JPH07189A - 新規抗生物質及びその製造法 - Google Patents
新規抗生物質及びその製造法Info
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- JPH07189A JPH07189A JP23429792A JP23429792A JPH07189A JP H07189 A JPH07189 A JP H07189A JP 23429792 A JP23429792 A JP 23429792A JP 23429792 A JP23429792 A JP 23429792A JP H07189 A JPH07189 A JP H07189A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記，理化学的性状を有する新規抗生物質又
はその塩。 分子量：２９９．４１３ マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）： ３００
〔Ｍ＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおり1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルは第２図のとおり13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第３図のとおり 【効果】 医薬，殊に抗菌剤として有用である。
はその塩。 分子量：２９９．４１３ マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）： ３００
〔Ｍ＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおり1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の1Ｈ
−ＮＭＲスペクトルは第２図のとおり13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第３図のとおり 【効果】 医薬，殊に抗菌剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は医薬，殊に抗菌剤として
有用なメチシリン耐性黄色ブドウ球菌を含む抗黄色ブド
ウ球菌抗生物質及び発酵法による該抗生物質の製造法に
関する。
有用なメチシリン耐性黄色ブドウ球菌を含む抗黄色ブド
ウ球菌抗生物質及び発酵法による該抗生物質の製造法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】従来，微生物が生産する種々の抗生物質
にはペニシリン，セファロスポリン，カルバペネム等の
βラクタム系抗生物質，エリスロマイシン，ジョサマイ
シン，ロキタマイシン等のマクロライド抗生物質，カナ
マイシン，ゲンタマイシン，トブラマイシン等のアミノ
グリコシド抗生物質などが良く知られている。これらの
抗生物質及びそれらを化学合成的手法により改良した化
合物の中には，臨床上，非常に有用な抗菌剤として有効
利用されているものが多々ある。しかし近年，これらの
既知抗生物質に対して高い耐性度を有するメチシリン耐
性黄色葡萄状球菌（ＭＲＳＡ）が臨床の場で非常に多く
出現し，社会的にも重大問題となりつつある。
にはペニシリン，セファロスポリン，カルバペネム等の
βラクタム系抗生物質，エリスロマイシン，ジョサマイ
シン，ロキタマイシン等のマクロライド抗生物質，カナ
マイシン，ゲンタマイシン，トブラマイシン等のアミノ
グリコシド抗生物質などが良く知られている。これらの
抗生物質及びそれらを化学合成的手法により改良した化
合物の中には，臨床上，非常に有用な抗菌剤として有効
利用されているものが多々ある。しかし近年，これらの
既知抗生物質に対して高い耐性度を有するメチシリン耐
性黄色葡萄状球菌（ＭＲＳＡ）が臨床の場で非常に多く
出現し，社会的にも重大問題となりつつある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】このような状況の中
で，本発明者らは天然に存在する多くの微生物が生産す
る物質について研究を行っていたところ，アルスロバク
タ−属に属し，グラム陽性菌に対して抗菌活性を有する
物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養する事
によって，同培地中にＭＲＳＡ耐性を有する新規抗グラ
ム陽性菌抗生物質が生産されており，この物質を単離す
ることにより本発明を完成した。また，本発明者らは本
発明の新規抗生物質がＭＲＳＡを含むグラム陽性菌に対
して抗菌活性を有し，全く新規な化学構造を有する化合
物であることを発見した。従って，本発明の目的は新規
抗生物質を提供することにある。また，本発明の別の目
的はアルスロバクター属に属する微生物を用いる発酵法
により製造し，抗生物質の製造法を提供することにあ
る。更に本発明の目的はアルスロバクター属に属する新
規微生物を提供することにある。
で，本発明者らは天然に存在する多くの微生物が生産す
る物質について研究を行っていたところ，アルスロバク
タ−属に属し，グラム陽性菌に対して抗菌活性を有する
物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養する事
によって，同培地中にＭＲＳＡ耐性を有する新規抗グラ
ム陽性菌抗生物質が生産されており，この物質を単離す
ることにより本発明を完成した。また，本発明者らは本
発明の新規抗生物質がＭＲＳＡを含むグラム陽性菌に対
して抗菌活性を有し，全く新規な化学構造を有する化合
物であることを発見した。従って，本発明の目的は新規
抗生物質を提供することにある。また，本発明の別の目
的はアルスロバクター属に属する微生物を用いる発酵法
により製造し，抗生物質の製造法を提供することにあ
る。更に本発明の目的はアルスロバクター属に属する新
規微生物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち，本発明は下記
理化学的性状を有する新規抗生物質又はその塩に関す
る。
理化学的性状を有する新規抗生物質又はその塩に関す
る。
【０００５】新規抗生物質の理化学的性状 分子量：２９９．４１３ マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）： ３００
〔Ｍ＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおり1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の１
Ｈ−ＮＭＲスペクトルは第２図のとおり 次に，ＹＬ−０２７２９Ｓ物質は酸と塩を形成すること
ができる。本発明の目的化合物にはこれらの塩を包含す
る。好適な塩としては塩酸塩，臭化水素酸塩，ヨウ化水
素酸塩，硫酸塩，硝酸塩，リン酸塩等の鉱酸塩やギ酸
塩，酢酸塩，プロピオン酸塩，シュウ酸塩，マロン酸
塩，コハク酸塩，フマール酸塩，マレイン酸塩，乳酸
塩，リンゴ酸塩，クエン酸塩，酒石酸塩，炭酸塩，ピク
リン酸塩，メタンスルホン酸塩，エタンスルホン酸塩，
グルタミン酸塩等の有機酸塩を挙げることができる。
〔Ｍ＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおり1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の１
Ｈ−ＮＭＲスペクトルは第２図のとおり 次に，ＹＬ−０２７２９Ｓ物質は酸と塩を形成すること
ができる。本発明の目的化合物にはこれらの塩を包含す
る。好適な塩としては塩酸塩，臭化水素酸塩，ヨウ化水
素酸塩，硫酸塩，硝酸塩，リン酸塩等の鉱酸塩やギ酸
塩，酢酸塩，プロピオン酸塩，シュウ酸塩，マロン酸
塩，コハク酸塩，フマール酸塩，マレイン酸塩，乳酸
塩，リンゴ酸塩，クエン酸塩，酒石酸塩，炭酸塩，ピク
リン酸塩，メタンスルホン酸塩，エタンスルホン酸塩，
グルタミン酸塩等の有機酸塩を挙げることができる。
【０００６】本発明の製造法は，アルスロバクター属に
属する新規抗生物質ＹＬ−０２７２９Ｓ物質を生産する
能力を有する微生物を培地に培養し，培養物中に生成蓄
積させ行うことができる。また，上記の新規抗生物質を
生産する能力を有す微生物を培地に培養し，培養物中に
該化合物を生産させ，次いで該化合物を採取することか
らなる新規抗黄色ブドウ球菌抗生物質の製造法である。
本発明の新規な抗菌活性を有する化合物を生産する菌株
はインドネシア領カリマンタン島で採取された土壌より
分離された微生物で，次のような菌学的性状を有する。
属する新規抗生物質ＹＬ−０２７２９Ｓ物質を生産する
能力を有する微生物を培地に培養し，培養物中に生成蓄
積させ行うことができる。また，上記の新規抗生物質を
生産する能力を有す微生物を培地に培養し，培養物中に
該化合物を生産させ，次いで該化合物を採取することか
らなる新規抗黄色ブドウ球菌抗生物質の製造法である。
本発明の新規な抗菌活性を有する化合物を生産する菌株
はインドネシア領カリマンタン島で採取された土壌より
分離された微生物で，次のような菌学的性状を有する。
【０００７】微生物学的性質 １）形態 肉汁寒天培地上で，３３℃，５日間培養した細胞は多菌
〜球菌（多形成）を示し，運動性の細胞が観察される場
合がある。グラム染色性は不定で，胞子は観察されな
い。 ２）培養的性質 肉汁寒天培地上では，乳白色の光沢を持つコロニー
が観察され，滑走性は認められない。 ハート・インフュージョン液体培地で培養２４時間
後に培地上部が濁るのが観察され，培養５日後には培地
全体が濁り皮膜も観察された。 リトマスミルクで培地では４日目頃から培地が酸性
となった。
〜球菌（多形成）を示し，運動性の細胞が観察される場
合がある。グラム染色性は不定で，胞子は観察されな
い。 ２）培養的性質 肉汁寒天培地上では，乳白色の光沢を持つコロニー
が観察され，滑走性は認められない。 ハート・インフュージョン液体培地で培養２４時間
後に培地上部が濁るのが観察され，培養５日後には培地
全体が濁り皮膜も観察された。 リトマスミルクで培地では４日目頃から培地が酸性
となった。
【０００８】 ３）生理的性質 オキシダーゼ ：陰性 カタラーゼ ：陽性 ウレアーゼ ：陽性 インドールの生成 ：陰性 硫化水素の生成 ：陰性 アルギニン分解能 ：陽性 ポリβハイドロキシブチレート の菌体内蓄積 ：陰性 ＯＦテスト ：Ｏ型 ＮａＣｌ添加培地での生育 ：３％で生育するが４％ 以上で生育しない クエン酸の利用性 ：陰性 硝酸ナトリウムの利用性 ：陽性 脱脂牛乳の凝固 ：陰性 脱脂牛乳のペプトン化 ：陽性 栄養要求性 ：なし 生育温度 ：１５〜３７℃ 生育ｐＨ ：５〜８．５ 嫌気培養 ：陰性 リトマスミルク ：凝固せずにペプトン化する ゼラチンの液化 ：陽性 ４）炭素源の利用性
【０００９】
【表２】 糖の利用性 酸の生成 ───────────────────────── Ｌ−アラビノース ± ＮＴ Ｄ−キシロース ＋ ＋ Ｄ−グルコース ＋ ＋ Ｄ−マンノース ＋ ＮＴ Ｄ−フラクトース ＋ ＮＴ Ｄ−ガラクトース ＋ ＮＴ マルトース ＋ ± シュクロース − − ラクトース − ＋ トレハロース ＋ ＮＴ Ｄ−マンニット ± ± グリセリン ＋ ＮＴ メリビオース − ＮＴ ンニトール ＋ ＮＴ キサンチン ± ＮＴ イノシトール ＋ ＮＴ サリシン − ＮＴ Ｌ−ラフィノース − ＮＴ Ｌ−ラムノース − ＮＴ デンプン ＋ ＮＴ ＋： 陽性 ±：偽陽性 −： 陰性 ＮＴ：試験せず
【００１０】（５）ＤＮＡのＧＣ含量（ＨＰＬＣ法によ
る） Ｇ＋Ｃ（ｍｏｌ％）＝６７．４ 以上の微生物学的性質をまとめると，本菌株はグラム染
色性不定で，各種培地において桿菌から球菌の多形性を
示し運動性を有する。生育温度範囲は１５〜３７℃で，
オキシダーゼ試験は陰性であり，カタラーゼ試験は陽性
で，硫化水素の生成，インドールの生成試験結果は陰性
である。またＤＮＡのＧＣ含量は６７．４ｍｏｌ％であ
る（ＨＰＬＣ法）。
る） Ｇ＋Ｃ（ｍｏｌ％）＝６７．４ 以上の微生物学的性質をまとめると，本菌株はグラム染
色性不定で，各種培地において桿菌から球菌の多形性を
示し運動性を有する。生育温度範囲は１５〜３７℃で，
オキシダーゼ試験は陰性であり，カタラーゼ試験は陽性
で，硫化水素の生成，インドールの生成試験結果は陰性
である。またＤＮＡのＧＣ含量は６７．４ｍｏｌ％であ
る（ＨＰＬＣ法）。
【００１１】このような性質を有する菌をバージーズ・
マニュアル・オブ・デターミネィテブ・バクテリオロジ
ィ第８版（Baergey's Manual of Determinative Bacter
iology, 8th ed., 1975），及び バージーズ・マニュ
アル・オブ・システマティック・バクテリオロジィ（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology, 1984），
およびその他の文献によって検索した結果，本菌株は
アルスロバクター（Arthrobacter）属に属する細菌であ
ると判断される。次にアルスロバクター属に属する既知
菌種と本菌株の性状を上記の文献などによって比較した
が，生理的性質，糖の利用性などによって一致する菌種
はみあたらなかった。
マニュアル・オブ・デターミネィテブ・バクテリオロジ
ィ第８版（Baergey's Manual of Determinative Bacter
iology, 8th ed., 1975），及び バージーズ・マニュ
アル・オブ・システマティック・バクテリオロジィ（Be
rgey's Manual of Systematic Bacteriology, 1984），
およびその他の文献によって検索した結果，本菌株は
アルスロバクター（Arthrobacter）属に属する細菌であ
ると判断される。次にアルスロバクター属に属する既知
菌種と本菌株の性状を上記の文献などによって比較した
が，生理的性質，糖の利用性などによって一致する菌種
はみあたらなかった。
【００１２】そこで本菌株をアルスロバクター エスピ
ー（Arthrobacter sp.）ＹＬ−０２７２９Ｓと命名し
た。なお本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第１３１０２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３１０
２）として寄託されている。
ー（Arthrobacter sp.）ＹＬ−０２７２９Ｓと命名し
た。なお本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第１３１０２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３１０
２）として寄託されている。
【００１３】（製造法）本発明の新規抗生物質の製造法
を実施するに当たり，該化合物の生産菌株 アルスロバ
クター エスピー ＹＬ−０２７２９Ｓ株の栄養源を含
有する培地に接種し，好気的に発育させることにより，
本発明の新規目的化合物を含む培養物が得られる。栄養
物としては，細菌の栄養源として公知のものを使用すれ
ばよい。たとえば市販されているペプトン，肉エキス，
コーン・スティープリカー，綿実粉，落花生粉，大豆
粉，酵母エキス，ＮＺ−アミン，カゼインの水解物，魚
粉，硝酸ソーダー，硝酸アンモニュウム等の無機または
有機の窒素源，市販されている糖蜜，澱粉，デキストリ
ン，蔗糖，グルコース，マルトース，フラクトース，キ
シロース，ラムノース，マンニトール，グリセリン等の
炭水化物あるいは脂肪等の炭素源が使用できる。
を実施するに当たり，該化合物の生産菌株 アルスロバ
クター エスピー ＹＬ−０２７２９Ｓ株の栄養源を含
有する培地に接種し，好気的に発育させることにより，
本発明の新規目的化合物を含む培養物が得られる。栄養
物としては，細菌の栄養源として公知のものを使用すれ
ばよい。たとえば市販されているペプトン，肉エキス，
コーン・スティープリカー，綿実粉，落花生粉，大豆
粉，酵母エキス，ＮＺ−アミン，カゼインの水解物，魚
粉，硝酸ソーダー，硝酸アンモニュウム等の無機または
有機の窒素源，市販されている糖蜜，澱粉，デキストリ
ン，蔗糖，グルコース，マルトース，フラクトース，キ
シロース，ラムノース，マンニトール，グリセリン等の
炭水化物あるいは脂肪等の炭素源が使用できる。
【００１４】また金属塩として，Ｎａ，Ｋ，Ｍｇ，Ｃ
ａ，Ｚｎ，Ｆｅ 等の硫酸塩，塩酸塩，硝酸塩，燐酸
塩，炭酸塩等が必要に応じて添加される。さらに必要に
応じてバリン，ロイシン，イソロイシン，スレオニン，
フェニルアラニン，トリプトファン，メチオニン，リジ
ン，アルギニン，システイン，シスチン等の他，通常知
られているアミノ酸類や，オレイン酸メチル，ラード
油，シリコン油，界面活性剤等の抗生物質生成促進物質
または消泡剤が適宜使用される。これらのもの以外で
も，該生産菌が利用し，本発明の新規抗生物質の生産に
役立つものであれば何れでも使用することができる。培
用法としては，一般の抗生物質の生産方法と同様に行え
ばよく，その培養方法は固体培養でも液体培養でもよ
い。
ａ，Ｚｎ，Ｆｅ 等の硫酸塩，塩酸塩，硝酸塩，燐酸
塩，炭酸塩等が必要に応じて添加される。さらに必要に
応じてバリン，ロイシン，イソロイシン，スレオニン，
フェニルアラニン，トリプトファン，メチオニン，リジ
ン，アルギニン，システイン，シスチン等の他，通常知
られているアミノ酸類や，オレイン酸メチル，ラード
油，シリコン油，界面活性剤等の抗生物質生成促進物質
または消泡剤が適宜使用される。これらのもの以外で
も，該生産菌が利用し，本発明の新規抗生物質の生産に
役立つものであれば何れでも使用することができる。培
用法としては，一般の抗生物質の生産方法と同様に行え
ばよく，その培養方法は固体培養でも液体培養でもよ
い。
【００１５】液体培養の場合は静置培養，撹拌培養，振
盪培養等のいずれを実施してもよいが，特に通気撹拌培
養が好ましい。また，培養温度は生産菌が発育し，本発
明の化合物を生産する温度，すなわち１５℃〜３７℃の
範囲で適宜変更出来るが，およそ３２℃が好ましい。培
地のｐＨは４〜９の範囲で適宜変更できるが，ｐＨ６〜
８が好ましい。培養時間は種々の条件によって異なり，
１０時間〜１６８時間であるが，通常２４時間〜１２０
時間程度で培養物中に蓄積される目的化合物が最高力価
に達する。培養物から目的化合物を採取するには，微生
物の生産する代謝産物に用いる通常の抽出，分離，精製
の手段が適宜利用される。培養物中の目的化合物は培養
物をそのままか，又は遠心分離あるいは培養物に濾過助
剤を加え濾過して得られた培養濾液に，酢酸エチル，ク
ロロホルム，ベンゼン，トルエン等の水と混和しない有
機溶媒を加えて抽出する。
盪培養等のいずれを実施してもよいが，特に通気撹拌培
養が好ましい。また，培養温度は生産菌が発育し，本発
明の化合物を生産する温度，すなわち１５℃〜３７℃の
範囲で適宜変更出来るが，およそ３２℃が好ましい。培
地のｐＨは４〜９の範囲で適宜変更できるが，ｐＨ６〜
８が好ましい。培養時間は種々の条件によって異なり，
１０時間〜１６８時間であるが，通常２４時間〜１２０
時間程度で培養物中に蓄積される目的化合物が最高力価
に達する。培養物から目的化合物を採取するには，微生
物の生産する代謝産物に用いる通常の抽出，分離，精製
の手段が適宜利用される。培養物中の目的化合物は培養
物をそのままか，又は遠心分離あるいは培養物に濾過助
剤を加え濾過して得られた培養濾液に，酢酸エチル，ク
ロロホルム，ベンゼン，トルエン等の水と混和しない有
機溶媒を加えて抽出する。
【００１６】また培養濾液を適宜の担体に接触させ，濾
液中の目的化合物を吸着させ，次いで適当な溶媒で溶出
する事により目的化合物を抽出する事ができる。更に詳
しく述べるならば，例えばアンバーライトＸＡＤ−２，
ダイヤイオンＨＰ２０，ダイヤイオンＣＨＰ２０Ｐまた
はダイヤイオンＳＰ９００のごとき多孔性吸着樹脂に接
触させて目的化合物を吸着させる。ついでメタノール，
エタノール，アセトン，アセトニトリル等の有機溶剤と
水の混合液を用いて目的物を溶出させる。この時の溶媒
の混合比は，目的化合物が最も効率よく溶出しうる値に
することはいうまでもない。すなわち溶媒比率を低濃度
より段階的，または連続的に高濃度まで上げて行くこと
により，目的化合物の含まれる比率の，より高い画分を
得ることが出来る。
液中の目的化合物を吸着させ，次いで適当な溶媒で溶出
する事により目的化合物を抽出する事ができる。更に詳
しく述べるならば，例えばアンバーライトＸＡＤ−２，
ダイヤイオンＨＰ２０，ダイヤイオンＣＨＰ２０Ｐまた
はダイヤイオンＳＰ９００のごとき多孔性吸着樹脂に接
触させて目的化合物を吸着させる。ついでメタノール，
エタノール，アセトン，アセトニトリル等の有機溶剤と
水の混合液を用いて目的物を溶出させる。この時の溶媒
の混合比は，目的化合物が最も効率よく溶出しうる値に
することはいうまでもない。すなわち溶媒比率を低濃度
より段階的，または連続的に高濃度まで上げて行くこと
により，目的化合物の含まれる比率の，より高い画分を
得ることが出来る。
【００１７】酢酸エチル，クロロホルム等の有機溶媒で
抽出する場合には培養濾液にこれらの溶媒を加え，よく
振盪し，目的化合物を抽出する。つぎに上記の各操作法
を用いて得られた目的化合物含有画分は常用の吸着担
体，例えば活性炭，アルミナ，シリカゲル，セルロース
等を担体に用いたカラムクロマトグラフィーや，シリカ
ゲル系ＯＤＳ逆相担体のカラムを用いた高速液体クロマ
トグラフィー等の常法により，更に純粋に分離精製する
ことができる。
抽出する場合には培養濾液にこれらの溶媒を加え，よく
振盪し，目的化合物を抽出する。つぎに上記の各操作法
を用いて得られた目的化合物含有画分は常用の吸着担
体，例えば活性炭，アルミナ，シリカゲル，セルロース
等を担体に用いたカラムクロマトグラフィーや，シリカ
ゲル系ＯＤＳ逆相担体のカラムを用いた高速液体クロマ
トグラフィー等の常法により，更に純粋に分離精製する
ことができる。
【００１８】
【実施例】 実施例 １ グルコース１．０％，ポテトスターチ２．０％，酵母エ
キス０．５％，ポリペプトン０．５％，炭酸カルシウム
０．４％を含む種培地（ｐＨ７．０）を作成し，各６０
ｍｌずつ５００ｍｌの三角フラスコに分注した。この培
地を１２０℃で２０分間滅菌した後，ベネット寒天上に
良く生育させたアルスロバクター エスピー ＹＬ−０
２７２９Ｓ株の菌体をかき取って接種し，２８℃で７２
時間振盪培養を行って種培養液とした。つぎに生産培地
として，上記と同様の培地を全く同様の方法で分注し，
滅菌したものに上記種培養液を３％の割合で植菌し，２
８℃で７２時間培養した。
キス０．５％，ポリペプトン０．５％，炭酸カルシウム
０．４％を含む種培地（ｐＨ７．０）を作成し，各６０
ｍｌずつ５００ｍｌの三角フラスコに分注した。この培
地を１２０℃で２０分間滅菌した後，ベネット寒天上に
良く生育させたアルスロバクター エスピー ＹＬ−０
２７２９Ｓ株の菌体をかき取って接種し，２８℃で７２
時間振盪培養を行って種培養液とした。つぎに生産培地
として，上記と同様の培地を全く同様の方法で分注し，
滅菌したものに上記種培養液を３％の割合で植菌し，２
８℃で７２時間培養した。
【００１９】このようにして培養した３ｌの培養液を６
０００ｒｐｍで１０分間遠心して約２．５ の遠心上清
液を得た。この遠心上清液（ｐＨ７）に３ｌの酢酸エチ
ルを加え，よく振盪して目的のＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を抽出した。次にこの酢酸エチルの抽出液を芒硝でよく
脱水後，減圧下で濃縮乾固し，９６３．３ｍｇのＹＬ−
０２７２９Ｓ粗抽出物を得た。これを更に精製するた
め，約５ の酢酸エチルに溶解し，１０枚のシリカゲル
薄層プレート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ
社製，２０ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯状
にチャージし，ベンゼン：アセトン（６：４）の溶媒で
展開した。
０００ｒｐｍで１０分間遠心して約２．５ の遠心上清
液を得た。この遠心上清液（ｐＨ７）に３ｌの酢酸エチ
ルを加え，よく振盪して目的のＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を抽出した。次にこの酢酸エチルの抽出液を芒硝でよく
脱水後，減圧下で濃縮乾固し，９６３．３ｍｇのＹＬ−
０２７２９Ｓ粗抽出物を得た。これを更に精製するた
め，約５ の酢酸エチルに溶解し，１０枚のシリカゲル
薄層プレート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ
社製，２０ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯状
にチャージし，ベンゼン：アセトン（６：４）の溶媒で
展開した。
【００２０】この薄層プレートは展開後風乾し，ＵＶラ
ンプ（２５４ｎｍ）で目的物のバンドを確認した後，そ
の部分を掻き取り，酢酸エチル：メタノール（９：１）
で目的物を溶出した。この溶出画分は減圧濃縮し，真空
下で乾固して３２．６ｍｇの粗ＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を得た。更に純粋に精製するため上記と同様に約０．３
の酢酸エチルに溶解し，１枚のシリカゲル薄層プレー
ト（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ社製，２０
ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯状にチャージ
し，クロロホルム：メタノール：アンモニア（９：１：
０．１）の溶媒で展開した。
ンプ（２５４ｎｍ）で目的物のバンドを確認した後，そ
の部分を掻き取り，酢酸エチル：メタノール（９：１）
で目的物を溶出した。この溶出画分は減圧濃縮し，真空
下で乾固して３２．６ｍｇの粗ＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を得た。更に純粋に精製するため上記と同様に約０．３
の酢酸エチルに溶解し，１枚のシリカゲル薄層プレー
ト（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ社製，２０
ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯状にチャージ
し，クロロホルム：メタノール：アンモニア（９：１：
０．１）の溶媒で展開した。
【００２１】この薄層プレートは展開後風乾し，ＵＶラ
ンプ（２５４ｎｍ）で目的物のバンドを確認した後，そ
の部分を掻き取り，ベンゼン：アセトン（６：４）で目
的物を溶出した。この溶出液は減圧下で濃縮乾固した
後，一夜真空デシケータで乾燥し，純粋なＹＬ−０２６
３２Ｓ物質を１１．０ｍｇ得た。
ンプ（２５４ｎｍ）で目的物のバンドを確認した後，そ
の部分を掻き取り，ベンゼン：アセトン（６：４）で目
的物を溶出した。この溶出液は減圧下で濃縮乾固した
後，一夜真空デシケータで乾燥し，純粋なＹＬ−０２６
３２Ｓ物質を１１．０ｍｇ得た。
【００２２】上記抽出，分離，精製されたＹＬ−０２６
３２Ｓ物質は下記の物理化学的性質を有する。 分子量：２９９．４１３ マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）： ３００〔Ｍ
＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおりである。
３２Ｓ物質は下記の物理化学的性質を有する。 分子量：２９９．４１３ マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）： ３００〔Ｍ
＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおりである。
【００２３】1Ｈ−ＮＭＲスペクトル： ＹＬ−０２７２
９Ｓ物質の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは，第２図のとおり
である。13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第３図のとおりである。 色および形状：白色または微黄色の無定型半透明固体。 酸性，中性，塩基性の区分：中性。 溶解性：メタノール，エタノール，アセトン，酢酸エチ
ル，クロロホルム等には溶けるが水には溶け難く，ヘキ
サンにはほとんど溶けない。 上記の理化学的性状からＹＬ−０２７２９Ｓ物質の化学
構造は下記Ａ又はＢが示唆される。
９Ｓ物質の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは，第２図のとおり
である。13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第３図のとおりである。 色および形状：白色または微黄色の無定型半透明固体。 酸性，中性，塩基性の区分：中性。 溶解性：メタノール，エタノール，アセトン，酢酸エチ
ル，クロロホルム等には溶けるが水には溶け難く，ヘキ
サンにはほとんど溶けない。 上記の理化学的性状からＹＬ−０２７２９Ｓ物質の化学
構造は下記Ａ又はＢが示唆される。
【００２４】
【化１】
【００２５】実施例２ 実施例１と全く同様の方法で種培養培地，生産培地を調
製し，同様の方法で培養を行った。このようにして培養
した５ｌの培養液を６０００ｒｐｍで１０分間遠心し約
３．５ｌの遠心上清液を得た。得られた遠心上清液（ｐ
Ｈ７）を酢酸エチル４ｍｌで抽出し，有機層を濃縮して
ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の粗抽出物を得た。次いでシリ
カカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ−３００・
和光純薬工業社製）に供し，ベンゼン：アセトン（＝
９：１）で展開し，５ｍｌずつのフラクションに分画し
た。その結果，目的物は，フラクションナンバー８７か
ら１０９に溶出された。
製し，同様の方法で培養を行った。このようにして培養
した５ｌの培養液を６０００ｒｐｍで１０分間遠心し約
３．５ｌの遠心上清液を得た。得られた遠心上清液（ｐ
Ｈ７）を酢酸エチル４ｍｌで抽出し，有機層を濃縮して
ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の粗抽出物を得た。次いでシリ
カカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ−３００・
和光純薬工業社製）に供し，ベンゼン：アセトン（＝
９：１）で展開し，５ｍｌずつのフラクションに分画し
た。その結果，目的物は，フラクションナンバー８７か
ら１０９に溶出された。
【００２６】この画分を集め，濃縮乾固した後に，真空
下で一夜乾燥し，１０２．６ｍｇの目的物を得た。つい
で，ＯＤＳ−ＨＰＬＣ（ＳＴＲ−ＯＤＳ，島津テクノリ
サーチ製）に供し０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ４．３
５）：テトラヒドロフラン：メタノール（＝３０：５：
６５）で展開し活性を有するピークを分取した。その結
果，純粋なＹＬ−０２７２９Ｓ物質を１５．７ｍｇ得
た。
下で一夜乾燥し，１０２．６ｍｇの目的物を得た。つい
で，ＯＤＳ−ＨＰＬＣ（ＳＴＲ−ＯＤＳ，島津テクノリ
サーチ製）に供し０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ４．３
５）：テトラヒドロフラン：メタノール（＝３０：５：
６５）で展開し活性を有するピークを分取した。その結
果，純粋なＹＬ−０２７２９Ｓ物質を１５．７ｍｇ得
た。
【００２７】
【発明の効果】本発明化合物は，新規且つ有用な微生物
を提供すると共に，各種グラム陽性細菌に活性を有し，
中でもＭＲＳＡなどの高度多剤耐性を含むブドウ状球菌
にも抗菌作用を示す。これらの作用を以下に示す。 試験管内における抗菌活性（ＭＩＣ） ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の種々の微生物に対する抗菌活
性を測定する。この測定は，ミューラーヒントン培地を
用いた寒天希釈平板培養法によって行った。
を提供すると共に，各種グラム陽性細菌に活性を有し，
中でもＭＲＳＡなどの高度多剤耐性を含むブドウ状球菌
にも抗菌作用を示す。これらの作用を以下に示す。 試験管内における抗菌活性（ＭＩＣ） ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の種々の微生物に対する抗菌活
性を測定する。この測定は，ミューラーヒントン培地を
用いた寒天希釈平板培養法によって行った。
【００２８】
【表３】
【図１】ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の紫外部吸収スペクト
ルを示す。
ルを示す。
【図２】ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の１Ｈ−ＮＭＲスペク
トルを示す。
トルを示す。
【図３】ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の１３Ｃ−ＮＭＲスペ
クトルを示す。
クトルを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１１月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１９】このようにして培養した３ｌの培養液を６
０００ｒｐｍで１０分間遠心して約２．５ｌの遠心上清
液を得た。この遠心上清液（ｐＨ７）に３ｌの酢酸エチ
ルを加え，よく振盪して目的のＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を抽出した。次にこの酢酸エチルの抽出液を芒硝でよく
脱水後，減圧下で濃縮乾固し，９６３．３ｍｇのＹＬ−
０２７２９Ｓ粗抽出物を得た。これを更に精製するた
め，約５ｍｌの酢酸エチルに溶解し，１０枚のシリカゲ
ル薄層プレート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃ
ｋ社製，２０ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯
状にチャージし，ベンゼン：アセトン（６：４）の溶媒
で展開した。
０００ｒｐｍで１０分間遠心して約２．５ｌの遠心上清
液を得た。この遠心上清液（ｐＨ７）に３ｌの酢酸エチ
ルを加え，よく振盪して目的のＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を抽出した。次にこの酢酸エチルの抽出液を芒硝でよく
脱水後，減圧下で濃縮乾固し，９６３．３ｍｇのＹＬ−
０２７２９Ｓ粗抽出物を得た。これを更に精製するた
め，約５ｍｌの酢酸エチルに溶解し，１０枚のシリカゲ
ル薄層プレート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃ
ｋ社製，２０ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯
状にチャージし，ベンゼン：アセトン（６：４）の溶媒
で展開した。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２０】この薄層プレートは展開後風乾し，ＵＶラ
ンプ（２５４ｎｍ）で目的物のバンドを確認した後，そ
の部分を掻き取り，酢酸エチル：メタノール（９：１）
で目的物を溶出した。この溶出画分は減圧濃縮し，真空
下で乾固して３２．６ｍｇの粗ＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を得た。更に純粋に精製するため上記と同様に約０．３
ｍｌの酢酸エチルに溶解し，１枚のシリカゲル薄層プレ
ート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ社製，２
０ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯状にチャー
ジし，クロロホルム：メタノール：アンモニア（９：
１：０．１）の溶媒で展開した。
ンプ（２５４ｎｍ）で目的物のバンドを確認した後，そ
の部分を掻き取り，酢酸エチル：メタノール（９：１）
で目的物を溶出した。この溶出画分は減圧濃縮し，真空
下で乾固して３２．６ｍｇの粗ＹＬ−０２７２９Ｓ物質
を得た。更に純粋に精製するため上記と同様に約０．３
ｍｌの酢酸エチルに溶解し，１枚のシリカゲル薄層プレ
ート（キーゼルゲル６０Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ社製，２
０ｃｍ×２０ｃｍ）の下から２ｃｍの所に帯状にチャー
ジし，クロロホルム：メタノール：アンモニア（９：
１：０．１）の溶媒で展開した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２５】実施例２ 実施例１と全く同様の方法で種培養培地，生産培地を調
製し，同様の方法で培養を行った。このようにして培養
した５ｌの培養液を６０００ｒｐｍで１０分間遠心し約
３．５ｌの遠心上清液を得た。得られた遠心上清液（ｐ
Ｈ７）を酢酸エチル４ｌで抽出し，有機層を濃縮してＹ
Ｌ−０２７２９Ｓ物質の粗抽出物を得た。次いでシリカ
カラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ−３００・和
光純薬工業社製）に供し，ベンゼン：アセトン（＝９：
１）で展開し，５ｍｌずつのフラクションに分画した。
その結果，目的物は，フラクションナンバー８７から１
０９に溶出された。
製し，同様の方法で培養を行った。このようにして培養
した５ｌの培養液を６０００ｒｐｍで１０分間遠心し約
３．５ｌの遠心上清液を得た。得られた遠心上清液（ｐ
Ｈ７）を酢酸エチル４ｌで抽出し，有機層を濃縮してＹ
Ｌ−０２７２９Ｓ物質の粗抽出物を得た。次いでシリカ
カラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ−３００・和
光純薬工業社製）に供し，ベンゼン：アセトン（＝９：
１）で展開し，５ｍｌずつのフラクションに分画した。
その結果，目的物は，フラクションナンバー８７から１
０９に溶出された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鈴木 康人 東京都台東区柳橋１−12−５ カサ・デ・ ファミリア ２Ｆ (72)発明者 徳永 達祐 茨城県取手市井野台２−５−１−702 (72)発明者 ブッド ルマナウ インドネシア ジャカルタ ジャカルタ セラタン アールティー 004 アールヴ ィー 006 カリバタ インダー ブロッ ク ディー 18 (72)発明者 ラトナ ムルニ ランティアトモジョ インドネシア ジャカルタ ジャカルタ 11510 アールティー 008 アールヴィー 009 コンプレックス グリーンヴィル ブロック オー ナンバー 12
Claims (3)
- 【請求項１】 次の理化学的性状を有する新規抗生物質
ＹＬ−０２７２９Ｓ物質又はその塩； 分子量：２９９．４１３ マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）： ３００〔Ｍ
＋Ｈ〕 ２９８〔Ｍ−Ｈ〕 分子式：Ｃ19Ｈ25Ｎ０2 紫外部吸収スペクトル：２５３，３４４ｎｍに吸収極大
を示し，第１図のとおり1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の 1
Ｈ−ＮＭＲスペクトルは第２図のとおり13 Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＹＬ−０２７２９Ｓ物質の
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第３図のとおり - 【請求項２】 アルスロバクター（Ａrthrobacter）属
に属し，請求項１に記載の新規抗生物質ＹＬ−０２７２
９Ｓ物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養
し，培養物中に生成蓄積した新規抗生物質ＹＬ−０２７
２９Ｓ物質を採取することを特徴とする新規ＹＬ−０２
７２９Ｓ物質の製造法。 - 【請求項３】 アルスロバクター（Arthrobacter）属に
属する微生物が，アルスロバクター（Arthrobacter）エ
スピーＹＬ−０２７２９Ｓ（微工研菌寄第１３１０２
号）である請求項２記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23429792A JP3117294B2 (ja) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | 新規抗生物質及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23429792A JP3117294B2 (ja) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | 新規抗生物質及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07189A true JPH07189A (ja) | 1995-01-06 |
| JP3117294B2 JP3117294B2 (ja) | 2000-12-11 |
Family
ID=16968791
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23429792A Expired - Fee Related JP3117294B2 (ja) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | 新規抗生物質及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3117294B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4946957A (en) * | 1986-10-01 | 1990-08-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Anti-tumor DC-52 derivatives |
| WO1998051306A1 (en) * | 1997-05-16 | 1998-11-19 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Medicinal compositions against helicobacter pylori |
| US6080757A (en) * | 1996-06-06 | 2000-06-27 | Pfizer Inc | Antibiotic quinolones and derivatives |
-
1992
- 1992-08-10 JP JP23429792A patent/JP3117294B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4946957A (en) * | 1986-10-01 | 1990-08-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Anti-tumor DC-52 derivatives |
| US6080757A (en) * | 1996-06-06 | 2000-06-27 | Pfizer Inc | Antibiotic quinolones and derivatives |
| WO1998051306A1 (en) * | 1997-05-16 | 1998-11-19 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | Medicinal compositions against helicobacter pylori |
| EP0992241A4 (en) * | 1997-05-16 | 2001-04-04 | Yamanouchi Pharma Co Ltd | MEDICAL COMPOSITIONS AGAINST HELICOBACTER PYLORI |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3117294B2 (ja) | 2000-12-11 |
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