JPH07275341A - コラーゲン製材および骨欠損部補綴材 - Google Patents
コラーゲン製材および骨欠損部補綴材Info
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- JPH07275341A JPH07275341A JP6075604A JP7560494A JPH07275341A JP H07275341 A JPH07275341 A JP H07275341A JP 6075604 A JP6075604 A JP 6075604A JP 7560494 A JP7560494 A JP 7560494A JP H07275341 A JPH07275341 A JP H07275341A
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Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】I型：III型コラーゲンの比が、９０：１０〜７
０：３０、より望ましくは８５：１５から成る至適配合
比を有し、骨欠損部などの生体組織の補綴に使用され
る。 【効果】物理的強度とコラゲナーゼ抵抗性に優れ、また
細胞・組織の誘導性に優れている。
０：３０、より望ましくは８５：１５から成る至適配合
比を有し、骨欠損部などの生体組織の補綴に使用され
る。 【効果】物理的強度とコラゲナーゼ抵抗性に優れ、また
細胞・組織の誘導性に優れている。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、骨欠損部等の生体の欠
損部位に用いられるコラーゲン製材に関する。
損部位に用いられるコラーゲン製材に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体組織に何らかの異常や欠損が生じた
場合、自己の他部位より採取した組織を移植することが
好ましいがその供給が困難な場合が多く、人工補綴材を
もって代替する場合が多く、そのような発想は古くから
存在した。
場合、自己の他部位より採取した組織を移植することが
好ましいがその供給が困難な場合が多く、人工補綴材を
もって代替する場合が多く、そのような発想は古くから
存在した。
【０００３】例えば、骨組織に何らかの異常や欠損が生
じた場合の人工補綴材にはチタニウム、ステンレス等の
金属類、ハイドロキシアパタイト等のセラミック類があ
る。しかし、金属類は生体骨との直接的な結合が得られ
ず、長期安定性に欠ける。また、セラミック類は生体骨
との直接的な結合が得られるが、それ自身の物性が脆
く、骨の物理的機能上問題がある。
じた場合の人工補綴材にはチタニウム、ステンレス等の
金属類、ハイドロキシアパタイト等のセラミック類があ
る。しかし、金属類は生体骨との直接的な結合が得られ
ず、長期安定性に欠ける。また、セラミック類は生体骨
との直接的な結合が得られるが、それ自身の物性が脆
く、骨の物理的機能上問題がある。
【０００４】その他の補綴材として、豚の皮膚由来の凍
結乾燥アテロコラーゲンをγ線照射滅菌したもの（コラ
ーゲンフリース［Collagenfleece］，ペンタファーム社
製）が市販されており、これを実際に骨再建に応用し、
これを使用しなかった場合に比し、骨欠損部の骨形成が
早まったというウルリッヒ［Ulrich Joos］とジュルト
ルード［Gertrud Ochs］の報告（バイオマテリアルス[B
iomaterials］ １９８０,２３〜２６)がある。
結乾燥アテロコラーゲンをγ線照射滅菌したもの（コラ
ーゲンフリース［Collagenfleece］，ペンタファーム社
製）が市販されており、これを実際に骨再建に応用し、
これを使用しなかった場合に比し、骨欠損部の骨形成が
早まったというウルリッヒ［Ulrich Joos］とジュルト
ルード［Gertrud Ochs］の報告（バイオマテリアルス[B
iomaterials］ １９８０,２３〜２６)がある。
【０００５】また、型別コラーゲンの影響では、小川俊
也らが、骨形成因子の担体としてI,II,III,IV,V型の各
種コラーゲンを用いて異所性骨化を検討し、III型によ
る骨形成が他群と比し、遅かったと報告（第15回日本バ
イオマテリアル学会予稿集，１９９３年）している。し
かし、これらのコラーゲンを利用した補綴材に関して、
コラーゲンのタイプ比及びまたそれらの生体組織形成性
能に言及した報告は見あたらない。
也らが、骨形成因子の担体としてI,II,III,IV,V型の各
種コラーゲンを用いて異所性骨化を検討し、III型によ
る骨形成が他群と比し、遅かったと報告（第15回日本バ
イオマテリアル学会予稿集，１９９３年）している。し
かし、これらのコラーゲンを利用した補綴材に関して、
コラーゲンのタイプ比及びまたそれらの生体組織形成性
能に言及した報告は見あたらない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】コラーゲンにはI〜XVI
型まで認知されており、なかでもI型は最も一般的でヒ
ドロキシリジンが少なく、幅広い原繊維、皮膚、腱、
骨、じん帯、角膜、内部器官に多く体内のコラーゲンの
９０％を占めており、またIII型はヒドロキシプロリン
が多く含まれヒドロキシリジンが少ないのが特徴である
（細胞の分子生物学，ブルース アルバーツ[Bruce Alb
erts]著，中村桂子 監訳，教育者）。
型まで認知されており、なかでもI型は最も一般的でヒ
ドロキシリジンが少なく、幅広い原繊維、皮膚、腱、
骨、じん帯、角膜、内部器官に多く体内のコラーゲンの
９０％を占めており、またIII型はヒドロキシプロリン
が多く含まれヒドロキシリジンが少ないのが特徴である
（細胞の分子生物学，ブルース アルバーツ[Bruce Alb
erts]著，中村桂子 監訳，教育者）。
【０００７】骨を構成するコラーゲンの９９％はI型で
ある。しかし、I型比の高いコラーゲンでは、良好な骨
誘導は達成されない。未熟な骨である類骨ではI型コラ
ーゲンの他にIII型コラーゲンの存在が知られているこ
とから、コラーゲンを利用した生体組織補綴材料には至
適なI型/III型比が存在すると考えられる。つまり、本
発明は至適なI型/III型比のコラーゲンからなり特に骨
組織の誘導に優れたコラーゲン製材を提供することにあ
る。
ある。しかし、I型比の高いコラーゲンでは、良好な骨
誘導は達成されない。未熟な骨である類骨ではI型コラ
ーゲンの他にIII型コラーゲンの存在が知られているこ
とから、コラーゲンを利用した生体組織補綴材料には至
適なI型/III型比が存在すると考えられる。つまり、本
発明は至適なI型/III型比のコラーゲンからなり特に骨
組織の誘導に優れたコラーゲン製材を提供することにあ
る。
【０００８】また、従来のコラーゲン製材である再線維
化したアテロコラーゲンは、例え異種の動物由来であっ
てもコラーゲンの免疫活性決定基であるテロペプタイド
部分が切断・除去されているためヒトの骨組織に対する
親和性は大きいと考えられる。しかしながら、コラーゲ
ン分子間に架橋を付加しないと生体内でコラゲナーゼで
容易に分解吸収される。
化したアテロコラーゲンは、例え異種の動物由来であっ
てもコラーゲンの免疫活性決定基であるテロペプタイド
部分が切断・除去されているためヒトの骨組織に対する
親和性は大きいと考えられる。しかしながら、コラーゲ
ン分子間に架橋を付加しないと生体内でコラゲナーゼで
容易に分解吸収される。
【０００９】γ線照射したり、ヘキサメチレンジイソシ
アネートやグルタールアルデヒド等の薬品で処理すると
コラーゲン分子間に架橋が導入され物性や耐コラゲナー
ゼ性が強化できる。しかし、強固な架橋を導入すると生
体内に埋植した場合コラーゲンに対する異物反応のみが
強く現れ、貪食細胞による貪食が認められるようにな
る。つまり、物性や耐コラゲナーゼ性の強化と組織・細
胞に対する親和性という生物学的性能の向上とは両立が
困難であり、さらに一定期間生体内に存在し、異物反応
が無いまま組織再建を導くコラーゲン製材は従来求め得
なかった。
アネートやグルタールアルデヒド等の薬品で処理すると
コラーゲン分子間に架橋が導入され物性や耐コラゲナー
ゼ性が強化できる。しかし、強固な架橋を導入すると生
体内に埋植した場合コラーゲンに対する異物反応のみが
強く現れ、貪食細胞による貪食が認められるようにな
る。つまり、物性や耐コラゲナーゼ性の強化と組織・細
胞に対する親和性という生物学的性能の向上とは両立が
困難であり、さらに一定期間生体内に存在し、異物反応
が無いまま組織再建を導くコラーゲン製材は従来求め得
なかった。
【００１０】つまり本発明は、特に骨誘導に至適な組成
比であり、耐コラゲナーゼ性が強化され、かつ異物反応
を招かないコラーゲン製材を提供することを目的とす
る。
比であり、耐コラゲナーゼ性が強化され、かつ異物反応
を招かないコラーゲン製材を提供することを目的とす
る。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明の生体組織補綴材
料は、以下の構成によって構成される。
料は、以下の構成によって構成される。
【００１２】（１） I型コラーゲン：III型コラーゲン
の比が９０：１０〜７０：３０であるコラーゲン製材。
の比が９０：１０〜７０：３０であるコラーゲン製材。
【００１３】（２） I型コラーゲン：III型コラーゲン
の比が８５：１５であるコラーゲン製材。
の比が８５：１５であるコラーゲン製材。
【００１４】（３） I型コラーゲン：III型コラーゲン
の比が９０：１０〜７０：３０である再線維化アテロコ
ラーゲンからなる上記（１）に記載のコラーゲン製材。
の比が９０：１０〜７０：３０である再線維化アテロコ
ラーゲンからなる上記（１）に記載のコラーゲン製材。
【００１５】（４） I型コラーゲン：III型コラーゲン
の比が８５：１５である再線維化アテロコラーゲンから
なる上記（２）に記載のコラーゲン製材。
の比が８５：１５である再線維化アテロコラーゲンから
なる上記（２）に記載のコラーゲン製材。
【００１６】（５） スポンジ状を成す再線維化アテロ
コラーゲンを架橋処理することにより得られ、架橋度が
３０〜８０％であり、前記再線維化アテロコラーゲンの
I型コラーゲン：III型コラーゲンの比が９０：１０〜７
０：３０である上記（３）に記載のコラーゲン製材。
コラーゲンを架橋処理することにより得られ、架橋度が
３０〜８０％であり、前記再線維化アテロコラーゲンの
I型コラーゲン：III型コラーゲンの比が９０：１０〜７
０：３０である上記（３）に記載のコラーゲン製材。
【００１７】（６） スポンジ状を成す再線維化アテロ
コラーゲンを架橋処理することにより得られ、架橋度が
３０〜８０％であり、前記再線維化アテロコラーゲンの
I型コラーゲン：III型コラーゲンの比が８５：１５であ
る上記（４）に記載のコラーゲン製材。
コラーゲンを架橋処理することにより得られ、架橋度が
３０〜８０％であり、前記再線維化アテロコラーゲンの
I型コラーゲン：III型コラーゲンの比が８５：１５であ
る上記（４）に記載のコラーゲン製材。
【００１８】（７） 前記スポンジ状が凍結乾燥により
形成されてなる上記（５）及び（６）に記載のコラーゲ
ン製材。
形成されてなる上記（５）及び（６）に記載のコラーゲ
ン製材。
【００１９】（８） 前記架橋処理が、熱脱水架橋処理
であることを特徴とする上記（５）及び（６）に記載の
コラーゲン製材。
であることを特徴とする上記（５）及び（６）に記載の
コラーゲン製材。
【００２０】（９） 前記熱脱水架橋が真空下，１１０
℃，２〜８時間で行われることを特徴とする上記
（５），（６）及び（８）に記載のコラーゲン製材。
℃，２〜８時間で行われることを特徴とする上記
（５），（６）及び（８）に記載のコラーゲン製材。
【００２１】（１０） 前記熱脱水架橋処理による架橋
度が３０〜８０％、さらに好ましくは４０〜７０％であ
る上記（５），（６），（８）及び（９）に記載のコラ
ーゲン製材。
度が３０〜８０％、さらに好ましくは４０〜７０％であ
る上記（５），（６），（８）及び（９）に記載のコラ
ーゲン製材。
【００２２】（１１） 前記熱脱水架橋処理による架橋
度が４０〜７０％である上記（５），（６），（８），
（９）及び（１０）に記載のコラーゲン製材。
度が４０〜７０％である上記（５），（６），（８），
（９）及び（１０）に記載のコラーゲン製材。
【００２３】（１２） 再線維化アテロコラーゲンに、
ヘリックス含量が０〜８０％である変性コラーゲンを１
０〜５０％混合したことを特徴とする上記（３），
（４），（５）及び（６）に記載のコラーゲン製材。
ヘリックス含量が０〜８０％である変性コラーゲンを１
０〜５０％混合したことを特徴とする上記（３），
（４），（５）及び（６）に記載のコラーゲン製材。
【００２４】（１３） 上記（１）〜（１２）に記載の
コラーゲン製材からなる骨欠損部補綴材。
コラーゲン製材からなる骨欠損部補綴材。
【００２５】本発明において原料コラーゲンは、特に限
定されないが牛由来のものを用いる。
定されないが牛由来のものを用いる。
【００２６】また本発明においてコラーゲンは、異種の
動物由来であってもコラーゲンの免疫活性決定基である
テロペプタイド部分を切断・除去したアテロコラーゲン
を再線維化して用いることが望ましい。
動物由来であってもコラーゲンの免疫活性決定基である
テロペプタイド部分を切断・除去したアテロコラーゲン
を再線維化して用いることが望ましい。
【００２７】また本発明においてコラーゲンは、凍結乾
燥を行うことによりスポンジ状となったものを、真空下
１１０℃，２〜８時間の条件で熱脱水架橋することによ
って得られた物を用いることが望ましい。
燥を行うことによりスポンジ状となったものを、真空下
１１０℃，２〜８時間の条件で熱脱水架橋することによ
って得られた物を用いることが望ましい。
【００２８】本発明において用いるI型コラーゲン及びI
II型コラーゲンは各々原料コラーゲンから、塩析により
分離・精製され単離される。
II型コラーゲンは各々原料コラーゲンから、塩析により
分離・精製され単離される。
【００２９】また、本発明において各型コラーゲンの比
（％）は、常法に従い電気泳動で分離した後デンシトメ
ーターでその割合を測定した。
（％）は、常法に従い電気泳動で分離した後デンシトメ
ーターでその割合を測定した。
【００３０】本発明に用いる好適なコラーゲンの生成の
仕方について説明すると、まず牛真皮由来のアテロコラ
ーゲンを酸性溶液に溶解し、これを６０℃で，２０分〜
２４時間加熱することによってヘリックス含量０〜８０
％である変性コラーゲンを得る。ヘリックス含量とはコ
ラーゲン特有の三重鎖ヘリックスの含量を意味し、変性
コラーゲンではこのヘリックスがランダムコイル化して
いるためヘリックス含量が変性度に応じ低下する。この
ヘリックス含量は円偏光２色性分光計（ＣＤ）や赤外分
光光度計（ＩＲ）で測定することが出来る。
仕方について説明すると、まず牛真皮由来のアテロコラ
ーゲンを酸性溶液に溶解し、これを６０℃で，２０分〜
２４時間加熱することによってヘリックス含量０〜８０
％である変性コラーゲンを得る。ヘリックス含量とはコ
ラーゲン特有の三重鎖ヘリックスの含量を意味し、変性
コラーゲンではこのヘリックスがランダムコイル化して
いるためヘリックス含量が変性度に応じ低下する。この
ヘリックス含量は円偏光２色性分光計（ＣＤ）や赤外分
光光度計（ＩＲ）で測定することが出来る。
【００３１】次に、原料である上述した牛真皮由来のア
テロコラーゲンにはI型コラーゲンとIII型コラーゲンが
含まれており、塩析法にて分離・精製することにより単
離出来る。
テロコラーゲンにはI型コラーゲンとIII型コラーゲンが
含まれており、塩析法にて分離・精製することにより単
離出来る。
【００３２】本発明のコラーゲン製材は、この単離され
たアテロコラーゲンのI型コラーゲンとIII型コラーゲン
を一定比で混合した後、再線維化し、さらに凍結乾燥し
てスポンジ状となったものを真空下１１０℃，２〜８時
間の条件で熱脱水架橋することによって得られる。この
製造法により得られたコラーゲンは３０〜８０％、より
好ましくは４０〜７０％の架橋度を有する。
たアテロコラーゲンのI型コラーゲンとIII型コラーゲン
を一定比で混合した後、再線維化し、さらに凍結乾燥し
てスポンジ状となったものを真空下１１０℃，２〜８時
間の条件で熱脱水架橋することによって得られる。この
製造法により得られたコラーゲンは３０〜８０％、より
好ましくは４０〜７０％の架橋度を有する。
【００３３】本発明において架橋度は、低い架橋である
とコラゲナーゼで容易に分解吸収され、また高い架橋を
導入すると生体内に埋植した場合コラーゲンに対する異
物反応のみが強く現れるため、３０〜８０％、より好ま
しくは４０〜７０％の架橋度がよい。このようにして得
られたコラーゲンは、３７℃生理食塩水中に浸漬しても
一部溶解するが、残りの部分は溶解せずスポンジ構造を
維持する。これにより、動物の骨欠損部や、それ以外の
軟組織に埋植しても少なくとも４週間はそこに存在し続
けることができる。
とコラゲナーゼで容易に分解吸収され、また高い架橋を
導入すると生体内に埋植した場合コラーゲンに対する異
物反応のみが強く現れるため、３０〜８０％、より好ま
しくは４０〜７０％の架橋度がよい。このようにして得
られたコラーゲンは、３７℃生理食塩水中に浸漬しても
一部溶解するが、残りの部分は溶解せずスポンジ構造を
維持する。これにより、動物の骨欠損部や、それ以外の
軟組織に埋植しても少なくとも４週間はそこに存在し続
けることができる。
【００３４】本発明において製造法は上述した方法が最
も好ましいが、架橋度を上記範囲内に調整できるもので
あれば、他の方法でも製造可能である。
も好ましいが、架橋度を上記範囲内に調整できるもので
あれば、他の方法でも製造可能である。
【００３５】架橋構造を病理組織学的に検索すると、γ
線や薬品で架橋処理したコラーゲンが一様に貪食細胞浸
潤等の異物反応を招いてしまうのに対し、本発明のコラ
ーゲンでは未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管の侵
入が観察され、異物反応は認められない。また、変性ア
テロコラーゲンを混合することにより初期の細胞侵入性
をより高めることが出来ると共に非特異的なコラーゲン
の負栄養性石灰沈着も防止できる。
線や薬品で架橋処理したコラーゲンが一様に貪食細胞浸
潤等の異物反応を招いてしまうのに対し、本発明のコラ
ーゲンでは未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管の侵
入が観察され、異物反応は認められない。また、変性ア
テロコラーゲンを混合することにより初期の細胞侵入性
をより高めることが出来ると共に非特異的なコラーゲン
の負栄養性石灰沈着も防止できる。
【００３６】本発明における架橋度とは次の方法で測定
したものをいう。コラーゲン製材を０.５mM ＨＣｌ中、
４℃，１５〜１６時間撹拌後、３０００rpm,１５分間遠
心分離を行い上清と残渣に分ける。この時の上清をＡと
する。次に残渣に８Ｍ尿素を加え、６０℃，３０分間の
加熱を行い、３０００rpm，１５分間遠心分離し、残渣
と上清に分ける。この時の上清をＢ、残渣をＣとする。
次いで、ＡとＢの溶液中の蛋白質濃度をそれぞれ測定
し、それに各々の体積を積算したものをＷA，ＷBとす
る。また、Ｃの重量をＷCとする。そして、架橋度＝
［（ＷB＋ＷC）／（ＷA＋ＷB＋ＷC）］×１００とす
る。
したものをいう。コラーゲン製材を０.５mM ＨＣｌ中、
４℃，１５〜１６時間撹拌後、３０００rpm,１５分間遠
心分離を行い上清と残渣に分ける。この時の上清をＡと
する。次に残渣に８Ｍ尿素を加え、６０℃，３０分間の
加熱を行い、３０００rpm，１５分間遠心分離し、残渣
と上清に分ける。この時の上清をＢ、残渣をＣとする。
次いで、ＡとＢの溶液中の蛋白質濃度をそれぞれ測定
し、それに各々の体積を積算したものをＷA，ＷBとす
る。また、Ｃの重量をＷCとする。そして、架橋度＝
［（ＷB＋ＷC）／（ＷA＋ＷB＋ＷC）］×１００とす
る。
【００３７】以上のように本発明のコラーゲン製材は、
一定の物性、耐コラゲナーゼ性を有し、かつ異物反応を
伴わずに細胞・組織のみを誘導する。
一定の物性、耐コラゲナーゼ性を有し、かつ異物反応を
伴わずに細胞・組織のみを誘導する。
【００３８】さらにIII型コラーゲンを含有し、またIII
型コラーゲンとI型コラーゲンとの配合比を規定するこ
とによりIII型コラーゲンの存在が知られている未熟な
骨である類骨への適合性が良好となるため、骨欠損部へ
の補綴材として用いると効果的である。
型コラーゲンとI型コラーゲンとの配合比を規定するこ
とによりIII型コラーゲンの存在が知られている未熟な
骨である類骨への適合性が良好となるため、骨欠損部へ
の補綴材として用いると効果的である。
【００３９】また、本発明のコラーゲン製材は優れた細
胞・組織の誘導性を有するため、骨欠損部への補綴材以
外にも、人工真皮、臓器パッチ、また抜歯窩や軟骨欠損
部などの各種軟組織欠損部への補綴材等にも使用でき
る。
胞・組織の誘導性を有するため、骨欠損部への補綴材以
外にも、人工真皮、臓器パッチ、また抜歯窩や軟骨欠損
部などの各種軟組織欠損部への補綴材等にも使用でき
る。
【００４０】
【実施例】以下、実施例を示し、本発明をさらに詳細に
説明する。
説明する。
【００４１】（実施例）I型コラーゲンとIII型コラーゲンの分離 牛真皮由来の粗製アテロコラーゲン粉末（高研株式会社
製）を３mg/mlの濃度で３mM ＨＣｌに溶解させ、０.４
５μmのミリポアフィルターを通じて不溶成分を除去し
た。この濾液に１/９量の０.５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７.５）と１０％ ＮａＣｌを加え、終濃度が１.
５Ｍ ＮａＣｌ−０.０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.
５）となるように調製した。１０℃で一晩撹拌した後、
１０,０００×ｇで３０分遠心分離して得られた上清をI
型コラーゲン画分とした。
製）を３mg/mlの濃度で３mM ＨＣｌに溶解させ、０.４
５μmのミリポアフィルターを通じて不溶成分を除去し
た。この濾液に１/９量の０.５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７.５）と１０％ ＮａＣｌを加え、終濃度が１.
５Ｍ ＮａＣｌ−０.０５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.
５）となるように調製した。１０℃で一晩撹拌した後、
１０,０００×ｇで３０分遠心分離して得られた上清をI
型コラーゲン画分とした。
【００４２】沈渣はIII型コラーゲンを含み、この沈澱
を２Ｍ尿素を含む０.２Ｍ ＮａＣｌ−０.０５Ｍ Ｔｒｉ
ｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.５）処理した後、１０,０００×ｇ
で３０分遠心分離した。さらにこの沈澱を０.８Ｍ Ｎａ
Ｃｌ（ｐＨ３）で洗浄した後、３mM ＨＣｌに溶解させ
ＤＥＡＥセルロースクロマトグラフィーとＣＭセルロー
スクロマトグラフィーで精製して得られたIII型コラー
ゲンは８５.９％であった。
を２Ｍ尿素を含む０.２Ｍ ＮａＣｌ−０.０５Ｍ Ｔｒｉ
ｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.５）処理した後、１０,０００×ｇ
で３０分遠心分離した。さらにこの沈澱を０.８Ｍ Ｎａ
Ｃｌ（ｐＨ３）で洗浄した後、３mM ＨＣｌに溶解させ
ＤＥＡＥセルロースクロマトグラフィーとＣＭセルロー
スクロマトグラフィーで精製して得られたIII型コラー
ゲンは８５.９％であった。
【００４３】一方、I型コラーゲン画分は１Ｎ ＨＣｌを
加えて酸ｐＨ２〜４に調製してコラーゲンを沈澱させ
た。３,０００×ｇで２０分間遠心分離して上清を廃棄
した後、０.５Ｍ酢酸を加えてコラーゲンを溶解させ、
大量の０.０５Ｍ酢酸に対して透析したものを凍結乾燥
し、精製I型コラーゲンを得た。精製して得られたI型コ
ラーゲンは９４.６％であった。
加えて酸ｐＨ２〜４に調製してコラーゲンを沈澱させ
た。３,０００×ｇで２０分間遠心分離して上清を廃棄
した後、０.５Ｍ酢酸を加えてコラーゲンを溶解させ、
大量の０.０５Ｍ酢酸に対して透析したものを凍結乾燥
し、精製I型コラーゲンを得た。精製して得られたI型コ
ラーゲンは９４.６％であった。
【００４４】I型モノマーとI型ポリマーコラーゲンの
分離 牛真皮由来の粗製アテロコラーゲン粉末（高研株式会
社）９０mgを低温下で３０mlの３mM ＨＣｌに撹拌溶解
した後、１.５mlの０.３Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4、４.５mlの４
Ｍ ＮａＣｌおよび９mlのＲＯ水を加えて泡立てないよ
うによく混合して４５mlの０.０１Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4およ
び０.４Ｍ ＮａＣｌを含む溶液とした。これを３２℃で
２時間インキュベートした後、３,０００rpmで３０分間
遠心分離し、上清のI型モノマーコラーゲン画分は３７
℃で、さらに２時間インキュベートした後、３,０００r
pmで３０分間遠心分離して沈澱とした。
分離 牛真皮由来の粗製アテロコラーゲン粉末（高研株式会
社）９０mgを低温下で３０mlの３mM ＨＣｌに撹拌溶解
した後、１.５mlの０.３Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4、４.５mlの４
Ｍ ＮａＣｌおよび９mlのＲＯ水を加えて泡立てないよ
うによく混合して４５mlの０.０１Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4およ
び０.４Ｍ ＮａＣｌを含む溶液とした。これを３２℃で
２時間インキュベートした後、３,０００rpmで３０分間
遠心分離し、上清のI型モノマーコラーゲン画分は３７
℃で、さらに２時間インキュベートした後、３,０００r
pmで３０分間遠心分離して沈澱とした。
【００４５】一方、I型ポリマーおよびIII型コラーゲン
を含む沈澱は水洗した後、３０mlの３mM ＨＣｌに再溶
解し、再び０.０１Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4および０.４Ｍ Ｎａ
Ｃｌを含む溶液とした。この溶液を今度は３０℃で２時
間インキュベートした後、３,０００rpmで３０分間遠心
分離し、上清をI型ポリマーコラーゲン画分、沈澱をIII
型コラーゲン画分とした。I型ポリマーコラーゲン画分
は３７℃でさらに２時間インキュベートした後、３,０
００rpmで３０分間遠心分離して沈澱とした。これらI型
モノマー、I型ポリマーおよびIII型コラーゲンの含量
は、それぞれ９７.４％，９１.８％，６５.２％であっ
た。
を含む沈澱は水洗した後、３０mlの３mM ＨＣｌに再溶
解し、再び０.０１Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4および０.４Ｍ Ｎａ
Ｃｌを含む溶液とした。この溶液を今度は３０℃で２時
間インキュベートした後、３,０００rpmで３０分間遠心
分離し、上清をI型ポリマーコラーゲン画分、沈澱をIII
型コラーゲン画分とした。I型ポリマーコラーゲン画分
は３７℃でさらに２時間インキュベートした後、３,０
００rpmで３０分間遠心分離して沈澱とした。これらI型
モノマー、I型ポリマーおよびIII型コラーゲンの含量
は、それぞれ９７.４％，９１.８％，６５.２％であっ
た。
【００４６】III型含量１５％コラーゲン製材の作製 上記で得られたI型モノマー画分に上記で得られたI
II型コラーゲン画分を混合し、I型：III型比が８５：１
５のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲン濃度が３mg/m
lに成るように調整した。これに４℃条件でリン酸緩衝
液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬して１mg/mlの再
線維化アテロコラーゲン（III型１５％ＦＡＣ）を得
る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は８５：１
５）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放置すると
ヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラーゲン（Ｈ
ＡＣ）（I型：III型比は８５：１５）が得られる。
II型コラーゲン画分を混合し、I型：III型比が８５：１
５のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲン濃度が３mg/m
lに成るように調整した。これに４℃条件でリン酸緩衝
液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬して１mg/mlの再
線維化アテロコラーゲン（III型１５％ＦＡＣ）を得
る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は８５：１
５）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放置すると
ヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラーゲン（Ｈ
ＡＣ）（I型：III型比は８５：１５）が得られる。
【００４７】III型１５％ＦＡＣとＨＡＣをコラーゲン
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型１５％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型１５％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量１５％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型１５％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型１５％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量１５％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
【００４８】（比較例１）III型含量３％コラーゲン製
材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が９７：３のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲン
濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条件
でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬して
１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型３％ＦＡ
Ｃ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は
９７：３）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放置
するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラーゲ
ン（ＨＡＣ）（I型：III型比は９７：３）が得られる。
材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が９７：３のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲン
濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条件
でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬して
１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型３％ＦＡ
Ｃ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は
９７：３）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放置
するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラーゲ
ン（ＨＡＣ）（I型：III型比は９７：３）が得られる。
【００４９】III型３％ＦＡＣとＨＡＣをコラーゲン量
の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製バ
ットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−４
０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとIII
型３％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII型
３％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真空条
件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含量３
％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て無菌雰
囲気下で行った。
の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製バ
ットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−４
０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとIII
型３％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII型
３％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真空条
件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含量３
％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て無菌雰
囲気下で行った。
【００５０】（比較例２）III型含量１０％コラーゲン
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が９０：１０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬し
て１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型１０％Ｆ
ＡＣ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比
は９０：１０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後
放置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラ
ーゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は９０：１０）が得ら
れる。
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が９０：１０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬し
て１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型１０％Ｆ
ＡＣ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比
は９０：１０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後
放置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラ
ーゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は９０：１０）が得ら
れる。
【００５１】III型１０％ＦＡＣとＨＡＣをコラーゲン
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型１０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型１０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量１０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型１０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型１０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量１０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
【００５２】（比較例３）III型含量２０％コラーゲン
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が８０：２０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬し
て１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型３％ＦＡ
Ｃ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は
８０：２０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放
置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラー
ゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は８０：２０）が得られ
る。
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が８０：２０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬し
て１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型３％ＦＡ
Ｃ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は
８０：２０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放
置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラー
ゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は８０：２０）が得られ
る。
【００５３】III型２０％ＦＡＣとＨＡＣをコラーゲン
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型２０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型２０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量２０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型２０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型２０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量２０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
【００５４】（比較例４）III型含量３０％コラーゲン
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が７０：３０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬し
て１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型３０％Ｆ
ＡＣ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比
は７０：３０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後
放置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラ
ーゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は７０：３０）が得ら
れる。
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が７０：３０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃の恒温槽に１日浸漬し
て１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型３０％Ｆ
ＡＣ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比
は７０：３０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後
放置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラ
ーゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は７０：３０）が得ら
れる。
【００５５】III型３０％ＦＡＣとＨＡＣをコラーゲン
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型３０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型３０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量３０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型３０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型３０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量３０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
【００５６】（比較例５）III型含量６０％コラーゲン
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が４０：６０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃恒温槽に１日浸漬して
１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型６０％ＦＡ
Ｃ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は
４０：６０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放
置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラー
ゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は４０：６０）が得られ
る。
製材の作製 実施例１−で得られたI型モノマー画分に実施例１−
で得られたIII型コラーゲン画分を混合し、I型：III
型比が４０：６０のコラーゲン溶液を得て、総コラーゲ
ン濃度が３mg/mlに成るように調整した。これに４℃条
件でリン酸緩衝液を加え、３７℃恒温槽に１日浸漬して
１mg/mlの再線維化アテロコラーゲン（III型６０％ＦＡ
Ｃ）を得る。一方、アテロコラーゲン（I型：III型比は
４０：６０）溶液を６０℃，３０分の条件で熱処理後放
置するとヘリックス含量が４０％の熱変性アテロコラー
ゲン（ＨＡＣ）（I型：III型比は４０：６０）が得られ
る。
【００５７】III型６０％ＦＡＣとＨＡＣをコラーゲン
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型６０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型６０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量６０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
量の比が９：１となるように混合、撹拌しステンレス製
バットに流し入れ、−３０℃にまで急速凍結した後、−
４０℃/０.１torr未満の真空条件下で凍結乾燥するとII
I型６０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジが得られる。このIII
型６０％ＦＡＣ−ＨＡＣスポンジを５０ｍtorr未満の真
空条件下で１１０℃，３時間熱脱水架橋して、III型含
量６０％コラーゲン製材を得た。なお以上の操作は全て
無菌雰囲気下で行った。
【００５８】（試験例）実施例で作製した本発明に係わ
るコラーゲン製材を約７００ｇのSprague-Dawlay(SD)系
雄性ラットの頭蓋全層骨欠損部に埋入し、骨の再構成を
評価した。
るコラーゲン製材を約７００ｇのSprague-Dawlay(SD)系
雄性ラットの頭蓋全層骨欠損部に埋入し、骨の再構成を
評価した。
【００５９】まず、ラットをペントバルビタールを３３
mg/kg B.W.腹腔内投与して麻酔した後、腹位に固定し
た。開頭し結合組織、骨膜を剥離し、骨面を露出した。
頭蓋骨に約６×６mmの切れ込みを入れ頭蓋骨を摘除し、
骨全層欠損創を作製した。
mg/kg B.W.腹腔内投与して麻酔した後、腹位に固定し
た。開頭し結合組織、骨膜を剥離し、骨面を露出した。
頭蓋骨に約６×６mmの切れ込みを入れ頭蓋骨を摘除し、
骨全層欠損創を作製した。
【００６０】コラーゲン製材に、実施例で作製したもの
と、他に対照として比較例１，２，３，４，５で作製し
たものを用いて骨全層欠損創に埋植した。また、骨全層
欠損創に未埋植のものも同時に行った。埋植後、４週間
後に剖検に供し、頭蓋骨を摘出し、ホルマリン固定し
た。２〜３mm位の厚みに切り出した後、蟻酸−ホルマリ
ン水溶液にて脱灰を行った。脱灰完了後充分水洗し、試
料および周辺骨組織を病理組織学的に検索した。組織学
的結果を以下に述べる。
と、他に対照として比較例１，２，３，４，５で作製し
たものを用いて骨全層欠損創に埋植した。また、骨全層
欠損創に未埋植のものも同時に行った。埋植後、４週間
後に剖検に供し、頭蓋骨を摘出し、ホルマリン固定し
た。２〜３mm位の厚みに切り出した後、蟻酸−ホルマリ
ン水溶液にて脱灰を行った。脱灰完了後充分水洗し、試
料および周辺骨組織を病理組織学的に検索した。組織学
的結果を以下に述べる。
【００６１】実施例：コラーゲン製材が疑似真皮様の形
態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管の
侵入が観察され、また異物反応は認められなかった。さ
らに疑似真皮様組織の一部が軟骨化しており、骨の再生
は良好に認められた。
態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管の
侵入が観察され、また異物反応は認められなかった。さ
らに疑似真皮様組織の一部が軟骨化しており、骨の再生
は良好に認められた。
【００６２】比較例１：コラーゲン製材が疑似真皮様の
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はわずかに認められた。
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はわずかに認められた。
【００６３】比較例２：コラーゲン製材が疑似真皮様の
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はやや良好に認められた。
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はやや良好に認められた。
【００６４】比較例３：コラーゲン製材が疑似真皮様の
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はやや良好に認められた。
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はやや良好に認められた。
【００６５】比較例４：コラーゲン製材が疑似真皮様の
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はやや良好に認められた。
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はやや良好に認められた。
【００６６】比較例５：コラーゲン製材が疑似真皮様の
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はわずかに認められた。
形態を形成し、未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管
の侵入が観察されたが、異物反応が若干認められた。ま
た、実施例の様な骨の再生はわずかに認められた。
【００６７】未充填：欠損部に肉芽を形成し、未分化間
葉系細胞や骨芽細胞、血管の侵入が観察されたが、組織
球等による異物反応も認められた。また、骨の再生は殆
ど認められなかった。
葉系細胞や骨芽細胞、血管の侵入が観察されたが、組織
球等による異物反応も認められた。また、骨の再生は殆
ど認められなかった。
【００６８】また、骨欠損部への再生された骨面積を画
像解析装置 ＬＵＺＥＸ Ｄ ＱＪ８０７５,１（ニレコ
［NIRRECO Co.］）にて測定し、各コラーゲン製材の骨
再生能を計った。
像解析装置 ＬＵＺＥＸ Ｄ ＱＪ８０７５,１（ニレコ
［NIRRECO Co.］）にて測定し、各コラーゲン製材の骨
再生能を計った。
【００６９】結果は、未充填では欠損部に肉芽が形成さ
れていた。骨欠損創（１７.４０±１.４０cm2）へ埋植
した箇所の骨再生は、実施例では９.０２±０.８７cm2
であったのに対し、比較例１では３.４４±１.７７c
m2，比較例２では４.５０±０.７６cm2，比較例３では
５.２１±０.８２cm2，比較例４では４.６２±１.３８c
m2，比較例５では２.９６±０.４５cm2であった。ま
た、未充填では、０.８６±０.５１cm2であり、実施例
の骨再生は著明に認められた。
れていた。骨欠損創（１７.４０±１.４０cm2）へ埋植
した箇所の骨再生は、実施例では９.０２±０.８７cm2
であったのに対し、比較例１では３.４４±１.７７c
m2，比較例２では４.５０±０.７６cm2，比較例３では
５.２１±０.８２cm2，比較例４では４.６２±１.３８c
m2，比較例５では２.９６±０.４５cm2であった。ま
た、未充填では、０.８６±０.５１cm2であり、実施例
の骨再生は著明に認められた。
【００７０】
【発明の効果】以上詳述したように本発明は、I型：III
型コラーゲンの比が、９０：１０〜７０：３０、より望
ましくは８５：１５から成る至適配合比を有したコラー
ゲン製材である。
型コラーゲンの比が、９０：１０〜７０：３０、より望
ましくは８５：１５から成る至適配合比を有したコラー
ゲン製材である。
【００７１】本発明のコラーゲン製材は好ましくは、異
物反応を招かず、物理的強度と耐コラゲナーゼ性を与え
る至適な条件で架橋した再線維化アテロコラーゲンであ
り、骨欠損部に埋植した際に一定期間必要とされる物理
的強度とコラゲナーゼ抵抗性を有すると共に、骨修復を
導く未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管の侵入を招
き骨再生を早期に達成することが出来る。
物反応を招かず、物理的強度と耐コラゲナーゼ性を与え
る至適な条件で架橋した再線維化アテロコラーゲンであ
り、骨欠損部に埋植した際に一定期間必要とされる物理
的強度とコラゲナーゼ抵抗性を有すると共に、骨修復を
導く未分化間葉系細胞や骨芽細胞、毛細血管の侵入を招
き骨再生を早期に達成することが出来る。
【００７２】従って本発明のコラーゲン製材は骨欠損部
への補綴材に有効に使用できる。
への補綴材に有効に使用できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大澤 孝明 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内
Claims (9)
- 【請求項１】I型コラーゲン：III型コラーゲンの比が９
０：１０〜７０：３０であるコラーゲン製材。 - 【請求項２】I型コラーゲン：III型コラーゲンの比が９
０：１０〜７０：３０である再線維化アテロコラーゲン
からなるコラーゲン製材。 - 【請求項３】スポンジ状を成す再線維化アテロコラーゲ
ンを架橋処理することにより得られ、架橋度が３０〜８
０％であり、前記再線維化アテロコラーゲンのI型コラ
ーゲン：III型コラーゲンの比が９０：１０〜７０：３
０である請求項２に記載のコラーゲン製材。 - 【請求項４】前記スポンジ状が凍結乾燥により形成され
てなる請求項３に記載のコラーゲン製材。 - 【請求項５】前記架橋処理が、熱脱水架橋処理であるこ
とを特徴とする請求項３に記載のコラーゲン製材。 - 【請求項６】前記熱脱水架橋が真空下，１１０℃，２〜
８時間で行われることを特徴とする請求項３及び５に記
載のコラーゲン製材。 - 【請求項７】前記熱脱水架橋処理による架橋度が３０〜
８０％である請求項３，５及び６に記載のコラーゲン製
材。 - 【請求項８】再線維化アテロコラーゲンに、ヘリックス
含量が０〜８０％である変性コラーゲンを１０〜５０％
混合したことを特徴とする請求項２及び３に記載のコラ
ーゲン製材。 - 【請求項９】請求項１乃至８に記載のコラーゲン製材か
らなる骨欠損部補綴材。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07560494A JP3420634B2 (ja) | 1994-04-14 | 1994-04-14 | コラーゲン製材および骨欠損部補綴材 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07560494A JP3420634B2 (ja) | 1994-04-14 | 1994-04-14 | コラーゲン製材および骨欠損部補綴材 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07275341A true JPH07275341A (ja) | 1995-10-24 |
| JP3420634B2 JP3420634B2 (ja) | 2003-06-30 |
Family
ID=13580986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07560494A Expired - Fee Related JP3420634B2 (ja) | 1994-04-14 | 1994-04-14 | コラーゲン製材および骨欠損部補綴材 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3420634B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100487693B1 (ko) * | 2001-11-27 | 2005-05-06 | (주)리젠메드 | 골아세포의 부착을 촉진하는 자연골 대체용 인공골 구조재료 |
| WO2005121251A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-22 | Zakrytoe Aktsionernoe Obshchestvo 'ostashkovsky Kozhevenny Zavod' | Sheet porous collagen-containing material and method for the production thereof |
| JP2007500043A (ja) * | 2003-07-25 | 2007-01-11 | ウォーソー・オーソペディック・インコーポレーテッド | コラーゲン及び脱灰骨基質を含んでなる架橋された組成物、その作製方法、及びその使用方法 |
| JP2008519614A (ja) * | 2004-11-10 | 2008-06-12 | ファイブローゲン、インコーポレーテッド | 移植可能なコラーゲン組成物 |
| CN116510065A (zh) * | 2022-01-28 | 2023-08-01 | 江苏京森生物医药新材料科技有限公司 | 重组人源化iii型胶原蛋白止血海绵及其应用 |
| CN118743786A (zh) * | 2024-05-30 | 2024-10-08 | 中国人民解放军空军军医大学 | 可3d打印的胶原-磷酸钙复合材料及其制备方法和应用 |
-
1994
- 1994-04-14 JP JP07560494A patent/JP3420634B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100487693B1 (ko) * | 2001-11-27 | 2005-05-06 | (주)리젠메드 | 골아세포의 부착을 촉진하는 자연골 대체용 인공골 구조재료 |
| JP2007500043A (ja) * | 2003-07-25 | 2007-01-11 | ウォーソー・オーソペディック・インコーポレーテッド | コラーゲン及び脱灰骨基質を含んでなる架橋された組成物、その作製方法、及びその使用方法 |
| WO2005121251A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-22 | Zakrytoe Aktsionernoe Obshchestvo 'ostashkovsky Kozhevenny Zavod' | Sheet porous collagen-containing material and method for the production thereof |
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| CN116510065A (zh) * | 2022-01-28 | 2023-08-01 | 江苏京森生物医药新材料科技有限公司 | 重组人源化iii型胶原蛋白止血海绵及其应用 |
| CN118743786A (zh) * | 2024-05-30 | 2024-10-08 | 中国人民解放军空军军医大学 | 可3d打印的胶原-磷酸钙复合材料及其制备方法和应用 |
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|---|---|
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