JPH07501880A - 分析試験用の試薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 分析試験用の試薬組成物 発明の背景 １、発明の分野 本発明は、新規試薬組成物およびこれらの組成物の製造方法に関するものである 。特に、本発明は、生物学的試料の分析に有用な新規凍結乾燥球状試薬および稀 釈剤に関するものである。

臨床上の生物学的試料の簡便で、効果的な試験用試薬の製造において、乾燥した 化学配合物か均質で、しかも分離した一定の量で得られることは重要である。

これらの試薬は正確に測定されている少量で能率よく、かつまた経済的に製造さ れなければならない。しかしながら、有機物質からなる試薬は、保存中に振り落 とされたり、あるいは分解したりする傾向を存し、量的制御の問題が生しる。一 方、試薬は、その安定性を増加させるために、代表的には乾燥した形態で提供さ れる。現在の、乾燥化学配合物の製造技術には、乾式配合、噴霧乾燥、または液 床乾燥なとの方法か包含される。しかしなから、これら３種の方法はいづれも、 これらの方法を費用のかかるものにするか、効率の悪いものにするか、または実 施か困難であるものにする、制限を存する。

乾式配合法ては、比重の異なる化学物質の均質な配合物を得ることか困難である 。さらにまた、非常に少量の成分を大量の別の成分と混合する場合には、均質性 の達成は特に困難である。一度均質にされても、この配合された化学物質を再現 性（１％以内）をもって、少量（約１０ｍｇより少ない量）ずつ分配することは 極めて困難である。

噴霧乾燥法は、試薬を先ず液体中に溶解させることから、さらに均質な化学物質 配合物をもたらす。しかしながら、噴霧乾燥を使用すると、配合された化学物質 を正確な寸法で得るには、費用かかかり、また困難である。一般的実施において 、この方法は２０％よりも大きい変化係数を有する寸法分布を有する粒子をもた らす。均一な粒子１法を得るためには、生成する粒子を再処理しなければならな い（通常、凝集させる）。凝集後の、これらの粒子は一般に、元の噴霧乾燥粒子 よりも溶解性に乏しい。さらにまた、これらの方法は代表的に、フルオロカーボ ン冷凍溶液を使用する方法であり、この冷凍剤は環境に対して有害である。

液床法は、液状試薬配合物を粒子上に噴霧し、次いてこの液状物を乾燥させて、 配合試薬により被覆されている粒子を得る方法である。

この方法を使用すると、均一τｊ法の粒子の形成か困難であり、かつまた均一被 覆か困難である。

本発明に係わる試薬の中で、特に重要な試薬は、遠心分析機における生物学的試 料、例えば血漿または血清、の分析に有用な試薬である。このような分析機では 、被験試料の計量に、試料と適当な稀釈剤との混合に、そしてまた細胞成分から の液体の分離に、ローターか使用される。その別々の量か光学的に測定される化 学試薬を含有する複数の分離している試験凹部かまた、ローターによって提供さ れる。

遠心ローターの試験凹部中の生物学的試１）を分析するためには、分析に使用さ れる試薬に対して多くの要件か要求される。特に、この分析は典型的に自動化さ れていることから、分析速度は格別に重要である。さらにまた、かなりの臨床診 断分析では、試料を試薬に添加してから短時間内に測定かなされる必要かある。

従って、乾燥試薬調製物は、試料溶液中に迅速に溶解されなければならない。さ らに、試薬の急速な水和は泡を形成することかあり、この泡は光学的測定を干渉 して、結果に対して有害に作用することかある。

遠心分析機では、代表的に、分析の前に試料を稀釈剤と混合する。稀釈された試 料をローター中に入れた後に、この稀釈剤の添加量を測定することはできない。

料の稀釈間をその場て、１．１１定するための都合のよい方法か要求される。さ らにまた、稀釈しようとする試料か、細胞を含有している場合には、この細胞の 浸透圧によるショックを防止するために、等張濃度の化合物を含有していなけれ ばならない。しかしなから、このような化合物はまた、分析を増強してはならな いし、抑制してもならない。多くの等張溶液か公知であり、これらには塩類溶液 、グルコース、またはリン酸塩緩ｔ＋塩類溶液か包含される。これらの溶液の中 て、適当なものはない。これはこれらの溶液か溶液に追加のｖｉ衝能を付加し、 あるいはこれらの溶液か分析対象と同一の化学物質を導入するからである。

従って、従来技術は、遠心分析機における上記問題を回避することかできる試薬 組成物に欠けている。特に、従来技術には、試料溶液中に迅速に溶解し、かつま た泡形成問題を付随していない、安価で、信頼できる試薬調製物は存在していな い。さらにまた、現在入手できる稀釈剤は、容易に測定することができず、かつ また分析結果を変えることがあることから、適当なものではない。本発明は、こ れらの問題およびまた関連問題を解消するものである。

２　背景技術の説明 米国特許Ｎｏ、３，７２１，７２５および同Ｎｏ、３．９３２，９４３は、凍結 乾燥された試薬の製造方法に関するものであり、この方法は試薬含有溶液を、フ ルオロカーホン冷凍剤の移動床に噴霧し、次いて生成する冷凍した滴を凍結乾燥 させることからなる方法である。米国特許Ｎｏ、４．８４８．０９４には、基本 的に球状の冷凍小滴の生成方法およびこの冷凍小滴を冷凍液から分離する方法が 記載されている。米国特許Ｎｏ、４．６５５，０４７には、比較的濃厚な液体を 少し高い所から、冷凍用物質中に滴下することにより、この滴状液体を凍結させ る方法か記載されている。米国特許Ｎｏ、３，８１９．４８８は、グルタミン酸 オキサリックトランスアミナーゼ活性およびグルタミン酸ピルビン酸トランスア ミナーゼ活性測定用の安定な凍結乾燥診断組成物を提供するものである。米国特 許Ｎｏ、４，５８８，６９６は、ホルムアルデヒドおよび（または）グルタルア ルデヒド試験に使用される錠剤の製造に関するものである。米国特許Ｎｏ、４゜ ２９５．２８０、同Ｎｏ、４，３５１，１５８および同Ｎｏ、４．　７１２．　 ３１０はいずれも、相性か悪い化合物を含有する均質組成物の製造方法に関する ものである。米国特許Ｎｏ、４，８２０，６２７には、診断用試薬の錠剤形成に 適する粒子の製造方法か記載されている。米国特許Ｎｏ、４，１１５，５３７は 、イオン交換樹脂を含有する診断用錠剤に関するものである。米国特許Ｎｏ、４ ．　７５５．４６１は、錠剤形の血漿組成物に関するものである。米国特許Ｎｏ 、４゜６７８．８１２および同Ｎｏ、４，７６２，８５７は両方ともに、賦形剤 および安定剤として、トレハローズを含有する診断用錠剤に関するものである。

トリト゛　ン（ＴＲＩＴＯＮ；登録商品名）Ｘ１００の使用も開示されている。

米国特許Ｎｏ、４．７１６，１１９には、血清にテトラメチルアンモニウムアセ テートを添加することか記載されている。ルーマニア特許出願Ｎｏ、８５，１５ ５は、ｐ−ニトロフェニルホスフェートを含有する酵素アルカリホスファターゼ 試薬錠剤に関するものである。Ｄｒｉｓｃｏｌｌ等によるＣＩ　ｉｎ、　Ｃｈｅ ｍ、　、　２９：　１６０９−１６１５（１９８３）には、光学検定法用の錠剤 形試薬を含む装置／試薬系か記載されている。

本発明の要旨 本発明は、生物学的試料の分析用組成物に関するものである。特に、本発明は、 試料分析用試薬を含有する球状試薬およびこの球状試薬の製造方法に関するもの である。本発明の球状試薬は、代表的には、約１０秒より短い時間で、迅速にか つまた完全に、溶液中に溶解することかできる。本発明の球状試薬は、約１．　 ７ｍｍ−約２．３ｍｍの直径を存し、そしてまた約３％より小さい重量変化係数 を存する。これらの球状試薬は、生物学的試料の分析に必要な試薬に加えて、当 該球状試薬か溶解された場合における泡の生成を抑制するのに充分な濃度の界面 活性剤および当該球状試薬中に水を導入することかてきる化学格子の形成を促進 するのに充分な濃度の充填剤を含有する。

この界面活性剤は代表的に、非イオン性洗剤、例えはオクトキソノール（ｏｃｔ ｏｘｙｎｏｌ　）　９　［ｈ’月・ン（登録商品名）Ｘ−＋００］またはポリオ キシエチレン９ラウリルエーテルである。球状試薬中の、この界面活性剤の濃度 は代表的には、再構成された試薬中における濃度か約０．０８ｇ＝約３．１ｇ／ １００ｍ１であるような濃度に調節する。

本発明に使用するのに適する充填剤は、ポリエチレングリコール、ｍｙｏ−イノ シトール、ポリヒニルピロリトン、ウソ血清アルブミン、デキストラン、マンニ トール、コール酸ナトリウム、またはその組み合わせである。この充填剤化合物 は代表的には、乾燥重量で約ｌＯ％−約５０％の濃度で存在させる。この充填剤 化合物によって形成される化学格子は球状試薬か迅速に、かつまた完全に試料溶 液または稀釈液中に溶解することを可能にする。

球状試薬は、所望の試薬（１種または２種以上）の（水性溶液）を調製し、この 水性溶液の正確に測量されている滴を冷凍剤中に分散させ、次いてこの冷凍され た滴を凍結乾燥させることによって生成される。この冷凍剤は代表的には、撹拌 されていない液状窒素である。

試料を光学的に分析する前に、生物学的試料と混合するのに適する稀釈剤かまた 提供される。本発明の稀釈剤は、試料の分析を干渉しない、等張濃度の化合物を 含有する。特に、好適な化合物は、特定の分析ｐＨにおいて緩衝能を有していな い化合物である。この用途に典型的な化合物には、約１２０ｍＭ＝約１５０ｍＭ の濃度のテトラメチルアンモニウムアセテートおよび約２０−３０ｇ／リッター のイノシトールか包含される。この稀釈剤はまた、生物学的試料の稀釈度を測定 するための、光学的測定方法て検出てきるマーカー化合物を含有することもてき る。このようなマーカー化合物には、例えば１．　Ｉ’、３．　３．　３’、３ ’−へキサメチルイントトリカルポシアニンイオダイト、１，１′−ビス（スル ホアルキル）３．　３．　３’、３’−テトラメチルイントトリカルポシアニン 塩類のような染料、酵素基質（例えば、ラフチー１−およびｐ−ニトロフェニル ホスフェート）および酵素（例えば、微生物グルコース−６−ホスフニートデヒ トロゲナーゼおよびＤ−ラフチー１−デヒドロゲナーゼ）か包含される。

好適聾様の詳細な説明 本発明は、例えは血液試料の迅速で経済的な分析を可能にする遠心ローターおよ び分析桟用の、生物学的試料分析用の組成物を提供する。本発明によって、水性 溶液中における当該球状試薬の迅速で、完全な溶解を促進する化学格子を有する 、凍結乾燥された球状試工か提供される。これらの球状試薬はまた、この試薬か 溶解する際の泡の生成を抑制するのに充分の濃度で界面活性剤を含有する。この 球状試薬は、当該分析に対して実質的に作用しない、等張濃度の化合物を含有す る稀釈剤溶液と組み合わせて使用することかできる。さらにまた、試料の稀釈度 をその場で、迅速に、かつまた容易に測定するために、マーカー化合物を使用す ることもてきる。

本発明の球状試薬および稀釈剤は、生物学的試料、特に血漿または血清の光学的 分析用の遠心分析機で使用するのに適している。このような分析機に使用される 遠心ローターは代表的に、血液を適当な稀釈剤と混合し、次いて血漿と細胞物質 とを分離するための手段を有する。このローターはまた、稀釈された血漿を、こ のローター内の複数のキュヘット中に分布させる手段を有しており、これにより 装置から一定量の試料溶液を移す操作を必要とせずに、相違する光学的分析を行 うことか可能になる。所望の分析に必要な試薬を含有する１種または２種以上の 球状試薬を各キュベツトに用意することができる。

以下の同時係属出願に記載されているローターおよび方法を使用すると好ましい ：１９９０年６月２４日付けて出願された米国５ｅｒｉａｌＮｏ、５３２．　５ ２４および１９９０年４月１０付けて出願された３つの出願（米国５ｅｒｉａｌ Ｎｏ、６７８゜８２３．６７８，８２４および０７／６７８，７６２）。これら の出願の記載全部を引用してここに組み入れる。上記出願には、全血からの血漿 の分離用の遠心ローターか記載されており、このローターは、内部チャンノ１− および血漿または血清を１種または２種以上の試薬と組み合わせて、複数の試験 用凹部にそれぞれ分布させる通路を有する。全血を血漿に分離するために必要な チャンバーおよび通路は、計量チャンバーから外側に向かって放射状に位置して おり、この計量チャンバーは血液および（または）稀釈液を正確に計量した量で 分離チャンノ１−に供給する。この分離チャンバーは外側に向かって放射状にｒ γ在するセルトラップを有する。ローターか回転すると、全血中の細胞成分かセ ルトラップに隔離される。このように分離された血漿は次いて複数の試験凹部ま たはキュソヘ・７１−に放出される。この分離および一定量放出工程は回転する ローターにより発生する遠心力の結果として生しる。

本発明の組成物は、上記ローターと組み合わせて、血漿または稀釈血漿の分析に 特に適している。これらの組成物はまた、その他の広く種々の生物学的液体、例 えは尿、溶液、精液、唾液、眼球レンズ液、脳液、を髄液、羊水、および組織培 養液、ならびに食品および工業化学物質等にも有用である。本発明の組成物は、 血漿または稀釈血漿に対して行う必要かあるか、または行うと有用である、広く 種々の分析法の実施に特に適している。これらの分析法は一般に、血漿を１種ま たは２種以上の試薬と混和して、血漿中の特定の成分または特徴の測定に関連し うる、何らかの光学的に検出てきる変化を血漿に生しさせることを必要とする。

好ましくは、色変化、蛍光または発光などに慣用の分光光度計、蛍光１ＵＩＩ定 計、光検出機等で測定することかできる結果を生じさせる反応またはその他の変 化を血漿か受けるようにする。いくつかの場合に、その試験四部で免疫検定およ びその他の特異結合検定を行うこともてきる。しかしなから、一般に、このよう な分析法では、均質性か要求され、また分離工程を必要とするものてないもので あるべきである。その他の場合に、免疫学的反応工程か生起した後に、試験凹部 から血漿を分離するための手段を用意することによって、不均質分析系に適応さ せることもてきる。実施できる通常の血液分析には、グルコース、ラクテートデ ヒドロゲナーゼ、血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＳＧＯＴ ）　、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＳＧＰＴ）　、血液尿 素（窒素）（ＢＵＮ）　、総蛋白質、アルカリ度、アルカリホスファターゼ、Ｃ −反応性蛋白質、ビリルピン、カルシウム、クロライ！−、ナトリウム、カリウ ムおよびマグネシウム等か包含される。上記リストは排他的なものではなく、本 発明の装置および方法を用いて実施できる分析の例を単に示すものである。通常 、これらの試験は、血漿を１種または２種以上の試薬と一緒にして、血漿におけ る目で見て検出てきる、一般に光学的測定により検出てきる変化を生しさせるこ とを必要とする。

一方、本発明の球状試薬は、前記分析法のいずれかに適する試薬から調製する。

代表的には、試薬を含有する水性溶液を調製する。球状試薬の均質性を確保する ために、この溶液は均質でなければならず、かつまた全成分は充分に溶解または り濁させなけれはならない。この溶液の各滴を次いて、冷凍剤、好ましくは液状 窒素中に分配する。本発明で使用されるものとして、液状冷凍剤は、約−７５° Ｃ以下、好ましくは約−１５０°Ｃ以下の常恒沸点を存する液化気体であるもの とする。

冷凍した塊を次いて、凍結乾燥させ、球状試薬を生成させる。この球状試薬は代 表的に、約６９６より少ない量、好ましくは約３％より少ない量の残留水分を含 有する。凍結乾燥は、当技術で公知の標準的方法により行う。代表的には、冷凍 した滴を約５０ミリトール（ｍＴｏｒｒ）−約４５０ミリ）・−ルて、約４時間 −約２４時間、好ましくは約２００ミ１月・−ルて、約６時間、凍結乾燥させる 。

これらの滴は、均一であり、かつまた正確に計量されており、従って生成される 乾燥した球状試薬は均質性を有する。これらの滴か均一で、かつまた正確に計量 されている場合には、これらの滴から調製された一団の球状試薬の不正確度（重 量変化係数）は、約３％以下であり、好ましくは約０．　３％−約２５％の範囲 にある。この重量変化係数をさらに減少させるためには、当該水性溶液を、減圧 ポンプまたは減圧ラインを用いて脱気させ、その後てこの溶液の滴を分配すると 好ましい。この重量変化係数値を得るには、既知量の球状試薬の重量を測定する 。次いで、下記式によって、変化係数（Ｃ，Ｖ、　）を得る。

Ｃ，Ｖ、　＝Ｊ　Ｊ５ｉ：　Ｘ　ｌ　００ｙ−平均じｎ”球状体に係わる）−Σ ｘ／ｎこの方法によって製造される球状試薬の均質性か、後続の錠剤形成工程に おいて、均質な錠剤を得るために要求されることは明白である。これらの滴は要 求される精度を提供する多くの手段のいずれかによって分配することかできる。

代表的には、ＩＶＥＫモデルＡＡＡポンプ（Ｎ、　Ｓｐｒｉｎｇｆ　１ｅｌｄ、 　ＶＴ）か使用される。この溶液は通常、約２．５μｍ−約４０μｍの容量を仔 する分離した滴として分配される。この滴の正確な容量は、特定の用途に依存す る。例えば、総蛋白質測定用の球状試薬を製造する場合には、２．９６μ】の滴 か使用され、Ｃ−反応性蛋白質およびアルカリホスファターゼ測定用の球状試薬 の場合には、２６７μｍの滴か使用される。その他の用途における適当な容量は 以下のとおりである５ＧＯＴ、４．０μｍ、カリウム、４．０μｍ、クレアチニ ン、４０μｍ。

ピリルビス　２．６６７μｍ、アミラーゼ、２．６６７μｍ：コレステロール。

２６６７μｍ；尿酸、３．４７８μｍ、およびグルコース、２．０６５μｍ。

本発明の球状試薬は、水性試料溶液、または懸濁液中に迅速に溶解する。本発明 の試料溶液は稀釈されていてもよく、あるいは無稀釈の生物学的試料であっても よい。球状試薬は代表的には、約３０秒よりも短い時間、好ましくは約１０秒よ りも短い時間で溶解する。この溶解迅速性は、この球状試薬か、破裂して、再構 成容積全体に化学物質を分布させる印象を与える。この球状試薬の迅速溶解は、 当該球状試薬中に水を迅速に配送する化学格子構造を生成させることにより促進 中に充填剤（ｆｉｌｌｅｒ）を含有させる。球状試薬が凍結乾燥されるに従い、 これらの分子か当該球状体における開放空間または化学格子のネットワークの生 成を促進する。球状試薬の充填剤成分は代表的に、ポリマー状化合物、例えばウ シ血清アルブミン、ポリエチレングリコール、デキストラン、ファイコル（Ｆｉ ｃｏｌｌ）（登録商品名；　ＰｈａｒＩＴｋＬｃｉａ　ＬＫＢ　Ｂｉｏｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ、　Ｉｎｔ、、　Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、　Ｎｅｗ　Ｊｅ窒唐■凵 j、 またはポリビニルピロリドンである。さらに、コール酸ナトリウム等の乳化剤も 充填剤として使用てきる。単糖類およびそれらの誘導体、例えばマンニトールま たは多価アルコール、ｍｙｏ−イノノト−ルもまた使用できる。分析に依存して 、この充填剤は、それぞれ個別に、または１種または２種以上の充填剤成分を組 み合わせて、使用することかできる。

本発明の球状試薬は、充填剤に加えてまた、球状試薬か急速に再水和する場合の 泡の生成を防止するのに充分な濃度で、１種または２種以上の界面活性剤を含有 する。前記したように、泡の生成は光学測定を干渉することから、分析に対して 有害である。しかしながら、球状試薬か適当な濃度で界面活性剤を含有している 場合には、このような問題を回避することかできる。適当な界面活性剤には、非 イオン性洗剤、例えばポリエチレン９ラウリルエーテル、オクトキシノール９、 ノントラポール（Ｓｙｎｔｈｒａｐｏｌ　＋登録商品名’）ＮＰ−９０、ドリコ ール（Ｔｒｙｃｏｌ　；登録商品名）５９４１、およびドリコール６７３５等か 包含される。イオン性洗剤、例えはガファソク（Ｇａｆａｃ　；登録商品名）５ ６０、ドデソル硫酸ナトリウム等も適当である。代表的には、これらの界面活性 剤は、再構成された球状試薬中に、約０．０８ｇ／ｌｏｏｍｌ＝約３．Ｉｇ／１ ００ｍ１の濃度で存在させる。

この界面活性剤の使用濃度は、分析に使用される特定の試薬に依存する。

特定の球状試薬の製造に使用する充填剤および界面活性剤は、好ましくは分析に 対する干渉か最低にされるように選択する。これらの成分の最適条件は、表１に より容易に理解される。この表１は、各種分析に使用される試薬とともに使用す るのに適する充填剤および界面活性剤の望ましい特徴に係わる情報を提供するも のである。さらに、下記の例は、例示分析に特に存用であることか見出だされた 充填剤および界面活性剤の正確な濃度を提示している。

試験凹部に正確な寸法の球状試薬を提供するためには、諸成分を球状試薬中に濃 縮させる。予め定められた量の試料により再水和されると、この試薬およびその 他の成分は正確な濃度で提供される。例えば、アルカリホスファターゼ測定用の 球状試薬の成分は代表的には、約６×濃度を有し、そしてまた総蛋白質試薬は、 約２．７×濃度である。特定の分析用の試薬の理想的濃度は、試験凹部の寸法お よび試料容量等に依存して、容易に決定することができる。

前記したように、稀釈剤は代表的に、生物学的試料の分析に使用される。完全細 胞を含有する試料、例えば全血、とともに使用する稀釈剤は、これらの細胞を浸 透圧から守る、等張濃度の化合物を含有しているべきである。しかしながら、稀 釈液中に等張出合物を存在させる場合には、これは分析結果に対して実質的に無 効果てなければならない。等張出合物の存在による、定是分析の結果の変化が５ ％よりも少ない、好ましくは約２．５％よりも少ない、最も好ましくは約１％よ りも少ない場合に、この等張出合物は実質的に無効果であると見做す。特に、等 張出合物によって付与される追加の緩衝能は最少にされるべきである。本発明は 、分析を干渉しない等張濃度の化合物を含有する改良された稀釈剤を提供する。

この改良は、例えば特定の分析のｐＨ範囲外のｐＫａ値を有する弱酸の塩を選択 することによって達成される。この目的に好適な弱酸の塩は、約１２０−約１５ ０ｍＭの濃度のテトラメチルアンモニウムアセテ−１・である。その他の適当な 化合物には、約２％−約３％の濃度の、ｍｙｏ−イノシトール、緩衝能を有して いない多価アルコールか包含される。

本発明の稀釈剤はまた、使用者か稀釈度をその場で、迅速にかつまた容易に測定 することを可能にする、マーカー化合物を含有することかできる。本発明のマー カー化合物は代表的には、光学的測定により検出てきる化合物であり、この化合 物は予め定められた量または測定可能な量で、稀釈剤り１に添加する。この稀釈 剤を試料と混合した後に、このマーカーの濃度を光学的測定により検出する。こ れは、例えは稀釈された試料の適当な波長における吸光度を、既知濃度の標準溶 液と比較することによって行うことかできる。混合前のマーカーａ度と混合後の マーカー濃度との比率を使用して、試料の稀釈度を測定することかできる。

種々の光学的測定により測定てきるマーカー化合物を使用することかできる。

光学的測定により検出てきる着色反応に使用できる化合物も使用することかでき る。理想的には、このマーカー化合物は分析に使用される波長をいづれも吸収し ないものであり、または試料に対して行われる後続の分析を干渉しないものであ る。１．ビ、３．　３．　３’、３’−へキサメチルインｌ”　ｌ−リカルホシ アニンイオダイトまたは１．１′−ヒス（スルホアルキル）−３，３，３’、３ ’　−テ１へラメチルイントトリカルホソアニン塩類のような染料か代表的に用 いられる。光学的測定により検出できる化合物に変換される、適当なマーカー化 合物には、試料中には正常には存在しない酵素基質、例えばｐ−二トロフェニル ホスフェートまたはＤ−ラクテートか包含される。化合物ｐ−ニトロフェニルホ スフェートはアルカリホスファターゼの基質であり、着色したｐ−ニトロフェニ ル反応生成物を生成する。Ｄ−ラクテートは、Ｄ−ラクテートデヒドロゲナーゼ の基質であり、ＮＡＤとともに使用すると、着色したＮＡＤＨ反応生成物を生成 させる。稀釈剤に使用するのに適する、その他の使用できるマーカーには、酵素 それ自体が包含され、これは血漿中に存在するか、または反応室中に存在する基 質とともに使用すると、色を生じる。この酵素は、正常には、試料中に存在して いないものであるへきである。ヒト起源の試料の場合に、代表的酵素には、微生 物グルコース−６−ホスフェート　デヒドロゲナーゼおよびＤ−ラクテート　デ ヒドロゲナーゼが含まれる。マーカー化合物は、試料で行われる後続の分析に対 する干渉が最低にされるように選択すると好ましい。マーカー化合物か不安定で あり、この稀釈剤の長期保存か実施できない場合に、このようなマーカーまたは その先駆化合物は、乾燥状態で保持することができ、その使用時点でまたはこれ に近い時点で、溶解させる。このような例には、１．１′−ビス（スルホアルキ ル）−３，３゜３’、３’−テトラメチルインド斗すカルポシアニン塩類かあり 、これらの化合物は水性溶液中に溶解された後に、凝集する。これらの問題を防 止するために、インドシアニン染料およびその他の不安定な染料は　代表的には 、固体表面に適用されている乾燥状態で保存される。この固体表面は、例えば分 析ローターの通路、毛細管またはチャンバーの壁部、あるいはポリスチレンボー ルのような不活性担体であることかてきる。吸着している染料を有する、この表 面を分析ローターの通路またはチャンバーのとこかに、例えば稀釈チャンバーと 混合チャンバーとの間の通路に、あるいは混合チャンバーに配置することかてき る。この表面を次いて、適当な等張稀釈剤溶液に溶解させて、染料を溶出させる 。この水性稀釈剤溶液は、使用される特定の染料に応して選択する。インドシア ニン染料の場合には、２．５％ｍｙｏ−イノシトールか適当である。

以下の例は、特定の分析用の球状試薬の製造を例示するものである。これらの例 は、説明の目的て示すものであり、制限しようとするものではない。

総蛋白質測定用の球状試薬の製造 下記の化学物質を正確に重１＝ｔｉし、次いて容器内で約８００ｍ１の脱イオン 水または蒸留水に溶解して、下記の溶液を調製した酒石酸す１−リウムカリウム 　３７．８０ｇ水酸化ナトリウム　ペレット　２８．　２０　ｇ硫酸第二銅　１ ２．００ｇ ヨウ化カリウム　１２．９０ｇ 炭酸すトリウム　３，８５ｇ コール酸すトリウム　５．　００ｇ ポリオキシエチレン９ラウリルエーテル　１．４３ｇポリエチレングリコール（ ＦＷ３４００）　５０．００ｇポリエチレングリコール（ＦＷ８０００）　４０ ．００ｇポリエチレングリコール（ＦＷ２０．ｏｏｏ）　５．Ｏｏｇ次の化学物 質を添加する以前に、各化学物質をそれぞれ完全に溶解させることか最上である 。最後の化学物質を溶解させた後に、この溶液の量を、脱イオン７ｋまたは蒸留 水によりＩ　Ｏリッターに調整した。この溶液を、最（＆の了し反力１０゜４５ ミクロンである階段状手段に通して濾過した。この溶液を次（Ａで、減圧ポンプ を用いて脱気させた。３７　ｍｌ＋６３ｍ１に、水により稀釈しｔこ上記溶液を 使用して、血漿または而清なとの種々の臨床試料中の総蛋白質濃度の分析をイ１ つだ。安定剤として炭酸す１−リウムを添加し、そして溶解中の泡の制動こ、ボ １〕オキシエチレン９ラウリルエーテルを添加した。コール酸ナトリウムおよび 各種ポリエチレングリコール類を充填剤として使用し、後続の凍結乾燥中（こお けるイし学格子の形成を促進させた。

この溶液を、２．９６マイクロリノターの分離している滴として、ｌ−２滴／秒 の速度て、Ｉ　Ｖ　Ｅ　ＫモデルΔＡＡポンプにより分配した。この分離して０ る液状滴を空気中に通して、球状体を生成させた。これを液状窒素の表面（こ送 つｔこ。

この窒素の表面は、撹拌する必要はない。冷凍後に、この球状体をＶｉｒｔｉｓ 凍結乾燥機（モデルＮｏ、１２ＥＬコンソール）　（Ｇａｒｄｅｎｅｒ、Ｎ、Ｙ 、　）て乾燥させ、その残留水分を、全残留物の１１％よりも少なくした。

上記方法により製造された、凍結乾燥球状試薬は、水または稀釈液（１４部）と ヒト血清（１部）との混合物８マイクロリツターにより再構成することができる 。５５０ｎｍにおける吸光値の生しる変化値から、水または稀釈液８マイクロリ ッターにより再構成された球状試薬の吸光値を引き算し、次いて水土ポリオキシ エチレン９ラウリルエーテルおよびコール酸ナトリウムにより同一割合で稀釈さ れたヒト血清試料の吸光値を引き算することによって得られる数値は、試料中の 総蛋白質の量に比例する。

１．７８ｍｍ直径の球状体の中の不正確度（変化係数）は、下記のとおりである 。

分配された時点の冷凍球状体　３．７ｍｇで１．５％凍結乾燥させた球状体　０ ．６ｍｇで２．５９にれらの球状試薬はそれぞれ、遠心分析機内で５秒以内に、 水または稀釈液８マイクロリッターに溶解する。

例２ Ｃ−反応性蛋白質測定用の球状試薬の製造下記の化学物質を正確に重量計量し、 次いて容器内で約２００ｍ１の脱イオン水または蒸留水に溶解して、下記の溶液 を調製した：Ｃ−反応性蛋白質抗体　０．５６リソター塩化す１〜リウム　２５ ．５０ｇ ＨＥＰＥＳ　７１．５０ｇ トリトン　Ｘ−１００３，００ｇ ポリエチレングリコール（ＦＷ２０，０００）　８４．００ｇ次の化学物質を添 加する以前に、各化学物質をそれぞれ完全に溶解させることか最上である。最後 の化学物質を溶解させた後に、この溶液のｐＨを種水酸化ナトリウムにより７４ に調整し、次いてこの溶液の量を、脱イオン水または蒸留水によりＩ　Ｏリッタ ーに調整した。この溶液を、最後の孔度か０２ミクロンである階段状手段に通し て濾過した。この溶液を次いで、脱気させた。

３３ｍ１＋６７ｍ１に、水または稀釈液により稀釈した上記溶液を使用して、血 漿または血清なとの種々の臨床試料中のＣ−反応性蛋白質の分析を行った。安定 剤として塩化ナトリウムを添加し、そして溶解中の泡の制御に、ト１月・ン　Ｘ −１００を添加する。ポリエチレングリコールを添加して、分析段１．Ｌ：にお ける混濁の発現を促進させ、またこの　ポリエチレングリコールは充填剤として 使用し、後続の凍結乾燥中における化学格子の形成を促進させる。

この溶液を、２．６７マイクロリツターの分離している滴として、ｌ−２ｍ／秒 の速度て、Ｉ　Ｖ　Ｅ　ＫモデルＡＡＡポンプにより分配した。この分離した液 状滴を空気中に通して、球状体か生成させた。これを液状窒素の表面に送った。

この窒素の表面は、撹拌する必要はない。冷凍後に、この球状体をＶｉｒｔｉｓ 凍結乾燥機（モデルＮｏ、１２ＥＬコンソール）で乾燥させ、その残留水分を、 全残留物の６％よりも少なくした。

上記方法により製造された、凍結乾燥球状試薬は、水または稀釈液（１４部）と ヒト血清（１部）との混合物８マイクロリツターにより再構成することかてきる 。３４０ｎｍにおける吸光値に生しる変化から、水または稀釈液８マイクロリッ ターにより再構成された球状試薬の吸光値を引き算し、次いて水＋トリトンＸ− １００により同一割合で稀釈されたヒト血清試料の吸光値を引き算することによ って得られる数値は、試料中のＣ−反応性蛋白質の量に比例する。

１．７８ｍｍ直径の球状体の中の不正確度（変化係数）は、下記のとおりである 分配された時点の冷凍球状体　２．９ｍｇで１．７％凍結乾燥させた球状体　０ ．５ｍｇで１，８９にれらの球状試薬はそれぞれ、遠心分析機内で３秒以内に、 水または稀釈液８マイクロリッターに溶解する。

例３ アルノＪリホスファターゼ（Ａ　Ｌ　Ｐ）測定用の球状試薬の製造下記の溶液を 調製した。ＡＬＰ部Ａ 下記の化学物質を正確に重量計量し、次いて容器内で約８００ｍ１の脱イオン水 または蒸留水に溶解した。

１〜リス（ヒドロキソメチル）アミノメタン−ＨＣｌ　１０．２ｇ ＨＥＤＴＡ　２．１ｇ 塩化マグネシウム６水和物　２６ｇ 硫酸アニン６水和物　Ｉ。７ｇ ４−二Ｉ・ロフェニルホスフエ−１−３５，６ｇポリエチレングリコール（ＦＷ ２０，０００）　５４．０ｇｍｙｏ−イノシト−ル　ｌｏ、ｏｇ ｌ・１月・ン　Ｘ１Ｏ００，８ｇ 次の化学物質を添加する以０１Ｎに、各化学物質をそれぞれ完全に溶解させるこ とか最上である。最後の化学物質を溶解させた後に、この溶液のｐＨを稀２−ア ミノー２−メチルー１−プロパツールにより６．８に調整し、次いてこの溶液の 量を、脱イオン水または蒸留水により１．０リツターに調整した。この溶液を、 最後の孔度か０２ミクロンである階段状手段に通して濾過した。この溶液を次Ｌ ｌて、脱気させた。

ＡＬＰ部Ｂ　下記の化学物質を正確に重量計量し、次いて容器内で約８００ｍ１ の脱イオン水または蒸留水に溶解したニドリス（ヒドロキソメチル）アミノメタ ン−ＨＣｌ　１０．２ｇ １〜リス（ヒドロキソメチル）アミノメタン　１６６．０ｇＨＥＤＴＡ　２．１ ｇ ポリエチレングリコール（ＦＷ２０．ｏｏｏ）　５４．ｏｇｍｙｏ−イノシトー ル　ｌＯ，Ｏｇ ｌ・１月・ン　Ｘ−１０００，８ｇ ２−アミノ−２−メチル−１−プロパツール　５３４ｇポリビニルピロ１月・ン （ＦＷ３０，０００）　］、Ｏｇ次の化学物質を添加する以前に、各化学物質を それぞれ完全に溶解させることか最上である。最後の化学物質を溶解させた後に 、この溶液のｐＨを稀２−アミノー２−メチルー１−プロパツールによ１月０． 　３に調整し、次Ｌ）てこの溶１夜の量を、脱イオン水または蒸留水により１． ０１ルノターに調整した。この溶液を、最後の孔度か０２ミクロンである階段状 手段に通して濾過しｌこ。この溶８を次いて、脱気させた。

それぞれ１６．７ｍｌの上記溶液と６７ｍ１の水または稀釈液とを配合して、血 清または血漿なとの種々の臨床試料中のアルカリホスファターゼの分を斤（二使 ＩＴｉする。グリセロールは安定剤として添加し、ト１月・ンＸ−１ｏｏｌよ溶 解中の泡の制御に使用する。ポリエチレングリコール、ｍｙｏ−イラン１〜−ル 、およびポＩＪヒニルピロリドンは、後続の凍結乾燥中における化学格子形成を 促進する充填剤ｊとして添加する。これらの溶液を別々に、それぞれ２６７マイ クロ１ルノターの分離した滴として、１−２滴／秒の速度てＩＶＥＸモデルＡＡ Ａポンプ（こよりり）配した。これらの分離している液滴を空気中に通し、球状 体を生成させ、次Ｌ１て液状窒素の表面に導入した。この窒素の表面は撹拌する 必要はな（１゜凍結させｔこ後に、これらの球状体をＶｉｒｔｉｓ凍結乾燥機（ モデルＮｏ、＋２　ＥＬコン゛ノール）で乾燥させ、その残留水分を、全残留物 の６％よりも少なくシｌこ。

士、記ＡＬＰ　ＡおよびＡＬＰ　Ｂの各凍結乾燥球状試薬はそれぞれ、水まｔこ １よ稀釈液（１４部）とヒト血清（１部）との混合物１６マイクロリ・ツタ−（ 二より再構成することかてきる。４０５ｎｒｎにおける吸光値の変化率は、試料 中のアルｉＪリホスファターゼの量に比例する。

１．７２ｍｍ直径の球状体の中の不正確度（変化係数）は、下記のとおりてあ分 配され７９時【′入の　２．８ｍｇで０．　４％　２．９ｍｇで０７９６冷凍球 状体 凍結乾燥させた　０．５ｍｇて１．　５９．６　０．　７ｍｇで２２８６球状体 これら２種の球状試薬はそれぞれ、遠心分析機内て１０秒以内に、水または稀釈 液１６マイクロリツターに溶解する。この試薬安定性を利用して、この分析にお ける活性成分を分離する。これらの球状試薬のそれぞれをＡＬＰ分析用の同一チ ャンバーに入れる。

例４ 巨大環状イオノホール　トリニトロアニリノクリブタへミスフエランド［２，２ ］を含有するカリウム測定用の、凍結乾燥された濃縮カリウム試薬の製造 以下のとおりにして、活性トリニトロアニリノクリブタヘミスフェランド［２゜ ２］および界面活性剤［ブリッジ（Ｂｒｉｊ：登録商品名）界面活性剤］を、Ｗ ｉ　ｄｅＰｏｒｅ　Ｂｕｔｙｌ、４０　ｕＭクロマトグラフィ媒質（Ｊ、　Ｔ、 　Ｂａｋｅｒ　Ｉｎｃ、　、　Ｐｈｉ　ｌｌｉｐｓｂｕｒｇ。

ＮＹ　０８８６５）を使用して、クロモライト（Ｃｈｒｏｍｏｌｙｔｅ；登録商 品名）カリウム試薬（Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　Ｃｏｒｐ 、、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹＩ０９６１　）から単離した０Ｗｉｄｅ　Ｐｏｒ ｅ　Ｂｕｔｙｌ、４０　μＭクロマトグラフィ媒質２５ｇを脱気したイソプロパ ツール３６０ｍ１中に懸濁し、次いて脱気し、脱イオン化した水３６０ｍ１を添 加した。この液体の約８０％はデカンテーションにより分離した。追加の３６０ ｍ１Ｏ脱気し、脱イオン化した水を添加し、このスラリーをフラスコ中で２分間 音波処理し、次いて２分間、減圧て脱気した。この懸濁クロマトグラフィ媒質を 適当な大きさのクロマ１〜グラフイカラムに注入して、３−１０ｃｍ高さの充填 床を形成した。このカラムに脱気し、脱イオン化した水２５０ｍ１を通すことに よって、この充填物を平衡化した。

このカラムに、クロモライト（登録商品名）カリウム試薬５リツターを装入した 。着色している１〜リニトロアニリノクリプタヘミスフエランｌ’［２，２］お よび界面活性剤は、このカラムの頂上部に吸着された。２−（２−エトキシエ１ 〜キ刀−エタノール（ＥＥＥ）３％および安定剤をまた含有する、未吸着の１〜 リエタノールアミン緩衝剤は採取し、再使用する。上記カラムから、前記の脱気 したイソプロパツール（９８９４）およびＥＥＥ　（２％）の混合物によ頃　ト リニトロアニリノクリブタヘミスフエラン いてこの溶出液から、室温で排気した回転蒸発器を用いて、イソプロパツールを 分離して、油状の暗褐色濃縮物を得た。

前記で採取した緩衡剤フラクションを、排気した回転蒸発器を用いて３５−４０ °Ｃで２分の１に濃縮させた。この２分の１ｍ縮緩衝剤溶液４００ｍ１に、上記 濃縮トリニトロアニリノクリブタへミスフェランド［２，２］、界面活性剤およ び残留ＥＥＥを溶解した。

下記の物質を計量し、上記溶液に加え、溶解させた：ポリエチレングリコール（ ＦＷ３４００）　４０ｇイソプロパツール　５．０ｍｌ ポリビニルピロリドンに−２９−３２０，５０ｇこの溶液のｐＨを、カルメロ対 照電極を有する電極対を用いて測定し、出発クロモライト（登録商品名）カリウ ム試薬のｐＨから０．０５ｐＨ単位以下で相違するｐＨであることを確認した。

必要に応して、２０％トリエタノールアミン溶液または２０％トリエタノールア ミンＨＣＩ溶液を使用して、ｐＨを調節した。

最後に、その容積を、上記２分の１濃縮緩衝剤溶液により５００ｍ１に調整した 。

この試薬を、最後の孔度か０．２ミクロンである階段状手段に通して濾過した。

２−（２−工トキシエトキソ）−エタノールの好適濃度は約３％−約４．８％で あり、そしてポリエトキシラウレルエーテルの好適濃度は約０．５％−約１．　 ０％である。

上記溶液を水または稀釈液により、５０ｍ１＋５０ｍ１に稀釈し、血清または血 漿なとの種々の臨床試料中のカリウムの分析に使用する。この試薬の均質な凍結 を確実にするために、かつまた凍結乾燥後の迅速な再構成を助長するためには、 上記レベルの２−（２−工トキンエトキノ）−エタノールか必要である。イソプ ロパツールは。凍結処理中における、正しい結晶構造の生成を助長し、再水和を 促進する。ブリッジ（登録商品名）界面活性剤（例えば、ブリッジ−３５または −５８）は、再水和を助長し、かつまた泡生成の抑制を助長する。ポリエチレン グリコールは、後続の凍結乾燥中における化学格子の形成を促進させるために添 加する。

」１記溶液を、４０７マイクロリソターの分離している液滴として、１−２ｍ／ 秒の速度てＴＶＥＸモデルＡΔＡポンプにより分配した。これらの分離している 液滴を空気中に通し、球状体を生成させ、次いてＶｉｒｔｉｓ７４結乾燥機（モ デルＮｏ、１２ＥＬコンソール）で乾燥させ、その残留水分を、全残留物の６％ よりも少なくした。上記方法により調製された凍結乾燥球状試薬は、水または稀 釈液（１４部）とヒト血清（１部）との混合物８マイクロリツターにより再構成 することかてきる。５００ｎｍにおける吸光値に生しる変化値、水または稀釈液 ８マイクロリッターにより再構成された球状試薬の吸光値を引き算し、次いで水 土ブリッジ（登録商品名）界面活性剤により同一割合で稀釈されたヒト血清試料 の吸光値を引き算することによって得られる数値は、試料中のカリウムの量に比 例する。

１．９７ｍｍ直径の球状体の中の不正確度（変化係数）は、下記のとおりである 。

分配された時点の冷凍球状体　２．６ｍｇで１．　５％凍結乾燥させた球状体　 ０．５ｍｇで１．　６％これらの球状試薬はそれぞれ、５秒以内に、水または稀 釈液８マイクロリッターに溶解する。

上記例は、本発明の範囲内にある球状試薬の製造を説明するものである。これら の例は、本発明の目的を明白にし、かつまた本発明の目的を理解するために示さ れたものである。しかしなから、成る種の変更および修正か、添付請求の範囲の 範囲内で実施できることは明白である。

フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号ＧＯＩＮ　３５１００ 　Ｄ　８５０６−２Ｊ（７２）発明者　バード、タミイ アメリカ合衆国９４５３６　カリフォルニア州フレモント、ペイウッド　テラス 　３３７１゜アパートメント　２１２ （７２）発明者　バヤニ、バスカー アメリカ合衆国９４５３９　カリフォルニア州フレモント、ミッション　リッジ 　コート（７２）発明者　スキーラー、クリスチャンアメリカ合衆国９４０２５ 　カリフォルニア州メシロ　パーク、シャロン　パーク　ドライブ８５０ （７２）発明者　ユ、チーソウ アメリカ合衆国９５０７０　カリフォルニア州サラトガ、ポニー　リッジ　ウェ イ Ｉ （７２）発明者　タング、ツイ、エヌ。

アメリカ合衆国９５１２１　カリフォルニア州サン　ホセ、ウィニー　プレース 　ウェイ（７２）発明者　オストイツク、ブラディミアー、イー。

アメリカ合衆国９４０２２　カリフォルニア州ロス　アルトス、コロナト　アベ ニュー（７２）発明者　フ、ブランコ アメリカ合衆国９４０４０　カリフォルニア州マウンテン　ビュー、アール４１ ９．シャワーズ　ドライブ　４９ （７２）発明者　スチムブリ、キャロル、ティー。

アメリカ合衆国９４４０３　カリフォルニア州サン　マテオ、マーシャル　アベ ニュー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．生物学的試料分析用の試薬を含有し、溶液中に完全に溶解することができる 球状試薬の製造方法であって、 試薬の水性溶液を形成し； この水性溶液を均質な、正確に計量されている酒として、冷凍剤液中に分配して 、この滴を冷凍し；次いで この冷凍した滴を凍結乾燥させて、球状試薬を形成する：工程からなる製造方法 。 ２．上記冷凍剤液が撹拌されていない、請求項１に記載の製造方法。 ３．上記球状試薬が、約１．５ｍｍ−２．３ｍｍの平均直径を有する、請求項１ に記載の製造方法。 ４．上記球状試薬が、約３．０％よりも小さい重量変化係数を有する、請求項１ に記載の製造方法。 ５．上記均質な、正確に計量されている滴が、約２ひＩ−約６．５ひＩの容積を 有する、請求項１に記載の製造方法。 ６．上記水性溶液を均質な、正確に計量されている滴に分配する前に、この水性 溶液を脱気させる、請求項１に記載の製造方法。 ７．上記冷凍剤液が、液状窒素である、請求項１に記載の製造方法。 ８．上記水性溶液が、当該球状試薬中における化学格子の形成を促進させるのに 充分な濃度で、充填剤をさらに含有している、請求項１に記載の製造方法。 ９．上記充填剤が、ポリエチレングリコール、ｍｙｏ−イノシトール、ポリビニ ルピロリドン、デキストラン、コール酸ナトリウム、マンニトール、ウシ血清ア ルブミン、またはその組み合わせである、請求項８に記載の製造方法。 １０．上記水性溶液が、当該球状試薬を溶液に溶解した場合における泡の生成を 抑制するのに充分な濃度で、界面活性剤をさらに含有している、請求項１に記載 の製造方法。 １１．上記界面活性剤が、オクトキシノール９またはポリオキシエチレン９ラウ リルエーテルである、請求項１０に記載の製造方法。 １２、上記溶液が、試料溶液または稀釈剤液である、請求項１に記載の製造方法 。 １３．請求項１に記載の方法により調製された球状試薬。 １４．溶液中に完全に溶解することのできる球状試薬であって、生物学的試料の 分析に必要な試薬、当該球状試薬が溶解された場合における泡の生成を抑制する のに充分な濃度の界面活性剤、および当該球状試薬中に溶液を導入させることが できる化学格子の形成を促進させるのに充分な濃度の充填剤からなる球状試薬。 １５．約２０μ１よりも少ない量の溶液に完全に溶解することができる、請求項 １４に記載の球状試薬。 １６．水性溶液中で、約１０秒よりも短い時間で、完全に溶解することができる 、請求項１４に記載の球状試薬。 １７．約１．５ｍｍ−２．３ｍｍの間の直径を有する、請求項１４に記載の球状 試薬。 １８．上記充填剤が、ポリエチレングリコール、ｍｙｏ−イノシトール、ポリビ ニルピロリドン、デキストラン、コール酸ナトリウム、マンニトール、またはそ の組み合わせである、請求項１４に記載の球状試薬。 １９．上記充填剤の濃度が、約１Ｏ重量％−約５０重量％である、請求項１４に 記載の球状試薬。 ２０．上記界面活性剤が、オクトキシノール９、ブリッジ（Ｂｒｉｊ；登録商標 ）−３５、ブリッジ（登録商標）−５８、またはポリオキシエチレン９ラウリル エーテルからなる、請求項１４に記載の球状試薬。 ２１．上記界面活性剤の濃度は、完全溶解後における試料中の界面活性剤の濃度 が約０．０８ｇ−約３．ｌｇ／１００ｍＩであるように調節されている、請求項 １４に記載の球状試薬。 ２２．上記試薬が血液試料中の総蛋白質の測定に適する試薬であり、上記充填剤 がポリエチレングリコールであり、そして上記界面活性剤がポリオキシエチレン ９ラウリルエーテルである、請求項１４に記載の球状試薬。 ２３．上記試薬が、血液試料中のｃ−反応性蛋白質測定に適する試薬であり、上 記充填剤がポリエチレングリコールであり、そして上記界面活性剤がオクトキシ ノール９である、請求項１４に記載の球状試薬。 ２４．上記試薬が、血液試料中のアルカリホスファターゼ活性測定に適する試薬 であり、上記充填剤がポリエチレングリコール、ｍｙｏ−イノシトールおよびポ リビニルピロリドンからなり、そして上記界面活性剤がオクトキシノール９であ る、請求項１４に記載の球状試薬。 ２５．上記試薬が、発色団イオノホールクリプタヘミスフェランドを含有する、 請求項１４に記載の球状試薬。 ２６．揮発性有機溶剤、界面活性剤、および充填剤をさらに含有する、請求項２ ５に記載の球状試薬。 ２７．上記有機溶剤が、イソプロパノールであり、界面活性剤がブリッジ（登録 商標）−３５またはブリッジ（登録商標）−５８であり、そして充填剤がポリエ チレングリコールである、請求項２６に記載の球状試薬。 ２８．生物学的試料の光学的分析の前に、当該試料と混合するのに適する稀釈剤 てあって、分析において緩衝能を実質的に有していない等張濃度の化合物および 当該生物学的試料の稀釈度を測定するための光学的測定により検出できるマーカ ー化合物を含有する稀釈剤。 ２９．上記化合物が、約１２０ｍＭ−約１５０ｍＭの濃度のテトラメチルアンモ ニウムアセテートである、請求項２８に記載の稀釈刑。 ３０．上記化合物が、約２％一約３％の濃度のｍｙｏ−イノシトールである、請 求項２８に記載の稀釈剤。 ３１．上記マーカー化合物が、酵素基質である、請求項２８に記載の稀釈剤。 ３２．上記酵素基質が、ｐ−二トロフェニルホスフェートまたはＤ−ラクテート である、請求項３１に記載の稀釈剤。 ３３．上記マーカー化合物が、１，１′，３，３，３′，３′−ヘキサメチルイ ンドトリカルボシアニンイオダイドまたは１，１′−ビス（スルホアルキル）− ３，３，３′，３′−テトラメチルインドトリカルボシアニン塩である、請求項 ２８に記載の稀釈剤。 ３４．上記マーカー化合物が、酵素である、請求項２８に記載の稀釈剤。 ３５．上記酵素が、グルコースー６一ホスフェートデヒドロゲナーゼ、またはＤ 一ラクテートデヒドロゲナーゼである、請求項３４に記載の稀釈剤。 ３６．一溶液中に完全溶解することができる凍結乾燥した組成物であって、生物 学的試料中のカリウム分析に充分の濃度で、発色団イオノホールクリプタヘミス フェランドを含有する組成物。 ３７．当該組成物を溶液中に溶解した場合における泡の生成を抑制するのに充分 の濃度で、界面活性剤をさらに含有する、請求項３６に記載の組成物。 ３８．上記クリプタヘミスフェランドが、トリニトロアニリノクリプタヘミスフ ェランド［２．２］である、請求項３６に記載の組成物。 ３９．分析用ローター内の溶液にマーカー化合物を添加する方法であって、当該 ローター内の固体表面に、マーカー化合物を適用し；次いでこの固体表面を溶液 と接触させて、当該マーカー化合物を当該溶液中に溶解させる； 工程からなる添加方法。 ４０．上記マーカー化合物が、１，１′−ビス（スルホアルキル）−３，３，３ ′，３′−テトラメチルインドトリカルボシアニン塩または１，１′，３３′， ３′−ヘキサメチルインドトリカルボシアニンイオダイドである、請求項３９に 記載の方法。 ４１．上記固体表面が、分析磯ローター内の通路またはチヤンバーに配置されて いるポリスチレンボールである、請求項３９に記載の方法。 ４２．上記固体表面と溶液との接触工程を、ローターの回転によって、この溶液 を通路に適して、またはチャンバーに通して流動させることにより行う、請求項 ４１に記載の方法。 ４３．上記溶液が、稀釈剤液である、請求項４２に記載の方法。 ４４．上記稀釈剤が、ｍｙｏ−イノシトールである、請求項４３に記載の方法。 ４５．生物学的試料の稀釈度を測定する方法であって、光学的測定により検出て きるマーカー化合物を含有する稀釈剤を用意し；この稀釈剤を生物学的試料と混 合して、稀釈された試料を生成させ；この稀釈液中のマーカーの量を測定し；次 いでこの稀釈された試料中のマーカーの量を決定する；工程からなる方法。 ４６．稀釈剤と生物学的試料との混合工程を、遠心分析機内で行う、請求項４５ に記載の方法。 ４７．上記マーカー化合物が、ｐ−ニトロフェニルホスフェート、Ｄ−ラクテー ト、１、１′−ビス（スルホアルキル）−３、３、３′、３′−テトラメチルイ ンドトリカルボシアニンイオダイドまたは１、１′、３、３、３′、３′−ヘキ サメチルインドトリカルボシアニンイオダイド、グルコース−６−ホスフェート デヒドロゲナーゼ、またはＤ−ラクテートデヒドロゲナーゼである、請求項４５ に記載の方法。 ４８．生物学的液体の光学的分析方法であって、当該試料分所用の試薬を含有す る球状試薬を有する試験凹部に予め定められた量の生物学的液体を供給し、ここ でこの球状試薬をこの液体中に完全に溶解し；試験凹部内の上記液体に光線を通 し；次いで当該液体を通過した後の光線を検出する；ことからなる光学的分所方 法。 ４９．上記試験凹部が、遠心ローター内に存在し、そして予め定められた量の生 物学的液体の供給工程を、ローターの回転により行う、請求項４８に記載の光学 的分析方法。 ５０．上記化物学的液体が血漿または血清からなる、請求項４８に記載の光学的 分析方法。 ５１．上記球状試薬が、当該球状試薬が溶解された場合における泡の生成を抑制 するのに充分な濃度の界面活性剤および当該球状試薬中に溶液を導入させること ができる化学格子の形成を促進させるのに充分な濃度の充填剤をさらに含有する 、請求項４８に記載の光学的分析方法。