JPH07198719A - 尿タンパク質およびクレアチニンの測定法 - Google Patents
尿タンパク質およびクレアチニンの測定法Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 水性溶液中のタンパク質およびクレアチニン
の測定方法であって、 （ａ）尿などの試料を用意し；そして以下の（ｂ）
（ｃ）の工程をどちらかの順で行う； （ｂ）溶液のpHを、タンパク質濃度に関するイムノアッ
セイを実施するのに好適なレベルに調整し、次いでイム
ノアッセイ技術によってタンパク質濃度を測定する；お
よび （ｃ）溶液のpHを、クレアチニンに関するアッセイを実
施するのに好適なレベルに調整し、次いでクレアチニン
の比色測定のための試薬を添加することにより試料中の
クレアチニン濃度を測定することを特徴とする方法。 【効果】 本発明によれば、尿タンパク質とクレアチニ
ンを単一反応容器中で正確に測定することができる。
の測定方法であって、 （ａ）尿などの試料を用意し；そして以下の（ｂ）
（ｃ）の工程をどちらかの順で行う； （ｂ）溶液のpHを、タンパク質濃度に関するイムノアッ
セイを実施するのに好適なレベルに調整し、次いでイム
ノアッセイ技術によってタンパク質濃度を測定する；お
よび （ｃ）溶液のpHを、クレアチニンに関するアッセイを実
施するのに好適なレベルに調整し、次いでクレアチニン
の比色測定のための試薬を添加することにより試料中の
クレアチニン濃度を測定することを特徴とする方法。 【効果】 本発明によれば、尿タンパク質とクレアチニ
ンを単一反応容器中で正確に測定することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、水性溶液中のタンパク
質およびクレアチニンの濃度を測定する方法および反応
容器（試験具）に関する。より詳しくは、尿試料中のタ
ンパク質（例えばアルブミン）およびクレアチニンの濃
度を測定する方法および反応容器に関する。
質およびクレアチニンの濃度を測定する方法および反応
容器（試験具）に関する。より詳しくは、尿試料中のタ
ンパク質（例えばアルブミン）およびクレアチニンの濃
度を測定する方法および反応容器に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】ヒト
血清アルブミン（ＨＳＡ）は、尿中の測定可能なタンパ
ク質の一つであり、腎症（ネフロパシー）、すなわち、
腎臓の異常な状態の初期段階を検出することにおいて臨
床的に重要である。インシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤ
Ｍ）およびインシュリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）
を患っている患者の高パーセンテージの者が、正常集団
の上限を越えるレベルでＨＳＡを最終的に排泄する。
「ミクロアルブミン尿症（microalbuminuria）」のこの
段階は、だんだん悪化してネフロパシーに至る。ミクロ
アルブミン尿症の段階での腎臓の損傷は適切な療法を施
すことにより制御または逆転させることが可能であるの
で、ミクロアルブミン尿症の測定はＩＤＤＭおよびＮＩ
ＤＤＭの総合的な手当の一部であることがよく認識され
ている。
血清アルブミン（ＨＳＡ）は、尿中の測定可能なタンパ
ク質の一つであり、腎症（ネフロパシー）、すなわち、
腎臓の異常な状態の初期段階を検出することにおいて臨
床的に重要である。インシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤ
Ｍ）およびインシュリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）
を患っている患者の高パーセンテージの者が、正常集団
の上限を越えるレベルでＨＳＡを最終的に排泄する。
「ミクロアルブミン尿症（microalbuminuria）」のこの
段階は、だんだん悪化してネフロパシーに至る。ミクロ
アルブミン尿症の段階での腎臓の損傷は適切な療法を施
すことにより制御または逆転させることが可能であるの
で、ミクロアルブミン尿症の測定はＩＤＤＭおよびＮＩ
ＤＤＭの総合的な手当の一部であることがよく認識され
ている。
【０００３】他の尿媒介性タンパク質、例えば、Ｉｇ
Ｇ、α−１−ミクログロブリン、ベンス・ジョーンズタ
ンパク質およびＮ−アセチル−ｂ−Ｄ−グルコサミニダ
ーゼは、タンパク尿症の腎前方、糸球体、および腎後方
形態を検出し、区別するためのマーカーとして有用であ
る。タンパク尿症は、尿中のタンパク質濃度が３０mg/d
L を越える場合に示され、種々の異なる腎臓病に関して
共通する症状である。したがって、腎臓病学者、糖尿病
学者および心臓病学者の側には、尿中のこれらのタンパ
ク質の測定のための高感度で、特異的で、定量的な試験
方法の必要性が存在する。
Ｇ、α−１−ミクログロブリン、ベンス・ジョーンズタ
ンパク質およびＮ−アセチル−ｂ−Ｄ−グルコサミニダ
ーゼは、タンパク尿症の腎前方、糸球体、および腎後方
形態を検出し、区別するためのマーカーとして有用であ
る。タンパク尿症は、尿中のタンパク質濃度が３０mg/d
L を越える場合に示され、種々の異なる腎臓病に関して
共通する症状である。したがって、腎臓病学者、糖尿病
学者および心臓病学者の側には、尿中のこれらのタンパ
ク質の測定のための高感度で、特異的で、定量的な試験
方法の必要性が存在する。
【０００４】尿タンパク質のアッセイの感度および特異
性を増し、尿の希釈をもたらす高い尿流速の問題を最小
にするためには、タンパク質／クレアチニン比を尿タン
パク質アッセイ結果に用いて尿濃度を正規化（標準化）
する。典型的な尿タンパク質分析は、イムノアッセイ、
例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、
ラテックス使用イムノアッセイおよび免疫濁度測定アッ
セイ（immunoturbidimetric assay)を包含する。アルカ
リJaffe 法および Benedict-Behre 法のような一般的な
クレアチニンアッセイは、典型的には１１．５〜１２．
５の範囲の高pHで実施される。現代の臨床実験室におけ
る一般的な実務は、タンパク質アッセイとクレアチニン
アッセイを別々に実施し、次いでこれらのアッセイから
得られた値を一緒にしてタンパク質−クレアチニン比を
生成するものである。尿流速が高い患者は尿の希釈のた
めに人為的に低いタンパク質値を有し得るので、また、
クレアチニンは尿の希釈の良いマーカーであるので、タ
ンパク質／クレアチニン比を使用することは、尿希釈の
問題を排除し、真のタンパク質排泄率のより正確な反映
を与える。
性を増し、尿の希釈をもたらす高い尿流速の問題を最小
にするためには、タンパク質／クレアチニン比を尿タン
パク質アッセイ結果に用いて尿濃度を正規化（標準化）
する。典型的な尿タンパク質分析は、イムノアッセイ、
例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、
ラテックス使用イムノアッセイおよび免疫濁度測定アッ
セイ（immunoturbidimetric assay)を包含する。アルカ
リJaffe 法および Benedict-Behre 法のような一般的な
クレアチニンアッセイは、典型的には１１．５〜１２．
５の範囲の高pHで実施される。現代の臨床実験室におけ
る一般的な実務は、タンパク質アッセイとクレアチニン
アッセイを別々に実施し、次いでこれらのアッセイから
得られた値を一緒にしてタンパク質−クレアチニン比を
生成するものである。尿流速が高い患者は尿の希釈のた
めに人為的に低いタンパク質値を有し得るので、また、
クレアチニンは尿の希釈の良いマーカーであるので、タ
ンパク質／クレアチニン比を使用することは、尿希釈の
問題を排除し、真のタンパク質排泄率のより正確な反映
を与える。
【０００５】Clin. Chem. 32/8, 1544-1548 (1986)にお
いて、Watts らは低濃度の尿アルブミンの測定のための
４つの免疫化学的方法（ラジオイムノアッセイ、放射免
疫拡散法、免疫濁度測定アッセイおよび酵素結合免疫吸
着アッセイ）を考察している。彼らは、糖尿病性ネフロ
パシーはインシュリン依存性糖尿病による死亡の主要な
原因であること、および臨床化学実験室は、実行可能
で、アルブミンについて特異的で感度が良い技術を必要
としていることを指摘している。Watts らは、さらにPr
actical Diabetes vol.9, No. 3, pp.84-86 において、
ミクロアルブミン尿症は指示薬色素結合試験による検出
を免れる尿アルブミンの正常を上回る（supranormal)量
であること、そしてそれは糖尿病患者における初期のネ
フロパシーと心臓血管疾患の両方の強力なマーカーであ
ることを指摘している。
いて、Watts らは低濃度の尿アルブミンの測定のための
４つの免疫化学的方法（ラジオイムノアッセイ、放射免
疫拡散法、免疫濁度測定アッセイおよび酵素結合免疫吸
着アッセイ）を考察している。彼らは、糖尿病性ネフロ
パシーはインシュリン依存性糖尿病による死亡の主要な
原因であること、および臨床化学実験室は、実行可能
で、アルブミンについて特異的で感度が良い技術を必要
としていることを指摘している。Watts らは、さらにPr
actical Diabetes vol.9, No. 3, pp.84-86 において、
ミクロアルブミン尿症は指示薬色素結合試験による検出
を免れる尿アルブミンの正常を上回る（supranormal)量
であること、そしてそれは糖尿病患者における初期のネ
フロパシーと心臓血管疾患の両方の強力なマーカーであ
ることを指摘している。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は尿試料の同一の
アリコートを用いて単一の反応容器中で尿タンパク質お
よびクレアチニンを測定する方法である。本発明の方法
は以下の工程を包含する： （ａ）タンパク質およびクレアチニンを含有する疑いが
ある尿試料を用意し、そして以下の（ｂ）（ｃ）の工程
をどちらかの順で行う； （ｂ）尿試料のpHを、タンパク質濃度に関するイムノア
ッセイを実施するのに好適なレベルに調整し、次いでイ
ムノアッセイ技術によってタンパク質濃度を測定する；
および （ｃ）尿試料のpHを、クレアチニンに関するアッセイを
実施するのに好適なレベルに調整し、次いで尿試料中の
クレアチニン濃度を測定する。 個々のタンパク質濃度およびクレアチニン濃度を測定し
た後、それらの比を算出する。
アリコートを用いて単一の反応容器中で尿タンパク質お
よびクレアチニンを測定する方法である。本発明の方法
は以下の工程を包含する： （ａ）タンパク質およびクレアチニンを含有する疑いが
ある尿試料を用意し、そして以下の（ｂ）（ｃ）の工程
をどちらかの順で行う； （ｂ）尿試料のpHを、タンパク質濃度に関するイムノア
ッセイを実施するのに好適なレベルに調整し、次いでイ
ムノアッセイ技術によってタンパク質濃度を測定する；
および （ｃ）尿試料のpHを、クレアチニンに関するアッセイを
実施するのに好適なレベルに調整し、次いで尿試料中の
クレアチニン濃度を測定する。 個々のタンパク質濃度およびクレアチニン濃度を測定し
た後、それらの比を算出する。
【０００７】本発明の実施においては、クレアチニンを
タンパク質より先に測定するオプションＡと、タンパク
質濃度を初めに測定してから試験中の尿試料のクレアチ
ニン濃度を測定するオプションＢの、いずれを用いるこ
とも可能である。測定を実施する順番にかかわらず、尿
試料のpHを、このアッセイに関して最適なpH範囲である
約７〜９のpHで実施されるタンパク質のイムノアッセイ
の要件に適合するように調整することが必要である。ク
レアチニンアッセイは、アッセイ系が正しく作動し得る
ようにクレアチニンを脱プロトン化するために、約１
１．５〜１２．５のpHで実施する。尿中のクレアチニン
の測定に関する最初の実用的な試験は、Jaffe 法として
知られ、アルカリ溶液中でのピクリン酸とクレアチニン
の結合による赤黄色を帯びた褐色のピクリン酸クレアチ
ニンの形成を包含する。より最近のクレアチニン測定法
は、Benedict-Behre法として知られ、別のクレアチニン
反応性試薬である３，５−ジニトロ安息香酸とクレアチ
ニンのアルカリ媒体における反応を包含する。クレアチ
ニンを脱プロトン化するために必要な高pHでクレアチニ
ンと接触すると有色応答を提供するいかなる試薬も、こ
の工程での使用に好適である。
タンパク質より先に測定するオプションＡと、タンパク
質濃度を初めに測定してから試験中の尿試料のクレアチ
ニン濃度を測定するオプションＢの、いずれを用いるこ
とも可能である。測定を実施する順番にかかわらず、尿
試料のpHを、このアッセイに関して最適なpH範囲である
約７〜９のpHで実施されるタンパク質のイムノアッセイ
の要件に適合するように調整することが必要である。ク
レアチニンアッセイは、アッセイ系が正しく作動し得る
ようにクレアチニンを脱プロトン化するために、約１
１．５〜１２．５のpHで実施する。尿中のクレアチニン
の測定に関する最初の実用的な試験は、Jaffe 法として
知られ、アルカリ溶液中でのピクリン酸とクレアチニン
の結合による赤黄色を帯びた褐色のピクリン酸クレアチ
ニンの形成を包含する。より最近のクレアチニン測定法
は、Benedict-Behre法として知られ、別のクレアチニン
反応性試薬である３，５−ジニトロ安息香酸とクレアチ
ニンのアルカリ媒体における反応を包含する。クレアチ
ニンを脱プロトン化するために必要な高pHでクレアチニ
ンと接触すると有色応答を提供するいかなる試薬も、こ
の工程での使用に好適である。
【０００８】本発明の分析方法は、タンパク質とクレア
チニンの測定をどちらの順でも実行することができる。
オプションＡによれば、尿試料を強アルカリおよびクレ
アチニン測定に好適な試薬と混合し、典型的には分光光
度測定手段により得られるクレアチニン濃度測定のため
の色を生じさせる。次いで反応混合物のpHを、適切な酸
性化剤(acidifier) を用いて低下させ、抗体試薬と混合
してタンパク質濃度測定のための濁度を生じさせる。
チニンの測定をどちらの順でも実行することができる。
オプションＡによれば、尿試料を強アルカリおよびクレ
アチニン測定に好適な試薬と混合し、典型的には分光光
度測定手段により得られるクレアチニン濃度測定のため
の色を生じさせる。次いで反応混合物のpHを、適切な酸
性化剤(acidifier) を用いて低下させ、抗体試薬と混合
してタンパク質濃度測定のための濁度を生じさせる。
【０００９】オプションＢにおいては、尿試料を抗体試
薬と混合してタンパク質濃度測定のための濁度を生じさ
せる。次いでアルカリ試薬および適切なクレアチニン指
示薬を添加して、pHを上昇させ、クレアチニン濃度測定
のための色を生じさせる。
薬と混合してタンパク質濃度測定のための濁度を生じさ
せる。次いでアルカリ試薬および適切なクレアチニン指
示薬を添加して、pHを上昇させ、クレアチニン濃度測定
のための色を生じさせる。
【００１０】尿試料および試薬溶液の容量は、特定の分
析環境に好都合などんな量にもすることができるが、一
方、少なめの量、例えば、１〜５０μl の尿、および２
０〜１，０００μl のクレアチニン試薬およびタンパク
質のための免疫試薬を含有する緩衝液で充分である。
析環境に好都合などんな量にもすることができるが、一
方、少なめの量、例えば、１〜５０μl の尿、および２
０〜１，０００μl のクレアチニン試薬およびタンパク
質のための免疫試薬を含有する緩衝液で充分である。
【００１１】オプションＡを用いて測定を実行する場
合、有色のクレアチニン反応産物は次の工程におけるタ
ンパク質の濁度測定アッセイに干渉するので、クレアチ
ニンおよびタンパク質アッセイの間に遅延が生じる。し
たがって、オプションＢが好ましい方法である。これ
は、抗体／タンパク質反応の凝集生成物はアルカリおよ
びクレアチニン試薬を添加するとほとんど直ちに溶解
し、アッセイのこの部分はタンパク質測定の約１秒以内
に実行することができるということが発見されたためで
ある。
合、有色のクレアチニン反応産物は次の工程におけるタ
ンパク質の濁度測定アッセイに干渉するので、クレアチ
ニンおよびタンパク質アッセイの間に遅延が生じる。し
たがって、オプションＢが好ましい方法である。これ
は、抗体／タンパク質反応の凝集生成物はアルカリおよ
びクレアチニン試薬を添加するとほとんど直ちに溶解
し、アッセイのこの部分はタンパク質測定の約１秒以内
に実行することができるということが発見されたためで
ある。
【００１２】この点において、免疫凝集を包含する比濁
アッセイまたは濁度測定アッセイにおけるような光散乱
を包含するタンパク質アッセイ技術は、本発明における
使用に特に好適である。これは、タンパク質と抗体との
間での凝集アッセイ、またはラテックスに結合した抗体
凝集タイプの凝集アッセイであることができる。この場
合、タンパク質の特定のエピトープに特異的な抗体もし
くはそのフラグメントが、水に懸濁し得る粒子（例え
ば、ポリスチレンまたは他のラテックス）およびタンパ
ク質に結合する。抗体または抗体−ラテックスの多数の
エピトープ結合部位と、タンパク質上の複数のエピトー
プとを一緒にすることにより、抗体または抗体−ラテッ
クスとタンパク質との間で大きい凝集塊を形成させるこ
とができる。この凝集塊は、分光光度測定により測定可
能な濁度を生み出し、その濁度の度合いを試験試料中の
タンパク質濃度と相関させる。以下の実施例により、本
発明の方法を用いるＨＳＡおよびクレアチニンの分析を
説明する。
アッセイまたは濁度測定アッセイにおけるような光散乱
を包含するタンパク質アッセイ技術は、本発明における
使用に特に好適である。これは、タンパク質と抗体との
間での凝集アッセイ、またはラテックスに結合した抗体
凝集タイプの凝集アッセイであることができる。この場
合、タンパク質の特定のエピトープに特異的な抗体もし
くはそのフラグメントが、水に懸濁し得る粒子（例え
ば、ポリスチレンまたは他のラテックス）およびタンパ
ク質に結合する。抗体または抗体−ラテックスの多数の
エピトープ結合部位と、タンパク質上の複数のエピトー
プとを一緒にすることにより、抗体または抗体−ラテッ
クスとタンパク質との間で大きい凝集塊を形成させるこ
とができる。この凝集塊は、分光光度測定により測定可
能な濁度を生み出し、その濁度の度合いを試験試料中の
タンパク質濃度と相関させる。以下の実施例により、本
発明の方法を用いるＨＳＡおよびクレアチニンの分析を
説明する。
【００１３】
実施例１オプションＡによるＨＳＡおよびクレアチニンの測定 ５％ポリエチレングリコール溶液１．０８mlに、ＨＳ
Ａ、クレアチニンまたはＨＳＡとクレアチニンの混合物
からなる試料６０μl を添加した。これに続いて、アル
カリ試薬３０μl （リン酸カリウム、pH１３．５）およ
びＤＮＢＡ３０μl によりクレアチニンアッセイを開始
し、そこで５３１nmでの吸光度を２００秒間測定した。
吸光度の増加率は、試料中のクレアチニンの濃度に比例
する（図１に示す）。図１から、試料中のクレアチニン
の濃度は２０〜５００mg/dL の範囲で正確に測定可能で
あることが決定される。測定の直後に、トリスＨＣｌ
〔トリス緩衝剤はトリス（ヒドロキシメチルアミノメタ
ン）である〕５０μl を添加した。この緩衝液により有
色のクレアチニン反応産物が破壊された後（２〜３分）
に、抗血清（ＨＳＡに対するヤギ抗体）６０μl を添加
した。再び５３１nmでの吸光度を１５０秒間測定した。
吸光度の増加率は、図２に示すように試料中のＨＳＡの
濃度に比例する。図２から、ＨＳＡの濃度は５〜５００
mg/Lの範囲で正確に測定可能であることがわかる。
Ａ、クレアチニンまたはＨＳＡとクレアチニンの混合物
からなる試料６０μl を添加した。これに続いて、アル
カリ試薬３０μl （リン酸カリウム、pH１３．５）およ
びＤＮＢＡ３０μl によりクレアチニンアッセイを開始
し、そこで５３１nmでの吸光度を２００秒間測定した。
吸光度の増加率は、試料中のクレアチニンの濃度に比例
する（図１に示す）。図１から、試料中のクレアチニン
の濃度は２０〜５００mg/dL の範囲で正確に測定可能で
あることが決定される。測定の直後に、トリスＨＣｌ
〔トリス緩衝剤はトリス（ヒドロキシメチルアミノメタ
ン）である〕５０μl を添加した。この緩衝液により有
色のクレアチニン反応産物が破壊された後（２〜３分）
に、抗血清（ＨＳＡに対するヤギ抗体）６０μl を添加
した。再び５３１nmでの吸光度を１５０秒間測定した。
吸光度の増加率は、図２に示すように試料中のＨＳＡの
濃度に比例する。図２から、ＨＳＡの濃度は５〜５００
mg/Lの範囲で正確に測定可能であることがわかる。
【００１４】オプションＢによるＨＳＡおよびクレアチ
ニンの測定 ４％ポリエチレングリコール、１０mMトリス、１０mMＥ
ＤＴＡおよび０．０２％アジ化ナトリウムからなるアッ
セイ緩衝液（pH８．５）の１．０８mlに、試料（ＨＳ
Ａ、クレアチニンまたはＨＳＡとクレアチニンの混合
物）６０μl を添加した。これに続いて抗血清試薬６０
μl によりＨＳＡアッセイを開始した。５３１nmでの吸
光度を２００秒間測定した。吸光度の増加率は、試料中
のＨＳＡの濃度に比例する。濁度測定によるＨＳＡ測定
の後、アルカリ試薬３０μl を添加し、続いて３，５−
ジニトロ安息香酸（ＤＮＢＡ）試薬３０μl を添加し
た。アルカリ添加後直ちに濁度は清澄になり、クレアチ
ニンアッセイの開始に当って全く遅延が起こらなかっ
た。再び５３１nmでの吸光度を３分間測定した。吸光度
の増加率は、試料中のクレアチニンの濃度に比例する。
ＨＳＡアッセイおよびクレアチニンアッセイを一緒にし
て図３に示す。図３から、試料中のＨＳＡの濃度は５〜
１，０００mg/Lの範囲で正確に測定可能であり、続いて
試料中のクレアチニン（１５０mg/dL)を正確に測定する
ことができることがわかる。
ニンの測定 ４％ポリエチレングリコール、１０mMトリス、１０mMＥ
ＤＴＡおよび０．０２％アジ化ナトリウムからなるアッ
セイ緩衝液（pH８．５）の１．０８mlに、試料（ＨＳ
Ａ、クレアチニンまたはＨＳＡとクレアチニンの混合
物）６０μl を添加した。これに続いて抗血清試薬６０
μl によりＨＳＡアッセイを開始した。５３１nmでの吸
光度を２００秒間測定した。吸光度の増加率は、試料中
のＨＳＡの濃度に比例する。濁度測定によるＨＳＡ測定
の後、アルカリ試薬３０μl を添加し、続いて３，５−
ジニトロ安息香酸（ＤＮＢＡ）試薬３０μl を添加し
た。アルカリ添加後直ちに濁度は清澄になり、クレアチ
ニンアッセイの開始に当って全く遅延が起こらなかっ
た。再び５３１nmでの吸光度を３分間測定した。吸光度
の増加率は、試料中のクレアチニンの濃度に比例する。
ＨＳＡアッセイおよびクレアチニンアッセイを一緒にし
て図３に示す。図３から、試料中のＨＳＡの濃度は５〜
１，０００mg/Lの範囲で正確に測定可能であり、続いて
試料中のクレアチニン（１５０mg/dL)を正確に測定する
ことができることがわかる。
【００１５】尿中のタンパク質とクレアチニンの組合せ
分析が上述した湿式分析フォーマットによってうまく作
動する一方で、それが米国特許第４，９９０，０７５号
に開示されているような連続的分析アッセイを実施する
ための反応容器への適用に特に好適であることを、我々
は見出した。上記の特許は、液体試験試料中の分析対象
物と相互作用してその分析対象物の関数として検出可能
な応答を生じる第一および第二の分析試薬を包含させた
第一および第二の反応ゾーンを含む分析試薬反応チャン
ネルと、実質的に水平な回転軸とを有する反応容器を開
示する。第二の反応ゾーンは第一の反応ゾーンから予め
決められた距離だけ離して設けられ、第一の反応ゾーン
と液体が流通する状態（フルイドコミュニケーション）
にある。それにより、反応チャンネルに入れられた液体
試験試料は、回転軸に関して反応容器を回転させること
により反応ゾーン間を反応チャンネルに沿って重力によ
り輸送されることが可能である。反応容器は、液体試験
試料の単一方向の流れを反応容器中に提供するための液
体試験試料送達手段と、液体試験試料を送達手段に導入
するための、送達手段と液体が流通する状態にある導入
口手段とを有する。
分析が上述した湿式分析フォーマットによってうまく作
動する一方で、それが米国特許第４，９９０，０７５号
に開示されているような連続的分析アッセイを実施する
ための反応容器への適用に特に好適であることを、我々
は見出した。上記の特許は、液体試験試料中の分析対象
物と相互作用してその分析対象物の関数として検出可能
な応答を生じる第一および第二の分析試薬を包含させた
第一および第二の反応ゾーンを含む分析試薬反応チャン
ネルと、実質的に水平な回転軸とを有する反応容器を開
示する。第二の反応ゾーンは第一の反応ゾーンから予め
決められた距離だけ離して設けられ、第一の反応ゾーン
と液体が流通する状態（フルイドコミュニケーション）
にある。それにより、反応チャンネルに入れられた液体
試験試料は、回転軸に関して反応容器を回転させること
により反応ゾーン間を反応チャンネルに沿って重力によ
り輸送されることが可能である。反応容器は、液体試験
試料の単一方向の流れを反応容器中に提供するための液
体試験試料送達手段と、液体試験試料を送達手段に導入
するための、送達手段と液体が流通する状態にある導入
口手段とを有する。
【００１６】タンパク質／クレアチニンアッセイは、以
下に記載するＡまたはＢのいずれかの形状を用いるこの
反応容器において実施することができる。図４では形状
Ａが用いられており、モノサッカリド、ジサッカリドま
たはオリゴサッカリドのような添加剤と抗体との混合物
が、反応容器１０の第一の反応チャンバー２４中の第一
の試薬部位２８上に乾燥されている。添加剤は、乾燥
中、および乾燥後の長期貯蔵中に抗体を安定化する傾向
があるので、望ましい。添加剤は、乾燥した試薬の剥離
およびひび割れを防止するための物理的安定性をも提供
する。
下に記載するＡまたはＢのいずれかの形状を用いるこの
反応容器において実施することができる。図４では形状
Ａが用いられており、モノサッカリド、ジサッカリドま
たはオリゴサッカリドのような添加剤と抗体との混合物
が、反応容器１０の第一の反応チャンバー２４中の第一
の試薬部位２８上に乾燥されている。添加剤は、乾燥
中、および乾燥後の長期貯蔵中に抗体を安定化する傾向
があるので、望ましい。添加剤は、乾燥した試薬の剥離
およびひび割れを防止するための物理的安定性をも提供
する。
【００１７】この試験具は、例えば分析すべき少量の尿
のような液体試験試料の試験具への導入を可能にする送
達チャンバー２３を形成する内壁１４を有する。そし
て、送達チャンバーは反応チャンネル２１と液体流通状
態にあるので、液体試験試料は送達チャンバーを通って
反応チャンネルに入ることができ、その回転の水平軸に
沿って試験具を時計回りに回転させることにより反応チ
ャンネルに沿って流される。試験試料は、図４に示すよ
うなキャピラリディスペンサー１２を通って好都合に送
達される。
のような液体試験試料の試験具への導入を可能にする送
達チャンバー２３を形成する内壁１４を有する。そし
て、送達チャンバーは反応チャンネル２１と液体流通状
態にあるので、液体試験試料は送達チャンバーを通って
反応チャンネルに入ることができ、その回転の水平軸に
沿って試験具を時計回りに回転させることにより反応チ
ャンネルに沿って流される。試験試料は、図４に示すよ
うなキャピラリディスペンサー１２を通って好都合に送
達される。
【００１８】少量の尿のみが送達チャンネルを通って導
入されることになるので、好適な緩衝剤を含むさらなる
反応液を、送達チャンネルを通して、または本発明の分
析アッセイ手順を実施するための緩衝液および／または
液体試薬を含有するよう適合させた液体送達リザーバー
２６のような別の供給源から導入することができる。液
体送達リザーバーは、必要時まで液体を保持する液体リ
ザーバーとして働く凹部２６をその中に有するリザーバ
ー体２７を包含し、それは反応チャンネル２１へリザー
バー２６中の液体が流れ得るように除去することができ
る膜（示されていない）でおおわれている。簡便な試験
具の操作で、液体リザーバー２６からの液体に担持され
た液体試験試料を、視認チャンバーを通して視認するた
めの位置に流入させることになる。
入されることになるので、好適な緩衝剤を含むさらなる
反応液を、送達チャンネルを通して、または本発明の分
析アッセイ手順を実施するための緩衝液および／または
液体試薬を含有するよう適合させた液体送達リザーバー
２６のような別の供給源から導入することができる。液
体送達リザーバーは、必要時まで液体を保持する液体リ
ザーバーとして働く凹部２６をその中に有するリザーバ
ー体２７を包含し、それは反応チャンネル２１へリザー
バー２６中の液体が流れ得るように除去することができ
る膜（示されていない）でおおわれている。簡便な試験
具の操作で、液体リザーバー２６からの液体に担持され
た液体試験試料を、視認チャンバーを通して視認するた
めの位置に流入させることになる。
【００１９】反応容器は、第一の反応ゾーン２４を有
し、これは典型的には反応チャンネル２１中に入ってい
る。第一の反応ゾーンは、図８において１８ａおよびｂ
として示されている側壁の一方または反応容器１６の内
壁に典型的に付着している第一の試薬部位２８に乾燥抗
体試薬を含有する。試験具の好適な回転は、部位２８の
乾燥抗体試薬を反応液と接触させ、その溶解を容易にす
る。抗体試薬が尿試験試料を担持する反応液中に適当に
溶解したら、試験具１０を右に４５°回転させて視認口
４２をこの液体でカバーさせ、ここで分光光度計で読み
取りを行い、時間の関数としての濁度の変化を測定す
る。これらの読み取りを既知の量のタンパク質を含有す
る尿試料を用いて作製したグラフと比較することによ
り、試験試料中のタンパク質濃度を決定する。
し、これは典型的には反応チャンネル２１中に入ってい
る。第一の反応ゾーンは、図８において１８ａおよびｂ
として示されている側壁の一方または反応容器１６の内
壁に典型的に付着している第一の試薬部位２８に乾燥抗
体試薬を含有する。試験具の好適な回転は、部位２８の
乾燥抗体試薬を反応液と接触させ、その溶解を容易にす
る。抗体試薬が尿試験試料を担持する反応液中に適当に
溶解したら、試験具１０を右に４５°回転させて視認口
４２をこの液体でカバーさせ、ここで分光光度計で読み
取りを行い、時間の関数としての濁度の変化を測定す
る。これらの読み取りを既知の量のタンパク質を含有す
る尿試料を用いて作製したグラフと比較することによ
り、試験試料中のタンパク質濃度を決定する。
【００２０】この時、アッセイ系は、分析手順の第二の
工程の準備ができており、それはクレアチニン濃度の測
定である。ＤＮＢＡのような好適なクレアチニン試薬お
よび同様の添加剤の混合物、および糖添加剤と同じ機能
に役立てるための非反応性タンパク質、ポリエチレング
リコール、ポリエステルもしくはポリビニルアルコール
のような水溶性ポリマーを、第二の反応ゾーンに位置す
る第二の試薬部位３２ａの上に乾燥させる。アルカリ試
薬と添加剤の混合物を水溶性ポリマーと共に、物理的に
互いに離れるように試薬部位３２ａから反対の容器壁に
存在する第三の試薬部位３２ｂの上に乾燥させる。液体
緩衝試薬は、典型的には凝集を増強するためのポリエチ
レングリコール、トリス、保存剤としてＥＤＴＡおよび
アジ化ナトリウム、抗体の安定剤として、および望まし
くない反応生成物の形成を防止するための塩化カリウ
ム、およびpH７〜９で反応容器へのタンパク質の非特異
的吸着を防止するためのゼラチン、加水分解ゼラチン、
オブアルブミンおよびカゼインのような非反応性タンパ
ク質を含んでおり、これを、アッセイするべきタンパク
質およびクレアチニンを含有する尿試料とともに容器中
に導入する。
工程の準備ができており、それはクレアチニン濃度の測
定である。ＤＮＢＡのような好適なクレアチニン試薬お
よび同様の添加剤の混合物、および糖添加剤と同じ機能
に役立てるための非反応性タンパク質、ポリエチレング
リコール、ポリエステルもしくはポリビニルアルコール
のような水溶性ポリマーを、第二の反応ゾーンに位置す
る第二の試薬部位３２ａの上に乾燥させる。アルカリ試
薬と添加剤の混合物を水溶性ポリマーと共に、物理的に
互いに離れるように試薬部位３２ａから反対の容器壁に
存在する第三の試薬部位３２ｂの上に乾燥させる。液体
緩衝試薬は、典型的には凝集を増強するためのポリエチ
レングリコール、トリス、保存剤としてＥＤＴＡおよび
アジ化ナトリウム、抗体の安定剤として、および望まし
くない反応生成物の形成を防止するための塩化カリウ
ム、およびpH７〜９で反応容器へのタンパク質の非特異
的吸着を防止するためのゼラチン、加水分解ゼラチン、
オブアルブミンおよびカゼインのような非反応性タンパ
ク質を含んでおり、これを、アッセイするべきタンパク
質およびクレアチニンを含有する尿試料とともに容器中
に導入する。
【００２１】タンパク質アッセイが完了した後、容器を
さらに１３５°右に回転させてもとの位置から逆転さ
せ、緩衝剤溶液を、試薬部位３２ａで乾燥クレアチニン
検出試薬と、そして部位３２ｂでアルカリ試薬と接触さ
せ、それにより図７に示されるようにその溶解を起こさ
せる。これは、クレアチニン測定反応が起こるのに必要
な１１．５〜１２．５のレベルまで緩衝剤溶液のpHを増
加させる結果となる。
さらに１３５°右に回転させてもとの位置から逆転さ
せ、緩衝剤溶液を、試薬部位３２ａで乾燥クレアチニン
検出試薬と、そして部位３２ｂでアルカリ試薬と接触さ
せ、それにより図７に示されるようにその溶解を起こさ
せる。これは、クレアチニン測定反応が起こるのに必要
な１１．５〜１２．５のレベルまで緩衝剤溶液のpHを増
加させる結果となる。
【００２２】予期せぬことに、クレアチニン濃度は、こ
の溶解工程の少し後、すなわち、１秒以内またはより典
型的には試料を混合し測定を開始するのに必要な時間
（約５秒間）のうちに、分光光度計により測定すること
ができる。これは、タンパク質／抗体凝集によって起こ
った緩衝剤溶液の曇りが、この溶液をクレアチニン測定
試薬および強アルカリと接触させると迅速に清澄になる
という発見による。曇った緩衝剤溶液が、比色測定クレ
アチニン分析が成功して実行されるほど充分に清澄にな
るには通常何日もかかるので、このことは、アッセイ系
をかなりスピードアップする。典型的には、タンパク質
アッセイを完了後クレアチニンアッセイを開始する前
に、忙しい臨床検査実験室のオペレーターは、約３０分
以上、好ましくは５分以上または１分でさえ待とうとし
ない。望ましい場合には、タンパク質の分光光度計によ
る測定値をとった直後にクレアチニンアッセイを実施す
ることができる。
の溶解工程の少し後、すなわち、１秒以内またはより典
型的には試料を混合し測定を開始するのに必要な時間
（約５秒間）のうちに、分光光度計により測定すること
ができる。これは、タンパク質／抗体凝集によって起こ
った緩衝剤溶液の曇りが、この溶液をクレアチニン測定
試薬および強アルカリと接触させると迅速に清澄になる
という発見による。曇った緩衝剤溶液が、比色測定クレ
アチニン分析が成功して実行されるほど充分に清澄にな
るには通常何日もかかるので、このことは、アッセイ系
をかなりスピードアップする。典型的には、タンパク質
アッセイを完了後クレアチニンアッセイを開始する前
に、忙しい臨床検査実験室のオペレーターは、約３０分
以上、好ましくは５分以上または１分でさえ待とうとし
ない。望ましい場合には、タンパク質の分光光度計によ
る測定値をとった直後にクレアチニンアッセイを実施す
ることができる。
【００２３】クレアチニン検出試薬およびアルカリ試薬
の溶解後、試験具を図６に示されている位置に回転させ
て戻す。ここで分光光度計の読み取りを、時間の関数と
しての色形成を得るための時間にわたって視認口４２を
通してとり、これを、既知のクレアチニン濃度を有する
試料で作成したクレアチニン測定と比較して未知のクレ
アチニン濃度を確認する。
の溶解後、試験具を図６に示されている位置に回転させ
て戻す。ここで分光光度計の読み取りを、時間の関数と
しての色形成を得るための時間にわたって視認口４２を
通してとり、これを、既知のクレアチニン濃度を有する
試料で作成したクレアチニン測定と比較して未知のクレ
アチニン濃度を確認する。
【００２４】形状Ｂの場合には、抗体と添加剤の混合物
を第一の試薬部位２８上に乾燥させ、アルカリ試薬およ
び添加剤の混合物を第二の試薬部位３２ａまたはｂのど
ちらかの上に乾燥させる。クレアチニン試薬、ポリエチ
レングリコール、トリス、ＥＤＴＡ、アジ化ナトリウ
ム、塩化カリウムおよび非反応性タンパク質を含むpH７
〜９の液体緩衝剤を、タンパク質およびクレアチニンを
含有する尿試料とともに容器中に導入する。緩衝剤溶液
は、前のように抗体試薬を可溶化し、タンパク質濃度は
視認口４２を通して分光光度計により測定する。タンパ
ク質濃度の測定後、緩衝剤溶液を第二の試薬部位の乾燥
アルカリ試薬と接触させ、それによりアルカリを溶解さ
せてpHをクレアチニンアッセイの実施に必要なレベルに
上昇させる。どちらの形状でも、等価の結果を達成する
ために前に記載した反応容器とともに用いることができ
る。
を第一の試薬部位２８上に乾燥させ、アルカリ試薬およ
び添加剤の混合物を第二の試薬部位３２ａまたはｂのど
ちらかの上に乾燥させる。クレアチニン試薬、ポリエチ
レングリコール、トリス、ＥＤＴＡ、アジ化ナトリウ
ム、塩化カリウムおよび非反応性タンパク質を含むpH７
〜９の液体緩衝剤を、タンパク質およびクレアチニンを
含有する尿試料とともに容器中に導入する。緩衝剤溶液
は、前のように抗体試薬を可溶化し、タンパク質濃度は
視認口４２を通して分光光度計により測定する。タンパ
ク質濃度の測定後、緩衝剤溶液を第二の試薬部位の乾燥
アルカリ試薬と接触させ、それによりアルカリを溶解さ
せてpHをクレアチニンアッセイの実施に必要なレベルに
上昇させる。どちらの形状でも、等価の結果を達成する
ために前に記載した反応容器とともに用いることができ
る。
【００２５】ある具体的な態様においては、ＨＳＡに対
するヤギ抗血清を、第一の試薬部位上で乾燥させること
により抗体試薬として用いた。この物質は、商業的に入
手可能であり、さらに処理することなしに用いることが
できる。好ましくは、抗血清は２倍に濃縮し、安定剤と
して２〜５％のレベルのスクロース／トレハロース混合
物と合わせる。試薬の１５μl 試料を、６０℃および乾
燥時間１５分で作動させた乾燥トンネルを用いて反応部
位上で乾燥させる。
するヤギ抗血清を、第一の試薬部位上で乾燥させること
により抗体試薬として用いた。この物質は、商業的に入
手可能であり、さらに処理することなしに用いることが
できる。好ましくは、抗血清は２倍に濃縮し、安定剤と
して２〜５％のレベルのスクロース／トレハロース混合
物と合わせる。試薬の１５μl 試料を、６０℃および乾
燥時間１５分で作動させた乾燥トンネルを用いて反応部
位上で乾燥させる。
【００２６】クレアチニンのためのアルカリ試薬は、ア
ルカリ水酸化物溶液（例えば、２．５M ＫＯＨ）、また
は適正なpHを維持するためのホスフェート、ボレートも
しくはグアニジン誘導体のようなアルカリ緩衝物質とア
ルカリ水酸化物との混合物を含む。典型的には、スクロ
ース／トレハロース混合物と合わせた１M ホスフェート
および４M 水酸化カリウムの混合物１５μl を、６０℃
および乾燥時間１５分で作動させた乾燥トンネルを用い
て第二の試薬部位上で乾燥させる。
ルカリ水酸化物溶液（例えば、２．５M ＫＯＨ）、また
は適正なpHを維持するためのホスフェート、ボレートも
しくはグアニジン誘導体のようなアルカリ緩衝物質とア
ルカリ水酸化物との混合物を含む。典型的には、スクロ
ース／トレハロース混合物と合わせた１M ホスフェート
および４M 水酸化カリウムの混合物１５μl を、６０℃
および乾燥時間１５分で作動させた乾燥トンネルを用い
て第二の試薬部位上で乾燥させる。
【００２７】好ましいクレアチニン試薬であるＤＮＢＡ
は、典型的には、１０％の糖またはポリマー添加剤を含
有するその１．４M 水性溶液から、この溶液の１５μl
試料を適用して前のように乾燥させることによって第二
の試薬部位に適用する。
は、典型的には、１０％の糖またはポリマー添加剤を含
有するその１．４M 水性溶液から、この溶液の１５μl
試料を適用して前のように乾燥させることによって第二
の試薬部位に適用する。
【００２８】実際の操作においては、形状Ａを用いて、
緩衝剤溶液（４％ポリエチレングリコール、２５mMトリ
ス、５mMＥＤＴＡ、０．１％アジ化ナトリウム、および
非反応性タンパク質として０．１％ゼラチン；pH８．
５）０．５７ml試料、および試料（尿中のＨＳＡおよび
クレアチニン）３０μl をカートリッジに導入して反応
を開始させた。試料ブランクの測定後、抗体試薬を溶解
させて５３１nmでの吸光度を１２０秒間測定した。吸光
度の増加率を、ＨＳＡ濃度を測定するために用いた。ア
ルカリ試薬およびＤＮＢＡ試薬を次いで溶解させ、クレ
アチニン濃度を吸光度の増加率により測定した。溶液は
クレアチニン試薬の溶解後迅速に清澄になったので、こ
の工程を、１秒の短い時間、通常は１〜５秒間のうちに
実施することが可能であった。
緩衝剤溶液（４％ポリエチレングリコール、２５mMトリ
ス、５mMＥＤＴＡ、０．１％アジ化ナトリウム、および
非反応性タンパク質として０．１％ゼラチン；pH８．
５）０．５７ml試料、および試料（尿中のＨＳＡおよび
クレアチニン）３０μl をカートリッジに導入して反応
を開始させた。試料ブランクの測定後、抗体試薬を溶解
させて５３１nmでの吸光度を１２０秒間測定した。吸光
度の増加率を、ＨＳＡ濃度を測定するために用いた。ア
ルカリ試薬およびＤＮＢＡ試薬を次いで溶解させ、クレ
アチニン濃度を吸光度の増加率により測定した。溶液は
クレアチニン試薬の溶解後迅速に清澄になったので、こ
の工程を、１秒の短い時間、通常は１〜５秒間のうちに
実施することが可能であった。
【００２９】形状Ｂを用いる分析を、緩衝液中のＤＮＢ
Ａ溶液０．５７ml（４％ポリエチレングリコール、２５
mMトリス、５mMＥＤＴＡ、０．１％アジ化ナトリウム、
１００mMＫＣｌおよび１０mg/ml ＤＮＢＡ；pH８．
５）、および尿中ＨＳＡおよびクレアチニン３０μl を
カートリッジに導入して反応を開始し、実施した。試料
ブランクの測定後、抗体試薬を溶解させ、５３１nmでの
吸光度を１または２分間測定した。ＨＳＡ濃度は吸光度
の増加率の関数として測定した。アルカリ試薬を次いで
溶解させ、再び５３１nmでの吸光度を３分間測定して、
クレアチニン濃度を吸光度の増加率から測定した。
Ａ溶液０．５７ml（４％ポリエチレングリコール、２５
mMトリス、５mMＥＤＴＡ、０．１％アジ化ナトリウム、
１００mMＫＣｌおよび１０mg/ml ＤＮＢＡ；pH８．
５）、および尿中ＨＳＡおよびクレアチニン３０μl を
カートリッジに導入して反応を開始し、実施した。試料
ブランクの測定後、抗体試薬を溶解させ、５３１nmでの
吸光度を１または２分間測定した。ＨＳＡ濃度は吸光度
の増加率の関数として測定した。アルカリ試薬を次いで
溶解させ、再び５３１nmでの吸光度を３分間測定して、
クレアチニン濃度を吸光度の増加率から測定した。
【００３０】図９は、この手順で測定した、異なる濃度
のＨＳＡおよび１４８mg/dL のクレアチニンを含有する
試料の反応応答プロフィールを表わす。図９から、尿試
料中のＨＳＡ濃度は、５〜５００mg/Lの範囲で正確に測
定可能であり、続いて試料中のクレアチニン（１４８mg
/L）を正確に測定可能であることがわかった。
のＨＳＡおよび１４８mg/dL のクレアチニンを含有する
試料の反応応答プロフィールを表わす。図９から、尿試
料中のＨＳＡ濃度は、５〜５００mg/Lの範囲で正確に測
定可能であり、続いて試料中のクレアチニン（１４８mg
/L）を正確に測定可能であることがわかった。
【図１】オプションＡによるクレアチニンの測定を示す
図。
図。
【図２】オプションＡによるＨＳＡの測定を示す図。
【図３】オプションＢによるクレアチニンおよびＨＳＡ
の測定を示す図。
の測定を示す図。
【図４】本発明の方法を実施し得る反応容器（形状
Ａ）。
Ａ）。
【図５】本発明の方法を実施し得る反応容器。
【図６】本発明の方法を実施し得る反応容器。
【図７】本発明の方法を実施し得る反応容器。
【図８】本発明の方法を実施し得る反応容器。
【図９】反応容器によるクレアチニンおよびＨＳＡの測
定を示す図。
定を示す図。
１０：反応容器（試験具） １２：キャピラリディスペンサー １４：内壁 １６：内壁 １８：側壁 ２１：反応チャンネル ２３：送達チャンバー ２４：第一の反応チャンバー（反応ゾーン） ２６：液体リザーバー ２７：リザーバー体 ２８：第一の試薬部位 ３２ａ：第二の試薬部位 ３２ｂ：第三の試薬部位 ４２：視認口
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 エミー・エイチ・チュー アメリカ合衆国、インデイアナ州、46514、 エルクハート、カウンティ・ロード・ナン バー10 22640 (72)発明者 ブレンダ・チューダー アメリカ合衆国、インデイアナ州、46514、 エルクハート、アンナ・ドライブ 2041
Claims (15)
- 【請求項１】 水性溶液中のタンパク質およびクレアチ
ニンの測定方法であって、 （ａ）タンパク質およびクレアチニンを含有する溶液を
用意し；そして以下の（ｂ）（ｃ）の工程をどちらかの
順で行う； （ｂ）溶液のpHを、タンパク質濃度に関するイムノアッ
セイを実施するのに好適なレベルに調整し、次いでイム
ノアッセイ技術によってタンパク質濃度を測定する；お
よび （ｃ）溶液のpHを、クレアチニンに関するアッセイを実
施するのに好適なレベルに調整し、次いでクレアチニン
の比色測定のための試薬を添加することにより試料中の
クレアチニン濃度を測定することを特徴とする方法。 - 【請求項２】 イムノアッセイの実施前に、pHを約７〜
９のレベルに調整する、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 クレアチニンアッセイの実施前に、pHを
約１１．５〜１２．５のレベルに調整する、請求項１記
載の方法。 - 【請求項４】 クレアチニンの比色測定のための試薬
が、ピクリン酸または３，５−ジニトロ安息香酸であ
る、請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 水性溶媒が尿である、請求項１記載の方
法。 - 【請求項６】 イムノアッセイが凝集タイプのものであ
る、請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 試験対象のタンパク質に対して特異的な
抗体が、水に懸濁し得る粒子に結合している、請求項６
記載の方法。 - 【請求項８】 タンパク質濃度を好適なpHで最初に測定
し、次いでpHをクレアチニンの測定に好適なレベルに上
昇させる、請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 クレアチニンの測定を、pHを上昇させた
時から約３０分以内に開始する、請求項８記載の方法。 - 【請求項１０】 クレアチニンの試験を、約１〜５秒以
内に開始する、請求項９記載の方法。 - 【請求項１１】 単一の反応容器における尿タンパク質
およびクレアチニンの測定方法であって、 （ａ）尿タンパク質およびクレアチニンを含有する尿試
料を用意する； （ｂ）尿試料のpHを、約７〜９のレベルに調整し、イム
ノアッセイ技術によってタンパク質濃度を測定する； （ｃ）尿試料のpHを、約１１．５〜１２．５のレベルに
上昇させる； （ｄ）クレアチニンの比色測定のための試薬を添加する
ことにより尿試料中のクレアチニン濃度を測定すること
を特徴とする方法。 - 【請求項１２】 単一の反応容器における尿タンパク質
およびクレアチニンの測定方法であって、 （ａ）実質的に水平な回転軸と、尿タンパク質に対して
特異的な乾燥免疫試薬を包含する第一の反応ゾーン、お
よび反応チャンネルに導入された反応液のpHをクレアチ
ニン測定に好適なレベルに上昇させ得る乾燥塩基性試薬
を包含する第二の反応ゾーン、を有する分析試薬反応チ
ャンネルを有する反応容器を用意する； （ｂ）尿タンパク質およびクレアチニンを含有する疑い
のある尿試料と、免疫濁度測定手段により尿タンパク質
濃度を測定するのに好適なpHに調整された反応液とを、
反応容器に導入し、それを乾燥免疫試薬と接触させ、そ
れにより免疫試薬を溶解させて免疫試薬と尿タンパク質
との相互作用により反応液の濁度の増加を起こさせる； （ｃ）時間の関数としての濁度の変化に基づいて尿タン
パク質の濃度を測定する； （ｄ）上記反応液とクレアチニン測定のための試薬と
を、第二の反応ゾーン中の乾燥塩基性試薬と接触させ、
それにより塩基性試薬を溶解させて上記反応液のpHをク
レアチニンの比色測定に必要なレベルに上昇させる；そ
して （ｅ）分光光度測定手段によりクレアチニンの濃度を測
定することを特徴とする方法。 - 【請求項１３】 pHを、尿タンパク質の濃度の測定の前
に約７〜９のレベルに調整し、クレアチニンの測定の前
に約１１．５〜１２．５のレベルに上昇させる、請求項
１２記載の方法。 - 【請求項１４】 クレアチニンの測定を、pHを約１１．
５〜１２．５のレベルに上昇させた時から約３０分以内
に開始する、請求項１２記載の方法。 - 【請求項１５】 クレアチニンの測定を、１〜５秒以内
に開始する、請求項１４記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/160,239 US5385847A (en) | 1993-12-02 | 1993-12-02 | Method for the determination of urinary protein and creatinine |
| US08/160239 | 1993-12-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07198719A true JPH07198719A (ja) | 1995-08-01 |
| JP3707814B2 JP3707814B2 (ja) | 2005-10-19 |
Family
ID=22576091
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29829994A Expired - Lifetime JP3707814B2 (ja) | 1993-12-02 | 1994-12-01 | 尿タンパク質およびクレアチニンの測定法 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5385847A (ja) |
| EP (1) | EP0656541B1 (ja) |
| JP (1) | JP3707814B2 (ja) |
| KR (1) | KR950019732A (ja) |
| AT (1) | ATE219248T1 (ja) |
| AU (1) | AU677106B2 (ja) |
| BR (1) | BR9404242A (ja) |
| CA (1) | CA2131146C (ja) |
| DE (1) | DE69430789T2 (ja) |
| ES (1) | ES2177560T3 (ja) |
| FI (1) | FI114342B (ja) |
| IL (1) | IL110220A (ja) |
| NO (1) | NO315957B1 (ja) |
| NZ (1) | NZ264209A (ja) |
| TW (1) | TW348216B (ja) |
| ZA (1) | ZA945837B (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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| US5610073A (en) * | 1995-09-26 | 1997-03-11 | Bayer Corporation | Use of CO2 absorbant for stabilization of dried alkaline reagent in creatinine assay |
| KR100461987B1 (ko) * | 1995-12-06 | 2005-07-01 | 시스멕스 가부시키가이샤 | 데이터체크장치 |
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