JPH07242564A - 骨形成促進剤 - Google Patents
骨形成促進剤Info
- Publication number
- JPH07242564A JPH07242564A JP6054820A JP5482094A JPH07242564A JP H07242564 A JPH07242564 A JP H07242564A JP 6054820 A JP6054820 A JP 6054820A JP 5482094 A JP5482094 A JP 5482094A JP H07242564 A JPH07242564 A JP H07242564A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- active ingredient
- bone
- bone formation
- ngf
- nerve growth
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 骨芽細胞を活性化し骨形成を促進する薬剤の
提供。 【構成】 神経成長因子もしくは該活性を発現する部分
ペプチドを有効成分とする骨形成促進剤。 【効果】 本剤は、前骨芽細胞の骨芽細胞への分化を促
進し、骨基質の主要な蛋白質であるコラーゲンの合成を
活性化する。従って骨粗鬆症をはじめとする骨形成不全
を症状とする骨疾患の予防薬および治療薬として使用し
うる。
提供。 【構成】 神経成長因子もしくは該活性を発現する部分
ペプチドを有効成分とする骨形成促進剤。 【効果】 本剤は、前骨芽細胞の骨芽細胞への分化を促
進し、骨基質の主要な蛋白質であるコラーゲンの合成を
活性化する。従って骨粗鬆症をはじめとする骨形成不全
を症状とする骨疾患の予防薬および治療薬として使用し
うる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、骨粗鬆症をはじめとす
る骨形成不全を症状とする骨疾患の予防および治療に適
用しうる、神経成長因子（ＮＧＦ）を有効成分とする骨
形成促進剤に関する。
る骨形成不全を症状とする骨疾患の予防および治療に適
用しうる、神経成長因子（ＮＧＦ）を有効成分とする骨
形成促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】老人あるいは、閉経後の女性に多発する
骨粗鬆症は、骨形成と骨吸収のバランスが骨吸収の方に
偏ることにより骨の蛋白質やカルシウムが失われ、骨に
鬆（す）が入ったような状態になる病気である。この病
気は痛みを伴うばかりでなく、このような状態になった
骨は非常に脆く骨折頻度が高まる点で、特に老人の患者
が多いこの病気に於て深刻な問題となっている。現在、
痛みを緩和するカルシトニン、骨吸収を抑制するイプリ
フラボン、腸管からのカルシウムの吸収を高めるビタミ
ンＤ３、或はカルシウム製剤等が用いられているが、臨
床現場で満足な効果を発揮しているものはない。
骨粗鬆症は、骨形成と骨吸収のバランスが骨吸収の方に
偏ることにより骨の蛋白質やカルシウムが失われ、骨に
鬆（す）が入ったような状態になる病気である。この病
気は痛みを伴うばかりでなく、このような状態になった
骨は非常に脆く骨折頻度が高まる点で、特に老人の患者
が多いこの病気に於て深刻な問題となっている。現在、
痛みを緩和するカルシトニン、骨吸収を抑制するイプリ
フラボン、腸管からのカルシウムの吸収を高めるビタミ
ンＤ３、或はカルシウム製剤等が用いられているが、臨
床現場で満足な効果を発揮しているものはない。
【０００３】一方、神経成長因子（ＮＧＦ）は神経の成
長を促進する物質として、多くの種の動物から単離さ
れ、構造が明らかにされている。このＮＧＦは、１１６
〜１１８のアミノ酸からなるポリペプチドが２個結合し
た２量体であり、マウス顎下腺に最も多く含まれている
ことが知られている。ＮＧＦは哺乳動物間のホモロジー
が極めて高く、異種間でも有効に働くことが、神経突起
伸長活性などで知られている。しかしながら、ＮＧＦが
骨形成を促進することは全く知られていない。
長を促進する物質として、多くの種の動物から単離さ
れ、構造が明らかにされている。このＮＧＦは、１１６
〜１１８のアミノ酸からなるポリペプチドが２個結合し
た２量体であり、マウス顎下腺に最も多く含まれている
ことが知られている。ＮＧＦは哺乳動物間のホモロジー
が極めて高く、異種間でも有効に働くことが、神経突起
伸長活性などで知られている。しかしながら、ＮＧＦが
骨形成を促進することは全く知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】閉経後の骨粗鬆症は、
エストロゲン欠乏により、骨吸収が異常に高まることが
原因と考えられていることから、骨吸収抑制物質が骨粗
鬆症の治療薬として期待され研究されてきた。しかし骨
吸収を行う破骨細胞と骨形成を行う骨芽細胞は互いに局
所因子を分泌し、それぞれの分化や活性化に影響を及ぼ
しあっている。従って破骨細胞を抑制することは、骨芽
細胞の不活化を引き起こし骨代謝回転の鈍化を引き起こ
す可能性が高いと考えられる。そこで骨を作る細胞であ
る骨芽細胞を活性化し骨形成を促進する物質を骨粗鬆症
の治療薬として用いることが望ましいと考えられる。
エストロゲン欠乏により、骨吸収が異常に高まることが
原因と考えられていることから、骨吸収抑制物質が骨粗
鬆症の治療薬として期待され研究されてきた。しかし骨
吸収を行う破骨細胞と骨形成を行う骨芽細胞は互いに局
所因子を分泌し、それぞれの分化や活性化に影響を及ぼ
しあっている。従って破骨細胞を抑制することは、骨芽
細胞の不活化を引き起こし骨代謝回転の鈍化を引き起こ
す可能性が高いと考えられる。そこで骨を作る細胞であ
る骨芽細胞を活性化し骨形成を促進する物質を骨粗鬆症
の治療薬として用いることが望ましいと考えられる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、骨形成促
進活性物質を探索した結果、神経成長因子（ＮＧＦ）
が、前骨芽細胞の分化のマーカーであるアルカリフォス
ファターゼ活性を促進し、さらにコラーゲン合成を促進
することを見いだし、本発明を完成するに至った。
進活性物質を探索した結果、神経成長因子（ＮＧＦ）
が、前骨芽細胞の分化のマーカーであるアルカリフォス
ファターゼ活性を促進し、さらにコラーゲン合成を促進
することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００６】本発明において用いるＮＧＦは、ヒト由来
のもののほか、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、
ウシ、ヘビなど、動物由来のものであれば何れのもので
あってもよい。例えば、マウス顎下腺より、Bocchini,
V.等の方法[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 64: 787-794
(1969)]や、Mobley, W. C.等の方法［Biochemistry15;
5543-5551, (1976)]によって容易に単離、精製するこ
とができる。そのほかにも、ヘビ毒液やモルモット前立
腺等からも単離しうる。又、遺伝子工学の手法を用い
て、ヒトを初めとする各種哺乳動物由来のＮＧＦを生産
することもできる。ＮＧＦは、神経成長因子活性を発現
する神経成長因子の部分ペプチドであってもよい。
のもののほか、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、
ウシ、ヘビなど、動物由来のものであれば何れのもので
あってもよい。例えば、マウス顎下腺より、Bocchini,
V.等の方法[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 64: 787-794
(1969)]や、Mobley, W. C.等の方法［Biochemistry15;
5543-5551, (1976)]によって容易に単離、精製するこ
とができる。そのほかにも、ヘビ毒液やモルモット前立
腺等からも単離しうる。又、遺伝子工学の手法を用い
て、ヒトを初めとする各種哺乳動物由来のＮＧＦを生産
することもできる。ＮＧＦは、神経成長因子活性を発現
する神経成長因子の部分ペプチドであってもよい。
【０００７】さらに、本発明においては、ＮＧＦもしく
はＮＧＦ活性を発現するＮＧＦの部分ペプチドの一部の
アミノ酸が置換、欠損したミューテインを有効成分とし
て用いることができ、この態様も本発明の範囲である。
はＮＧＦ活性を発現するＮＧＦの部分ペプチドの一部の
アミノ酸が置換、欠損したミューテインを有効成分とし
て用いることができ、この態様も本発明の範囲である。
【０００８】本発明の骨形成促進剤の有効成分である神
経成長因子又は部分ペプチドの投与量は、患者の性別、
年令、体重、症状等にもよるが、一般に、１日当たり
０.１〜１０００ｍｇであり、１乃至数回に分けて投与
することができる。本剤は、水溶液として、あるいは、
製剤学上許容される担体と混合して、静脈内、皮下、あ
るいは筋肉注射により投与することが好ましい。
経成長因子又は部分ペプチドの投与量は、患者の性別、
年令、体重、症状等にもよるが、一般に、１日当たり
０.１〜１０００ｍｇであり、１乃至数回に分けて投与
することができる。本剤は、水溶液として、あるいは、
製剤学上許容される担体と混合して、静脈内、皮下、あ
るいは筋肉注射により投与することが好ましい。
【０００９】注射剤を製造するには、有効成分を必要に
応じ塩酸、水酸化ナトリウム、乳剤、乳酸ナトリウム、
リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなど
のｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化
剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプ
ルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シ
クロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空下凍結乾
燥し、用時溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成
分にレシチン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射用乳
剤とすることもできる。
応じ塩酸、水酸化ナトリウム、乳剤、乳酸ナトリウム、
リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなど
のｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化
剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプ
ルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シ
クロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空下凍結乾
燥し、用時溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成
分にレシチン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射用乳
剤とすることもできる。
【００１０】注射剤以外の製剤は、公知の製剤法、例え
ば日本薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な
改良を加えた方法によって製造することができる。
ば日本薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な
改良を加えた方法によって製造することができる。
【００１１】
【実施例】以下、本発明を実施例により詳細に説明す
る。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
る。ただし、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
【００１２】実施例１ ２４穴プレートに調製した１mlのアルファＭＥＭ（Flow
laboratories）培地（１０％ウシ新生児血清；ICN Bio
medikalsを含む）にＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞 １ｘ１０4個
／ｍｌとなるようにはん種し、３７℃、５％CO2下で４
８時間培養した。培地を除去した後、新たに同じ培地を
添加し更にマウスベータＮＧＦを２nｇ／ｍｌとなるよ
うに加えた。これを上記の炭酸ガス培養装置内で培養
し、３日おきに、ＮＧＦを含む同じ培地で培地交換しな
がら培養を継続し、薬剤添加後６日目の細胞内のアルカ
リフォスファターゼ活性を、以下の方法で測定した。
laboratories）培地（１０％ウシ新生児血清；ICN Bio
medikalsを含む）にＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞 １ｘ１０4個
／ｍｌとなるようにはん種し、３７℃、５％CO2下で４
８時間培養した。培地を除去した後、新たに同じ培地を
添加し更にマウスベータＮＧＦを２nｇ／ｍｌとなるよ
うに加えた。これを上記の炭酸ガス培養装置内で培養
し、３日おきに、ＮＧＦを含む同じ培地で培地交換しな
がら培養を継続し、薬剤添加後６日目の細胞内のアルカ
リフォスファターゼ活性を、以下の方法で測定した。
【００１３】（アルカリフォスファターゼ活性の測定）
培地を除去し、細胞をPBS(-)で洗浄した後、０.０５％T
riton X（和光純薬）の２mM MgCl2 溶液を１ウエル当
り５００マイクロリットル加えて細胞を懸濁し、これを
遠心チューブに移して３０秒間超音波破砕した後遠心分
離した。遠心上清のアルカリフォスファターゼ活性を、
Lowry等の方法（J.Biol.Chem.,193,265-273,1951）に準
じてアルカリ性フォスファBテストワコー測定キット
（和光純薬）を用いて測定した。ＮＧＦ無添加の細胞を
対照として、ＮＧＦを添加した細胞の活性を図１に示し
た。
培地を除去し、細胞をPBS(-)で洗浄した後、０.０５％T
riton X（和光純薬）の２mM MgCl2 溶液を１ウエル当
り５００マイクロリットル加えて細胞を懸濁し、これを
遠心チューブに移して３０秒間超音波破砕した後遠心分
離した。遠心上清のアルカリフォスファターゼ活性を、
Lowry等の方法（J.Biol.Chem.,193,265-273,1951）に準
じてアルカリ性フォスファBテストワコー測定キット
（和光純薬）を用いて測定した。ＮＧＦ無添加の細胞を
対照として、ＮＧＦを添加した細胞の活性を図１に示し
た。
【００１４】実施例２ ２４穴プレートに調製した１mlのアルファＭＥＭ（Flow
laboratories）培地（１０％ウシ新生児血清；ICN Bio
medikalsを含む）にＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞 １ｘ１０4個
／ｍｌとなるようにはん種し、これにマウスベータＮＧ
Ｆを2ng/mlとなるように添加したものと、無添加のもの
各々を３７℃、５％CO2下で６日間培養した。培地を除
去した後、１ウェル当り１００マイクロリットルの0.5M
酢酸溶液を加え５分間静置した後、抽出されたコラーゲ
ンの量をコラーゲンアッセイキット（SIRCOL社製）を用
いて測定した。結果を図２に示した。
laboratories）培地（１０％ウシ新生児血清；ICN Bio
medikalsを含む）にＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞 １ｘ１０4個
／ｍｌとなるようにはん種し、これにマウスベータＮＧ
Ｆを2ng/mlとなるように添加したものと、無添加のもの
各々を３７℃、５％CO2下で６日間培養した。培地を除
去した後、１ウェル当り１００マイクロリットルの0.5M
酢酸溶液を加え５分間静置した後、抽出されたコラーゲ
ンの量をコラーゲンアッセイキット（SIRCOL社製）を用
いて測定した。結果を図２に示した。
【００１５】上記の結果より、ＮＧＦは前骨芽細胞を骨
芽細胞へと分化させ、さらに骨のコラーゲン合成を促進
することが明らかとなった。従ってこのNGFの骨形成因
子としての活性は、骨粗鬆症をはじめとする骨形成不全
を症状とする骨疾患の予防および治療に有効に利用する
ことができる。
芽細胞へと分化させ、さらに骨のコラーゲン合成を促進
することが明らかとなった。従ってこのNGFの骨形成因
子としての活性は、骨粗鬆症をはじめとする骨形成不全
を症状とする骨疾患の予防および治療に有効に利用する
ことができる。
【００１６】
【発明の効果】本発明の骨形成促進剤は、前骨芽細胞の
骨芽細胞への分化を促進し、骨基質の主要な蛋白質であ
るコラーゲンの合成を活性化する。従って骨粗鬆症をは
じめとする骨形成不全を症状とする骨疾患の予防薬およ
び治療薬として用いることができる。
骨芽細胞への分化を促進し、骨基質の主要な蛋白質であ
るコラーゲンの合成を活性化する。従って骨粗鬆症をは
じめとする骨形成不全を症状とする骨疾患の予防薬およ
び治療薬として用いることができる。
【図１】 実施例１における、前骨芽細胞のアルカリフ
ォスファターゼ活性を示すグラフである。
ォスファターゼ活性を示すグラフである。
【図２】 実施例２における、前骨芽細胞によるコラー
ゲン合成量を示すグラフである。
ゲン合成量を示すグラフである。
Claims (1)
- 【請求項１】 神経成長因子を有効成分とする骨形成促
進剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6054820A JPH07242564A (ja) | 1994-03-02 | 1994-03-02 | 骨形成促進剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6054820A JPH07242564A (ja) | 1994-03-02 | 1994-03-02 | 骨形成促進剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07242564A true JPH07242564A (ja) | 1995-09-19 |
Family
ID=12981334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6054820A Pending JPH07242564A (ja) | 1994-03-02 | 1994-03-02 | 骨形成促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07242564A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001049313A1 (en) * | 1999-12-30 | 2001-07-12 | Medscand Medical Ab | Use of ngf for the manufacturing of a drug for treating allergic disorders |
| JP2006290813A (ja) * | 2005-04-12 | 2006-10-26 | Api Co Ltd | 骨形成促進剤、骨粗鬆症予防剤及びコラーゲン合成促進剤 |
| KR100751690B1 (ko) * | 2005-06-13 | 2007-08-23 | 세원셀론텍(주) | 조골 세포와 생체 기질 성분의 혼합물을 이용한 골 생성용조성물 및 그 제조방법 |
-
1994
- 1994-03-02 JP JP6054820A patent/JPH07242564A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001049313A1 (en) * | 1999-12-30 | 2001-07-12 | Medscand Medical Ab | Use of ngf for the manufacturing of a drug for treating allergic disorders |
| JP2006290813A (ja) * | 2005-04-12 | 2006-10-26 | Api Co Ltd | 骨形成促進剤、骨粗鬆症予防剤及びコラーゲン合成促進剤 |
| KR100751690B1 (ko) * | 2005-06-13 | 2007-08-23 | 세원셀론텍(주) | 조골 세포와 생체 기질 성분의 혼합물을 이용한 골 생성용조성물 및 그 제조방법 |
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