JPH0722506B2 - 抗菌活性を有する微生物菌株 - Google Patents
抗菌活性を有する微生物菌株Info
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- JPH0722506B2 JPH0722506B2 JP63011850A JP1185088A JPH0722506B2 JP H0722506 B2 JPH0722506 B2 JP H0722506B2 JP 63011850 A JP63011850 A JP 63011850A JP 1185088 A JP1185088 A JP 1185088A JP H0722506 B2 JPH0722506 B2 JP H0722506B2
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、抗菌活性を有する枯草菌（バチルス・ズブチ
ルス、Bacillus subtilis）株に関する。
ルス、Bacillus subtilis）株に関する。
枯草菌は、胞子形成性、好気性、高弾性で鞭毛をもつ細
菌である。これは様々な生物学的コントロール研究のた
めの研究対象となっていて、有望な結果が様々な試験に
おいて、例えばリゾクトニア（Rhizoctonia）及びピチ
ウム（Pythium）の立枯れ病〔オルセン（Olsen）、1964
年；オルセン及びベーカー（Baker）、1968年；ブロー
ドベント（Broadbent）ら、1971年〕、リンゴの木にお
ける葉痕のネクトリア・ガリゲナ（Nectria galligen
a）感染〔スウィンバーン（Swinburne）、1973年〕、小
麦におけるフサリウム（Fusarium）苗胴枯れ病〔チャン
（Chang）及びコンメダール（Kommedahl）、1968年〕に
関し報告されており、しかも枯草菌は簡単な増殖培地を
必要とするのみで容易かつ安価に産生しうるという利点
を有している。
菌である。これは様々な生物学的コントロール研究のた
めの研究対象となっていて、有望な結果が様々な試験に
おいて、例えばリゾクトニア（Rhizoctonia）及びピチ
ウム（Pythium）の立枯れ病〔オルセン（Olsen）、1964
年；オルセン及びベーカー（Baker）、1968年；ブロー
ドベント（Broadbent）ら、1971年〕、リンゴの木にお
ける葉痕のネクトリア・ガリゲナ（Nectria galligen
a）感染〔スウィンバーン（Swinburne）、1973年〕、小
麦におけるフサリウム（Fusarium）苗胴枯れ病〔チャン
（Chang）及びコンメダール（Kommedahl）、1968年〕に
関し報告されており、しかも枯草菌は簡単な増殖培地を
必要とするのみで容易かつ安価に産生しうるという利点
を有している。
我々は、サットン・ボニングトン（Sutton Bonningto
n）の耕作地で栽培されたソラマメ植物の葉表面から、
細菌のスクリーニング中に枯草菌の新株を単離した。新
株は様々なバイオアッセイにおいて驚くべきほどの抗菌
活性を有していることが見出された。
n）の耕作地で栽培されたソラマメ植物の葉表面から、
細菌のスクリーニング中に枯草菌の新株を単離した。新
株は様々なバイオアッセイにおいて驚くべきほどの抗菌
活性を有していることが見出された。
以上のように、本発明は抗菌活性を有する枯草菌株（JB
3）〔そのサンプルは、ナショナル・コレクションズ・
オブ・インダストリアル・バクテリア社（National Col
lections of Industrial Bacteria Ltd,NCIB）、トーリ
ー・リサーチ・ステーション（Tory Research Statio
n）、P.O.ボックス31、135アビー・ロード、AB9 8DG、
スコットランドに1986年12月22日付で受託番号NCIB1237
5として寄託された〕、又は抗菌活性をもつその変異体
もしくは誘導体を提供するものである。
3）〔そのサンプルは、ナショナル・コレクションズ・
オブ・インダストリアル・バクテリア社（National Col
lections of Industrial Bacteria Ltd,NCIB）、トーリ
ー・リサーチ・ステーション（Tory Research Statio
n）、P.O.ボックス31、135アビー・ロード、AB9 8DG、
スコットランドに1986年12月22日付で受託番号NCIB1237
5として寄託された〕、又は抗菌活性をもつその変異体
もしくは誘導体を提供するものである。
JB3株の特に有効な変異体又は誘導体はJB3.6株であっ
て、そのサンプルは1986年12月22日付で受託番号NCIB12
376としてNCIBに寄託された。
て、そのサンプルは1986年12月22日付で受託番号NCIB12
376としてNCIBに寄託された。
JB3のもう１つの特に有効な変異体又は誘導体はR1株で
あって、そのサンプルは1987年12月24日付で受託番号NC
IB12616としてNCIBに寄託された。
あって、そのサンプルは1987年12月24日付で受託番号NC
IB12616としてNCIBに寄託された。
本発明は、植物の病気、動物及びヒトの微生物感染を抑
制し、並びに一般的な微生物汚染を抑制するための、上
記株又はその誘導体もしくは変異体、あるいはこれらの
株又はその誘導体もしくは変異体から得られる抗菌物質
の用法にも関する。新株は場合により他の微生物株と混
合して使用することができる。
制し、並びに一般的な微生物汚染を抑制するための、上
記株又はその誘導体もしくは変異体、あるいはこれらの
株又はその誘導体もしくは変異体から得られる抗菌物質
の用法にも関する。新株は場合により他の微生物株と混
合して使用することができる。
新株は植物菌疾患を抑制するのに特に有用である。植物
に適用する場合、株類は適切な担体又は希釈剤を含有し
た組成物中に配合させておくことができる。投与時にお
いて植物葉の湿潤性を保持させるために、組成物はゴム
質又は界面活性剤を含有していてもよい。
に適用する場合、株類は適切な担体又は希釈剤を含有し
た組成物中に配合させておくことができる。投与時にお
いて植物葉の湿潤性を保持させるために、組成物はゴム
質又は界面活性剤を含有していてもよい。
インビトロバイオアッセイにおいて、新株は様々な病原
菌に対して抗菌活性を有し、胚管の著しい湾曲、菌糸端
（hyphal tip）の溶解及びその後の菌類の死を生じさせ
ることが判明した。今までに試験された菌類としては、
下記のものがある：アルタナリア種（Alternaria sp
p.） ボトリチス種（Botrytis spp.） レプトスファエリア種（Leptosphaeria spp.） リゾクトニア種（Rhizoctonea spp.） スクレロチニア種（Sclerotinia spp.） アスコキタ種（Ascochyta spp.） カンジダ種（Candida spp.） 植物全体に関する実験により、サブ菌感染病〔例えば、
プッシニア種（Puccinia spp.）〕の抑制が可能である
ことを証明した。
菌に対して抗菌活性を有し、胚管の著しい湾曲、菌糸端
（hyphal tip）の溶解及びその後の菌類の死を生じさせ
ることが判明した。今までに試験された菌類としては、
下記のものがある：アルタナリア種（Alternaria sp
p.） ボトリチス種（Botrytis spp.） レプトスファエリア種（Leptosphaeria spp.） リゾクトニア種（Rhizoctonea spp.） スクレロチニア種（Sclerotinia spp.） アスコキタ種（Ascochyta spp.） カンジダ種（Candida spp.） 植物全体に関する実験により、サブ菌感染病〔例えば、
プッシニア種（Puccinia spp.）〕の抑制が可能である
ことを証明した。
抗菌活性は、下記のような生物に対するインビトロ試験
において見出された： スタフィロコッカス種（Staphylococcus spp.） ストレプトコッカス種（Streptococcus spp.） 無傷のソラマム及び大麦植物に関する温室試験において
枯草菌株の懸濁液を散布した場合には、葉がその後にボ
トリチス・ファバエ（Botrytis fabae）又はプッシニア
・ホルディ（Puccinia hordei）でそれぞれ接種された
ときに症状の進行を有効に防止した。
において見出された： スタフィロコッカス種（Staphylococcus spp.） ストレプトコッカス種（Streptococcus spp.） 無傷のソラマム及び大麦植物に関する温室試験において
枯草菌株の懸濁液を散布した場合には、葉がその後にボ
トリチス・ファバエ（Botrytis fabae）又はプッシニア
・ホルディ（Puccinia hordei）でそれぞれ接種された
ときに症状の進行を有効に防止した。
抗菌活性は、胞子形成過程と通常関連した栄養制限条件
下で生じる。葉面上の湿潤及び乾燥サイクルが枯草菌の
生育及び胞子形成のサイクルを誘起させた後、抗菌活性
を生じさせるものと予想される。枯草菌の抗菌活性とは
異なり、新しい活性は非常に安定であって、オートクレ
ーブ処理後でも活性を残存させている。
下で生じる。葉面上の湿潤及び乾燥サイクルが枯草菌の
生育及び胞子形成のサイクルを誘起させた後、抗菌活性
を生じさせるものと予想される。枯草菌の抗菌活性とは
異なり、新しい活性は非常に安定であって、オートクレ
ーブ処理後でも活性を残存させている。
大きな抗菌活性は、単に合成培地上での純粋（アゼニッ
ク）培養産物（アーチファクト）として得られる。しか
しながら、この活性は現実には葉表面上で最も得られや
すいのである。検出可能な抗菌活性を示さない細菌の若
い培養物（12〜18時間）は、感染葉に投与された場合に
病気を有効に抑制した。顕微鏡検査によれば、病原体は
インビトロで観察された場合と同様の偏った増殖性を示
した。
ク）培養産物（アーチファクト）として得られる。しか
しながら、この活性は現実には葉表面上で最も得られや
すいのである。検出可能な抗菌活性を示さない細菌の若
い培養物（12〜18時間）は、感染葉に投与された場合に
病気を有効に抑制した。顕微鏡検査によれば、病原体は
インビトロで観察された場合と同様の偏った増殖性を示
した。
新株について下記のような特徴が留意された： 30℃における試験 胞子形状：楕円形又は円柱形（最大増殖温度50℃） 明確に膨張した胞子嚢：− 優勢な胞子位置：中央 ロッド幅、μｍ １ 細胞内小球体（ａ） − 嫌気的増殖（ａ） （＋）（弱い陽性） ５％NaCl中での増殖 ＋ ７％NaCl中での増殖 ＋ pH5.7ブロス中での増殖 ＋ グルコースからの酸（ｂ） ＋ グルコースからのガス（ｂ） − VP（アセトイン） ＋ 卵黄寒天透明性 − カゼイン分解 ＋ ゼラチン分解 ＋ デンプン加水分解 ＋ NO3 -からNO2 -への変換 ＋ エスクリン加水分解 ＋ コゼル（Koser）のクエン酸 ＋ モラー（Moller）のアルギニンジヒドロラーゼ − VPブロスのpH 5.2 （ａ）グルコース寒天上 （ｂ）ペプトン水糖、アンドレード（Andrade）の指示
薬 酸は30℃において下記炭素源から産生された：グリセロ
ール、Ｌ−アラビノース、リボース、Ｄ−キシロース、
ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ
−マンノース、イノシトール、アンニトール、ソルビト
ール、α−メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチルグル
コサミン、アミグダリン、アルブチン、サリシン、セロ
ビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、ス
クロース、トレハロース、イヌリン、Ｄ−ラフィノー
ス、デンプン、グリコーゲン、βゲンチオビオース、Ｄ
−ツラノース 本発明の新株は、上記菌学的性質のうち、特に、嫌気増
殖性であって、かつクエン酸資化能並びにガラクトース
からの酸生成能を有する点で公知種と異なる。
薬 酸は30℃において下記炭素源から産生された：グリセロ
ール、Ｌ−アラビノース、リボース、Ｄ−キシロース、
ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ
−マンノース、イノシトール、アンニトール、ソルビト
ール、α−メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチルグル
コサミン、アミグダリン、アルブチン、サリシン、セロ
ビオース、マルトース、ラクトース、メリビオース、ス
クロース、トレハロース、イヌリン、Ｄ−ラフィノー
ス、デンプン、グリコーゲン、βゲンチオビオース、Ｄ
−ツラノース 本発明の新株は、上記菌学的性質のうち、特に、嫌気増
殖性であって、かつクエン酸資化能並びにガラクトース
からの酸生成能を有する点で公知種と異なる。
本発明は、下記例により、及び例4Bの結果を示した添付
図面により説明される。
図面により説明される。
例１ 新株の単離 細菌をサットン・ボニングトンにおけるノッチンガム農
業大学（Nottingham University School of Agriculter
e）で栽培されたソラマメ耕作地から単離した。
業大学（Nottingham University School of Agriculter
e）で栽培されたソラマメ耕作地から単離した。
予備実験では、耕作地から採取された葉において、チョ
コレート斑点病（ボトリチス・ファバエ）の進行度の点
で著しい差異を示した。このことは、葉表面の微生物相
における差異を反映していたのであろう。したがって、
植物病原体に対して有効な拮抗体の単離は、限られた病
気の進行しか示さない葉で行なった。
コレート斑点病（ボトリチス・ファバエ）の進行度の点
で著しい差異を示した。このことは、葉表面の微生物相
における差異を反映していたのであろう。したがって、
植物病原体に対して有効な拮抗体の単離は、限られた病
気の進行しか示さない葉で行なった。
二葉性の葉を分離し、各対のうち１つの小葉にボトリチ
ス・シネレア（Botrytis cinerea）及びボトリチス・フ
ァバエを接種した。接種24時間後、微生物を病気の程度
の低い小葉とは反対のもう１つの小葉から単離し、抗菌
活性について試験した。連続的単離は、無菌蒸留水50ml
中で30分間小葉２〜３枚を振盪した後に行なった。細菌
は、菌増殖を抑制するためにニスタチンを含有した栄養
寒天上で洗浄物を培養することにより単離した。48〜72
時間のインキュベート後、個々のコロニーからの細胞を
V8液寒天プレートの一面上に線条接種し、30℃で３日間
増殖させた。寒天の反対側にボトリチス・シネレアのプ
ラグを接種したところ、インキュベート後抗菌活性はコ
ントロールとの比較による菌増殖阻害領域で示された。
かかる抗菌活性は、後で枯草菌と確認された１種の細菌
のいくつかのコロニーと関連していた。これらコロニー
のうちの１つは、JB3と命名された。
ス・シネレア（Botrytis cinerea）及びボトリチス・フ
ァバエを接種した。接種24時間後、微生物を病気の程度
の低い小葉とは反対のもう１つの小葉から単離し、抗菌
活性について試験した。連続的単離は、無菌蒸留水50ml
中で30分間小葉２〜３枚を振盪した後に行なった。細菌
は、菌増殖を抑制するためにニスタチンを含有した栄養
寒天上で洗浄物を培養することにより単離した。48〜72
時間のインキュベート後、個々のコロニーからの細胞を
V8液寒天プレートの一面上に線条接種し、30℃で３日間
増殖させた。寒天の反対側にボトリチス・シネレアのプ
ラグを接種したところ、インキュベート後抗菌活性はコ
ントロールとの比較による菌増殖阻害領域で示された。
かかる抗菌活性は、後で枯草菌と確認された１種の細菌
のいくつかのコロニーと関連していた。これらコロニー
のうちの１つは、JB3と命名された。
JB3の純粋培養物から得られる細菌細胞の連続希釈物を
栄養寒天上で培養した。１〜50の分離コロニーを有する
プレートを単一細胞培養物の単離用に選択した。全部で
22個のかかる単離物を得、抗菌活性について試験した。
ボトリチス・シネレアの分生子で接種したV8寒天プレー
ト上への点接種は、個々のコロニーから行なった。72時
間のインキュベート後、菌増殖阻害領域を測定した。１
つの単離物（JB3.6と命名されている）は試験された他
のいずれの単離物よりも非常に大きな阻害領域を形成し
ており、これが次の試験で広汎に使用された。
栄養寒天上で培養した。１〜50の分離コロニーを有する
プレートを単一細胞培養物の単離用に選択した。全部で
22個のかかる単離物を得、抗菌活性について試験した。
ボトリチス・シネレアの分生子で接種したV8寒天プレー
ト上への点接種は、個々のコロニーから行なった。72時
間のインキュベート後、菌増殖阻害領域を測定した。１
つの単離物（JB3.6と命名されている）は試験された他
のいずれの単離物よりも非常に大きな阻害領域を形成し
ており、これが次の試験で広汎に使用された。
例２ インビトロ抗菌性バイオアッセイ 枯草菌株JB3.6及び試験菌の同時接種をポテトデキスト
ロース寒天プレート上で行なった。1cm長の２つの枯草
菌線条接種を各プレートの正反対の側から1cmの箇所で
行なった。試験菌の0.5cm菌糸体プラグを中央におい
た。コントロールプレートは枯草菌接種をうけなかっ
た。プレートを25℃で12日間までインキュベートした。
菌糸体プラグの中心から直角に枯草菌線条接種箇所まで
至るライン上における各菌コロニーの直径を毎日測定し
た。菌増殖性の低下率は、対応コントロールプレートに
おいて菌が全体を覆うようになった時点、即ちコントロ
ールコロニーの直径が90mmになった時点で、試験コロニ
ーの直径から計算した。結果は第１表に示されている。
ロース寒天プレート上で行なった。1cm長の２つの枯草
菌線条接種を各プレートの正反対の側から1cmの箇所で
行なった。試験菌の0.5cm菌糸体プラグを中央におい
た。コントロールプレートは枯草菌接種をうけなかっ
た。プレートを25℃で12日間までインキュベートした。
菌糸体プラグの中心から直角に枯草菌線条接種箇所まで
至るライン上における各菌コロニーの直径を毎日測定し
た。菌増殖性の低下率は、対応コントロールプレートに
おいて菌が全体を覆うようになった時点、即ちコントロ
ールコロニーの直径が90mmになった時点で、試験コロニ
ーの直径から計算した。結果は第１表に示されている。
同様の試験において、枯草菌株JB3.6の活性は下記菌類
に対しても証明された： ボトリチス・アリイ（Botrytis allii） ボトリチス・エリプチカ（Botrytis elliptica） ボトリチス・ナルシッシコラ（Botrytis narcissicol
a） ボトリチス・ツリパエ（Botrytis tulipae） アスコクチア・ファバエ（Ascochtya fabae） クラドスポリウム・ヘルバルム（Cladosporium herbaru
m） サッカロマイセス・セレビシアエ（Saccharomyces cere
visiae） カンジダ・アルビカンス（Candida albicans） 例３ インビトロ抗菌性バイオアッセイ 栄養寒天プレートに試験細菌を接種し、かつ枯草菌株JB
3.6を線条接種した。プレートを30℃で24時間インキュ
ベートし、枯草菌線条接種箇所周囲における阻害領域の
在否を記録した。
に対しても証明された： ボトリチス・アリイ（Botrytis allii） ボトリチス・エリプチカ（Botrytis elliptica） ボトリチス・ナルシッシコラ（Botrytis narcissicol
a） ボトリチス・ツリパエ（Botrytis tulipae） アスコクチア・ファバエ（Ascochtya fabae） クラドスポリウム・ヘルバルム（Cladosporium herbaru
m） サッカロマイセス・セレビシアエ（Saccharomyces cere
visiae） カンジダ・アルビカンス（Candida albicans） 例３ インビトロ抗菌性バイオアッセイ 栄養寒天プレートに試験細菌を接種し、かつ枯草菌株JB
3.6を線条接種した。プレートを30℃で24時間インキュ
ベートし、枯草菌線条接種箇所周囲における阻害領域の
在否を記録した。
枯草菌は、下記細菌に対しては試験された場合に阻害領
域を形成した： スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aur
eus） ストレプトコッカス・ラクチス（Streptococcus lacti
s） ストレプトコッカス・アガラクチアエ（Streptococcus
agalactiae） ミクロコッカス・ルテウス（Micrococcus luteus） ミクロコッカス・ロセウム（Micrococcus roseus） バチルス・メガテリウム（Bacillus megaterium） 例４ 枯草菌（JB3.6）によるソラマメのチョコレート
斑点病（ボトリチス・ファバエ）の生物学的抑制 パートＡ ４つの同様の耕作地（１×2m）に1mのガードの列を設け
て各々の処理のために用いた。下記処理が行なわれた。
域を形成した： スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aur
eus） ストレプトコッカス・ラクチス（Streptococcus lacti
s） ストレプトコッカス・アガラクチアエ（Streptococcus
agalactiae） ミクロコッカス・ルテウス（Micrococcus luteus） ミクロコッカス・ロセウム（Micrococcus roseus） バチルス・メガテリウム（Bacillus megaterium） 例４ 枯草菌（JB3.6）によるソラマメのチョコレート
斑点病（ボトリチス・ファバエ）の生物学的抑制 パートＡ ４つの同様の耕作地（１×2m）に1mのガードの列を設け
て各々の処理のために用いた。下記処理が行なわれた。
A.植物は、コントロールとして、０日目において、栄養
液中で混合されたボトリチス・ファバエの単離胞子懸濁
液（胞子105ml-1）を散布することにより接種された。
液中で混合されたボトリチス・ファバエの単離胞子懸濁
液（胞子105ml-1）を散布することにより接種された。
B.植物は、０日目において、ボトリチス・ファバエ及び
枯草菌細胞（JB3.6）（18時間培養物）の懸濁液で接種
された。
枯草菌細胞（JB3.6）（18時間培養物）の懸濁液で接種
された。
C.植物は、７日目において、Ｂの後に枯草菌細胞（18時
間培養物）の再度の散布によって接種された。
間培養物）の再度の散布によって接種された。
D.植物は、０日目において、ボトリチス・ファバエ及び
枯草菌細胞（72時間培養物）の懸濁液で接種された。
枯草菌細胞（72時間培養物）の懸濁液で接種された。
E.植物は、７日目において、Ｄの後に枯草菌細胞（72時
間培養物）の再度の散布によって接種された。
間培養物）の再度の散布によって接種された。
実験はランダムなブロックとして考えられた。接種前に
５本の植物を各処理ブロック内からランダムに選択し、
標識をつけた。病気の評価は、葉３〜５において褐色／
黒色に変化した葉の面積を測定することによって、これ
らの植物に関して行なった。次いで、病気率％の平均値
を評価した。この操作は、耕作地全体についてやや主観
的な評点を与えるよりも正確であると考えられた。第２
表に示した結果が得られた。
５本の植物を各処理ブロック内からランダムに選択し、
標識をつけた。病気の評価は、葉３〜５において褐色／
黒色に変化した葉の面積を測定することによって、これ
らの植物に関して行なった。次いで、病気率％の平均値
を評価した。この操作は、耕作地全体についてやや主観
的な評点を与えるよりも正確であると考えられた。第２
表に示した結果が得られた。
これらの結果は、有意差のある抑制レベルが２日目まで
に達成され、枯草菌の18時間又は72時間培養物を用いた
実験の14日間にわたり維持されたことを示している。記
録は、多数のコントロール地の葉が病気率100％に達し
て枯れた14日目後に止めた。しかしながら、この期間後
に行なわれた観察では、数週間にわたり枯草菌で処理さ
れた地区において更に病気の進行を示さなかった。４日
目までに、72時間細菌培養物は、抗生物質の産生が生じ
る前に限定的感染を起こした18時間培養物よりも有効に
抑制した。接種された組織の顕微鏡検査では、菌胚管の
典型的湾曲を示していた。７日目の枯草菌による２回目
の散布では抑制上で有意の改善を示さなかったが、これ
はおそらくこの段階前において病原体が死滅していたこ
とを反映しているのであろう。
に達成され、枯草菌の18時間又は72時間培養物を用いた
実験の14日間にわたり維持されたことを示している。記
録は、多数のコントロール地の葉が病気率100％に達し
て枯れた14日目後に止めた。しかしながら、この期間後
に行なわれた観察では、数週間にわたり枯草菌で処理さ
れた地区において更に病気の進行を示さなかった。４日
目までに、72時間細菌培養物は、抗生物質の産生が生じ
る前に限定的感染を起こした18時間培養物よりも有効に
抑制した。接種された組織の顕微鏡検査では、菌胚管の
典型的湾曲を示していた。７日目の枯草菌による２回目
の散布では抑制上で有意の改善を示さなかったが、これ
はおそらくこの段階前において病原体が死滅していたこ
とを反映しているのであろう。
パートＢ ポリテン（polythene）製トンネル内でのボトリチス感
染抑制に関する枯草菌3.6の効力を更に下記のようにし
て試験した。頭上噴霧灌水系を病気の進行にとって非常
に適した環境を設定するために取付け、しかもポリトン
ネル内で生じうる倒伏問題を少なくさせるためにツルナ
シインゲン変種を用いた。４つの同様の耕作地を各処理
のために用いた。生物学的抑制剤の適用時期について試
験した。枯草菌3.6は、ボトリチス・ファバエ胞子懸濁
液の適用の３日前、同時及び７日後に耕作地に適用し
た。７日目までに病気が症状を進行させ始めた。更に行
なった処理では、細菌生存数をモニターするために枯草
菌R1のリファンピシン耐性株（例７参照）を用いた。生
物学的抑制に関するデータは、接種後の時間に対する感
染率の図である添付図面中に示されている。平均病気評
点は、同様の４つの耕作地の各々でランダムに選択され
た10本の植物において感染した４番目の葉の面積を表わ
している。優れた抑制効果は、細菌が事前に予防的に及
び病原体と同時に適用された場合に得られた。抑制剤
は、感染後に適用された場合であっても著しい病気抑制
効果を有していた。抑制は、コントロール他の多数の葉
が枯れた実験36日目までの期間中維持された。
染抑制に関する枯草菌3.6の効力を更に下記のようにし
て試験した。頭上噴霧灌水系を病気の進行にとって非常
に適した環境を設定するために取付け、しかもポリトン
ネル内で生じうる倒伏問題を少なくさせるためにツルナ
シインゲン変種を用いた。４つの同様の耕作地を各処理
のために用いた。生物学的抑制剤の適用時期について試
験した。枯草菌3.6は、ボトリチス・ファバエ胞子懸濁
液の適用の３日前、同時及び７日後に耕作地に適用し
た。７日目までに病気が症状を進行させ始めた。更に行
なった処理では、細菌生存数をモニターするために枯草
菌R1のリファンピシン耐性株（例７参照）を用いた。生
物学的抑制に関するデータは、接種後の時間に対する感
染率の図である添付図面中に示されている。平均病気評
点は、同様の４つの耕作地の各々でランダムに選択され
た10本の植物において感染した４番目の葉の面積を表わ
している。優れた抑制効果は、細菌が事前に予防的に及
び病原体と同時に適用された場合に得られた。抑制剤
は、感染後に適用された場合であっても著しい病気抑制
効果を有していた。抑制は、コントロール他の多数の葉
が枯れた実験36日目までの期間中維持された。
例５ トマトのクラドスポリウム・フルブム感染の抑制 ４週令のトマト苗木に枯草菌JB3.6の存在又は非存在下
で腐葉病原体を接種した。植物にバチルス72時間培養物
を散布し、乾燥させ、しかる後クラドスポリウム（Clad
osporium）胞子懸濁液を散布した。透明ポリテン袋で48
時間囲った後、植物を温室中で３週間栽培した。感染し
た葉面積率は葉１〜３に関して調べ、得られたデータは
第３表に示されている。枯草菌は、実験が生物学的抑制
剤にとって不利な条件下で行なわれた場合であっても感
染を抑制したことは明らかである。
で腐葉病原体を接種した。植物にバチルス72時間培養物
を散布し、乾燥させ、しかる後クラドスポリウム（Clad
osporium）胞子懸濁液を散布した。透明ポリテン袋で48
時間囲った後、植物を温室中で３週間栽培した。感染し
た葉面積率は葉１〜３に関して調べ、得られたデータは
第３表に示されている。枯草菌は、実験が生物学的抑制
剤にとって不利な条件下で行なわれた場合であっても感
染を抑制したことは明らかである。
例えば、このクラドスポリウムに関する接種操作では植
物全体への反復散布を必要とするため、抑制剤の洗浄除
去の可能性が考慮されねばならない。
物全体への反復散布を必要とするため、抑制剤の洗浄除
去の可能性が考慮されねばならない。
更には、この菌の極端な半バイオトロピズム性のため
に、病気の症状が現われるまでに長時間を要する。
に、病気の症状が現われるまでに長時間を要する。
例６ エンドウのアスコキタ・ピシ感染の抑制 ３週令のエンドウ植物に斑点病原菌アスコキタ・ピシ
（Ascochyta pisi）を散布接種した。全体の半分は、枯
草菌JB3.6の72時間培養物の同時接種をうけた。10日間
の栽培後に感染率を葉１〜５及び茎で調べたが、得られ
たデータ（第４表）は病気率の明らかな低下を示してい
る。抑制はより若い葉及び茎において最も強かった。処
理をうけた植物はかなり大きくなりがちであったが、こ
れはおそらく茎全体でほとんど病変のなかったことを反
映しているのであろう。エンドウ植物には極端な非湿潤
性があることから、これらの発見は得に重要である。
（Ascochyta pisi）を散布接種した。全体の半分は、枯
草菌JB3.6の72時間培養物の同時接種をうけた。10日間
の栽培後に感染率を葉１〜５及び茎で調べたが、得られ
たデータ（第４表）は病気率の明らかな低下を示してい
る。抑制はより若い葉及び茎において最も強かった。処
理をうけた植物はかなり大きくなりがちであったが、こ
れはおそらく茎全体でほとんど病変のなかったことを反
映しているのであろう。エンドウ植物には極端な非湿潤
性があることから、これらの発見は得に重要である。
例７ 小麦のテイク−オール（立枯病）の抑制 ガウェマンノマイセス・グラミニス（Gauemannomyces g
raminis）により生じる小麦のテイク−オール（take−a
ll）（立枯病）に関する予備実験を行なった。枯草菌R1
（枯草菌3.6由来リファンピシン耐性株）は、土壌中で
の拮抗剤の残留性に関する将来の実験を行なえるよう
に、これらの実験で用いた。最初の生物学的抑制に関す
る小規模実験では、約５×107cfu/種子で被覆した小麦
種子を用いた。被覆種子及び未処理種子を、オート麦粒
上で増殖させたガウェマンノマイセスを配合した配合土
にまいた。４週間のインキュベート後、植物を破壊して
根及び茎のテイク−オール感染について調べた。得られ
た結果は第５表に掲載されており、抑制困難なこの病気
に対して有意の低下率を示している。
raminis）により生じる小麦のテイク−オール（take−a
ll）（立枯病）に関する予備実験を行なった。枯草菌R1
（枯草菌3.6由来リファンピシン耐性株）は、土壌中で
の拮抗剤の残留性に関する将来の実験を行なえるよう
に、これらの実験で用いた。最初の生物学的抑制に関す
る小規模実験では、約５×107cfu/種子で被覆した小麦
種子を用いた。被覆種子及び未処理種子を、オート麦粒
上で増殖させたガウェマンノマイセスを配合した配合土
にまいた。４週間のインキュベート後、植物を破壊して
根及び茎のテイク−オール感染について調べた。得られ
た結果は第５表に掲載されており、抑制困難なこの病気
に対して有意の低下率を示している。
リファンピシン耐性株は、リファンピシン５μｇ含有の
オキソイド・マルトディスク（Oxoid Multodisc）を用
いて寒天拡散バイオアッセイにより単離した。枯草菌JB
3.6の24時間栄養ブロス培養物の1mlアリコートをマルト
ディスク含有栄養寒天プレート上に拡散し、乾燥させ
た。阻害領域で増殖する単一コロニーを選択した。これ
らの株の１つをR1と命名した。
オキソイド・マルトディスク（Oxoid Multodisc）を用
いて寒天拡散バイオアッセイにより単離した。枯草菌JB
3.6の24時間栄養ブロス培養物の1mlアリコートをマルト
ディスク含有栄養寒天プレート上に拡散し、乾燥させ
た。阻害領域で増殖する単一コロニーを選択した。これ
らの株の１つをR1と命名した。
例８ 菜種のペロノスポラ感染の抑制 ペロノスポラ（Peronospora）により生じるべと病感染
は、バイオトロピズム性菌病の一例である。それ自体で
は、この病原体に対するインビトロバイオアッセイを行
なうことができない。したがって、予備実験では、枯草
菌JB3.6の適用による菜種の病気率を低下させうる可否
について試験するために行なった。子葉にペロノスポラ
の胞子嚢を散布し、枯草菌の72時間培養物の同時適用を
全体の半分について行なった。植物を５日間透明プラス
チック製培養器中でインキュベートし、感染した子葉の
面積率を調べた。病気率は、拮抗剤によってコントロー
ルの半分以下に低下した。菜葉上のペロノスポラはさし
て重要ではない病原体である。しかしながら、他のべと
病（例えば、ブドウのつる）並びに非常に類似したフィ
トフトラ（Phytophthora）及びピチウム（Pythium）
は、現存の方法で調整することが困難であるから、深刻
な経済的損害を与える。
は、バイオトロピズム性菌病の一例である。それ自体で
は、この病原体に対するインビトロバイオアッセイを行
なうことができない。したがって、予備実験では、枯草
菌JB3.6の適用による菜種の病気率を低下させうる可否
について試験するために行なった。子葉にペロノスポラ
の胞子嚢を散布し、枯草菌の72時間培養物の同時適用を
全体の半分について行なった。植物を５日間透明プラス
チック製培養器中でインキュベートし、感染した子葉の
面積率を調べた。病気率は、拮抗剤によってコントロー
ルの半分以下に低下した。菜葉上のペロノスポラはさし
て重要ではない病原体である。しかしながら、他のべと
病（例えば、ブドウのつる）並びに非常に類似したフィ
トフトラ（Phytophthora）及びピチウム（Pythium）
は、現存の方法で調整することが困難であるから、深刻
な経済的損害を与える。
例９ 穀物のウドンコ病の抑制 穀物におけるウドンコ病〔エリシフェ・グラミニス（Er
ysiphe graminis）〕は、おそらく英国において最も大
きな経済的損害を与える病気であろう。広域植物育生計
画及び化学的制御方法があるにもかかわらず、これらの
高度に分化した病原体はなおも甚大な損害を与えてい
る。それらのバイオトロピズム性はインビトロバイオア
ッセイの実施を妨げている。小麦のウドンコ病抑制に関
する室温試験が行なわれた。小麦植物に対する枯草菌JB
3.6の72時間培養物の適用は、ウドンコ病菌接種直前に
３回の散布によって行なった。植物を接種後14日目に調
べたところ、結果（第６表）は枯草菌の適用が葉におけ
る病気症状を有意に減少させたことを示している。
ysiphe graminis）〕は、おそらく英国において最も大
きな経済的損害を与える病気であろう。広域植物育生計
画及び化学的制御方法があるにもかかわらず、これらの
高度に分化した病原体はなおも甚大な損害を与えてい
る。それらのバイオトロピズム性はインビトロバイオア
ッセイの実施を妨げている。小麦のウドンコ病抑制に関
する室温試験が行なわれた。小麦植物に対する枯草菌JB
3.6の72時間培養物の適用は、ウドンコ病菌接種直前に
３回の散布によって行なった。植物を接種後14日目に調
べたところ、結果（第６表）は枯草菌の適用が葉におけ
る病気症状を有意に減少させたことを示している。
穀物病の生物学的抑制に関する問題は、細菌培養物が穀
物葉を効果的に湿潤させることができずかつ抑制剤の表
面流出が生じうることである。このことは結果の再現性
に関する問題まで発展しうる。我々は、これらの問題が
界面活性剤のような“スティッカー（sticker）”化合
物を細菌培養物に加えることによって克服されうること
を明らかにした。これらの化合物は葉からの抑制剤の流
出を防止することができる。１種のかかる化合物エチラ
ンCD107を用いて得られた結果は第７表に示されてい
る。温室試験において、小麦植物に枯草菌JB3.6の72時
間培養物をウドンコ病菌接種直前に散布した。数本の植
物に0.1％エチランCD107含有培養物を散布した。植物を
接種後10日目に調べたところ、その結果はエチランCD10
7の添加が病気の抑制を有意に改善したことを示してい
る。
物葉を効果的に湿潤させることができずかつ抑制剤の表
面流出が生じうることである。このことは結果の再現性
に関する問題まで発展しうる。我々は、これらの問題が
界面活性剤のような“スティッカー（sticker）”化合
物を細菌培養物に加えることによって克服されうること
を明らかにした。これらの化合物は葉からの抑制剤の流
出を防止することができる。１種のかかる化合物エチラ
ンCD107を用いて得られた結果は第７表に示されてい
る。温室試験において、小麦植物に枯草菌JB3.6の72時
間培養物をウドンコ病菌接種直前に散布した。数本の植
物に0.1％エチランCD107含有培養物を散布した。植物を
接種後10日目に調べたところ、その結果はエチランCD10
7の添加が病気の抑制を有意に改善したことを示してい
る。
参考文献 ブローデント・ビー（Broadent P）、ベーカー・ケー・
エフ（Baker K.F.）、ウォーターワース・ワイ（Waterw
orth Y.）、1971年、オーストラリア土壌中の根病原菌
に拮抗する細菌及びアクチノマイセテス、オーストラリ
アン・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・サイエンス
（Australial Journol of Biological Science）、第24
巻、第925−944頁； チャン・アイ・ピー（Chang,I.P.）、コンメダール・テ
ー（Commedahl T.）、1968年、穀粒を拮抗性微生物で被
覆することによるトウモロコシ苗胴枯れ病の生物学的抑
制、フィトパソロジー（Phytopathology）、第58巻、第
1395−1401頁； オルセン・シー・エム（Olsen,C.M.）、1964年、土壌中
のリゾクトニア・ソラニ（Rhizoctonia solani）に関す
る微生物の拮抗作用、博士論文、カルフォルニア・バー
クレー大学、第152頁； オルセン・シー・エム、ベーカー・ケー・エフ、1968
年、土壌の選択的熱処理及び枯草菌によるリゾクトニア
・ソラニの阻害に関するその効果、フィトパソロジー、
第58巻、第79−87頁；スウィンバーン・テー・アール
（Swinburne.T.R）、1973年、ネクトリア・ガリゲナ（N
ectria galligena）感染によるリンゴ葉痕の微生物相、
トランサクションズ・オブ・ザ・ブリティッシュ・ミコ
ロジカル・ソサエテー（Transactions of the British
Mycological Society）、第60巻、第389−403頁；
エフ（Baker K.F.）、ウォーターワース・ワイ（Waterw
orth Y.）、1971年、オーストラリア土壌中の根病原菌
に拮抗する細菌及びアクチノマイセテス、オーストラリ
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覆することによるトウモロコシ苗胴枯れ病の生物学的抑
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る微生物の拮抗作用、博士論文、カルフォルニア・バー
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年、土壌の選択的熱処理及び枯草菌によるリゾクトニア
・ソラニの阻害に関するその効果、フィトパソロジー、
第58巻、第79−87頁；スウィンバーン・テー・アール
（Swinburne.T.R）、1973年、ネクトリア・ガリゲナ（N
ectria galligena）感染によるリンゴ葉痕の微生物相、
トランサクションズ・オブ・ザ・ブリティッシュ・ミコ
ロジカル・ソサエテー（Transactions of the British
Mycological Society）、第60巻、第389−403頁；
図は、ボトリチス・ファバエが接種された豆類に枯草菌
を散布した場合の経時的な葉の感染率について示してい
る。
を散布した場合の経時的な葉の感染率について示してい
る。
Claims (9)
- 【請求項１】嫌気増殖性であり、かつクエン酸資化能並
びにガラクトースからの酸生成能を有するバチルス・ズ
ブチルス。 - 【請求項２】JB3菌株NCIB 12375である、請求項１のバ
チルス・ズブチルス。 - 【請求項３】JB3.6菌株NCIB 12376である、請求項１の
バチルス・ズブチルス。 - 【請求項４】R1菌株NCIB 12616である、請求項１のバ
チルス・ズブチルス。 - 【請求項５】微生物感染又は微生物汚染の抑制のために
使用される、請求項１のバチルス・ズブチルス。 - 【請求項６】請求項１のバチルス・ズブチルス、又はこ
れから単離された抗菌物質、並びにそれらのための担体
又は希釈剤を含んでなる抗菌剤組成物。 - 【請求項７】ゴム質又は界面活性剤を更に含有する、請
求項６の抗菌剤組成物。 - 【請求項８】微生物感染又は微生物汚染の抑制のために
使用される、請求項６の抗菌剤組成物。 - 【請求項９】植物又はそれらの環境に、請求項１のバチ
ルス・ズブチルス又は請求項６の抗菌剤組成物を適用す
ることからなる、植物における微生物感染の抑制方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB878701234A GB8701234D0 (en) | 1987-01-21 | 1987-01-21 | Strain of microorganism |
| GB8701234 | 1987-01-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63273470A JPS63273470A (ja) | 1988-11-10 |
| JPH0722506B2 true JPH0722506B2 (ja) | 1995-03-15 |
Family
ID=10610970
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63011850A Expired - Fee Related JPH0722506B2 (ja) | 1987-01-21 | 1988-01-21 | 抗菌活性を有する微生物菌株 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5344647A (ja) |
| EP (1) | EP0276132B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0722506B2 (ja) |
| AT (1) | ATE71802T1 (ja) |
| CA (1) | CA1324099C (ja) |
| DE (1) | DE3867853D1 (ja) |
| ES (1) | ES2035260T3 (ja) |
| GB (1) | GB8701234D0 (ja) |
| GR (1) | GR3003937T3 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8805394D0 (en) * | 1988-03-07 | 1988-04-07 | Agricultural Genetics Co | Antibiotic |
| IL87322A0 (en) * | 1988-08-02 | 1989-01-31 | Univ Ramot | Method of controlling foliar diseases caused by fungal pathogens with fungicidal bacteria and novel pure cultures of fungicidal bacteria |
| JPH0734738B2 (ja) * | 1991-10-02 | 1995-04-19 | 有機質肥料生物活性利用技術研究組合 | 植物病原菌抑制微生物及びその利用法 |
| GB9206645D0 (en) * | 1992-03-26 | 1992-05-06 | Mini Agriculture & Fisheries | Biological control of post harvest pests |
| US5614188A (en) * | 1993-10-06 | 1997-03-25 | Murakashi Lime Industry Co., Ltd. | Anti-fusarium composition containing strains of bacillus Sp., a chitin-containing material, and a powdery material |
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| US6716435B1 (en) * | 1997-04-18 | 2004-04-06 | Ganeden Biotech, Inc. | Absorbent product containing absorbent structure and Bacillus coagulans |
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| DE69832267T2 (de) * | 1997-04-18 | 2006-08-10 | Ganeden Biotech, Inc., La Jolla | Oberflächige verwendung von probiotischen bacillussporen zur verhinderung oder bekämpfung von mikrobiellen infektionen |
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| EP1010754A4 (en) | 1997-09-03 | 2000-12-06 | Washi Kosan Kk | New microorganism |
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| SK13062001A3 (sk) | 1999-03-30 | 2002-05-09 | Agraquest, Inc. | Biologicky čistá kultúra, prostriedok, izolovaný metabolit, supernatant, čiastočne vyčistená frakcia, vo vode rozpustná látka, spôsob produkcie fungicídneho supernatantu, spôsob čiastočného vyčistenia supernatantu, spôsob zvýšenia insekticídnej aktivity |
| US6808917B1 (en) | 2001-02-02 | 2004-10-26 | Thomas D. Johnson | Controlling plant pathogens with fungal/bacterial anatagonist combinations |
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| KR20080044922A (ko) * | 2004-02-23 | 2008-05-21 | 닛뽕소다 가부시키가이샤 | 식물 병해 방제제 조성물 및 미생물 |
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