JPH07501544A - ウイルス感染症の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ウィルス感染症の治療方法 発明の分野 本発明は修飾Ｃ反応性タンパク質によるウィルス感染症の治療方法に関する。

また、本発明はウィルスを修飾Ｃ反応性タンパク質で中和する方法に関する。

発明の背景 エイズ（後天性免疫不全症候群）の出現以来、ウィルス感染症に有効な治療に対 する要望が緊急になりつつある。エイズはヒト免疫不全ウィルスＩ　（ｌＩｔＶ −１）により引き起こされる。初期の病因の事象は、Ｔ細胞及び単球−マクロフ ァージのサブセットのＣＤ４レセプターへのＨＩＶ−１の結合である。Ｆａｕｃ ｉ　ら著、　Ａｎｎ、　Ｉｎｔｅｒｎ。

Ｍｅｄ、、１１４．６７８−６９３　（１９９１）　（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ ５ｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎモ■■v 約）。ウィルスはヒト免疫系と相互作用し、そしてこの相互作用の最終の結果が ＣＤ４　Ｔ細胞サブセットの定量的減少及び機能異常により生じる顕著な免疫抑 制である（上記の文献）。単核食細胞は、ウィルスの溜めとして利用できること により旧Ｖ−１感染の病原に役割を果たすことがある（上記の文献）。ＨＩＶ− １感染した個人の末梢血中の単球は生体内で稀に感染されるが、一方、感染組織 マクロファージは器官特異的ＨＩＶ−１関連の病原に役割を果たすことがあると いう事実が注目される（上記の文献）。

エイズの治療に関して食品、薬品管理局（ＦＤＡ）により認可された一つの薬剤 は３°−アジド−２′、３゛−ジデオキシ−チミジン（シトプシン、アジドチミ ジン、ＡＺＴ）であり、これは逆転写酵素のレベルで作用することによりＨＩＶ −１複製を抑制する。しかしながら、八ＺＴは重大な副作用、例えば、骨髄抑圧 を生じ、それは高比率の患者で不十分に寛容される。Ｙａｒｃｈｏａｎら著、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｔｏｄａｙ、　１１．３２７−３３　（１９９０）。また、八 ＺＴの有益な効果が１２〜１８ケ月で低下すると報告されていた。

Ｃｈａｓｅ著、“Ｄｏｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　１ｌｏｐｅ　Ａ ＺＴ　Ｗｉｌｌ　１（ｅｌｐ　５ｔａｖｅ　ＯＨＡＩＤＳ”A　Ｗａ− ＩＩ　５ｔｒｅｅｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ、　１９８８年４月２８日、１４頁、■欄 。

また、ＦＤＡは、ＡＺＴを寛容てきない患者またはＡＺＴが最早有効ではない患 者のエイズの治療のために２’、３’　−ジデオキシイノシン（ＤＤＩ）を認可 していた。

ＣＤＩは短期間で有効かつ安全とわかったが、その長期効果は未だ知られていな い。

Ｃｈｅｕ　Ｅｎｇ、　Ｎｅｗｓ、１９９１年１０月１４日、１７頁。

エイズの治療用のその池の薬剤はアンプリゲンである。アンブリゲンは不適正塩 基対合の二本鎖ＲＮＡである。それはインターフェロン産生を刺激し、ナチュラ ルキラー細胞を活性化し、そして細胞内の抗ウイルス機構を増強することにより 抗ウィルス活性を増大する。Ｍｏｎ　ｔｅｆ　ｉｏｒ　ｉら著、　Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔ’　ｌ　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　A　８４゜ ２９８５−８９　（＋９８７）及びＤａｇａｎ　ｉ著、　Ｃｈｅｍ、Ｅｎｇ、Ｎ ｅｗｓ、　１９８７年１１月２３Ｂ、　４１−４９頁。

エイズの治療のためのその他の可能な治療方法がＹａｒｃｈｏａｎら著、　１ｍ ｍ聞ｏ１．Ｔｏｄ−ａｙ、　Ｉｌ、　３２７−３３　（１９９０）　；　Ｄａｇ ａｎｉ著、　ＣｈｅａＥｎｇ、Ｎｅｗｓ、　１９８７年１１月２３８．４１−４ X 頁に説明されている。

Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＩ’）がＴｉ１ｌｅＬｔ及びＦｒａｎｃｉｓ　［Ｊ、 Ｉ？ｘｐ、Ｍｃｄ、、　５２．５６１−７することを観察した。続いて、その他 の者が反応性血清因子をタンパク質として同定し、それ故、　“Ｃ反応性タンパ ク質”と称される。

ニューモコッカル（ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｌ）　Ｃ多糖に結合することに加え て、ＣＲＰはｌ）ホスフェートモノエステル（特にホスホリルコリンを含む）： ２）その他の細胞壁多糖（ホスホリルコリンを含む）；３）ホスファチジルコリ ン（レンチン）；４）フィブロネクチン：５）クロマチン：６）ヒストン類；及 び７）０１小咳チボヌクレオタンパク質の７０ｋＤａポリペプチドに結合する。

Ｋｉ　Ｉｐａｔｒｉｃｋ及びＶｏｌａｎａｋｉｓ著、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

Ｒｅｓ、、　１０．４３−５３　（１９９１）。また、幾つかの研究所がガラク トースを含む多糖へのＣＲＰの結合を報告していた（上記文献）。しかしながら 、成る研究所は、ＣＲＰが成る特別なガラクタンのｔＵｔ成分である痕跡ホスフ ェート基に結合することを報告していたが、その池のカラクタンへのＣＲＰ結合 がまたホスフェート残基または炭水化物決定基のいずれに誘導されるかを不明に する（上記文献）。

Ａｔｏｎｏら著、　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ、 　２４．６５５−６６２　（＋９８９）は、血清ＣＲＰのレベルが急性Ａ型及び Ｂ型肝炎、特にＡ型の患者で著しく増大されるが、回復期中に迅速に減少するこ とを教示している。また、その文献は急性期及び回復期の両方の非Ａ型、非Ｂ型 肝炎で一般に低いことを報告している。

Ｐｕｔｔｏら著、　Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　Ｃｈｉｌ ｄｈｏｏｄ、　６１．２４−２９　（１９８６）は、細菌感染症及びウィルス感 染症を患う発熱幼児中のＣＲＰレベルの測定の結果を報告している。病気の期間 が１２時間以上てあり、ＣＲＰレベルが２０ｍｇ／ｍ１未満であった場合、検査 した全ての幼児はウィルス感染症または潜在的なウィルス感染症を有していた。

２０ｍｇ／ｍｌ以下のＣＲＰレベルを有する幾人かの幼児は侵入性細菌感染症を 有していたが、彼らは１２時間以内にわたって病気であった。２０ｍｇ／ｍｌ〜 ４０ｍｇ／ｍｌのＣＲＰレベルがウィルス感染症及び細菌感染症の両方を有する 幼児で報告された。

４０ｍｇ／ｎ１以上のＣＲＰ値は、９０％の特異性で細菌感染症の７９％を検出 した。

本件出願人の知るかぎりでは、ウィルスに結合し、ウィルスの食作用に寄与し、 またはそれ以外にウィルスを中和できるＣＲＰの報告はなかった。更に、本件出 願人は、ＣＲＰがウィルス感染症を治療するのに使用されているという報告を知 らない。

ＣＲＰの研究の多くが細菌感染症におけるその役割を測定することに関していた 。

例えば、Ｘｉａら著、　ＦＡＳＩＥＢ　Ｊ、、　５．　Ａ１６２８　（＋９９１ ）は、内毒素（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ）ショックにおけるＣＲＰの役割を研究する ように設計された実験を記載している。誘導プロモーター（グルコース新酸に対 する要求に応答して誘導）の制御下でウサギＣＲＰをコードするキメラ遺伝子が マウスに導入された。殆どのその他のを椎動物とは対照的に、マウスは急性期応 答中でさえも、わずかに痕跡量の内在性ＣＲＰを合成する。キメラ遺伝子がマウ スに導入された場合、ウサギＣＲＰがグルコース新酸に対する要求に応答して発 現された。更に、高レベルのウサギＣＲＰを発現し、続いてグルコース新酸を誘 発するマウスの７５％が、ウサギＣＲＰ合成がグルコース新酸を抑制することに より抑制された動物に関して２７％の生存に較べて、３５０〜４００７１ｇの内 毒素による処理で生存することがわかった。著者らは、ＣＲＰが内毒素ショック に対する自然防御に役割を果たし得ると推測するが、ＣＲＰが内毒素を結合する ことは知られていない。

Ｍｏ１ｄら著、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、　３８．３９ ２−３９５　（＋９８２）は、ＣＲＰ結合が補体活性化をもたらすことができ、 力り補体の存在下で、Ｃ多糖感作赤血球及び型２７のＳ、ニューモニアエのオン ソニン化の増進をもたらすことができることを報告している。更に、その文献は 、ＣＲＰの注射が型３または型４のＳ、ニューモニアエで抗原投与されたマウス の生存を増大したことを報告している。最後に、著者らは、彼らがＣＲＰが潜在 的に病原性のグラム陽性細菌（Ｓ、ニューモニアエ、ストレプトコッカス・ビリ ダンス（Ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ　ｖｉｒｉｄａｎｓ）、及びスタフィロコッ カス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）の一つの分 離株）の小さい群に結合するが、グラム陰性細菌またはその他のグラム陽性細菌 に結合しないと結論する試験結果を記載している。それ故、彼らは、オンソニン 化を増進し、かつ宿主防御に寄与するＣＲＰの能力がＳ、ニューモニアエによる 感染に特異的であり得ると仮定する。

同様に、Ｍｏ１ｄら著、　Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、　３８９．２ ５１−６２　（１９８２）は、ＣＲＰが補体の存在下でオプソニンとして作用し 得ることを報告している。しかしながら、その文献は、ＣＲＰがグラム陰性細菌 に結合せず、幾つかのグラム陽性生物のみに結合することを教示している。ＣＲ Ｐが結合するこれらのグラム陽性細菌に関して、オプソニンとしてのＣＲＰの有 効性は種に応じて変化した。最後に、その文献は、ＣＲＰが型３及び型４のＳ、 ニューモニアエ感染からマウスを保護したと報告している。

また、Ｎａｋａｙａｍら著、　Ｃｌ１ｎ、Ｅｘｐ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　５４ ．３１９−２６　（１９８３）は、ＣＲＰが型３または型４のＳ、ニューモニア エによる致死性感染に対して保護することを教示している。更に、その文献は、 ＣＲＰが同様の投与量のサルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　 Ｌｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）に対して保護しなかったことを教示している。

Ｈｏｒｏｗｉ　ｔｚら著、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１３８．２５９８−２ ６０３　（１９８７）は、マウスが多糖抗原に対し抗体をつくることから防止す るＸ連鎖免疫不全を有するマウス（“ｘｉｄマウス″）におけるＣＲＰの効果を 記載している。これらのマウスにおいて、ＣＲＰは型３のＳ、ニューモニアエに よる感染に対する保護を与え、血液から細菌を排除することにより作用した。し かしながら、ＣＲＰはＳ、ニューモニアエの高投与量では完全には保護性ではな かった。ＣＲＰは正常なマウスでこれらの高投与量に対し完全保護を与えるので 、著者らは、莢膜多糖の保護抗体が産生じ得るまで、ＣＲＰの機能マウスでＣＲ Ｐの保護効果を減少または終止したが、正常なマウスではその保護効果を減少ま たは終止しなかった。

Ｎａｋａｙａｗｌａら著、　Ｊ、　ｌｏｍｕｎｏｌ、、　１３２．１３３６−４ ０　（１９８４）は、マウスにＣＲＰを注射し、次いでそれらを型３のＳ、ニュ ーモコッチ（ｐｎｅｕ＋ｎｏｃｏｃｃｉ）で免疫することの結果を報告している 。その結果は、ＣＲＰの投与量により変化する細菌のホスホリルコリン決定基に 対する減少された抗体応答であった。しかしながら、抗体がＳ、ニューモコッチ のその他の抗原決定基に対し産生された。

Ｈｏｋａ＋ｎａら著、　Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　８３．１０１７−１ ０２４　（１９６２）は、カルボニル鉄球状体、ジブロコツカス・ニューモニア エ（Ｄｉｐｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）型■１及びＸＸＶｌｌ並 びにセラチア−フルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）がＣ ＲＰによるインキュベーション後に正常なヒト血液の白血球により迅速に、かつ 多数で倉食されたことを報告している。同様に、Ｋｉｎｄｍａｒｋ著、　Ｃｌ１ ｎ、［！ｘｐ、　ｌ＋ｎｍｕｎｏ１．、８．９４１−４８　（１９７１）は、ｅ ｌｌａ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）の食作用を刺激したことを報告している。

Ｇｕｐｔａら著、　Ｊ、　Ｉ＋ｍｎｕｎｏ１．、１３７．２１７３−７９　（１ ９８６）は、ＣＲＰが急性リウマチ熱を有する患者の血清から単離された免疫複 合体中で検出されたことを教示している。

リウマチ熱は、群Ａ連鎖球菌性咽頭炎の後に生じ得る急性炎症疾患である。免疫 複合体のその他の成分は、ストレプトリジンＯ及びストレプトリジン０の抗体を 含んでいた。

しかしながら、Ｂａ１ｌｏｕら著、　Ｊ、Ｌａｂ、Ｃｌ１ｎ、Ｍｅｄ、、　１１ ５．３３２−３８　（１９９０）は、高度に精製されたＣＲＰが免疫グロブリン （モノマーまたは凝集）または免疫複合体に結合しないことを教示している。そ の文献は、免疫複合体中のＣＲＰの報告された存在がＣＲＰと免疫グロブリン以 外の免疫複合体の成分、例えば、抗原または補体成分の会合から生じ、またはそ の会合により促進し得ることを示唆する。

Ｋ１１ｐａｔｒｉｃｋ及びＶｏｌａｎａｋｉｓ著、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 　１３４．３３６４−７０　（１９８５）は、刺激された多形核白血球（ＰＭＮ ）にＣＲＰレセプターがあることを報告している。また、著者らは、活性化され たＰＭＮによるニューモコッカルＣ多糖及びＣＲＰで被覆された赤血球の摂取が ニューモコッカルＣ多糖のみて被覆された赤血球の摂取よりも大きいことを開示 している。最後に、著者らは、ＣＲＰの機能が外来病原体及び損傷宿主細胞また は壊死性宿主細胞を特異的に認識し、かつＩ）補体系と相互作用し、または２） 好中球の誘発食作用レセプターと相互作用することによりそれらの排除を開始す るその能力に関係することを提案している。

Ｊａｍｅｓ　ら著、Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ　Ｉｎｔｅ ｒｎａｔｉｏｎａｌ、　４１１０８−８．２９６３　（１９W０） は、ＣＲＰが４０％の倉食単球及び３％のリンパ球を含む単核白血球のサブセッ トに結合することを教示している。結合は、ＣＲＰ分子の形態を含む幾つかの因 子により影響された（例えば、リガンドへの複合体形成または６３℃への加熱に よるＣＲＰの修飾が必要とされた）。

Ｔｅｂｏら著、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１４４．２３１−３８　（１９９０ ）は、単球におけるＣＲＰのレセプターの存在を教示している。更に、その文献 は、ＣＲＰの膜レセプターが好中球に関して報告されていたことを開示している 。

Ｋｅｍｐｋａら著、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１４４．１００４−１００９　 （１９９０）は、著者らが、ＣＲＰがガラクトース特異的結合タンパク質（これ は、肝臓マクロファージの表面に結合された場合に、粒状リガンドのガラクトー ス特異的エンドサイト−シスを媒介するレセプターとして機能する）であること を意味すると解する結果を開示している。

ＣＲＰは５個の同一のサブユニットからなるペンタマーである。ＣＲＰのペンタ マー形態は時として“天然ＣＲＰ”と称される。はぼ１９８３年に、ＣＲＰの別 の形態が発見され、これは“修飾ＣＲＰ”または“ｍＣＲＰ”と称される。ｍＣ ＲＰは、天然ＣＲＰと較べてかなり異なる電荷、サイズ、溶解性及び抗原性の特 徴を有する。Ｐｏｔｅｍｐａら著。

Ｍｏ１．　Ｉ＋ｎｍｕｎｏ１．、２０．１１６５−７５　（１９８３）。また、 ｍｃＲＰは結合特性の点で天然ＣＲＰと異なる。例えば、にＲＰはホスホリルコ リンに結合しない。上記文献ＨＣｈｕｄｗｉｎら著。

Ｊ、ＡＩＩｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　７７、２１６ａ　（１ ９８６）。最後に、ｍＣＲＰはその生理活性の点で天然ＣＲＰと異なる。Ｐｏｔ ｅｍｐａら著、　Ｐｒｏｔｉｄｅｓ　Ｂｉｏｌ、ＦＩｕｉｄｓ、　３４．２８７ −２９０　（１９８６）；Ｐｏｔｅｍｐａら著、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、　 １２．３９１−４０５　（１９８８）を参照のこと。

にＲＰの特有の抗原性は“ネオＣＲＰ″と称された。ネオＣＲＰ抗原性は、Ｉ） 成る条件（以下に記載される）下で酸、尿素または熱で処理されたＣＲＰ　。

２）ＣＲＰをコードするＤＮＡの一次翻訳産物（ブレＣＲＰ）　；及び３）プラ スチック表面に固定化されたＣＲＰで発現される。Ｐｏｔｅｍｐａら著、　Ｍｏ １．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　２０．１１６５−７５　（１９８３）；　Ｍａｎｔ ｚｏｕｒａ−ｎｉｓ　ら著、Ｐｅｄ、Ｒｅｓ、、１８．２６０ａ　（１９８４） ；　Ｓａｍｏｌｓ　ら著、ＢｉｏｃｈｅｕＪ、、　２２７．７５９−６５　（１ ９８５）；　Ｃｈｕｄｗｉｎら著、　Ｊ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、、　７７、２１６ａ（１９８６）；　oｏｔｅｍｐａ ら著、Ｉｎｒｌａｍｍａｔｉｏｎ、１２．３９１−４０５　（１９８８）。

ネオＣＲＰに特異的なポリクローナル抗体と反応性の分子が末梢血リンパ球（主 としてＮＫ細胞及びＢ細胞）の１０〜２５％、単球の８０％及び好中球の６０％ の表面で、また組織損傷の部位で同定された。Ｐｏｔｅｍｐａら著、　ＦＡＳＥ Ｂ　Ｊ、、　２．７３１ａ　（１９８８）ｓＢｒａｙら著、　ＣＩ　ｉｎ、　Ｉ ｍｍｕｎ吐Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ、　８．１３７−１４０　（＋９８７）；　Ｒ ｅｅｓら著、　Ｆｅｄ、oｒｏｃ、。

４５、２６３ａ　（１９８６）。その他に、にＲＰは単球細胞毒性の発生に影響 し、単球のアクセサリ−細胞機能を改善し、凝集１ｇＧ誘発食細胞酸化的代謝を 増強し、かっ単球によるインターロイキン−１、プロスタグランジンＥ及びリポ キシゲナーゼ産生物の産生を増大できることが報告されていた。Ｐｏｔｅｍｐａ ら著、　Ｐｒｏｔｉｄｅｓ　Ｂｉｏｌ。

Ｆｌｕｉｄｓ、　３４．２８７−２９０　（１９８７）；　Ｐｏｔｅｍｐａ　ら 著、Ｉｎｆｌａｗｎａｔｉｏｎ、１２．３９１−４０５（＋９８８）；　Ｃｈｕ ら著、　Ｐｒｏｃ、Ａｍｅｒ、Ａｃａｄ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、　２８．３ ４４ａ　（１９８７）；　Ｐｏｔｅ高垂≠■ 著、　Ｐｒｏｃ、Ａｍｅｒ、Ａｃａｄ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、　２８．３４ ４ａ　（１９８７）；　Ｚｅｌｌｅｒら著、　Ｆｅｄ、Ｐｒ盾メA。

４６、ｌ０３３ａ　（＋９８７）；　Ｃｈｕ　ら著、　Ｐｒｏｃ、Ａｍｅｒ、Ａ ｃａｄ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、２９．３７１ａ　（１９W８）。

Ｃｈｕｄｗｉｎら著、　Ｊ、ＡＩＩｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 　７７、２１６ａ　（１９８６）は、ｗＩｃＲＰがダラム陽性型７ＦのＳ、ニュ ーモニアエで抗原投与されたマウスで保護効果を有し得ることを教示している。

マウスが生理食塩水、天然ＣＲＰ　、またはにＲＰで静脈内注射された。３０分 後に、マウスは致死投与量のＳ、ニューモニアエを受けた。ＩＯ日口の生存率は 以下のとおりであった。生理食塩水で前処理されたマウス２／１８；　２００ａ ｇの天然ＣＲＰで前処理されたマウス７／１２；　１０μｇのＩＩＩＣＲＰで前 処理されたマウス１２／１８；そして１００μｇのにＲＰて前処理されたマウス ５／６゜著者らは、ＣＲＰがホスホリルコリン結合以外の機構による細菌感染に 対し保護的であり得ること、かっＣＲＰがｍＣＲＰ　（これはホスホリルコリン を結合しない）により従来推測されていたよりも細菌宿主防御の広い役割を有し 得ることを推測している。

本件出願人が知るかぎりでは、ｍｃＲＰがその他のあらゆる種類の細菌感染に対 し保護的であるという報告はなかった。更に、本件出願人が知るかぎりでは、に ＲＰがウィルスに結合し、ウィルスの食作用に寄与し、それ以外にウィルスを中 和でき、またはウィルス感染症を治療するのに使用されるという報告はなかった 。

ＣＲＰ及びＩｎＣＲＰの概説につき、Ｇｏｔｓｃｈｌ　ｉｃｈ著、　Ａｎｎ、Ｎ 、Ｙ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、、　５５７．９−１８（１９８９）を参照のこと。に １ｌｐａｔｒｉｃｋ及びＶｏｌａｎａｋｉｓ著、　Ｉｍｍ＋ｕｎｏ１．Ｒｅｓ、 、　１０．４３−５３（１９９１）はＣＲＰの最近の概説を提示する。

最後に、本件出願人は、本件出願人力哄同発明者として名をあげられている成る 共同未決出願につき注意を喚起したい。１９９０年１０月３日に出願された米国 特許出願第０７１５８２．８８４号は、免疫複合体を結合するためのＩｎＣＲＰ の使用に関する。この出願はＰＣＴ出願ＵＳ８９１０１２４７号の国際出願（１ ９８９年１０月１９日ｉ：ＷＯ８９１０９６２８号として公開された）として出 願され、現在放棄された１９８８年４月４日に出願された米国特許出願第０７／ １７６、９２３号の一部継続出願である。また、本件出願人は、現在放棄された １９８９年６月２７日に出願された米国特許出願第０７／３７２．４４２号の一 部継続出願である１９８９年６月２９日に出願された米国特許出願第０７／３７ ２．１６６号に共同発明者として名をあげられている。この出願は、天然ＣＲＰ 　、にＲＰまたは両方に見られるエピトープと選択的反応性のモノクローナル抗 体を記載し、特許請求している。

最後に、このような感染症を治療するためのｍｃＲＰに関する“非連鎖球菌細菌 感染症の治療方法”という発明の名称の出願が、これと同日に出願されている。

発明の要約 本発明は、医薬上許される担体中の有効量の修飾ＣＲＰを哺乳類に投与すること を特徴とする哺乳類のウィルス感染症の治療方法を提供する。特に、修飾ＣＲＰ はヒト免疫不全ウィルスＩ　（ＨＩＶ−１）感染症を含むレトロビリダニ（Ｒｅ けｏｖｉｒｉｄａｅ）感染症を治療するのに有効とわかった。

また、本発明は、ウィルスを修飾ＣＲＰと接触させることを特徴とするウィルス の中和方法を提供する。例えば、修飾ＣＲＰは、輸血の前に修飾ＣＲＰを血液試 料に添加することにより輸血に使用される血液試料中でウィルスを中和するのに 使用し得る。特に、修飾ＣＲＰはＨＩＶ−１を含むレトロビリダニを中和するの に有効とわかった。

図面の簡単な説明 図ＩＡ及び１８　：　ｌｆｆ−１に対するにＲＰ懸濁液の活性に関する二つの試 験管内のホルマザンアッセイの結果のグラフ図 図ＩＣ及びＩＤ　：　ＨＩＶ−１に対する可溶性！ＩＩＣＲＰの活性に関する二 つの試験管内のホルマザンアッセイの結果のグラフ図 図ＩＥ　：　ＨＩＶ−１に対するＡＺＴの活性に関する試験管内のホルマザンア ッセイの結果のグラフ図 図２Ａ及び２Ｂ＝時間に対するサル２Ｂ（図２Ａ）及びサル５０Ｂ（図２Ｂ）に 関する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び血漿中のＣＤ４リンパ球の％及びｓＩｖ カ価のｌｏｇ、。のグラフ図矢印は、ＩＴＩＣＲＰがサルに投与された日を示す 。

現在好ましい実施態様の詳細な説明 本発明の実施に有益な修飾ＣＲＰは、あらゆる源からのものであってもよい。異 なる種からのＣＲＰのアミノ酸配列の間にがなりの相同性がある。例えば、種々 の哺乳類の種からのＣＲＰの間に約５０〜約８０％の配列相同性がある。Ｈｕら 著、　Ｂｉｏｃｈ−ｅｍ、、２５．７８３４−３９　（１９８６）：　’ｉｌ’ ｈｉｔｅｈｅａｄら著、ＢｉｏｃｈｅａＪ、、　２６６、２８３−９０　（１９ X０）； Ｋｉ　Ｉｐａｔｒｉｃｋ及びＶｏｌａｎａｋｉｓ著、　Ｉ＋ｎ＋ｎｕｎｏ１．Ｒ ｅｓ、、　１０．４３−５３　（１９９１）。それ故、あらゆる源からのｍＣＲ Ｐがウィルス感染症を治療し、またはウィルスを中和するのに有効であろうと予 測される。こうして、ウィルス感染症を患う哺乳類が、異なる種からのｍｃＲＰ で治療し得る（例えば、マウスがヒトｍＣＲＰで治療し得る）。また、哺乳類は 、ｍｃＲＰに対する免疫反応を避けるために、同種ｍｃＲＰで治療されることが 好ましい（例えば、ヒトがヒトｍｃＲＰて治療される）。

ｍｃＲＰは、出発物質としてＣＲＰを使用してつくられることが好ましい。天然 源がらＣＲＰを単離する方法が公知である。多くのこのような技術が、背景部分 に説明された文献に記載されている。ＣＲＰは、Ｖｏｌａｎａｋｉｓら［Ｊ、Ｉ ｎｗｎｕｎｏｌ、、　１１３．９−１７（１９７８）］により記載され、そして Ｐｏｔｅｍｐａら［Ｍｏ１．　ｌｎｗｎｕｎｏｌ、、　２４．５３１−４１（１ ９８７）］により改良されたようなホスホリルコリン置換バイオゲル（ＢｉｏＧ ｅｔ）Ａ　Ｏ，５ｍ　（バイオラド・ラボラトリイズ（ＢｉｏＲａｄ　Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｉｅｓ）から得られるアガロース系樹脂）を使用してカルシウム依存 性アフィニティークロマトグラフィーにより胸膜または腹水から単離される。こ の操作を使用して、少なくとも９９％純粋であるＣＲＰを得ることができる。

ヒト、マウス、及びウサギのＣＲＰをコードするゲノムクローン及びｃＤＮＡク ローンが単離された。Ｌｅｉ　ら著、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６０． １３３７７−８３　（１９８５）；　Ｗｏｏら著。

Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅａ、２６０．　１３３８４−８８　（＋９８５）；　Ｈｕ ら著、Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎ、、　２５．７８３４−３９　（１X８６）； Ｈｕら著、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６３．　１５００−１５０４　（ １９８８）；　Ｗｈｉｔｅｈｅａｄら著、　Ｂｉｏｃｈｅｕ@Ｊ、　。

２６６、２８３−９０　（＋９９０）。異なる種からのＣＲＰの間のかなりの相 同性を仮定すると、プローブを容易に調製でき、その結果、その他の種からのＣ ＲＰをコードするゲノムクローン及びｃＤＮＡクローンが弔離し得る。このよう なプローブを調製し、ゲノムクローン及びｃＤＮＡクローンを単離する方法が公 知である。例えば、Ｌｅｉら著９Ｊ１口ｉｏ１．ｃｈｅｕ、２６０．　１３３７ ７−８３　（１９８５）；　Ｗｏｏ　ら著、Ｊ０口ｉｏ１．ｃｈｅｕ、２６０． １３３８４−W８ （＋９８５）；　Ｈｕら著、Ｂｉｎｃｈｅｍ−、２５，７８３４−３９（１９８ ６）；　Ｈｕら著、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６３゜１５００−１５０４ 　（１９８８）；　Ｗｈｉｔｅｈｅａｄら著１口ｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、、　２６６ 、２８３−９０　（１９９０）を参照のこと。既知のクローンの一種または新た に単離されたクローンを使用して、ＣＲＰが、通常の公知の組換えＤＮＡ技術並 びに細胞培養条件及び醗酵条件を使用して調製し得る。例えば、ｆｌｕら著、　 Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６３．１５００−１５０４　（＋９８８）を参 照のこと。

しかしながら、ペンタマーの天然ＣＲＰを得るために、真核宿主細胞、好ましく は哺乳類宿主細胞が使用されるべきである。Ｓａｍｏｌｓ及びＨｕ著、　Ｐｒｏ ｔｉｄｅｓ　Ｂｉｏｌ、ＦＩｕ−ｉｄｓ、　３４．２６３−６６　（１９８６） ；Ｉ（ｕら著、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６３．１５００−１５０４　 （１９８８）■Q照 のこと。

ＣＲＰからｆｆ＋ｃＲＰをつくる方法が公知である。多くのこのような方法が、 背景部分に説明された文献に記載されている。

例えば、ｍＣＲＰは、ＣＲＰを変性することにより調製し得る。ＣＲＰは通常の キレート剤（好ましくは、エチレンンアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）またはクエ ン酸）の存在下で有効量の尿素（好ましくは８Ｍ）による処理により変性し得る 。更に、ＣＲＰはタンパク質のｐＨを約３以下または約１１−！２以上に調節す ることにより処理されてｍｃＲＰを生成し得る。最後に、ｍＣＲＰは、カルシウ ムの不在下または上記のキレート剤の如きキレート剤の存在下で変性を生じるの に充分な時間（好ましくは６３℃て２分間）にわたってＣＲＰを５０℃以上に加 熱することにより生成し得る。

また、ｍｃＲＰは、組換えＤＮＡ技術を使用して調製し得る。背景部分で注目さ れるように、ＣＲＰ遺伝子の一次翻訳産物（プレＣＲＰ）がネオＣＲＰ抗原性を 発現することがわかった。従って、ｍＣＲＰは、ＣＲＰサブユニットが宿主細胞 中でペンタマーの天然ＣＲＰに構築されないような条件を選択することにより調 製し得る。これは、所望のゲノムクローンまたはｃＤＮＡクローンを原核生物宿 主中で発現することにより達成し得る。Ｓａｍｏｌｓ及びＨｕ著、　Ｐｒｏｔ、 Ｂｉｏｌ、Ｆｌｕｉｄｓ、　３４．２６３−６６　（１９８６）を参照のこと。

このようにして産生されたｍｃＲＰは、ＣＲＰサブユニット及び／またはプレＣ ＲＰ及びおそらくその他のＣＲＰペプチドの凝集物からなることが明らかである 。

上記の文献を参照のこと。ｍＣＲＰのこの形態は不溶性であり、しかも更なる精 製が難しい。しかしながら、この不溶性物質を更に処理しないで懸濁液として哺 乳類に直接注射することが可能であるべきである。何となれば、ＣＲＰから調製 された単離ｍＣＲＰの懸濁液は、哺乳類に注射される場合に安全かつ有効とわか ったからである（実施例２を参照のこと）。

最後に、ｍＣＲＰは、ＣＲＰを疎水性固体表面に吸着させることにより調製し得 る。

適当な固体表面及び条件が共同未決米国特許出願第０７１５８２．８８４号及び ＰＣＴ出願第Ｗ０８９１０９６２８号明細書に記載されており、これらの開示が 参考として本明細書に含まれる。固体表面に吸着されたｍＣＲＰは、以下に説明 されるように、血液の如き液体からウィルスを除去するのに有益であり得る。

ｍＣＲＰは、幾つかの基準により天然ＣＲＰから区別し得る。背景部分で注目さ れるように、修飾ＣＲＰはネオＣＲＰ抗原性を発現し、一方、天然ＣＲＰはそれ を発現しない。ネオＣＲＰ抗原性は、背景部分に記載されたようにネオＣＲＰに 特異的なポリクローナル抗血清を使用して検出し得る。しかしながら、ｍＣＲＰ は、本件出願人の共同未決米国特許出願第０７／３７４．１６６号明細書（その 開示が参考として本明細書に含まれる）に記載されたようなモノクローナル抗体 を使用して天然ＣＲＰから区別される。これらのモノクローナル抗体がまたＹｉ ｎｇら著、　Ｊ、１ｍｍｕｎｏ１．、１４３．２２１−２８（１９８９）に記載 されている。また、ｍＣＲｒ’は免疫複合体及び凝集免疫グロブリンを結合し、 一方、天然ＣＲＰは本件出願人の共同未決米国特許出願第０７１５８２．８８４ 号及び公開されたＰＣＴ出願第ＷＯ８９１０９（ｉ２８号明細書に記載されてい るようにそれらを結合しない。また、背景部分に説明されているように、ｍ１Ｒ Ｐを天然ＣＲＰから区別する幾つかのその他の方法があり、これらとして、電荷 、溶解性、結合特性及び生理活性が挙げられる。しかしながら、製剤がｍＣＲＰ を含むことを示すために、その製剤が、ｌ）にＲＰのみに見られるエピトープに 特異的な抗体と積極的に反応し１、かっ２）凝集免疫グロブリン（例えば、凝集 １ｇＧ）を結合することを確かめることが、通常、充分である。

如何なる特別な理論に拘束されることを望まないが、ｍ１ＲＰは５個のＣＲＰサ ブユニットの解離により生成され、これらのサブユニットの夫々が、その後、自 然な構造変化を受けてｍＣＲＰを生成する。Ｂｒａｙら著、　Ｃｌ１ｎ、Ｉｍｍ ｕｎｏｌ、Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ、　８゜１３７−１４０　（１９８７）を参照 のこと。それ故、ＣＲＰサブユニットのフラグメントは、ｍｃＲＰにつき本明細 書に記載されたのと同じ活性を有し得ることが可能であり、このようなフラグメ ントの使用は本発明の範囲内に入るであろう。

また、ＣＲＰに実質的に相同のタンパク質はｍＣＲＰにつき本明細書に記載され た活性を有するものと考えられ、このようなタンパク質がまた本発明の範囲内に 入ると考えられる。例えば、ＣＲＩ＋遺伝子の部位誘導突然変異により付加、欠 失または置換された二三のアミノ酸を有するＣＲＰサブユニットは、おそらくウ ィルス感染症の治療に有効でありそうであり、ｍｃＲｒ’に置換できそうである 。特に、ｍＣＲＰはＣＲＰ遺伝子の一次翻訳産物を含むと本明細書で定義される 。

ｍＣＲＰは、あらゆる型のウィルス感染症を治療するのに使用し得ることが意図 されている。しかしながら、ｍｃＲＰはレトロビリダニ感染症を治療するのに有 効かつ安全とわかったことが特に注目に値する。ｍＣＲＰは、ナショナル・カン サー・インスティチュート（ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃ、ｅｒ　Ｉｎ ５ｔｉｔｕｔｅ）（ＮＣＩ）により行われる基準化された試験管内の試験でＨＩ Ｖ−１感染症に対しかなりの保護を与えるとともに、試験したあらゆる投与量で 毒性を示さないことがわかった。また、ｍｃＲＰは、ノミアン（ｓｉｍｉａｎ　 、サル）免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）力価をかなり低下し、また副作用を生しな いで、ＡＺＴに匹敵するか、またはそれより優れている様式でサル中のＣ１１４ 細胞の数を増大することがわかった。

レトロヒリダエ（しトロウィルス科）は、３種の亜科（サブファミリー）　±ン コヒリナエ（Ｏｎｃｏｖｉｒｉｎａｅ）　、スブルマビリナエ（Ｓｐｕｒｍａｖ ｉｒｉｎａｅ）及びレンチビリナエ化ｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｅ）を含む球形の外 膜ＲＮＡウィルスのファミリー（科）である。

１１ｕｌｌら著、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ：　Ｄｉｒｅｃｌｏｒｙ＆Ｄｉｃｔｉｏｎ ａｒｙ　ｏｆ　Ａｎｉ＋ｎａｌ、　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａ獅п@Ｐｌａｎｔ Ｖｉｒｕｓｅｓ、　１９１頁（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ　１９８９）　Ｏ これらの粒子は直径８０〜１００ｎＩＩｌであり、８ｎｍの糖タンパク質表面突 起を有する（上記の文献）。複製がＤＮＡ（これは宿主の染色体ＤＮＡに組み込 まれるようになる）へのウィルスＲＮＡの逆転写で開始する（上記の文献）。

内在性オンコウイルスはを推動物中で広く生じ、多くの病気と関連する（上記の 文献）。伝達は垂直及び水平の両方である（上記の文献）。

レンチウィルスとして、ＩＩＩＶ−１及びＳＩＶが挙げられる。Ｆａｕｃｉ著、 　５ｃｉｅｎｃｅ。

２３９、６１７−６２２　（１９８８）。ヒツジのビスナウィルス、ウマ伝染性 貧血ウィルス、及びネコ免疫不全ウィルスとのＩＩＩＶ−１の形態学的類似性、 生物学的類似性及び分子類似性が特に重要である（上記の文献）。また、ＩＩＩ Ｖ−１は５ＴＬＶ−１１１（ＳＩＶと同じであると考えられる）の如きその他の 霊長類レトロウィルスに関連する（上記の文献）。旧Ｖ−２は５ＴＬＶ−１１１ と血清反応性及びポリヌクレオチド配列相同性を共有し、そして）ＩＩＶ−１誘 発エイズ及びエイズ関連症状（ＡＲＣ）と区別できない臨床症候群を有する西ア フリカの患者から単離された（上記の文献）。

哺乳類のウィルス感染症を治療するために、有効量のにＲＰが哺乳類に投与され る。、　ｍｃＲ＋）は、感染かひとくなる前に哺乳類に投与されることが好まし い。ｄＲＰはウィルス感染症の最初の指示の時点で、またはウィルス感染症を発 生する恐れのある者に予防的に投与されることが最も好ましい。例えば、ｍＣＲ Ｐは、ＨＩＶ−１の如きウィルスで汚染された血液を受け得る同性愛者または外 科患者に予防的に投与し得る。実際に、にＲＰは、好ましくは採血される時点の 血液ツク・ソゲに添加されてあらゆるウィルス、特にＩＩＩＶ−１（これは血液 中に存在し得る）を中和し、そ相こより輸血を受ける者へのウィルスの伝達を防 止することが意図されている。勿論、＋ｒ＋ＣＲＰはウィルス感染症を既に患っ ている哺乳類に投与し得る。

ｍＣＲＰは、一般に、注射（例えば、静脈内注射、腹腔的注射、皮下注射、筋肉 的注射）により、またはリポソーム中に封入されて哺乳類に投与し得る。静脈内 注射が使用されることが好ましい。また、ｍＣＲＰは、例えば、感染の傷部位ま たはその他の部位に局所適用し得る。最後に、ｍｃＲＩ’を噴霧により投与して 呼吸器系感染症を治療することが可能であるべきである。ｍＣＲＰはタンパク質 であるので経口投与できそうにないことが注目されるべきである。

投与される必要があるにＲＰの投与量は、ｍＣＲＰを受ける哺乳類、感染の型、 感染の重度、投与の経路、及び哺乳類に投与されるその他の薬剤の同一性に応し て変化することが、当業者により理解される。また、にＲＰの１回よりも多く投 与することが必要なことがあることが、理解される。

ｍｃＲＰの有効投与量及び投与スケジュールは経験により決めることができ、こ のような決定をすることは当業者の技能内にある。本件出願人は、Ｉｋｇ当たり 約５ｕｇ−約１５０ｍｇのｍＣＲＰ、好ましくはＩｋｇ当たり約２５０μｇ〜約 ］　５ｍｇ　の投与量がウィルス感染症を治療するのに有効であることがわかっ た。一般に、ｍＣＲＰの幾つかのこのような投与量が哺乳類に与えられる必要が あり、そして投与の間隔は約１日〜約７日であることが好ましい。ｎＩｃＲＰの 投与は、哺乳類に健康が回復されるまで続けられるべきである。

医薬上許される担体が公知である。例えば、ｍｃＲＰの投与に適した担体として 、液体、例えば、水、生理食塩水及び緩衝液が挙げられる。食塩用リン酸緩衝液 、ｐｌ（７，４が担体として使用されることが好ましい。また、ｍｃＲＰはリポ ソームに封入されて投与し得る［Ｄｅｏｄｈａｒら著、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ ｅａｒｃｈ、　４２．５０８４−５０８８　（１９８２）；Ｔｈｏｍｂｒｅら著 、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ、、　１６．１４ ５−１５０　（＋９８４）；　Ｂａｒｎ≠迺■B Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　４４．３０５−３］０　（１９８４）を参 照のこと］。局所投与に関して、ｍｃＲＰは、当業界で公知であるように、ロー ノコン、ゲル、クリーム、等に混入し得る。

ｍｃＲＰがその抗ウイルス効果を与える方法は、未だ知られていない。それは哺 乳類の免疫系に作用し、または免疫系と相互作用してそれをウィルス感染と対抗 するのに更に有効にする。加えて、ｍＣＲＰはウィルスに結合しそうであると大 ０に考えられる。

そうである場合、ｍＣＲＰはウィルスを検出または定量化するためのア・ソセイ に使用し得る。例えば、ｍｃＲＰは共同未決特許出願第０７１５８２．８８４号 明細書に記載されたアッセイの如きアッセイに使用し得る。例えば、ｍＣＲＰは 固体表面に結合でき、体液中でウィルスを結合するのに使用し得る。結合されて いない物質を洗浄して除いた後、ウィルスの標識抗体を使用してウィルスが検出 または定量化し得る。また、抗ウイルス抗体が固体表面に結合でき、ｍｃＲＩ’ が標識し得る。

また、にＲＰは血液の如き液体中に存在するウィルスを中和するのに使用し得る 。

先に注目されたように、ｍＣＲＰは、好ましくは採血される時点て血液バッグに 添加されてあらゆるウィルス、特にＨＩＶ−１，（これは血液中に存在し得る） を中和し、それにより輸血を受ける者へのウィルスの伝達を防止することが意図 されている。

ｍｃＲＰを血液に添加し、続いてこれにＨＩＶ−１を添加する実験からの予備デ ータは、にＲＰが感染力を低下したことを示す。また、にＲＰは、共同未決出願 第０７１５８２．８８４号明細書に記載されているような血漿分離交換装置中の ような固体表面に結合でき、そして血液またはその他の液体がその装置に通され てウィルスを除去し得る。

最後に、ｍｃＲＰは、ウィルスに対する保護を誘発するように設計されたワクチ ン中のアジュバントとして使用し得ることが意図されている。ウィルス感染力を 中和するｍｃＲＰの能力が、このようなワクチンを更に安全にすべきである。

ヒトＣＲＰを、Ｖｏｌａｎａｋｉｓら［Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１１３．９ −１７　（１９７８）］により記載され、Ｐｏｔｅｍｐａら［Ｍｏ１．　［ｎｗ ｎｕｎｏｌ、、　２４．５３１−４１　（１９８７）コにより改良されたホスホ リルコリン置換バイオゲル＾０．５ｍ（バイオラド・ラボラトリイズから得られ るアガロース系樹脂）を使用してカルシウム依存性アフィニティークロマトグラ フィーにより胸膜または腹水から単離した。簡単に言えば、胸膜または腹水をホ スホリルコリン置換カラムに通し、ＣＲＰを結合させた。次いで、２８０ナノメ ーターにおける吸光度が０．０２未満になるまで、そのカラムを２ミリモルのＣ ａＣｌ　２を含む７５ミリモルの食塩用トリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣＩ−緩衝液（ ｐＨ７，２）で徹底的に洗浄した。ＣＲＰを７５ミリモルのトリス、７．５ミリ モルの食塩用クエン酸緩衝液（ｐｌ＋７．２）で溶離した。

この高濃度のトリスは、アフィニティー精製ＣＲＰ製剤をしばしば汚染する非特 異的吸着されたタンパク質をかなり減少する。

ＣＲＰを含む両分を溜め、脱イオン水で３倍に希釈し、Ｄ［！５２イオン交換樹 脂（ワットマン（Ｔｈａｔｍａｎ）から入手）に吸着させ、次いで０．０５Ｍ　 〜０．５ＭのＮａＣｌの線形塩勾配で溶離した。ＣＲＰを含む両分を溜め、２〜 ５ミリモルのＣａＣＩｔまで再度石灰化しく適当な量のＩＭの溶液を添加するこ とにより）、未置換のバイオゲルＡ０．５ｍカラムに適用して残留血清アミロイ ドＰ成分（ＳＡＰ）を除去した。

次に、ＣＲＰを０．７〜１．４ｋｇ／ｃｍ２（１０−２０ｐｓｉ）の窒素雰囲気 下で限外濾過（アミコン（Ａｆｆ＋１ｃｏｎ）；ＰＭ３０膜）を使用してｌａｇ ／ｍｌに濃縮した。■、９８のＣＲＰ吸光係数（ｍｇ／ｍｌ）を使用して濃度を 測定した。次に、濃縮ＣＲＰを２ミリモルのＣａＣＩｚを含むｌＯミリモルの食 塩用トリスーＨＣｌ−緩衝液（ｐＨ７、２）で徹底的に透析し、滅菌濾過して４ ℃で貯蔵した。これらの製剤は５Ｏ３−１”ＡＧＥ電気泳動で単一のＭｒ　２３ ．０００バンドを生じ、ＳＡＰ　、　ＩｇＧ及び抗原性につき試験された全ての その他のタンパク質の９９％より多くが除かれた。

１１ＣＲＰをつくるため、ｌ　ｍｇ／ｍｌのＣＲＰ　（上記のようにして調製さ れた）を、ｌＯミリモルのＥＤＴＡの存在下で３７℃で１時間にわたって８Ｍの 超純粋尿素（シュワルツ−マン（Ｓｃｈｗａｒｔｚ−Ｍａｎｎ、　Ｓｐｒｉｎｇ 　Ｖａｌｌｅｙ、　ＮＹ））中でインキュベートした。尿素を０．０１５Ｍの塩 化ナトリウムを含む１０ミリモルのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，４）また はトリス−ＨＣＩ＝緩衝液（ｐＨ７，２）中で透析により除去した。出発タンパ ク質の９０％より多くが透析後に溶液相中にあると考えられた。

ａ＋ｃＲＰを０．２０ミクロンのフィルター（ゲルマン（Ｇｅｌｍａｎ））によ り滅菌濾過した。

次いて濃度を、０．０１５Ｍの塩化ナトリウムを含むｌＯミリモルのリン酸ナト リウム緩衝液、ｐＨ７，４で０．５ｍｇ／ｍｌに調節してにＲＰの溶液を生成し た。この溶液を、本明細書中“可溶性＋ｎＣＲＰ”と称する。

滅菌濾過した可溶性ｎｙＣＲＰの一部を、塩化ナトリウムを添加することにより 生理イオン濃度に調節して０．１５ＭのＮａＣＩの最終濃度を得、次いで水浴中 で１５分間インキュベートした。にＲＰの大部分が自己凝集して乳白色の溶液を 生成し、これを約５０００　Ｘ　ｇで１０分間遠心分離してタンパク質を沈降さ せた。沈降したタンパク質を適当な容積の無菌緩衝液（好ましくは、Ｏ，１５Ｍ のＮａＣｌを含むＩＯミリモルのリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７，４）中で再 度呼局させて２〜４　ｍｇ／ｍｌの最終濃度のｍｃＲＰを得た。この懸濁液を、 本明細書中“ｍｃＲＰ懸濁液”と称する。

Ｂ、試験管内アッセイ バートＡに記載されたようにして調製された可溶性、ｍＣＲＰ及びｍｃＲＰ懸濁 液を、ＨＩＶ−１に対する活性に関するそれらの基準化された試験管内アッセイ において試験するためにナショナル・カンサー・インスティチュート（ＮＣＩ） に提出した。

ＭＣＩにより使用されたアッセイは、Ｗｅｉｓｌｏｗら著、　Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃ ａｎｃｅｒ　１ｎｓｔ、、　８１゜５７７〜５８６　（＋９８９）に記載された アッセイである。この操作は、ウィルス増殖サイクルのあらゆる段階で作用する 薬剤を検出するように設計される。ウィルス活性を妨害するようにウィルス粒子 、細胞、またはウィルス遺伝子産物と相互作用する薬剤は、細胞を細胞崩壊から 保護するであろう。

簡単に言えば、アッセイを以下のように行った。細胞培地中のｍＣＲＰの連続希 釈液を調製した。Ｔ４リンパ球（ＣＥＭ細胞系）を添加し、短い間隔で、ＨＩＶ −１を添加した。培養物を３７℃で５％二酸化炭素雰囲気中で６日間インキュベ ートした。次いでテトラゾリウム試薬（２，３−ビス［２−メトキシ−４−ニト ロ−５−スルホフェニル］−５−［（フェニルアミノ）カルボニル］−２０−テ トラゾリウムヒドロキシド）を全てのウェルに添加し、培養物をインキュベ−１ −して生存細胞によるホルマザン発色を可能にした。個々のウェルを分光光度計 により分析してホルマザン生成を定量化し、顕微鏡で見て生存細胞を検出して、 保護活性を確認した。ｍｃＲＰで処理されたウィルス感染細胞を同一プレート上 でにＲＰで処理された感染されていない細胞（毒性対照）及びその他の適当な対 照（未処理の感染細胞、未処理の感染されていない細胞、細胞を含まないｍｃＲ Ｐウェル、等）と比較した。

全ての試験を同一条件下で同時に行われた陽性対照（ＡＺＴ処理したもの）と比 較した。

アッセイの結果を図ＩＡ−Ｅに示す。これらの図中、ダイヤモンド形記号を結ぶ 実線は、感染されていない未処理の対照に対するｍｃＲＰまたは八ＺＴて処理さ れたＩ（ＩＶ−１感染細胞の生存率を示す。三角形記号を結ぶ破線は、同じ感染 されていない未処理の対照（毒性対照）に対するｍＣＲＰまたはＡＺＴで処理さ れた感染されていない細胞の生存率を示す。ウィルス細胞変性効果が、点線の基 準線により示される。

この線は、処理の不在下のウィルスによる細胞の崩壊の程度を示し、定性対照パ ラメーターとして使用される。５０％未満のこのパラメーターの生存値は許容し 得ると考えられる。保護率（％）が、グラフの右側に示される。

図ＩＡ−１０に示されるように、ｍｃＲＰは優れた抗＋１１Ｖ−１活性を有して いた。＋ｎＣＲＰは１００〜１５０μｇ／ｍ　Ｉで７３〜１００％程度に大きい 保護を与えた（図ＩＡ及びＩＢを参照のこと）。また、ｍＣＲＰは、試験したあ らゆる投与量てＴ４細胞に対し毒性を殆ど示さないか、または全く示さなかった 。

５０％の有効濃度（ＥＣ，。）に関するおよその値がＮＣＩにより４５μｇ／ｍ ｌと計算された。

５０％の抑制濃度（ＩＣ３゜）を計算できなかった。何となれば、ｍＣＲＰ単独 による抑制が殆ど検出されないか、または全く検出されなかったからである。こ れらの結果はＡＺＴ対照で得られた結果（図ＩＥを参照のこと）と比較して非常 に有利である。

実施例２　サルのＳＩ■感染を治療するための修飾ＣＲＰの使用ｍＣＲＰをンミ アン免疫不全ウィルス（Ｓ閑に対する活性につき生体内で試験した。

樹立Ｓｌｖ感染症を有する２匹の雄のアカゲザル（マカカ・ムラツタ（Ｍａｃａ ｃａ　ｍｕｌ−ａｔｔａ）Ｘ２Ｂ及び５０Ｂと称する）を使用した。それらは両 方ともに、＋ｎＣＲＰによる治療が開始される約１０ケ月前に約１０００７ＣＩ Ｄ、ｏＳｆＶｍａｃ２５１ウィルスを与えられていた。

それらは別の実験薬剤（何であるかは知られていない）でうまく治療されなかっ たが、ｍｃＲＰを与えてその他の薬剤を“ウォッシュアウト”する少なくとも１ ケ月前にいかなる種類の治療を受けていなかった。

夫々のサルに５日連続で毎日１６ｍｇのｍｃＲＰ懸濁液（実施例１、パートＡに 記載されたようにして調製）を静脈内注射した（５．５〜５．９ｋｇのサル当た り合計８０ｍｇ）。

治療の１日日を日ｌと称した。

臨床観察を１９日間にわたり毎日１回行った。完全な物理試験を治療前の日１及 び日１９に行った。制限された物理試験（温度、脈拍及び呼吸）を日３．５及び １２に行った。

血液試料を、日ｌ、３及び５にｍＣＲＰの注射の直前に採取した。また、血液試 料を日１２及び１９に採取した。血液試料をフルオレセンス励起セルソーティン グ（ＦＡＣＳ）により分析して種々のリンパ球サブセントの％を測定した。また 、ウィルス力価及びＳＩＶ　ｐ２７コアタンパク質の量を測定した。ルーチンの 血液学試験及び血液科学試験を日１．５及び１９に採取した血液試料につき行っ て、動物力＜ｍＲＰによる治療の結果として何らかの副作用に苦しんでいるかを 測定した。

ＦＡＣＳを製造業者（ベクトン・ディキンマン（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓ ｏｎ））の指示に従って全血につき行った。簡単に言えば、抗体１０〜２０μＩ を、ＨＤＴＡを含む血液１００μ■に添加し、その混合物を暗所で１０分間イン キュベートした。次いてＦＡＣ３溶解溶液（ベクトン・ディキンマン）２ｍ１を 添加し、インキュベーションを室温で１０分間続けた。細胞を、５％のウシ胎児 血清を含む最少必須培地中で１回洗浄し、次いて０．５％のパラホルムアルデヒ ド中で定着した。試料をベクトン・ディキンマンＦＡＣ３ｃａｎ血球計算機で分 析した。

ＣＤ４マーカーを有するＴリンパ球のレベルが、ＨＩＶ−１感染の場合と同様に 、Ｓ＋Ｖ感染の結果として低下される。Ｙａｒｃｈｏａｎら著、　Ａｎａｌ　Ｉ ｎｔｅｒｎ、Ｍｅｄ、、　１１５．１８４−８９　（１９９１）。サルの正常値 は合計１５００のリンパ球のうちの約４５０（３０〜３２％）であると報告され ている。ごく最近、疾病管理センターは、エイズの定義が２００（１４％）以下 のＣＤ４　リンパ球カウントを有するものであると変えられることを提案した。

Ｃｈｉｃａｇｏ　Ｔｒｉｂｕｎｅ、　１９９１年１１月１５８．　１節、５頁。

これと同じ程度に低い値を有するものが、ひどく免疫悪化されたと考えられる。

抗ＣＤ４モノクローナル抗体０ＫＴ４ａ（オルト（ＯｒＬｈｏ））を使用して得 られた日１．３．５．１２及び１９のサル５０Ｂの血液中のＣＤ４リンパ球の％ が下記の表１に示される。

このサルは日Ｉに２２．３％のＣＤ４　リンパ球で開始した。こうして、そのＣ Ｄ４レベルが低下されたが、“エイズレベル”ではなかった。治療中（日３及び ５　）　、ＣＤ４の％レベルは、日１の開始レベルと比較して日３てＩ７．９％ 増加し、日５て１０．３％増加した。ｍｃＲＰによる治療が停止された後の“ウ ォッノユアウト”期間中に、ＣＤ４の％レベルが日ｌの値より下に低下した。

また、サル２Ｂに関する結果が表１に示される。サル２Ｂは日１に１４．７％の ＣＤ４　リンパ球レベルで研究を開始し、それ故、　“エイズレベル”付近であ った。ＣＤ４の％レベルは、開始レベルと比較してｍｃＲＰによる治療後の日３ で１２．２％増加し、日５て１７．７％増加した。ＣＤ４の％レベルは２週間の “ウォッシュアウト”期間中に開始レベルより下に低下した。

ＡＺＴによる治療の数カ月にわたるＣＤ４の％レベルの５％の上昇は優れている と考えられる（Ｒ，Ｍｕｒｐｈｙ博士の個人的な情報）。それ故、ｍＣＲＰによ る治療の数時間以内のサル２Ｂ及び５０Ｂの両方におけるＣＤ４レベルの約ｌＯ 〜１８％の観察された上昇は極めて良好と考えられる。

ｌμｌ　ＣＤ４細胞　ｌμｌ　ＣＤ４細胞当たりの　の％　当たりの　の％ ＣＤ４細胞　ＣＤ４細胞 の絶対数３　の絶対数 ２Ｂ　１　４７９　１４．７　−−−−　−−−−３　８３５　１６．５　７４ ．３　１２．２５　６７８　１７．３　４１．５　１７．７１２　５２９　１２ ．４　１０．４　−１５．６１９　４４６　１２．５　−６．９　−１５．０５ ０８　１　１０９２　２２．３　−−−−　−一−−３１３３０２６，３２１， ８１７，９ ５９５２２４，６−１２，８１０，３ ＋２　１０９１　２０．７　０．０　−７．２１９　５４６　２１．４　−５０ ．０　−４．０１リンパ球及び単球の合計数にＣＤ４細胞の％を掛けることによ りめられたＣＤ４リンパ球の絶対数 また、ＣＤ４に特異的な異なるモノクローナル抗体であるＬｅｕ３ａを使用して ＣＤ４リンパ球を監視した。結果が下記の表２に示される。サル５０Ｂに関して 、ＣＤ４リンパ球の％の変化のパターンは、０ＫＴ４ａて得られたパターンに似 ていた。サル２Ｂは異なるパターンを示した。ＣＤ４リンパ球の％は治療期間中 比較的変化されないままであったが、治療が停止された後にかなり低下した。し かしながら、サル２Ｂに関して測定されたＩＩＬ１当たりのＣＤ４リンパ球の絶 対数は、！ＩＩＣＲＰによる治療中（日３及び５）に増加した。

ｌμｌ　ＣＤ４細胞　ｌμｌ　Ｃ１）４細胞当たりの　の％　当たりの　の％ ＣＤ４細胞　ＣＤ４細胞 の絶対数°　の絶対数 ２８　１　５７２　１７．６　−−−−　−−−−３　８２７　１６．４　４４ ．６　−６．８５　６９１　１７．６　２０．８　０．０１２　５６２　１３． １　−１．７　−２５．６１９　４９１　１３．８　−１４．２　−２１．６５ ０Ｂ　１　９９０　２０．２　−−−−　−−−−３　１３Ｂ２　２７．４　３ ９．６　３５．６５　９３７　２４．２　−５．４　１９．８＋２　１０４４　 １９．８　５．５　−２．０１９　５２５　２０．６　−４７．０　２．００リ ンパ球及び単球の合計数にＣＤ４細胞の％を掛けることによりめられたＣＤ４リ ンパ球の絶対数 また、ＣＤ８リンパ球のレベルを、抗ＣＤ８抗体Ｌｅｕ２ａ（ベクトン・デイキ ンソン）を使用して測定した。結果が下記の表３に示される。サル２Ｂは、日１ のレベルと比較してｍｃＲＰによる治療中及び治療後にＣＤ８リン／く球の増加 された％を示した。

サル５０Ｂは治療期間中にＣＤ８リンパ球の実質的に変化されない％を示したが 、ｍ１ＲＰによる治療が停止された後に減少された％を示した。

ｌμｌ　ＣＤ８細胞　１μＩ　ＣＤ８細胞当たりの　の％　当たりの　の％ ＣＤ８細胞　ＣＤ８細胞 の絶対数°　の絶対数 ２Ｂ　１　１９２６　５９．１　−−−−　−−ｍ−３３５８６７１，０８６， ２２０，１ ５２５５１６５，１３２，５１０，２ １２２７０Ｂ　６３．３　４０．６　７．１１９　２４４６　６８．７　２７． ０　１６．２５０Ｂ　１　２５８７　５２．８　−−−−　−−−−３　２７５ ２　５４．５　６．４　３．２５　２０２１　５２．２　−２１．９　−１．１ １２　２５４７　ｉ８．４　−１．６　−８．３１９　１１９９　４７．０　− ５３．７　−１１．０”リンパ球及び単球の合計数にＣＤ８細胞の？６を掛ける ことによりめられｔこＣＤ８リンパ球の絶対数 最後に、４Ｂ４　リンパ球のレベルを測定した。結果が下記の表４Ｉこ示される 。

４Ｂ４マーカーは、応答して抗原を再生する“メモリー”ＣＤ４１Ｊンノく球（ こ存在する。

この細胞の集団は、免疫系により既に出会った抗原に対し応答する免疫系の能力 に関係する。“天然”ＣＤ４細胞は、抗原に対し新たに応答するように免疫系を “教えること”に関与する細胞である。

サル５０Ｂでは、４８４リンパ球の絶対数が開始レベルの上下に変動したが、％ が１９日の試験期間中に一定に上昇された（表４を参照のこと）。サル２Ｂでは 、４Ｂ４リンパ球の絶対数が１９日の試験期間中に増加されたが、４Ｂ４リンパ 球の％が減少し、次いてほぼ開始レベルまで増加した（表４を参照のこと）。

１μｍ４Ｂ４細胞　１μｍ４Ｂ４細胞 当たりの　の％　当たりの　の％ ４Ｂ４細胞　４Ｂ４細胞 ３　２０２　４．０　１４．８　−２５．９５１８７４．８　３２．５　−１１ ．１１２　１９５　４．６　４０．６　−１５．６＋９　１８９　５．３　２７ ．０　−１．９５０Ｂ　１　２６９　５．５　−−−−　−−−−３　３１０　 ６、＋　６．４　１２．０５　２２１　５．７　−２１．９　４．４１２　３５ ８　６．８　−１．６　２４．１１９　１７６　６．９　−５３．７　２６．３ “リンパ球及び単球の合計数に４Ｂ４細胞の％を掛けることによりめられた４Ｂ ４リンパ球の絶対数 先に注目されたように、日１，５及び１９に採取された血液試料をルーチンの血 液学試験及び血液化学試験にかけた。血液学及び血液化学の結果は、１ＩＣＲＰ による治療の結果としてかなりの変化及び副作用を全く示さなかった。全てのパ ラメーターは研究中に正常な制限内に留まった。

最後に、かなりの臨床上の異常がｔＩＣＲＰによる治療の結果として観察されな かった。実際に、両方のサルは日ｌから日１９まで体重を増加した（その増加は ９％及び１５％であった）。

サルの血漿中のＳＩＶ　ｐ２７コアタンパク質の量を、コウルター（ＣＯＵＬＴ ＥＲ，商標）ＳＩＹコアＡｇアッセイキットを使用して測定した。そのアッセイ を製造業者の指示に従って行った。簡単に言えば、ＳＩＶコアＡｇアッセイは、 ミクロウェルに被覆されたネズミモノクローナル抗体（抗Ｓ１ｖコア抗原ｐ２７ ）を使用する酵素イムノアッセイである。そのアッセイを行うために、夫々の試 料２００μｍを抗体被覆ミクロウェルに添加し、ミクロウェル・ストリップを覆 い、室温で１６〜２０時間インキュベートした。試料中に存在する場合、抗原は 抗体被覆ミクロウェルに結合するであろう。インキュベーンコン期間後に、ウェ ルをつすツシュ緩衝液３００μｍで６回洗浄した。次いで、ＳＩＶのビオチニル 化ヒト抗体２００μｌを添加し、ストリップを３７℃で１時間インキュベートし た。ウェルを再度つオツシュ緩衝液３００μｍで６回洗浄した。次に、接合スト レプトアビジンホースラディツシュペルオキシダーゼ２００μｍを夫々のウェル に添加し、ストリップを３７℃で３０分間インキュベートした。ウェルを再度ウ ォッシュ緩衝液３００μＩで６回洗浄した。次に、テトラメチルベンジジン基質 ２００μｍを夫々のウェルに添加し、ストリップを室温で３０分間インキュベー トした。基質の存在下のペルオキシダーゼと過酸化水素の反応により発色し、発 色の強さは試料中に存在するＳＩＶ抗原の量に直接比例する。

その反応をコウルター・ストツピング試薬５０μｌの添加により停止し、ストリ ップをマイクロタイタ・プレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。ｐ２７の 値（ｎｇ／ｍりを、キットにより供給された試料から作成した標準曲線と比較し て得た。また、陽性対照及び陰性対照を実験した。陰性カットオフ値を計算した 。この陰性カットオフ値は陰性対照つ１ル（希釈剤のみ）の平均と０．０３の所 定の係数の合計である。カットオフ値以上の吸光度値を有する試料がＳＩＶ抗原 に対し陽性と考えられる。

これらの結果が下記の表５に示される。血漿抗原レベルは、研究の全ての時点で 両方のサルで検出限界を下まわった。平均の陰性対照吸光度は０．０３８であり 、コウルター陰性カットオフは０．０６８であると計算された。吸光度値はカッ トオフ値より大きくなかった。

２Ｂ　Ｏ，０４３０，０４７０，０３７０，０１９０，０１６５０Ｂ　Ｏ，０３ ２０，０３７０，００２０，００９０，００８ウィルス滴定を、以下のようにし て、防腐剤を含まないヘパリン中で無菌採取された血液試料で行った。末梢血単 核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール・パック（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ）を使 用して血液から分離した。３．　＋４　ｘ　１０’の細胞で開始するＰＢＭＣの ６回の４倍希釈液及び５０μｍで開始する血漿の６回の４倍希釈液を、９６ウエ ル・マイクロタイタ・プレート中でＣＥＭＸＩ７４細胞と同時培養した（合計容 量２５０μｌ及びＣＥＭＸ１７４細胞の合計数２．５　ｘ　１０’）。培養液上 澄み試料を日１４に回収した。培養物を、上記のようにしてｐ２７抗原につき試 験した。全ての培養物を６回反復して実験した。陰性カットオフ点を、陰性対照 として感染されていない細胞培養液上澄みを使用して夫々のアッセイプレートに つき上記のようにして計算した。夫々のウェルをカットオフとの比較により陽性 または陰性と決定した。個々のウィルス力価をＲｅｅｄ及びＭｕｅｎｃｈ著、　 Ａｎ＋ｅｒ、Ｊ、Ｈｙｇｉｅｎｅ、　２７．４９３　（１９３８）の方法により 反復値を合計することにより計算した。こうして計算された力価の負のｌｏｇを 図２Ａ及び２Ｂ中に時間に対しプロットする。また、図２Ａ及び２ＢはＣＤ４　 リンパ球レベル（ＯＫ７４ａを使用）を示す。

図２Ａ及び２Ｂかられかるように、１ＩＩＣＲＰによる治療後に夫々のサルにお いてＰＢＭＣ及び血漿の両方で測定されたウィルス力価の著しい低下があった。

変化はＰＢＭＣ力価につき最大であり、これらはサル５０Ｂにつき約２．０１ｏ ｇ低下し、サル２Ｂにつき１．５１ｏｇ低下した。ウィルス力価はにＲＰの最後 の投与後の約１週間にわたって低く留まったが、その後再度上昇し始めた。血漿 中の９２７抗原のレベルは同様のパターンを示した。

以上から、Ｓ１ｖ感染したサルへのｍ１ＲＰの注射は細胞関連ＳｆＶウィルス力 価及び血漿ＳＩＶウィルス力価を著しく減少したことが結論し得る。また、＋ｎ ＣＲＰはｍ１ＲＰによる治療中にＳＩＶ感染したサルのＣＤ４リンパ球の％を増 加した。ｍｃＲＰ治療は副作用を生じなかった。

試料１度Ｃｕ　９　／ｄ）の１０９１ｅ試料濃度（μｇ／ＩＩｇ）のＩ０９＋ｅ 試料濃度Ｃｕｔａ／ｄ）の１０９１６ 日数 ＯＣＤ４％　ａ　ＰＢＭＣウイルス力価　×血漿ウィルス力価　１処３１日フロ ントページの続き （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ （ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ， ＳＮ、　ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　 ＣＨ，Ｃ３゜ＤＥ、ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、 　ＬＵ、　ＭＧ、　ＮｉＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、ＰＬ、ＲＯ，ＲＵ、ＳＤ 、ＳＥ

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．有効量の修飾Ｃ反応性タンパク質を哺乳類に投与することを特徴とする哺乳 類のウイルス感染症の治療方法。
2. ２．ウイルス感染症が、レトロビリダエ科の一員であるウイルスにより引き起こ される請求の範囲第１項に記載の方法。
3. ３．ウイルスがヒト免疫不全ウイルス１である請求の範囲第２項に記載の方法。
4. ４．ウイルスがサル免疫不全ウイルスである請求の範囲第２項に記載の方法。
5. ５．ウイルスを修飾Ｃ反応性タンパク質と接触させることを特徴とするウイルス の中和方法。
6. ６．ウイルスが血液試料中に存在する請求の範囲第５項に記載の方法。
7. ７．ウイルスがレトロビリダエ科の一員である請求の範囲第５項に記載の方法。
8. ８．ウイルスがヒト免疫不全ウイルス１である請求の範囲第７項に記載の方法。
9. ９．ウイルスがレトロビリダエ科の一員である請求の範囲第６項に記載の方法。
10. １０．ウイルスがヒト免疫不全ウイルス１である請求の範囲第９項に記載の方法 。
11. １１．血液試料が輸血に使用され、かつ修飾ＣＲＰが輸血の前に血液試料に添加 される請求の範囲第６項に記載の方法。