JPH0731490A - 共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微生物 - Google Patents
共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微生物Info
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- JPH0731490A JPH0731490A JP5184142A JP18414293A JPH0731490A JP H0731490 A JPH0731490 A JP H0731490A JP 5184142 A JP5184142 A JP 5184142A JP 18414293 A JP18414293 A JP 18414293A JP H0731490 A JPH0731490 A JP H0731490A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 シュードモナス属に属し、乾燥菌体中８０〜
９５％、モノマーユニット３ＨＨｘ及び３ＨＯ、更に場
合により３ＨＤ及び３ＨＤＤからなる共重合体を産生す
る微生物を培養し、該共重合体を採取する該共重合体の
製造方法。 【効果】 医薬品、食品、衛生用品、農園芸品、包装材
料等に有用な共重合体を高収率で得ることができる。
９５％、モノマーユニット３ＨＨｘ及び３ＨＯ、更に場
合により３ＨＤ及び３ＨＤＤからなる共重合体を産生す
る微生物を培養し、該共重合体を採取する該共重合体の
製造方法。 【効果】 医薬品、食品、衛生用品、農園芸品、包装材
料等に有用な共重合体を高収率で得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬品、食品、衛生用
品、農園芸品、包装材料等広範な分野に応用可能な生分
解性の共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微
生物に関する。
品、農園芸品、包装材料等広範な分野に応用可能な生分
解性の共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微
生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】微生物の多くは、各種の共重合体を生成
することが知られている。それらの共重合体は熱可塑性
を有する、いわゆるプラスチックから、粘弾性を有する
ゴム状のものまで、多岐にわたっており、しかも、これ
らはいずれも生分解性を有するものである。
することが知られている。それらの共重合体は熱可塑性
を有する、いわゆるプラスチックから、粘弾性を有する
ゴム状のものまで、多岐にわたっており、しかも、これ
らはいずれも生分解性を有するものである。
【０００３】例えば、近年、エネルギー貯蔵物質として
注目されているポリ−３−ヒドロキシブチレート〔Ｐ
（３ＨＢ）〕については特開昭５６−１１７７９３号、
同５７−７４０８４号、同５７−１５０３９３号に、３
−ヒドロキシブチレートと３−ヒドロキシバリレートの
共重合体〔Ｐ（３ＨＢ−ｃｏ−３ＨＶ）〕については特
開昭５７−１５０３９３号、同５８−６９２２４号、同
５８−２１２７９２号、同５９−２２０１９２号、同５
９−２０５９９２号、同６１−２９３３８５号、同６３
−２６９９８９号に、３−ヒドロキシブチレートと４−
ヒドロキシブチレート〔Ｐ−（３ＨＢ−ｃｏ−４Ｈ
Ｂ）〕については特開平１−４８８２１号、同１−１５
６３２０号、同１−２２２７８８号、同１−３０４８９
１号、同２−２７９９２号、同２−２３４６８３号、同
３−２１６１９３号等にそれぞれ共重合体及びその製造
方法が開示されている。
注目されているポリ−３−ヒドロキシブチレート〔Ｐ
（３ＨＢ）〕については特開昭５６−１１７７９３号、
同５７−７４０８４号、同５７−１５０３９３号に、３
−ヒドロキシブチレートと３−ヒドロキシバリレートの
共重合体〔Ｐ（３ＨＢ−ｃｏ−３ＨＶ）〕については特
開昭５７−１５０３９３号、同５８−６９２２４号、同
５８−２１２７９２号、同５９−２２０１９２号、同５
９−２０５９９２号、同６１−２９３３８５号、同６３
−２６９９８９号に、３−ヒドロキシブチレートと４−
ヒドロキシブチレート〔Ｐ−（３ＨＢ−ｃｏ−４Ｈ
Ｂ）〕については特開平１−４８８２１号、同１−１５
６３２０号、同１−２２２７８８号、同１−３０４８９
１号、同２−２７９９２号、同２−２３４６８３号、同
３−２１６１９３号等にそれぞれ共重合体及びその製造
方法が開示されている。
【０００４】更に、Ａ．Ｓｔｅｉｎｂｕｃｈｅｌらの、
Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｖｏ
ｌ．５６，Ｎｏ．１１，ｐ３３６０−３３６７（１９９
０）には、３−ヒドロキシヘキサノエートと３−ヒドロ
キシオクタノエートの共重合体〔Ｐ（３ＨＨｘ−ｃｏ−
３ＨＯ）〕等の３ＨＢ単位を持たない共重合体が微生物
によって生成されることが報告されている。すなわち、
炭素源としてオクタン酸を添加した栄養塩培地で、例え
ばシュードモナス・オーレオファシンス ＤＳＭ５００
８２を培養すると乾燥菌体中１８．０％の〔Ｐ（３ＨＨ
ｘ−ｃｏ−３ＨＯ）〕〔３ＨＨｘ２０．８モル％，３Ｈ
Ｏ８９．２モル％〕を生成し、シュードモナス・シトロ
ネロリス ＤＳＭ５０３３２を培養すると乾燥菌体中７
５．３％の〔Ｐ（３ＨＯ−ｃｏ−３ＨＤ）〕〔３ＨＨｘ
９３．８モル％，３ＨＤ６．２モル％〕を生成し、ま
た、シュードモナス・オレオボランス ＡＴＣＣ２９３
４７を培養すると乾燥菌体中４４．０％の〔Ｐ（３ＨＨ
ｘ−ｃｏ−３ＨＯ，３ＨＤ）〕〔３ＨＨｘ５．４モル
％，３ＨＯ９２．０モル％，３ＨＤ２．６モル％〕を生
成する。更に、炭素源としてグルコン酸を添加した栄養
塩培地で、例えばシュードモナス・メンドシナ ＤＳＭ
５００１７を培養すると乾燥菌体中５０．７％のＰ（３
ＨＨｘ−ｃｏ−３ＨＯ，３ＨＤ，３ＨＤＤ）〔３ＨＨｘ
４．３モル％，３ＨＯ２９．８モル％，３ＨＤ６１．９
モル％，３ＨＤＤ４．２モル％〕を生成する。
Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｖｏ
ｌ．５６，Ｎｏ．１１，ｐ３３６０−３３６７（１９９
０）には、３−ヒドロキシヘキサノエートと３−ヒドロ
キシオクタノエートの共重合体〔Ｐ（３ＨＨｘ−ｃｏ−
３ＨＯ）〕等の３ＨＢ単位を持たない共重合体が微生物
によって生成されることが報告されている。すなわち、
炭素源としてオクタン酸を添加した栄養塩培地で、例え
ばシュードモナス・オーレオファシンス ＤＳＭ５００
８２を培養すると乾燥菌体中１８．０％の〔Ｐ（３ＨＨ
ｘ−ｃｏ−３ＨＯ）〕〔３ＨＨｘ２０．８モル％，３Ｈ
Ｏ８９．２モル％〕を生成し、シュードモナス・シトロ
ネロリス ＤＳＭ５０３３２を培養すると乾燥菌体中７
５．３％の〔Ｐ（３ＨＯ−ｃｏ−３ＨＤ）〕〔３ＨＨｘ
９３．８モル％，３ＨＤ６．２モル％〕を生成し、ま
た、シュードモナス・オレオボランス ＡＴＣＣ２９３
４７を培養すると乾燥菌体中４４．０％の〔Ｐ（３ＨＨ
ｘ−ｃｏ−３ＨＯ，３ＨＤ）〕〔３ＨＨｘ５．４モル
％，３ＨＯ９２．０モル％，３ＨＤ２．６モル％〕を生
成する。更に、炭素源としてグルコン酸を添加した栄養
塩培地で、例えばシュードモナス・メンドシナ ＤＳＭ
５００１７を培養すると乾燥菌体中５０．７％のＰ（３
ＨＨｘ−ｃｏ−３ＨＯ，３ＨＤ，３ＨＤＤ）〔３ＨＨｘ
４．３モル％，３ＨＯ２９．８モル％，３ＨＤ６１．９
モル％，３ＨＤＤ４．２モル％〕を生成する。
【０００５】これら生分解性の共重合体は加水分解性を
有し、土中や河川水中、海水中、生体内の微生物の作用
で二酸化炭素と水に分解され自然環境に戻るものであ
り、近年、地球環境保全に対する意識の高まりから注目
され、研究開発がなされ、実用化が検討されている。
有し、土中や河川水中、海水中、生体内の微生物の作用
で二酸化炭素と水に分解され自然環境に戻るものであ
り、近年、地球環境保全に対する意識の高まりから注目
され、研究開発がなされ、実用化が検討されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、微生物
が生成する共重合体は、その理化学的性質が多岐にわた
っており、それぞれの使用目的に適合する共重合体の探
索が要求されている。
が生成する共重合体は、その理化学的性質が多岐にわた
っており、それぞれの使用目的に適合する共重合体の探
索が要求されている。
【０００７】一方、共重合体の微生物による生産は、通
常の化学合成法による生産に比較して、培地成分が高価
である、微生物のポリマー生成速度が遅い、菌体中のポ
リマー含有率が低い等のため生産コストが高くなるとい
う欠点を有しており、この問題の解決が望まれていた。
常の化学合成法による生産に比較して、培地成分が高価
である、微生物のポリマー生成速度が遅い、菌体中のポ
リマー含有率が低い等のため生産コストが高くなるとい
う欠点を有しており、この問題の解決が望まれていた。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる実
情に鑑み鋭意検討した結果、千葉県佐倉市の土壌より分
離したシュードモナス属に属する細菌を培養すれば、３
ＨＢ単位を有しない共重合体が極めて高収率で得られる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
情に鑑み鋭意検討した結果、千葉県佐倉市の土壌より分
離したシュードモナス属に属する細菌を培養すれば、３
ＨＢ単位を有しない共重合体が極めて高収率で得られる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】すなわち、本発明は、シュードモナス属に
属し、乾燥菌体中に８０〜９５％下記理化学的性質、
（Ａ）〜（Ｅ）を有する共重合体を産生する微生物を培
養し、該共重合体を採取することを特徴とする共重合体
の製造方法を提供するものである。
属し、乾燥菌体中に８０〜９５％下記理化学的性質、
（Ａ）〜（Ｅ）を有する共重合体を産生する微生物を培
養し、該共重合体を採取することを特徴とする共重合体
の製造方法を提供するものである。
【００１０】（Ａ）構成成分及び組成 下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）； （ａ）下記式（１）及び／又は（２）及び／又は（３）で表わされる３−ヒド ロキシヘキサノエート単位（３ＨＨｘ） １〜４０モル％、
【００１１】
【化５】
【００１２】 （ｂ）下記式（４）及び／又は（５）及び／又は（６）で表わされる３−ヒド ロキシオクタノエート単位（３ＨＯ） １０〜９５モル％、
【００１３】
【化６】
【００１４】 （ｃ）下記式（７）及び／又は（８）及び／又は（９）で表わされる３−ヒド ロキシデカノエート単位（３ＨＤ） ０〜７０モル％、
【００１５】
【化７】
【００１６】 （ｄ）下記式（１０）及び／又は（１１）及び／又は（１２）で表わされる３ −ヒドロキシドデカノエート単位（３ＨＤＤ） ０〜４０モル％、
【００１７】
【化８】
【００１８】からなる共重合体。 （Ｂ）数平均分子量 ５０，０００〜１，０００，０００。 （Ｃ）融点 ３５〜７０℃又は明確な融点を示さない。 （Ｄ）ガラス転移点 −２０〜−５０℃。 （Ｅ）溶解性 クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタ
ン及びアセトンに可溶、水に不溶。
ン及びアセトンに可溶、水に不溶。
【００１９】本発明は、更に上記共重合体を生成するシ
ュードモナス エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．） ３１−１株（微工研菌寄第１３２８０号）を提
供するものである。
ュードモナス エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．） ３１−１株（微工研菌寄第１３２８０号）を提
供するものである。
【００２０】上記共重合体を生成する微生物の菌学的性
質は以下のとおりである。
質は以下のとおりである。
【００２１】（１）形態学的性質 寒天培地、３０℃、一夜培養で０．６〜０．８μm ×
１．７〜２．３μm の直状桿菌である。液体培地、３０
℃、一夜培養で０．８〜１．１μm ×２．５〜５．７μ
m の直状桿菌である。べん毛染色で極毛が観察され、運
動性が認められる。多形性、胞子、グラム染色性及び抗
酸性は認められない。
１．７〜２．３μm の直状桿菌である。液体培地、３０
℃、一夜培養で０．８〜１．１μm ×２．５〜５．７μ
m の直状桿菌である。べん毛染色で極毛が観察され、運
動性が認められる。多形性、胞子、グラム染色性及び抗
酸性は認められない。
【００２２】（２）各種培地における生育状態 （イ）肉汁寒天平板培養 コロニーは平滑で周縁はやや粗造である。特徴的コロニ
ー色素、拡散性色素の産生は認められない。 （ロ）肉汁寒天斜面培地 菌苔は平滑で周縁はやや粗造である。特徴的コロニー色
素、拡散性色素の産生は認められない。 （ハ）肉汁液体培地 培地全体に生育が認められるが、表面皮膜は認められな
い。 （ニ）肉汁ゼラチン穿刺培養 培地の上部に生育が認められるが、液化は認められな
い。 （ホ）リトマスミルク アルカリの産生は認められるが、凝固は認められない。
ー色素、拡散性色素の産生は認められない。 （ロ）肉汁寒天斜面培地 菌苔は平滑で周縁はやや粗造である。特徴的コロニー色
素、拡散性色素の産生は認められない。 （ハ）肉汁液体培地 培地全体に生育が認められるが、表面皮膜は認められな
い。 （ニ）肉汁ゼラチン穿刺培養 培地の上部に生育が認められるが、液化は認められな
い。 （ホ）リトマスミルク アルカリの産生は認められるが、凝固は認められない。
【００２３】（３）生理的性質 （イ）硝酸塩の還元 ：陰性 （ロ）脱窒反応 ：陰性 （ハ）ＭＲテスト ：陰性 （ニ）ＶＰテスト ：陰性 （ホ）インドールの生成 ：陰性 （ヘ）硫化水素の生成 ＴＳＩ寒天 ：陰性 酢酸鉛寒天 ：陰性 （ト）デンプンの加水分解 ：陰性 （チ）クエン酸塩の利用 Ｋｏｓｅｒの培地 ：陽性 Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地：陽性 （リ）無機窒素源の利用 硝酸塩 ：陽性 アンモニウム塩 ：陽性 （ヌ）色素の生成 コロニー ：陰性 水溶性 ：陰性 （ル）ウレアーゼ ：陰性 （ヲ）オキシダーゼ ：陽性 （ワ）カタラーゼ ：陽性 （カ）生育の範囲 pH ：５．５〜９．０ 温度 ：−３〜３６℃ （ヨ）酸素に対する態度 ：好気性 （タ）Ｏ−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ Ｌｅｉｆｓｏｎ法）：
Ｏ （レ）糖類からの酸及びガスの生成 ：表１に記載
Ｏ （レ）糖類からの酸及びガスの生成 ：表１に記載
【００２４】
【表１】
【００２５】以上の菌学的性質から、この微生物はシュ
ードモナス属に属する菌であり、更に公知の菌株と比較
しても同じものが存しないため新規の菌株と判断し、シ
ュードモナス エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．） ３１−１と命名して、工業技術院微生物工業技
術研究所に微工研菌寄第１３２８０号（ＦＥＲＭ Ｐ−
１３２８０）として寄託した。
ードモナス属に属する菌であり、更に公知の菌株と比較
しても同じものが存しないため新規の菌株と判断し、シ
ュードモナス エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．） ３１−１と命名して、工業技術院微生物工業技
術研究所に微工研菌寄第１３２８０号（ＦＥＲＭ Ｐ−
１３２８０）として寄託した。
【００２６】本発明の微生物は自然又は紫外線、Ｘ線、
化学薬剤等により変異を起す。従って、本発明の共重合
体の製造方法は、これら変異株を用いることもできる。
化学薬剤等により変異を起す。従って、本発明の共重合
体の製造方法は、これら変異株を用いることもできる。
【００２７】本発明の菌株を用いて、本発明の共重合体
を製造する方法は、培地に該菌株を接種し、培養し、こ
の培養物より乾燥菌体中８０〜９５％を占める共重合体
を採取する方法である。この培地中には、資化し得る炭
素源、窒素源及びその他の栄養源を適当量含有せしめて
おく。これらは特に制限はないが、具体的には、炭素源
としてはオクタン酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウ
ム、吉草酸、ブイヨン、シュクロース、デンプン、糖
蜜、アラビノース、ソルビトール、メタノール、二酸化
炭素等が挙げられ、窒素源としては塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの無機窒素源の
他、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、大豆粉、油粕な
どの有機窒素源も挙げることができ、その他の添加物と
しては、必要に応じてマグネシウム、ナトリウム、カリ
ウム、カルシウム、マンガン、銅、モリブデン、亜鉛、
鉄等の金属塩、リン酸塩、硝酸塩、塩化物、炭酸塩等、
クエン酸ナトリウム等の有機酸塩が挙げられる。
を製造する方法は、培地に該菌株を接種し、培養し、こ
の培養物より乾燥菌体中８０〜９５％を占める共重合体
を採取する方法である。この培地中には、資化し得る炭
素源、窒素源及びその他の栄養源を適当量含有せしめて
おく。これらは特に制限はないが、具体的には、炭素源
としてはオクタン酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウ
ム、吉草酸、ブイヨン、シュクロース、デンプン、糖
蜜、アラビノース、ソルビトール、メタノール、二酸化
炭素等が挙げられ、窒素源としては塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの無機窒素源の
他、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、大豆粉、油粕な
どの有機窒素源も挙げることができ、その他の添加物と
しては、必要に応じてマグネシウム、ナトリウム、カリ
ウム、カルシウム、マンガン、銅、モリブデン、亜鉛、
鉄等の金属塩、リン酸塩、硝酸塩、塩化物、炭酸塩等、
クエン酸ナトリウム等の有機酸塩が挙げられる。
【００２８】培養は好気的条件下で行うのが好ましく、
静置、振とう、通気攪拌培養のいずれも可能であるが、
振とうあるいは通気攪拌培養が有利である。培養温度は
約１０〜３６℃が好ましく、特に約２０〜３２℃が好適
である。また、培地のpHは約５．５〜９．０が適当であ
るが、特に６．５〜８．０が最適である。
静置、振とう、通気攪拌培養のいずれも可能であるが、
振とうあるいは通気攪拌培養が有利である。培養温度は
約１０〜３６℃が好ましく、特に約２０〜３２℃が好適
である。また、培地のpHは約５．５〜９．０が適当であ
るが、特に６．５〜８．０が最適である。
【００２９】培養期間は培地の組成、温度等の培養条件
によって異なるが、通常約０．５〜６日程度、好ましく
は１〜３日程度である。
によって異なるが、通常約０．５〜６日程度、好ましく
は１〜３日程度である。
【００３０】また、このとき主として菌体を増殖させる
前段の培養と、窒素及び／又はリンを制限して菌体内に
共重合体を生成、蓄積させる後段の培養との二段階によ
り培養したほうが、通常、共重合体の生成量が多くなる
ため好ましい。すなわち、上記の培養条件で前段の培養
を行い、得られた培養液から菌体を濾過あるいは遠心分
離のような手段で分離回収し、その菌体を後段の窒素及
び／又はリンを制限した培地での培養に移行させるか、
又は、前段の培養において窒素及び／又はリンを枯渇さ
せ、菌体を分離回収することなく、その培養液を後段の
培養に移行させてもよい。この後段の培養は培養液中に
窒素及び／又はリンを実質的に含有させない点でのみ前
段の培養と異なる。
前段の培養と、窒素及び／又はリンを制限して菌体内に
共重合体を生成、蓄積させる後段の培養との二段階によ
り培養したほうが、通常、共重合体の生成量が多くなる
ため好ましい。すなわち、上記の培養条件で前段の培養
を行い、得られた培養液から菌体を濾過あるいは遠心分
離のような手段で分離回収し、その菌体を後段の窒素及
び／又はリンを制限した培地での培養に移行させるか、
又は、前段の培養において窒素及び／又はリンを枯渇さ
せ、菌体を分離回収することなく、その培養液を後段の
培養に移行させてもよい。この後段の培養は培養液中に
窒素及び／又はリンを実質的に含有させない点でのみ前
段の培養と異なる。
【００３１】以上の培養における培地のオクタン酸ナト
リウム等の炭素源の量は、共重合体を生成させることが
でき、かつ、微生物の生育を阻害しない量であればよい
が、共重合体を構成するモノマーユニットの種類あるい
はモノマーユニット数の割合により変化させることが好
ましい。通常は培養液１ｌあたり１〜１００ｇ程度、好
ましくは５〜３０ｇ程度である。
リウム等の炭素源の量は、共重合体を生成させることが
でき、かつ、微生物の生育を阻害しない量であればよい
が、共重合体を構成するモノマーユニットの種類あるい
はモノマーユニット数の割合により変化させることが好
ましい。通常は培養液１ｌあたり１〜１００ｇ程度、好
ましくは５〜３０ｇ程度である。
【００３２】上記により培養された培養物中から、濾過
あるいは遠心分離などの通常の手段によって菌体を分離
回収し、この菌体を洗浄、乾燥して乾燥菌体を得る。菌
体の収量は１〜１０ｇ／ｌ程度である。この菌体から目
的の共重合体を採取するには、常法により、例えばクロ
ロホルムのような有機溶剤で生成した共重合体を抽出
し、例えば共重合体を溶解しにくいメタノール、ヘキサ
ンなど貧溶媒を加えて上記共重合体を沈澱させる。
あるいは遠心分離などの通常の手段によって菌体を分離
回収し、この菌体を洗浄、乾燥して乾燥菌体を得る。菌
体の収量は１〜１０ｇ／ｌ程度である。この菌体から目
的の共重合体を採取するには、常法により、例えばクロ
ロホルムのような有機溶剤で生成した共重合体を抽出
し、例えば共重合体を溶解しにくいメタノール、ヘキサ
ンなど貧溶媒を加えて上記共重合体を沈澱させる。
【００３３】かくして得られた共重合体は３ＨＨｘ及び
３ＨＯ、更に場合により３ＨＤ及び３ＨＤＤのモノマー
ユニットがエステル結合した前記理化学的性質を有する
共重合体である。各モノマーユニットの割合及び分子量
は、オクタン酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウムなど
の炭素源の種類や濃度を変えることによって、制御する
ことができる。
３ＨＯ、更に場合により３ＨＤ及び３ＨＤＤのモノマー
ユニットがエステル結合した前記理化学的性質を有する
共重合体である。各モノマーユニットの割合及び分子量
は、オクタン酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウムなど
の炭素源の種類や濃度を変えることによって、制御する
ことができる。
【００３４】
【実施例】以下に本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３５】実施例１保存菌株の復元と予備培養 凍結保存したシュードモナス エスピー ３１−１株
（微工研菌寄第１３２８０号）を室温で解凍し、１％グ
ルコース添加ブイヨン培地に植菌して、３０℃、２４時
間培養し復元した。この復元菌株を１％グルコース添加
ブイヨン液体培地５mlに植菌し、３０℃、２４時間往復
振とう培養した。前段培養 下記に示す組成の培地を２ｌジャーファメンターに入
れ、予備培養した前記シュードモナス エスピー ３１
−１株を３０℃で２０時間好気培養した。
（微工研菌寄第１３２８０号）を室温で解凍し、１％グ
ルコース添加ブイヨン培地に植菌して、３０℃、２４時
間培養し復元した。この復元菌株を１％グルコース添加
ブイヨン液体培地５mlに植菌し、３０℃、２４時間往復
振とう培養した。前段培養 下記に示す組成の培地を２ｌジャーファメンターに入
れ、予備培養した前記シュードモナス エスピー ３１
−１株を３０℃で２０時間好気培養した。
【００３６】
【表２】 （培地組成） NH4Cl ０．４ｇ KH2PO4 ２．７ｇ NaH2PO4 ３．２ｇ MgSO4 ０．２ｇ ミネラル溶液* １．０ml 蒸留水 １，０００ml pH ７．０
【００３７】
【表３】 *:次の成分を含む CoCl １１９．０mg CaCl2 ７．８mg CrCl2 ６２．２mg FeCl3・6H2O ９．７mg NiCl3 １１８．０mg CuSO4 １５６．０mg 0.1N-HCl水溶液 １．０ｌ
【００３８】後段培養 次に、前段培養を行った培地組成と同じ培地に炭素源と
してオクタン酸ナトリウム５ｇ／ｌ培地を加えた培地
で、３０℃で３０時間好気培養した。pHは無調整で７．
０〜７．５であった。菌体の分離 得られた培養物から遠心分離（１０，０００rpm ）によ
って、菌体を分離した。次に、得られた菌体を凍結乾燥
し乾燥菌体８．０ｇ／ｌを得た。共重合体の分離・精製 得られた乾燥菌体にクロロホルム（ウォーターバス９０
℃）を加え共重合体を抽出して濃縮し、これにメタノー
ルを加えて共重合体を沈澱させた後、上澄のメタノール
を取り除き、真空乾燥機で乾燥し、乾燥菌体中８８％の
共重合体（１）を得た。共重合体（１）の理化学的性質 以上のようにして得られた共重合体（１）の組成、数平
均分子量、融点、ガラス転移点及び溶解性を下記により
測定した。
してオクタン酸ナトリウム５ｇ／ｌ培地を加えた培地
で、３０℃で３０時間好気培養した。pHは無調整で７．
０〜７．５であった。菌体の分離 得られた培養物から遠心分離（１０，０００rpm ）によ
って、菌体を分離した。次に、得られた菌体を凍結乾燥
し乾燥菌体８．０ｇ／ｌを得た。共重合体の分離・精製 得られた乾燥菌体にクロロホルム（ウォーターバス９０
℃）を加え共重合体を抽出して濃縮し、これにメタノー
ルを加えて共重合体を沈澱させた後、上澄のメタノール
を取り除き、真空乾燥機で乾燥し、乾燥菌体中８８％の
共重合体（１）を得た。共重合体（１）の理化学的性質 以上のようにして得られた共重合体（１）の組成、数平
均分子量、融点、ガラス転移点及び溶解性を下記により
測定した。
【００３９】
【表４】 組 成：1Ｈ−ＮＭＲスペクトル，13Ｃ−ＮＭＲスペク
トル 分子量：ゲルパーミエーションクロマトグラフィ（ＧＰ
Ｃ）測定（日立製作所製Ｌ−６２００，データ処理装置
Ｄ−２５２０） 融 点：示差走査熱量計（ＤＳＣ）測定（１０℃／min
）（島津製作所製ＤＳＣ−５０） ガラス転移点：示差走査熱量計（ＤＳＣ）測定（２０℃
／min ） 溶解性：各種溶剤に対する溶解性
トル 分子量：ゲルパーミエーションクロマトグラフィ（ＧＰ
Ｃ）測定（日立製作所製Ｌ−６２００，データ処理装置
Ｄ−２５２０） 融 点：示差走査熱量計（ＤＳＣ）測定（１０℃／min
）（島津製作所製ＤＳＣ−５０） ガラス転移点：示差走査熱量計（ＤＳＣ）測定（２０℃
／min ） 溶解性：各種溶剤に対する溶解性
【００４０】測定結果を併せて表５に示す。乾燥菌体中
の共重合体（１）は８８％の高含有率であった。共重合
体（１）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタン、
１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に不溶
であった。共重合体（１）はゴム状であった。また、１
００ＭＨｚ 13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図１に、５００
ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図２に、ＧＰＣ測定チ
ャートを図３に、ＤＳＣ測定チャートを図４に示す。
の共重合体（１）は８８％の高含有率であった。共重合
体（１）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタン、
１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に不溶
であった。共重合体（１）はゴム状であった。また、１
００ＭＨｚ 13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図１に、５００
ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図２に、ＧＰＣ測定チ
ャートを図３に、ＤＳＣ測定チャートを図４に示す。
【００４１】実施例２ 後段の培養にて、炭素源としてオクタン酸ナトリウム１
２ｇ／ｌ培地とした以外は実施例１と同様に行った。
２ｇ／ｌ培地とした以外は実施例１と同様に行った。
【００４２】測定結果を併せて表５に示す。乾燥菌体中
の共重合体（２）は９３％の高含有率であった。また、
共重合体（２）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタ
ン、１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に
不溶であった。共重合体（２）はゴム状であった。
の共重合体（２）は９３％の高含有率であった。また、
共重合体（２）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタ
ン、１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に
不溶であった。共重合体（２）はゴム状であった。
【００４３】実施例３ 培養を前段、後段の二段階に分けることなく、実施例１
の前段培養のときに、炭素源としてオクタン酸ナトリウ
ム５ｇ／ｌ培地を加え７２時間培養し、後段培養を行わ
なかった以外は、実施例１と同様に行った。
の前段培養のときに、炭素源としてオクタン酸ナトリウ
ム５ｇ／ｌ培地を加え７２時間培養し、後段培養を行わ
なかった以外は、実施例１と同様に行った。
【００４４】測定結果を併せて表５に示す。乾燥菌体中
の共重合体（３）は８３％の高含有率であった。共重合
体（３）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタン、
１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に不溶
であった。共重合体（３）はゴム状であった。
の共重合体（３）は８３％の高含有率であった。共重合
体（３）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタン、
１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に不溶
であった。共重合体（３）はゴム状であった。
【００４５】実施例４ 前段培養及び後段培養の培地の組成中NH4Clを０．５ｇ
／ｌ培地とし、後段培養の培地に炭素源としてオクタン
酸ナトリウムに変えて、グルコン酸ナトリウム１５ｇ／
ｌ培地を加えた以外は実施例１と同様に行った。
／ｌ培地とし、後段培養の培地に炭素源としてオクタン
酸ナトリウムに変えて、グルコン酸ナトリウム１５ｇ／
ｌ培地を加えた以外は実施例１と同様に行った。
【００４６】測定結果を併せて表５に示す。乾燥菌体中
の共重合体（４）は８０％の高含有率であった。共重合
体（４）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタン、
１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に不溶
であった。共重合体（４）はドロドロした油状であっ
た。また、１００ＭＨｚ 13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図
５に、５００ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図６に、
ＧＰＣ測定チャートを図７に、ＤＳＣ測定チャートを図
８に示す。
の共重合体（４）は８０％の高含有率であった。共重合
体（４）の溶解性はクロロホルム、ジクロロメタン、
１，２−ジクロロエタン、アセトンに可溶で、水に不溶
であった。共重合体（４）はドロドロした油状であっ
た。また、１００ＭＨｚ 13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図
５に、５００ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図６に、
ＧＰＣ測定チャートを図７に、ＤＳＣ測定チャートを図
８に示す。
【００４７】
【表５】
【００４８】
【発明の効果】本発明の製造方法により、乾燥菌体中８
０〜９５％を占める高含有率のモノマーユニット３ＨＨ
ｘ、３ＨＯ、３ＨＤ及び３ＨＤＤからなる共重合体を得
ることができる。これにより、従来の製造方法に比し、
生産コストを著しく低減せしめることが可能であり、工
業的メリットは大である。更に、本発明により得られる
共重合体は医薬品、食品、衛生用品、農園芸品、包装材
料等、広範な分野での応用が期待される。
０〜９５％を占める高含有率のモノマーユニット３ＨＨ
ｘ、３ＨＯ、３ＨＤ及び３ＨＤＤからなる共重合体を得
ることができる。これにより、従来の製造方法に比し、
生産コストを著しく低減せしめることが可能であり、工
業的メリットは大である。更に、本発明により得られる
共重合体は医薬品、食品、衛生用品、農園芸品、包装材
料等、広範な分野での応用が期待される。
【図１】実施例１で得られた共重合体の１００ＭＨｚで
の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
【図２】実施例１で得られた共重合体の５００ＭＨｚで
の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
【図３】実施例１で得られた共重合体のＧＰＣ測定チャ
ートを示す図面である。
ートを示す図面である。
【図４】実施例１で得られた共重合体のＤＳＣ測定チャ
ートを示す図面である。
ートを示す図面である。
【図５】実施例４で得られた共重合体の１００ＭＨｚで
の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
【図６】実施例４で得られた共重合体の４００ＭＨｚで
の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図面である。
【図７】実施例４で得られた共重合体のＧＰＣ測定チャ
ートを示す図面である。
ートを示す図面である。
【図８】実施例４で得られた共重合体のＤＳＣ測定チャ
ートを示す図面である。
ートを示す図面である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (72)発明者 平野 元三 千葉県四街道市鷹の台１丁目３番 株式会 社日本製鋼所内
Claims (2)
- 【請求項１】 シュードモナス属に属し、乾燥菌体中に
８０〜９５％下記理化学的性質（Ａ）〜（Ｅ）を有する
共重合体を産生する微生物を培養し、該共重合体を採取
することを特徴とする共重合体の製造方法。 （Ａ）構成成分及び組成 下記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）； （ａ）下記式（１）及び／又は（２）及び／又は（３）で表わされる３−ヒド ロキシヘキサノエート単位 １〜４０モル％、 【化１】 （ｂ）下記式（４）及び／又は（５）及び／又は（６）で表わされる３−ヒド ロキシオクタノエート単位 １０〜９５モル％、 【化２】 （ｃ）下記式（７）及び／又は（８）及び／又は（９）で表わされる３−ヒド ロキシデカノエート単位 ０〜７０モル％、 【化３】 （ｄ）下記式（１０）及び／又は（１１）及び／又は（１２）で表わされる３ −ヒドロキシドデカノエート単位 ０〜４０モル％、 【化４】 からなる共重合体。 （Ｂ）数平均分子量 ５０，０００〜１，０００，０００。 （Ｃ）融点 ３５〜７０℃又は明確な融点を示さない。 （Ｄ）ガラス転移点 −２０〜−５０℃。 （Ｅ）溶解性 クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタ
ン及びアセトンに可溶、水に不溶。 - 【請求項２】 請求項１記載の共重合体を生成するシュ
ードモナス エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓ
ｐ．） ３１−１株（微工研菌寄第１３２８０号）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5184142A JPH0731490A (ja) | 1993-07-26 | 1993-07-26 | 共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5184142A JPH0731490A (ja) | 1993-07-26 | 1993-07-26 | 共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微生物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0731490A true JPH0731490A (ja) | 1995-02-03 |
Family
ID=16148109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5184142A Pending JPH0731490A (ja) | 1993-07-26 | 1993-07-26 | 共重合体の製造方法及び該共重合体を生成する微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0731490A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003048969A (ja) * | 2001-05-31 | 2003-02-21 | Canon Inc | ［（置換フェニル）メチル］スルファニル構造を側鎖に有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 |
| JP2004315782A (ja) * | 2002-10-24 | 2004-11-11 | Canon Inc | 新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法；それを含む樹脂組成物、それを用いた成形品の製造方法；新規なポリヒドロキシアルカノエートを含有する荷電制御剤、該荷電制御剤を用いたトナー；前記樹脂組成物を含むバインダー樹脂；前記トナーを用いた画像形成方法および画像形成装置 |
| JP2009171883A (ja) * | 2008-01-23 | 2009-08-06 | Agri Bioindustry:Kk | ポリヒドロキシアルカノエートおよびポリヒドロキシアルカノエートの製造方法 |
| JP2022514244A (ja) * | 2018-12-20 | 2022-02-10 | ロレアル | 油性媒体中にポリヒドロキシアルカノエートを含む化粧用組成物 |
-
1993
- 1993-07-26 JP JP5184142A patent/JPH0731490A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003048969A (ja) * | 2001-05-31 | 2003-02-21 | Canon Inc | ［（置換フェニル）メチル］スルファニル構造を側鎖に有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 |
| JP2004315782A (ja) * | 2002-10-24 | 2004-11-11 | Canon Inc | 新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法；それを含む樹脂組成物、それを用いた成形品の製造方法；新規なポリヒドロキシアルカノエートを含有する荷電制御剤、該荷電制御剤を用いたトナー；前記樹脂組成物を含むバインダー樹脂；前記トナーを用いた画像形成方法および画像形成装置 |
| JP2009171883A (ja) * | 2008-01-23 | 2009-08-06 | Agri Bioindustry:Kk | ポリヒドロキシアルカノエートおよびポリヒドロキシアルカノエートの製造方法 |
| JP2022514244A (ja) * | 2018-12-20 | 2022-02-10 | ロレアル | 油性媒体中にポリヒドロキシアルカノエートを含む化粧用組成物 |
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