JPH07505375A - トレミフェンおよびその代謝物の局所投与 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 トレミフエンおよびその代謝物の局所投与本発明は、活性成分としてトレミフエ ン（ｔ　ｏ　ｒ　ｅｍｉｆｅｎｅ）またはその代謝物のうちの１つであるＮ−デ メチルトレミフエン（４−クロロ−１，２−ジフェニル−［４−［２−（Ｎ−メ チルアミノ）エトキシ］フェニル］−１−ブテン）もしくは４−ヒドロキシトレ ミフエン（４−クロロ−１−（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１− ［４−［２−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）エトキシ］フェニル］−１−ブテン） 、またはそれらの薬学的に許容される非毒性の塩を含有する局所製剤に関する。

かかる局所製剤を用いること、たとえば皮膚にまたは乳癌の転移性病変などの皮 膚から少し離れたところに局在する癌の治療に用いることも本発明の範囲内には いる。さらに、これら局所製剤を癌細胞の細胞毒性薬物に対する多剤耐性の反転 （ｒｅｖｅｒｓａｌ）に用いることも、乳癌の補助的な（ａｄｊｕｖａｎｔ）治 療に用いることもまた、本発明の範囲内に入る。トレミフエンまたはその代謝物 の局所投与は黒色腫、リンパ腫、カポージ肉腫および菌状息肉腫（ｆｕｎｇｏｉ ｄｅｓｍｙｃｏｓｉｓ）の治療にとくに有効である。

タモキシフェン（ｔ　ａｍｏｘ　ｉ　ｆ　ｅｎ）およびトレミフエンは、エスト ロゲン受容体陽性乳癌の治療に用いられる、トリフェニルエチレン系抗エストロ ゲンである。

これらの薬物は乳癌治療用の内分泌剤（ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　ａｇｅｎｔ）とし て、最も頻繁に処方されている。

タモキシフェンおよびトレミフェンは、腫瘍エストロゲン受容体（ＥＲ”ｓ）の 競合的拮抗によってエストロゲン誘発増殖を抑制する。抗エストロゲン療法は、 初期（ｐ　ｒ　ｉｍａ　ｒｙ）手術後の女性の無疾病の状態および１全員の生存 を延長するのに有効である。抗エストロゲン療法は、乳房切除後に補助的な治療 を受けている初期乳癌患者において、再発を遅らせ、生存を延長する。エストロ ゲン受容体（Ｅ　Ｒ）陽性の転移性乳癌の患者の約３分の２が、タモキシフェン によって一時的に軽減されるであろう。タモキシフェンは比較的良性の薬物と考 えられているが、最近の証拠では、補助的な治療としてタモキシフェンを投与し た女性は、子宮内膜の新生物（ｎｅｏｐｌａｓｍａｓ）を発生させる危険性が増 加するかもしれないということが示唆されている（フォルナノダーテイ−（Ｆｏ ｒｎａｎｄｅｒ　Ｔ）ら、ランセット（Ｌａｎｃｅ　ｔ）　、１９８９．２１　 ：１１７−１２０）。

組織病理学では、これらの腫瘍を、乳房腫瘍の転移とは無関係の湿潤性（ｔｎｆ ｉｌｔｒａｔｉｎｇ）子宮内膜腫瘍として区別している。この危険性の増加に寄 因する要因はあまりわかっていない。しかしながら、種々の調査によって子宮内 膜癌とエストロゲン活性を有する物質とが関連づけられている（スミス　ディー シー（Ｓｍｉｔｈ　Ｄｃ）ら、ニュー　イングランド　ジャーナルオン　メディ スン（Ｎ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊ　Ｍｅｄ）、１９７５；２９３：１１６４−６７ ）。

多剤耐性（ＭＤＲ）の進行は、癌が化学療法剤、とくにアントラサイクリン（ａ ｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ）およびビンカ　アルカロイド（ｖｉｎｃａ　ａｌ ｋａｌｏｉｄｓ）に効きにくくなる主な機構の１つである。古典的なＭＤＲは原 形質膜のＰ−糖タンパク（ｐ　１７０）をコードするｍａｒ−１遺伝子の過発現 （ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）と関係がある。ＭＤＲ−１遺伝子の発現は、 アクティブディペンデント放出機構（ａｃｔｉｖｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｅｆ ｆｌｕｘ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）による細胞の薬物蓄積の減少と関係があると信 じられている。

ベラパミル（ｖｅｒａｐａｍｉｌ）、トリフルオペリジン（ｔｒｉｆｌｕｏｐｅ ｒｉｚｉｎｅｓ）およびシクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｓ）を含めた 多くの物質は、イン　ビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で多剤耐性を反転することが 示されているが、はとんどの物質は、患者に実質的に毒性なく反転するのに充分 高いイン　ビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）濃度にならない。このことは、重大な心臓毒 性と関係のあるベラパミルについてはとりわけあてはまる（ｔｒｕｅ）。

非ステロイド性トリフェニルエチレン系抗エストロゲンは、その抗エストロゲン 作用とは明らかに無関係の化学的感受活性（ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ 　ａ（ｉｉｖｉｔｙ）をイン　ビトロで証明した。トレミフエンおよびその代謝 物であるＮ−デメチルトレミフエンおよび４−ヒドロキシトレミフエンは、大し た毒性なくヒトでえられる濃度では、ＭＤＲ陽性細胞で化学的感受活性を有する 、新規なトリフェニルエチレンの例である。

ト１ノミフェンは、イン　ビトロで耐性を反転する濃度（５μＭ）が実質的な毒 性なく経口療法後にイン　ビボでえられつるという点で特異であると思われる（ ウィーベ　ヴイジエイ（Ｗｉｅｂｅ　ＶＪ）　ら、キャンサーケモセラピー　ア ンド　ファーマコロジー（Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ　Ｐｈａｒｍａｃ ｏｌ）、１９９０．２５　：　２４７−２５１）。大量に経口投与したのちのト レミフエンおよびＮ−デメチルートレミフエンの血漿濃度はおよそ１０μＭであ る。しかしながら、血漿濃度は腫瘍水準（ｌｅｖｅｌ）では有効な抗ＭＤＲ活性 を表わさないかもしれない。高投与量のトレミフェン（４００ｍｇ／日）の全身 毒性は、通常日まい、吐き気およびのぼせに制限されるが、ほかの細胞毒性物質 （Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｇｅｎｔｓ）との組み合わせ療法によって全身毒性の 概要が変わるかもしれない。

したがって、腫瘍のトレミフエンまたはその代謝物の濃度を増加させる一方で、 全身的にさらされること（ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を最小にする方法によって、これ らの薬物による抗ＭＤＲ療法の効能が改善されうる。

そこで、トレミフエンおよびその代謝物の局所投与は、全身毒性の危険性なしに きわめて高い局所的腫瘍濃度をえるために用いられうるということが見出された 。トレミフエンおよびその代謝物のかかる局所製剤は、黒色腫、リンパ腫、カボ ージ肉腫、菌状息肉腫および局在する乳癌の転移性病変などの、皮膚にまたは皮 膚から少し離れたところに局在する癌の治療に有効である。さらに、局所投与は 、高リスクの患者において乳癌の再発を防ぎつつ、子宮内膜の腫瘍および全身毒 性の危険性を最小にする有効な方法となりうる。

トレミフエンおよびその代謝物の経皮投与は、主に２つの異なる方法で行なわれ うる。（ｉ）治療活性化合物もしくはその非毒性の薬学的に許容される塩と、適 当な薬学的担体および任意に吸収促進剤を混合して、軟膏、乳剤、ローション剤 、水剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、クリーム剤、ゲル剤などを形成して、好ましくは ある量の該製剤を皮膚の一定面積に塗布する方法、または（ｉｉ）治療活性物質 を既知の技術によってパッチまたは経皮送達システムに包含させる方法である。

好ましい賦形剤の例としては、ＤＭＳＯ，植物性および動物性油、不揮発性脂肪 族アルコール、酸、エステル（たとえばセトステアリルアルコールおよびセチル アルコール）揮発性アルコール化合物（たとえばエタノールまたはイソプロパツ ール）、グリコールおよびグリコールエーテル（ポリエチレングリコール、ポリ プロピレングリコール、グリセロールおよびグリセロールエーテル）、セルロー ス誘導体（たとえばメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロース）など の、局所製剤の製造において薬学の分野でよく知られたものが包含される。

また、その技術において知られている、乳化剤（たとえばソルビタンステアリン 酸塩またはポリソルベート６０）、保存剤および吸収促進剤が含まれていてもよ い。

トレミフェンおよびその代謝物の水性媒体への溶解性は、薬物物質とシクロデキ ストリンとを複合させることにより著しく改良されうる。シクロデキストリン（ α−１β−およびγ−シクロデキストリンならびにそれらの誘導体を含む）はす べてグルコースの環状オリゴマーである。シクロデキストリンは、薬物分子がシ クロデキストリン分子の脂質親和体の（ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ−ｓｅｅｋｉｎｇ） 空洞に包接された、薬物との包接複合体を形成しうる。したがって、シクロデキ ストリンは親油性の薬物を水性媒体に効果的に溶解させるのである。薬学の分野 にシクロデキストリンを用いることは、たとえばドラッグ　デベロプメント　ア ンド　インダストリアル７ｙ−ｖシー（Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎ ｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｙ）、１７　（：１１）　、１５０ ３−１５４９．１９９１に記載されているう 予防／補助的治療に対するトレミフエンまたはその代謝物の投与量の範囲は、薬 物のバイオアベイラビリティによってヒトにおいて約１〜２ｏｏｍｇ／日／人で ある。

好ましい投与量は、補助的な経口投与量で６０ｍｇ／日、または週１回の１回投 与量で３００〜５００ｍｇ／パッチに近くなるだろう。高投与量の短期治療（ｓ ｈｏｒｔｃｏｕｒｓｅ）のトレミフエン（またはトレミフエン代謝物）としては 、４００〜１０００ｍｇ／日、好ましくは５００〜６００ｍｇ／日の投与量が示 唆されている。

実験 本発明を実証するためにっぎの広範囲な研究を行なった。

実験１は、マウスにおける短期治療の高投与量での局所投与および（ｖｓ、）腹 腔内（ＩＰ）投与後の、トレミフェンおよびその代謝物の組織分布、さらに１回 投与量での局所投与およびＩＰ投与後の、トレミフエンおよびその代謝物の抗エ ストロゲン的投与量の組織分布について記載する。

実験２は、マウスにおける乳癌腫瘍の増殖妨害における、局所投与後のトレミフ エンおよびその代謝物の効能について記載する。

実験３はマウスのＭＤＲ腫瘍のドキソルビシン細胞毒性の増加における、高投与 量で局所投与したトレミフェンの効能について記載する。

実験４は、ヒヒのリンパ腫の増殖妨害における、局所投与後のトレミフエンおよ びその代謝物の効能について記載する。

実験５は、モノデルフィス　トメステイカ（Ｊ／　ｏ　ｎ　。

ｄｅ／）ｙ力ｉｓ　ｄｏｍｅｓｌｉｃｓ）における局所投与後のトレミフェンの 組織分布、および黒色腫細胞系（ｃ６１１　１１ｎｅｓ）におけるトレミフエン の細胞増殖抑制効果について記載する。

図面について、 図１は、局所的におよび腹腔内でトレミフエンで治療したマウスから切除した腫 瘍について行なったクローニング研究の結果を示し、 図２はトレミフエンを用いておよび用いずに局所的に治療したマウスから切除し た腫瘍について行なったクローニング研究の結果を示し、 図３ａは局所的にトレミフェンで治療したヒヒの右鼠経部リンパ腫で観察された 反応を示し、および図３ｂは治療していないヒヒの左のリンパ腫で観察された反 応を示す。

１６匹の雌無胸腺ヌードマウスに、２０ゲージの針を用いて左肩甲骨表面（ａ　 ｒ　ｅ　ａ）の５Ｘ１０’ＭＤＡＡ−１細胞を皮下に注射した。治療前３週間の あいだ腫瘍を増殖させた。

ＩＰ投与用にトレミフエンクエン酸塩をラッカセイ油に懸濁させた。３匹のマウ スそれぞれに、１８ゲージの針を用いて５０μＩを腹腔内に注入し、１ｍｇ／日 を５日間送達した。局所的なトレミフエンはＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ／メチルセルロ ース／水（１０：２５ニア：５８）の混合物で、２．５ｍｇ／動物／日の投与量 で５日間投与した。トレミフエンクエン酸塩をまずＤＭＳＯに溶解させ、つぎに ＥｔＯＨ，メチルセルロースおよび水の混合物に希釈した。マウスはすべて治療 開始後５日目に最終投与してから２時間後に屠殺した。腋窩の血管を破壊したの ちにキャピラリーピペットで血液試料を集め、ヘパリン処理した遠沈管にいれた 。脳、肝臓および子宮を外科的に除去し、別々の管に入れた。

１回投与量のトレミフエンを前に記載したとおりに腹腔内に（ＩＰ）、または希 釈剤としてＤＭＳＯ／ＥｔＯＨ／メチルセルロース／水を用いて局所的に、投与 した。

ＩＰでまたは局所的に投与したトレミフエンの量は５００μｇだった。組織サン プルを前記のように集めた。

血液サンプルはすべｒ１０００ｇで遠心分離した。血漿を集め、体積を測り、清 潔な抽出管に入れた。残っている組織サンプルはすべて秤量し、抽出管に入れ、 内部標準、ナフォキシジン（ｎａｆｏｘｉｄｉｎｅ）でスパイクした（ｓｐｉｋ ｅｄ）。６ｍｌの抽出液を加える前に組織を完全にホモゲナイズした。サンプル を集め、以下に記載のように乾燥させた。ＨＰＬＣカラムに注入する前に、それ ぞれのサンプルは２００μｍのメタノールで復元した。サンプルはすべてＵＶ活 性化のための石英製キュベツトに入れた。脳のサンプルは使い捨ての注射器フィ ルターでの濾過が必要であった。トレミフエンの濃度は標準曲線にもとづいて全 サンプルについて計算した。

トレミフェンおよびその代謝物は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ） で定量した。

結果 表１は、局所治療した腫瘍では、トレミフェン濃度が１５０倍大きかったが、腹 腔内投与の２．５倍の投与量でも血清濃度はより低かったということを示してい る。

このことは明らかに薬理学的に有利なことを示した。面白いことには、トレミフ ェンを局所投与したマウスは、トレミフエンをＩＰ投与したマウスと比べて子宮 の濃度では１０分の１であった。肝臓においても、局所治療したマウスが、より 少ない全身分布を示唆する、より低いトレミフエン濃度を示した。脳組織のトレ ミフエン濃度は同等であった。

表２は、局所治療した腫瘍では、Ｎ−デメチルトレミフエン濃度は大きかったが 、血清濃度はより低かったということを示している。このことは、ＭＤＡ　Ａ− １腫瘍細胞がトレミフェンを代謝するかもしれないということを示している。腹 腔内治療した腫瘍と局所治療した腫瘍とのあいだには、肝臓での濃度において本 質的に差はなかった。局所治療したマウスの脳および子宮でも、ＩＰ治療した群 よりも低いＮ−デメチルトレミフエン濃度を示した。

表３は、局所治療した腫瘍はＩＰ治療した腫瘍よりもトランス　４−ヒドロキシ トレミフエン濃度が太きかったということを示している。この代謝物は最も強い 抗エストロゲン代謝物である。局所治療した腫瘍の血清レベル（ｌｅｖｅｌ）は 低いが、一方脳の濃度は同じであった。

抗エストロゲン薬物の有効な投与量でのＭＣＦ−ＴＥＲ十細胞におけるトレミフ エンのインビトロの吸収についても調べ、これらの研究を前記のイン　ビボの分 布研究の結果と比較した。６．６μＭのトレミフエンで２０時間インキュベート したのち、細胞を洗浄し、数えて秤量し、細胞のトレミフエン濃度をＨＰＬＣで 測定した。

トレミフエンの濃度（μｇ／ｍｇ）を表４に示す。

局所的および腹腔内の投与経路のあとの腫瘍でえられるトレミフエン濃度と比較 すると、トレミフエンの局所投与後に最大濃度が見られる。局所投与では、イン 　ビトロでさらされたのちのトレミフエン濃度の７倍より大きくなり、腹腔内注 射後の濃度の１５０倍よりも大きくなった。これらの結果から、トレミフェン濃 度は皮下腫瘍に局所投与したのちに容易にえられうるが、腹腔内投与ではイン　 ビトロの吸収データの１／２０であり、局所療法のさらなる連動性（ｋｉｎｅｔ ｉｃ）の利点を示唆しているということがわかる。

表５は、ＩＰで５００μｇ１および局所的に５００μｇの１回投与量を投与した のちのトレミフエン濃度を示している。ＤＭＳＯおよびメチルセルロースを希釈 剤として用いた。両方の局所投与方法ではＩＰ投与に比べて腫瘍レベルは似てい たが、全身分布はあまり類似していなかった。このことは血清でも子宮でも注目 される傾向である。

ディスカッジョン： 実験において、トレミフエンはすぐに経皮吸収されて、きわめて高い腫瘍濃度に なるが、一方全身的にさらされるのを制限するということを証明する。面白いこ とに、より多くのトレミフエンが腫瘍に局所送達されうるが、血清濃度はずっと 低いのでトレミフエンの局所送達に治療上かなり有益であることを示している。

さらには、トレミフエンの、活性のあるＮ−デメチル−代謝物も４−ヒドロキシ −代謝物も、局所送達後の腫瘍組織ではＩＰ送達よりも大きい濃度で存在してお り、これらの活性代謝物への代謝は肝臓だけでなく組織レベルでもおこりうると いうことを示唆している。

子宮および肝臓では、局所送達後のトレミフェン濃度はＩＰ送達よりもずっと低 く、局所療法での全身的にさらされることの減少のさらなる証拠を提供している 。子宮がさらされることが減少することは、抗エストロゲンに対する二次的な腫 瘍の潜在的な危険性によって臨床的にかなり有益となりうる。延長されたタモキ シフェンによる補助的な治療ののちに、子宮内膜の異形成、出血、ポリープ形成 および腫瘍が報告された（ヌオヴオ　エムニー（Ｎｕｏｖｏ　ＭＡ）ら、インタ ーナショナル　ジャーナル　オン　ガイネコロジカル　パソロジ−（Ｉｎｔ　Ｊ 　Ｇｙｎ　Ｐａｔｈｏｌ）、１９８９；８：１２５−１３１）。タモキシフェン 療法後に子宮組織に存在するタモキシフェン代謝物（ビスフェノールおよび代謝 物Ｅ）は二次的な子宮の新生物の発生と関連しているかもしれない（ヌオヴオ　 エムニーら、インターナショナル　ジャーナノ１　オン　ガイネコロジカル　パ ソロジー、１９８９；２１：１１７−１２０）。トレミフエンの局所投与はこれ らの副作用に対する可能性を回避しうるのこの研究では、１２匹のマウスにＭＣ Ｆ−７細胞を移植し、小さな腫瘍がすべてのマウスで検出される（＜１ｍｍ３） まで増殖させた。そのときに、マウスを４匹ずつの３群に分けた。第１群は希釈 剤だけ（ＤＭＳｏ　２０μｌ）を局所投与し、第２群は局所投与によって５００ μｇの４−０Ｈ−）レミフエンを投与し、そして第３群は局所投与によって５０ ０μｇ／日のトレミフエンを投与した。すべてのマウスには１日あたり同じ量の 希釈剤（２０μｌ）を投与した。１５日間治療してから研究を評価した。

結果： ４匹の対照マウスはすべて腫瘍（＞６Ｘ８ｍｍｓ）を発生した。ほかの群では、 ４−０Ｈ−）シミフェン群の１匹のマウスだけが小さな腫瘍（＜２Ｘ１ｍｍｓ） を発生した。この実験から、４−０Ｈ−トレミフエンまたはトレミフエンの局所 投与によって腫瘍の増殖が妨げられたということが明らかに示される。

ディスカッジョン： この実験から、局所投与した補助的な投与量のトレミフェンまたはその代謝物は イン　ビボ　マウスモデルで乳癌腫瘍の増殖を妨げることができるということが 明白に証明される。局所投与の速動性の利点（実験１）と結びつけた結果から、 局所的なトレミフエンは全身に分布することなく所望の抗エストロゲン作用をえ ることかで′きるということが示唆される。

局所投与のトレミフェンクエン酸塩を１ｍｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ ）に溶解し、トレミフエン２゜５ｍｇ／６０μｌを送達する溶液をえた。薬物を 皮膚表面に直接および腫瘍のまわりに滴下して塗布した。それぞれの水滴は完全 に蒸発させた。この治療を合計５日間同じ時刻に１日１回行なった。すべてのマ ウスを治療開始後５日目に、最終投与してから２時間後に屠殺した。

腫瘍を無菌的に集め、クローン原性分析（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ　ａｓｓａｙ） のために処理した。

トレミフエン投与後、腫瘍を切除し、それぞれの腫瘍の一部をＨＰＬＣ分析用に 抽出した。残りの部分は、ドキソルビシン１μｇ’／ｍｌに１時間さらしたのち クローン化した。抑制率（％）を１４日後に測定し、それぞれ個々の腫瘍におけ るトレミフエン濃度に対してプロット図１は、局所的におよび腹腔内でトレミフ エンで治療したマウスから切除した腫瘍について行なったクローニング研究の結 果を示している。グラフに示されているように、１４日目の抑制率（％）と細胞 のトレミフエン濃度とのあいだに良好な相関性（ｒ＝０．７７）があった。

さらに、局所治療した３つの腫瘍ではすべて抑制率が３０％より大きかったのに 対し、腹腔内治療した３つの腫瘍ではすべて抑制率が３０％より小さかった。

図２は、トレミフエンを用いておよび用いずに局所的に治療したマウスから切除 した腫瘍について行なったクローニング研究の結果を示している。いちばんうえ の曲線は、トレミフエンで治療しなかったマウスにおいてドキソルビシンに対し て耐性のある腫瘍を示す。下の２つの曲線はトレミフエンで治療した腫瘍を示す 。明らかに、トトレミフエンはドキソルビシンに対してこれらＭＤＲＭＤＡ　Ａ −１腫瘍を敏感にするように見える。

ディスカッジョン： これらの結果から、イン　ビボで局所的にトレミフエンを用いたとき見られる、 えられる腫瘍のトレミフエン濃度が高くなればなるほど、その相乗効果はドキソ ルビシンに対する獲得した薬物耐性を反転するときに大きくなるということが示 唆される。

実験４ 方法 自然発生の非ホジキンリンパ腫を患った１５才の雌の老ヒヒの局所的トレミフエ ン療法について評価した。直径１〜２ｃｍの肥大したリンパ節は両方の鼠径部で 明らかであった。トレミフエンをジメチルスルホキシド、エタノールおよびメチ ルセルロースの混合物に溶解させた。

８日間にわたって、合計１．４ｇのトレミフエンを右腫瘍部位にまず塗布した。

局所治療開始したのち１５日目から、１５．１７．１９および２３日目に１ｇの トレミフエンを用いた、合計４ｇの投与量の経口療法を開始した。治療開始後２ ５日目に経口療法を継続しつつ、布置径部の局所治療を再開した。その期間、合 計１．４ｇのトレミフエンを経皮投与し、１１ｇを経口投与した。治療に対する 反応は、２つの直交する寸法について腫瘍の大きさを測ることによって決定した 。

結果 治療に対する反応は図３８および図３ｂに示す。明らかな反応が治療した窮鼠径 部リンパ腫で観察されたが、治療していない左のリンパ腫は局所治療期間中に大 きくなっていた。経ロ的トレミフエン療法のあいだ、左置径部リンパ腫は安定し たが、窮鼠径部リンパ腫は再増殖しはじめた。その結果、局所的トレミフエン療 法をこの腫瘍について再開した。局所治療に対する初期の反応と同様に、リンパ 腫は腫瘍面積が４７６ｍｍ２から２４ｍｍ２に退化した。

雌ヒヒの局部的なＴ細胞リンパ腫の治療は、局所的なトレミフェン’６＜イン　 ビボでの抗腫瘍反応（ｒｅｓｐ。

ｎ５ｅ）をひきおこしうるということを示した。

実験５ 方法 トレミフェンクエン酸塩の形態のトレミフエンをまずＤＭＳＯに溶解させ、その 後最終濃度がｌ　ｍ　ｇ　／　ｍ　１となるように３％のメチルセルロースを含 むエタノールに加えた。

６匹の雄モノデルフイス　トメステイカに５日間トレミフェンを局所投与した。

投与量は３匹において０．５ｍｇ／日および３匹において１ｍｇ／日であった。

背中下部の表面積ＩＣｍ２の毛をそった皮膚にトレミフエンを局所的に塗布した 。５日目に動物を層殺し、トレミフエンおよびその代謝物の濃度を、血漿、皮膚 、精巣、肝臓、眼、脳および心臓において測定した。

３つのヒト黒色腫細胞系（ＴＤ３６、ＴＤ３０ＡおよびＳＫ−ＭＥＬ−３１）お よびモノデルフィス　ドメス的細胞系（ＴＤｌ、４、ＴＤ７．２およびＴＤ８） をイン　ビトロで増殖させ、トレミフエンの細胞増殖抑制のＩＣ−５０の値を算 定した。転移性黒色腫細胞系ＳＫ−ＭＥＬ−３１はアメリカン　タイプ　カルチ ャー　コレクション（ロックパイル（Ｒｏｃｋｖ　ｉ　１１　ｅ）　、ＭＤ）か ら入手した。さらなる２つのヒト細胞系は外科的に切除した直径の大きい、表面 に拡がった黒色腫の一部分からえた。ＴＤｌ、４は良性の黒色腫から生じたのに 対し、ＴＤ７．２およびＴＤ８はメラニン形成細胞の増殖からえた。ＩＣ−５０ の値は細胞生存率（％）、トレミフエンクエン酸塩の濃度に対する半対数的（ｓ ｅｍｉ−１゜ｇ）プロットから決定した。

結果 表６に、５日間０．５および１ｍｇ／日で局所投与したのちの６匹の動物におけ るトレミフエンの血漿および組織の平均濃度を示す。皮膚のトレミフエン濃度は ほかの臓器と比べて５００倍をこえていた。

トレミフエンのヒトおよび実験的細胞系の５０％の増殖を抑制する濃度（ＩＣ− ５０）を表７に示す。トレミフエンの増殖抑制効果はメラニン形成細胞由来の６ つの細胞系すべてにおいてきわめてよく似ていた。ＩＣ−５０は５．８〜９．６ μＭの範囲であった。

ディスカッジョン この実験では、トレミフエンがイン　ビトロでヒトおよび実験的黒色層細胞系に 対して明らかな細胞増殖抑制効果を有していることを証明した。細胞増殖抑制効 果はすべての細胞系において観察されたが、この効果をえるのに必要な濃度はか なり高かった。しかしながら、トレミフェンを局所投与すると、これらイン　ビ トロの濃度をはるかにこえた皮膚濃度となる。明らかな細胞増殖抑制効果がイン 　ビボにおいて皮膚の黒色腫についてえられうるということを示唆している。

［以下余白］ ３Ｌｕ　トレミフェンでのＩＰ治療および局所治療の５日後のトレミフエン濃度 組織　ＩＰ　局所　局所／ＩＰ 表」ＩＰ治療および局所治療後のＮ−デメチルトレミフエン濃度 組織　ＩＰ　局所　局所／ＩＰ 皮膚　１２９６．４０　＋　１００３．９３　１２３７．３５　＋　７６８．９ ０肝臓　１．０７　＋　０．６９　３．６０　＋　２．２３精巣　１．５２　＋ 　２．１３　０．５２　＋　０．０５脳　０．８２±０．９９　０．８２±ｏ、 ６２眼　０　０．１７±０．０５ Ｖ　トレミフェンのヒトのおよび実験的黒色腫細胞系のＩＣ−５０の値 細胞系　ＩＣ−５０（μＭ） ヒト　ＴＤ３６　５．８ ＴＤ３０Ａ　７．７ ＳＤ　−ＭＥＬ　−３１８，１ 実験　ＴＤ８　７．７ ＴＤ１．４　９．３ ＴＤ７．２　９．６ ＋　１０　ｔｏｏ　１０００　１００００細胞のトレミフェン　（μｇ／ｇｍ） ＦＩＧ、１ ＦＩＧ、２ 時間　（ロ） ＦＩＧ、３ｂ 補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）　」平成６年９月３０日

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、活性成分として トレミフェンまたはその代謝物のうちの１つであるＮ−デメチルトレミフェン（ ４−クロロ−１，２−ジフェニル−［４−［２−（Ｎ−メチルアミノ）エトキシ ］フェニル］−１−ブテン）もしくは４−ヒドロキシトレミフェン（４−クロロ −１−（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−［４−［２−（Ｎ，Ｎ −ジメチルアミノ）エトキシ］フェニル］−１−ブテン）、またはそれらの薬学 的に許容される非毒性の塩からなる局所製剤。
2. ２．軟膏、乳剤、ローション剤、水剤、ゲル剤またはクリーム剤の形態である請 求の範囲第１項記載の製剤。
3. ３．製剤が経皮送達貼布システムである請求の範囲第１項記載の製剤。
4. ４．活性成分がシクロデキストリンまたはシクロデキストリン誘導体の複合体の 形態である請求の範囲第２項または第３項記載の製剤。
5. ５．活性成分がトレミフェンまたはその薬学的に許容される塩である請求の範囲 第１項〜第４項のいずれかに記載の製剤。
6. ６．乳癌の治療に用いるための請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の局 所製剤。
7. ７．乳癌の補助的な治療に用いるための請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに 記載の局所製剤。
8. ８．癌細胞の細胞毒性薬物に対する多剤耐性の反転に用いるための請求の範囲第 １項〜第５項のいずれかに記載の局所製剤。
9. ９．黒色腫、リンパ腫、カポージ肉腫または菌状息肉腫の治療に用いるための請 求の範囲第１項〜第５項または第８項のいずれかに記載の局所製剤。
10. １０．１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、活性成分とし てトレミフェンまたはその代謝物のうちの１つであるＮ−デメチルトレミフエン （４−クロロ−１，２−ジフェニル−［４−［２−（Ｎ−メチルアミノ）エトキ シ］フェニル］−１−ブテン）もしくは４−ヒドロキシトレミフェン（４−クロ ロ−１−（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−［４−［２−一（Ｎ ，Ｎ−ジメチルアミノ）エトキシ〕フェニル］−１−ブテン）、またはそれらの 薬学的に許容される非毒性の塩からなる局所製剤の有効な量を、その治療が必要 な患者に局所投与することからなる乳癌の治療方法。
11. １１．１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、トレミフェン またはその代謝物のうちの１つであるＮ−デメチルトレミフェン（４−クロロ− １，２−ジフェニル−［４−［２−（Ｎ−メチルアミノ）エトキシ］フェニル］ −１−ブテン）もしくは４−ヒドロキシトレミフェン（４−クロロ−１−（４− ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−［４−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルア ミノ）エトキシ］フェニル］−１−ブテン）、またはそれらの薬学的に許容され る非毒性の塩を多剤耐性反転に有効な量をその治療が必要な患者に局所投与する ことからなる、細胞毒性薬物に対する癌細胞の多剤耐性を反転するための方法。
12. １２．１つまたはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤とともに、活性成分とし てトレミフェンまたはその代謝物のうちの１つであるＮ−デメチルトレミフェン （４−クロロ−１，２−ジフェニル−［４−［２−（Ｎ−メチルアミノ）エトキ シ］フェニル］−１−ブテン）もしくは４−ヒドロキシトレミフェン（４−クロ ロ−１−（４−ヒドロキシフェニル）−２−フェニル−１−［４−［２−（Ｎ， Ｎ−ジメチルアミノ）エトキシ］フェニル］−１−ブテン）、またはそれらの薬 学的に許容される非毒性の塩からなる局所製剤の有効な量をその治療が必要な患 者に局所投与することからなる、黒色腫、リンパ腫、カポージ肉腫または歯状息 肉腫の治療方法。