JPH07233187A - ５−フルオロウリジン誘導体の製造および医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ５−フルオロウリジン−５'−モノホスフェ
ート（５−ＦＵＭＰ）と５−フルオロウリジン−５'−
ジホスフェートガラクトース（５−ＦＵＤＰＧal）の微
生物学的製造法および５−ＦＵＤＰＧalを含む制癌活性
医薬組成物を提供する。 【構成】 ５−フルオロウリジンにリン酸基供給源の存
在下セラチア属微生物を作用させて５−ＦＵＭＰを得、
これにガラクトースとリン酸基供給源の存在下カンジダ
属微生物を作用させて５−ＦＵＤＰＧal得る方法および
５−ＦＵＤＰＧalを含む制癌活性医薬組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、５−フルオロウリジン
−５'−リン酸エステルの製造法、具体的には、５−フ
ルオロウリジン−５'−モノホスフェート（５−ＦＵＭ
Ｐ）および５−フルオロウリジン−５'−ジホスフェー
トガラクトース（５−ＦＵＤＰＧal）またはその塩の微
生物学的製造法および５−ＦＵＤＰＧalを有効成分とす
る制癌活性医薬組成物に関する。

【０００２】５−ＦＵＭＰは、式：

【化５】 で示される化合物であって、それ自体制癌活性を有する
ことが知られている。また、５−ＦＵＤＰＧalは、式：

【化６】 で示される化合物であって、化合物自体は公知である。
それ自身の制癌活性はないが、細胞膜に存在する特異的
なピロホスファターゼの作用で５−ＦＵＭＰに変換され
た後に制癌活性を発揮する。

【０００３】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】上記
５−ＦＵＭＰの製造法としては、式：

【化７】 で示される５−フルオロウリジン（５−ＦＵＲ）にリン
酸化剤（例えばオキシ塩化リン）を反応させる方法が知
られている（特開昭５１−９５０８１号）。しかしなが
ら、この方法では、５−ＦＵＭＰの他にウリジンの２'
または３'位の水酸基がリン酸化された化合物が副生
し、これら副生物の分離、除去には手間がかかるという
難点があった。また、５−ＦＵＲに対してオキシ塩化リ
ンとトリメチルホスフェートまたはトリエチルホスフェ
ートを作用させて５−ＦＵＭＰを製造する方法も知られ
ている（特開昭６０−１７０００号）。この方法では、
前記の副生物の生成を回避することはできるが、収率が
約６％と非常に低い不利益がある。加えて、いずれの方
法においても、試薬中に水分がごく僅かでも存在すれば
反応が阻害されるため、５−ＦＵＲをはじめとする試薬
や溶媒は、予め厳密にその水分を除去しなければならな
いという煩雑さを伴っている。

【０００４】また、５−ＦＵＤＰＧalや５−フルオロウ
リジン−５'−ジホスフェートグルコース（５−ＦＵＤ
ＰＧlc）のような５−ＦＵＲの糖リン酸エステルの製造
法については、５−ＦＵＭＰにモルフォリン、次いでジ
シクロヘキシルカルボジイミドを作用させた後、グルコ
ース−１−リン酸を反応させることにより、５−ＦＵＤ
ＰＧlcを製造する方法が知られている（特開昭６０−１
７０００号）。この製造法は、試薬として使用する糖−
１−リン酸がグルコース−１−リン酸の場合には安価で
あるため有効な方法であると言えるが、ガラクトース−
１−リン酸などその他のものである場合には極めて高価
であるため、経済的な観点からその適用性が大きく妨げ
られる可能性がある。

【０００５】本発明者らは、上記した従来技術の持つ種
々の問題点を解決すべく、鋭意研究した結果、セラチア
（Serratia）属に属する微生物の細胞内に存在するヌク
レオシドホスホトランスフェラーゼによるリン酸基転移
反応およびカンジダ（Candida）属に属する微生物の細
胞内に存在するガラクトース代謝酵素系に着目し、これ
らを利用して５−ＦＵＲの５−ＦＵＭＰへの変換および
５−ＦＵＭＰの５−ＦＵＤＰＧalへの変換を行うことに
成功し、これに基づいて５−ＦＵＭＰおよび５−ＦＵＤ
ＰＧalの工業的な生産方法を確立するに至ったものであ
る。

【０００６】また、５−フルオロウラシル(５−ＦＵ)は
核酸合成代謝拮抗剤の一種で、１９５７年に合成されて
以来、癌組織への親和性が高く、消化器癌をはじめとし
て各種固形癌に対する広いスペクトルを示すことから広
く臨床に供せられてきた。最近、抗腫瘍効果増強、スペ
クトル拡大及び副作用軽減を目指して、多くの誘導体が
合成され臨床研究も進められている。

【０００７】ところで、動物細胞の細胞膜には特異性の
異なる数種の糖ヌクレオホスファターゼ（ＮＰＰ）が存
在することが知られている（Ｗ.Ｄeppert et al.：Ｊ.
ＣellＰhysiol.,９０，４１−５２（１９７６），Ｅrwi
n Ｂischoff et al.：Ｅur.Ｊ.Ｂiochem.,６２，２７９
−２８３（１９７６））。一方、本発明者の１人である
田中らはある種の癌細胞の細胞膜に特異的なＮＰＰが多
く存在することを知り、さらに、５−ＦＵＤＰＧal等の
５−ＦＵＲ糖ヌクレオチドアナログがそれ自身制癌活性
はないかまたは弱いが、このＮＰＰの作用で５−ＦＵＭ
Ｐに変換された後に制癌活性を発揮するとの知見を得て
本発明を完成した。

【０００８】５−ＦＵＲの糖ヌクレオチドアナログの制
癌剤としての利用については、５−フルオロウリジン−
５’−ジホスフェートグルコース（５−ＦＵＤＰＧlc）
が知られている（特開昭６１−１５８９２５号）。しか
し、これまで５−ＦＵＤＰＧalについての制癌活性につ
いての開示はない。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明の第１の要旨は、
セラチア属に属する微生物菌株またはその体内酵素を、
リン酸基供給源の存在下、５−ＦＵＲに作用させて、５
−ＦＵＭＰを得ることを特徴とする、５−フルオロウリ
ジン−５'−リン酸エステルの製造法、およびカンジダ
属に属する微生物菌株またはその体内酵素を、ガラクト
ースおよびリン酸基供給源の存在下、５−ＦＵＭＰに作
用させて、５−ＦＵＤＰＧalを得ることを特徴とする５
−フルオロウリジン−５'−リン酸エステルの製造法で
ある。

【００１０】本発明の第２の要旨は５−フルオロウリジ
ン−５’−ジホスフェートガラクトース（５−ＦＵＤＰ
Ｇal）および薬理学的に許容され得るそれらの塩を含む
制癌活性医薬組成物である。上記のような特徴を有する
化合物である５−ＦＵＤＰＧalは、正常細胞に障害を与
えず癌細胞のみを特異的に攻撃する可能性を有してお
り、制癌剤につきものの重篤な副作用を減少させること
ができる。

【００１１】本発明において、出発原料として使用する
５−ＦＵＲは、リボースの１位の炭素原子に５−フルオ
ロウラシルが結合したものであるが、５−フルオロウラ
シルは、極めて有効な制癌剤として知られている。その
作用機作は生体内でリボシル化およびリン酸化を受けて
５−フルオロ−２'−デオキシウリジン−５'−リン酸と
なり、これがデオキシウリジル酸をチミジル酸に転換す
るチミジル酸合成酵素を阻害することによりＤＮＡの合
成を抑制する。またＲＮＡにもウラシルの代わりに取り
込まれ、異常タンパク質合成を促して細胞を死滅させ
る。このことから、５−ＦＵＲが５−フルオロウラシル
の作用機作に依存する作用を微生物に与えるであろうこ
とが容易に考えられる。

【００１２】また、上記の５−フルオロ−２'−デオキ
シウリジン５'−リン酸は、上記のように間接的にＤＮ
Ａ合成を抑制する以外に、ＤＮＡ中に５'−チミジル酸
の代わりに取り込まれ、塩基対形成に異常を引き起こす
突然変異誘起性がある。５−ＦＵＭＰは、５−フルオロ
−２'−デオキシウリジン５'−リン酸分子中のデオキシ
リボース部分がリボースである以外は全く同様の構造を
持つ化合物であるから、５−ＦＵＭＰもまた本発明に使
用する微生物に何らか（たとえばＲＮＡ合成抑制）の影
響を与えるであろうことが考えられる。

【００１３】このように、５−ＦＵＲおよび５−ＦＵＭ
Ｐは微生物に対し生育抑制など何らかの負の影響を与え
るであろうことが容易に考えられる化合物であるにもか
かわらず、現実には、本発明において、それらによる使
用微生物に対する悪影響は実質的に認められず、５−Ｆ
ＵＭＰや５−ＦＵＤＰＧalが良好に生産される。

【００１４】本発明方法に従って、５−ＦＵＲを５−Ｆ
ＵＭＰに変換するには、５−ＦＵＲに適当な媒質中にお
いてリン酸基供給源の存在下にセラチア属に属する微生
物またはその細胞内に存在する酵素を作用させればよ
い。通常は、セラチア属に属する微生物自体が使用さ
れ、その典型的な例としては、セラチア・マルセッセン
ス（Serratia marcescens）ＩＦＯ 3046を挙げること
ができる。

【００１５】リン酸基供給源としては、５−ＦＵＲに導
入されるリン酸基を供給できる物質であれば特に制限は
なく、特にリン酸基を有する有機化合物、たとえばベン
ジルリン酸、シアノエチルリン酸、テトラクロルピロリ
ン酸、ｐ−ニトロフェニルリン酸などを挙げることがで
きる。

【００１６】媒質としては水性媒質が使用され、上記し
た５−ＦＵＲとリン酸基供給源のほか、必要に応じてセ
ラチア属微生物の生育に必要な栄養源が含まれていてい
てもよい。水性媒質は、ｐＨ３〜５、好ましくはｐＨ４
前後に調節する。反応実施に際しては、温度を約４０℃
〜６０℃、好ましくは４５〜５０℃に保つことが望まし
い。

【００１７】反応後、生成した５−ＦＵＭＰを精製する
には、常法に準じてこれを行えばよい。たとえば、反応
液から菌体を除去して得られた液体成分を吸着剤（たと
えば活性炭）に吸着、溶出させ、溶出液についてさらに
イオン交換樹脂（たとえばDowex IX8（ＣＩ型））のカ
ラムを用いて精製を行い、該当フラクションに吸着剤
（たとえば活性炭）を加えて目的物を吸着させた後、適
宜の溶離液（たとえばアンモニア水）を用いて溶出す
る。溶出液を適当に濃縮した後、適当な塩形成剤（たと
えば酢酸バリウム、酢酸ナトリウム）を加え、さらに水
混和性有機溶媒（たとえばエタノール）を加えることに
よって生ずる沈澱を集め、５−ＦＵＭＰを塩（たとえば
バリウム塩、ナトリウム塩）の形で得る。

【００１８】また、本発明方法により５−ＦＵＭＰを５
−ＦＵＤＰＧalに変換するには、５ーＦＵＭＰを適当な
媒質中においてガラクトースとリン酸基供給源の存在下
にカンジダ属に属する微生物またはその細胞内に存在す
る酵素を作用させればよい。通常は、カンジダ属の微生
物それ自身を使用すればよく、その典型的な例は、カン
ジダ・サイトアナ（Candida saitoana）ＩＦＯ ０７６
８である。

【００１９】リン酸供給源としては、リン酸基を有する
無機物が好んで使用され、その具体例としてはリン酸カ
リウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。

【００２０】媒質としては水性媒質が使用され、上記し
たガラクトースとリン酸基供給源に加え、必要に応じ、
使用微生物の生育に必要な栄養源を含有してもよい。

【００２１】反応後、生成した５−ＦＵＤＰＧalを精
製、回収するためには、５−ＦＵＭＰの場合と同様、反
応液から菌体を除去した後、吸着剤（たとえば活性炭）
およびイオン交換樹脂（たとえばＤowex IX8（ＣＩ
型））のカラムを用いて処理すればよい。

【００２２】本発明は、５−ＦＵＭＰおよび５−ＦＵＤ
ＰＧalの製造のいずれの場合も、その製造過程において
取り扱い易く、かつ事後処理の面でも処理し易い水溶媒
体を使用できる点で工業的に有利である。

【００２３】なお、本発明において、特に５−ＦＵＭＰ
をバリウム塩の形で採取し、必要に応じこれをそのまま
使用して５−ＦＵＤＰＧalに変換することは、上記５−
ＦＵＭＰのバリウム塩が水に難溶性であるため、回収が
容易であり、かつ精製が容易である点で有利である。

【００２４】なお、このような水に難溶性であるバリウ
ム塩はそのままの形ではカンジダ属の菌体中には取り込
まれないことが予測され、かつそのような菌体に対し有
害物質であることが予測されるにもかかわらず、現実に
は高収率で５−ＦＵＭＰから５−ＦＵＤＰＧalへの変換
が達成される点において、予想外の効果を奏するものと
いうことができる。

【００２５】さらに、５−ＦＵＤＰＧalの合成に用いら
れる微生物による合成法は他の化合物にも適用ができ、
糖を結合した化合物も比較的安価に合成できることか
ら、実用的な他の５−ＦＵＲの糖ヌクレオチドアナロ
グ、例えば、５−フルオロウリジン−ジホスフェートグ
ルコース（５−ＦＵＤＰＧlc）、５−フルオロウリジン
−ジホスフェートグルコース−Ｎ−アセチルグルコサミ
ン（５−ＦＵＤＰＧlcＮＡc）の開発が可能である。

【００２６】５−ＦＵＤＰＧalを含む制癌活性医薬組成
物は、正常細胞に障害を与えず癌細胞のみを特異的に攻
撃する可能性を有しており、制癌剤につきものの重篤な
副作用を減少させることができる。

【００２７】制癌活性試験 ５−ＦＵＲおよび５−ＦＵＭＰを対照物質として５−Ｆ
ＵＤＰＧalの培養癌細胞に対する作用について検討し
た。 １．材料 (１)細胞正常細胞 (1)ＮＨＤＦ細胞(正常ヒト皮膚線維芽細胞)、(2)３Ｔ３
細胞(マウス線維芽細胞)腫瘍化細胞 (3)３Ｔ３細胞(ＳＶ４０形質転換細胞)、(4)Ｂ１６−Ｆ
Ｏ細胞(マウス黒色腫細胞)、(5)ＬＬ／２細胞(マウス肺
癌細胞)、(6)ＮＳ−１（マウス骨髄腫細胞）、(7)Ｘ６
３−Ａｇ８（マウス骨髄腫細胞）、(8)ＳＰ２／０（マ
ウス骨髄腫細胞−脾細胞）、(9)ＨｅＬａ２２９（ヒト
子宮頚癌細胞）、(10)Ｋ−５６２（ヒト白血病細胞）、
(11)ＭＯＬＴ−３（ヒト白血病細胞） 以上はいずれも液体窒素細胞保存容器中に保存されてい
たものを、解凍して使用した。 (２)薬剤 ５−ＦＵＲはシグマケミカルより購入し、５−ＦＵＭＰ
および５−ＦＵＤＰＧalは分与されたものである。

【００２８】２．方法 (１)細胞を５×１０⁴個／ウエルの濃度で１０％ＦＣＳ
加ＭＥＭ培地(日水製薬)に懸濁し、９６ウエル平底マイ
クロプレート(ヌンク)に播種し、３７℃、５％ＣＯ₂雰
囲気下において２４時間培養した。 (２)薬剤をＭＥＭ培地に溶かし、メンブランフィルター
により濾過除菌した後に、所定の濃度に調整し、１ウエ
ル当たり２０μlずつ分注した。 (３)３７℃、５％ＣＯ₂雰囲気下において所定の時間培
養後、培養上清を除去しＰＢＳで２回洗浄した。 (４)ＰＢＳ中の６μＭ Ｃalcein−ＡＭ(モレキュラープ
ローブ)溶液を１００μlずつウエルに分注し３７℃に２
時間放置した。 (５)サイトフロー２３００(ミリポア)により、励起波長
４８５nm, 蛍光波長５３０nmにて蛍光を測定した。培地
のみのウエルの蛍光強度を１００とした時、薬剤を入れ
たウエルの蛍光強度の比を細胞の生存率（％）とした。

【００２９】３．結果 結果を表に示す。

【表１】 薬物添加(0.01μmol／ml)培地中で４日間培養した各種細胞の生存率(％) 細胞名 由来 5-FUDPGal 5-FUMP 5-FUR正常細胞 １. NHDF 正常ヒト皮膚線維芽細胞 69.0±12.3 20.2± 0.5 20.7± 2.7 ２. 3T3 マウス線維芽細胞 94.2±11.7 66.6± 7.8 47.5± 2.6癌細胞 ３. 3T3(形質転換) SV40形質転換細胞 2.3± 0.1 2.1± 0.1 2.2± 0.1 ４. B16-FO マウス黒色腫細胞 20.2± 5.6 18.6± 1.0 15.4± 1.7 ５. LL/2 マウス肺癌細胞 11.5± 2.6 6.9± 0.5 4.6± 0.3 ６. NS-1 マウス骨髄腫細胞 56.6± 3.0 54.6± 0.1 54.8± 0.4 7. X63-Ag8 マウス骨髄腫細胞 22.8± 1.1 22.5± 0.5 19.8± 0.8 ８. SP2/0 マウス骨髄腫細胞-脾細胞 18.0± 3.0 8.5± 0.1 6.4± 0.3 ９. HeLa229 ヒト子宮頸癌細胞 17.9± 0.8 15.8± 0.3 15.9± 0.3 10. K-562 ヒト白血病細胞 32.3± 9.4 27.3± 0.8 25.8± 1.3 11. MOLT-3 ヒト白血病細胞 18.0± 0.3 17.8± 0.3 18.0± 0.3 (平均値±SD)

【００３０】３Ｔ３細胞及びＮＨＤＦ細胞のような正常
細胞は５−ＦＵＤＰＧalに対しては抵抗性を示したが、
５−ＦＵＲ及び５−ＦＵＭＰには程度の差はあるが感受
性を示した。９種の癌細胞はいずれもこれらの薬剤に対
して感受性を示し、生存率が低下した。特に、３Ｔ３腫
瘍化細胞(形質転換)及びＬＬ／２細胞(マウス肺癌細胞)
がこれらの薬剤に対して非常に強い感受性を示し、つい
でＢ１６−ＦＯ細胞(マウス黒色腫細胞)、Ｘ６３−Ａｇ
８（マウス骨髄腫細胞）、ＳＰ２／０（マウス骨髄腫細
胞-脾細胞）及びＨｅＬａ２２９（ヒト子宮頸癌細胞）
およびＭＯＬＴ−３（ヒト白血病細胞）がかなり強い感
受性を示した。また、Ｋ−５６２（ヒト白血病細胞）お
よびＮＳ−１（マウス骨髄腫細胞）が、これらの薬剤に
対しても感受性を示した。

【００３１】図１に０.０１μmol／mlの濃度の薬剤の入
った培地中で４日間培養後の細胞の感受性の差を、正常
細胞である３Ｔ３細胞およびＮＨＤＦ細胞、癌細胞であ
る３Ｔ３細胞(形質転換)、Ｂ１６−ＦＯ細胞(マウス黒
色腫細胞)及びＬＬ／２細胞(マウス肺癌細胞)について
示した。３Ｔ３細胞及びＮＨＤＦ細胞のような正常細胞
は５−ＦＵＤＰＧalに対しては抵抗性を示したが、５−
ＦＵＲ及び５−ＦＵＭＰには程度の差はあるが感受性を
示した。３種の癌細胞はいずれもこれらの薬剤に対して
強い感受性を示し生存率が低下することが理解される。

【００３２】さらに、培地に５−ＦＵＤＰＧalを添加後
４日間培養した時点での、細胞の生存率と薬物濃度との
関係を図２に示した。０.０００１μmol／ml以下の濃度
では正常マウス線維芽細胞である３Ｔ３細胞及び腫瘍化
した３Ｔ３細胞はともに生存率は約１００％であり、低
下しなかった。０.００１μmol／ml以上の濃度では腫瘍
化した３Ｔ３細胞の生存率は１０％以下に低下したが、
正常３Ｔ３細胞の生存率はやや低下したのみであった。
Ｂ１６−ＦＯ細胞(マウス黒色腫細胞)及びＬＬ／２細胞
(マウス肺癌細胞)の癌細胞では０.００１μmol／ml以上
の５−ＦＵＤＰＧal濃度で生存率の急激な低下が認めら
れた。ＮＨＤＦ細胞(正常ヒト皮膚線維芽細胞)は３Ｔ３
細胞よりも低濃度の５−ＦＵＤＰＧalで生存率の低下が
認められたものの、前述の癌細胞よりは感受性が低かっ
た。

【００３３】４．結論 ５−ＦＵＤＰＧalの培養癌細胞及び正常細胞に対する作
用について対照物質として、５−ＦＵＲ及び５−ＦＵＭ
Ｐを用い比較検討した。その結果、正常細胞は５−ＦＵ
ＤＰＧalに対しては抵抗性を示したが、５−ＦＵＲ及び
５−ＦＵＭＰには程度の差はあるが感受性を示した。癌
細胞については、使用した９種類の癌細胞が、いずれも
これらの薬剤に対して強い感受性を示した。これらの結
果より、５−ＦＵＤＰＧalは、対照とした５−ＦＵＲお
よび５−ＦＵＭＰと比較して、正常細胞に対する毒性が
弱く、５−ＦＵＤＰＧalの癌細胞への選択毒性を有する
ことが判明した。

【００３４】本発明の５−ＦＵＤＰＧalまたはその生理
学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物を実際
の治療に用いる際には、患者の病態や用法に応じてさま
ざまな剤型のものが使用される。このような剤型の例と
しては、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤など
の内用剤、軟膏、パップ剤などの外用剤、注射剤あるい
は坐剤などを挙げることができる。

【００３５】これらの医薬組成物はその剤型に応じ、製
剤学上使用される手法により生理学的に許容される無毒
の賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、保存剤、溶解剤な
どの添加剤と適宜混合し、周知の方法に従い調整するこ
とにより製造できる。

【００３６】例えば散剤または細粒剤は、５−ＦＵＤＰ
Ｇalまたはその生理学的に許容される塩に必要に応じ、
賦形剤、結合剤、崩壊剤などの添加剤を加え、粉末また
は微粒状として散剤または細粒剤とする。また、必要に
応じて着色剤、芳香剤、矯味剤などを加えることができ
る。さらには適当なコーティング剤で剤皮を施してもよ
い。

【００３７】顆粒剤は、５−ＦＵＤＰＧalまたはその生
理学的に許容される塩に必要に応じ、賦形剤、結合剤、
崩壊剤などの添加剤を加えて均等に混和した後、粒状と
し、粒子をそろえて製する。顆粒剤には、必要に応じて
着色剤、芳香剤、矯味剤などを加えることができる。ま
た、適当なコーティング剤で剤皮を施してもよい。

【００３８】錠剤は通例、５−ＦＵＤＰＧalまたはその
生理学的に許容される塩に必要に応じ、賦形剤、結合
剤、崩壊剤などの添加剤を加えて均等に混和したものを
顆粒状とした後、周知の方法に従い打錠して製すること
ができる。錠剤にはまた必要に応じて着色剤、矯味剤な
どを加えることができる。さらに適当なコーティング剤
で剤皮を施し、糖衣錠、フィルムコート錠、腸溶錠など
にすることができる。

【００３９】カプセル剤は例えば、５−ＦＵＤＰＧalま
たはその生理学的に許容される塩に必要に応じ、適当な
賦形剤などの添加物を均等に混和したもの、または粒状
にしたものを適当な大きさのカプセルに充填して製す
る。あるいは充填内容物に腸溶性や特効性などの特性を
与えるためのコーティングを施した後、充填してもよ
い。

【００４０】坐剤は適当な基剤に必要ならば乳化剤、懸
濁化剤などを加え、これに５−ＦＵＤＰＧalまたはその
生理学的に許容される塩を加えて混和して均等にした
後、一定の形状に成型して製する。本剤には適当な剤皮
で被包することができる。また、必要に応じて保存剤を
加えてもよい。

【００４１】注射剤は例えば、５−ＦＵＤＰＧalまたは
その生理学的に許容される塩の一定量を溶剤に溶解、懸
濁もしくは乳化して一定容量とした後、アンプルなどの
注射剤用の容器に充填、密封して製することができる。
あるいは、適当な賦形剤と混合後、凍結乾燥し用時溶解
型の注射剤としてもよい。本剤には、所望により安定
剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤な
どの添加剤を加えることができる。また、血液あるいは
体液と等張にするための等張化剤やｐＨを調節するため
のｐＨ調整剤、あるいは局所麻酔剤などの無痛化剤を加
えてもよい。

【００４２】本発明の医薬組成物を実際の治療に用いる
際の投与量は、対象となる患者の年齢、体重、性別、症
状などを考慮して適宜増減されるが、一般に５−ＦＵＤ
ＰＧalとして経口投与の場合、通常成人１日当たり０.
５〜５mg／kg体重の範囲で、非経口投与の場合、通常成
人１日当たり０.２〜２mg／kg体重の範囲で使用され
る。

【００４３】また、本発明の５−ＦＵＤＰＧalまたはそ
の生理学的に許容される塩を有効成分とする制癌剤は、
単独で用いる他に既存の制癌剤と併用あるいは配合する
ことも可能である。係る制癌剤としては、例えばカルモ
フール、シタラビンオクホスファート、テガフール、ド
キシフルリジン、フルオロウラシルなどの代謝拮抗剤、
シクロホスファミド、カルボニン、塩酸ニムスチン、ダ
カルバジン、ラニムスチンなどのアルキル化剤、マイト
マイシン、クロモマイシン、アクチノマイシン、ブレオ
マイシン、アントラサイクリン、ネオカルチノスタチン
などの抗腫瘍性抗生物質やアセグラトン、エトポシド、
塩酸プロカルバジン、クエン酸タモキシフェン、塩酸ミ
トキサントロン、カルボプラチン、シスプラチンなどを
挙げることができる。

【００４４】毒性試験 本発明の５−ＦＵＤＰＧalの急性毒性（ＬＤ₅₀）につい
て検討したところ、Ｊｃｌ：ＩＣＲ系マウスの尾静脈内
に単回注入した結果、ＬＤ₅₀値は３００mg／ｋｇ以上で
あった。

【００４５】５−ＦＵＤＧａｌを含む制癌剤は、正常細
胞に障害を与えず癌細胞のみを特異的に攻撃する可能性
を有しており、制癌剤につきものの重篤な副作用を減少
させることができる。

【００４６】

【実施例】本発明を以下の実施例で更に詳細に説明する
が、本発明の技術的範囲は以下の実施例により何ら制限
を受けるものではない。 実施例１ 肉エキス５g、ペプトン１５g、塩化ナトリウム５g、リ
ン酸一水素カリウム５gを含む液体培地１リットル（ｐ
Ｈ７.０）に、あらかじめ同液体培地５mlで一晩振盪培
養したセラチア・マルセッセンスＩＦＯ 3046を加え、
３０℃で一晩振盪培養した。培養液より菌体を遠心分離
して集め、蒸留水にて洗浄した後、再び蒸留水に懸濁
（５００mg湿重／ml）して得た菌体懸濁液２０mlを１M
酢酸緩衝液（ｐＨ４.０）３０ml、１０mM硫酸亜鉛・７
水和物１０ml、１００mM５−ＦＵＲ２０ml（２ミリモ
ル）および３５０mMｐ−ニトロフェニルリン酸２０mlの
各溶液と混合し、反応液の全容積を水で１００mlとし
た。本混合液を４７℃で２４時間ゆるやかに振盪した。
反応液について高速液体クロマトグラフィーで検出を行
ったところ、５−ＦＵＭＰの合成効率は８４.４％であ
った。遠心分離によって菌体を除去した上清のｐＨを
３.８に合わせ、クロマト用活性炭１０gにて５−ＦＵＭ
Ｐを吸着させた。活性炭を約１リットルの水で洗浄後、
エタノール：アンモニア水：水（50：5：45）２００ml
で溶出した。

【００４７】溶出液よりエタノールおよびアンモニアを
減圧下に除去した後、Dowex IX8（３×２０cm）のカラ
ムに通して目的物を吸着させた後、１リットルの蒸留水
でカラムを洗浄した。未反応の５−ＦＵＲはすべてこの
フラクションに回収された。次いで、０.０１Ｎの塩酸
２リットルおよび０.１Ｍの塩化リチウムを含む０.０１
Ｎの塩酸２リットルにて、塩化リチウム濃度０〜０.１M
までの直線的な濃度勾配をつくり、５−ＦＵＭＰを溶出
した。５−ＦＵＭＰは、０.０５Mの塩化リチウムを含む
フラクションの前後に回収された。このフラクション
（約１リットル）を約１００mlまで濃縮した後、クロマ
ト用活性炭１０gを加えて５−ＦＵＭＰを吸着させ、水
１リットルで洗浄後エタノール：アンモニア水：水（5
0：5：45）２００mlで溶出した。これを１０mlまで減圧
濃縮し、酢酸バリウム４９１mg（１.６ミリモル）を加
えた。生成した沈澱を遠心分離し、エタノール：水
（２：１）（２０ml×２回）、更にエタノール（２０ml
×２回）で洗浄した。沈澱を減圧乾燥し、白色粉末状の
５−ＦＵＭＰのバリウム塩を得た。

【００４８】収量６９８mg（収率６５.２％） 元素分析 Ｃ₉Ｈ₁₀Ｏ₉Ｎ₂ＰＦ・Ｂａ・３Ｈ₂Ｏ Ｃ Ｈ Ｎ Ｐ 計算値； ２０.２４ ３.０３ ５.２７ ５.８３ 実験値； １９.９３ ２.９２ ４.９７ ５.７５

【００４９】 ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータ 炭素の位置 ¹H-NMR，δH（ppm，結合定数Ｊ(Hz)） ¹³C-NMR，δC（ppm） ６ ８.１１（d,６.４） １' ５.９０（dd,４.９,１.５） ９０.７９ ２' ４.２９（t,５.２） ７５.８６ ３' ４.３１（t,５.２） ７１.９８ ４' ４.２０（m） ８５.９１(d，８.８) ５' ４.０２（ddd,１２.０,５.５,３.１） ６５.９７ ３.９７（ddd,１２.０,５.５,３.４）

【００５０】実施例２ 乳糖１００g、ペプトン４g、酵母エキス４g、リン酸二
水素カリウム４g、リン酸一水素二アンモニウム４g、硫
酸マグネシウム・水和物２gを含む液体培地（ｐＨ６.
２）２リットルにあらかじめ同液体培地１００mlで一晩
振盪培養したカンジダ・サイトアナＩＦＯ 0768を加
え、３０℃で一晩振盪培養した。培養液より菌体を遠心
分離で集め、蒸留水にて３回洗浄した後、減圧下で十分
に乾燥させた。実施例１で得られた５−ＦＵＭＰのバリ
ウム塩５３６mg（１ミリモル）、Ｄ−ガラクトース１.
８g、４００mMリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７.０）２５
ml、１２０mM硫酸マグネシウム・７水和物５.０mlおよ
び上記乾燥菌体５g（均一な状態にまで粉末化した）を
混合し、さらに蒸留水を加えて全容を５０mlとした反応
液を３０℃で１４時間振盪した。反応液について高速液
体クロマトグラフィーで検出した５−ＦＵＤＰＧalの合
成効率は９４％であった。

【００５１】遠心分離によって菌体を除去して得られる
上清のｐＨを３.８とした後、クロマト用活性炭５gにて
５−ＦＵＤＰＧalを吸着させた。実施例１に記載の方法
に従って活性炭より５−ＦＵＤＰＧalを溶出した。溶出
液より減圧下にエタノールおよびアンモニアを除去し、
さらに実施例１記載の方法に従ってＤowex IX8のカラム
を用いるクロマトグラフィーを行い、活性炭に吸着、溶
出後、最終的にバリウム塩として５−ＦＵＤＰＧalの白
色粉末を得た。クロマトグラフィーの条件は、実施例１
と同様であるが、ただし塩化リチウムの濃度勾配は、
０.０５〜０.１Ｍとした。５−ＦＵＤＰＧalは塩化リチ
ウム濃度０.０７Ｍを含むフラクションの前後で溶出
し、この時点で既に５−ＦＵＭＰは初期値の約１％まで
減少しており、５−ＦＵＭＰと５−ＦＵＤＰＧalを完全
に分離することが出来た。

【００５２】収量６３３mg（収率７３.５％） 元素分析 Ｃ₁₅Ｈ₂₁Ｎ₂ＦＯ₁₇Ｐ₂・３/２Ｂａ・４Ｈ₂Ｏ Ｃ Ｈ Ｎ Ｐ 計算値； ２０.９３ ３.３７ ３.２５ ７.２０ 実験値； ２０.５４ ３.３４ ３.２７ ７.１０

【００５３】 ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータ 炭素の位置 ¹H-NMR，δH（ppm，結合定数Ｊ(Hz)） ¹³C-NMR,δC（ppm） ６ ７.９８（d，６.４） １' ６.０３（dd，４.９，１.８３） ９０.１３ ２' ７４.９９ ３' ７０.５３ ４' ８４.２０（d，１０） ５' ３.８９（dt，１０.４，３.２） ６６.３５（d，６） ３.９８（dd，１０.４，３.３） １'' ５.７２（dd，７.０，３.４） ９７.０４（d，６） ２'' ６９.７６（d，７） ３'' ７０.９６ ４'' ７０.７２ ５'' ７３.１５ ６'' ３.７９（dd，１１.９，５.５） ６２.３５ ３.８２（dd，１１.９，７.３）

【００５４】

【製剤例】次に示すような処方に従い、各種製剤を製し
た。ただし、剤型の種類および処方はここに挙げたもの
に限るものではない。 製剤例１（散剤） ５−ＦＵＤＰＧal２ｇをとり、乳糖を加え全量を１００
ｇとし、均等に混和して散剤とした。

【００５５】製剤例２（顆粒剤） ５−ＦＵＤＰＧal２ｇ、乳糖７０ｇ、トウモロコシデン
プン１０ｇおよびヒドロキシプロピルセルロース５ｇを
とり、均等に混和した後、流動層造粒機を用いて造粒し
た。得られた造粒物を乾燥、整粒したものに結晶セルロ
ース１２ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇを加え
てよく混合し、顆粒剤を製した。

【００５６】製剤例３（カプセル剤） ５−ＦＵＤＰＧal２ｇ、乳糖１５０ｇ、結晶セルロース
３０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース１６ｇ、ステア
リン酸マグネシウム２ｇをとり、均等に混和したものを
ゼラチン製硬カプセルに充填し、硬カプセル剤１０００
カプセルを製した。

【００５７】製剤例４（錠剤） ５−ＦＵＤＰＧal２ｇ、乳糖１４０ｇ、低置換度ヒドロ
キシプロピルセルロース３０ｇ、ヒドロキシプロピルセ
ルロース２６ｇを加えて均等に混和した後、流動層造粒
機を用いて造粒した。得られた造粒物にステアリン酸マ
グネシウム２ｇを加えて打錠して錠剤１０００錠を製し
た。

【００５８】製剤例５（注射剤） ５−ＦＵＤＰＧal１ｇをとり、注射用水１０００ｍｌに
溶解した後、塩酸を用いてｐＨ７.５に調節する。得ら
れた溶液を精密濾過機にて濾過滅菌した後、容量１ｍｌ
のガラス製アンプルに充填し、密封、滅菌、乾燥してア
ンプル入注射剤１０００アンプルを製した。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ５−ＦＵＲ、５−ＦＵＭＰおよび５−ＦＵＤ
ＰＧalに対する正常細胞及び癌細胞の感受性の差を示す
棒グラフである。

【図２】 ５−ＦＵＤＰＧalの正常細胞及び癌細胞への
作用を示す折れ線グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 19/30 Ｃ１２Ｒ 1:72）

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 セラチア（Serratia）属に属する微生物
   菌株またはその体内酵素を、リン酸基供給源の存在下、
   式： 【化１】 で示される５−フルオロウリジンに作用させて、式： 【化２】 で示される５−フルオロウリジン−５'−モノホスフェ
   ートを得ることを特徴とする、５−フルオロウリジン−
   ５'−リン酸エステルの製造法。
2. 【請求項２】 カンジダ（Candida）属に属する微生物
   菌株またはその体内酵素を、ガラクトースおよびリン酸
   基供給源の存在下、式： 【化３】 で示される５−フルオロウリジン−５'−モノホスフェ
   ートに作用させて、式： 【化４】 で示される５−フルオロウリジン−５'−ジホスフェー
   トガラクトースを得ることを特徴とする５−フルオロウ
   リジン−５'−リン酸エステルの製造法。
3. 【請求項３】 ５−フルオロウリジン−５'−ジホスフ
   ェートガラクトースまたは薬理学的に許容され得るそれ
   らの塩を有効成分として含む制癌活性医薬組成物。