JPH07308184A - 耐性菌の簡易検知装置 - Google Patents
耐性菌の簡易検知装置Info
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- JPH07308184A JPH07308184A JP12574094A JP12574094A JPH07308184A JP H07308184 A JPH07308184 A JP H07308184A JP 12574094 A JP12574094 A JP 12574094A JP 12574094 A JP12574094 A JP 12574094A JP H07308184 A JPH07308184 A JP H07308184A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/34—Internal compartments or partitions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12M23/08—Flask, bottle or test tube
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 多剤耐性菌以外の細菌を抑制する抗生物質、
マンニット及びフェノールレッドを含有する培養液中で
被検細菌を培養し、培養前後の培養液の色の変化によっ
て多剤耐性菌の存在を検知する長期保存性を有する簡易
検知装置とこれを用いる多剤耐性菌の検知方法を提供す
る。 【構成】 マンニット及びフェノールレッドを含有する
培養液をガラスアンプルに封入すると供に、多剤耐性菌
以外の細菌を抑制する抗生物質をディスクチップに含
浸、凍結乾燥させ、使用時に培養液中に抗生物質を溶解
させる。
マンニット及びフェノールレッドを含有する培養液中で
被検細菌を培養し、培養前後の培養液の色の変化によっ
て多剤耐性菌の存在を検知する長期保存性を有する簡易
検知装置とこれを用いる多剤耐性菌の検知方法を提供す
る。 【構成】 マンニット及びフェノールレッドを含有する
培養液をガラスアンプルに封入すると供に、多剤耐性菌
以外の細菌を抑制する抗生物質をディスクチップに含
浸、凍結乾燥させ、使用時に培養液中に抗生物質を溶解
させる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、長期保存性にすぐれ、
操作が簡単で、携帯し易い耐性菌、特にメチシリン耐性
黄色ブドウ球菌（Methicillin−resistant Staphylococ
cus aureus；以下、MRSAと略記）などの検知装置に係わ
る。
操作が簡単で、携帯し易い耐性菌、特にメチシリン耐性
黄色ブドウ球菌（Methicillin−resistant Staphylococ
cus aureus；以下、MRSAと略記）などの検知装置に係わ
る。
【０００２】
【従来の技術】近年の医療の高度化、治療の進歩によ
り、抗菌薬、免疫抑制薬などが治療手段として広汎に使
用され、その恩恵を受けている。しかしながらその反
面、二次的現象として多くの耐性菌が産出されているこ
とも否めず、難治感染症の原因の一つとなっているMRSA
群はその代表的なものであり、医療上大きな問題となっ
ている。特に重症患者を治療する集中治療室内での感
染、老人ホームなどにおける抵抗力の弱った人への感染
は、腸炎や肺炎を惹き起こし、有効な薬物治療法がない
ため肺血症で死亡する例が増えている。
り、抗菌薬、免疫抑制薬などが治療手段として広汎に使
用され、その恩恵を受けている。しかしながらその反
面、二次的現象として多くの耐性菌が産出されているこ
とも否めず、難治感染症の原因の一つとなっているMRSA
群はその代表的なものであり、医療上大きな問題となっ
ている。特に重症患者を治療する集中治療室内での感
染、老人ホームなどにおける抵抗力の弱った人への感染
は、腸炎や肺炎を惹き起こし、有効な薬物治療法がない
ため肺血症で死亡する例が増えている。
【０００３】また、これらMRSAだけでなく、多剤耐性コ
アグラーゼ陰性ブドウ球菌（Coagulase negative Staph
ylococcus)(以下、多剤耐性CNSと略記）などが医療従事
者からも多く検知され、年々増加する傾向にある。
アグラーゼ陰性ブドウ球菌（Coagulase negative Staph
ylococcus)(以下、多剤耐性CNSと略記）などが医療従事
者からも多く検知され、年々増加する傾向にある。
【０００４】これに対し、MRSAや多剤耐性CNS感染症を
増やさないためには、感染の早期発見を行い、的確な防
止対策をとることが重要と考えられる。特に、この感染
の早期発見に当たっては、早く、簡単に、確実に、かつ
安価に、より多くの検体をスクリーニングできることが
強く望まれてきている。
増やさないためには、感染の早期発見を行い、的確な防
止対策をとることが重要と考えられる。特に、この感染
の早期発見に当たっては、早く、簡単に、確実に、かつ
安価に、より多くの検体をスクリーニングできることが
強く望まれてきている。
【０００５】従来の技術は、患者検体や医療環境から採
取した検体を耐性菌用の選択培地を用いた寒天平板培地
上で培養し、培地上に形成されたコロニーを目視観察す
ると共に、その他の検知確認手段を用いて耐性菌を確
認、検知する方法が採用されており、例えば、吉田繁ら
は「迅速かつ簡便なメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MR
SA）検知用寒天平板の開発」を臨床病理（41巻 ９号
ｐ．1037〜1042（1993)）に発表し、さらに最近では、
ポリメラーゼ連鎖反応（以下PCRと略記）を用いたMRSA
の判定方法が提案され、適用されてきている。
取した検体を耐性菌用の選択培地を用いた寒天平板培地
上で培養し、培地上に形成されたコロニーを目視観察す
ると共に、その他の検知確認手段を用いて耐性菌を確
認、検知する方法が採用されており、例えば、吉田繁ら
は「迅速かつ簡便なメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MR
SA）検知用寒天平板の開発」を臨床病理（41巻 ９号
ｐ．1037〜1042（1993)）に発表し、さらに最近では、
ポリメラーゼ連鎖反応（以下PCRと略記）を用いたMRSA
の判定方法が提案され、適用されてきている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述の
従来の方法は、いずれも操作上煩雑であること；寒天培
地上に生育したコロニーを判定するため、検知に当たり
専門技術又は熟練が必要であること；使用する生の培地
においては抗生物質の活性低下が避けられず、長期保存
ができないこと；検知費用が高いことなどの欠点を有
し、さらにPCRを用いた方法では、例えばMRSAの耐性遺
伝子mecA遺伝子を増幅することが考えられても、MRSA以
外にもmecA遺伝子を含有するブドウ球菌が存在すること
による精度の問題を有する上に、現状では大学付属病院
など一部で実施されているにすぎない。また特に菌検知
に簡便好適な装置として、特開昭62−171671号には、液
体培地をカプセルに収容し、さらに菌採取用のタンポン
と共に該カプセルを容器内に収容した装置が提案されて
いるが、添加された抗生物質は液体培地においても経時
的に活性を失い、耐性菌を選択的に検知するには信頼性
が乏しいことは否めない。
従来の方法は、いずれも操作上煩雑であること；寒天培
地上に生育したコロニーを判定するため、検知に当たり
専門技術又は熟練が必要であること；使用する生の培地
においては抗生物質の活性低下が避けられず、長期保存
ができないこと；検知費用が高いことなどの欠点を有
し、さらにPCRを用いた方法では、例えばMRSAの耐性遺
伝子mecA遺伝子を増幅することが考えられても、MRSA以
外にもmecA遺伝子を含有するブドウ球菌が存在すること
による精度の問題を有する上に、現状では大学付属病院
など一部で実施されているにすぎない。また特に菌検知
に簡便好適な装置として、特開昭62−171671号には、液
体培地をカプセルに収容し、さらに菌採取用のタンポン
と共に該カプセルを容器内に収容した装置が提案されて
いるが、添加された抗生物質は液体培地においても経時
的に活性を失い、耐性菌を選択的に検知するには信頼性
が乏しいことは否めない。
【０００７】
【課題を解決するための手段】これらの事情に鑑み、鋭
意研究の結果、長期保存性に優れた携帯し易い選択的耐
性菌検知装置を開発し、これを使用することにより、専
門技術を必要とせず、24〜48時間内に耐性菌、例えばMR
SAや多剤耐性CNSの検知を行い得ることを見い出し、本
発明を完成するに至った。
意研究の結果、長期保存性に優れた携帯し易い選択的耐
性菌検知装置を開発し、これを使用することにより、専
門技術を必要とせず、24〜48時間内に耐性菌、例えばMR
SAや多剤耐性CNSの検知を行い得ることを見い出し、本
発明を完成するに至った。
【０００８】即ち、菌を培地で培養して培地の変化を観
察することにより菌を検知する装置において、菌採取
端、抗生物質及び培地を包含してなり、使用前（すなわ
ち培養前）には少なくとも前記抗生物質と培地とが非接
触的に、菌採取に続く培養時には、外力を作用させて前
記菌採取端、抗生物質及び培地を一体的に接触させるよ
うに収容容器に配置されていることを特徴とする選択的
耐性菌検知装置を開発し、本発明に至った。
察することにより菌を検知する装置において、菌採取
端、抗生物質及び培地を包含してなり、使用前（すなわ
ち培養前）には少なくとも前記抗生物質と培地とが非接
触的に、菌採取に続く培養時には、外力を作用させて前
記菌採取端、抗生物質及び培地を一体的に接触させるよ
うに収容容器に配置されていることを特徴とする選択的
耐性菌検知装置を開発し、本発明に至った。
【０００９】ここに、菌採取端とは綿棒構造で代表され
るが、採取対象が液状を呈する場合には少なくとも部分
的にゴムやエラスティック性あるいは可撓性を有する材
料からなるパイプ状のスポイト機能を持つものや、先端
が種々の形のスパチュラ構造でもよく、要するに菌の採
取に好適な形状で無菌の収容容器に無菌状態で収容可能
であり、かつ菌採取後に培地と十分に接触し得る構造で
ある限り、あらゆる構造を採用し得る。また、菌採取端
は後述する抗生物質や培地とは使用前に接触しない状態
で収容されることが好ましいが、抗生物質とは若干の接
触があっても構わない。
るが、採取対象が液状を呈する場合には少なくとも部分
的にゴムやエラスティック性あるいは可撓性を有する材
料からなるパイプ状のスポイト機能を持つものや、先端
が種々の形のスパチュラ構造でもよく、要するに菌の採
取に好適な形状で無菌の収容容器に無菌状態で収容可能
であり、かつ菌採取後に培地と十分に接触し得る構造で
ある限り、あらゆる構造を採用し得る。また、菌採取端
は後述する抗生物質や培地とは使用前に接触しない状態
で収容されることが好ましいが、抗生物質とは若干の接
触があっても構わない。
【００１０】抗生物質は検知対象である耐性菌との関係
から種類が選定され、特に培地量との関係から適量が決
定される。抗生物質を予め培地に添加すると装置はより
コンパクトになるが、残念ながら先に述べた通り、抗生
物質の活性が経時的に低下することが多く、長期保存可
能な耐性菌の選択的検知装置にあっては、これら抗生物
質と培地とを非接触的に収容することが不可避と言え
る。収容形態としては直接容器内に粉末状で収容するこ
とも可能だが、水その他の適切な溶媒に溶解せしめ、適
量を担体（例えば濾紙等）に含浸し、凍結乾燥してディ
スクチップの形で収容するほか、収容容器内の好ましく
は培養する空間（以下培養部と呼称する）となるべき部
位にこの溶液を添加し、減圧乾燥等の方法でコ−ティン
グして収容するとか、あるいは又これら粉末や溶液を破
壊可能なアンプルやカプセルに充填して収容しても構わ
ない。収容容器内のいずれの部位に収容されてあって
も、培養前に容器を振るとか、液体培地で洗い流すとか
により培地と接触可能な状態での収容であれば、培養前
に培地と非接触状態を保つ限り如何なる収容方法を採用
しても構わない。
から種類が選定され、特に培地量との関係から適量が決
定される。抗生物質を予め培地に添加すると装置はより
コンパクトになるが、残念ながら先に述べた通り、抗生
物質の活性が経時的に低下することが多く、長期保存可
能な耐性菌の選択的検知装置にあっては、これら抗生物
質と培地とを非接触的に収容することが不可避と言え
る。収容形態としては直接容器内に粉末状で収容するこ
とも可能だが、水その他の適切な溶媒に溶解せしめ、適
量を担体（例えば濾紙等）に含浸し、凍結乾燥してディ
スクチップの形で収容するほか、収容容器内の好ましく
は培養する空間（以下培養部と呼称する）となるべき部
位にこの溶液を添加し、減圧乾燥等の方法でコ−ティン
グして収容するとか、あるいは又これら粉末や溶液を破
壊可能なアンプルやカプセルに充填して収容しても構わ
ない。収容容器内のいずれの部位に収容されてあって
も、培養前に容器を振るとか、液体培地で洗い流すとか
により培地と接触可能な状態での収容であれば、培養前
に培地と非接触状態を保つ限り如何なる収容方法を採用
しても構わない。
【００１１】培地としては検知しようとする耐性菌に対
して公知の培地あるいはその改良培地を使用できる。培
地は好ましくは液体状態であり、アンプルもしくはカプ
セルに充填、収容されることが望ましいが、これに限定
されるものではなく、例えば壊れ易い隔壁により前記抗
生物質と接触しないように収容された寒天培地でもよ
く、この場合、培養時壊れ易い隔壁を該隔壁上に載置さ
れているガラスでコ−ティングした鉄片を外部マグネッ
トを介して破壊するとか、綿棒の硬い材質で出来た棒部
分で突き破り、抗生物質と水のカプセルを破壊して溶液
として培地上に流し込むなどして採取端の菌を抗生物質
及び寒天培地と接触させる。ちなみに、寒天培地の代わ
りに乾燥培地を収容して、収容容器内に種々の形態で収
容された水で常用の寒天培地に復帰せしめることも可能
である。また培地には培養結果を正確に判定できるよう
に、pH指示薬や、菌によって分解されて分解産物が菌の
増殖を示す指標となる化学物質の添加を行っても良い
が、これらは多量に存在すると培養を阻害するものもあ
るので適量で添加されることは当然である。
して公知の培地あるいはその改良培地を使用できる。培
地は好ましくは液体状態であり、アンプルもしくはカプ
セルに充填、収容されることが望ましいが、これに限定
されるものではなく、例えば壊れ易い隔壁により前記抗
生物質と接触しないように収容された寒天培地でもよ
く、この場合、培養時壊れ易い隔壁を該隔壁上に載置さ
れているガラスでコ−ティングした鉄片を外部マグネッ
トを介して破壊するとか、綿棒の硬い材質で出来た棒部
分で突き破り、抗生物質と水のカプセルを破壊して溶液
として培地上に流し込むなどして採取端の菌を抗生物質
及び寒天培地と接触させる。ちなみに、寒天培地の代わ
りに乾燥培地を収容して、収容容器内に種々の形態で収
容された水で常用の寒天培地に復帰せしめることも可能
である。また培地には培養結果を正確に判定できるよう
に、pH指示薬や、菌によって分解されて分解産物が菌の
増殖を示す指標となる化学物質の添加を行っても良い
が、これらは多量に存在すると培養を阻害するものもあ
るので適量で添加されることは当然である。
【００１２】上述の採取端及び抗生物質に関する種々の
収容形態、並びに培地に関する種々の収容形態の選定、
組合せについては、発明の趣旨を逸脱しない限り数多く
の組合せが許容される。特に、抗生物質及び培地（特に
液体培地）の両者とも、あるいは一方を合成樹脂やガラ
ス製のアンプルやカプセルに収容しこれらを破壊するこ
とにより抗生物質及び培地を一体化させる際には、収容
容器のカプセル又はアンプルの収容部が可撓性を有して
いることは、割り具などにより外部から力を作用させて
これらカプセル又はアンプルを容易に破壊することがで
きるため好ましい。特に物理化学の実験に用いられる各
種の破壊しやすい（ブレ−カブルな）機構を有したアン
プルやカプセルは適用するに好ましい。収容容器はコン
パクトなほど好ましいが、培養に必要な空気が存在し得
る体積が確保し得ることは不可欠である。また収容容器
の形状は全体として円筒形のものが積載上好ましいが、
シャ−レ形の円盤上面に突起が出たような形状なども採
用でき、発明の趣旨を逸脱しない限りあらゆる形態が許
容され、材質も各種の培地や抗生物質に不活性な合成樹
脂、天然ゴム、合成ゴム、各種ガラス、各種金属が全体
的にあるいは部分的に選定使用し得る。
収容形態、並びに培地に関する種々の収容形態の選定、
組合せについては、発明の趣旨を逸脱しない限り数多く
の組合せが許容される。特に、抗生物質及び培地（特に
液体培地）の両者とも、あるいは一方を合成樹脂やガラ
ス製のアンプルやカプセルに収容しこれらを破壊するこ
とにより抗生物質及び培地を一体化させる際には、収容
容器のカプセル又はアンプルの収容部が可撓性を有して
いることは、割り具などにより外部から力を作用させて
これらカプセル又はアンプルを容易に破壊することがで
きるため好ましい。特に物理化学の実験に用いられる各
種の破壊しやすい（ブレ−カブルな）機構を有したアン
プルやカプセルは適用するに好ましい。収容容器はコン
パクトなほど好ましいが、培養に必要な空気が存在し得
る体積が確保し得ることは不可欠である。また収容容器
の形状は全体として円筒形のものが積載上好ましいが、
シャ−レ形の円盤上面に突起が出たような形状なども採
用でき、発明の趣旨を逸脱しない限りあらゆる形態が許
容され、材質も各種の培地や抗生物質に不活性な合成樹
脂、天然ゴム、合成ゴム、各種ガラス、各種金属が全体
的にあるいは部分的に選定使用し得る。
【００１３】更にMRSA検知を想定した本発明による具体
的装置の１例である図１をもとに詳述する。この検知装
置は、上端で開口し、下端で閉止した透明な下部チュー
ブ１と；上端で閉止し、下端が多孔板３によって閉止さ
れ、前記透明な下部チューブ１の開口上端と気密に係合
して、透明な下部チューブ１を封止するキャップを兼ね
ると共に、後述する培養液が封入されたガラスアンプル
４を前記閉止された上端と下端多孔板３との間に収容す
る可撓性合成樹脂からなる上部チューブ２と；一端が前
記多孔板３に保持され、他端が前記透明な下部チューブ
１内に伸びる菌採取用の綿棒６と；前記透明な下部チュ
ーブ１内に入れられた前記耐性菌以外の菌の生育を抑制
する後述の抗生物質を含浸した乾燥ディスクチップ５を
包含してなる。
的装置の１例である図１をもとに詳述する。この検知装
置は、上端で開口し、下端で閉止した透明な下部チュー
ブ１と；上端で閉止し、下端が多孔板３によって閉止さ
れ、前記透明な下部チューブ１の開口上端と気密に係合
して、透明な下部チューブ１を封止するキャップを兼ね
ると共に、後述する培養液が封入されたガラスアンプル
４を前記閉止された上端と下端多孔板３との間に収容す
る可撓性合成樹脂からなる上部チューブ２と；一端が前
記多孔板３に保持され、他端が前記透明な下部チューブ
１内に伸びる菌採取用の綿棒６と；前記透明な下部チュ
ーブ１内に入れられた前記耐性菌以外の菌の生育を抑制
する後述の抗生物質を含浸した乾燥ディスクチップ５を
包含してなる。
【００１４】ここに、培養液は、マンニット食塩培地、
スタフィロコッカスブイヨン等の一般的な液体培地のい
ずれでもよく、指示薬としてフェノールレッドを含有
し、培養液の初期pHは7.4で、赤色を呈している。ま
た、乾燥ディスクチップ５は、耐性をもたないグラム陽
性球菌を抑制するオキサシリン、グラム陰性桿菌を抑制
するアゾトレオナム及びポリミキシンＢの抗生物質を含
有する。乾燥ディスクチップ５は、吸着担体として合成
樹脂や天然樹脂の特に繊維の集合体であれば種類を問わ
ないが、セルロースペーパーチップが最適である。
スタフィロコッカスブイヨン等の一般的な液体培地のい
ずれでもよく、指示薬としてフェノールレッドを含有
し、培養液の初期pHは7.4で、赤色を呈している。ま
た、乾燥ディスクチップ５は、耐性をもたないグラム陽
性球菌を抑制するオキサシリン、グラム陰性桿菌を抑制
するアゾトレオナム及びポリミキシンＢの抗生物質を含
有する。乾燥ディスクチップ５は、吸着担体として合成
樹脂や天然樹脂の特に繊維の集合体であれば種類を問わ
ないが、セルロースペーパーチップが最適である。
【００１５】かくして、少なくとも抗生物質と培地とは
接触しない状態で収容されているので、長期保存が可能
な耐性菌の簡易検知装置を提供し得ることとなる。
接触しない状態で収容されているので、長期保存が可能
な耐性菌の簡易検知装置を提供し得ることとなる。
【００１６】
【作用】本発明の検知装置の使用に当たっては、予め滅
菌又は除菌されている菌採取端を収容容器から取り出
し、手早く被検体と接触させて菌を採取し、迅速に再び
収容容器内に気密に収納し、次いで容器外部から外力を
作用せしめて非接触状態を保持していた菌採取端、抗生
物質及び培地を一体的に混合接触させ、常法により一定
時間一定温度のもとに培養し、培地の濁り、コロニーの
成長、増殖した菌に由来の産生物質に基づく物理化学的
な性状の変化を「培地の変化」として検知するとか、あ
るいはまた予め培地に添加しておいた化合物の増殖した
菌による分解などに基づく培地の物理化学的な性状変化
を「培地の変化」として観測して菌の存在を判定するこ
とを意味する。もちろん、培養後に、収容容器から培地
を取り出して以上の観測をすることも可能ではあるが、
そのまま観測し得ることが好ましく、収容容器の少なく
とも培養状況を観測する部位が透明であることが好まし
い。もしも逆に透明であるために収容されている抗生物
質や培地が光によってその性状を変化させる虞がある場
合には、当該透明部に遮光のための被覆、例えば黒色の
テ−プを巻き着けておくことが好ましく、特に培地の変
化を観測する際に取り外し易いほど好適である。
菌又は除菌されている菌採取端を収容容器から取り出
し、手早く被検体と接触させて菌を採取し、迅速に再び
収容容器内に気密に収納し、次いで容器外部から外力を
作用せしめて非接触状態を保持していた菌採取端、抗生
物質及び培地を一体的に混合接触させ、常法により一定
時間一定温度のもとに培養し、培地の濁り、コロニーの
成長、増殖した菌に由来の産生物質に基づく物理化学的
な性状の変化を「培地の変化」として検知するとか、あ
るいはまた予め培地に添加しておいた化合物の増殖した
菌による分解などに基づく培地の物理化学的な性状変化
を「培地の変化」として観測して菌の存在を判定するこ
とを意味する。もちろん、培養後に、収容容器から培地
を取り出して以上の観測をすることも可能ではあるが、
そのまま観測し得ることが好ましく、収容容器の少なく
とも培養状況を観測する部位が透明であることが好まし
い。もしも逆に透明であるために収容されている抗生物
質や培地が光によってその性状を変化させる虞がある場
合には、当該透明部に遮光のための被覆、例えば黒色の
テ−プを巻き着けておくことが好ましく、特に培地の変
化を観測する際に取り外し易いほど好適である。
【００１７】培地として寒天培地を用いる場合は、寒天
培地の上部にある隔壁を薄く構成し隔壁を綿棒で突き壊
す方法に続いて、抗生物質を含むカプセル、水を含むカ
プセルを外力を作用して破壊して培地上に均一に供給す
る方式が好ましい。
培地の上部にある隔壁を薄く構成し隔壁を綿棒で突き壊
す方法に続いて、抗生物質を含むカプセル、水を含むカ
プセルを外力を作用して破壊して培地上に均一に供給す
る方式が好ましい。
【００１８】以上、外力を作用してカプセル、アンプル
あるいは隔壁を破壊することについて種々説明してきた
が、要するに、収容容器の外部から力を作用させる際、
たとえ収容容器が変形しても培養には差し支えないもの
である限り、あるいはまた培養系と外部とが遮断されて
いる限り、換言すれば、収容容器内が外気によって汚染
されることなく、菌と培地と抗生物質とが培養系を形成
できる限り如何なる力の作用も可能であり、こみや軽い
衝撃などあらゆる力の作用をも採用し得る。
あるいは隔壁を破壊することについて種々説明してきた
が、要するに、収容容器の外部から力を作用させる際、
たとえ収容容器が変形しても培養には差し支えないもの
である限り、あるいはまた培養系と外部とが遮断されて
いる限り、換言すれば、収容容器内が外気によって汚染
されることなく、菌と培地と抗生物質とが培養系を形成
できる限り如何なる力の作用も可能であり、こみや軽い
衝撃などあらゆる力の作用をも採用し得る。
【００１９】再度、図１を参照しながら、具体例をMRSA
検知方法について記述する。本発明の「検知装置を使用
する」に当たっては、上部チューブ２を下部チューブ１
からはずし、上部チューブ２を持って綿棒６の先で患者
の鼻腔粘膜、咽頭、又は被検査対象の区域の床、壁、又
は区域内にある家具等の表面を擦る。ついで、検体を採
取した上部チューブ２を元のように下部チューブ１に差
し込み、係合させて気密に封止する。上部チューブ２内
に保持してある培養液が封入されたガラスアンプル４を
外部から例えば市販の割り具を用いて割り、封入された
培養液を多孔板３を通って、綿棒６に沿って下部チュー
ブ１内に落下させ、綿棒の先が培養液内に浸るようにす
る。この際、割れたガラスは多孔板３の上に残り、培養
後の観察に支障を来すことはない。下部チューブ１内に
入った培養液は前述の抗生物質を含浸した乾燥ディスク
チップ５と接触し、乾燥ディスクチップ５に保持された
抗生物質が培養液に溶解する。ついで、下部チューブ１
に上部チュ−ブ２を係合した状態で35℃下に24〜48時間
培養する。培養後、MRSAが存在すると、これらは培養液
中のマンニットを分解するため培養液のpHが酸性とな
り、指示薬フェノ−ルレッドの色調が赤色から黄色に変
色する。従って、判定に当たっては、培養液の黄変によ
って耐性菌の存在が検知できる。
検知方法について記述する。本発明の「検知装置を使用
する」に当たっては、上部チューブ２を下部チューブ１
からはずし、上部チューブ２を持って綿棒６の先で患者
の鼻腔粘膜、咽頭、又は被検査対象の区域の床、壁、又
は区域内にある家具等の表面を擦る。ついで、検体を採
取した上部チューブ２を元のように下部チューブ１に差
し込み、係合させて気密に封止する。上部チューブ２内
に保持してある培養液が封入されたガラスアンプル４を
外部から例えば市販の割り具を用いて割り、封入された
培養液を多孔板３を通って、綿棒６に沿って下部チュー
ブ１内に落下させ、綿棒の先が培養液内に浸るようにす
る。この際、割れたガラスは多孔板３の上に残り、培養
後の観察に支障を来すことはない。下部チューブ１内に
入った培養液は前述の抗生物質を含浸した乾燥ディスク
チップ５と接触し、乾燥ディスクチップ５に保持された
抗生物質が培養液に溶解する。ついで、下部チューブ１
に上部チュ−ブ２を係合した状態で35℃下に24〜48時間
培養する。培養後、MRSAが存在すると、これらは培養液
中のマンニットを分解するため培養液のpHが酸性とな
り、指示薬フェノ−ルレッドの色調が赤色から黄色に変
色する。従って、判定に当たっては、培養液の黄変によ
って耐性菌の存在が検知できる。
【００２０】存在が検知された菌がMRSAであるか他の耐
性菌であるかについての判定に当たっては、陽性反応を
示した試料について、その培養液の一部をとり、常法ど
おりこれに４−メチルウンベリフェリルリン酸を添加
し、さらに１〜２時間培養した後、MRSAが産生するフォ
スファターゼにより生じた４−メチルウンベリフェロン
の蛍光を波長365nmで検知することにより確認し得る。
併せて、陽性反応を示した試料の他の一部を、やはり常
法どおりウサギプラズマを含有する溶液に添加し、培養
した後、MRSAが産生するコアグラーゼによって生ずるゲ
ル化反応を確認して、多剤耐性菌がMRSAであると判定で
きる。
性菌であるかについての判定に当たっては、陽性反応を
示した試料について、その培養液の一部をとり、常法ど
おりこれに４−メチルウンベリフェリルリン酸を添加
し、さらに１〜２時間培養した後、MRSAが産生するフォ
スファターゼにより生じた４−メチルウンベリフェロン
の蛍光を波長365nmで検知することにより確認し得る。
併せて、陽性反応を示した試料の他の一部を、やはり常
法どおりウサギプラズマを含有する溶液に添加し、培養
した後、MRSAが産生するコアグラーゼによって生ずるゲ
ル化反応を確認して、多剤耐性菌がMRSAであると判定で
きる。
【００２１】この場合、４−メチルウンベリフェリルリ
ン酸についても、上述の抗生物質と同様に、ディスクチ
ップに含浸、凍結乾燥し、一方ウサギプラズマについて
は、ゼラチン水溶液に溶解後、円柱状に成形し、凍結乾
燥してチップとすることにより長期保存性が確保され
る。
ン酸についても、上述の抗生物質と同様に、ディスクチ
ップに含浸、凍結乾燥し、一方ウサギプラズマについて
は、ゼラチン水溶液に溶解後、円柱状に成形し、凍結乾
燥してチップとすることにより長期保存性が確保され
る。
【００２２】以下に実施例を挙げて、本発明の具体的使
用例を記述するが、発明を限定するものではない。
用例を記述するが、発明を限定するものではない。
【００２３】
【実施例１】トリプトン 1.0（w／v）％（以下単に％で
表示）、ラクトース 0.20％、イーストエクストラクト
0.25％、Ｄ−マンニット 1.0％、塩化リチウム 0.50
％、塩化ナトリウム 0.40％、フェノールレッド 0.17％
及び精製水からなる液体培地1.5mlをガラスアンプルに
封入し、121℃、120分間で滅菌処理を行った。抗生物質
については、培養液濃度でオキサシリン（６μｇ／m
l）、アズトレオナム（５μｇ／ml）及びポリミキシン
Ｂ（10μｇ／ml）となるようにディスクチップに含浸さ
せ、凍結乾燥させた。ガラスアンプル及び乾燥ディスク
チップを収容した図１の装置を用いて下記の試験を行っ
た。
表示）、ラクトース 0.20％、イーストエクストラクト
0.25％、Ｄ−マンニット 1.0％、塩化リチウム 0.50
％、塩化ナトリウム 0.40％、フェノールレッド 0.17％
及び精製水からなる液体培地1.5mlをガラスアンプルに
封入し、121℃、120分間で滅菌処理を行った。抗生物質
については、培養液濃度でオキサシリン（６μｇ／m
l）、アズトレオナム（５μｇ／ml）及びポリミキシン
Ｂ（10μｇ／ml）となるようにディスクチップに含浸さ
せ、凍結乾燥させた。ガラスアンプル及び乾燥ディスク
チップを収容した図１の装置を用いて下記の試験を行っ
た。
【００２４】生検検体は、Ａ病院に入院するMRSA罹患患
者20名、及び医療従事者20名から採取したものである。
対照としての陽性標準検体（ｎ＝10）に関しては、検定
済みの多剤耐性標準検体１としてMRSAを及び陽性標準検
体２として多剤耐性CNSをそれぞれ104／チューブで使用
した。陰性標準検体としてはスタフィロコッカス・エピ
デルミディス（Staphylococcus epidermidis）を104 ／
チューブで使用した。各被検者の咽頭、鼻腔、手指から
綿棒にて検体を採取し、綿棒を樹脂（ポリエチレン：以
下単に樹脂と記載）製の下部チューブ内に入れ、キャッ
プを気密に係合した後、樹脂製の上部チューブ内の液体
培地封入ガラスアンプルを上部チューブの外から割り具
によって割り、液体培地を下部樹脂製チューブに流入さ
せた。培養温度35℃で24〜48時間培養後、培地変化の判
定を行った。判定は培地の色調変化を観察して行い、赤
色のままのものを陰性、黄色に変色したものを陽性と判
定した。
者20名、及び医療従事者20名から採取したものである。
対照としての陽性標準検体（ｎ＝10）に関しては、検定
済みの多剤耐性標準検体１としてMRSAを及び陽性標準検
体２として多剤耐性CNSをそれぞれ104／チューブで使用
した。陰性標準検体としてはスタフィロコッカス・エピ
デルミディス（Staphylococcus epidermidis）を104 ／
チューブで使用した。各被検者の咽頭、鼻腔、手指から
綿棒にて検体を採取し、綿棒を樹脂（ポリエチレン：以
下単に樹脂と記載）製の下部チューブ内に入れ、キャッ
プを気密に係合した後、樹脂製の上部チューブ内の液体
培地封入ガラスアンプルを上部チューブの外から割り具
によって割り、液体培地を下部樹脂製チューブに流入さ
せた。培養温度35℃で24〜48時間培養後、培地変化の判
定を行った。判定は培地の色調変化を観察して行い、赤
色のままのものを陰性、黄色に変色したものを陽性と判
定した。
【００２５】なお、培地が黄変した陽性検体につき、さ
らにフォスファターゼ及びコアグラーゼ産生の有無を４
−メチルウンベリフェロンの蛍光及びウサギプラズマの
ゲル化で検討した。
らにフォスファターゼ及びコアグラーゼ産生の有無を４
−メチルウンベリフェロンの蛍光及びウサギプラズマの
ゲル化で検討した。
【００２６】多剤耐性菌の存在に関する培地の変色によ
る試験結果を表１に、陽性検体について行ったフォスフ
ァターゼ及びコアグラーゼテストの結果を表２にそれぞ
れ示す。
る試験結果を表１に、陽性検体について行ったフォスフ
ァターゼ及びコアグラーゼテストの結果を表２にそれぞ
れ示す。
【００２７】
【表１】 試験結果 検 体 の 種 類 対象部位 MRSA罹患患者 医療従事者 (培地の色調変化) (培地の色調変化) 咽 頭 20／20 ３／20 鼻 腔 20／20 ２／20 手 指 12／20 ４／20 陽性標準検体１ 10／10 陽性標準検体２ 10／10 陰性標準検体 ０／10
【００２８】
【表２】 試験結果 検 体 の 種 類 対象部位 M R S A 罹 患 患 者 医 療 従 事 者 フォスファターセ゛試験 コアク゛ラーセ゛試験 フォスファターセ゛試験 コアク゛ラーセ゛ 試験 咽 頭 20／20 20／20 ２／20 ２／20 鼻 腔 20／20 20／20 １／20 １／20 手 指 ８／20 ８／20 ２／20 ２／20 陽性標準検体１ 10／10 10／10 陽性標準検体２ 10／10 10／10 陰性標準検体 ０／10 ０／10
【００２９】上記表１及び表２において、試験結果を以
下のように表示している。 液体培地の色調変化：培地の色調が赤色から黄色に変化
した例数／総検体数 フォスファターゼ試験：青色に蛍光を発した陽性例数／
総検体数 コアグラーゼ試験：ウサギプラズマ溶液がゲル化した陽
性例数／総検体数
下のように表示している。 液体培地の色調変化：培地の色調が赤色から黄色に変化
した例数／総検体数 フォスファターゼ試験：青色に蛍光を発した陽性例数／
総検体数 コアグラーゼ試験：ウサギプラズマ溶液がゲル化した陽
性例数／総検体数
【００３０】表１から明らかなように、検知結果はMRSA
罹患患者の咽頭、鼻腔においては全例陽性であった。手
指は60％の検知率であった。医療従事者の咽頭、鼻腔、
手指においては、それぞれ15％、10％、20％の検知率で
あった。
罹患患者の咽頭、鼻腔においては全例陽性であった。手
指は60％の検知率であった。医療従事者の咽頭、鼻腔、
手指においては、それぞれ15％、10％、20％の検知率で
あった。
【００３１】さらに液体培地の色調が赤色から黄色に変
化した陽性例に対して行ったフォスファターゼ試験及び
コアグラーゼ試験では、表２から明らかなように、MRSA
罹患患者の咽頭、鼻腔においては全例陽性であった。手
指は60％の検知率であった。医療従事者の咽頭、鼻腔、
手指においては、それぞれ10％、５％、10％の検知率で
あった。このことは、医療従事者における本発明の簡易
検知装置での陽性結果とフォスファターゼ試験あるいは
コアグラーゼ試験での陽性結果との差は、MRSA以外に、
同じ多剤耐性を有するCNSも検知されていたことを意味
する。
化した陽性例に対して行ったフォスファターゼ試験及び
コアグラーゼ試験では、表２から明らかなように、MRSA
罹患患者の咽頭、鼻腔においては全例陽性であった。手
指は60％の検知率であった。医療従事者の咽頭、鼻腔、
手指においては、それぞれ10％、５％、10％の検知率で
あった。このことは、医療従事者における本発明の簡易
検知装置での陽性結果とフォスファターゼ試験あるいは
コアグラーゼ試験での陽性結果との差は、MRSA以外に、
同じ多剤耐性を有するCNSも検知されていたことを意味
する。
【００３２】
【実施例２】実施例１で調製した本発明の簡易検知装置
を用い、従来法との保存安定性について比較検討した。
従来法では市販のMRSAスクリーニング用寒天平板培地
（フードスタンプ「ニッスイ」MSO寒天；日水製薬株式
会社）を用い、寒天平板培地を冷蔵で３ヶ月間保存した
後使用した。一方、本発明の簡易検知装置は15℃で１年
間及び40℃で２ヶ月間保存した後使用した。試験は各検
定菌毎３回行った。
を用い、従来法との保存安定性について比較検討した。
従来法では市販のMRSAスクリーニング用寒天平板培地
（フードスタンプ「ニッスイ」MSO寒天；日水製薬株式
会社）を用い、寒天平板培地を冷蔵で３ヶ月間保存した
後使用した。一方、本発明の簡易検知装置は15℃で１年
間及び40℃で２ヶ月間保存した後使用した。試験は各検
定菌毎３回行った。
【００３３】検定に当たり、グラム陽性菌としてMRSA、
CNS、スタフィロコッカス・エピデルミディス、スタフ
ィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカ
リス（Enterococus faecalis）、グラム陰性菌としてエ
シェリキア・コリ（Escherichia coli）、クレブシエラ
・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）、セラチア
・マルセッセンス（Serratia marcescens）、プロテウ
ス・ブルガリス（Proteus vulgaris）、シュードモナス
・アエルギノーザ（Pseudomonas aeruginosa）を104／
チューブで使用して試験を行った。
CNS、スタフィロコッカス・エピデルミディス、スタフ
ィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカ
リス（Enterococus faecalis）、グラム陰性菌としてエ
シェリキア・コリ（Escherichia coli）、クレブシエラ
・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）、セラチア
・マルセッセンス（Serratia marcescens）、プロテウ
ス・ブルガリス（Proteus vulgaris）、シュードモナス
・アエルギノーザ（Pseudomonas aeruginosa）を104／
チューブで使用して試験を行った。
【００３４】得られた結果を表３に示す。
【００３５】
【表３】 試験結果 検 定 菌 本発明の検知装置 市販MRSAスクリーニンク゛用寒天培地 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ MRSA ３／３ ３／３ ３／３ ３／３ CNS ３／３ ３／３ ３／３ ３／３ S．エヒ゜テ゛ルミテ゛ィス ０／３ ０／３ １／３ ３／３ S．アウレウス ０／３ ０／３ ０／３ ３／３ E．フェカリス ０／３ ０／３ １／３ ３／３ E．コリ ０／３ ０／３ ０／３ ２／３ K．ニューモニエ ０／３ ０／３ ０／３ ３／３ S．マルセッセンス ０／３ ０／３ ０／３ ３／３ P．フ゛ルカ゛リス ０／３ ０／３ ０／３ ２／３ P．アエルキ゛ノーサ゛ ０／３ ０／３ ０／３ ３／３ Ａ：15℃、１年間保存 Ｂ：40℃、２カ月間保存 Ｃ：
冷蔵下、１週間保存Ｄ：冷蔵下、３カ月保存
冷蔵下、１週間保存Ｄ：冷蔵下、３カ月保存
【００３６】以上の結果より、本発明の簡易検知装置に
おいては、15℃で１年間及び40℃で２ヶ月間の保存品の
両者供、MRSA及びCNSの全例に液体培地の色調の黄変
（陽性）が認められ、その他の菌においては総て陰性を
示した。従来法である市販の寒天培地は、冷蔵で３ヶ月
間保存したものでは、MRSA及びCNS以外の菌も同様に発
育し、正しくMRSA及びCNSを検知することが出来なかっ
た。このことは、寒天培地中に含有する抗生物質の分解
が生じ、MRSA及びCNS以外の菌の増殖抑制が弱まった結
果と考えられる。このように市販の寒天培地において
は、保存安定性に問題があった。本発明の簡易検知装置
においては、抗生物質が凍結乾燥されたディスクチップ
とガラスアンプルに封入された液体培地とが培養直前ま
で簡易検知装置内に分離され接触していないため、抗生
物質がその活性を安定に保ち、長期保存が達成し得る。
おいては、15℃で１年間及び40℃で２ヶ月間の保存品の
両者供、MRSA及びCNSの全例に液体培地の色調の黄変
（陽性）が認められ、その他の菌においては総て陰性を
示した。従来法である市販の寒天培地は、冷蔵で３ヶ月
間保存したものでは、MRSA及びCNS以外の菌も同様に発
育し、正しくMRSA及びCNSを検知することが出来なかっ
た。このことは、寒天培地中に含有する抗生物質の分解
が生じ、MRSA及びCNS以外の菌の増殖抑制が弱まった結
果と考えられる。このように市販の寒天培地において
は、保存安定性に問題があった。本発明の簡易検知装置
においては、抗生物質が凍結乾燥されたディスクチップ
とガラスアンプルに封入された液体培地とが培養直前ま
で簡易検知装置内に分離され接触していないため、抗生
物質がその活性を安定に保ち、長期保存が達成し得る。
【００３７】
【発明の効果】本発明による簡易検知装置は、菌採取
端、培地及び抗生物質を収容容器内に被接触的にかつ一
括収容されているため、長期保存が可能な耐性菌検知作
業に好適な装置を提供し、その結果として菌採取から培
養までの操作及び培養後の判定操作が非常に短時間にな
し得るものであり、熟練及び専門知識を要することな
く、確実に、多数の検体を処理できる方法を提供するも
のである。従って、多数の採取検体の耐性菌感染の早期
発見が可能となり、問題になっているMRSAなどの院内感
染防止対策の一助とすることができる。また、抗生物質
に限らず保存不安定な培地を分割収容して安定性を付与
した培養装置に応用、適用できる。
端、培地及び抗生物質を収容容器内に被接触的にかつ一
括収容されているため、長期保存が可能な耐性菌検知作
業に好適な装置を提供し、その結果として菌採取から培
養までの操作及び培養後の判定操作が非常に短時間にな
し得るものであり、熟練及び専門知識を要することな
く、確実に、多数の検体を処理できる方法を提供するも
のである。従って、多数の採取検体の耐性菌感染の早期
発見が可能となり、問題になっているMRSAなどの院内感
染防止対策の一助とすることができる。また、抗生物質
に限らず保存不安定な培地を分割収容して安定性を付与
した培養装置に応用、適用できる。
【図１】本発明による多剤耐性菌の簡易検知装置の概略
図である。
図である。
１ 下部チューブ ２ 上部チューブ ３ 多孔板 ４ ガラスアンプル ５ 乾燥ディスクチップ ６ 綿棒
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 三和 亜通志 千葉県千葉市若葉区御成台１−６−４
Claims (1)
- 【請求項１】菌を培地で培養して培地の変化を観察する
ことにより菌を検知する装置において、外力の作用によ
り互いに一体的に接触する菌採取端、抗生物質及び培地
を包含してなり、少なくとも前記抗生物質と培地とが非
接触的に収容容器に配置されていることを特徴とする選
択的耐性菌検知装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12574094A JPH07308184A (ja) | 1994-05-16 | 1994-05-16 | 耐性菌の簡易検知装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12574094A JPH07308184A (ja) | 1994-05-16 | 1994-05-16 | 耐性菌の簡易検知装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07308184A true JPH07308184A (ja) | 1995-11-28 |
Family
ID=14917624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12574094A Withdrawn JPH07308184A (ja) | 1994-05-16 | 1994-05-16 | 耐性菌の簡易検知装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07308184A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998020107A1 (en) * | 1996-11-07 | 1998-05-14 | Srl, Inc. | Bacterium detector |
| JP2002034553A (ja) * | 2000-07-24 | 2002-02-05 | Eiken Chem Co Ltd | Ｍｒｓａスクリーニング用培地 |
| US6919200B2 (en) * | 1998-11-23 | 2005-07-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Purification method and apparatus |
| JP2006223168A (ja) * | 2005-02-17 | 2006-08-31 | Nikken Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | 検査用具 |
| US7232681B2 (en) * | 2003-04-24 | 2007-06-19 | O'connell David | Personal cell sampling kit |
| JP2012105643A (ja) * | 2010-10-28 | 2012-06-07 | Eiken Chemical Co Ltd | 薬剤耐性菌検出用ディスク試験片 |
| CN109439532A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-03-08 | 武汉慧康利兹食品有限公司 | 用于香精微生物的检测装置 |
-
1994
- 1994-05-16 JP JP12574094A patent/JPH07308184A/ja not_active Withdrawn
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998020107A1 (en) * | 1996-11-07 | 1998-05-14 | Srl, Inc. | Bacterium detector |
| US6197574B1 (en) | 1996-11-07 | 2001-03-06 | Srl, Inc. | Bacterium detector |
| AU731465B2 (en) * | 1996-11-07 | 2001-03-29 | Fujirebio Inc. | Apparatus for detecting microorganism |
| US6919200B2 (en) * | 1998-11-23 | 2005-07-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Purification method and apparatus |
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| CN109439532A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-03-08 | 武汉慧康利兹食品有限公司 | 用于香精微生物的检测装置 |
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