JPH0748403A

JPH0748403A - 丹参由来多糖類、その製造法および用途

Info

Publication number: JPH0748403A
Application number: JP5199275A
Authority: JP
Inventors: Kokuki Kanou; 国驥叶; Junichi Kajiwara; 淳一梶原; Kiyoshi Kirihara; 清桐原; Kazuo Kato; 和夫加藤; Hiroko Abe; 博子阿部
Original assignee: NIPPON CHEM RES KK; JCR Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: NIPPON CHEM RES KK; JCR Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 1993-06-03
Filing date: 1993-07-15
Publication date: 1995-02-21
Anticipated expiration: 2016-04-25
Also published as: JP3161882B2

Abstract

(57)【要約】【目的】丹参の新規な有効成分を提供する。【構成】丹参から水または水性溶媒で抽出されうる下
記の特性を有する多糖類Ａ．糖含量：６０〜１００％（１）糖組成：ウロン酸４０〜８０％中性糖１０〜３０％（２）中性糖組成：ラムノース０〜１５％グルコース０〜１５％ガラクトース２５〜５５％アラビノース３０〜６０％マンノース０〜１５％Ｂ．分子量１５０，０００〜３００，０００丹参の水性抽出液を多孔性ポリマー樹脂を通過され限外
濾過、ゲル濾外クロマトグラフィーで精製する上記多糖
類の製法，および上記多糖類よりなるネフローゼ症候群
の寛解剤。【効果】本発明に新規な多糖類は水溶性で副作用が少
く、尿蛋白の排出を抑制してネフローゼ症候群の寛解や
肝障害症状の改善に用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、老人はもとより近年若
年層で増加傾向にある腎臓疾患、とりわけ慢性腎不全に
至る前段階であるネフローゼ症候群と診断された患者に
対し、あるいはウイルス性及び薬物性肝炎等の肝障害の
症状を有する患者に対し、通院可能で安全な経口及び筋
肉内投与治療剤を提供する発明に関する。

【０００２】

【従来の技術】丹参は中国では、血液循環，血行停止の
改善に良いとされ伝統的に使用されている薬草で、近
年、血管拡張作用（大浦彦吉：和漢医薬学会誌．，５：
２２７−２３７．，１９８８．）、降圧作用（中山医学
院論：医歯薬出版，東京．，２５７−２５８．，１９８
０．）、抗凝血作用（羅厚蔚ら：ＡｃｔａＰｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａＳｉｎｉｃａ．，２３（１１）：８
３０−８３４．，１９８８．）、細胞内コレステロール
の合成抑制作用（ＳｕｎＸｉ−ｍｉｎｇ；中草薬．，
２２（１）：２０−２３．，１９９１．）、肝細胞保護
（戚心広ら：中西医結合雑誌．，１１（２）：１０２−
１０４．，１９９１．）及びラジカル消去作用（胡天
喜：上海中医薬雑誌，９：２８−３０．，１９８８．）
などの多彩な生理活性作用があること、また腎機能の改
善（大浦彦吉：第二回和漢薬の医学薬学的研究に関する
日中シンポジウムｐｐ．１４８−１５７，１９８
８．）、慢性腎疾患及び尿毒症の患者に対して有効（張
鏡人：上海中医薬雑誌．，１．１７−１８．，１９８
１．）であることが内外において報告されているが、そ
の本質については何等言及されていないか、言及されて
いても本願発明の物質とは全く異なる低分子物質であ
る。

【０００３】微小変化型ネフローゼの内科的な治療薬と
して、合成薬であるステロイド剤或いは抗血小板薬であ
るジピリダモールが用いられているが、長期間使用しな
くてはならず、若年層に投薬する際には特に満月様顔
貌，月経不順，めまい，頭痛，悪心，嘔吐で、重篤な場
合には感染症，消化管出血，代謝異常，骨粗症，血栓
症，副腎不全，精神障害などの副作用が懸念されてい
る。

【０００４】本発明と同じ原料からの腎疾患への治療薬
の研究は盛んに行われているが、低分子のフェナントレ
ンキノン類であるタンシノン類似物並びにカフェイン酸
４量体であるマグネシウムリトスペルミン酸Ｂ等が単離
されているが（Ｔ．Ｙｏｏｚａｗａ，Ｈ．Ｙ．Ｃｈｕｎ
ｇ，Ｈ．Ｏｕｒａ，Ｇ．Ｎｏｎａｋａ，ａｎｄＩ．Ｎ
ｉｓｈｉｏｋａ，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，
３６，３１６（１９８８））、何れも有機溶媒含有下で
抽出される脂溶性の高い物質だけであり、まだ臨床応用
には至っていない。

【０００５】また、肝炎にはウイルス性、薬物性のもの
もあるがウイルス性のものが大半を占めており、それら
の治療薬としてはインターフェロン、インターロイキン
２のようなＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｍｏｄｉｆｉｅｒ（ＢＲＭ）、グリチルリチンの靜注用
注射剤であるネオミノファーゲンＣなどが用いられてい
る。しかしながらＢＲＭには発熱等の副作用が見られる
ことにより長期投与には問題がある。またグリチルリチ
ンは基本的には抗炎症剤であり、長期に使用する場合は
血圧、電解質濃度の管理が必要となる。この他にも生薬
成分であるサイコサポニン、サポニン、ゴミシンなどが
知られているが、いずれも臨床応用されるには至ってい
ない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】腎疾患は大別して、糸
球体由来の原発性とそれ以外の疾患に由来する続発性に
分類され、前者が約８０％以上を占め、低年齢層ほど多
い（約９０％）¹⁵⁾。病理組織所見からは微小変化群，
単状糸球体硬化症，膜性腎症，メサンギゥム増殖性腎症
（ＩｇＡ腎症，非ＩｇＡ腎症），膜性増殖糸球体腎炎，
半月体形成糸球体腎炎などに分類される。蛋白尿は臨床
所見の特徴として、いずれの組織学的病型にも共通して
認められ、重篤な場合にはネフローゼ症候群として診断
されている¹⁶⁾。また近年腎臓疾患、特に腎臓の器質的
な衰えにより誘発される疾患は老人にとどまらず若年層
に増加しつつあるため、器質の改善から疾患を治療する
副作用発現の少ない生薬，漢方薬成分で水溶性のある経
口或いは筋肉内に投薬し治療する薬剤の開発が望まれて
いる。

【０００７】また、肝炎は大別して、ウイルス性のもの
とアルコール等の薬物によるものがあるが、Ｂ型及びＣ
型肝炎ウイルスによるものが圧倒的に多い。近年治療薬
として特にインターフェロンがＣ型肝炎に対して有効で
あることが報告されており、使用頻度も高まってきてい
る（飯野司郎ら：基礎と臨床．２６：３３９，１９９
２；鈴木宏ら：肝・胆・膵．２３：１０６５，１９９
１）。しかしながら、短期投与で発熱等のインフルエン
ザ様症状が表れ、長期投与でも体重減少、下痢、嘔吐、
不整脈、脱毛、自己免疫異常等の副作用が見られる。ま
たこれらの薬剤はすべて注射剤であることからより簡便
に使用できる新たな治療薬あるいはインターフェロン等
との併用補助薬として副作用発現の少ない生薬、漢方薬
成分で水溶性のある経口或いは筋肉内に投与し治療する
薬剤の開発が望まれている。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、広く繁用
されている蛋白尿排泄を顕著に起こし、さらに腎臓の器
質変化を示すことで良く知られるピューロマイシンで惹
起したラットのネフローゼ症候群モデルおよび肝障害モ
デルを利用して鋭意検討した結果、丹参の水抽出物より
上記モデル対して有効な多糖類を見いだした。

【０００９】本発明はこの知見に基づくもので、（Ｉ）丹参から水または水性溶媒で抽出されうる下記の
特性を有する多糖類Ａ．糖含量：６０〜１００％（１）糖組成：ウロン酸４０〜８０％中性糖１０〜３０％（２）中性糖組成：ラムノース０〜１５％グルコース０〜１５％ガラクトース２５〜５５％アラビノース３０〜６０％マンノース０〜１５％Ｂ．分子量１５０，０００〜３００，０００（II）丹参を水または水性溶媒で抽出し、抽出液から残
渣を除去した液を無極性多孔性ポリマー樹脂を通過さ
せ、限外濾過で濃縮し、ついで限外濾過クロマトグラフ
ィーに付することを特徴とする上記の多糖類の製造法お
よび（III)上記の多糖類よりなるネフローゼ症候群の寛解剤
である。

【００１０】丹参は植物丹参（Ｓａｌｖｉａｍｉｌｔ
ｉｏｒｒｈｉｚａＢｕｎｇｅ）の根および根状の茎で
あるが、同属植物の南丹参（Ｓ．ｂｏｗｌｅｙａｎａ
Ｄｕｎｎ）、甘粛丹参（Ｓ．ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ
Ｍａｘｉｍ）、雲南丹参（Ｓ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ
Ｃ．Ｈ．Ｗｒｉｇｈｔ）等の根も用いられ、本発明で
はこれらを総称して丹参という。

【００１１】本発明で用いられる丹参の産地は特に限定
されるものではないが、好ましくは中国，四川地区産の
丹参が本発明の多糖類を効率よく抽出精製することがで
きる。

【００１２】丹参はできるだけ小片にして抽出するのが
望ましい。抽出溶媒として水または水性溶媒が用いら
れ、水性溶媒としてはリン酸緩衝液、酢酸緩衝液等の緩
衝液または食塩等の塩類水溶液を用いるのが好ましい。

【００１３】抽出溶媒のｐＨは約４〜約９に調整するの
が好ましい。抽出は約５０〜約１００℃で行うのが好ま
しく、さらに好ましくは７０〜９０℃である。たとえ
ば、丹参を予め５０〜１００℃好ましくは７０〜９０℃
にした温水或いはｐＨ４〜９の範囲にある緩衝液または
塩類溶液に入れるか、入れたあと温浴中などで所定の温
度になるまで加温して抽出する。

【００１４】かくして、１〜８時間、好ましくは３〜５
時間抽出すれば粗出液が得られる。抽出液中に混在する
丹参の残渣は目の粗い濾布やヌッチェなどで濾去するこ
とができる。

【００１５】残渣を除去した抽出液は水で平衡化した無
極性の多孔性ポリマー樹脂を充填材とするカラムクロマ
トグラフィーによりさらに精製する。このポリマー樹脂
としては、たとえばＨＰ−２０およびＭＣＩ−ゲル（三
菱化成社製）やアンバーライトＸＡＯ−２（オルガノ社
製）などが挙げられる。

【００１６】丹参の活性成分についてＭＣＩ−ゲルの吸
着分画で、５０％メタノール溶液で溶出される低分子物
質であるマグネシウムリトスペルミン酸Ｂが報告されて
おり、発明者らも、同様の分画に蛋白尿排泄を抑制する
活性のあることを確認した。しかし、非吸着部分を含め
溶出された全画分について、詳細に蛋白尿排泄を抑制す
る作用を試験した結果、当初の予想に反して、素通り画
分にも上記作用を示す成分のあることが判明し、本発明
の物質の発見の端緒となった。この時点で、この処理か
らの素通り画分は、極性が高いことが予想され、又、蛋
白質に固有の紫外部吸収スペクトルを示さないから蛋白
質以外の成分であろうと思われた。

【００１７】素通り画分の一部を、次いで２枚の限外ろ
過膜（カットオフ，分子量３００，０００及び５０，０
００の）システムに通し、濃縮且つ精製ステップの検討
を行った。実際には分子量３００，０００以上、５０，
０００〜３００，０００及び５０，０００以下の各物質
群に分け、各成分についてピューロマインシン惹起ラッ
トモデルを用いて、蛋白尿排泄を抑制する活性を試験し
た。その結果、強い活性が分子量５０，０００〜３０
０，０００に範囲にある分画に見られ、５０，０００以
下にも弱い活性が見られた。

【００１８】そこで、先の素通り画分の濃縮に分子量３
０００のカットオフ，限外ろ過膜を用いた。この工程で
の限外ろ過膜はカットオフのサイズが同じであれば何れ
の種類のものでも本発明の物質の濃縮に用いることが可
能である。

【００１９】次に濃縮液中の活性成分をより狭い分子量
範囲に限定するために、ゲルろ過カラムクロマトグラフ
ィーによる精製を行った。一般に蛋白質などの場合に
は、ゲルろ過クロマトグラフィーの担体としては、セフ
ァデックス及びセファロース類（ファルマシア社製），
セルロファイン（生化学工業社製），バイオゲル（バイ
オラッド社製）などが使用されており、本発明の物質の
クロマトグラフィーにも上記のものが使用できるが、好
ましくは合成手段によって調製された材質によるクロマ
ト材、例えばバイオゲルが本発明の物質の精製に適して
いる。クロマト材には編目サイズ、即ち排除限界により
各種のものがあるが、分画範囲として１００００〜３０
０，０００のものであればいずれでも構わない。発明者
らは、好んでバイオゲルＰ−３０，−６０，−１００、
中でもバイオゲルＰ−６０を使用した。そこで、濃縮液
を水で平衡化したバイオゲルＰ−６０を充填したカラム
に通した。モニターは暫定的に２８０ｎｍの吸収で行
い、吸収のある分画と吸収のない分画をカラム容量の２
倍量まで数分画に分け、次いでピューロマイシン惹起ラ
ットモデルでの蛋白尿排泄の抑制作用を試験したところ
高分子領域に活性を有する多糖類が溶出されていること
がわかった。

【００２０】この多糖類は過ヨウ素酸酸化あるいは還元
処理すると活性を失う。また本物質は血小板凝集抑制作
用，赤血球膜保護作用を有することがｉｎｖｉｔｒｏ
の実験結果より明らかになった。さらにピューロマイシ
ン惹起ネフローゼモデルラットまたは四塩化炭素誘発肝
障害モデルラットにおいてはラジカルが関与することが
知られているが、本物質には直接ラジカルを消去する作
用はないことがＥＳＲを用いた実験により示された。

【００２１】試験例および実施例においては、丹参の抽
出液を無極性ポーラスポリマー樹脂及びゲルろ過クロマ
トグラフィーで精製（精製画分）した多糖類の特性を下
記のように試験した。

【００２２】（１）全糖含量：フェノール硫酸法（Ｈｏ
ｄｇｅ，Ｊ．Ｅ．ａｎｄＨｏｆｒｅｉｔｅｒ，Ｂ．
Ｔ．（１９６２）ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＣａｒｂｏｈ
ｙｄｒａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ）．Ｖｏｌ．１，ｐ．３３８）試験溶液０．５ｍｌを試験管にとり５％（ｗ／ｖ）フェ
ノール液０．５ｍｌを加え、濃硫酸２．５ｍｌを速やか
に液面に直接に加えよくまぜ、室温に２０分保った後、
４８０ｎｍの吸光度を測定する。標準溶液にはグルコー
ス（１０〜９０μｇ／ｍｌ）水溶液を用いた。

【００２３】（２）ウロン酸含量：メタヒドロキシジフ
ェニル法（Ｂｌｕｍｅｎｋｒａｎｔｚ，Ｎ．ａｎｄＡ
ｓｂｏｅＨａｎｓｅｎ，Ｇ．（１９７３）Ａｎａｌ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．５４，４８４−４８９．）試料溶液０．２ｍｌに０．０１２５Ｍホウ酸ナトリウム
の濃硫酸溶液１．２ｍｌを添加し、氷冷後攪はんする。
１００℃で５分間処理した後氷冷し、０．１５％メタヒ
ドロキシジフェニルの０．５％水酸化ナトリウム溶液２
０μｌを加え、５２０ｎｍの吸光度を測定する。標準溶
液にはガラクツロン酸溶液を用いた。

【００２４】（３）中性糖含量（アルジトールアセテー
ト−ＧＣ−ＭＳ法）（Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ，Ｌ．Ｇ．ａ
ｎｄＰｉｐｅｒ，Ｃ．Ｖ．（１９７０）Ｔａｐｐｉ．
５３，２５７−２６０．）

【００２５】丹参の精製画分５０ｍｇを７２％（ｖ／
ｖ）硫酸３ｍｌに溶かし、３０℃，１時間処理したもの
に蒸留水８４ｍｌを加え、１２０℃で１時間オートクレ
ープする。内部標準としてイノシトール４ｍｇを加え、
その３０ｍｌを水酸化バリウムを加えてｐＨ５．５に調
整した後、遠心分離して上清を得る。その２５ｍｌに水
素化ホウ素ナトリウム８０ｍｇを添加し、室温で２時間
処理後、酢酸で反応をとめる。濃縮乾燥後、蒸留水に溶
かしＤＥＡＥセファデックスカラムにかけ素通り画分を
集める。濃縮乾燥後、無水酢酸とピリジンによりアセチ
ル化した後、ジクロルメタンと１Ｎ塩酸の混液で抽出す
る。有機層を蒸留水で洗った後、濃縮し、アセトンに溶
かしてガスクロマトグラフィーマススペクトロメトリー
（ＧＣ−ＭＳ）にて定量した（カラム：Ｓｕｐｅｌｃｏ
糖分析用キャピラリーカラムを使用）。また標品は上記
の還元操作により処理して同様に分析した。

【００２６】（４）分子量の測定トーソーＨＰＬＣシステム（トーソー社製）にアサヒパ
ックＧＳ−５２０（旭化成社製）カラム（７．６ｍｍＩ
Ｄｘ５００ｍｍ）を接続し、ミリＱ水を用いて、本願物
質試料溶液１０μｌをカラムに付加して分子量を測定
（温度：室温、流速：０．５ｍｌ／分、検出：ＲＩＤ）
した。分子量マーカーにはアミロースキット（中埜酢店
社製）：分子量１０２００，３０１００，７５２００，
１１１４００，３６４２００を用い、これらの溶出パタ
ーンから得た検量線より、本願物質の分子量を算出し
た。

【００２７】（５）ピューロマイシン惹起ネフローゼ症
候群モデルラットによる評価１）ネフローゼ症候群モデルラットの作製：ウィスター
系雌性ラット（約９週令、体重約１５０ｇ）にピューロ
マイシンアミノヌクレオシド（：以下ピューロマイシ
ン、シグマ社製）６０ｍｇ／ｋｇを１回、頸静脈内投与
してネフローゼ症候群モデルラットを作製した（東條静
夫ら：ネフローゼ症候群京極方久編，ソフトサイエ
ンス社出版，４７９−４８８，１９８４）。

【００２８】２）試料溶液の投与：ピューロマイシン投
与の開始の日から１日１回各試料溶液を胃カニューレを
通じて２１日間経口或いは筋肉内投与した。陰性対照群
には注射用水を、陽性対照群にはジピリダモール溶液を
用いた。

【００２９】３）尿蛋白質量の測定：尿蛋白質量は、ピ
ューロマイシン投与終了後５日目から、２〜３日おきに
２４時間尿をラット代謝ケージを用いて採尿し、尿量を
計測した。次いで遠心分離（３０００ｒｐｍｘ１０分）
して得た上清１ｍｌにスルホサリチル酸３ｍｌを加え、
室温で１０分間放置した後、波長６６０ｎｍの吸収を測
定し、検量線より尿中のタンパク質濃度を求め、更に尿
容量を乗じて尿中への総蛋白質排泄量を算出した。検量
線作成に当たっては牛血清アルブミン（シグマ社製）を
標準タンパク質に用いた。

【００３０】４）血清コレステロール，血清アルブミ
ン，血清中の総蛋白質量及び血清過酸化脂質の測定：ピ
ューロマイシン投与終了後７日目，１４日目，２１日目
に各群のラットをエーテル麻酔を施した後、静脈より採
血し、血清中のコレステロール１アルブミン，総蛋白質
量及び過酸化脂質量を測定した（いずれも和光純薬工業
社製）。

【００３１】（６）四塩化炭素誘発肝障害モデルによる
評価１）肝障害モデルの作成：Ｗｉｓｔａｒ系雌性ラット
（９−１１週令、体重１６０ｇ前後）に対し、オリーブ
油に等量の割合で混和した四塩化炭素（和光純薬製）溶
液１．５ｍｌ／ｋｇを腹空内に１回投与することにより
作成した。（炎症学書：炎症炎症動物実験法、実験的肝
繊維症．医学書院出版，２５３−２７７）

【００３２】２）試料溶液の投与：四塩化炭素投与３日
前から投与前日まで試料を１日１回筋肉内投与あるいは
７日前から投与前日まで経口投与を行った。陰性対照群
には注射用水を投与した。

【００３３】３）血清生化学的検査：四塩化炭素投与２
４時間後にエーテル麻酔下で開胸、心臓より２ｍｌの血
液を採血し、常温に１時間放置後、遠心分離して血清を
得た。血清トランスアミナーゼ（ＧＯＴ：ｇｌｕｔａｍ
ｉｃｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃｔｒａｎｓａｍｉｎａ
ｓｅ，ＧＰＴ：ｇｌｕｔａｍｉｃｐｙｒｕｖｉｃｔｒ
ａｎｓａｍｉｎａｓｅ）活性の測定は和光純薬製キット
を用いて行った。

【００３４】７）統計解析：それぞれの測定データはす
べて平均±Ｓ．Ｅで示し、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓのｔ検定
により統計解析した。

【００３５】下記の実施例に示されるように、本発明の
多糖類は動物実験でネフローゼ症候群の寛解や肝障害症
状の改善に有効であり、ネフローゼ症候群の寛解剤また
は肝障害症状改善剤として、通常成人１人当たり１日
量、経口的に約１０〜１００ｍｇ、筋肉内注射として約
０．５〜１０ｍｇ投与することができる。

【００３６】

【実施例】以下に実施例および試験例を挙げて本発明を
さらに説明する。実施例１中国，四川地区産の丹参の根部の小片１０ｋｇに水８０
Ｌを加え、投げ込みヒーターを投じ８０℃にした後、３
時間攪はんしながら抽出した。抽出液中の根部残渣はヌ
ッチェでろ過して取り除き、回収した根部残渣に更に水
８０Ｌを加えて１回目と同様に処理して再抽出液を得
た。１回目と２回目の抽出液（１３０Ｌ）を合わせ、減
圧下、４０℃でエバポレーターを用いて濃縮し濃縮液
（１０Ｌ）を得た。

【００３７】次に、濃縮液をＨＰ−２０（４Ｌ，三菱化
成社製）を充填したカラム（１１×４５ｃｍ）に付加し
た。平衡化液及び展開液には水を用い、室温下でクロマ
トグラフィーを行い、素通り分画及び水洗浄分画（非吸
着）液を回収した。カラムは５０％メタノール及びアセ
トニトリルで洗浄した後、最後に水に完全に置換して再
使用した。上記非吸着画分は繰り返し３回程同様に処理
して完全に非吸着分画の液（５５Ｌ）を得た。この全非
吸着液は分子量カットオフ３０００の限外ろ過膜を装備
した限外ろ過装置ＳＥＰ−１０１３（旭化成）を用いて
限外ろ過濃縮し、通過液（分子量約３０００以下，Ｓ
ＥＰ−ＯＵＴ）と非通過液（分子量約３０００以上，
ＳＥＰ−ＩＮ）を得た。濃縮した非通過液（ＳＥＰ−Ｉ
Ｎ）を水で平衡化したバイオゲルＰ−６０を充填したカ
ラム（１．５×１００ｃｍ）に付加し、水を展開液とし
て用いクロマトグラフィーを行った。モニターは暫定的
に波長２８０ｎｍで吸収を測定し、横軸に分画番号を、
縦軸に各分画液の吸収を記載したグラフを作成し、吸収
を示さない分画を中心に全糖の測定を行い、その測定結
果を同じグラフに記載した（図１）。

【００３８】目的の多糖類成分は分画番号１１から２２
の分画液（ＡＦ）に得られ、ついで凍結乾燥して粉末
（３０ｇ，ロットＡ）を得た。ここで得た精製多糖類の
特性を前述した試験法により試験した結果、以下の持性
を得た。

【００３９】１）糖含量（フェノール硫酸法）：７９％（１）糖組成：ウロン酸含量（６２％、メタヒドロキシ
ジフェニル法）中性糖含量（１７％、アルジトールアセテート−ＧＣ−
ＭＳ法）（２）中性糖組成（アルジトールアセテート−ＧＣ−Ｍ
Ｓ法）グルコース含量（５．５％）ガラクトース含量（３９．７％）アラビノース含量（４４．６％）マンノース含量（５．５％）ラムノース含量（４．７％）（３）その他の糖：アミノ糖、アルドヘキソース、２−
デオキシ糖は含まない。

【００４０】２）分子量：２５９０００（標準多糖：ア
ミラーゼキット、分子量１００〜３６０Ｋ）

【００４１】３）ネフローゼ症候群モデルラットによる
評価精製試料１０ｍｇ／ｋｇ，４０ｍｇ／ｋｇを経口投与、
０．５ｍｇ／ｋｇ，２．５ｍｇ／ｋｇを筋肉内投与した
ところ、図２，図３に示したようにいずれの場合も尿蛋
白排泄が有意に抑制された。また、表１，表２に示した
ように血清コレステロール（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）
値，血清アルブミン（Ａｌｂｕｍｉｎ）値及びＡ／Ｇ
比，血清過酸化脂質（ＭＤＡ）値においても有意な改善
効果が認められた。

【００４２】

【表１】（表中、ＰＡはピューロマイシンアミノヌクレオシド、
ＡＦは本発明の多糖類を表す。以下の表においてもおな
じ）

【００４３】

【表２】

【００４４】４）四塩化炭素誘発肝障害モデルによる評
価精製試料（ＡＦ）７ｍｇ／ｋｇ，３５ｍｇ／ｋｇを経口
投与、０．３ｍｇ／ｋｇ，１．５ｍｇ／ｋｇを筋肉内投
与したところ、表４に示したようにいずれの場合もＡＦ
前投与群では血清ＧＯＴ，ＧＰＴ値の上昇が用量依存的
に抑制された。

【００４５】実施例２実施例１に記載の方法によりロットの異なる丹参原料よ
り各々精製を行い、１に記載した以外に計３ロット（ロ
ットＢ，Ｃ，Ｄ）の精製品を取得し、同様の特性評価を
行った。

【００４６】１）糖含量（フェノール硫酸）：ロットＢ
（６５％），ロットＣ（８０％），ロットＤ（９３％）（１）糖組成

【００４７】

【表４】

【００４８】（２）中性糖組成（アルジトールアセテー
ト−ＧＣ−ＭＳ法）

【００４９】

【表５】

【００５０】（３）その他の糖：ロットＢ，Ｃ，Ｄのい
ずれもアミノ糖、アルドヘキソース、２−デオキシ糖は
含まない。

【００５１】２）分子量：（標準多糖：アミロースキャ
ット、分子量１００〜３６０Ｋ）ロットＢ（１５０，０００），ロットＣ（２８０，００
０），ロットＤ（２５０，０００）

【００５２】３）ネフローゼ症候群モデルラットによる
評価薬効評価についてはいずれの精製品も実施例１で得られ
たものとほぼ同等の効果が得られた。

【００５３】実施例３活性の本体が糖であること及びウロン酸の薬効に対する
関与について調べる目的で本精製品を以下の操作によっ
て酸化及び還元し、それらの効果について調べた。投与
量はネフローゼ症候群ラットにはそれぞれ４０ｍｇ／ｋ
ｇを経口投与し、肝障害ラットにはそれぞれ１．５ｍｇ
／ｋｇを筋肉内投与した。

【００５４】（１）酸化（Ｎｏｂｌｅ，Ｄ．Ｗ．ａｎｄ
Ｓｔｕｒｇｅｏｎ，Ｒ．Ｊ．（１９７０）Ｃａｒｂｏ
ｈｙｄ，Ｒｅｓ．１２，４４８による）精製試料６００
ｍｇを蒸留水１５０ｍｌに溶かし、０．２Ｍ過ヨウ素酸
ナトリウム溶液１５０ｍｌを加えて３７℃で２４０時間
反応させる。エチレングリコール１５０ｍｌを加えて反
応を止めた後、水素化ホウ素ナトリウム５００ｍｇを加
えて室温２４時間処理する。酢酸で反応を止め、水に透
析した後、凍結乾燥する。

【００５５】（２）還元（Ｔａｙｌｏｒ，Ｒ．Ｌ．ａｎ
ｄＣｏｎｒａｄ，Ｈ．Ｅ．（１９７２）Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ．１１，１３８３−１３８８による）精製
試料５０ｍｇを蒸留水に溶かし、ＥＤＣ（１−ｅｔｈｙ
ｌ−３−（ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙ
ｌ）−ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）２４９ｍｇを加えた
後、０．１Ｎ塩酸でｐＨ４．７５に保ちながら１９時間
反応させる。その後、２Ｍ水素化ホウ素ナトリウム溶液
１０ｍｌを１時間かけて滴下し、その間ｐＨ７に保つ。
さらに１時間攪はんした後、水に透析し凍結乾燥する。

【００５６】結果を図４ならびに表３、表４および表５
に示したが、酸化及び還元した試料については全く効果
が認められなかった。このことは精製試料中の活性物質
は確かに多糖類であり、中でも特にウロン酸が薬効に大
きく寄与していることが示された。また還元前後の中性
糖含量の比較から本試料に含まれるウロン酸のほとんど
はガラクツロン酸であることがわかった。

【００５７】

【表３】

【００５８】

【表４】

【００５９】

【表５】

【００６０】

【発明の効果】本発明によれば、丹参から抽出される新
規な多糖類が提供され、それはネフローゼ症候群の寛解
や肝障害症状の改善に用いることができる。

【００６１】

【図面の簡単な説明】

図１は実施例１におけるゲルろ過クロマトグラフィーに
より展開された分画の波長２８０ｎｍ（Ａ₂₈₀）および
４８０ｎｍ（Ａ₄₈₀）の吸光度、図２および図３は実施
例１においてネフローゼ症候群モデルラットに本発明の
多糖類（ＡＦ）を種々の投与量で経口投与した場合の尿
蛋白排泄量、図４はＡＦを酸化または還元して同様に投
与した場合の尿蛋白排泄量、をそれぞれ示すグラフであ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者加藤和夫兵庫県神戸市垂水区桃山台六丁目10−３ (72)発明者阿部博子大阪府堺市向陵西町四丁目10−８サンライズガーデン三国ケ丘406号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】丹参から水または水性溶媒で抽出されう
る下記の特性を有する多糖類Ａ．糖含量：６０〜１００％（１）糖組成：ウロン酸４０〜８０％中性糖１０〜３０％（２）中性糖組成：ラムノース０〜１５％グルコース０〜１５％ガラクトース２５〜５５％アラビノース３０〜６０％マンノース０〜１５％Ｂ．分子量１５０，０００〜３００，０００
【請求項２】丹参を水または水性溶媒で抽出し、抽出
液から残渣を除去した液を無極性多孔性ポリマー樹脂を
通過させ、限外濾過で濃縮し、ついで限外濾過クロマト
グラフィーに付することを特徴とする請求項１記載の多
糖類の製造法。
【請求項３】丹参の抽出をｐＨ約４〜約８で行う請求
項２記載の製造法。
【請求項４】水性溶媒が緩衝液または塩類水溶液であ
る請求項２記載の製造法。
【請求項５】丹参の抽出を約４０〜約１００℃で行う
請求項２または３記載の製造法。
【請求項６】請求項１記載の多糖類よりなるネフロー
ゼ症候群の寛解剤。
【請求項７】請求項１記載の多糖類よりなる肝障害症
状の改善剤。
【請求項８】筋肉内投与または経口投与される請求項
５記載の寛解剤。