JPH07267988A - 新規ペプチド - Google Patents
新規ペプチドInfo
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- JPH07267988A JPH07267988A JP6062444A JP6244494A JPH07267988A JP H07267988 A JPH07267988 A JP H07267988A JP 6062444 A JP6062444 A JP 6062444A JP 6244494 A JP6244494 A JP 6244494A JP H07267988 A JPH07267988 A JP H07267988A
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- peptide
- cys
- arg
- leu
- val
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- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】一般式
【化１】
（式中の記号は以下の意味を示す。
Ａ1，Ａ2； 同一または異なって D-Cys または L-Cy
s，但し，A1=D-Cys のときA2=D-Cys Ｘ1，Ｘ2； 同一または異なって Gly,Ala,Val,Leu ま
たは Ile ｍ，ｎ； 同一または異なって０または１ Ｙ； Gly,Ala,Val,Ser または Thr Ｚ1，Ｚ2； 何れか一方は Arg，他方は Arg,Hrg,His,
Lys,Nle,Leu,Val） で示される新規ペプチドまたはその塩。 【効果】 中枢神経系または末梢神経系に作用し，それ
らに関与する種々の疾患の予防及び治療に有用である。
s，但し，A1=D-Cys のときA2=D-Cys Ｘ1，Ｘ2； 同一または異なって Gly,Ala,Val,Leu ま
たは Ile ｍ，ｎ； 同一または異なって０または１ Ｙ； Gly,Ala,Val,Ser または Thr Ｚ1，Ｚ2； 何れか一方は Arg，他方は Arg,Hrg,His,
Lys,Nle,Leu,Val） で示される新規ペプチドまたはその塩。 【効果】 中枢神経系または末梢神経系に作用し，それ
らに関与する種々の疾患の予防及び治療に有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は，ニューロペプチドＹ受
容体に親和性を有する新規ペプチドに関する。また，該
ペプチドを有効成分として含有する医薬に関する。
容体に親和性を有する新規ペプチドに関する。また，該
ペプチドを有効成分として含有する医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）は膵ペプ
チド類に属するアミノ酸３６残基からなるペプチドで，
ヒトおよび動物の中枢および末梢組織に広く分布する。
中枢神経系においてＮＰＹは，摂食促進作用，抗痙攣作
用，学習促進作用，抗不安作用，抗ストレス作用等を有
している。また，うつ病，アルツハイマー病およびパー
キンソン氏病において脳脊髄中のＮＰＹ量が低下するこ
とが，頭部外傷に伴い脳内のＮＰＹ量が増加することが
知られている。一方，末梢組織において，ＮＰＹは血管
収縮性ペプチドともいわれ，血管等平滑筋の収縮調節，
心臓収縮性の調節，レニン等の血圧調節ホルモンの分泌
調節等を司っている。
チド類に属するアミノ酸３６残基からなるペプチドで，
ヒトおよび動物の中枢および末梢組織に広く分布する。
中枢神経系においてＮＰＹは，摂食促進作用，抗痙攣作
用，学習促進作用，抗不安作用，抗ストレス作用等を有
している。また，うつ病，アルツハイマー病およびパー
キンソン氏病において脳脊髄中のＮＰＹ量が低下するこ
とが，頭部外傷に伴い脳内のＮＰＹ量が増加することが
知られている。一方，末梢組織において，ＮＰＹは血管
収縮性ペプチドともいわれ，血管等平滑筋の収縮調節，
心臓収縮性の調節，レニン等の血圧調節ホルモンの分泌
調節等を司っている。
【０００３】ＮＰＹ受容体親和性物質（ＮＰＹ受容体ア
ゴニストおよびアンタゴニスト）は，上記ＮＰＹの生理
作用に関連する種々の疾患，すなわち過食症および拒食
症，不安定神経症，老人性痴呆症，パーキンソン氏病，
うつ病，高血圧症および低血圧症等に代表される疾患の
治療薬として有用であると考えられる。ＮＰＹはそのＣ
末端側が生理活性（親和性）の発現に必須であることが
知られている。活性を有する最小の断片はＮＰＹ29-36
であることが報告されているが，その活性は非常に弱い
ものである。
ゴニストおよびアンタゴニスト）は，上記ＮＰＹの生理
作用に関連する種々の疾患，すなわち過食症および拒食
症，不安定神経症，老人性痴呆症，パーキンソン氏病，
うつ病，高血圧症および低血圧症等に代表される疾患の
治療薬として有用であると考えられる。ＮＰＹはそのＣ
末端側が生理活性（親和性）の発現に必須であることが
知られている。活性を有する最小の断片はＮＰＹ29-36
であることが報告されているが，その活性は非常に弱い
ものである。
【０００４】生理活性のあるＮＰＹ断片としてはこれま
で報告された最小のものは，Tatemoto らによるアミノ
酸１０残基からなるＮＰＹ27-36 断片である［Proc.Nat
l.Acad.Sci.USA,89,1174(1992)］。
で報告された最小のものは，Tatemoto らによるアミノ
酸１０残基からなるＮＰＹ27-36 断片である［Proc.Nat
l.Acad.Sci.USA,89,1174(1992)］。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら，生体内
での安定性，脳内移行性を考慮する時，公知のアミノ酸
断片は，医薬品として実用上十分なものとは言えず，受
容体に対する高い親和性と安定性を有するＮＰＹ誘導体
の開発が期待されている。従って，本発明の目的は短鎖
しかも公知のＮＰＹ断片に比べて格段に優れた受容体親
和性を有するペプチドを提供することである。さらに，
ＮＰＹに関連する疾患の治療に有用な生理活性ペプチド
を提供することを目的としている。
での安定性，脳内移行性を考慮する時，公知のアミノ酸
断片は，医薬品として実用上十分なものとは言えず，受
容体に対する高い親和性と安定性を有するＮＰＹ誘導体
の開発が期待されている。従って，本発明の目的は短鎖
しかも公知のＮＰＹ断片に比べて格段に優れた受容体親
和性を有するペプチドを提供することである。さらに，
ＮＰＹに関連する疾患の治療に有用な生理活性ペプチド
を提供することを目的としている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは，ＮＰＹ誘
導体に関し鋭意検討を行った結果，従来のＮＰＹ断片と
は異なり２つのシステインを含有する環状新規ペプチド
を見出し本発明を完成した。すなわち本発明は，一般式
導体に関し鋭意検討を行った結果，従来のＮＰＹ断片と
は異なり２つのシステインを含有する環状新規ペプチド
を見出し本発明を完成した。すなわち本発明は，一般式
【０００７】
【化５】
【０００８】（式中の記号は以下の意味を示す。 Ａ1，Ａ2； 同一または異なって D-Cys または L-Cy
s，但し A1=D-Cys のときA2=D-Cys Ｘ1 ，Ｘ2 ； 同一または異なって Gly,Ala,Val,Leu
または Ile ｍ，ｎ；同一または異なって０または１ Ｙ； Gly,Ala,Val,Ser または Thr Ｚ1 ，Ｚ2 ； いずれか一方は Arg ，他方は Arg,Hrg,
His,Lys,Nle,Leu またはVal） で示される新規ペプチドまたはその塩である。
s，但し A1=D-Cys のときA2=D-Cys Ｘ1 ，Ｘ2 ； 同一または異なって Gly,Ala,Val,Leu
または Ile ｍ，ｎ；同一または異なって０または１ Ｙ； Gly,Ala,Val,Ser または Thr Ｚ1 ，Ｚ2 ； いずれか一方は Arg ，他方は Arg,Hrg,
His,Lys,Nle,Leu またはVal） で示される新規ペプチドまたはその塩である。
【０００９】以下，本発明化合物につき詳細に説明す
る。本発明化合物内のアミノ酸残基の記号は，下記の意
味を示す。 Ｃｙｓ システイン Ｔｙｒ チロシン Ｇｌｙ グリシン Ａｌａ アラニン Ｖａｌ バリン Ｌｅｕ ロイシン Ｉｌｅ イソロイシン Ｓｅｒ セリン Ｔｈｒ スレオニン Ａｒｇ アルギニン Ｈｒｇ ホモアルギニン Ｈｉｓ ヒスチジン Ｌｙｓ リジン Ｎｌｅ ノルロイシン
る。本発明化合物内のアミノ酸残基の記号は，下記の意
味を示す。 Ｃｙｓ システイン Ｔｙｒ チロシン Ｇｌｙ グリシン Ａｌａ アラニン Ｖａｌ バリン Ｌｅｕ ロイシン Ｉｌｅ イソロイシン Ｓｅｒ セリン Ｔｈｒ スレオニン Ａｒｇ アルギニン Ｈｒｇ ホモアルギニン Ｈｉｓ ヒスチジン Ｌｙｓ リジン Ｎｌｅ ノルロイシン
【００１０】また，これらのアミノ酸残基は，指定のな
い限りＤ型アミノ酸残基もしくはＬ型アミノ酸残基のい
ずれであってもよい。本発明化合物（Ｉ）中の -[(X1 )
m -(X2 )n -Y] −におけるＸ1 ，Ｘ2 では Gly,Ala,Va
l,Leu または Ile であり，またＹでは Gly,Ala,Val,Se
r または Thrである。ｍおよびｎは，Ｘ1 およびＸ2 の
いずれか一方または両方が存在しない場合があることを
意味している。好適にはＸ1 およびＸ2 が共に存在し，
Ｘ1がＬｅｕ，Ｘ2がＩｌｅである。又，その場合ＹはＴ
ｈｒが好ましい。
い限りＤ型アミノ酸残基もしくはＬ型アミノ酸残基のい
ずれであってもよい。本発明化合物（Ｉ）中の -[(X1 )
m -(X2 )n -Y] −におけるＸ1 ，Ｘ2 では Gly,Ala,Va
l,Leu または Ile であり，またＹでは Gly,Ala,Val,Se
r または Thrである。ｍおよびｎは，Ｘ1 およびＸ2 の
いずれか一方または両方が存在しない場合があることを
意味している。好適にはＸ1 およびＸ2 が共に存在し，
Ｘ1がＬｅｕ，Ｘ2がＩｌｅである。又，その場合ＹはＴ
ｈｒが好ましい。
【００１１】Ｘ1 ，Ｘ2 およびＹのアミノ酸残基は，Ｌ
型もしくはＤ型のいずれでもよい。好ましくはＬ型であ
る。Ｚ1 ，Ｚ2 におけるアミノ酸残基は，何れか一方は
Arg であり，他方は Arg,Hrg,His,Lys,Nle,Leu,Val か
ら選ばれる。Ｚ1，Ｚ2のアミノ酸残基は，Ｌ型もしくは
Ｄ型のいずれでもよい。好ましくはＬ型である。好適に
は，Ｚ1，Ｚ2は共にL-Arg である。なお，Ａｃはアセチ
ル基を意味する。一般式（Ｉ）に包含される，本発明化
合物の代表的なものを挙げると次のとおりである。
型もしくはＤ型のいずれでもよい。好ましくはＬ型であ
る。Ｚ1 ，Ｚ2 におけるアミノ酸残基は，何れか一方は
Arg であり，他方は Arg,Hrg,His,Lys,Nle,Leu,Val か
ら選ばれる。Ｚ1，Ｚ2のアミノ酸残基は，Ｌ型もしくは
Ｄ型のいずれでもよい。好ましくはＬ型である。好適に
は，Ｚ1，Ｚ2は共にL-Arg である。なお，Ａｃはアセチ
ル基を意味する。一般式（Ｉ）に包含される，本発明化
合物の代表的なものを挙げると次のとおりである。
【００１２】
【化６】
【００１３】
【化７】
【００１４】
【化８】
【００１５】一般式（Ｉ）の化合物は酸または塩基と塩
を形成することができ，本発明ペプチド誘導体にはこれ
らの塩を包含するものである。ここに酸との塩としては
塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，リン酸等の鉱
酸やギ酸，酢酸，プロピオン酸，シュウ酸，マロン酸，
コハク酸，酒石酸，炭酸，ピクリン酸，メタンスルホン
酸，エタンスルホン酸，グルタミン酸等の有機酸との酸
付加塩を挙げることができる。
を形成することができ，本発明ペプチド誘導体にはこれ
らの塩を包含するものである。ここに酸との塩としては
塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，リン酸等の鉱
酸やギ酸，酢酸，プロピオン酸，シュウ酸，マロン酸，
コハク酸，酒石酸，炭酸，ピクリン酸，メタンスルホン
酸，エタンスルホン酸，グルタミン酸等の有機酸との酸
付加塩を挙げることができる。
【００１６】また，塩基との塩としてはリチウム，ナト
リウム，カリウム，マグネシウム，カルシウム，アルミ
ニウム等の無機塩基やメチルアミン，エチルアミン，エ
タノールアミン等の有機塩基，リジン，オルニチン等の
塩基性アミノ酸との塩またはアンモニウム塩が挙げられ
る。本発明の目的化合物を製造するには，種々の方法に
より製造できるが合成法によるときは，まず，構成ア
ミノ酸配列からなるペプチド化合物を製造し，ついで
得られたペプチド化合物における２個のＣｙｓのＳＨ基
にジスルフィド結合を形成させるのが好ましい。
リウム，カリウム，マグネシウム，カルシウム，アルミ
ニウム等の無機塩基やメチルアミン，エチルアミン，エ
タノールアミン等の有機塩基，リジン，オルニチン等の
塩基性アミノ酸との塩またはアンモニウム塩が挙げられ
る。本発明の目的化合物を製造するには，種々の方法に
より製造できるが合成法によるときは，まず，構成ア
ミノ酸配列からなるペプチド化合物を製造し，ついで
得られたペプチド化合物における２個のＣｙｓのＳＨ基
にジスルフィド結合を形成させるのが好ましい。
【００１７】ペプチド化合物の製造法；本発明のペプ
チド化合物の製造は，ペプチド合成法の一つである各種
保護基，カップリング試薬などを駆使して行うカップリ
ング法，Ｃ端末端活性化法，Ｎ端活性化法などの液相法
を用いて合成することは勿論可能であるが，簡便に生産
および精製ができる固相法［Merrifield;J.Am.Chem.So
c.,85,2185(1963) によって初めて紹介され，その後改
良が加えられている方法］を適用して合成するのが有利
である。固相法によってペプチドを合成するにあたって
は，優れたペプチド自動合成機；例えばアプライド・バ
イオシステムズ社のペプチド合成機，４３０Ａが市販さ
れており，この装置の標準的運転プログラムに従って行
えばよい，なお，本発明化合物の製造法としては，現在
市販の装置の適用のみに限定されるべきものでないこと
はいうまでもない。これらのペプチド合成機による合成
はラセミ化を伴うことが少なく，原料アミノ酸の立体配
置が維持された目的化合物を得ることができる。
チド化合物の製造は，ペプチド合成法の一つである各種
保護基，カップリング試薬などを駆使して行うカップリ
ング法，Ｃ端末端活性化法，Ｎ端活性化法などの液相法
を用いて合成することは勿論可能であるが，簡便に生産
および精製ができる固相法［Merrifield;J.Am.Chem.So
c.,85,2185(1963) によって初めて紹介され，その後改
良が加えられている方法］を適用して合成するのが有利
である。固相法によってペプチドを合成するにあたって
は，優れたペプチド自動合成機；例えばアプライド・バ
イオシステムズ社のペプチド合成機，４３０Ａが市販さ
れており，この装置の標準的運転プログラムに従って行
えばよい，なお，本発明化合物の製造法としては，現在
市販の装置の適用のみに限定されるべきものでないこと
はいうまでもない。これらのペプチド合成機による合成
はラセミ化を伴うことが少なく，原料アミノ酸の立体配
置が維持された目的化合物を得ることができる。
【００１８】合成されたペプチドはさらに精製度を高め
るため分取用逆相高速液体クロマトグラフィーなどによ
って，精製するのが有利である。なお，ペプチド自動合
成機による合成においては，アミノ保護基の除去を一般
にトリフルオロ酢酸で行うため，最終生成物は，トリフ
ルオロ酢酸塩として単離されるが，イオン交換クロマト
グラフィーなどにより種々の塩として単離することがで
きる。合成ペプチドの純度，安定性を維持するために
は，凍結乾燥するものが好適である。なお，自動化ペプ
チド合成機によるペプチド合成手順はおよそ次の手順が
行われるものである。
るため分取用逆相高速液体クロマトグラフィーなどによ
って，精製するのが有利である。なお，ペプチド自動合
成機による合成においては，アミノ保護基の除去を一般
にトリフルオロ酢酸で行うため，最終生成物は，トリフ
ルオロ酢酸塩として単離されるが，イオン交換クロマト
グラフィーなどにより種々の塩として単離することがで
きる。合成ペプチドの純度，安定性を維持するために
は，凍結乾燥するものが好適である。なお，自動化ペプ
チド合成機によるペプチド合成手順はおよそ次の手順が
行われるものである。
【００１９】１）固相樹脂に目的とするポリペプチドの
Ｃ末端α−アミノ保護アミノ酸Ａを縮合させる。 ２）α−アミノ保護アミノ酸Ａの保護基の除去−洗浄−
中和−洗浄の操作を行う。 ３）目的とするポリペプチドを構成するα−アミノ保護
アミノ酸を順次縮合させる。 ４）α−アミノ保護アミノ酸の保護基の除去−洗浄−中
和−洗浄の操作を行う。 ５）目的とするポリペプチドを合成した後，Ｎ末端のア
ミノ基をアセチル化する。 ６）固相樹脂から目的とするペプチドを切り離し，アミ
ノ酸残基の全側鎖に結合している保護基の除去を行う。 ７）６）で得られた遊離ペプチド内の２個のチオールを
用いて酸化環状反応を行う。 また，ペプチド化合物を製造する別の方法として，この
ペプチドをコードするＤＮＡを用いて遺伝子工学的手法
により行うことも可能である。
Ｃ末端α−アミノ保護アミノ酸Ａを縮合させる。 ２）α−アミノ保護アミノ酸Ａの保護基の除去−洗浄−
中和−洗浄の操作を行う。 ３）目的とするポリペプチドを構成するα−アミノ保護
アミノ酸を順次縮合させる。 ４）α−アミノ保護アミノ酸の保護基の除去−洗浄−中
和−洗浄の操作を行う。 ５）目的とするポリペプチドを合成した後，Ｎ末端のア
ミノ基をアセチル化する。 ６）固相樹脂から目的とするペプチドを切り離し，アミ
ノ酸残基の全側鎖に結合している保護基の除去を行う。 ７）６）で得られた遊離ペプチド内の２個のチオールを
用いて酸化環状反応を行う。 また，ペプチド化合物を製造する別の方法として，この
ペプチドをコードするＤＮＡを用いて遺伝子工学的手法
により行うことも可能である。
【００２０】ジスルフィド結合の形成；次に，で得
られたペプチド化合物における２つのＣｙｓのＳＨ基に
分子内ジスルフィド結合を形成させるには酸化処理すれ
ばよい。例えば，固相法により合成されたペプチドを上
記の方法により固相樹脂から切断及びアミノ酸残基の全
側鎖の結合している保護基を除去した後，遊離のチオー
ル基を酢酸アンモニウム緩衝液中過酸化水素酸を加え酸
化させることにより行うことができる。
られたペプチド化合物における２つのＣｙｓのＳＨ基に
分子内ジスルフィド結合を形成させるには酸化処理すれ
ばよい。例えば，固相法により合成されたペプチドを上
記の方法により固相樹脂から切断及びアミノ酸残基の全
側鎖の結合している保護基を除去した後，遊離のチオー
ル基を酢酸アンモニウム緩衝液中過酸化水素酸を加え酸
化させることにより行うことができる。
【００２１】単離・精製は，各種クロマトグラフィー，
塩析法，結晶化法，濾過法，濃縮法または遠心分離法等
を用いて行われる。本発明化合物の構造確認法は，ＨＰ
ＬＣ，アミノ酸分析，元素分析，マイクロクエンシング
またはペプチドマッピング法が挙げられる。
塩析法，結晶化法，濾過法，濃縮法または遠心分離法等
を用いて行われる。本発明化合物の構造確認法は，ＨＰ
ＬＣ，アミノ酸分析，元素分析，マイクロクエンシング
またはペプチドマッピング法が挙げられる。
【００２２】
【発明の効果】本発明化合物はＮＰＹ誘導体としてＮＰ
Ｙの生理機能に関連する種々の疾患，すなわち過食神経
症，拒食神経症，肥満，てんかん，不安神経症，老人性
痴呆症，うつ病，パーキンソン病，頭部外傷に伴う脳組
織変性，ストレスに起因する種々の身体症状，高血圧
症，低血圧症，心不全，狭心症，喘息，下痢，ホルモン
異常等の治療薬として有用である。本発明化合物はま
た，糖尿病患者における食事療法の補助薬として，ま
た，術中，術後，ショック時あるいは褐色細胞腫の際の
血圧管理に用いる薬剤として有用である。本発明化合物
の作用は，以下のような試験方法によって確認された。
Ｙの生理機能に関連する種々の疾患，すなわち過食神経
症，拒食神経症，肥満，てんかん，不安神経症，老人性
痴呆症，うつ病，パーキンソン病，頭部外傷に伴う脳組
織変性，ストレスに起因する種々の身体症状，高血圧
症，低血圧症，心不全，狭心症，喘息，下痢，ホルモン
異常等の治療薬として有用である。本発明化合物はま
た，糖尿病患者における食事療法の補助薬として，ま
た，術中，術後，ショック時あるいは褐色細胞腫の際の
血圧管理に用いる薬剤として有用である。本発明化合物
の作用は，以下のような試験方法によって確認された。
【００２３】ヒト神経芽細胞種由来のＳＫ−Ｎ−ＭＣ細
胞またはブタ海馬からから調製した膜標本を本発明の化
合物および５０ｐＭの［125 Ｉ］−ペプチドＹＹ（ＰＹ
Ｙ），１０ｍＭ 塩化マグネシウム ，１ｍＭフェニル
メチルスルホニルフルオリド，１ｍｇ／ｍｌバシトラシ
ン，及び５ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含む５０ｍ
Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で２５℃，１８０
分間インキュベートした後，１０，０００×ｇ，３分間
の遠心により膜結合放射能を分離した。非特異的結合は
１μＭのＮＰＹ存在下で測定した。
胞またはブタ海馬からから調製した膜標本を本発明の化
合物および５０ｐＭの［125 Ｉ］−ペプチドＹＹ（ＰＹ
Ｙ），１０ｍＭ 塩化マグネシウム ，１ｍＭフェニル
メチルスルホニルフルオリド，１ｍｇ／ｍｌバシトラシ
ン，及び５ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含む５０ｍ
Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で２５℃，１８０
分間インキュベートした後，１０，０００×ｇ，３分間
の遠心により膜結合放射能を分離した。非特異的結合は
１μＭのＮＰＹ存在下で測定した。
【００２４】この薬理試験において本発明化合物は，Ｎ
ＰＹ受容体に対する高い親和性を示した。特に前記式
（１）の化合物はＮＰＹ受容体に対する良好な親和性を
示した。本発明化合物またはその塩の１種または２種以
上を有効成分として含有する製剤は，通常用いられる調
剤用の担体や賦形剤，その他の添加剤を用いて，注射
剤，吸入剤，坐剤，経皮用液剤，軟膏，経皮用貼付剤，
経粘膜貼付剤（例えば口腔内貼付剤），経粘膜用液剤
（例えば経鼻用液剤）などに調製され，非経口的に投与
するのが好ましい。
ＰＹ受容体に対する高い親和性を示した。特に前記式
（１）の化合物はＮＰＹ受容体に対する良好な親和性を
示した。本発明化合物またはその塩の１種または２種以
上を有効成分として含有する製剤は，通常用いられる調
剤用の担体や賦形剤，その他の添加剤を用いて，注射
剤，吸入剤，坐剤，経皮用液剤，軟膏，経皮用貼付剤，
経粘膜貼付剤（例えば口腔内貼付剤），経粘膜用液剤
（例えば経鼻用液剤）などに調製され，非経口的に投与
するのが好ましい。
【００２５】製剤用の担体や賦形剤としては，固体又は
液状の非毒性医薬用物質が挙げられる。これらの例とし
ては，例えば乳糖，ステアリン酸マグネシウム，スター
チ，タルク，ゼラチン，寒天，ペクチン，アラビアゴ
ム，オリーブ油，ゴマ油，カカオバター，エチレングリ
コール等やその他常用の物が例示される。本発明化合物
の臨床投与量は，適用される患者の疾患，体重，年齢や
性別，投与ルート等を考慮して適宜設定されるが，通常
成人で一日当り１〜５００ｍｇでありこれを１回あるい
は２〜４回に分けて投与する。
液状の非毒性医薬用物質が挙げられる。これらの例とし
ては，例えば乳糖，ステアリン酸マグネシウム，スター
チ，タルク，ゼラチン，寒天，ペクチン，アラビアゴ
ム，オリーブ油，ゴマ油，カカオバター，エチレングリ
コール等やその他常用の物が例示される。本発明化合物
の臨床投与量は，適用される患者の疾患，体重，年齢や
性別，投与ルート等を考慮して適宜設定されるが，通常
成人で一日当り１〜５００ｍｇでありこれを１回あるい
は２〜４回に分けて投与する。
【００２６】
【製造法】次に実施例により本発明を更に詳細に説明す
るが，これらの実施例に限定されない。 実施例１
るが，これらの実施例に限定されない。 実施例１
【００２７】
【化９】
【００２８】１）ｔ−Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカル
ボニル基）法によるペプチドの固相合成 装置： Applied Biosystems 社製 ペプチド自動合成
装置４３０Ａ 合成手順は合成機に組み込まれているソフトウエアーに
従って行った。 アミノ酸誘導体および樹脂（ペプチド研究所製） ＭＢＨＡ樹脂（ｐ−メチルベンツヒドリルアミン樹脂） Boc-Tyr(BrZ),Boc-Arg(Tos),Boc-Thr(Bzl),Boc-Ile,Boc
-Leu,Boc-D-Cys(4-MeBzl) （なお，Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基，Ｚ
はベンジルオキシカルボニル基，Ｔｏｓはトシル基，Ｂ
ｚｌはベンジル基をそれぞれ意味する。以下同じ） 反応補助試薬 ジクロロメタン（ＤＣＭ），ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ），ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ），ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ），ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ），無水酢酸
ボニル基）法によるペプチドの固相合成 装置： Applied Biosystems 社製 ペプチド自動合成
装置４３０Ａ 合成手順は合成機に組み込まれているソフトウエアーに
従って行った。 アミノ酸誘導体および樹脂（ペプチド研究所製） ＭＢＨＡ樹脂（ｐ−メチルベンツヒドリルアミン樹脂） Boc-Tyr(BrZ),Boc-Arg(Tos),Boc-Thr(Bzl),Boc-Ile,Boc
-Leu,Boc-D-Cys(4-MeBzl) （なお，Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基，Ｚ
はベンジルオキシカルボニル基，Ｔｏｓはトシル基，Ｂ
ｚｌはベンジル基をそれぞれ意味する。以下同じ） 反応補助試薬 ジクロロメタン（ＤＣＭ），ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ），ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ），ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ），ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ），無水酢酸
【００２９】２）合成方法 合成はＣ末端より始めてＮ末端に向けて行う。まず act
ivation 槽中で最初の Boc-Tyr（BrZ）をＤＣＣにより
充分活性化しておき反応槽にあるＭＢＨＡ樹脂と反応さ
せる。反応終了後，次のアミノ酸を縮合させるためＴＦ
Ａ処理を行って樹脂上にあるＢｏｃ基の除去をし，ＤＩ
ＥＡで中和後，同様に次のアミノ酸誘導体 (Boc-Arg(To
s)) をＤＣＣで縮合させる。この操作をプログラムに従
って自動的にＮ末端アミノ酸酸で繰り返し行ない，最後
にＴＦＡ処理でＢｏｃ基を除去しＤＩＥＡで洗浄後，無
水酢酸処理によりＮ端アミノ基をアセチル化した。
ivation 槽中で最初の Boc-Tyr（BrZ）をＤＣＣにより
充分活性化しておき反応槽にあるＭＢＨＡ樹脂と反応さ
せる。反応終了後，次のアミノ酸を縮合させるためＴＦ
Ａ処理を行って樹脂上にあるＢｏｃ基の除去をし，ＤＩ
ＥＡで中和後，同様に次のアミノ酸誘導体 (Boc-Arg(To
s)) をＤＣＣで縮合させる。この操作をプログラムに従
って自動的にＮ末端アミノ酸酸で繰り返し行ない，最後
にＴＦＡ処理でＢｏｃ基を除去しＤＩＥＡで洗浄後，無
水酢酸処理によりＮ端アミノ基をアセチル化した。
【００３０】３）固相樹脂からのペプチドの切り出し 合成保護ペプチド樹脂にｐ−クレゾールを加えフッ化水
素（ＨＦ）処理装置にセットした後，−２〜−５℃，６
０分間処理を行い，固相樹脂からペプチドの切り出しと
同時にアミノ酸の全側鎖保護基の除去操作を行った。反
応後ＨＦを減圧下に留去した後５０％酢酸水溶液にて粗
ペプチドを抽出し，樹脂をろ別したのち凍結乾燥により
粉末を得た。分析ＲＰ−ＨＰＬＣは明らかなメインピー
クを与えた。 ４）酸化環状化反応 上記で得られたチオール遊離の粗ペプチドを酢酸アンモ
ニウム緩衝液に溶解し（溶解しにくい場合には尿素を加
える），過酸化水素を加え，ｐＨ８に調整し，反応をＲ
Ｐ−ＨＰＬＣで追跡，反応が終了していることの確認
後，アスコルビン酸を加えて反応を止め，ｐＨを酸性に
して，直接ＲＰ−ＨＰＬＣの分取精製にかけ，目的とす
るピークの単離を行った。
素（ＨＦ）処理装置にセットした後，−２〜−５℃，６
０分間処理を行い，固相樹脂からペプチドの切り出しと
同時にアミノ酸の全側鎖保護基の除去操作を行った。反
応後ＨＦを減圧下に留去した後５０％酢酸水溶液にて粗
ペプチドを抽出し，樹脂をろ別したのち凍結乾燥により
粉末を得た。分析ＲＰ−ＨＰＬＣは明らかなメインピー
クを与えた。 ４）酸化環状化反応 上記で得られたチオール遊離の粗ペプチドを酢酸アンモ
ニウム緩衝液に溶解し（溶解しにくい場合には尿素を加
える），過酸化水素を加え，ｐＨ８に調整し，反応をＲ
Ｐ−ＨＰＬＣで追跡，反応が終了していることの確認
後，アスコルビン酸を加えて反応を止め，ｐＨを酸性に
して，直接ＲＰ−ＨＰＬＣの分取精製にかけ，目的とす
るピークの単離を行った。
【００３１】 ＲＰ−ＨＰＬＣによる精製 カラム ＯＤＳ系 逆相カラム 分析 ４．６×１５０ｍｍ，ｓ−５ １２０Ａ ＯＤＳ 分取 ３０×２５０ｍｍ，ｓ−５ １２０Ａ ＯＤＳ 溶離液 Ａ：０．１％ ＴＦＡ水 Ｂ：０．１％ ＴＦＡアセトニトリル 分析 ２５分 分取 ６０分 検出 ２２０ｎｍ
【００３２】 理化学的性状 外観：白色粉末 アミノ酸分析値 水解条件： ６Ｎ ＨＣｌ，１１０℃，２２ｈ Thr(1)0.90 Ile(1)0.97 Leu(1)1.01 Tyr(1)0.94 NH3(1)1.18 Arg(2)2.00 Cys(2)1.87 純度（ＨＰＬＣ）： ９３．６％ 液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件 カラム： YMC Pac ODS-AM(4.6mmI.D. × 150mm） 溶離液： ０．１％ ＴＦＡ グラディエント： CH3CN 10%-60%(25min.) 温度： ５０℃ 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ． 検出： ２２０ｎｍ 以下，実施例２乃至３の化合物は，実施例１で使用する
アミノ酸の代わりに各々の化合物を構成するアミノ酸を
用いて実施例１と同様に処理して得た。 実施例２
アミノ酸の代わりに各々の化合物を構成するアミノ酸を
用いて実施例１と同様に処理して得た。 実施例２
【００３３】
【化１０】
【００３４】 理化学的性状 外観： 白色粉末 アミノ酸分析値 水解条件： ６Ｎ ＨＣｌ，１１０℃，２２ｈ Thr(1)0.89 Ile(1)0.95 Leu(1)1.00 Tyr(1)0.93 NH3(1)1.17 Arg(2)2.00 Cys(2)1.88 純度（ＨＰＬＣ）：９７．５％ 液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件 カラム： YMC Pak ODS-AM(4.6mmI.D.×150mm）Lot. 041516478 溶離液： ０．１％ ＴＦＡ グラディエント： CH3CN 10%-60%(25min.) 温度： ５０℃ 流速： １ ｍｌ／ｍｉｎ． 検出： ２２０ｎｍ 実施例３
【００３５】
【化１１】
【００３６】 理化学的性状 外観： 白色粉末 アミノ酸分析値 水解条件： ６Ｎ ＨＣｌ，１１０℃，２２ｈ Thr(1)0.90 Ile(1)0.97 Leu(1)1.01 Tyr(1)0.96 NH3(1)1.13 Arg(2)2.00 Cyr(2)1.81 純度（ＨＰＬＣ）： ９８．３％ 液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件 カラム： YMC Pak ODS-AM(4.6mmI.D. × 150mm) Lot.041516478 溶離液： ０．１％ ＴＦＡ グラディエント： CH3CN 10%-60%(25min.) 温度： ５０℃ 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ． 検出： ２２０ｎｍ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＮ Ｃ０７Ｋ 14/435 8318−4Ｈ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＮ
Claims (7)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中の記号は以下の意味を示す。 Ａ1，Ａ2； 同一または異なって D-Cys または L-Cy
s，但しA1=D-Cys のときA2=D-Cys Ｘ1 , Ｘ2 ； 同一または異なって Gly,Ala,Val,Leu
または Ile ｍ，ｎ； 同一または異なって０または１ Ｙ； Gly,Ala,Val,Ser または Thr Ｚ1 ，Ｚ2 ； 何れか一方は Arg ，他方は Arg,Hrg,Hi
s,Lys,Nle,Leu またはVal） で示される新規ペプチドまたはその塩。 - 【請求項２】Ｚ1，Ｚ2の何れか一方はL-Arg,他方はL-Ar
g,L-Hrg,L-His,L-Lys,L-Nle,L-LeuまたはL-Valである請
求項１記載の新規ペプチドまたはその塩 - 【請求項３】 -[(X1 )m -(X2 )n -Y]- が，-Leu-Ile-T
hr- である請求項２記載の新規ペプチドまたはその塩。 - 【請求項４】Ｚ1 ，Ｚ2 が共に L-Arg である請求項３
記載の新規ペプチドまたはその塩。 - 【請求項５】 【化２】 で示される請求項４記載の新規ペプチドまたはその塩。
- 【請求項６】 【化３】 （式中の記号は以下の意味を示す。 Ａ1，Ａ2： 同一または異なってD-CysまたはL-Cys，但
しA1=D-CysのときA2=D-Cys)で示される請求項４記載の
新規ペプチドまたはその塩 - 【請求項７】 【化４】 で示される新規ペプチドまたはその塩
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6062444A JPH07267988A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6062444A JPH07267988A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 新規ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07267988A true JPH07267988A (ja) | 1995-10-17 |
Family
ID=13200393
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6062444A Pending JPH07267988A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07267988A (ja) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004098591A2 (en) | 2003-05-05 | 2004-11-18 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase and their use in the treatment of neurological diseases |
| WO2005049027A2 (en) | 2003-11-03 | 2005-06-02 | Probiodrug Ag | Combinations useful for the treatment of neuronal disorders |
| WO2005075436A2 (en) | 2004-02-05 | 2005-08-18 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors of glutaminyl cyclase |
| WO2008055945A1 (en) | 2006-11-09 | 2008-05-15 | Probiodrug Ag | 3-hydr0xy-1,5-dihydr0-pyrr0l-2-one derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase for the treatment of ulcer, cancer and other diseases |
| WO2008065141A1 (en) | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors of glutaminyl cyclase |
| WO2011029920A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Probiodrug Ag | Heterocylcic derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
| WO2011107530A2 (en) | 2010-03-03 | 2011-09-09 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
| WO2011110613A1 (en) | 2010-03-10 | 2011-09-15 | Probiodrug Ag | Heterocyclic inhibitors of glutaminyl cyclase (qc, ec 2.3.2.5) |
| WO2011131748A2 (en) | 2010-04-21 | 2011-10-27 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
| EP2481408A2 (en) | 2007-03-01 | 2012-08-01 | Probiodrug AG | New use of glutaminyl cyclase inhibitors |
| WO2012123563A1 (en) | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Probiodrug Ag | Benz imidazole derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
| EP2865670A1 (en) | 2007-04-18 | 2015-04-29 | Probiodrug AG | Thiourea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors |
| EP3461819A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-03 | Probiodrug AG | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
-
1994
- 1994-03-31 JP JP6062444A patent/JPH07267988A/ja active Pending
Cited By (14)
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| WO2004098591A2 (en) | 2003-05-05 | 2004-11-18 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase and their use in the treatment of neurological diseases |
| EP2338490A2 (en) | 2003-11-03 | 2011-06-29 | Probiodrug AG | Combinations Useful for the Treatment of Neuronal Disorders |
| WO2005049027A2 (en) | 2003-11-03 | 2005-06-02 | Probiodrug Ag | Combinations useful for the treatment of neuronal disorders |
| WO2005075436A2 (en) | 2004-02-05 | 2005-08-18 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors of glutaminyl cyclase |
| WO2008055945A1 (en) | 2006-11-09 | 2008-05-15 | Probiodrug Ag | 3-hydr0xy-1,5-dihydr0-pyrr0l-2-one derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase for the treatment of ulcer, cancer and other diseases |
| WO2008065141A1 (en) | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors of glutaminyl cyclase |
| EP2481408A2 (en) | 2007-03-01 | 2012-08-01 | Probiodrug AG | New use of glutaminyl cyclase inhibitors |
| EP2865670A1 (en) | 2007-04-18 | 2015-04-29 | Probiodrug AG | Thiourea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors |
| WO2011029920A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Probiodrug Ag | Heterocylcic derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
| WO2011107530A2 (en) | 2010-03-03 | 2011-09-09 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
| WO2011110613A1 (en) | 2010-03-10 | 2011-09-15 | Probiodrug Ag | Heterocyclic inhibitors of glutaminyl cyclase (qc, ec 2.3.2.5) |
| WO2011131748A2 (en) | 2010-04-21 | 2011-10-27 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
| WO2012123563A1 (en) | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Probiodrug Ag | Benz imidazole derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
| EP3461819A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-03 | Probiodrug AG | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
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