JPH07502009A

JPH07502009A - クエルセチン化合物を活性物質として含有する腫瘍、特に卵巣及び造血系の腫瘍の治療用薬剤

Info

Publication number: JPH07502009A
Application number: JP4505072A
Authority: JP
Inventors: マンクソ　サルバトレ; フォルチト　ギアンカルロ; スカンビア　ジオバニ; ベネデチ　パシニ　ピエル　ルイギ; ピアンテリ　マウロ; パネレチ　フランコ　オレステ; カペリ　アルノルド
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1991-02-05
Filing date: 1992-01-31
Publication date: 1995-03-02
Also published as: ITRM910085A0; WO1992013851A1; EP0570475A1; AU1269192A; IT1244647B; ITRM910085A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】クエルセチン化合物を活性物質として含有する腫瘍、特に卵巣及び造血系の腫瘍の治療用薬剤本発明は一般に腫瘍の治療用薬剤、特にクエルセチンを活性物質として含有する薬剤に関するものである。

クエルセチンはいくつかの生化学的および薬学的活性を示す植物由来の化合物であるフラボノイド類の部類に属する天然の物質である。この物質は化学発ガン過程を妨げる能力ををするためにこれまで研究の主題となってきたが、現在も研究されている。

例えば、いくつかの研究の結果として、クエルセチンはアムネス試験で原核生物（杉材外、Ｐｒｏｃ、　Ｊｏｕｒ。

Ａｃａｄ、５３Ｂ　１９４．１９７７　）　、ネズミチフス菌（マツクグレッガー外、Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓ、５４２９７．１９７８）　、および真核生物（アメイチャー外、Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓ、、７２４４７．１９８０　）において変異誘導活性を示し、発ガンのイニンエイターとして作用したことを示唆している。これとは反対に、更に最近の研究（斉藤外、Ｔｅｒａｔｏｇ、、Ｃａｒｃｉｎｏｇ、、Ｍｕｔａｇｅｎ、１，２１３．１９８０　；広野外、Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔ、　１３．１５．１９８１　；森野外、Ｃａｒｃｉｎｏｇ。

３．９３．１９８２　）では、クエルセチンは抗増殖活性を有することを特に乳ガン（アシッド外、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ、４８，５７５４．１９８８　）において示したので、従ってこの物質は腫瘍の治療に有用であると考えられるかも知れない。この物質の活性は「タイプＩＩエストロゲン結合部位」と呼ばれる受容体との相互作用からなることも示唆された（マーカベリッチ外、Ｊ、５ｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　３０７１．１９８８）　ｏクエルセチンは、静脈および口の両方から導入されると生体に保持されるが、しかしながら、丁度よい程度の活性を示せるほど充分な時間保持されないという観察結果から、これまでヒトの腫瘍の治療に実際使用されることはなかった。

発明者たちは由来の異なる腫瘍から取られた幾つかの細胞系について研究および実験を行い、クエルセチンの抗増殖活性は［タイプＩＩエストロゲン結合部位］細胞受容体により伝達されるという仮定に対する支持を見つけた。更に、発明者たちはこれらの受容体はヒトの原発（初感）腫瘍、特に卵巣および造血系の原発腫瘍にも存在し、培養された細胞に見られるものと類似の特徴を有することを確認した。発明者たちは時間からクエルセチン効果の依存状態を見積もり、クエルセチンを卵巣癌細胞培養へ添加した後に２４時間で抗増殖活性がはっきり現れることを発見した。発明者たちはまたクエルセチンの抑制効果は非特定の細胞毒性活性によるものではないことを示した。しかし、上記のように、ヒトの生体はクエルセチンを保持できないので、このような確認および観察は実際に利用するには限度があることを考慮して、発明者たちは、ヒトの腫瘍に対して薬剤としての活性を示す製品の抗増殖性を利用するために、クエルセチン含有製品が更に長い時間生体に留まることを明らかにしたいと思った。この目的は本発明により下記の物質の少な（とも１種類を含有する製品を調製することにより達成された：クエルセチンと亜鉛の錯体；クエルセチンとセレンの錯体；ふっ素化クエルセブ・ン化合物：　、グリコシドクエルセチン化合物：ペンタアセチルクエルセチン；トリメチルクエルセチンおよびテトラメチルクエルセチン。

上記物質は、下記の実施例に記載された方法、または、当該技術に精通した者に周知であるから詳細に説明されないが実施例方法に自明の変更を加えた方法により調製された。

これらの物質のそれぞれはクエルセチンに匹敵するか弗るいはそれ以上の抗増殖活性を示した。更に上記物質は化学的薬学的安定性を有するので、ヒトの腫瘍の治療に使用てきる。特に、本発明□の製品を試験管内で細胞系に添加すると、その代謝時間はクエルセチンの代謝に必要な時間より長（なることに気付いた。

投与量に関しては、生体中に０．Ｏ１μモル／ミリリットルから始まるクエルセチンの血中レベルが得られるような量の上記物質を含有する製品を投与することにより治療に役立つ結果が得られる。腫瘍細胞系に関する抗増殖性試験が次の方法により実施された。直径１６ｍｍのくぼみを２４個有するファルコンに１平方センチ当たり１０”個の細胞を接種した。１８時間後、増殖培地は試験化合物または担体（エタノール）だけを入れた新しい培地と取り替えられる。この処理は２４時間後に繰り返された。

更に２４時間培養した後に、細胞をトリプシンで処理し細胞数を血球計算室で数えた。一部分を取って細胞の生命力についてトリバンブルーで試験した。

下記の実施例において、本発明で特許請求する化合物の調製について説明する。

実施例１エルセチンの酢酸亜鉛とクエルセチン（１対１モル）とを工゛タノール中で反応させると、エタノールに不溶解の物質が生成され、反応培地に沈澱するが、水に不溶解でありジメチルスルフオキシドにほとんど溶けない。このクエルセチン誘導体をメタノールに希釈した溶液について、ＡｌＣ１，との錯体を使って紫外線による測定が行われたが、これは深色移動および浅色移動に基づいて亜鉛の配位について情報を与える。上記測定は、亜鉛錯体が３’　、４’　の位置において２つの近いヒドロキシ基、を有することを示した。

実施例２ペン　アセチル　エルセチンンと無水酢酸に４　：　Ｊ　）の混合物で１晩処理した。

反応混合物を真空中で蒸発させ、固定層と、してシリカゲル、を使い、希釈剤としてクロロホルムを使いカラムクロマトグラフィにより精製した。純粋な物質が得られ（８４ｔｎｇ）、結晶化されてアセトンから分離され、融点はｌ　９７− ２．０１°Ｃであった。　１ＨおよびＩ３Ｃの核磁気共鳴データの分析によりこの化合物は３．　５，７．３°、゛４°゛−ペンタアセチルクエルセチンと確認された。メタノールにおける紫外線スペクトルは、Ａ　Ｉ、Ｃ１，の添加により深色移動を示さないが、５、の位置でヒドロキシ基もアセチル化されていることを示した（　ＯＨキレート）。

’Ｈ核磁気共鳴（ＣＤ　Ｃｌ　ｓ　）　、δ：２．３３゜２、’３−１．２．４３　（６＋６＋３１１．３ｓ、５ＸＯＡｃ）：　６．８７　（ＩＨ，ｄ’、Ｊ　＝２Ｈｚ、Ｈ−’８）、；　７．３３　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、Ｈ−８’）：　７．３５　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８１１ｚ、Ｈ−５°　）ニア、６９　（ＩＩＩ、ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、Ｈ−２”ｌ　ニア、７２　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝８と２　Ｈｚ　。

Ｈ−６’）。

１３ｃ核磁気共鳴（ＣＤＣＩ３　）、ｐＩ）ｍ：２０、　５．　２０．、．６　（ｘ２）、２　１．　０．　２　１．、　１（ＯＣＯＭ−立）；１０，８．９　・（Ｃ−８）　；１　１　３、．８　（Ｃ−６）’；　１　１　４．　７　（Ｃ −１０・）　：１２３、　．８”　（Ｃ，−５°　）　：　１２３．　９’　（Ｃ−２°　）　；　、１　２　６．４（Ｃ−６°　）；　ｌ　２７．７（Ｃ−１ ″　）、１　３　４．　０（Ｃ−３）　：　ｌ　４　２．　１（Ｃ−３’　）　＋　１　４４．　３　（Ｃ−４’　）　。

１５０、　３　（Ｃ−２）　；　１５３．　７　’（Ｃ−９）　；１　５　４、　２　（Ｃ−５）　；　ｌ　５　６．　８　（Ｃ＝、７．）’、：；１６７、　７２．　１６　７．、−７７、１　６７．　８．０゜］　６　７　、　８　３．、ｌ　６　９．．２．２　（ＯＣＯＭ　ｅ）　：１６９、　９９　（Ｃ−４）。

ａ　交換可能紫外線（Ｍ　ｅ　ＯＨ）λｆｆ１−　（最大波長）ｎｍ：２９７．２４９゜実施例３トリメチルクエルセチンおよびテトラメチルクエルセチンクエルセチン試料（７５ｍｇ）を少量のメタノールに溶解し、ジアゾメタンのジエチルエーテル溶液でメチル化する。約８時間後に反応混合物を蒸発させ、ＣＨＣｌ、と共に取り出し、シリカゲル（ＣＨＣｌ３）で精製する。２種類の純粋な物質が得られ、それぞれ３゜７．３’　、４’　−テトラメチルクエルセチン（１６ｍｇ）と３．７．４’　−トリメチルクエルセチン（２０ｍ　ｇ　）であることが確認された。３，７．３°、４′　−テトラメチルクエルセチンはアセトンから結晶化し、融点１５３−１５６°Ｃ，ｍ／ｚ３５ＢでＭ゛であった（質量分析計）。

１Ｈ核磁気共鳴（ＣＤＣＩ、）、ξ：３．８６゜３．９６　（６＋６Ｈ，２ｓ、４ＸＯＭｅ）；６．３２　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、Ｈ−６）；６．４１　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、Ｈ−８）；６．９７　（１８，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、Ｈ−５’ 　）；７．６７　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、Ｈ−２’　）ニア、７１　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝８と２Ｈｚ、Ｈ−６’　）；　１２．６３　（ＩＨ，ｓ、５−０Ｈ） −口Ｃ核磁気共鳴（ＣＤＣ１３）、ｐｐｍ：５５．７，５５．８，５５．９　（Ｃ−７，Ｃ−３’　、Ｃ−４°におけるＯＭｅ）；６０，０（Ｃ−３におけるＯＭｅ）：９２．Ｏ（Ｃ−８）；９７．７　（Ｃ−６）；　１０５．８　（Ｃ−１０）；１１０．７”　（Ｃ−５’　）；１１１．Ｑａ　（Ｃ−２”）　；　１２２．７　（Ｃ−ビ）、１３Ｂ、８（Ｃ−３）；　１４８．６　（Ｃ−３’　）；　１５　Ｌ、２（Ｃ−４’　）：　１５５．６　（Ｃ−２）：　１５６．５（Ｃ −９）；　ｌ　６１．８　（Ｃ−５）、１’６５．−５（Ｃ−７）；　ｌ　７８．５　（Ｃ−４）。

ａ　交換可能紫外線（ＭｅＯＨ）、λ最大ｎｍ：３５１，２５３：　（ＭｅＯＨ＋ＡＩＣＩｓ　）：　４０１，３６０゜２６８　；　（ＭｅＯＨ＋ＡｌＣ１，＋ＨＣ１）：変化なし。

３．７，４°　−トリメチルクエルセチンはＣＨＣｌ、から結晶化し、融点！７９°Ｃ，ｍ／ｚ３４４でＭ゛である（質量分析計）。

１Ｈ核磁気共嶋（アセトン−ｄ）、δ−３，８９゜３．９３，３．９６　（３＋３＋３Ｈ，３ｓ。

３ＸＯＭｅ）：６．３２　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ。

Ｈ−６）；　６．６９　（ｌｈ、ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ。

Ｈ−８）ニア、１４　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ。

Ｈ−５°）；７．６６　（ＩＨ，ｄ、Ｊ　＝２Ｈｚ。

Ｈ−２°）；７．７０　（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝８と２Ｈｚ、Ｈ−６°）；　１２．７４　（ＬＨ，ｓ５−０Ｈ）。

目Ｃ核磁気共鳴（ＣＤ　Ｃ１ｓ　）　、ｐｐｍ　’５５．８，５６．０　（Ｃ− ７とＣ−４゛におけるＯＭｅ）：６０．１　（Ｃ−３におけるＯＭｅ）；９２．１．（Ｃ−８）；９７．９（’Ｃ−８）；１０５．４　（Ｃ−，１０）；　ｌ　１０．４　（Ｃ−５’　）；ｔｚ、５　（Ｃ−２’　）；１２１．６　（Ｃ−６ ’　）、１２３．７　（Ｃ−Ｌ’　）；１３９．２（Ｃ−３）；　ｌ　４５．６　（Ｃ−４°）、１４８．８（Ｃ−３’　）　；　１　５５．　６　（Ｃ−２）　；　ｌ　５６．　８（Ｃ−９）　、１６２．　１　（Ｃ−５）　；　１６５．　５（Ｃ−７）　：　１　７８．　８　（Ｃ−４）。

紫外線（Ｍ　ｅ　ＯＨ）λ最大ｎ　ｍ　：　３５４　。

２６８ｓｈ、２５４　；　（ＭｅＯＨ＋ＡｌＣ１５）　：４０２、　３６０．　３００．　２６８　；　（ＭｅＯＨ＋ＡｌＣｌ、＋Ｉ（ＣＩ）：変化なし；　（ＭｅＯＨ＋ＮａＯＭｅ）　：　３８４．　２６５　；　（ＭｅＯＨ＋Ｎａ０Ａｃ）　＋３５４．　２６８ｓｈ、２５４゜実施例４−６エルセ　ン　セレンの亜鉛の場合と同じように、クエルセチンは酢酸セレン（１：　ｌ）と反応して、３種類のクエルセチン塩類とセレンが得られる。

ふ　エルセ　ン　ムクエルセチンは下記の物質の一つと反応し、いくつかのふワ素化クエルセチン化合物が得られる＝ＡｇＦ２、ＣＨ３Ｃ００Ｆ、Ｃ５ＳＯ４Ｆ。

１コン゛　エルセチン　ムクエルセチンはナトリウムメトキシドの存在下でグリコジルアセトブロマイドと反応して、様々なポリグリコシレートが得られる。

Claims

【特許請求の範囲】

１．クエルセチン亜鉛錯体、クエルセチンセレン錯体、ふっ素化クエルセチン化合物、グリコシドクエルセチン化合物、ペンタアセチルクエルセチン、トリメチルクエルセチン、テトラメチルクエルセチンから選ばれるクエルセチン化合物。
２．クエルセチンの３′，４′−ヒドロキシル基を有するクエルセチン亜鉛錯体。
３．３，５，７，３′，４′−ペンタアセチルクエルセチン。
４．３，７，４′−トリメチルクエルセチン。
５．３，７，３′，４′−テトラメチルクエルセチン。
６．活性物質として請求項１−５に記載のクエルセチン化合物から選ばれたクエルセチン化合物または前記化合物の内の２種類以上を混合したものを含有することを特徴とする腫瘍治療用薬剤。
７．クエルセチンの血中濃度が１ミリリットル当たり少なくとも０．０１μモルとなるように充分な投与量であることを特徴とする請求項６の薬剤の用途。
８．下記の工程：メタノール中でクエルセチンを酢酸亜鉛と反応させることにより亜鉛・クエルセチン塩を製造する工クエルセチンと酢酸セレンとを反応させることによりセレン・クエルセチン塩を製造する工程；下記の物質：ＡｇＦ２，ＣＨ２ＣＯＯＦ，ＣａＳＯ４Ｆの内の１種類とクエルセチンとを反応させることによりクエルセチンふっ素化化合物を製造する工程；ナトリウムメトキシドの存在下でクエルセチンをグリコシルアセトブロマイドと反応させることによりグリコシドクエルセチン化合物を製造する工程の内の少なくとも１つを包含することを特徴とする請求項１の化合物の製造方法。