JPH07227284A - 合成ｄｎａの処理方法 - Google Patents
合成ｄｎａの処理方法Info
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- JPH07227284A JPH07227284A JP4185794A JP4185794A JPH07227284A JP H07227284 A JPH07227284 A JP H07227284A JP 4185794 A JP4185794 A JP 4185794A JP 4185794 A JP4185794 A JP 4185794A JP H07227284 A JPH07227284 A JP H07227284A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 脱保護されたＤＮＡ溶液を水で希釈し、この
希釈液を容器内に通し、容器内に入れた多孔性の担体に
オリゴヌクレオチドを吸着保持させる中間工程におい
て、前記容器内の担体にオリゴヌクレオチドが吸着保持
されていることを紫外可視分光光度計で定量分析する。 【効果】 紫外可視分光光度計による定量分析によっ
て、前記担体に所定量のオリゴヌクレオチドが吸着保持
されていないことが判れば、前記容器からの通過液を再
び該容器内に通し直す。これにより、この段階で前記担
体へのオリゴヌクレオチドの吸着保持が確実に行われて
いることを確認し、以後の処理工程に無駄が生じること
を未然に防止できる。
希釈液を容器内に通し、容器内に入れた多孔性の担体に
オリゴヌクレオチドを吸着保持させる中間工程におい
て、前記容器内の担体にオリゴヌクレオチドが吸着保持
されていることを紫外可視分光光度計で定量分析する。 【効果】 紫外可視分光光度計による定量分析によっ
て、前記担体に所定量のオリゴヌクレオチドが吸着保持
されていないことが判れば、前記容器からの通過液を再
び該容器内に通し直す。これにより、この段階で前記担
体へのオリゴヌクレオチドの吸着保持が確実に行われて
いることを確認し、以後の処理工程に無駄が生じること
を未然に防止できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明はオリゴヌクレオチドを
レジンから切り離して回収するための合成ＤＮＡの処理
方法に関する。
レジンから切り離して回収するための合成ＤＮＡの処理
方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】この種の合成ＤＮＡの処理方法として、
合成ＤＮＡにアンモニア水を加えて、レジンから「保護
されたオリゴヌクレオチド」を切り離す第１工程と、脱
保護されたＤＮＡ溶液を水で希釈して、この希釈液を多
数の担体が入った容器内に通し、該担体にオリゴヌクレ
オチドを吸着保持させる第２工程と、前記容器内に洗浄
液を通して不純物を除去する第３工程と、前記容器内に
酸性液を通してオリゴヌクレオチドのＤＭＴ基を外す第
４工程と、前記容器内に洗浄水を通して前記酸性液を除
去する第５工程と、前記容器に有機溶媒液を通し、該容
器内の前記担体からオリゴヌクレオチドを溶出させて回
収する第６工程とを経て、オリゴヌクレオチドを回収す
ることが公知である。
合成ＤＮＡにアンモニア水を加えて、レジンから「保護
されたオリゴヌクレオチド」を切り離す第１工程と、脱
保護されたＤＮＡ溶液を水で希釈して、この希釈液を多
数の担体が入った容器内に通し、該担体にオリゴヌクレ
オチドを吸着保持させる第２工程と、前記容器内に洗浄
液を通して不純物を除去する第３工程と、前記容器内に
酸性液を通してオリゴヌクレオチドのＤＭＴ基を外す第
４工程と、前記容器内に洗浄水を通して前記酸性液を除
去する第５工程と、前記容器に有機溶媒液を通し、該容
器内の前記担体からオリゴヌクレオチドを溶出させて回
収する第６工程とを経て、オリゴヌクレオチドを回収す
ることが公知である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】問題は第２工程にあ
る。第１工程で得たＤＮＡ溶液に水を加えて希釈し、こ
の希釈液を前記容器に通したとき、該容器内にある多孔
性の担体にオリゴヌクレオチドが吸着保持されないまま
通過液に含まれて容器外に排出されることがある。そう
なると、第３工程以下の処理は全てが無駄な作業にな
る。しかも、最終的に精製された状態では目視で確認す
らできない状態下にあり、気付くのが遅れるところに問
題があった。その不手際を防ぐためには、次善策として
第２工程での通過液を最後まで保存しておき、第２工程
から再びやり直すことが考えられる。しかし、これも大
いなる無駄である。そこで本発明の目的は、第２工程を
経て第３工程に移る前に、前記容器中の担体にオリゴヌ
クレオチドが吸着保持されているか否かを、簡単な方法
でしかし確実に確認できるようにし、以て従来の処理作
業の無駄を無くせる合成ＤＮＡの処理方法を提供するに
ある。
る。第１工程で得たＤＮＡ溶液に水を加えて希釈し、こ
の希釈液を前記容器に通したとき、該容器内にある多孔
性の担体にオリゴヌクレオチドが吸着保持されないまま
通過液に含まれて容器外に排出されることがある。そう
なると、第３工程以下の処理は全てが無駄な作業にな
る。しかも、最終的に精製された状態では目視で確認す
らできない状態下にあり、気付くのが遅れるところに問
題があった。その不手際を防ぐためには、次善策として
第２工程での通過液を最後まで保存しておき、第２工程
から再びやり直すことが考えられる。しかし、これも大
いなる無駄である。そこで本発明の目的は、第２工程を
経て第３工程に移る前に、前記容器中の担体にオリゴヌ
クレオチドが吸着保持されているか否かを、簡単な方法
でしかし確実に確認できるようにし、以て従来の処理作
業の無駄を無くせる合成ＤＮＡの処理方法を提供するに
ある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明に係るＤＮＡの処
理方法は、次の第１工程ないし第６工程からなる。 第１工程 合成ＤＮＡにアンモニア水を加えて、レジン
から「保護されたオリゴヌクレオチド」を切り離す。 第２工程 脱保護されたＤＮＡ溶液を水で希釈して、こ
の希釈液を多孔性の担体が多数入った容器内に通し、該
担体にオリゴヌクレオチドを吸着保持させる。この際
に、前記容器内の担体に対するオリゴヌクレオチドの吸
着量を紫外可視分光光度計で定量分析する。 第３工程 前記容器内に洗浄液を通して不純物を除去す
る。 第４工程 前記容器内にＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）等
の酸性液を通してオリゴヌクレオチドのＤＭＴ基を外
す。 第５工程 前記容器内に洗浄水を通して前記酸性液を除
去する。 第６工程 前記容器にアセトニトリル又はエタノールな
どの有機溶媒液を通し、該容器内の前記担体からオリゴ
ヌクレオチドを溶出させて回収する。又は、先の第２工
程において、前記容器内の担体に対するオリゴヌクレオ
チドの吸着量を検出するに代えて、該容器から出た通過
液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を紫外可視分
光光度計で定量分析する。更に具体的には、第６工程を
経て得た溶出液から有機溶媒を蒸発させたのち、高速液
体クロマトグラフィにかけて精製する。又は、第６工程
を経て得た溶出液に水を加えて希釈したのち、この希釈
溶出液を高速液体クロマトグラフィにかけて精製する。
理方法は、次の第１工程ないし第６工程からなる。 第１工程 合成ＤＮＡにアンモニア水を加えて、レジン
から「保護されたオリゴヌクレオチド」を切り離す。 第２工程 脱保護されたＤＮＡ溶液を水で希釈して、こ
の希釈液を多孔性の担体が多数入った容器内に通し、該
担体にオリゴヌクレオチドを吸着保持させる。この際
に、前記容器内の担体に対するオリゴヌクレオチドの吸
着量を紫外可視分光光度計で定量分析する。 第３工程 前記容器内に洗浄液を通して不純物を除去す
る。 第４工程 前記容器内にＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）等
の酸性液を通してオリゴヌクレオチドのＤＭＴ基を外
す。 第５工程 前記容器内に洗浄水を通して前記酸性液を除
去する。 第６工程 前記容器にアセトニトリル又はエタノールな
どの有機溶媒液を通し、該容器内の前記担体からオリゴ
ヌクレオチドを溶出させて回収する。又は、先の第２工
程において、前記容器内の担体に対するオリゴヌクレオ
チドの吸着量を検出するに代えて、該容器から出た通過
液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を紫外可視分
光光度計で定量分析する。更に具体的には、第６工程を
経て得た溶出液から有機溶媒を蒸発させたのち、高速液
体クロマトグラフィにかけて精製する。又は、第６工程
を経て得た溶出液に水を加えて希釈したのち、この希釈
溶出液を高速液体クロマトグラフィにかけて精製する。
【０００５】
【作用】第２工程において、容器内の担体に対するオリ
ゴヌクレオチドの吸着量は、公知の紫外可視分光光度計
で定量分析するので、この段階で該担体にオリゴヌクレ
オチドが吸着保持されていれば、そのまま第３工程以下
の手順に入る。同じ第２工程において、前記容器から出
た通過液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を可視
分光光度計で定量分析することにより、この通過液にオ
リゴヌクレオチドが混入されておらず、前記担体に必要
かつ十分のオリゴヌクレオチドが吸着保持されているこ
とを確認できれば、この場合も第３工程以下の手順に入
る。いずれにせよ、前記容器内の担体に所定量のオリゴ
ヌクレオチドが吸着保持されていないときは、前記通過
液を再び該容器内に通す作業を繰り返し、この第２工程
の中で担体にオリゴヌクレオチドを確実に吸着保持させ
る。
ゴヌクレオチドの吸着量は、公知の紫外可視分光光度計
で定量分析するので、この段階で該担体にオリゴヌクレ
オチドが吸着保持されていれば、そのまま第３工程以下
の手順に入る。同じ第２工程において、前記容器から出
た通過液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を可視
分光光度計で定量分析することにより、この通過液にオ
リゴヌクレオチドが混入されておらず、前記担体に必要
かつ十分のオリゴヌクレオチドが吸着保持されているこ
とを確認できれば、この場合も第３工程以下の手順に入
る。いずれにせよ、前記容器内の担体に所定量のオリゴ
ヌクレオチドが吸着保持されていないときは、前記通過
液を再び該容器内に通す作業を繰り返し、この第２工程
の中で担体にオリゴヌクレオチドを確実に吸着保持させ
る。
【０００６】
（実施例１） 第１工程 合成ＤＮＡに３０％アンモニア水を加え、室
温で２時間を経てガラス、ポリエチレンなどのレジンか
ら「保護されたオリゴヌクレオチド」を切り離すととも
に、このとき保護基も外す。 第２工程 第１工程で脱保護されたＤＮＡ溶液に同一容
量の水を加えて希釈し、Ｃ１８（炭素数１８）の多孔性
の球状担体が多数収納された容器に該希釈液を通し、不
活性ガスで圧力をかけて「脱保護されたオリゴヌクレオ
チド」をのみ担体に吸着保持させる。このとき、容器内
の担体に対するオリゴヌクレオチドの吸着量を公知の紫
外可視分光光度計で定量分析し、担体にオリゴヌクレオ
チドが吸着保持されていることを確認する。このとき、
担体にオリゴヌクレオチドが必要かつ十分に吸着保持さ
れていないときは、前記容器からの通過液を改めて該容
器に通し直す。かくして担体に所定量のオリゴヌクレオ
チドが確実に吸着保持されていることをこの段階で確認
する。
温で２時間を経てガラス、ポリエチレンなどのレジンか
ら「保護されたオリゴヌクレオチド」を切り離すととも
に、このとき保護基も外す。 第２工程 第１工程で脱保護されたＤＮＡ溶液に同一容
量の水を加えて希釈し、Ｃ１８（炭素数１８）の多孔性
の球状担体が多数収納された容器に該希釈液を通し、不
活性ガスで圧力をかけて「脱保護されたオリゴヌクレオ
チド」をのみ担体に吸着保持させる。このとき、容器内
の担体に対するオリゴヌクレオチドの吸着量を公知の紫
外可視分光光度計で定量分析し、担体にオリゴヌクレオ
チドが吸着保持されていることを確認する。このとき、
担体にオリゴヌクレオチドが必要かつ十分に吸着保持さ
れていないときは、前記容器からの通過液を改めて該容
器に通し直す。かくして担体に所定量のオリゴヌクレオ
チドが確実に吸着保持されていることをこの段階で確認
する。
【０００７】第３工程 前記担体の入った前記容器内に
３％アンモニア水を繰り返して２回通し、担体にオリゴ
ヌクレオチドを残し、他の不純物を水洗い除去する。 第４工程 同じ容器内に２％ＴＦＡ（トリフルオロ酢
酸）を通し、合成ＤＮＡのＤＭＴ基を外して溶出させ
る。 第５工程 同じ容器内に水を通し、前記ＴＦＡを水洗い
除去する。 第６工程 同じ容器内に有機溶媒液として２０％アセト
ニトリルを通し、担体より目的のオリゴヌクレオチドを
該容器外に溶出させ、その溶出液を第２の容器に回収す
る。ここまでは自動化して処理する。 第７工程 次に、オリゴヌクレオチドの溶出液を凍結乾
燥し、前記有機溶媒を蒸発させる。 第８工程 最後に凍結乾燥して得たオリゴヌクレオチド
を高速液体クロマトグラフィにかけて最終精製する。
３％アンモニア水を繰り返して２回通し、担体にオリゴ
ヌクレオチドを残し、他の不純物を水洗い除去する。 第４工程 同じ容器内に２％ＴＦＡ（トリフルオロ酢
酸）を通し、合成ＤＮＡのＤＭＴ基を外して溶出させ
る。 第５工程 同じ容器内に水を通し、前記ＴＦＡを水洗い
除去する。 第６工程 同じ容器内に有機溶媒液として２０％アセト
ニトリルを通し、担体より目的のオリゴヌクレオチドを
該容器外に溶出させ、その溶出液を第２の容器に回収す
る。ここまでは自動化して処理する。 第７工程 次に、オリゴヌクレオチドの溶出液を凍結乾
燥し、前記有機溶媒を蒸発させる。 第８工程 最後に凍結乾燥して得たオリゴヌクレオチド
を高速液体クロマトグラフィにかけて最終精製する。
【０００８】（実施例２）実施例１の第２工程におい
て、担体が入った前記容器からの通過液を回収し、この
通過液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を紫外可
視分光光度計で定量分析し、通過液にオリゴヌクレオチ
ドが含有されていないこと、すなわち前記容器中の担体
にオリゴヌクレオチドが必要かつ十分に吸着保持されて
いることを確認したうえで、次の第３工程に移った。な
お、この場合も前記定量分析によって容器中の担体に所
定量のオリゴヌクレオチドが吸着保持されていないとき
は、前記通過液を改めて容器内に通し直す。それ以外は
実施例１と同様にした。
て、担体が入った前記容器からの通過液を回収し、この
通過液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を紫外可
視分光光度計で定量分析し、通過液にオリゴヌクレオチ
ドが含有されていないこと、すなわち前記容器中の担体
にオリゴヌクレオチドが必要かつ十分に吸着保持されて
いることを確認したうえで、次の第３工程に移った。な
お、この場合も前記定量分析によって容器中の担体に所
定量のオリゴヌクレオチドが吸着保持されていないとき
は、前記通過液を改めて容器内に通し直す。それ以外は
実施例１と同様にした。
【０００９】（実施例３）実施例１又は２において、そ
こでの第６工程を経て得たオリゴヌクレオチドの溶出液
に水を加えて希釈したのち、実施例１の第７工程を省略
して該希釈液を高速液体クロマトグラフィにかけて精製
した。
こでの第６工程を経て得たオリゴヌクレオチドの溶出液
に水を加えて希釈したのち、実施例１の第７工程を省略
して該希釈液を高速液体クロマトグラフィにかけて精製
した。
【００１０】
【発明の効果】かかる本発明によれば、第２工程におい
て容器内の担体にオリゴヌクレオチドが吸着保持されて
いることを紫外可視分光光度計で定量分析して事前に確
認したうえで第３工程に入れるので、その後の処理工程
に一切の無駄がなく全体として能率的である。しかも、
公知の紫外可視分光光度計を用いるだけであるから格別
のコストを掛けずに済み、確実にミスのない処理を行え
た。
て容器内の担体にオリゴヌクレオチドが吸着保持されて
いることを紫外可視分光光度計で定量分析して事前に確
認したうえで第３工程に入れるので、その後の処理工程
に一切の無駄がなく全体として能率的である。しかも、
公知の紫外可視分光光度計を用いるだけであるから格別
のコストを掛けずに済み、確実にミスのない処理を行え
た。
Claims (4)
- 【請求項１】 合成ＤＮＡにアンモニア水を加えて、レ
ジンから「保護されたオリゴヌクレオチド」を切り離す
第１工程と、 脱保護されたＤＮＡ溶液を水で希釈して、この希釈液を
多孔性の担体が多数入った容器内に通し、該担体にオリ
ゴヌクレオチドを吸着保持させる第２工程と、 前記容器内に洗浄液を通して不純物を除去する第３工程
と、 前記容器内に酸性液を通してオリゴヌクレオチドのＤＭ
Ｔ基を外す第４工程と、 前記容器内に洗浄水を通して前記酸性液を除去する第５
工程と、 前記容器に有機溶媒液を通し、該容器内の前記担体から
オリゴヌクレオチドを溶出させて回収する第６工程とか
らなり、 第２工程において、前記容器内の担体に対するオリゴヌ
クレオチドの吸着量を紫外可視分光光度計で定量分析す
ることを特徴とする合成ＤＮＡの処理方法。 - 【請求項２】 第２工程において、前記容器から出た通
過液中におけるオリゴヌクレオチドの含有量を紫外可視
分光光度計で定量分析する合成ＤＮＡの処理方法。 - 【請求項３】 第６工程を経て得た溶出液から有機溶媒
を蒸発させたのち、高速液体クロマトグラフィにかけて
精製する合成ＤＮＡの処理方法。 - 【請求項４】 第６工程を経て得た溶出液に水を加えて
希釈したのち、この希釈溶出液を高速液体クロマトグラ
フィにかけて精製する合成ＤＮＡの処理方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4185794A JPH07227284A (ja) | 1994-02-15 | 1994-02-15 | 合成ｄｎａの処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4185794A JPH07227284A (ja) | 1994-02-15 | 1994-02-15 | 合成ｄｎａの処理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07227284A true JPH07227284A (ja) | 1995-08-29 |
Family
ID=12619926
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4185794A Pending JPH07227284A (ja) | 1994-02-15 | 1994-02-15 | 合成ｄｎａの処理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07227284A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007094581A1 (en) * | 2006-02-14 | 2007-08-23 | Bioneer Corporation | Dried oligonucleotide composition and method of producing the same |
| WO2024053578A1 (ja) | 2022-09-07 | 2024-03-14 | 株式会社日本触媒 | 核酸の製造方法、不純物の除去方法及び不純物が少ない核酸 |
-
1994
- 1994-02-15 JP JP4185794A patent/JPH07227284A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007094581A1 (en) * | 2006-02-14 | 2007-08-23 | Bioneer Corporation | Dried oligonucleotide composition and method of producing the same |
| KR100777249B1 (ko) * | 2006-02-14 | 2007-11-28 | (주)바이오니아 | 건조 올리고뉴클레오티드 조성물 및 이의 제조 방법 |
| US9200027B2 (en) | 2006-02-14 | 2015-12-01 | Bioneer Corporation | Dried oligonucleotide composition and method of producing the same |
| WO2024053578A1 (ja) | 2022-09-07 | 2024-03-14 | 株式会社日本触媒 | 核酸の製造方法、不純物の除去方法及び不純物が少ない核酸 |
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