JPH07181182A - リポタンパク質含有試料の処理法 - Google Patents
リポタンパク質含有試料の処理法Info
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- JPH07181182A JPH07181182A JP6245147A JP24514794A JPH07181182A JP H07181182 A JPH07181182 A JP H07181182A JP 6245147 A JP6245147 A JP 6245147A JP 24514794 A JP24514794 A JP 24514794A JP H07181182 A JPH07181182 A JP H07181182A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 免疫応答に影響を及ぼすことなく生物学的試
料の濁りを減少または除去する方法を提供する。 【構成】 アミノ酸および測定すべき抗原に対する抗体
を含有する希釈緩衝液からなることを特徴とする、リポ
タンパク質含有試料を処理するためおよびイムノアッセ
イによって抗原を測定するための試料調製剤、および該
試料調製剤の調製用キット。
料の濁りを減少または除去する方法を提供する。 【構成】 アミノ酸および測定すべき抗原に対する抗体
を含有する希釈緩衝液からなることを特徴とする、リポ
タンパク質含有試料を処理するためおよびイムノアッセ
イによって抗原を測定するための試料調製剤、および該
試料調製剤の調製用キット。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、リポタンパク質含有試
料のためのおよび抗原をイムノアッセイするための試料
調製剤、並びに該試料調製剤の調製用キットに関する。
本発明はさらに、イムノアッセイによる抗原の測定方法
並びに生物学的試料（たとえば、血液または血漿試料）
の濁りを減少または除去する方法に関する。
料のためのおよび抗原をイムノアッセイするための試料
調製剤、並びに該試料調製剤の調製用キットに関する。
本発明はさらに、イムノアッセイによる抗原の測定方法
並びに生物学的試料（たとえば、血液または血漿試料）
の濁りを減少または除去する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】リポ
タンパク質は、極性脂質およびアポタンパク質Ａ−１、
Ａ−２、Ａ−４、Ｂ−４８、Ｂ−１００、ＣおよびＥの
鞘により取り囲まれた疎水性脂質（コレステロール、コ
レステロールエステル、トリグセライド）のコアを有す
る粒子である。リポタンパク質は、一方で疎水性の高い
脂質を可溶化するとともに、他方で特定の細胞や組織上
のある種の脂質の移動を制御するシグナルを有してい
る。リポタンパク質は、異なる密度のクラスに分類され
る：キロミクロン、ＶＬＤＬ（超低密度リポタンパク
質）、ＩＤＬ（中密度リポタンパク質）、ＬＤＬ（低密
度リポタンパク質）およびＨＤＬ（高密度リポタンパク
質）。
タンパク質は、極性脂質およびアポタンパク質Ａ−１、
Ａ−２、Ａ−４、Ｂ−４８、Ｂ−１００、ＣおよびＥの
鞘により取り囲まれた疎水性脂質（コレステロール、コ
レステロールエステル、トリグセライド）のコアを有す
る粒子である。リポタンパク質は、一方で疎水性の高い
脂質を可溶化するとともに、他方で特定の細胞や組織上
のある種の脂質の移動を制御するシグナルを有してい
る。リポタンパク質は、異なる密度のクラスに分類され
る：キロミクロン、ＶＬＤＬ（超低密度リポタンパク
質）、ＩＤＬ（中密度リポタンパク質）、ＬＤＬ（低密
度リポタンパク質）およびＨＤＬ（高密度リポタンパク
質）。
【０００３】そのタンパク質部分に基づき、リポタンパ
ク質は電気泳動において異なる移動度を示し、β−リポ
タンパク質、プレβ−リポタンパク質およびα−リポタ
ンパク質に分類される。ＬＰ−Ｘは、ホスファチドとコ
レステロールエステルとから大部分を構成される病的リ
ポタンパク質である。Ｌｐ（ａ）は、動脈硬化過程に関
与する別のリポタンパク質である。Ｌｐ（ａ）の構造は
ＬＤＬ粒子の構造に由来する。Ｌｐ（ａ）は、高度にグ
リコシル化したアポリポタンパク質（ａ）にジスルフィ
ド結合によって結合したＬＤＬ粒子である。Ｌｐ（ａ）
は、粒子間および粒子内の両方において脂質およびタン
パク質組成の不均一性を示す。Ｌｐ（ａ）は、動脈硬化
に対する遺伝的に決定された独立の危険因子を構成す
る。
ク質は電気泳動において異なる移動度を示し、β−リポ
タンパク質、プレβ−リポタンパク質およびα−リポタ
ンパク質に分類される。ＬＰ−Ｘは、ホスファチドとコ
レステロールエステルとから大部分を構成される病的リ
ポタンパク質である。Ｌｐ（ａ）は、動脈硬化過程に関
与する別のリポタンパク質である。Ｌｐ（ａ）の構造は
ＬＤＬ粒子の構造に由来する。Ｌｐ（ａ）は、高度にグ
リコシル化したアポリポタンパク質（ａ）にジスルフィ
ド結合によって結合したＬＤＬ粒子である。Ｌｐ（ａ）
は、粒子間および粒子内の両方において脂質およびタン
パク質組成の不均一性を示す。Ｌｐ（ａ）は、動脈硬化
に対する遺伝的に決定された独立の危険因子を構成す
る。
【０００４】血液や血漿試料などの生物学的液体中のリ
ポタンパク質の測定は、心臓および循環器疾患の危険の
決定のための予防的医学検査の過程において、およびリ
ポタンパク質含量を制御する治療分野においてもその重
要性を増してきている。一般に、リポタンパク質はイム
ノアッセイによって測定される。この目的のため、測定
すべきリポタンパク質に対する抗体を用い、生成した複
合体をアッセイする。この場合に生成した免疫複合体の
検出は、光学的方法、たとえば試料の濁度の増加を検出
することにより行われる。アッセイの感度を最大とする
ため、可能な限り透明な試料溶液を用いることが光学的
試験の必要条件である。
ポタンパク質の測定は、心臓および循環器疾患の危険の
決定のための予防的医学検査の過程において、およびリ
ポタンパク質含量を制御する治療分野においてもその重
要性を増してきている。一般に、リポタンパク質はイム
ノアッセイによって測定される。この目的のため、測定
すべきリポタンパク質に対する抗体を用い、生成した複
合体をアッセイする。この場合に生成した免疫複合体の
検出は、光学的方法、たとえば試料の濁度の増加を検出
することにより行われる。アッセイの感度を最大とする
ため、可能な限り透明な試料溶液を用いることが光学的
試験の必要条件である。
【０００５】血清が本来有する濁りは、主として脂血症
または高リポタンパク血症の血清の場合に問題となる。
というのは、そのような濁りは、脂血症の程度が低い場
合でもわずかの量のリポタンパク質を検出することが不
可能となるからである。それゆえ、たとえば、比濁計に
よりまたは濁度測定により測定される免疫沈降物の検出
は、試料物質が本来有する濁りによってかなり妨害され
る。
または高リポタンパク血症の血清の場合に問題となる。
というのは、そのような濁りは、脂血症の程度が低い場
合でもわずかの量のリポタンパク質を検出することが不
可能となるからである。それゆえ、たとえば、比濁計に
よりまたは濁度測定により測定される免疫沈降物の検出
は、試料物質が本来有する濁りによってかなり妨害され
る。
【０００６】とりわけＬｐ（ａ）の濁度測定は、とりわ
け試料が本来有する濁り（キロミクロン、トリグリセラ
イド）が大きい場合および凍結乾燥した後に再び解凍し
た試料の場合に、粒子のサイズおよび構造の不均一性の
ために幾度も困難に直面する。そのような試料では誤っ
て高いＬｐ（ａ）濃度がしばしば検出される。同様の困
難はＬｐ（ａ）の比濁計による測定の場合にも生じる。
従って、血清の濁りを除去することは、とりわけリポタ
ンパク質の測定のための臨床分析において極めて重要で
ある。
け試料が本来有する濁り（キロミクロン、トリグリセラ
イド）が大きい場合および凍結乾燥した後に再び解凍し
た試料の場合に、粒子のサイズおよび構造の不均一性の
ために幾度も困難に直面する。そのような試料では誤っ
て高いＬｐ（ａ）濃度がしばしば検出される。同様の困
難はＬｐ（ａ）の比濁計による測定の場合にも生じる。
従って、血清の濁りを除去することは、とりわけリポタ
ンパク質の測定のための臨床分析において極めて重要で
ある。
【０００７】溶液によって示される濁りの通常の測定手
段はＬＳＵ（光散乱単位（light scattering unit））
である。一般に、３４０ｎｍおよび１ｃｍの行路長にて
比濁計で測定した場合に７０ＬＳＵ以上のシグナルが測
定されたなら溶液は濁っているとみなされる。７０ＬＳ
Ｕまたはそれ以上での抗原−抗体反応の測定は、明らか
に誤りである。臨床分析のためには、試料は好ましくは
３０〜４０ＬＳＵの範囲の最大濁度を有するべきであ
る。脂血症試料の妨害性の濁りを除去するため、たとえ
ばリパーゼ処理または高スピード遠心分離がＣlinica
Ｃhimica Ａcta（１３５（１９８３）２０３〜２０８）
で推奨されている。しかしながら、界面活性剤は絶対に
使用すべきでない。というのは、界面活性剤は試料が本
来有する濁りを確かに除去するが、免疫化学的応答もま
た大きく低下する結果となるからである。ポリエチレン
グリコールは免疫化学的応答の反応促進剤として提唱さ
れている。
段はＬＳＵ（光散乱単位（light scattering unit））
である。一般に、３４０ｎｍおよび１ｃｍの行路長にて
比濁計で測定した場合に７０ＬＳＵ以上のシグナルが測
定されたなら溶液は濁っているとみなされる。７０ＬＳ
Ｕまたはそれ以上での抗原−抗体反応の測定は、明らか
に誤りである。臨床分析のためには、試料は好ましくは
３０〜４０ＬＳＵの範囲の最大濁度を有するべきであ
る。脂血症試料の妨害性の濁りを除去するため、たとえ
ばリパーゼ処理または高スピード遠心分離がＣlinica
Ｃhimica Ａcta（１３５（１９８３）２０３〜２０８）
で推奨されている。しかしながら、界面活性剤は絶対に
使用すべきでない。というのは、界面活性剤は試料が本
来有する濁りを確かに除去するが、免疫化学的応答もま
た大きく低下する結果となるからである。ポリエチレン
グリコールは免疫化学的応答の反応促進剤として提唱さ
れている。
【０００８】とりわけ脂血症試料の場合に、もともと透
明な血清の凍結乾燥とその後の再構成の手順のため、コ
ントロール血清の凍結乾燥において濁りが生じる。濁り
を防御するための予防手段として、ＥＰ−０１４１９２
２号はコントロール血清の凍結乾燥前に界面活性剤およ
びプロリンを添加することを提唱している。血清をプロ
リンおよびデオキシコール酸ナトリウムと混合し、凍結
乾燥する。凍結乾燥物を再構成した後、透明な血清は濁
らないことがわかった。コントロール血清を安定化する
場合には通常透明な血清を用いないので、溶液の清澄
化、すなわち界面活性剤／プロリンによる濁りの減少は
行うことができなかった。
明な血清の凍結乾燥とその後の再構成の手順のため、コ
ントロール血清の凍結乾燥において濁りが生じる。濁り
を防御するための予防手段として、ＥＰ−０１４１９２
２号はコントロール血清の凍結乾燥前に界面活性剤およ
びプロリンを添加することを提唱している。血清をプロ
リンおよびデオキシコール酸ナトリウムと混合し、凍結
乾燥する。凍結乾燥物を再構成した後、透明な血清は濁
らないことがわかった。コントロール血清を安定化する
場合には通常透明な血清を用いないので、溶液の清澄
化、すなわち界面活性剤／プロリンによる濁りの減少は
行うことができなかった。
【０００９】ＥＰ−００５８９５９号はまた、凍結乾燥
および再構成後も透明なままのコントロール血清を調製
するための種々の添加物について言及している。凝集の
状態の変化によって引き起こされる濁りを防止するため
の試薬として、例えばメタノール、アラニン、トリエチ
レングリコール、バリン、アセテート、ラクテートまた
は２−ヒドロキシメチル酪酸ナトリウムなどの有機非糖
様物質が示唆されている。しかしながら、ＥＰ−００５
８９５９号もまた、リポタンパク質含量の妨害されない
測定を実行できるような仕方でアッセイすべき試料を処
理する方法については開示していない。
および再構成後も透明なままのコントロール血清を調製
するための種々の添加物について言及している。凝集の
状態の変化によって引き起こされる濁りを防止するため
の試薬として、例えばメタノール、アラニン、トリエチ
レングリコール、バリン、アセテート、ラクテートまた
は２−ヒドロキシメチル酪酸ナトリウムなどの有機非糖
様物質が示唆されている。しかしながら、ＥＰ−００５
８９５９号もまた、リポタンパク質含量の妨害されない
測定を実行できるような仕方でアッセイすべき試料を処
理する方法については開示していない。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、一方で
生物学的液体が本来有している可能性のある濁りを減少
または除去し、他方で可能な限り誤りなく試料中の抗原
の分析を行うことのできる技術を提供することにある。
本発明に従い、この目的は、試料処理のために試料の濁
りを減少または除去するアミノ酸を含有する製剤であっ
て、測定すべき抗原（好ましくはリポタンパク質）に対
する抗体による該抗原の免疫化学的測定には影響を与え
ないような製剤によって達成される。本発明による製剤
は、有利にも反応促進剤、たとえばポリエチレングリコ
ールを含有する。アミノ酸は、好ましくは０.０５〜３
Ｍ、最も好ましくは０.１〜０.５Ｍの濃度にて緩衝媒体
中に含まれる。試料の前処理の如何にかかわらず、なか
でもプロリンが脂血症試料または濁った試料の濁りを除
くのに極めて適していることが示された。
生物学的液体が本来有している可能性のある濁りを減少
または除去し、他方で可能な限り誤りなく試料中の抗原
の分析を行うことのできる技術を提供することにある。
本発明に従い、この目的は、試料処理のために試料の濁
りを減少または除去するアミノ酸を含有する製剤であっ
て、測定すべき抗原（好ましくはリポタンパク質）に対
する抗体による該抗原の免疫化学的測定には影響を与え
ないような製剤によって達成される。本発明による製剤
は、有利にも反応促進剤、たとえばポリエチレングリコ
ールを含有する。アミノ酸は、好ましくは０.０５〜３
Ｍ、最も好ましくは０.１〜０.５Ｍの濃度にて緩衝媒体
中に含まれる。試料の前処理の如何にかかわらず、なか
でもプロリンが脂血症試料または濁った試料の濁りを除
くのに極めて適していることが示された。
【００１１】好ましい態様の本発明の製剤は、リポタン
パク質に対する抗体を含有しており、イムノアッセイに
よって該リポタンパク質を測定するのに用いられる。た
とえば、本発明の製剤はＬｐ（ａ）をアッセイするのに
用いられ、その場合、該製剤はＬｐ（ａ）抗体、好まし
くはＬｐ（ａ）抗血清を含有する。本発明の製剤は、市
販の試薬または試薬成分を修飾することによって簡単な
仕方で調製することができる。本発明の製剤は、試料が
以前に急速冷凍されたか、冷却状態で貯蔵されたか、ま
たは新たに解凍されたかに拘わらず、試料中の好ましく
はリポタンパク質の妨害されない測定を可能とする。そ
のような試料として、リポタンパク質を含有するために
光学的に濁った血液、血清または血漿試料などの生物学
的液体を特に適用することができる。
パク質に対する抗体を含有しており、イムノアッセイに
よって該リポタンパク質を測定するのに用いられる。た
とえば、本発明の製剤はＬｐ（ａ）をアッセイするのに
用いられ、その場合、該製剤はＬｐ（ａ）抗体、好まし
くはＬｐ（ａ）抗血清を含有する。本発明の製剤は、市
販の試薬または試薬成分を修飾することによって簡単な
仕方で調製することができる。本発明の製剤は、試料が
以前に急速冷凍されたか、冷却状態で貯蔵されたか、ま
たは新たに解凍されたかに拘わらず、試料中の好ましく
はリポタンパク質の妨害されない測定を可能とする。そ
のような試料として、リポタンパク質を含有するために
光学的に濁った血液、血清または血漿試料などの生物学
的液体を特に適用することができる。
【００１２】驚くべきことに、本発明の製剤はたとえば
Ｌｐ（ａ）の測定感度を実質的に増加させ、このこと
は、得られる結果が非常に適切な参照法によって同時に
確かめることができる。血清調製剤にプロリンを添加す
ると、血清試料のブランクの値が低くなり、抗体添加時
との吸光度における比濁計で測定した差違が増加する。
本発明の製剤におけるアミノ酸、とりわけプロリンの有
利な効果は、アミノ酸が一般に、凍結乾燥したコントロ
ール血清の濁りの生成を予防するためだけに界面活性剤
とともに提唱されてきたがそのような混合物（界面活性
剤）の試料への添加はイムノアッセイを妨害すると考え
られるので、一層驚くべきものである。さらに、そのよ
うな試料は凍結乾燥されることがなく、それゆえ凍結乾
燥および再構成の間にそのような混合物によって生成さ
れる濁りを防ぐ必要がない。
Ｌｐ（ａ）の測定感度を実質的に増加させ、このこと
は、得られる結果が非常に適切な参照法によって同時に
確かめることができる。血清調製剤にプロリンを添加す
ると、血清試料のブランクの値が低くなり、抗体添加時
との吸光度における比濁計で測定した差違が増加する。
本発明の製剤におけるアミノ酸、とりわけプロリンの有
利な効果は、アミノ酸が一般に、凍結乾燥したコントロ
ール血清の濁りの生成を予防するためだけに界面活性剤
とともに提唱されてきたがそのような混合物（界面活性
剤）の試料への添加はイムノアッセイを妨害すると考え
られるので、一層驚くべきものである。さらに、そのよ
うな試料は凍結乾燥されることがなく、それゆえ凍結乾
燥および再構成の間にそのような混合物によって生成さ
れる濁りを防ぐ必要がない。
【００１３】本発明の製剤を用いた場合、抗原を妨害さ
れずに免疫化学的に測定できるように試料を界面活性剤
と混合しないことも有利である。本発明の製剤または該
製剤を調製するためのキット並びに該キットの成分は、
有利にも界面活性剤を実質的に含んでいない。溶液は約
０.０１％未満の界面活性剤含量を有する場合には、
「実質的に」界面活性剤を含まないとみなされる。０.
０５％を越える界面活性剤含量の溶液で行うイムノアッ
セイは、界面活性剤によって明らかに誤りとなり、得ら
れる測定結果はもはや適切でない。
れずに免疫化学的に測定できるように試料を界面活性剤
と混合しないことも有利である。本発明の製剤または該
製剤を調製するためのキット並びに該キットの成分は、
有利にも界面活性剤を実質的に含んでいない。溶液は約
０.０１％未満の界面活性剤含量を有する場合には、
「実質的に」界面活性剤を含まないとみなされる。０.
０５％を越える界面活性剤含量の溶液で行うイムノアッ
セイは、界面活性剤によって明らかに誤りとなり、得ら
れる測定結果はもはや適切でない。
【００１４】本発明による製剤を少なくとも２つの成分
からなるキットとして提供することが有利であることが
示された。それゆえ、アミノ酸および所望なら反応促進
剤を緩衝物質の存在下で第一成分中で利用できるように
し、第二成分にはアッセイすべき抗原に対する抗体が含
まれる。別の態様によれば、本発明はイムノアッセイに
よる抗原の測定方法に関し、該方法において、イムノア
ッセイによって測定すべき試料にアミノ酸を加え、アッ
セイすべき該抗原に対する抗体を試料中に引き続きまた
は同時に導入し、ついで生成した抗体−抗原複合体を測
定する。
からなるキットとして提供することが有利であることが
示された。それゆえ、アミノ酸および所望なら反応促進
剤を緩衝物質の存在下で第一成分中で利用できるように
し、第二成分にはアッセイすべき抗原に対する抗体が含
まれる。別の態様によれば、本発明はイムノアッセイに
よる抗原の測定方法に関し、該方法において、イムノア
ッセイによって測定すべき試料にアミノ酸を加え、アッ
セイすべき該抗原に対する抗体を試料中に引き続きまた
は同時に導入し、ついで生成した抗体−抗原複合体を測
定する。
【００１５】本発明の他の態様は、濁った生物学的液体
の濁りを減少または除去する方法に関し、該方法は濁っ
た該生物学的液体にアミノ酸を加えることを特徴とす
る。それゆえ、試料液体を処理する方法が同時に提供さ
れる。本発明の方法において、アミノ酸として好ましく
はプロリンを用いる。本発明の方法は、血液試料または
血漿試料並びにイムノアッセイにより抗原を測定する濁
ったリポタンパク質含有試料に用いるのが好ましい。
の濁りを減少または除去する方法に関し、該方法は濁っ
た該生物学的液体にアミノ酸を加えることを特徴とす
る。それゆえ、試料液体を処理する方法が同時に提供さ
れる。本発明の方法において、アミノ酸として好ましく
はプロリンを用いる。本発明の方法は、血液試料または
血漿試料並びにイムノアッセイにより抗原を測定する濁
ったリポタンパク質含有試料に用いるのが好ましい。
【００１６】本発明の別の態様は、生物学的液体、とり
わけイムノアッセイにより測定するために提供される抗
原を含む濁ったリポタンパク質含有試料の濁りを減少ま
たは除去するためのアミノ酸、とりわけプロリンの使
用、並びに好ましくはイムノアッセイによる抗原の測定
のために提供される試料におけるリポタンパク質含有試
料を処理するためのアミノ酸、とりわけプロリンの使用
に関する。
わけイムノアッセイにより測定するために提供される抗
原を含む濁ったリポタンパク質含有試料の濁りを減少ま
たは除去するためのアミノ酸、とりわけプロリンの使
用、並びに好ましくはイムノアッセイによる抗原の測定
のために提供される試料におけるリポタンパク質含有試
料を処理するためのアミノ酸、とりわけプロリンの使用
に関する。
【００１７】
【実施例】つぎに、本発明を以下に実施例によりさらに
詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。これら実施例は、有効な実施処方に従い（ヒツ
ジの抗ヒトＬｐ（ａ）、参照標準ヒトＬｐ（ａ）、正常
コントロールヒトＬｐ（ａ））、イムノ・アクチエンゲ
ゼルシャフトの個々の市販試薬を適当に修飾することに
よる血清試料中のＬｐ（ａ）の測定を説明する。吸光度
の差異は光度計または自動分析器により検出し、実施例
においてはＣＯＢＡＭＳＩＲＡ装置（ホフマン−ラロシ
ュ）により表示された。
詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。これら実施例は、有効な実施処方に従い（ヒツ
ジの抗ヒトＬｐ（ａ）、参照標準ヒトＬｐ（ａ）、正常
コントロールヒトＬｐ（ａ））、イムノ・アクチエンゲ
ゼルシャフトの個々の市販試薬を適当に修飾することに
よる血清試料中のＬｐ（ａ）の測定を説明する。吸光度
の差異は光度計または自動分析器により検出し、実施例
においてはＣＯＢＡＭＳＩＲＡ装置（ホフマン−ラロシ
ュ）により表示された。
【００１８】実施例１：吸光度の検量曲線 種々の濃度のＬｐ（ａ）を含有する一連のＬｐ（ａ）溶
液の吸光度を測定し、検量曲線を確立した。一つのＬｐ
（ａ）含有試料に、プロリン（０.１モル／ｌ）を添加
するかまたは添加せず、１×ＰＢＳ（１×ＰＢＳ：１０
ｍＭ Ｎａ／Ｋリン酸、０.８％ＮａＣｌ、０.２％ＨＣ
ｌ、ｐＨ７.２）および４％ＰＥＧを含有する希釈緩衝
液、および５分後にＬｐ（ａ）抗体溶液を加えた。図１
Ａではプロリン（０.１モル／ｌ）を希釈媒体中に添加
した場合の吸光度の検量曲線を、図１Ｂではプロリンを
添加しない場合の同曲線を示す。
液の吸光度を測定し、検量曲線を確立した。一つのＬｐ
（ａ）含有試料に、プロリン（０.１モル／ｌ）を添加
するかまたは添加せず、１×ＰＢＳ（１×ＰＢＳ：１０
ｍＭ Ｎａ／Ｋリン酸、０.８％ＮａＣｌ、０.２％ＨＣ
ｌ、ｐＨ７.２）および４％ＰＥＧを含有する希釈緩衝
液、および５分後にＬｐ（ａ）抗体溶液を加えた。図１
Ａではプロリン（０.１モル／ｌ）を希釈媒体中に添加
した場合の吸光度の検量曲線を、図１Ｂではプロリンを
添加しない場合の同曲線を示す。
【００１９】明らかなように、最高のＬｐ（ａ）濃度
（すなわち、１０８ｍｇ／ｄｌ）を有する検量体は０.
０９の割合の吸光度を有するのに対して、プロリン
（０.１モル／ｌ）を添加した希釈媒体中の同検量体は
０.１２５の割合を示した。それゆえ、プロリンを添加
することにより反応シグナルは増強される。この場合の
割合は、希釈緩衝液を混合したときの測定シグナルを差
し引いた後の抗原−抗体反応の測定シグナルを最初の溶
液のものと対比したものに対応する。さらに、検量曲線
は希釈媒体中に添加しない場合には高濃度側で平になる
のに対して（図１Ｂ）、図１Ａに示す曲線は直線状にな
ることが検量曲線から明らかである。
（すなわち、１０８ｍｇ／ｄｌ）を有する検量体は０.
０９の割合の吸光度を有するのに対して、プロリン
（０.１モル／ｌ）を添加した希釈媒体中の同検量体は
０.１２５の割合を示した。それゆえ、プロリンを添加
することにより反応シグナルは増強される。この場合の
割合は、希釈緩衝液を混合したときの測定シグナルを差
し引いた後の抗原−抗体反応の測定シグナルを最初の溶
液のものと対比したものに対応する。さらに、検量曲線
は希釈媒体中に添加しない場合には高濃度側で平になる
のに対して（図１Ｂ）、図１Ａに示す曲線は直線状にな
ることが検量曲線から明らかである。
【００２０】実施例２：プレインキュベーションしたＬ
ｐ（ａ）の測定 本来的に高い濁度を有する血清試料を、プロリン（０.
１モル／ｌ）を含有する希釈緩衝液とともに５分間イン
キュベートする。この後、Ｌｐ（ａ）抗体を加える。吸
光度を３４０ｎｍの波長にて測定し、時間単位に対して
プロットする（図２Ａ）。同じアッセイを希釈緩衝液中
にプロリンを添加せずに行った（図２Ｂ）。これから、
血清試料のブランク値に対応する吸光度は０.３６（添
加せず）から０.２４（プロリン添加）に下げることが
できることが明らかである。
ｐ（ａ）の測定 本来的に高い濁度を有する血清試料を、プロリン（０.
１モル／ｌ）を含有する希釈緩衝液とともに５分間イン
キュベートする。この後、Ｌｐ（ａ）抗体を加える。吸
光度を３４０ｎｍの波長にて測定し、時間単位に対して
プロットする（図２Ａ）。同じアッセイを希釈緩衝液中
にプロリンを添加せずに行った（図２Ｂ）。これから、
血清試料のブランク値に対応する吸光度は０.３６（添
加せず）から０.２４（プロリン添加）に下げることが
できることが明らかである。
【００２１】プロリンを添加した混合物の反応経過にお
ける抗体添加時点からの吸光度の差異（図２Ａ）は、プ
ロリンを添加しない混合物における場合（図２Ｂ）に比
べて２００％大きい。それゆえ、プロリンを含有する混
合物では１０３.３ｍｇ／ｄｌのＬｐ（ａ）濃度が計算
されるが、同時に、プロリンを含有しない混合物では１
９.２ｍｇ／ｄｌの誤って低い値が計算される。一般
に、３０未満のＬｐ（ａ）濃度は正常であるとされ、そ
れを越える値は病的であるとみなされる。それゆえ、本
実施例の場合、該試料は通常の測定法に基づいた場合は
「正常」（１９.２ｍｇ／ｄｌ）とみなされるが、正確
な濃度（本発明の方法により測定）は明らかに病的値を
構成している。
ける抗体添加時点からの吸光度の差異（図２Ａ）は、プ
ロリンを添加しない混合物における場合（図２Ｂ）に比
べて２００％大きい。それゆえ、プロリンを含有する混
合物では１０３.３ｍｇ／ｄｌのＬｐ（ａ）濃度が計算
されるが、同時に、プロリンを含有しない混合物では１
９.２ｍｇ／ｄｌの誤って低い値が計算される。一般
に、３０未満のＬｐ（ａ）濃度は正常であるとされ、そ
れを越える値は病的であるとみなされる。それゆえ、本
実施例の場合、該試料は通常の測定法に基づいた場合は
「正常」（１９.２ｍｇ／ｄｌ）とみなされるが、正確
な濃度（本発明の方法により測定）は明らかに病的値を
構成している。
【００２２】実施例３：プレインキュベーションしたＬ
ｐ（ａ）の測定 実施例２と同様にして、試料のＬｐ（ａ）含量をＬｐ
（ａ）抗体を添加することにより濁度測定により測定し
た。図２Ａおよび２Ｂと同じ反応経過を、最大Ｌｐ
（ａ）濃度（＝１０８ｍｇ／ｄｌ）の検量体を用いて図
３Ａおよび３Ｂに示す。本実施例においても、０.１モ
ル／ｌのプロリンを添加することにより反応シグナル
（添加せず、図３Ｂ）を５０％増強することができた。
ｐ（ａ）の測定 実施例２と同様にして、試料のＬｐ（ａ）含量をＬｐ
（ａ）抗体を添加することにより濁度測定により測定し
た。図２Ａおよび２Ｂと同じ反応経過を、最大Ｌｐ
（ａ）濃度（＝１０８ｍｇ／ｄｌ）の検量体を用いて図
３Ａおよび３Ｂに示す。本実施例においても、０.１モ
ル／ｌのプロリンを添加することにより反応シグナル
（添加せず、図３Ｂ）を５０％増強することができた。
【００２３】実施例４：新鮮な試料と解凍した試料との
相関 上記のように、解凍した試料物質の濁りのため、凍結乾
燥した後に解凍した血清は新たに試験する試料に比べて
Ｌｐ（ａ）の濁度測定に不一致が生じた。本発明の製剤
にプロリンを混合することにより得られる改善を、以下
の実施例において示す。２５の血清試料のパネルをアリ
コートし、その一部を採血したのと同じ日にアッセイ
し、残りを凍結乾燥した。後者のアリコートを翌日に解
凍し、その後アッセイした。
相関 上記のように、解凍した試料物質の濁りのため、凍結乾
燥した後に解凍した血清は新たに試験する試料に比べて
Ｌｐ（ａ）の濁度測定に不一致が生じた。本発明の製剤
にプロリンを混合することにより得られる改善を、以下
の実施例において示す。２５の血清試料のパネルをアリ
コートし、その一部を採血したのと同じ日にアッセイ
し、残りを凍結乾燥した。後者のアリコートを翌日に解
凍し、その後アッセイした。
【００２４】プロリンを用いずに行ったアッセイの結果
を図４Ａに示す。新たに試験した試料と解凍した試料と
の相関はＲ＝０.９０８であり、一次式はｙ＝１.０１＋
０.８８ｘであった。平行アッセイにおいて、プロリン
を用いた解凍試料を測定した。新たに試験した試料との
比較を図４Ｂに示す。相関はＲ＝０.９７２に改善さ
れ、ｙ＝３.５２＋１.０９ｘなる一次式も傾き１を有す
る理想値との一致における顕著な改善を示した。
を図４Ａに示す。新たに試験した試料と解凍した試料と
の相関はＲ＝０.９０８であり、一次式はｙ＝１.０１＋
０.８８ｘであった。平行アッセイにおいて、プロリン
を用いた解凍試料を測定した。新たに試験した試料との
比較を図４Ｂに示す。相関はＲ＝０.９７２に改善さ
れ、ｙ＝３.５２＋１.０９ｘなる一次式も傾き１を有す
る理想値との一致における顕著な改善を示した。
【００２５】実施例５：電気免疫拡散法によるＬｐ
（ａ）の測定 電気免疫拡散法は、Ｌｐ（ａ）の免疫学的測定の標準法
である。実施例４で使用した凍結乾燥および解凍試料を
電気免疫拡散法でも平行アッセイで試験した（ローレル
（Ｌaurell）、Ａnal.Ｂiochem.１５（１９６６）、４
５による方法）。図５Ａにおいて、プロリンを用いずに
濁度測定した結果を電気免疫拡散法により測定した結果
と比較してある。相関はＲ＝０.９１８であり、電気免
疫拡散法の曲線の一次式はｙ＝１.９５＋０.５４ｘであ
った（濁度測定の一次式はｙ＝１.０１＋０.８８ｘ：図
４Ａ）。それゆえ、得られた結果に関して、これら２つ
の方法において明瞭な差異が認められる。プロリンを添
加することにより、相関係数がＲ＝０.９８９に上昇す
るのみならず、一次式ｙ＝３.３４＋０.９２ｘも両方法
の殆ど完全な一致を示していた（図５Ｂ）（プロリンの
存在下での濁度測定の一次式はｙ＝３.５２＋１.０９
ｘ；図４Ｂ）。
（ａ）の測定 電気免疫拡散法は、Ｌｐ（ａ）の免疫学的測定の標準法
である。実施例４で使用した凍結乾燥および解凍試料を
電気免疫拡散法でも平行アッセイで試験した（ローレル
（Ｌaurell）、Ａnal.Ｂiochem.１５（１９６６）、４
５による方法）。図５Ａにおいて、プロリンを用いずに
濁度測定した結果を電気免疫拡散法により測定した結果
と比較してある。相関はＲ＝０.９１８であり、電気免
疫拡散法の曲線の一次式はｙ＝１.９５＋０.５４ｘであ
った（濁度測定の一次式はｙ＝１.０１＋０.８８ｘ：図
４Ａ）。それゆえ、得られた結果に関して、これら２つ
の方法において明瞭な差異が認められる。プロリンを添
加することにより、相関係数がＲ＝０.９８９に上昇す
るのみならず、一次式ｙ＝３.３４＋０.９２ｘも両方法
の殆ど完全な一致を示していた（図５Ｂ）（プロリンの
存在下での濁度測定の一次式はｙ＝３.５２＋１.０９
ｘ；図４Ｂ）。
【図１】 プロリンを添加した場合（図１Ａ）および添
加しない場合（図１Ｂ）のＬｐ（ａ）の濃度に対して吸
光度をプロットした検量曲線。
加しない場合（図１Ｂ）のＬｐ（ａ）の濃度に対して吸
光度をプロットした検量曲線。
【図２】 本来的に濁度の高い血清試料をプロリンとと
もにプレインキュベートした場合（図２Ａ）およびしな
かった場合（図２Ｂ）の３４０ｎｍにおける吸光度を経
時的にプロットしたグラフ。
もにプレインキュベートした場合（図２Ａ）およびしな
かった場合（図２Ｂ）の３４０ｎｍにおける吸光度を経
時的にプロットしたグラフ。
【図３】 本来的に濁度の高い血清試料をプロリンとと
もにプレインキュベートした場合（図３Ａ）およびしな
かった場合（図３Ｂ）の吸光度を濁度測定により測定し
て経時的にプロットしたグラフ。
もにプレインキュベートした場合（図３Ａ）およびしな
かった場合（図３Ｂ）の吸光度を濁度測定により測定し
て経時的にプロットしたグラフ。
【図４】 プロリンを添加した場合（図４Ａ）および添
加しない場合（図４Ｂ）の新たな試料と解凍した試料と
におけるＬｐ（ａ）の濁度測定の相関を示すグラフ。
加しない場合（図４Ｂ）の新たな試料と解凍した試料と
におけるＬｐ（ａ）の濁度測定の相関を示すグラフ。
【図５】 プロリンを添加した場合（図５Ａ）および添
加しない場合（図５Ｂ）の新たな試料と解凍した試料と
におけるＬｐ（ａ）の電気免疫拡散法による測定の相関
を示すグラフ。
加しない場合（図５Ｂ）の新たな試料と解凍した試料と
におけるＬｐ（ａ）の電気免疫拡散法による測定の相関
を示すグラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ハルトムート・ラング オーストリア、アー−2560グリレンベル ク、シュタインホーフシュトラーセ15番
Claims (40)
- 【請求項１】 アミノ酸および測定すべき抗原に対する
抗体を含有する希釈緩衝液からなることを特徴とする、
リポタンパク質含有試料を処理するためおよびイムノア
ッセイによって抗原を測定するための試料調製剤。 - 【請求項２】 該希釈緩衝液がさらに反応促進剤を含有
する請求項１に記載の試料調製剤。 - 【請求項３】 アミノ酸および測定すべきリポタンパク
質に対する抗体を含有する希釈緩衝液からなることを特
徴とする、リポタンパク質含有試料を処理するためおよ
びイムノアッセイによってリポタンパク質を測定するた
めの試料調製剤。 - 【請求項４】 該希釈緩衝液がさらに反応促進剤を含有
する請求項３に記載の試料調製剤。 - 【請求項５】 アミノ酸およびＬｐ（ａ）に対する抗体
を含有する希釈緩衝液からなることを特徴とする、Ｌｐ
（ａ）含有試料を処理するためおよびイムノアッセイに
よってＬｐ（ａ）を測定するための試料調製剤。 - 【請求項６】 該希釈緩衝液がさらに反応促進剤を含有
する請求項５に記載の試料調製剤。 - 【請求項７】 該アミノ酸の濃度が０.０５〜３Ｍであ
る請求項１、３または５に記載の試料調製剤。 - 【請求項８】 該濃度が０.１〜０.５Ｍである請求項７
に記載の試料調製剤。 - 【請求項９】 該アミノ酸がプロリンである請求項１、
３または５に記載の試料調製剤。 - 【請求項１０】 該反応促進剤がポリエチレングリコー
ルである請求項２、４または６に記載の試料調製剤。 - 【請求項１１】 （ａ）緩衝物質およびアミノ酸を含有
する第一試料調製剤成分、および（ｂ）イムノアッセイ
によって測定すべき抗原に対する抗体を含有する第二試
料調製剤成分からなることを特徴とする、リポタンパク
質含有試料を処理するためおよびイムノアッセイによっ
て抗原を測定するための試料調製剤の調製用キット。 - 【請求項１２】 該第一試料調製剤成分がさらに反応促
進剤を含有する請求項１１に記載のキット。 - 【請求項１３】 該アミノ酸が該第一試料調製剤成分中
に０.０５〜３Ｍの濃度で含有される請求項１１に記載
のキット。 - 【請求項１４】 該濃度が０.１〜０.５Ｍである請求項
１３に記載のキット。 - 【請求項１５】 該アミノ酸がプロリンである請求項１
１に記載のキット。 - 【請求項１６】 該第一試料調製剤成分が該反応促進剤
としてポリエチレングリコールを含有する請求項１２に
記載のキット。 - 【請求項１７】 該第二試料調製剤成分がリポタンパク
質に対する抗体を含有する請求項１１に記載のキット。 - 【請求項１８】 該第二試料調製剤成分がＬｐ（ａ）に
対する抗体を含有する請求項１１に記載のキット。 - 【請求項１９】 緩衝物質およびアミノ酸を含有するこ
とを特徴とする、リポタンパク質含有試料を処理するた
めおよびイムノアッセイによって抗原を測定するための
キットを構成する成分。 - 【請求項２０】 さらに反応促進剤を含有する請求項１
９に記載の成分。 - 【請求項２１】 該アミノ酸が０.０５〜３Ｍの濃度で
含有される請求項１９に記載の成分。 - 【請求項２２】 該濃度が０.１〜０.５Ｍである請求項
２１に記載の成分。 - 【請求項２３】 該アミノ酸がプロリンである請求項１
９に記載の成分。 - 【請求項２４】 該反応促進剤がポリエチレングリコー
ルである請求項２０に記載の成分。 - 【請求項２５】 （ａ）イムノアッセイにより測定すべ
き試料を用意し、（ｂ）該試料にアミノ酸を混合し、
（ｃ）該試料中にイムノアッセイにより測定すべき抗原
に対する抗体を導入して抗体−抗原複合体を生成させ、
ついで（ｄ）該抗体−抗原複合体の量を測定することを
特徴とする、イムノアッセイによる抗原の測定方法。 - 【請求項２６】 該抗体が該アミノ酸の後に導入される
請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２７】 該抗体が該アミノ酸と同時に導入され
る請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２８】 該アミノ酸がプロリンである請求項２
５に記載の方法。 - 【請求項２９】 該試料が血液試料、血清試料および血
漿試料よりなる群から選ばれる請求項２５に記載の方
法。 - 【請求項３０】 該試料がリポタンパク質を含有するた
めに光学的に濁っている請求項２９に記載の方法。 - 【請求項３１】 アミノ酸を試料に加えることを特徴と
する、濁った生物学的試料の濁りを減少または除去する
方法。 - 【請求項３２】 該アミノ酸がプロリンである請求項３
１に記載の方法。 - 【請求項３３】 該試料が血液試料、血清試料および血
漿試料よりなる群から選ばれる請求項３１に記載の方
法。 - 【請求項３４】 該試料がリポタンパク質を含有するた
めに光学的に濁っている請求項３３に記載の方法。 - 【請求項３５】 アミノ酸を試料に加えることを特徴と
する、リポタンパク質含有試料の処理方法。 - 【請求項３６】 該アミノ酸がプロリンである請求項３
５に記載の方法。 - 【請求項３７】 該試料がイムノアッセイによる抗原の
測定のために提供される請求項３５に記載の方法。 - 【請求項３８】 アミノ酸を試料に加えることを特徴と
する、リポタンパク質を含有する生物学的液体の濁りを
減少または除去する方法。 - 【請求項３９】 該アミノ酸がプロリンである請求項３
８に記載の方法。 - 【請求項４０】 該生物学的液体がイムノアッセイによ
る抗原の測定のために提供される請求項３８に記載の方
法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0204393A AT400199B (de) | 1993-10-11 | 1993-10-11 | Aufbereitung von lipoproteinhältigen proben |
| AT2043/93 | 1993-10-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07181182A true JPH07181182A (ja) | 1995-07-21 |
Family
ID=3526548
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6245147A Pending JPH07181182A (ja) | 1993-10-11 | 1994-10-11 | リポタンパク質含有試料の処理法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0647850B1 (ja) |
| JP (1) | JPH07181182A (ja) |
| AT (2) | AT400199B (ja) |
| CA (1) | CA2117745A1 (ja) |
| DE (1) | DE59409638D1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010513522A (ja) * | 2006-12-21 | 2010-04-30 | アムジエン・インコーポレーテツド | ポリペプチドを含有する安定な緩衝化された製剤 |
| JP2010145202A (ja) * | 2008-12-18 | 2010-07-01 | Tosoh Corp | ポリエチレングリコールおよび尿素による免疫反応増強方法 |
| JP2013253980A (ja) * | 2007-06-08 | 2013-12-19 | Quest Diagnostics Investments Inc | 差異荷電粒子移動度によるリポ蛋白質の分析 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3107060A1 (de) * | 1981-02-25 | 1982-09-09 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Kontroll- oder eichserum und verfahren zu seiner herstellung |
| DE3329952A1 (de) * | 1983-08-19 | 1985-02-28 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur verringerung einer truebung in kontrollseren |
| DE3330770A1 (de) * | 1983-08-26 | 1985-03-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur pasteurisierung von humanplasma |
| JPS62261962A (ja) * | 1986-05-08 | 1987-11-14 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 脂質成分用液状管理血清 |
-
1993
- 1993-10-11 AT AT0204393A patent/AT400199B/de not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-10-05 DE DE59409638T patent/DE59409638D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-05 EP EP94890160A patent/EP0647850B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-05 AT AT94890160T patent/ATE198797T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-10-07 CA CA002117745A patent/CA2117745A1/en not_active Abandoned
- 1994-10-11 JP JP6245147A patent/JPH07181182A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010513522A (ja) * | 2006-12-21 | 2010-04-30 | アムジエン・インコーポレーテツド | ポリペプチドを含有する安定な緩衝化された製剤 |
| JP2013216659A (ja) * | 2006-12-21 | 2013-10-24 | Amgen | ポリペプチドを含有する安定な緩衝化された製剤 |
| JP2013253980A (ja) * | 2007-06-08 | 2013-12-19 | Quest Diagnostics Investments Inc | 差異荷電粒子移動度によるリポ蛋白質の分析 |
| JP2010145202A (ja) * | 2008-12-18 | 2010-07-01 | Tosoh Corp | ポリエチレングリコールおよび尿素による免疫反応増強方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE198797T1 (de) | 2001-02-15 |
| EP0647850A3 (de) | 1996-07-31 |
| CA2117745A1 (en) | 1995-04-12 |
| EP0647850A2 (de) | 1995-04-12 |
| DE59409638D1 (de) | 2001-02-22 |
| AT400199B (de) | 1995-10-25 |
| ATA204393A (de) | 1995-02-15 |
| EP0647850B1 (de) | 2001-01-17 |
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