JPH07304677A

JPH07304677A - 血圧降下剤

Info

Publication number: JPH07304677A
Application number: JP6121762A
Authority: JP
Inventors: Takashi Shimada; 貴志嶋田; Yasuhiro Kadowaki; 康弘門脇; Tetsuo Yamamoto; 哲郎山本
Original assignee: NICHINICHI SEIYAKU KK
Current assignee: NICHINICHI SEIYAKU KK
Priority date: 1994-05-11
Filing date: 1994-05-11
Publication date: 1995-11-21
Anticipated expiration: 2014-05-10
Also published as: JP2889491B2

Abstract

(57)【要約】【構成】エンテロコッカス・フェカリス、動物臓器等
から得られたＤＮＡ又はその処理物を有効成分とする血
圧降下剤【効果】本態性高血圧症の血圧降下に有効であり、医
薬品及び食品添加物として用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、細胞より抽出された
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を有効成分として含有する
血圧降下剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、高血圧症の予防もしくは治療のた
めに様々な種類の血圧降下剤（降圧剤）が使用されてい
る。現在臨床で使用されている降圧剤は、降圧利尿剤、
β遮断剤、交感神経抑制剤、血管拡張剤、カルシウム拮
抗剤等多種類存在するが、それぞれの薬剤には多種多様
な副作用が存在する。本態性高血圧症の治療において
は、高脂血症、電解質異常による腎障害、性機能障害、
神経障害等、薬剤の長期投与の副作用による二次疾患が
問題となっている。又、原因疾患があることで起こる二
次性高血圧症の治療においては更に上記薬剤投与による
副作用が重篤である。すなわち、二次性高血圧症は、原
因基礎疾患が改善されなければ高血圧症の改善は見られ
ず、副作用のある降圧剤の使用は困難である。

【０００３】血圧降下剤は長期にわたって投与される薬
剤である。そのため、副作用がなく、且つ薬理作用の強
力な血圧降下剤の開発が求められている。

【０００４】最近副作用のない降圧剤として微生物由来
のものが注目されている。微生物由来の血圧降下剤とし
ては、本発明者らによるエンテロコッカス・フェカリス
の菌体又はその処理物（特開平５−２０１８７１号）、
クロレラ藻体から分離された分子量１万以上の糖蛋白質
（特公昭６０−４５６０３号）、乳酸桿菌の高分子画分
中の多糖類(M.Furushiro et al., Agric. Biol. Chem.,
54, 2193-2198(1990))等が知られている。

【０００５】

【発明が解決しようとしている課題】副作用の少ない降
圧剤としての従来の微生物細胞の高分子画分は、多種多
様の構成成分を含むので品質を一定にすることが難し
く、臨床的使用に際して問題が生じやすい。本発明は、
血圧降下作用を有する構成成分を微生物から分画するこ
とにより、均質な降圧剤を得、更にこれを処理すること
によって、よりすぐれた降圧剤を提供するものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らはこの課題を
解決するため、微生物細胞から抽出した高分子画分を分
子量分画やカラム吸着法など公知の分画法を使用して各
種構成成分に分画した。それらの成分をヒトの本態性高
血圧症のモデル動物として繁用されている高血圧自然発
症ラット（以下ＳＨＲという）に適用したところ、ＤＮ
Ａ画分に顕著に血圧を下げる作用があることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。

【０００７】すなわち、本発明が提供する血圧降下剤
は、細胞内のＤＮＡ画分を有効成分とするものである。

【０００８】この画分の抽出法としては、細胞を破壊
し、有機溶媒で除タンパク後、遠心分離法もしくは巻き
取り法で該当画分を採取する方法が主であるが、ＤＮＡ
を分画する操作であればどのような方法を使っても差し
支えない。

【０００９】実施例に示すとおり、ＤＮＡを含有する画
分は、ＳＨＲを用いた実験において顕著な血圧降下作用
を示し、更にその降下作用は持続性を有することが確認
された。また、実施例に示すように、微生物由来のＤＮ
Ａだけでなく、動物細胞由来のＤＮＡであっても同様に
血圧降下作用が見られることにより、種特有のＤＮＡの
構造に関係なく血圧降下作用がある。ＤＮＡを含む画分
は腸内常在微生物又は食用可能な物質から抽出している
ため、毒性はほとんどなく、ＳＨＲに対して経口及び静
脈内に投与してもなんら異常は見られなかった。また、
自然物からの精製物でも、合成物でも毒性はほとんどな
い。

【００１０】核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）を多量に含む食
物の大量摂取は、高尿酸血症の原因の一つと考えられて
いる。しかし、最近の研究によると、食品由来核酸成分
が体内に入ると、体内合成にフィードバック機構が働
き、体内の核酸量は一定に保たれることが証明されつつ
ある。したがって、遺伝性の痛風患者あるいは染色体異
常によるプリン体代謝異常によって起こる高尿酸血症患
者は別として、本発明剤使用による副作用は生じない。

【００１１】本発明のＤＮＡを含有する画分は、水溶性
であるため、容易に任意の剤形とすることができる。ま
た、投与方法も経口投与（舌下投与も含む）と、非経口
投与（静脈内注射、点滴等）のいずれもが可能である。
経口投与のための錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤など
にする場合は、製剤化に当たり、一般に使用されている
結合剤、抱含剤、賦形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤等を
必要に応じて用いることができる。又、経口投与用液体
製剤の場合も、任意の補助成分を用いて、内用水液、振
とう合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤等の形態とする
ことができる。

【００１２】使用量は症状年齢等により異なるが、有効
成分として１日０．００１〜０．１ｇ／ｋｇ体重を通常
成人に対して１日１回又は数回に分けて投与することが
できる。

【００１３】

【実施例】以下実施例を示すが、本発明はこれらの実施
例の記載によってなんら制限されるものではない。

【００１４】実施例１．（エンテロコッカスの培養）エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecali
s)ＮＦ−１０１１（微工研菌寄第１２５６４号）を以下
に示す組成のロゴサ液体培地に接種し、（菌数：１０⁶
個／ｍｌ）、３７℃で１０〜１６時間培養し、生菌数約
１０⁹個／ｍｌの培養液を得た。得られた培養液を１
２，０００×ｇで２０分間遠心分離して集菌し、蒸留水
で２回洗浄して菌体を得た。

【００１５】ロゴサ液体培地の組成を示す。トリプチケース１０ｇ酵母エキス５ｇトリプトース３ｇリン酸一カリウム３ｇリン酸二カリウム３ｇクエン酸三アンモニウム２ｇツイーン８０（界面活性剤）１ｇグルコース２０ｇシステイン塩酸塩０．２ｇ塩類溶液（１のとおり）５ｍｌ蒸留水１０００ｍｌ（ｐＨ７．０に調整、１２１℃で１５分間加熱滅菌）（１）塩類溶液：ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ１１．５ｇＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ０．６８ｇＭｎＳＯ₄・２Ｈ₂Ｏ２．４ｇ蒸留水１００ｍｌ

【００１６】実施例２．（生菌体よりのＤＮＡ抽出）実施例１で得られた菌体８０ｇをｐＨ７に調整した０．
５Ｍ塩化カリウム、４０ｍＭ酢酸アンモニウムおよび１
ｍＭ酢酸マグネシウム混合溶液１Ｌに懸濁し、リゾチー
ムを終濃度１，３３０μｇ／ｍｌになるよう加え、３７
℃で２時間保持した後、生じたプロトプラスト細胞を
４，７５０×ｇで２０分間遠心分離して回収した。

【００１７】プロトプラスト細胞に５０ｍＭＴｒｉｓ
・ＨＣｌ溶液（ｐＨ８．５）８００ｍｌ、０．５ＭＥ
ＤＴＡ（ｐＨ８）８０ｍｌ及びＳＬＳ（サルコシンナト
リウム）（Fluka社製）８０ｍｌを加えて溶菌させ、こ
れを４℃で一晩放置後、等量のフェノール／クロロホル
ム（１：１（ｖ／ｖ））混液と混和し、１０，０００×
ｇで２０分間遠心分離により水層と有機溶媒層に分離し
た。回収した水層を等量のフェノール／クロロホルム
（１：１（ｖ／ｖ））混液と混和し、分離させる操作を
２回繰り返し、核酸画分を抽出した。得られた水層に等
量のクロロホルムを混和し、不純物を除去する操作を２
回繰り返した。得られた水層に２倍量の１００％冷エタ
ノールを加え、染色体ＤＮＡを析出させた。

【００１８】ガラス棒で巻きとって回収した析出ＤＮＡ
に１００％エタノールを加え、洗浄した後軽く乾燥し
た。次に、１００ｍｌの水に溶解し、ＲＮａｓｅＡ
（ベーリンガー・マンハイム社製）を終濃度１００μｇ
／ｍｌになるように添加して、３７℃で１時間反応させ
て、混在するＲＮＡを除いた。除タンパクのためにフェ
ノール処理とクロロホルム処理を行い、得られた水層に
４００ｍｌの水を加え、さらに全体の２倍量の１００％
冷エタノールを加え、再析出したＤＮＡを巻き取り回収
した。得られたＤＮＡを水５００ｍｌに溶解させた後、
５０ｍｌの３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）及び２倍
量の１００％冷エタノールを加え、析出ＤＮＡを巻き取
った。この操作業を２回繰り返し不純物を除去した。得
られたＤＮＡに１００％エタノールを加え、洗浄した
後、凍結乾燥した。

【００１９】実施例３．（抽出物質の構成成分含有量の
測定）実施例２で得られたＤＮＡ画分の核酸量を測定した。核
酸は分光光度計（日立製作所社製Ｕ−２０００型）で
波長２６０ｎｍにおいて１ＯＤ₂₆₀＝２０μｇ／ｍｌ
ＤＮＡに換算して計算した。該画分の核酸含有量は１ｍ
ｌ当たり０．８ｍｇであった。

【００２０】実施例２で得られたＤＮＡ画分及び酵素処
理（ＲＮａｓｅＡ、ＤＮａｓｅ I（宝酒造社製）に
て消化）を行った実施例２のＤＮＡ画分について、１％
アガロースゲル電気泳動を行った。その結果を図１に示
す。ＤＮＡ画分をＤＮａｓｅ Iで処理したものにはＤ
ＮＡ画分と同位置に泳動バンドが現れなかった。

【００２１】実施例２のＤＮＡ画分２０ｍｇをアンプル
に取り、１Ｎ−Ｈ₂ＳＯ₄を２ｍｌ加え、減圧下で封管
し、１００℃で１８時間加水分解を行った。その後開封
しＢａＣＯ₃にて中和し、遠心でＢａＳＯ₄を除去した。
この処理物１０μｌを薄層(Whatman silicagel K5)にス
ポットし、酢酸エチル：イソプロピルアルコール：水＝
６５：２２：１１（ｖ／ｖ／ｖ）の展開溶媒で薄層クロ
マトグラフィーを行った。その後、５０％硫酸噴霧後１
００℃、１０分間加熱して移動画分を検出した。結果を
図２に示す。

【００２２】実施例４．（エンテロコッカス生菌からの
ＤＮＡ画分の経口投与による血圧低下作用）日本チャールズリバー社より購入した雄性ＳＨＲ（１５
週齢）を各群の平均体重が一定となるように１群８匹ず
つに分けた。実施例２で得られたＤＮＡ画分を生理的食
塩水に溶解し、６５ｍｇ／ｋｇ体重を、胃ゾンデにて経
口投与した。対照群には生理的食塩水を投与した。３７
℃で１２分間保温したラットの尾動脈収縮期血圧（ｍｍ
Ｈｇ）を投与直前、投与の４、９、２４時間後に非観血
式血圧測定装置（ＭＫ−１０００：室町機械社製）で測
定した。結果を表１に示す（測定値は平均値±ＳＤを表
す。）。

【００２３】

【表１】 ──────────────────────────────────── 投与後の時間（ｈ） ───────────────────────── ０４９２４ ──────────────────────────────────── 対照 237±12 232±7 233±11 232±9 E. faecalis由来DNA 240±10 220±9** 221±12* 233±9 ──────────────────────────────────── （* p<0.05, ** p<0.01）

【００２４】実施例５．（子牛胸腺由来ＤＮＡ画分の経
口投与による血圧低下作用）日本チャールズリバー社より購入した雄性ＳＨＲ（１５
週齢）を各群の平均体重が一定となるように１群８匹ず
つに分けた。子牛胸腺由来ＤＮＡ（シグマ社製）を生理
的食塩水に溶解し、実施例４と同様に経口投与した。尾
静脈収縮期血圧（ｍｍＨｇ）を実施例４と同様に測定し
た。対照群が２４０ｍｍＨｇ付近であるのに対し、子牛
胸腺由来ＤＮＡを投与した群は投与４時間後２２６．４
±９．１ｍｍＨｇ、９時間後２１１．６±１５．８ｍｍ
Ｈｇと投与前の値に対して有意に低下した。

【００２５】実施例６．（製剤例）（１）実施例２で得たＤＮＡ画分又はその処理物の５０
ｍｇを、精製でんぷん末５０ｍｇ及び乳糖２００ｍｇと
混合して、錠剤又は顆粒剤にする。

【００２６】（２）実施例２で得たＤＮＡ画分又はその
処理物の１００ｍｇを、大豆タンパク１００ｍｇ及び乳
糖２００ｍｇと混合して、錠剤又は顆粒剤にする。

【００２７】

【発明の効果】本発明の血圧降下剤は、副作用及び毒性
が極めて低く、経口投与でも本態性高血圧症に著しい効
果がありかつ即効性であり持続性も有する。これらの特
徴を有することにより、医薬品としての使用に限らず、
日常の食品に添加して高血圧症を予防することも可能で
ある。また、ＤＮＡであれば由来を問わないため、ＤＮ
Ａ含量の多い動物及び魚介類の臓器（精巣等）等、廃棄
されていたものの有効利用もできる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例２で得られたＤＮＡ画分及びその酵素処
理物のアガロースゲル電気泳動のパターンを示した図で
ある。

【図２】実施例２で得られたＤＮＡ画分の加水分解物の
薄層クロマトグラムを示した図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】有効成分としてデオキシリボ核酸（ＤＮ
Ａ）又はその処理物を含有する血圧降下剤
【請求項２】デオキシリボ核酸が、エンテロコッカス
・フェカリス菌体から得られたものである請求項１記載
の血圧降下剤
【請求項３】デオキシリボ核酸が、胸腺等の動物の臓
器から得られたものである請求項１記載の血圧降下剤