JPH07502973A - 鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 的に純　な　−Ｄｌ−−ジオキソラン−ヌクレオシド政府は、本発明達成のため の研究に一部投資した、アレルギーおよび感染性疾患国立研究所の公共保険サー ビス、および退役軍人協会部門からの認可により、本発明における権利を有する 。

発明の背景 本発明は、ヌクレオシドの有機合成の分野に関し、特に、鏡像異性的に純粋なβ −Ｄ〜（−）−ジオキソランヌクレオシドの調製方法に関する。

多数の２“、３゛−ジデオキシヌクレオシドが、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤ Ｓ）を引き起こす物質である、ヒト免疫不全ウィルス（Ｉ（ＩＶ）に対する強力 な抗ウィルス剤であることが見い出されている。鉛化合物ＡＺＴ　（Ｍｉｔｓｕ ｙａ、　）１．　；　Ｂｒｏｄｅｒ、　Ｓ、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、υ、Ｓ、Ａ、、１９８６８３．１９１１）は、 ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳに関連した複合体を有する患者への投与が、米国食品薬 物庁（ＦＤＡ）により認可されている。他のいくつかの２°、３°−ジデオキシ ヌクレオシドは、臨床試験の様々な段階にある。その例としては、３−アジド− ２°、３−ジデオキシウリジン（ＡＺＤＬＩまたはＣ５−１１７、Ｃｈｕ、　Ｃ ，に、ら、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｗ、、　１９Ｂ９．３２．６１２、およびＥ ｒ１ｋｓｓｏｎ、　Ｂ、Ｆ、Ｈ，ら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ　 Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、　１９８９．３３．１９２７を参照のこと）、２’、３ −ジデオキシイノシン（ＤＤＩ）および２’　、　３’−ジデオキシシチジン（ ＤＤＣ）　（Ｙａｒｃｈｏａｎ、Ｒ，ら、５ｃｉｅｎｃｅ、１９８９．　２４５ ．　４１２）　、３−デオキシ−２°。

３−ジデヒドロチミジン（Ｄ４Ｔ、　Ｌｉｎ、　Ｔ、Ｓ、ら、Ｂｉｏｃｈｅ＋＋ ＋、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、１９Ｂ７．　３６．　３１１；　Ｈａｍａｍｏｔｏ 、Ｙ、ら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｂｅｍｏｔｈｅｒ、、１ ９８７．　３１．　９０７；Ｂａ１ｚａｒｉｎｉ、Ｊ、ら、Ｂｉｏｃｈｅ＋ａ、 　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏ＋ｓｍｕｎ、、　１９８７．１４０．７３ ５）　、および２゛−フルオロ−アラビノフラノシル−２−３°−ジデオキシシ チジン（Ｍａｒｔｉｎ、Ｔ、Ａ、ら、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｗ、、１９９０．　３ ３．　２１３７；　Ｗａｔａｎａｂｅ。

Ｋ、　Ａ、ら、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｔ、１９９０．　３３．　２１４５；　５ｔ ｅｒｚｙｃｋｉ、Ｒ，Ｚ、ら、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅ＋＋、、１９９０３３．　２ １５０）が含まれる。

５′−トリリン酸化形態では、これらのヌクレオシドは、増殖するウィルスＤＮ Ａ鎖の鎖停止を生じさせると共に、８１Ｍ逆転写酵素を阻害するすることが知ら れている。Ｆｕｒｍａｎ、　Ｐ、Ａ、ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、 　Ｓｅｔ、　Ｕ、Ｓ、Ａ１．１９８６．８３．８３３３；　’Ｃｈｅｎｇ。

Ｙ、Ｃ，ら、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｓ、、１９８７．　２６２．　２１８７； 　Ｓｔ、Ｃ１ａｉｒ、Ｍ。

Ｈｌら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、１９８ ７．　３１．　１９７２；および５ｃｈｉｎａｚｉ、　Ｒ，Ｆ、ら、Ａｎｔｉｍ ｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、１９８９　３３、　１１ ５゜ ヌクレオシド誘導体の立体化学は、その生物学的活性に重要な役割を果たす。ヌ クレオシド中のリボースのＣ１°（ヘテロ環式塩基の窒素に結合している炭素） 位置は、キラル中心である。なぜなら、炭素は４つの異なる部分に結合している からである。同様に、ヌクレオシドのＣ４°（ヌクレオチドにおいてリン酸化さ れるヒドロキシメチル基に結合した環状炭素）に光学的な活性中心がある。天然 に存在するヌクレオシドでは、Ｃ１’原子に結合した塩基およびＣ４°原子に結 合したヒト。

キシメチル基は、共に、炭水化物環の同一側に存在する。

Ｃ１’およびＣ４−置換基が炭水化物面の同一側に存在する（すなわち、置換基 がシスである）炭水化物立体配置は、「β−立体配置」と呼ばれる。Ｃ１°およ びＣ４°−置換基が炭水化物面の反対側に存在する（すなわち、置換基がトラン スである）炭水化物立体配置は、「α−立体配置」と呼ばれる。図２の化合物ｌ を参照すると、Ｃ４一原子に結合した非水素置換基が炭水化物環の面の上方に存 在するならば、ヌクレオシドは、叶ヌクレオシドと呼ばれる。Ｃ４一原子に結合 した非水素置換基が、炭水化物環の下方に存在するならば、ヌクレオシドは、Ｌ −ヌクレオシドと呼ばれる。

ヌクレオシドの天然には存在しないα−異性体（Ｃ１°またはＣ４°置換基が、 炭水化物面の反対側に存在する）が、生物学的に活性であることはめずらしく、 通常毒性である。

近年、６つの活性および２つの不活性な抗日Ｖヌクレオシド物質の固体立体配座 の分析が、特定の立体化学特性の有無を高ＨＩＶ活性と関連づけるために行われ た。Ｖａｎ　Ｒｏｅｙ、　Ｐ、ら、Ｊ、　Ａ＋＋、　Ｃｈｅｔ　Ｓａｃ、、　１ ９Ｂ８．１１０．２２７７；およびＶａｎ　Ｒｏｅｙ、　Ｐ、ら、Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　１９８９．８６．３９２ ９゜Ｘ−線構造は、活性抗旧■ヌクレオシドが０３−エキソまたは類似の炭水化 物立体配座をとるのに対して、不活性化合物は、Ｃ３−エンド立体配座をとるこ とを示した（エンドおよびエクソは、原子が、塩基に対して、糖環の同一側また は反対側に存在する立体配座を指す）。Ｃ３−エキソおよびＣ３’−エンド立体 配座Ｌ！、。

Ｃ５″原子を、アクシャル（ａｘｉａｌ）およびエフアトリアル（ｅｑｕｉｔｏ ｒｉａｌ）位にそれぞれ配置する。０５°原子の位置は、塩基に対する５゛−ヒ ドロキシル基の位置に影響を与える。５°−ヒドロキシル基は、ヌクレオシドの リン酸化部位であるため、ヌクレオシドの残りの部分に対するその位置は、重要 である。

近年、ヌクレオシドの３−炭素がへテロ原子と置換された、ヌクレオシド誘導体 の合成に関心が寄せられている。Ｎｏｒｂｅｃｋ、　Ｄ、Ｗら、Ｔｅｔ、　Ｌｅ ｔｔ、、　１９ｇ９．３０．６２６３は、Ｃ４°原子に関してジアステレオマー のラセミ混合物を形成する、（±）　−１−［２β、４β］　−２−（ヒドロキ シメチル）−４−ジオキソルアニルコチミン（以下、（±）−ジオキソラン−Ｔ と呼ぶ。図１を参照のこと）の合成を報告した。生成物は、Ｃ３’原子が０３° 原子と置換された３−デオキシチミジンの誘導体である。生成物は、ベンジルオ キジアルデヒドジメチルアセタールおよび（±）−メチルグリセレートから５工 程を経て合成され、７９％収率の１＝１ジアステレオマ一混合物を生成する。こ の生成物をＸ−線結晶学分析すると、ジオキソラン環が、エンド位に０３”原子 を有する、リボヌクレオシドにおいて通常観察される３７４立体配座をとること が示された。Ｎｏｒｂｅｃｋは、ジオキソラン−Ｔのラセミ混合物が、ＡＴＨ８ 細胞中２０μＭの抗日Ｖ活性を示し、ウィルスに対する低効力が０３°原子のエ ンド立体配座の効力に起因することを示した。

１９９０年６月４日から９日までの、カナダのモントリオールでのＡ　ＩＤｓに 関する第５回国際会議の論文番号Ｔ、　Ｃ，０，１，において、Ｂｅ１ｌｅａｕ らは、３−位に酸素またはイオウを含有するシチジンヌクレオシドの合成方法を 報告した。ジオキソラン環は、ＲＣ０２ＣＨ２ＣＨＯとグリセリンを縮合するこ とによって調製された。

Ｎｏｒｂｅｃｋの合成と同様に、Ｂｅ１ｌｅａｕの合成においても、ヌクレオシ ドのＣ４’炭素に関するジアステレオマーのラセミ混合物が形成されたｏ　Ｂｅ １ｌｅａｕは、ＮＧＢＰ−２１または（±）　ＢＣＨ−１８９（図１を参照のこ と）と呼ばれるイオウアナログが、高い抗日■活性を有していることを報告した 。（±）　ＢＣＨ−１８９については、現在、臨床前の毒性学が研究されている 。

今日まで、天然に見いだされるヌクレオシドと同一の立体化学（β立体異性体） を有する鏡像異性的に純粋なジオキソランヌクレオシドを生じる、３′−位にお ける酸素を有するヌクレオシドアナログの合成方法は報告されていない。ヌクレ オシド誘導体の抗ウィルス活性に関する立体化学の影響に関するさらなる情報を 提供し、新規な抗日Ｖ物質を提供するためには、研究の道具としてこのような合 成が必要である。

従って、本発明の目的は、鏡像異性的に純粋なジオキソランヌクレオシドの合成 方法を提供することである。

本発明の他の目的は、鏡像異性的に純粋な、顕著な抗日Ｖ活性を有するジオキソ ランヌクレオシドを提供することである。

発明の要旨 開示される本発明は、鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキンランーヌク レオシドの不斉調製方法である。この方法は、鏡像異性的に純粋な最終産物に必 要な立体化学のすべてを含む糖分で、その糖分の１位（後に形成されるヌクレオ シドにおいて４−位となる）に関して正しいジアステレオ異性体立体配置を有す る、１．６−アンヒドロマンノースかう、（２Ｒ，４Ｒ）　−オよび（２Ｒ，４ Ｓ）−４−アセトキシ−２−（保護−オキシメチル）−ジオキソランをまず調製 する。

（２Ｒ，４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−（保護オキシメ チル）−ジオキソランは、ジクロロエタン、アセトニトリル、または塩化メチシ ンのような有機溶媒中で、５ｎＣ１４、他のルイス酸、またはトリメチルンリル トリフレートの存在下で、所望のへテロ環式塩基と縮合され、立体化学的に純粋 なジオキソラン−ヌクレオシドを提供する。

鏡像異性的に純粋なジオキソランヌクレオシドは、従来調製された、化合物のラ セミ混合物よりもはるかに有効な活性ＨＩＶ物質である。化合物の抗ウィルス活 性は、これらのジオキソランを含むエンド立体配座中の部分が有効な抗ウイルス 物質ではないという、一般的に許容された理論を考慮すると驚くべきものである 。さらに、鏡像異性的に純粋なジオキソランヌクレオシドは、ヌクレオシドのラ セミ混合物はど毒性が高くない。なぜなら、天然に存在しない異性体が除去され ているからである。

生成物は、インビトロにおける旧Ｖの阻害を研究するための道具として使用され 、または薬学組成物中に含有されて投与され得、インビボにおける旧Ｖの増殖を 阻害する。

図面の簡単な説明 図１は、　（±）−１−［（２β、４β）　−２−（ヒドロキシメチル）＝４− ジオキソルアニル］チミン（ジオキソラン−Ｔ）および（±）−１−［２β、４ βコー２−（ヒドロキシメチル）−４−（１，３−チオキソラン）］チミン（Ｂ ＣＨ−１８９）の化学構造を示す。

図２は、鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキシラン−チミンの合成方法 を示す。

発明の詳細な説明 本明細書で使用されるように、用語「保護」は、分子の官能基上に置かれ、分子 の他の部分が誘導体化の間に、前記部分がさらに反応するのを防ぐ部分を指す。

特に酸素および窒素の保護基は、有機化学の当業者に公知である。

本明細書で使用される用語「１．３−ジオキソランヌクレオシド」は、図１およ び２に示されるようにヌクレオシド誘導体を指し、ここで、１．３−ジオキソラ ンは、オキサチオランＣ５炭素（ヌクレオシドにおいてＣ１−炭素となる）を通 じて、ヘテロ環式塩基、通常はプリンまたはピリミジン塩基に結合する。

■、鏡像異性的に純粋なジオキソランヌクレオシドの調製鏡像異性的に純粋なジ オキソランヌクレオシドの調製を行う際には、ジオキシラン環を開裂し得るよう な強酸条件を避けるように注意せねばならない。反応は、できるだけ塩基性また は中性条件で行うべきであり、酸性条件が必要な場合には、反応時間を最短に抑 えるべきである。

Ａ、、ジオキソラン誘導体の調製 鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）ジオキソラン−ヌクレオシドの合成の主要出 発物質は、１．６−アンヒドロマンノース（化合物上、図２）である。この糖類 は、（後に形成されるヌクレオシドでは４′位となる）この糖類の１位について のジアステレオマーの正しい立体配置を含めて、鏡像異性的に純粋な最終生成物 に必要なすべての立体化学を含有している（たとえば、化合物１１、図２参照） 。１．６−アンヒドロマンノースは、Ｋｎａｕｆ、　Ａ、Ｅ、；　Ｈａｎｎ、　 Ｒ，Ｍ、；　）ｌｕｄｓｏｎ、　Ｃ，Ｓ、　Ｊ、　Ａ＋ｕ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏ ｃ、　１９４１．　６３．　１４４７．およびＺｏｔｔｏｌａ、　Ｍ、Ａ、　； 　Ａｌｏｎｓｏ、　Ｒ，；　Ｖｉｔｅ、Ｇ、Ｄ、；　Ｆｒａｓｅｒ−Ｒｅｌｄ、 Ｂ、　ノ、Ｏｒｇ、ＣｈｅＩｌｌ、、　１９８９．　５４．　６１２３に記載の 工程に従って調製し得る。ジオキソランヌクレオシドの前合成では、リボース部 分の調製のために出発物質のラセミ混合物を用いてきた。試薬のラセミ混合物に よって合成を始めると、鏡像異性のヌクレオシド生成物の、望ましくないラセミ 混合物が生成される。この混合物を分離することは非常に難しく、最終生成物の コストが大きく上がる。さらに、天然に由来しない異性体を含有することによっ て、生成物の毒性が上がる。

１．６−アンヒドロマンノースは、ジメトキシプロバントＩ）−トルエンスルホ ン酸によってイソプロピリデン誘導体に変換され、この誘導体を、単離せずに、 ４位をベンゾイル化して、化合物上が得られる（図２参照）。４位を保護するに はアシル基を用いることもできる。そして、約Ｏから５０℃の範囲の温度で、６ ０％ジオキサン水溶液またはその他の適切な有機溶媒内で、硫酸、塩酸、蟻酸、 トリフルオロ酢酸、スルファミン酸等の触媒量の酸によって、化合物ｌのインプ ロピリデン基を除去し、白色固体状の（−）−１＋’６−アンヒドロ−４−０− ベンゾイル−β−Ｄ−マンノピラノースが高収率で得られる。

次の工程では、（−）−１，６−アンヒドロ−４−０−ベンゾイル−β−Ｄ−マ ンノピラノースのグリコールを、およそ室温で１時間、Ｈ”Ｏ／ＥｔＯＨ（１： 　１）内のＮａ１０４で処理することによって酸化開裂し、対応するジアルデヒ ドを生成する。この反応の酸化試薬として、テトラ酢酸鉛も用いることができる 。ＮａＢＨ４、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−１１）　、水素 化ホウ素リチウム（Ｌ　１ＢＨａ　）または水素化ビス（２−メトキシエトキシ ）−アルミニウムナトリウム（Ｒｅｄ−ＡＩ）を含む適切な還元剤を用いて、お よそ室温あるいはそれ以下で、このジアルデヒドを即座に原位置で還元する。こ の反応条件で、化合物上を二級の位置から一級の位置へのベンゾイル移動によっ て異性体化することによって、（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ベンゾキシ −１−ヒドロキシエチル）−２−（ヒドロキシメチル）−ジオキソラン（化合物 ５、図２）を生成する。

その後、このジオキソランの２位を、たとえば、トリメチルンソル、ジメチルへ キシルノリル、ｔ−プチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリルなどの トリ置換シリル基、トリチル、アルキル基、アセチル、プロピオニル、ベンソイ ル、ｐ−Ｎｏ２ベンゾイル、またはトルイルなどのアシル基、メチルスルホニル 、またはＩ）−トルイルスルホニルなどの適切な酸素保護基で保護する。好まし い保護基はｔ−ブチルジフェニルシリルである。ジオキソランの２位を保護した 後、メタノール中のナトリウムメトキシドまたはアンモニアなどの強塩基で、お よそＯから５０°Ｃで、ベンゾイル基を２−ヒドロキシエチル位置から除去し、 （−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−（保護−〇−メチル）−４−（１，２−ジヒドロ 牛ジエチル）−ジオキソラン（化合物６、図２）　を高酸４で生成する。

次の工程では、このジオキソランの４位の１．２−ジヒドロキシエチル基を、Ｎ ａ１０７Ｒｕ０２またはテトラ酢酸鉛などの酸化剤によって、およそ０から５０ ℃で、カルボン酸に変換することによって、（＋）−（２Ｒ，４Ｒ）−２べ保護 −オキシメチル）−４−カルボキシルジオキソラン（化合物７、図２参照）を生 成する。

その後、改変フンスジ−カー反応（Ｄｈａｖａｌｅ、　Ｄ、；ら、Ｔｅｔｒａｈ ｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、、　１９８８．２９．　６１６３）を、Ｐｂ（ＯＡｃ） ４によって酢酸エチル中で行い、（＋）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−（保護−オキシ メチル）−４−カルボキシルジオキソランを、対応する主要中間体である（２Ｒ １４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ＞−４−アセトキシ−２−（保護−オキシメチル ）ジオキソラン（化合物８、図２参照）に高収率で変換する。

Ｂ、ジオキソラン誘導体によるヘテロ環式塩基の縮合この反応スキームの次の工 程において、Ａ項で説明したように調製された鏡像異性的に純粋なジオキソラン を、乾燥有機溶媒中のトリメチルシリルトリフレート（トリメチルシリルトリフ ルオロメタンスルホネート）またはルイス酸の存在下で、保護された塩基と縮合 する。

電子不足中心と反応し得る窒素を含有するあらゆる化合物を、この縮合反応で用 い得る。プリン塩基には、アデニン、ヒボキサンチン　Ｎ６−アルキルプリン類 、Ｎ６−ベンジルプリン、Ｎ６−バロブリンおよびグアニンが含まれる。ピリミ ジン塩基には、チミン、シトシン、６−アザピリミジン、２−メルカプトピリミ ジンおよびウラシルが含まれる。ジオキソラン誘導体によって行われる縮合反応 ではチミン塩基が好ましく、１．３−チオキソランによって行われる縮合反応で はシトシン塩基が好ましい。

ヘテロ環式塩基の官能酸素および窒素基は、縮合の前に糖類で保護しなければな らない。保護基は当業者には公知であり、トリメチルシリル、ジメチルへキシル シリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、およびｔ−ブチルジフェニルシリル、トリ チルメチル、アルキル基、アセチルおよびプロピオニルなどのアシル基（低級ア ルキル−Ｃ（０））　、メチルスルホニル、およびｐ−トルイルスルホニルなど が含まれる。

この縮合反応で用い得るフリーデル−クラフッ触媒（ルイス酸）には、５ｎＣ１ ４、ＺｎＣｌ４、ＴｉＣｌ４、ＡｌＣｌ３、ＦｅＣｌ３、ＢＦ３−ジエチルエー テルおよびＢＣｌ３が含まれる。これらの触媒は、水の存在によってその活性が 抑えられるため、無水条件が必要である。また、これらの触媒は、アルコール類 および有機酸類などの、活性水素を有する有機溶媒が存在すると不活性となる。

ロメタン、１．２−ジクロロエタン、ニトロベンゼン、テトラクロロエタン、ク ロロベンゼン、ベンゼン、トルエン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラ ン、ジオキサンまたはアセトニトリルなどの溶媒中で用いられる。無水塩化アル ミニウムは、二硫化炭素には可溶ではない。Ｎ１ｅｄｂａｌｌａ、ら、Ｊ、　０ ■−」遥Ｌ３９．２５　（１９７４）。好ましい触媒は５ｎＣ１４テある。好ま しい溶媒は１．２−ジクロロエタンである。トリメチルシリルトリフレートは、 フリーデル−クラフッ触媒について上述したのと同様の条件で用い得る。反応は 、−１０’Ｃがら２００″Ｃの温度範囲で進行する。

縮合のための触媒の選択によって、αヌクレオシド生成物のβヌクレオシド生成 物に対する最終生成比率は影響を受ける。たとえば、中間体である（２１？、　 ４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−＜１−ブチルジフェニル シソオキシメチル）ジオキソラン（化合物８、図２）を、ＣＨ２Ｃｌ□中、トリ メチルシリルトリフレートの存在下で、シソル化チミジンと縮合すると、（−） −１−［（２Ｒ，４Ｒ）−２−（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル）− ４−ジオキソラニル〕チミンＬＡ（４ｓ％）と、（＋）−１−［（２Ｒ，４Ｓ） −２−（１−ブチルジフェニル／リルオ牛ジメチル）−４−ジオ牛ソラニルコチ ミノ１０−ａ　（２９％）との混合物が得られた。しがし、Ｓｒ＋ＣＩ４で反応 させると、主にβ−異性体ｌが生成され、ＴＬＣで検出可能な微量のα−異性体 胆が共存した。

この鏡像異性的に純粋なく−）−β−Ｄ−ジオキソラン−ヌクレオシドの調製方 法の最終工程では、ヌクレオシドの５−０−位１１が脱保護される。脱シリル化 は、酢酸、トリフルオロ酢酸、フッ化水素、フッ化ｎ−テトラブチルアンモニウ ム、フッ化カルシウムおよび塩酸ピリジニウムを含む様々な試薬によって行い得 る。たとえば、化合物ｌおよび胆をフッ化テトラブチルアンモニウムで脱シリル 化すると、所望の遊離ヌクレオシド■および■がそれぞれ得られる（図２）。商 業的規模で用いるには、酢酸が安価であるため好ましい。脱シリル化のためのそ の他の試薬は当業者に公知である。脱アシル化は、酸または塩基中で行われる。

５−０−エーテルは、ＢＣｌ３またはヨウ化トリメチルシリルで開裂され得る。

鏡像異性的に純粋なく−）−β−Ｄ−ジオキソラン−ヌクレオシドの調製方法は 、（−）−β−Ｄ−ジオキソランー■と示される、（−）−１ンの調製に関して 、以下の実用的実施例でさらに詳しく説明する。実用実施例に列挙した化合物は 、図２に示した構造に当てはまる。

（−）−１，６−アンヒドロ−２，３−イソプロピリデンート０−ベンゾイル− β−Ｄ−マンノピラノース １．６−アンヒドロ−β−Ｄ−マン／ピラノース（化合物１）を、アセトン（８ ００ｍｌ）およびメタノール（３ＱＱａ＋１）と混合し、自由に浮遊する固体の みが残るまで約３０分間撹拌した。ジメトキアブ。パン（３００ｍｌ）およヒｐ −＋−ルエンスルホン酸（５ｇ）ヲ加え、この混合物を２時間撹拌した。

この反応混合物を、トリエチルアミン（ｐＨ８）で塩基性にし、濾過して白色固 体物質を除去した。溶媒を蒸発させ、残渣を取り出し、酢酸エチルで結晶させて 、透明な針状の２．３−インプロピリデン化生成物４ｇを得た。

１．６−アンヒドロ−２，３−インプロピリデン−β−Ｄ−マンノピラノース（ ５，Ｏｌｇ、０．０２５モル）のピリジン（４０＋ａｌ）溶液に、０℃で、塩化 ベンゾイル（３，７４ｍＬ　０．０６２モル）を滴下した。この混合物を０°Ｃ で４５分間撹拌した。その後反応混合物に氷を加え、過剰の塩化ベンゾイルを除 去した。減圧下で溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（２００＋ａｌ）に溶解し た。有機層を水、飽和ＮａＨＣＯ，および食塩水で洗浄した。得られた物質を無 水Ｍｇ５ｏ４で乾燥し、濾過し、その後蒸発させて、黄色の固体状のく−）−１ ，６−アンヒドロ−２，３−イソプロピリデン−４−０−ベンゾイル−β−Ｄ− マンノピラノース粗生成物（化合物２．８．７ｇ）を得た。

（−）−１，６−アンヒドロ−４−〇−ベンゾイルーβ−Ｄ−マンノピラノース （３） ６０％ジオキサン水溶ｅ（８２０ｍｌ）中の１．６−アンヒドロ−４−０−ベン ゾイル−２，３−インプロピリデン−β−Ｄ−マンノピラノース１（１０，０ｇ 、　３２．６ミリモル）に、濃Ｈ２Ｓ０ａ　（３，３６ｍ１）を加えた。

この混合物を７０〜８０°Ｃで１５時間撹拌し、そして水浴内で冷却し、ＮａＨ ＣＯ，で中和して、当初の体積の半分になるまで濃縮した。その後、この溶液を 酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および水で洗浄し 、乾燥し、蒸発させて、白色固体状の１を得た。この固体をＣＨ２Ｃｌ２−ｎ− へキサンから結晶することによって、白色固体の３　（７，４ｇ、８５．３％） を得た［α戸Ｄ−１５４．７°（Ｃ，０，２１（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−４−（ ２−ベンゾキシ−１−ヒドロキシエチル）−２−（ヒドロキシメチル）ジオキソ ラン（５） ３　（７，４ｇ、　２７．８ミリモル）の９５％エタノール（２００＋ｓｌ）溶 液に、Ｎａ１Ｏｎ　（６，５４ｇ、　３０．７ミリモル）の水（２０ｈｌ）溶液 を加えた。この混合物を室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーによっ てジオールが完全にジアルデヒドに変換されたことを確認した後、反応混合物を 当初の体積の半分に濃縮した。メタノール（２００ｕ＋１）を残渣に加え、混合 物を５０°Ｃに冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（４，２ｇ、１１１．０ミリ モル）を少しずつ混合物に５分間にわたって加え、この混合物を５０℃で１０分 間撹拌し、氷酢酸で中和して、濃縮することによって、黄色油状の粗生成物ｌを 得た。この油をシリカゲルによるカラムクロマトグラフィで精製して、無色油状 の純粋な生成物ｌを得、これをジエチルエーテル／ｎ−ヘキサンから結晶するこ とによって白色固体状の５　（６，１２ｇ、８２％）ヲ得り：Ｃ，５８，０９＋ 　Ｈ，６，０１゜ （−）−（２Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ベンシリ＋ヒドロキシエチル）−２−（ｔ −ブチルジフェニルシリルオキシ−メチル）−ジオキソラン３　（２，８ｇ、１ ０．４ミリモル）とイミダノール（２，０４ｇ、３０．０ミリモル）とのジメチ ルホルムアミド（４０ｍｌ）溶液（こ、塩化ｔ−ブチルジフェニルシリル の混合物を室温で２時間撹拌した。この反応混合物を蒸発させることによって、 黄色の油を生成し、これをシ１ツカゲルによるカラムクロマトグラフィで精製す ること１こよって、無色油状の土（　４．　４８ｇ、８５％）を得た；（−）− （２Ｒ．　＋Ｒ）−４−（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル−（１．２ −ジヒドロキシエチル）−ジオキソラン（６）（−）　−（２Ｒ．　４Ｒ）−４ −（２−ベンゾキシ−ｌ−ヒドロキシエチル）−２−（ｔ−ブチルジフェニルシ リルオキシーメチル）−ジオキソラン（２。

５２ｇ，　５．０ミリモル）のメタノール（４０ｍｌ）溶液に、ナトリウムメト キシド（７．３ミリ）の０．　０７８Ｍメタノール溶液を加えた。この混合物を 室温で２時間撹拌した。この混合物を酢酸で中和し濃縮した。残渣を酢酸エチル と水とで分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨ ＣＯ３溶液と水とで洗浄し、その後乾燥し、蒸発させ、シリカゲルによるカラム クロマトグラフィで精製することによって、無色油状の６　（１９ｇ，　９５％ ）を得た：（ａｌ’Ｄ−２・（Ｃ　Ｏ．２５，　ＭａＯＨ）ｉ　’ＨＮＫＲ　（ ＤＭＳＯ−ｄ６）　６　１．００　（Ｓ，　９Ｈ，　ｔ−Ｂｕ）、　３．４０− ３．５２　（ｍ，　３Ｈ。

ＣＨ２０Ｈ　！ぴＣＨＯＨ）　、　３．６４　（ｄ，　Ｊ−３．７　Ｈｘ，　２ Ｈ，　ＣＨ２０ＴＢＤＰＳ）　、　３．８２−３、９５　（ｍ，　コＨ，　４． ５−Ｈ）、４．４９　（ｔ，　Ｊ−５．３　Ｈｚ，　ＩＨ，　Ｉｒ：　ＯＨ，　 Ｄ２０女県可ｔｌＥ　）、４．Ｅ１２　（ｄ，　Ｊｍ５．ｌ　Ｈｚ，　ＩＨ，　 ｓａｃ　ＯＨ，　Ｄ２０幻Ｉ鮨　）、　５．０１　（ｔ，　Ｊ−３．７　Ｈｚ， 　ＬＨ，　２−Ｈ）、　７＋３６−７、７１（ｍｙ　１ｏＨ，　Ａｒ−Ｈ）ｌ　 ＋３ｒｊｆ（　ＣｚｓＨ３３ＨｓｏＱｓＳ：とし７訂ｈｋ　、：Ｃ，　６５．６ ３；Ｈ，　７．５３．　＠ｉ　畷１値：　Ｃ，　６５．７２；　Ｈ，　７．５２ 。

（＋）−（２Ｒ．　４Ｒ）−２−（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル） −４−カルボキシルジオキソラン（７） ＣＨ３ＣＮ　（８１１）とＣＣ１４　（８ミリ）とＨ２Ｏ　（１２＋１１１）と の中の１（１。

６ｇ，　４．０ミリモル）の二相の溶液に、ＮａｌＯａ　（３．５９ｇ，　１６ ．８ミリモル）と水和Ｒｕ０２　（８．　５ｍｇ）を加えた。この混合物を室温 で５時間激しく撹拌した。塩化メチレン（４０＋ａｌ）をこの混合物に加えた。

有機層を分取した。水層をＣＨ２Ｃ１２で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄 し、セライトバッドを通して濾過し、その後濃縮することによって、黒色油状の 粗生成物７　（１．２ｇ、７７、４％）を得、これをさらに精製せずに次の反応 に用いた。

分析のために、粗生成物りをシリカゲルによるカラムクロマトグラフィで精製し て、白色泡状のＬを得た：［（１］２５Ｄ＋　１５．７”　（Ｃ Ｏ，２Ｂ、　ＭａＯＨ）　；　’ＨＮＭＲ（ＤＭ５０−ｄ６）　６０．９９　（ ｓ、　９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）　、　３．４３−４．０５　（ｍ、　４Ｈ，５−Ｈ２’ ＪｔＫＣＨ２０ＴＢＤＰＳ）　、　４．２５　（ｔ、　Ｊ−６，８Ｈｚ、　：Ｌ Ｈ。

４−Ｈ）、　５．０４　（ｄｄ、　Ｊ−５，１，３，７Ｈｚ、　ＩＨ，２−Ｈ） 、　７．３８−７．７２　（ｍ。

１０Ｈ，Ａｒ−Ｈ）。

（２Ｒ，４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−（ｔ−ブチルジ フェニルシリオキシ（ｓｉ　１ｙｏｘｙ）メチル）ジオキソラン（８）７　（０ ，４６ｇ、　１．１４ミリモル）の酢酸エチル（１０ｍ＋１）溶液に、ヒリジン （０，０９＋ｉｌ、　１．２５ミリモル）とＰｂ（ＯＡｃ）ｎ　（０，６６ｇ、 　１．４９ミリモル）とを加えた。この混合物を室温、Ｎ２雰囲気で１５時間撹 拌し、セライトパッドを通して濾過し、その後濃縮して、シリカゲルによるカラ ムクロマトグラフィで精製することに（−）−１−［（２Ｒ，４Ｒ）−２−（ｔ −ブチルジフェニルシリルオキシメチル）−トジオキソラニル］チミン（９）お よび（＋）−１−［（２Ｒ，４Ｓ）−２−（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ メチル）−４−ジオキソラニル］チミ　ン（１０） チミン（０，１５ｇ、　１．２　ミリモル）のへキサメチルジシラザン（１０ｍ ｌ）懸濁液に、触媒量の（Ｎ）Ｉ４）２ｓＯ４を加え、この混合物を３時間還流 した。得られた透明な溶液を濃縮して、無色油状のシリル化チミンを生成した。

８　（０，２４ｇ、　０．６ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２　（５＊ｌ）溶液を、シ リル化チミンのＣＨ２Ｃｌ２　（５＊ｌ）溶液に加え、この混合物を５℃まで冷 却した。この冷却した混合物に、トリメチルシリルトリフレート（０，２３ｍ１ ．１．２ミリモル）を加え、この混合物を室温、Ｎ２雰囲気で１時間撹拌した。

飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０＋ｉｌ）をこの混合物に加え、混合物を再び室温で ３０分間撹拌した。有機層を分取し、水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた 有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液と水とで洗浄し、乾燥し、濃縮し、シリカゲルに よるカラムクロマトグラフィで精製することによって、白色泡状の９　（０，１ ２５ｇ、４４．６％）と白色泡状の胆（０，０８ｇ、２８．６％）とを得た：２ （β−影池・）：［α］２５Ｄ−６，９８”　（ＣＯ，４３゜ＭａＯＨ）　；　 ’ＨＮＫＲ（ＣＤＣ１３）　６１．０８　（！ｉ、　９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）　、　１ ．６７　（ｓ、　：ｌＨ。

ＣＨ３）、　３．９２　（ｄ、　Ｊ＝３．２　Ｈｚ、　２Ｈ，ＣＨ２０ＴＢＤＰ Ｓ）、　４．１４　（ｄ、　Ｊ−４＋ＯＨｚ、　２Ｈ，５−Ｈ）、　５．０６　 （ｔ、　Ｊ＝：１．２’Ｈｚ、　ＩＨ，２−Ｈ）、　６．３６　（ｔ。

Ｊ＋４．Ｏｌ（ｚ、　ＩＨ，４−Ｈ）、　７．２６−７．７５　（ｍ、　１０Ｈ ，Ａｒ−Ｈ）、　９．．５１　（ｂｎｒｓ、ＩＨ，Ｈｍ）ｆＨ）：　ＵＶ　（Ｍ ａＯＨ）ン＼、２６５．０　（ｐＨ２）；　２６４．４　ｎｍ　（ｐＨ１１）； 　ｅ＃ｒＣ１ｙＨｈＯｇｔＪＪｒとＬｚＨｔｌＱ　：Ｃ，６４ｊ４；　Ｈ，６， ４９；　Ｎ。

（ＣＤＣ１３）　６１．０８　（ｓ、　９Ｈ，ｔ−Ｂｕ）、　１．９４　（ｄ、 　Ｊ−Ｃ２Ｈｚ、　３Ｈ。

ＣＨ３）　、　３−７０　（ｄ、　Ｊ−３，２Ｈｚ、　２Ｈ，ＣＨ２０ＴＢＤＰ Ｓ）　、　４−０１　（ｄｄ、　Ｊ−９，５゜２ｊ　Ｈｚ、１１１，５Ｈ）、４ ．３５　（ｄｄ、Ｊ−９，５，５，３Ｈｚ、ＬＭ、５−Ｈ）、５．５５（ｔ、Ｊ −１２Ｈｚ、ＬＭ、２−Ｈ）、６．３２　（ｄｄ、Ｊ−５，３，２，３Ｈｚ、Ｉ Ｈ，４−（−）−１−［（２Ｒ，４Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−ジオ キソラニル］チ溶液に、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライドのＴＨＦ ｌ、０Ｍ溶液（０，２４＋ｎｌ、０．２４ミリモル）を加え、この混合物を室温 で１時間攪拌した。次いで、この混合物を濃縮し、そしてシリカゲルのカラムク ロマトグラフィーにより精製して１上（４２ｍｇ、　９２．１％）を白色の固形 物として得た。

［ａ１２５Ｄ−１８，８°（ＣＯ，１７，ＭｅＯＨ）　；１ＨＮＭＲ（ＤＫＳＯ −ｄ６）　６１７５　（ｄ、　Ｊ−１，２Ｈｚ、　３Ｈ，ＣＨ３）　、　３．６ ：ｌ　（ｄｄ。

Ｊ＋６．０．２．６　Ｈｚ、　２Ｈ，ＣＨ２０Ｈ）、　４．０３　（ｄｄ、　Ｊ −９，９，５，５Ｈｚｔ　ＬＭ。

５−Ｈ）、　４．２２　（ｄｄ、　Ｊ＝９．９．２．０　Ｈｚ、　ＬＨ，５−Ｈ ）、　４．９０　（ｔ、　、Ｉ−２，６Ｈｚ、　ＩＨ，２−Ｈ）、　５．１６　 （ｔ、　Ｊ−ｔ、ｏ　Ｈｚ、　ＬＨ，ＯＨ）、　６．２１　（ｄｄ。

Ｊ−５，５，２，０Ｈｚ、　ＩＨ，４−Ｈ）、　７．６７　（ｄ、　Ｊ＝１２　 Ｈｚ、　ＬＨ，６’−Ｈ）。

１１２７　（ｂｒ　ｓ、　ＩＨＮＨ）；　ｔｙｖ　（Ｈｚ）　ｍａＸ　２６６． ０　（（１０７５７）；　２６６．５（Ｅ　９８９４）　（ｐＨ２）ｇ２６６． ３（Ｅ　８３９７）　（ｐＨ１１）；５４１’ｊＣｑ）ｌホ○、／’ＪＬｔＬ７ ３ｔｉイ貞、：Ｃ，４７，コロ；　Ｈ，５，３１；　Ｎ、１２．２ａ、＠；Ｒツ イＪ　：　ｃ。

４７．２８；　Ｈ，５，３４：　Ｎ、１２．２９゜（＋）−１−［（２Ｒ，４Ｓ ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−ジオキソラニル〕チ１、０　（６０ｍｇ、 　０．１３　ミリモル）を脱保護することにより、１２（２６ｍｇ、　８７．６ ％）を白色の泡状物として得た。

［α］”Ｄ　＋　１０．７°　（ＣＯ，１５゜ＭｅＯＨ）；　’ＨＮＫＲ（ＤＫ ＳＯ−ｃ１６）　６１−７９　（ｓ、３ＨＦ　ＣＨ３）＃　コ、４３　（ｄｄ。

Ｊ−６，０，３，７Ｈｚ、　２Ｈ，ＣＨ２０）１）、　４．０２　（ｄｄ、　Ｊ −９，５，３，３Ｈｚ、　１．Ｈ。

５−Ｈ）、　４．２８　（ｄｄ、　Ｊ−９，５，５，６Ｈｚ、　ＬＭ、　５−Ｈ ）、　５．００　（ｔ、　Ｊ＝６．ＯＨｚ、ＩＨ，ＯＨ）、５．４７　（ｔ、Ｊ −３，７Ｈｚ、ＩＨ，２−Ｈ）、６．１７　（ｄｄ。

Ｊ−５，６，：１．３　Ｈｚ、ＬＨ，４−Ｈ）、７．４３　（ｄ、Ｊｘｌ、２　 Ｈｚ、ＩＭ、６’−Ｈ）。

ＬＬ、３２　（ｂｒ　ｓ、　ＩＨＮＨ）　：　ＵＶ　（Ｈ２Ｏ畠、２６６．５　 （（９４５４）　；　２６６．５（（９４９９）　（ｐＨ２）；　２６６．３　 （（６９２５）　（ｐＨ＝１１）；　’ｒｊｊｌ〒Ｃ１’（＋ｚＱ５Ｎｚａａｚ ７１（ｈ　；Ｃ，４７，３６；　Ｈ，５，３１；　Ｎ、　１２．２ａ、　笑Ｊ１ を値：　Ｃ，４７，２２；Ｈ，５，３２７Ｎ、１２．１６゜ Ｉｆジオキソランヌクレオシドの抗ＨＩＶ活性β−Ｄ−（±）−ジオキソラン− チミンがＡＴＩＩ８細胞において旧Ｖに対する効果が低いという前述の報告と対 照的に、鏡像異性的に純粋なβ型し±は、強い抗日Ｖ活性（ＥＣ５ｏ＝　０．３ μＭ）を示した。驚くべきことに、鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキ ソラン−Ｔは、この化合物のラセミ混合物と比べて有意に高い抗日■活性を有す ることを発見した。この違いはこれらの系における１土のリン酸化の割合に基づ いて説明され得る。予測されたように、α−異性体ユは、有意な抗日■活性を示 さなかった。

β−Ｄ−（−）−ジオキソランヌクレオシドは、インビトロで旧Ｖの増殖を阻害 するための研究手段として用いられ得る。あるいは、インビボで旧Ｖの増殖を阻 害するために薬学的に投与され得る。

旧■を阻害するためのβ−Ｄ−（−）−ジオキソランーヌクレオシドの能力は、 種々の実験方法によって測定され得る。本発明書で用いられ、そして以下で詳細 に述べられる方法は、ＨＩＶ−１（ｔ、ＡｖＫ　）に感染した、フィトヘムアグ ルチニン（ＰＨＡ）で刺激すれたヒト末梢血単核（ＰＢＭ）細胞におけるウィル スの複製の阻害を測定する。ウィルスでコードされた逆転写酵素を測定すること により、生成したウィルスの量を決定する。生成した酵素の量を旧Ｖの対照物と 比較する。この方法を以下で詳細に述べる。

ヒト末梢血単核細胞における抗ウィルスおよび細胞毒性のアッセイ Ａ、Ｂ型肝炎および旧Ｖ−１について血清陰性（ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ）の 健康なドナー由来の３日齢のフィトヘムアグルチニンで刺激されたＰＢＭ細胞（ １０６細胞／＋ｍｌ）を、１ａ＋１当り５０％組織組織感染用量（ＴＩＣＤ　５ ０）ノ約１００倍の濃度の旧Ｖ−１（ＬＡｖ株）で感染させ、そして種々の濃度 の抗ウイルス性化合物の存在下または非存在下で培養した。

Ｂ、感染させて、およそ４５分後に、この培地を、試験されるべき化合物（培地 中に最終濃度の２倍の濃度）とともに、または化合物なしで、フラスコに加えた （　５ａｌ　：最終容量１０ｍ１）。ＡＺＴを陽性の対照として用いた。

Ｃ９これらの細胞をウィルス（約２ｘ　１１０５ｄｐ／ｌａｌ、逆転写酵素アッ セイにより測定された）に晒し、次いでＣＯ。インキュベーター中に置いた。Ｈ ＩＶ−１（ＬＡＹ株）は　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒＤｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏ ｌ　（アトランタ、ジョーシア州）から得た。

ＰＢＭ細胞の培養の、ウィルスの採収、および逆転写酵素活性の測定に用いられ た方法は、フンギシン（ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ）を培地ニ含めないこと（Ｓｃｈｉ ｎａｚｉら、Ａｎｔｉ＋ｍ１ｃｒｏｂ、　Ａ　ｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ。

３２、１７８４−１７８７　（１９８８）参照）以外は、％ｃＤｏｕｇａｌら（ Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ。

Ｍｅｔｈ、　７６、１７１−１８３．１９８５）および５ｐｉｒａら（Ｊ、　Ｃ ｌ１ｎ、　Ｍｅｔｈ。

２５、９７−９９．１９８７）に記載の方法であった。ウィルス感染した対照に おける逆転写酵素活性は、約２Ｘ　１０５ｄｐ！ｌ／■ｌであった。

ブランクおよび非感染細胞の対照の値は、それぞれ約３００ｄｐＩおよび１．０ ００ｄｐｍであった。工程Ｂの前に工程Ｃを行った場合にも、同様の結果が得ら れる。

Ｄ、６８目に、これらの細胞および上清液を１５ｓｌの試験管に移し、そして約 ９００ｇで１０分間遠心分離した。５＋ｍｌの上清液を除去し、そしてウィルス を４０．００Ｏｒｐｍで３０分間遠心分離（Ｂｅａｋｍａｎ　７０．Ｉ　Ｔｉロ ーター）することによって濃縮した。溶解したウィルスのベレｙ）を作製して、 逆転写酵素のレベルを測定した。結果をサンプルした上清液のｍｌ当りのｄｐ＋ ａで表す。

（−）−１−［（２β、４β）−２−（ヒドロキシメチル）−４−ジオキソラニ ル〕チミンの５０％有効濃度（ＥＣｓｏ）を、５０％効果方法（ｍｅｄｉａｎｅ ｆｆｅｃｔ　ｍｅｔｈｏｄ）（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａ　ｅｎｔｓ　Ｃｈｅ ｍｏｔｈｅｒ、　３０．４９１−４９８　（１９８６）によって測定した。簡単 にいうと、逆転写酵素の測定から決定されたウィルスの阻害の割合を、化合物の マイクロモル濃度に対してプロットする。ＥＣｓｏは、ウィルスの増殖を５０％ 阻害する化合物の濃度である。

ＰＢＭ細胞における（−）−１−［（２β、４β）−２−（ヒドロキシメチル） −４−ジオキソラニル］チミンのＥＣ５゜は、０．２μＭと測定された。

この活性は、２’、３’−ジデオキシアデノシン（ＤＤＡ、ＥＣ５ｏ＝　０．９ １μＭ＞、３−アジド−２゛、３−ジデオキシウリジ７（ＡＺＤＵ、　ＥＣ５ｏ ＝０、１８−０．４６μＭ）、および３−ジデオキシチミジン（ＤＤＴ、　ＥＣ ５゜・０．１７μＭ）にまさるとも劣らない。これらは、ＦＤＡで臨床段階の試 験を行っている構造が類似した化合物である。

ＩＩｌ、ジオキソランヌクレオシドの毒性ミトゲンで刺激された非感染のヒトＰ ＢＭ細胞（３，８Ｘ　１０５細胞／ｍｌ）を、上述の抗ウイルスアッセイに用い た条件と同様の条件で、薬物の存在下および非存在下で培養した。血球計、およ び５ｃｈｉｎａｚｉらのＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａ　ｅｎｔＳ　ａｎｄ　 Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａ　。

２２（３）、４９９　（１９８２）に記載のトリバンブルー排除法を用いて、こ れらの細胞を６日後に数えた。Ｉｃ５．は、通常の細胞増殖の５０％を阻害する 化合物の濃度である。

（−）−１−［（２β、４β）−２−（ヒドロキシメチル）−４−ジオキソラニ ル］チミンを１００μＭまでにわたって測定したところ、この化合物は評価され た非感染のＰＢＭ細胞中では１００μＭまで毒性がないことを示した。

ｌ　薬学組成物の調製 旧Ｖの感染により引き起こされる疾病にかかった患者は、薬学的に受容可能な牛 ヤソアまたは希釈剤の存在下においてβ−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオ シドまたはその塩の効果的な量を投与することにより処置され得る。活性物質は 、任意の適切なルート、たとえば、経口、腸管外、静脈、皮内、皮下、または局 所的に、液体または固体形態で投与され得る。

活性化合物は、治療上効果的な量の化合物を患者に送達するために充分な量で、 薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤中に含まれる。これによって、処置さ れる患者に深刻な毒性の影響を与えることなく、インビボで旧Ｖの複製が阻害す れる。ｒ　ＨＩＶ阻害量」は、ＨＩＶ阻害効果をもたらすために十分な活性成分 の量を意味する。この効果は、たとえば、本明細書に記載するようなアッセイに より測定される。

これらの調製物は、活性成分の血清中濃度を約０．２から４０μＭとする。好適 な濃度範囲は、０．２から２０μＭであり、最も好適には約１から１０μＭであ る。

薬学組成物は、１日体重１キログラムにつき、１から６０ミリグラムの化合物の 投与量を提供する。薬物組成物中における活性化合物の濃度は、薬物の吸収率、 不活性率、および排出率、そして当業者に周知の他の要素に依存する。投与量の 値はまた、緩和すべき症状の重篤さによっても変化することに注意されたい。さ らに、任意の特定の被験者について、特定の投与プログラムは、個人の必要に応 じて、および組成物を投与する者または投与の監督を行う者の専門家としての判 断に応じて、経時的に調節される。本明細書に記載の濃度範囲は、例示にすぎず 、本発明の組成物の範囲または使用を制限するものではない。活性成分は、一度 に投与され得るし、また、少量ずつ分けて様々な時間的間隔をおいて投与され得 活性化合物の好適な投与方法は、経口である。経口により投与する組成物は、一 般に不活性な希釈剤または食用のキャリアを含む。これらはゼラチンカプセルに 封入され得、また、タブレｙｈ状に圧縮され得る。経口治療投与のために、活性 組成物は賦形剤と混合され、タブレット、トローチ、マタハカプセルという形態 で使用され得る。薬学的に適合性を有する結合剤および／またはアジュバント物 質が、組成物の一部として含まれ得る。

タブレット、ピル、カプセル、およびトローチ等は、以下の成分または同様の性 質を有する化合物を任意に含み得る：微結晶セルロース、トラガカントゴム、ま たはゼラチンのようなバインダー；スターチまたはラクトースのような賦形剤、 アルギン酸、ブリモゲル（Ｐｒ　ｉｍｏｇｅｌ）、またはコーンスターチのよう な崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）の ような滑剤（ｌｕｂｒｆｃａｎｔ）　；　）　ｏイド状二酸化ケイ素のような滑 剤（ｇｌ　１ｄａｎｔ）　；スクロースまたはサッカリンのような甘味料；また は、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香味料のような香味料。

投与単位形態がカプセルである場合、カプセルは、上記の種類の物質に加えて、 脂肪油のような液体キャリアを含み得る。さらに、投与単位形態は、投与単位の 物理的形態を改変する他の様々な物質、たとえば、砂糖、シェラツク、または他 の腸剤のコーティングを含み得る。

β−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドまたはその塩は、エリキシル、懸 濁液、シロップ、オブラート、またはチューインガム等の成分として投与され得 る。シロップは、活性化合物に加えて、甘味料としてのスクロース、および特定 の防腐剤、染料および着色料、そして香味料を含み得る。

β−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドまたはその塩はまた、所望の作用 をそこなわない他の活性物質、または、所望の作用を補う物質、例えば抗生物質 、抗真菌剤、抗炎症剤、または他のヌクレオシド抗日Ｖ化合物を含む他の抗ウィ ルス剤などと混合され得る。

腸管外、皮肉、皮下、または局所的投与のための溶液または懸濁液は、以下の成 分を含み得る：注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、 グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒のような無菌希釈液； ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸また は重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレ ート剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩のような緩衝剤および塩化ナトリ ウムまたはデキストロースのような緊張性調整剤。腸管外投与される調製物は、 アンプル、使い捨て注射器、または、ガラスまたはプラスチック製の複数投与量 バイアル内に封入され得る。

静脈投与される場合、好適なキャリアは、生理的食塩水または食塩前リン酸緩衝 液（ＰＢＳ）である。

好適な実施態様において、活性化合物は、化合物の体内からの急速な排出を防ぐ キャリアと共に調製される。上記キャリアの例は、インブラントおよびマイクロ カプセル化送達システムを含む、制御型放出製剤のようなものである。生物分解 性を有し、かつ、生体適合性であるポリマー、たとえば、エチレン酢酸ビニル、 ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ 乳酸などが用いられ得る。このような製剤の調製方法は、当業者には明かである 。これらの物質はまた、Ａｌｚａ　ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ　Ｐ ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、　Ｉｎｃ、から市販されている。リポソーム懸 ゛濁液（感染細胞を標的とすべく、ウィルス性抗原に対するモノクローナル抗体 を備えたリポソームを含む）もまた、薬学的に受容可能なキャリアとして好適で ある。これらは、当業者に周知の方法、たとえば、米国特許第４．５２２．８１ １号（参考のため全体的に本明細書に援用される）に記載の方法により調製され 得る。たとえば、リポソーム製剤は、以下のように調製さし得る。適切な脂質ま たは脂質群（ステアロイル（ｓｔｅａｒｏｙｌ）ホスファチジルエタノールアミ ン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイル（ａｒａｃｈａｄｏｙｌ ）ホスファチジルコリン、およびコレステロールなど）を、無機溶媒中に溶解し 、その後、エバボレートして、容器の表面上に乾燥した脂質の薄膜を残す。活性 化合物、またはそのモノリン酸エステル、シリン酸エステル、および／またはト リリン酸エステル誘導体の水溶液を、その後、容器に導入する。容器をその後手 で揺り動かして、脂質物質を容器側壁から遊離させ、かつ、脂質凝集物を分散さ せて、それによりリポソーム懸濁液を調製する。

Ｖ、　β−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドのリン酸エステル誘導体の 調製 β−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドのモノ、ジ、およびトリリン酸エ ステル誘導体は、以下に記載するように調製され得る。

モノリン酸エステルは、Ｉｍａｉら、Ｊ、　Ｏｒ　、　Ｃｈｅｗ、、　３４（６ ）。

１５４７−１５５０　（１９６９年６月）の方法にしたがって調製され得る。

たとえば、約１００　ｍｇのβ−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドおよ び約２８０μｍの塩化ホスホリルを、約Ｏ″Ｃで約４時間、約８　ｍｌの乾燥酢 酸エチル中で攪拌することにより反応させる。

反応を、氷でクエンチする。水相を、活性炭カラムで精製し、エタノールと水と の１＝１混合液中の５％水酸化アンモニウムによす溶離させる。溶離液をエバボ レートすることにより、アンモニウム−（β−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌク レオシド）−５°−モノリン酸エステルが得られる。

シリン酸エステルは、Ｄａｖｉｓｓｏｎら、Ｊ、　Ｏｒ　、　Ｃｈｅｗ、、　５ ２（９）、　１７９４−１８０１　（１９ｇ？）の方法にしたがって調製され得 る。β−Ｄ−（−）−ジオ牛ソランーヌクレオシドは、対応するトシレートから 調製され得る。このトシレートは、たとえばヌクレオシドを室温で約２４時間ピ リジン中の塩化トシルと反応させ、生成物を常法どおり後処理（たとえば、洗浄 、乾燥、および結晶化）することにより調製され得る。

トリリン酸エステルは、Ｈｏａｒｄら、Ｊ、　Ａ＋ｍ、　Ｃｈｅ＋＋、　Ｓａｃ 、８７（８）、　１７８５−１７８８　（１９６５）の方法にしたがって調製さ れ得る。たとえば、β−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドを（当業者ニ 周知の方法にしたがってイミダゾリドを生成することにより）活性化させ、ＤＭ Ｐ中のどロリン酸トリブチルアンモニウムにより処理する。反応により、主にヌ クレオシドのトリリン酸エステルが生成され、同時に多少の未反応モノリン酸エ ステルおよトリリン酸エステルが得られる。ＤＥＡＥ力ラムノ陰イオン交換クロ マトグラフィーによる精製に続いて、トリリン酸エステルをたとえば四ナトリウ ム塩として単離する。

本発明を、好適な実施態様に基づいて説明してきた。本発明による鏡像異性的に 純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドの変形および変更は、当業 者にとって、上記の発明の詳細な説明から明らかである。これらの変形および変 更はすべて、添付の請求の範囲に含まれるものとする。

ヒ と Ｆｉｇｕｒｅ　１ Ｆｉｇｕｒｅ　２ Ｆｉｇｕｒｅ　２　（純さ） 国際調査報告 “輪惰−−１−＾−−帥−””　５７Ｔ／ＩＫＱｉ　／ｎＱ１クム畷炉瞥電−− １−−−１−Ｏ藺−＾ｉｓ噂嘩ｌｌｌｌＮ−，ＰＣｒ／Ｕ！ヨｉｔ１０９１２４ フロントページの続き （７２）発明者　チュン、ケイ、　チュウアメリカ合衆国　ジョーシア　３０６ ０５　アライブ　１５２４

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. １．１，６−アンヒドロマンノースからジオキンラン環を調製する工程を包含す る、鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキソラン−ヌクレオシドの調製方 法。
2. ２．前記１．６−アンヒドロマンノースをその（２，３）−イソプロプリデン誘 導体に変換する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記１，６−アンヒドロマンノースの２，３−イソプロピリデン誘導体を、 （−）−１，６−アンヒドロ−４−Ｏ−ベンゾイル−２，３−イソプロピリデン −β−Ｄ−マンノピラノースにベンゾイル化する工程をさらに包含する、請求項 ２に記載の方法。
4. ４．前記（−）−１，６−アンヒドロ−４−Ｏ−ベンゾイル−２，３−イソプロ ピリデン−β−Ｄ−マンノピラノースを、（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−４−（２− ベンゾキシ−１−ヒドロキシエチル）−２−（ヒドロキシメチル）−ジオキンラ ンに酸化する工程をさらに包含する、請求項３に記載の方法。
5. ５．前記ジオキソランの２−ヒドロキシ位を酸素保護基で保護する工程をさらに 包含する、請求項４に記載の方法。
6. ６．前記酸素保護基が、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチ ルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリチル、アルキル基、アシ ル基、ベンゾイル、ｐ−ＮＯ２ベンゾイル、トルイル、メチルスルホニル、およ びｐ−トルイルスルホニルからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
7. ７．（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−（保護−Ｏ−メチル）−４−（１，２−ジヒ ドロキシエチル）−ジオキンランを生成するために、前記ベンゾイル基を、前記 ２−ヒドロキシエチル位から除去する工程をさらに包含する、請求項５に記載の 方法。
8. ８．（２Ｒ，４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−（保護−オ キシメチル）ジオキンランからなる群から選択される化合物を形成するために、 前記（＋）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−（保護−オキシメチル）−４−カルボキシジ オキソランを酸化する工程をさらに包含する、請求項７に記載の方法。
9. ９．（２Ｒ，４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−（保護−オ キシメチル）−ジオキンランを、（２Ｒ，４Ｒ）−および（２Ｒ，４Ｓ）−４− アセトキシ−２−（保護−オキシメチル）−ジオキンランからなる群から選択さ れる生成物に変換する工程をさらに包含する、請求項８に記載の方法。
10. １０．前記ジオキンラン環を、プリンおよりピリミジン塩基からなる群から選択 されたヘテロ環式塩基と縮合する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法 。
11. １１．（２Ｒ，４Ｒ）−または（２Ｒ，４Ｓ）−４−アセトキシ−２−（保護− オキシメチル）−ジオキンランを、プリンおよびピリミジン塩基からなる群から 選択されるヘテロ環式塩基と縮合する工程をさらに包含する、請求項８に記載の 方法。
12. １２．前記ヘテロ環式塩基が、アデニン、ヒポキサンチン、Ｎ６−アルキルプリ ン、Ｎ６−ベンジルプリン、Ｎ６−ハロプリン、グアニン、チミン、シトシン、 ６−アザピリミジン、２−メルカプトピリミジン、およびウラシルからなる群か ら選択される、請求項１０に記載の方法。
13. １３．前記ヘテロ環式塩基が、アデニン、ヒポキサンチン、Ｎ６−アルキルプリ ン、Ｎ６−ベンジルプリン、Ｎ６−ハロプリン、グアニン、チミン、シトシン、 ６−アザピリミジン、２−メルカプトピリミジン、およびウラシルからなる群か ら選択される、請求項１１に記載の方法。
14. １４．前記ジオキソランヌクレオシドが、（−）−１−［（２β，４β）−２− （ヒドロキシメチル）−４−ジオキソルアニル］チミンである、請求項１に記載 の方法。
15. １５．鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（−）−ジオキソランヌクレオシド。
16. １６．（−）−１−［（２β，４β）−２−（ヒドロキシメチル）−４−ジオキ ソルアニル］チミンである、請求項１５に記載のヌクレオシド。
17. １７．ヒトのＨＩＶを阻害するのに有効な量の鏡像異性的に純粋なβ−Ｄ−（− ）−ジオキソランヌクレオシドを含む薬学組成物。
18. １８．前記ヌクレオシドが、（−）−１−［（２β，４β）−２−（ヒドロキシ メチル）−４−ジオキソルァニル］チミンである、請求項１７に記載の薬学組成 物。