JPH0740919B2 - スタフィロコッカス・エピデルミデイスの増殖法および培養基 - Google Patents
スタフィロコッカス・エピデルミデイスの増殖法および培養基Info
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- JPH0740919B2 JPH0740919B2 JP1111854A JP11185489A JPH0740919B2 JP H0740919 B2 JPH0740919 B2 JP H0740919B2 JP 1111854 A JP1111854 A JP 1111854A JP 11185489 A JP11185489 A JP 11185489A JP H0740919 B2 JPH0740919 B2 JP H0740919B2
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- staphylococcus epidermidis
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、スタフィロコッカス・エピデルミデイス（St
aphylococcus epidermidis）の増殖法およびその増殖法
に用いる培養基に関する。
aphylococcus epidermidis）の増殖法およびその増殖法
に用いる培養基に関する。
（従来の技術） スタフィロコッカス・エピデルミデイスは、ヒトおよび
温血動物の皮膚や粘膜の定住菌叢を構成する細菌の一種
であり、表皮ブドウ球菌との別名を持つ。同属のスタフ
ィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）
が種々の感染症および食中毒の潜在的病原菌であるのに
対して、この菌の多くは偏性寄生菌ないしは通性寄生菌
であるとされている（岩田和夫編「病原微生物学」南山
堂）。
温血動物の皮膚や粘膜の定住菌叢を構成する細菌の一種
であり、表皮ブドウ球菌との別名を持つ。同属のスタフ
ィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）
が種々の感染症および食中毒の潜在的病原菌であるのに
対して、この菌の多くは偏性寄生菌ないしは通性寄生菌
であるとされている（岩田和夫編「病原微生物学」南山
堂）。
このスタフィロコッカス・エピデルミデイスは、またリ
パーゼ、フォスフォリパーゼ、リポプロティンリパー
ゼ、エステラーゼ、リアーゼ、プロテアーゼなどの種々
の酵素を産生することが報告されている（“Bergey′s
manual of Determinative Bacteriology 8th Edition",
Cohen,1972、“THE STAPHYLOCOCCI",WIEY−INTE−RSCIE
NCなど）。
パーゼ、フォスフォリパーゼ、リポプロティンリパー
ゼ、エステラーゼ、リアーゼ、プロテアーゼなどの種々
の酵素を産生することが報告されている（“Bergey′s
manual of Determinative Bacteriology 8th Edition",
Cohen,1972、“THE STAPHYLOCOCCI",WIEY−INTE−RSCIE
NCなど）。
スタフィロコッカス・エピデルミデイスなどの微生物が
産生する脂肪分解酵素などは、従来、産業上種々の分野
に利用されている。例えば、医療用として、バチルス・
スブチルス（Bacillus Subtiiis）およびアスペルギル
ス・ニガー（Aspegillus Niger）その他の菌の産生する
リパーゼ（Triacylglycerol Acylhydrolase）が実用化
されている（柴田ら「薬用天然物質」南山堂、上野・大
村編「微生物薬品化学」改訂第２版、南山堂など）。ま
た、臨床診断検査分野では、リゾプス・ヤポニクス（Rh
izopus Japonicus）の産生するリポプロティンリパーゼ
（Triacylglyceroprotein acylhydolase）が、インシュ
リン欠乏性糖尿病や尿毒症、ネフローゼ症候群、アルコ
ール中毒の診断にも実用化されている（前記「微生物薬
品化学」改訂第２版、南山堂など）。さらに、食品加工
の分野では、リゾプス・デレマー（Rhizopu Delema
r）の産生するリパーゼはフレーバーの製造やその他に
実用化されている（前記「微生物薬品化学」改訂第２
版、南山堂など）。
産生する脂肪分解酵素などは、従来、産業上種々の分野
に利用されている。例えば、医療用として、バチルス・
スブチルス（Bacillus Subtiiis）およびアスペルギル
ス・ニガー（Aspegillus Niger）その他の菌の産生する
リパーゼ（Triacylglycerol Acylhydrolase）が実用化
されている（柴田ら「薬用天然物質」南山堂、上野・大
村編「微生物薬品化学」改訂第２版、南山堂など）。ま
た、臨床診断検査分野では、リゾプス・ヤポニクス（Rh
izopus Japonicus）の産生するリポプロティンリパーゼ
（Triacylglyceroprotein acylhydolase）が、インシュ
リン欠乏性糖尿病や尿毒症、ネフローゼ症候群、アルコ
ール中毒の診断にも実用化されている（前記「微生物薬
品化学」改訂第２版、南山堂など）。さらに、食品加工
の分野では、リゾプス・デレマー（Rhizopu Delema
r）の産生するリパーゼはフレーバーの製造やその他に
実用化されている（前記「微生物薬品化学」改訂第２
版、南山堂など）。
このような脂肪分解酵素などを産生する産業上有用なス
タフィロコッカス属細菌などの増殖方法は、従来、グル
コース、フルクトース、マルトース、シュクロース、グ
リセリン、デキストリン、デンプン、糖密、肉エキス、
ペプトン、コーンスティープリカー、大豆粕、カザミノ
酸、NZアミン、酵母エキス、Na+、K+、Ca2+、PO4 3-など
の無機イオンを含む培地（特公昭63-2593号公報）、ポ
リペプトン15％、食塩0.6％を含む培地、また、実験的
には、肉エキス１％、ペプトン１％、食塩３％を含む培
地（特公昭63-2594号公報）などの培養基を用いて行な
われていた。
タフィロコッカス属細菌などの増殖方法は、従来、グル
コース、フルクトース、マルトース、シュクロース、グ
リセリン、デキストリン、デンプン、糖密、肉エキス、
ペプトン、コーンスティープリカー、大豆粕、カザミノ
酸、NZアミン、酵母エキス、Na+、K+、Ca2+、PO4 3-など
の無機イオンを含む培地（特公昭63-2593号公報）、ポ
リペプトン15％、食塩0.6％を含む培地、また、実験的
には、肉エキス１％、ペプトン１％、食塩３％を含む培
地（特公昭63-2594号公報）などの培養基を用いて行な
われていた。
（発明が解決しようとする課題） しかしながら、上述の従来の培地を用いる方法では、食
塩やポリペプトンの添加量が異常に多いばかりか、必ず
しも良好な増殖を行ない、製造することが出来なかっ
た。
塩やポリペプトンの添加量が異常に多いばかりか、必ず
しも良好な増殖を行ない、製造することが出来なかっ
た。
この発明は上述の背景に基づきなされたものであり、そ
の目的とするところは、産業上有用であり、脂肪分解酵
素を産生するスタフィロコッカス・エピデルミデイスの
増殖を促進させることができる増殖法およびその方法に
用いることができる培養基を提供することである。
の目的とするところは、産業上有用であり、脂肪分解酵
素を産生するスタフィロコッカス・エピデルミデイスの
増殖を促進させることができる増殖法およびその方法に
用いることができる培養基を提供することである。
（課題を解決するための手段） 発明者らは、上記課題を解決のために種々の研究開発を
行なった結果、可溶化剤とともに用いたオレイン酸や、
そのナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩を、少
量培地に添加することで意外にも顕著な増殖促進がある
との知見を得、この発明の目的達成に有効であることを
見いだし、この発明を完成するに至った。
行なった結果、可溶化剤とともに用いたオレイン酸や、
そのナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩を、少
量培地に添加することで意外にも顕著な増殖促進がある
との知見を得、この発明の目的達成に有効であることを
見いだし、この発明を完成するに至った。
すなわち、この発明によるスタフィロコッカス・エピデ
ルミデイスの増殖法は、オレイン酸およびそのナトリウ
ム塩、カリウム塩、アンモニウム塩からなる群から運ば
れた可溶化された少なくとも１種の促進剤を標準寒天培
地に少量添加してなる培養基で、スタフィロコッカス・
エピデルミデイスを、増殖することを含むことを特徴と
するものである。
ルミデイスの増殖法は、オレイン酸およびそのナトリウ
ム塩、カリウム塩、アンモニウム塩からなる群から運ば
れた可溶化された少なくとも１種の促進剤を標準寒天培
地に少量添加してなる培養基で、スタフィロコッカス・
エピデルミデイスを、増殖することを含むことを特徴と
するものである。
この発明の好ましい態様において、培養基として、促進
剤を標準寒天培地に少量添加してのち、115乃至125℃、
15乃至25分間オートクレーブ処理されたものとすること
ができる。
剤を標準寒天培地に少量添加してのち、115乃至125℃、
15乃至25分間オートクレーブ処理されたものとすること
ができる。
この発明の増殖方法に用いられるスタフィロコッカス・
エピデルミデイス増殖用培養基は、オレイン酸、そのナ
トリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩からなる群か
ら選ばれた可溶化された少なくとも１種の促進剤を、標
準寒天培地に少量添加してなることを特徴とするもので
ある。
エピデルミデイス増殖用培養基は、オレイン酸、そのナ
トリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩からなる群か
ら選ばれた可溶化された少なくとも１種の促進剤を、標
準寒天培地に少量添加してなることを特徴とするもので
ある。
この発明の好ましい態様において、促進剤のオレイン酸
またはその塩の添加量は、培養基全体に対して0.001〜
2.0重量％である。
またはその塩の添加量は、培養基全体に対して0.001〜
2.0重量％である。
以下、この発明をより具体的に説明する。
この発明において増殖される対象菌は、スタフィロコッ
カス・エピデルミデイスである。このスタフィロコッカ
ス・エピデルミデイスは、公知の菌であり、当業者が容
易に入手できるものである。例えば、ヒトの表皮（皮脂
の分泌が多い部位の表皮が望ましい）の一定面積を減菌
水で湿らせた減菌綿棒で拭き取り、それを減菌したペプ
トン水（１％）中に洗い出して、洗い出し液の1mlを標
準寒天培地上に分散し、35℃にて24時間乃至48時間培養
することで、円形ないしは多少不整系のドーム状で表面
が滑面ないしは顆粒状を呈した白色のコロニーとして得
られ、得られたコロニーを数度に亘って釣菌して標準寒
天培地で純粋培養し、スタフィロコッカス・エピデルミ
デイスを容易に入手できる。このように入手した菌は、
この菌の同定用試薬（例えば、「IDキットSP−18」、日
水製薬製）を用いて簡単に確認できる。また、この菌の
タイプカルチャーは、理化学研究所微生物系統保存施
設、東京大学医科学研究所微生物株保存施設、東京大学
応用微生物研究所、発酵研究所などに、微生物の受託番
号JCM−2414、IFO−03726、ATCC−31432として登録さ
れ、これから容易に入手できる。
カス・エピデルミデイスである。このスタフィロコッカ
ス・エピデルミデイスは、公知の菌であり、当業者が容
易に入手できるものである。例えば、ヒトの表皮（皮脂
の分泌が多い部位の表皮が望ましい）の一定面積を減菌
水で湿らせた減菌綿棒で拭き取り、それを減菌したペプ
トン水（１％）中に洗い出して、洗い出し液の1mlを標
準寒天培地上に分散し、35℃にて24時間乃至48時間培養
することで、円形ないしは多少不整系のドーム状で表面
が滑面ないしは顆粒状を呈した白色のコロニーとして得
られ、得られたコロニーを数度に亘って釣菌して標準寒
天培地で純粋培養し、スタフィロコッカス・エピデルミ
デイスを容易に入手できる。このように入手した菌は、
この菌の同定用試薬（例えば、「IDキットSP−18」、日
水製薬製）を用いて簡単に確認できる。また、この菌の
タイプカルチャーは、理化学研究所微生物系統保存施
設、東京大学医科学研究所微生物株保存施設、東京大学
応用微生物研究所、発酵研究所などに、微生物の受託番
号JCM−2414、IFO−03726、ATCC−31432として登録さ
れ、これから容易に入手できる。
この発明に用いられる培養基は、オレイン酸、そのナト
リウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩からなる群から
選ばれた可溶化された少なくとも１種の促進剤を、標準
寒天培地に少量添加してなるものである。
リウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩からなる群から
選ばれた可溶化された少なくとも１種の促進剤を、標準
寒天培地に少量添加してなるものである。
促進剤として添加されるオレイン酸の塩としては、例え
ばナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などがあ
る。
ばナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などがあ
る。
上記の促進剤は、１種もしくは２種以上の組合せで用い
ることもできる。その組合せは、目的に応じて適宜選択
変更することができる。
ることもできる。その組合せは、目的に応じて適宜選択
変更することができる。
この発明における培養基に用いられる基本培地組成は、
標準寒天培地（日本薬局細菌・真菌検査用培地）の組成
および、その培地組成に類するものである。
標準寒天培地（日本薬局細菌・真菌検査用培地）の組成
および、その培地組成に類するものである。
この発明の培養基は、上記の成分以外に、目的に応じて
種々の添加剤を適宜添加することが出来る。そのような
添加剤として、可溶化剤、緩衝剤、促進補助剤などがあ
る。
種々の添加剤を適宜添加することが出来る。そのような
添加剤として、可溶化剤、緩衝剤、促進補助剤などがあ
る。
この培養基への促進剤の添加量は、培養条件に応じて適
宜選択変更することが出来るが、少量でよい。例えば、
促進剤としてオレイン酸またはその塩を用いる場合、そ
の添加量は、培養基全体に対して、0.001〜2.0重量％で
ある。
宜選択変更することが出来るが、少量でよい。例えば、
促進剤としてオレイン酸またはその塩を用いる場合、そ
の添加量は、培養基全体に対して、0.001〜2.0重量％で
ある。
この発明における培養基の製造方法の一例について説明
する。
する。
まず、所定量の促進剤を、可溶化剤とともに混合撹拌し
て溶解する。次いで、所定量のこの混合可溶化物を秤取
し、精製水を加えて所定全量とする。
て溶解する。次いで、所定量のこの混合可溶化物を秤取
し、精製水を加えて所定全量とする。
この溶液を、加熱処理前の所定量の標準寒天培地に加
え、例えば、115乃至125℃の温度、15乃至25分間、オー
トクレーブ処理する。このようにして培養基を製造する
ことが出来る。
え、例えば、115乃至125℃の温度、15乃至25分間、オー
トクレーブ処理する。このようにして培養基を製造する
ことが出来る。
調製された培養基を用いて、スタフィロコッカス・エピ
デルミデイスを通常の手法を用いて増殖することが出来
る。
デルミデイスを通常の手法を用いて増殖することが出来
る。
（発明の効果） 以上の説明および以下の実施例から実証されるように、
この発明による増殖法およびその方法に用いることがで
きる培養基によれば、次の効果を奏する。
この発明による増殖法およびその方法に用いることがで
きる培養基によれば、次の効果を奏する。
（１）産業上有用であり、脂肪分解酵素を産生するスタ
フィロコッカス・エピデルミデイスを迅速にかつ多量に
増殖させることができる。
フィロコッカス・エピデルミデイスを迅速にかつ多量に
増殖させることができる。
（２）微生物に由来する脂肪分解酵素などは、医療、臨
床診断検査、食品加工などの種々の分野で応用されてい
る。
床診断検査、食品加工などの種々の分野で応用されてい
る。
従来は、アスペルギルス属、ペニシリウム属、ムコー
属、リゾプス属、カンジタ属などの真菌や酵母に由来す
るものが主であり、細菌ではシュードモナス属、バチル
ス属に由来するものが知られている。これらの微生物の
産生するリパーゼは、おもにトリグリセライドのα位に
作用するものが多いが、とりわけアスペルギルス・ニガ
ー、アスペルギルス・フラパス、カンジダ・シリンドラ
セア、およびスタフィロコッカス・エピデルミデイスと
類似性の高いスタフィロコッカス・アウレウスの産生す
るリパーゼは、トリグリセライドのα位、β位のいずれ
にも作用することが知られている（一島英治編「食品工
業と酵素」朝倉書店）。
属、リゾプス属、カンジタ属などの真菌や酵母に由来す
るものが主であり、細菌ではシュードモナス属、バチル
ス属に由来するものが知られている。これらの微生物の
産生するリパーゼは、おもにトリグリセライドのα位に
作用するものが多いが、とりわけアスペルギルス・ニガ
ー、アスペルギルス・フラパス、カンジダ・シリンドラ
セア、およびスタフィロコッカス・エピデルミデイスと
類似性の高いスタフィロコッカス・アウレウスの産生す
るリパーゼは、トリグリセライドのα位、β位のいずれ
にも作用することが知られている（一島英治編「食品工
業と酵素」朝倉書店）。
上述のような菌体由来のリパーゼの利用状況にあって、
スタフィロコッカス・エピデルミデイスを効果的に増殖
することができるこの発明は、医療、臨床診断検査、食
品加工などの種々の分野で応用される増殖菌由来の脂肪
分解酵素を効率的に製造する手段を提供することにな
る。
スタフィロコッカス・エピデルミデイスを効果的に増殖
することができるこの発明は、医療、臨床診断検査、食
品加工などの種々の分野で応用される増殖菌由来の脂肪
分解酵素を効率的に製造する手段を提供することにな
る。
（実施例） 以下に、この発明を実施例に基づき具体的に説明する
が、この発明はその要旨を越えない限り以下の例に限定
されるものではない。
が、この発明はその要旨を越えない限り以下の例に限定
されるものではない。
実験例１ 促進剤のオレイン酸0.5gを、10gの可溶化剤のＴ−80と
ともに混合撹拌して溶解した。次いで、この混合可溶化
物1.05gを秤取し、精製水を加えて全量105gとした。
ともに混合撹拌して溶解した。次いで、この混合可溶化
物1.05gを秤取し、精製水を加えて全量105gとした。
この溶液10gを、加熱処理前の標準寒天培地90gに加え、
121℃の温度、20分間、オートクレーブ処理した。この
ようにして培養基を調製した。得られた培養基の組成を
下記に示す。
121℃の温度、20分間、オートクレーブ処理した。この
ようにして培養基を調製した。得られた培養基の組成を
下記に示す。
調製された培養基に、スタフィロコッカス・エピデルミ
デイスを１白金耳塗抹して35℃で24時間培養し、そのコ
ロニーをストリックで観察した。
デイスを１白金耳塗抹して35℃で24時間培養し、そのコ
ロニーをストリックで観察した。
そのコロニーの状態を示す写真を参考写真１の下側に示
す。
す。
比較のために、Ａの増殖促進成分を添加していない標準
寒天培地だけの対照培養基で培養した。そのコロニーの
状態を示す写真を参考写真１の上側に示す。
寒天培地だけの対照培養基で培養した。そのコロニーの
状態を示す写真を参考写真１の上側に示す。
対照と比較して明らかに増殖促進効果が認められた。結
果を第３表に示す。
果を第３表に示す。
実験例２ 促進剤のオレイン酸ナトリウム10gを、精製水70gに溶解
させ、10gの可溶化剤のＴ−80とともに混合撹拌し、次
いで、更に、精製水を加えて全量100gとした。
させ、10gの可溶化剤のＴ−80とともに混合撹拌し、次
いで、更に、精製水を加えて全量100gとした。
この溶液10gを、加熱処理前の標準寒天培地90gに加え、
121℃の温度、20分間、オートクレーブ処理した。この
ようにして培養基を調製した。得られた培養基の組成を
下記に示す。
121℃の温度、20分間、オートクレーブ処理した。この
ようにして培養基を調製した。得られた培養基の組成を
下記に示す。
調製された培養基に、スタフィロコッカス・エピデルミ
デイスを１白金耳塗抹して35℃で24時間培養し、そのコ
ロニーをストリックで観察した。
デイスを１白金耳塗抹して35℃で24時間培養し、そのコ
ロニーをストリックで観察した。
そのコロニーの状態を示す写真を参考写真２の下側に示
す。
す。
比較のために、Ａの増殖促進成分を添加していない標準
寒天培地だけの対照培養基で培養した。そのコロニーの
状態を示す写真を参考写真２の上側に示す。
寒天培地だけの対照培養基で培養した。そのコロニーの
状態を示す写真を参考写真２の上側に示す。
対照と比較して明らかに増殖促進効果が認められた。結
果を第３表に示す。
果を第３表に示す。
Claims (3)
- 【請求項１】オレイン酸およびその塩からなる群から選
ばれた可溶化された少なくとも１種の促進剤を標準寒天
培地に培養基全体に対して0.001〜2.0重量％添加してな
る培養基で、スタフィロコッカス・エピデルミデイス
を、増殖することを含むことを特徴とするスタフィロコ
ッカス・エピデルミデイスの増殖法。 - 【請求項２】培養基が、促進剤を標準寒天培地に少量添
加してのち、115乃至125℃、15乃至25分間オートクレー
ブ処理されたものである請求項１記載の増殖法。 - 【請求項３】オレイン酸およびその塩からなる群から選
ばれた可溶化された少なくとも１種の促進剤を、標準寒
天培地に少量添加してなるスタフィロコッカス・エピデ
ルミデイス増殖用培養基。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1111854A JPH0740919B2 (ja) | 1989-04-28 | 1989-04-28 | スタフィロコッカス・エピデルミデイスの増殖法および培養基 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1111854A JPH0740919B2 (ja) | 1989-04-28 | 1989-04-28 | スタフィロコッカス・エピデルミデイスの増殖法および培養基 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02291259A JPH02291259A (ja) | 1990-12-03 |
| JPH0740919B2 true JPH0740919B2 (ja) | 1995-05-10 |
Family
ID=14571827
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1111854A Expired - Fee Related JPH0740919B2 (ja) | 1989-04-28 | 1989-04-28 | スタフィロコッカス・エピデルミデイスの増殖法および培養基 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0740919B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2019203692B2 (en) * | 2018-08-30 | 2024-12-12 | Kenvue Brands Llc | Topical composition containing glycerin and yeast extract |
| CN115261274B (zh) * | 2022-08-05 | 2023-11-21 | 天康制药股份有限公司 | 一种表皮葡萄球菌高密度发酵培养基及其发酵方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE8615617U1 (de) * | 1986-06-10 | 1986-09-18 | Tesch, Klaus, 2000 Hamburg | Vorrichtung zum gegenseitigen Zentrieren und Spannen von zwei miteinander zu verschweißenden Rohrkörpern |
| JPS632594A (ja) * | 1986-06-19 | 1988-01-07 | Mitsubishi Heavy Ind Ltd | 突合せ溶接の裏当固定方法 |
-
1989
- 1989-04-28 JP JP1111854A patent/JPH0740919B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02291259A (ja) | 1990-12-03 |
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