JPH07505614A - ピロフェオホルビド類および光力学療法におけるそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本出願は本出願人が先に出願した米国特許出願第０７１５９７，７８６号（１９ ９０年１０月１５日出願）の部分継続出願であり、この出願は米国特許出願第０ ７／２２１．８０４号（１９８８年７月２０日出願、現在は米国特許第５．００ ２．９６２号、１９９１年３月２６日交付）の部分継続出願であり、これら両者 を本明細書に参考として引用し、それに対して３５　ＵＳＣ９１２０の下での優 先権を主張する。

発明の分野 本発明は、一般に感光性の療法用化合物および光力学療法（ＰＤＴ）に関するも のである。より詳細には、本発明はビロフエオホルヒド（ｐｙｒｏｐｈｅｏｐｈ ｏｒｂｉｄｅ）類、それらを含有する配合物、およびそれらを癌の治療に用いる ことに関するものである。

発明の背景 米国特許第５．００２．９６２号明Ｉ［ＩＩ書にＪ己載されるように、ポルフィ リン関連化合物は正常組織と比較して腫瘍組織の方に高い濃度で蓄槽し、これら の化合物を迦切な波長の光で照射すると活性化された形態となり、これは減衰す る際に細胞毒性を生じる。ポルフィリンまたは関連化合物を励起させると、実際 に毒性物質である一重項酸素が形成されると考えられる。しかし段毎された化合 物は見掛は上はこの過程で分解しない。

″ヘマトポルフィリン誘導体’　（ｔｌＰＤ）のｆ（用に関する文献に、ヘマト ポルすると訂集が起こり、混合物中の有効物質をサイズ分離した凝集物として粗 製形態で調製しうることが示されている（たとえば米国特許第４．６４９゛、１ ５１号明細書、本明細書中に参考として引用する）。この調製物は、商標フォト フリン（Ｐｈｏ　ｔｏ　ｒ　ｒ　ｉｎ）で市販されている。

フオトフリン組成物として市販されている調製物は混合物である。この混合物は エーテル結合で結合したポルフィリンを含有しくドウエルティー（Ｄｏｕｇｈｅ ｒｔｙ。

Ｔ、　Ｊ、　）ら、＾ｄｖ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　Ｂｉｏ（１９８３）１６０：３− １３）　、より最近ではカフセル（Ｋａｓｓｅｌ。

Ｄ）ら、　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ（１９８７）４６：４６３ −５６８がこの混合物にはエステル結合したポルフィリンも含有されることを示 した。スカウリズ（Ｓｃｏｕｒｉｄｃｓ、　Ｐ、λ、）ら。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５（１９８７）４７：３４３９−３４４５は、ヘマトポルフ ィリンジメチルエステルから出発してエーテル結ａポルフィリンのオリゴマー混 合物を合成した。この混合物はＰＤＴにおいて有効であったが、フｔトフリン調 製物と同様に複雑な混合物であった。エステル結合により結合したヘマトポルフ ィリン２量体もパンディ（ＰａｎｄｅＬＰ、に、）ら、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ 　（印刷中）により調製され、調製された２量体はフォトフリン組成物中に存在 せず、かつインビトロアッセイにおいて不活性であることが示された。

このように当技術分野では、ＨＰＤを凝集させ、そして比較的高分子量の成分に 分離させた場合に、調製された混合物の幾つかの要素が光力学療法において有効 であることが知られている。先に本発明者らは、米国特許第５．　００２．　９ ６２号明細書に開示されるようにＰＤＴに有用な弔−化合物組成物を調製した。

米国特許第５．００２．９６２号明細書に開示される精製および確認された組成 物は、米国特許第４．９２０．１４３および４．８８３．７９０号明細書に開示 される化合物および方法と同様に光力学療法に有用である。

発明の概寒 ビロフエオホルビド化合物、それらの化合物を含有する薬剤組成物を先力学療法 に用いることができる。ビロフエオホルビド類は下記一般構造式■またはＩＩに 包含される。

式中のＲ１はＣＨ，ＯＲ２であり、ここでＲ，１Ｊ１−２０個の炭素を含む第一 または第二アルキルであり、Ｒ３は−ＣＯ２Ｒｓてあり、ここでＲ４はＨｌまた は１−２０個の炭素を含むアルキルである。本発明の他の化合物は下記の式ＩＩ に包含される 式中のＲ１は−ＯＲａであり、ここてＲ６は１−２０個の炭素を含む第一または 第二アルキルであり、Ｒ７は一〇〇□Ｒ８であり、ここでＲ８はトＩ、または１ −１−２Ｏの炭素を含むアルキルである。特に好ましい化合物は、Ｒ６が−０− ヘキシルであり、かつＲ７が−ＣＯ２）（または−ＣＯ２ＣＨ３のものである。

本発明のビロフエオホルビド類を賦形剤と混和して、光力学療法に用いるのに適 した薬剤学的に許容しうる配合物が提供される。

本発明は、式■および［［の化合物の合成法をも包含する。

本発明は、本発明のビロフエオホルビド化合物を有効成分として含有する注射用 薬剤組成物、ならびに本発明の化合物および組成物を用いて光力学療法を実施す る方法をも包含する。

本発明は、特異的レセプター（たとえば細胞性レセプター）に結合しうるリガン トもしくは特定の抗原に結合しうる抗体に結合した本発明のビロフエオホルビト 化合物、およびこれらの結合体を含有する組成物、ならびにこれらの結合体およ びそれらの組成物を用いて光力学療法を実施する方法をも包含する。

本発明の主目的は、ビロフエオホルビド化合物、それらの化合物を含有する薬剤 組成物、およびそれらの化合物を光力学療法に用いて行われる治療法を提供する ことである。

他の目的は、異常に速やかに復製する腫瘍細胞を有するヒトの治療法、アテロー ム性動脈硬化症の治療法、または細菌もしくはウィルス感染の不活化法を提供す ることである。

本発明の特色は、本発明のビロフエオホルビド化合物が光力学療法に用いられる 通常の化合物と比較してスペクトルのさらに深く赤色部に及ぶ光をも吸収するこ とである。

本発明の利点は、本発明のピロフエオホルビド化合物および薬剤組成物は組織透 過が最適であり、光力学療法に用いられる他の化合物と比べて皮膚に保有される 期間が比較的短いことである。

本発明の他の利点は、本発明のビロフェオホルビド化合物が光力学療法に用いら れる通常の化合物の毒性と比較して、腫瘍細胞および罹患組織に対してより大き な毒性をもつことである。

本発明の他の利点は、ビロフエオホルビドを遊離酸（たとえば式Ｉまたは目にお いてＲ３またはＲ７が−ＣＯ２Ｈである場合）として合成することができ、リポ ソームまたは界面活性剤の必要なしに容易に配合しうろことである。

本発明の他の利点は、本発明のビロフエオホルビド化合物が光力学療法に用いら れる通常の光増感剤と比較して、著しく低い用量の注射材料で有効であることで ある。

本発明のこれらおよび他の目的、利点および特色は、以下に本明細書の一部をな す付随する構造式を参照しなからより十分に説明される構造、合成および使用の 詳細を読むことによって当業者に明らかになるであろう。本明細書全体を通じて 構造式中の同様な記号は同様な分子部分を表す。

図面の簡単な説明 第１図は式１１（ａ）の化合物のＦＡＢ質量スペクトルである。

本発明の好ましい形態の詳細な説明 本発明のビロフエオホルビド化合物、それらの化合物の薬剤組成物、合成法およ び使用法を開示する前に、本明細書に記載される特定の化合物、組成物、使用法 または合成法はもちろん変更しうるので、本発明がこれらに限定されないことを 理解すべきである。本発明の範囲は請求の範囲によってのみ限定されるのである から、本明細書で用いる名称は特定の形態を記述するためのらのにすぎず、限定 のためのものではないことも理解す・＼きである。

本明細書および請求の範囲で用いる甲数形（’　ａ″、“ａｎ”およびｔｈｅ″ ）は、前後関係から明らかにそうでないことか示されない限り複数の意味を含み 、たとえば″ビロフエオホルビド“にはそれらのビロフエオホルビドの混合物が 含まれ、″抗体″に言及した場合これにはそれらの抗体の混合物が含まれ、″治 療方法″に言及した場合これには本明細書を読むことによって当業者に明らかに なる同様な方法の２及が含まれる。

特に指示しない限り、本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は光力 学療法の分野の当業者が一般に理解しているものと同じ意味をもつ。本発明の実 施および試験に際しては、本明細書に記載したものと同様または均等な方法をい ずれも採用しつるか、以下に好ましい方法および物質を記載することを試みた。

式中のＲ１は−ＯＲａであり、ここでＲ６は１−２０個（好ましくは５−２０個 ）本発明の本質は、光力学療法と関連づけて用いた場合に癌の治療に極めて有効 であることが見出された新規化合物、およびそれらの化合物を含有する薬剤組成 物の開示である。より詳細には、これらの化合物は下記一般構造式■および［１ に包含されるピロフエオホルビド化合物である。

式中のＲ１はＣＩ（２０Ｒ２であり、ここてＲ２は１−２０個（好ましくは５− ２０個）の炭素を含む第一または第二アルキルであり、Ｒ１は−ＣＯ２Ｒ４であ り、ここでＲ１はＨｌまたは１−２０個の炭素を含むアルキルである。好ましい 化合物は、Ｒ１が−１：Ｈ２Ｏ−ヘキシルであり、かつ■ぐ、か−ＣＯ２ＣＨｓ または−Ｃｏ２Ｈであるものである。本発明の他の化合物は下記の式ＩＩに包含 される反応！￥、路　１ の炭素を危む第一または第二アルキルであり、Ｒ７は−Ｃ０２Ｒ３であり、ここ でＲ４はＩ−１、または１−２０個の炭素を含むアルキルである。特に好ましい 化合物は、Ｒ５が一〇−ヘキシルであり、かつＲ７が−ＣＯ、Ｈまた（ま−ＣＯ ２ＣＩ−１、のちのである。

構造式ｌおよびＩＩのビロフエオホルヒド化合物を薬剤組成物として配合し、癌 を治療するために療法上有効な量での者に投与することができる。

本発明は構造式ｌおよび（ｌの化合物をすべて包ａするか、構造式１１ａの化合 物が先力学療法と関連づけて用いた場合に癌の治療に特に有効であることが見出 された。構造式１１ａを下Ｈ，２ｔこ示す構造式１１ａの化ご物をａ成丈るため の一般的な反応経路を下記に示す出発原料 赤色光を吸収する上記化合物の製造に用いられる出発原料はメチル　フエオホ紙 により濾過し、アセトンで十分に洗浄した。この抽出および濾過工程をさらに２ 回反復した。固体から緑色をすへて取り出すことはできなかった。

緑色の濾液を蒸発させ、グレートＶの中性アルミナ上でのフランシュクロマトグ ラフィーにより、まずｎ　／＼キサンで溶離して速やかに移動する黄色のバンド を除去し、次いでンクロロメタンで溶離してフェオフィチン−ａを含有する主要 な青色／灰色のピークを得た。フェオフィチン−ｄをメタノール中の硫ｆｆ１５ ００１８ｇのメチル　フエオホルヒトーｄを得た。メチル　フェオホルヒトーａ はインビボ殺腫瘍活性アッセイにおいて、５ｍｇ／ｋｇの用量でＢ射した場合に 不活性であると思われる。

結合Ｃ本および標識ビロフェオホルヒト類本貫的に上記の化合物または調製物を 有効威分古して含む組成物を用いるほか、特異的な標的艮定メカニズムを付与す るために誘導体の形態を用いることができる。一般に用いられる標的特異性成分 には、モノクローナル抗体、および細胞性レセプターに対して特異的なりカント とは、細胞表面のレセプターに結合し、様な物質のいずれであってもよい。それ はポリクローナルまたはモノクローナル抗体調製物に由来するものであってもよ く、全抗体、またこれらの抗体の免疫反応性フラグメント、たとえばＦ（ａｂ’ ）２、ＦＡＢ、もしくはＦＡＢ’フラグメントも含まれる。これらの免疫反応性 フラグメントを全抗体の代替として用いることは当技術分野で周知である。たと えばスビーゲルバーグ（Ｓｐｉｅｇｅｌｂｅｒｇ、　Ｈ，Ｌ、　）、“Ｉｍｍｕ ｎｏａｓｓａｙｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ“ （１９７８）３　：１−２３を参照されたい。

これを本明細書に参考として引用する。

ポリクローナル抗血清は常法により、それに対する抗体が望まれている抗原を適 切な補礼動物に注射し、この抗原に対する血清中の抗体水準をアッセイし、力価 か高い時点で抗血清を調製することにより調製される。モノクローナル抗体調製 物も常法により、たとえばケーラーおよびミルスタインの方法により、免疫処置 した動物から得た末梢血リンパ球または胛臓細胞を使用し、これらの細胞をつは 常法により、スピーケルハーグ（ＳｐｉｅｇｅＬｂｅｒｇ、　Ｈ，Ｌ、　）　（ 前掲）の記載に従って行うことかできる。

特に有用な抗体には下記のものか含まれる　モノクローナル抗体調製物ＣＡＭＡ ＬＬ、これはマルコーム（Ｍａｌｃｏｌｍ、　Ａ、　）ら、　Ｅｘ　Ｆｌｅｍａ ｔｏＬ（１９８４）１２：５３９−５４７の記載に従って２ｊ製しつる。ポリク ローナルまたはモノクローナル抗Ｍ１抗体調製物、−ニー　（Ｎｅｗ、　Ｄ、　 ）ら、　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８３）１３０：１４７３（４７７（前掲）の 記載による：ならびに８１６Ｇ抗体、これはマイヤー（１（ａｉｅｒ、　Ｔ、） ら、　Ｊ　ＩｍｍｕｎｏＬ（１９８３）１３１：１８４３、スチール（Ｓｔｅｅ ｌ、　Ｊ、　Ｋ、　）ら、　Ｃｅ１ｌ　１ｍ１Ｉｌｕｎｏ１（１９８４）９０： ３０３の記載に従ってＡ製される。これらの出版物すべてを本明細書に参考とし て引用する。

上記のリストは例示であって、もちろん限定ではない、標的組織が分かると、こ の組織に対して特異的な抗体を常法により：Ａ製することができる。従って本発 明は、目的とするいかなる標的に対しても毒性を及ぼすために適用することがで きる。

が市販されており、一般的なリストには、たとえばパース・ケミカル社のカタロ 従ってレセプターのものに相捕的な外形（ｃｏｎｔｏｕｒ）および電荷ノ々ター ンをｂつ部分を意味する。多様な細胞タイプかホルモン、成長因子または神経伝 達物置を結合すべく設計された特異的レセプターをもつことは十分に理解されて いる。ただしレセプターに対して特異的なこれらの形態のりガントが知られてお り、か一つ理解されているが、本明細書中で用いる″レセプターに対して特異的 なりガグ中に見られるものか含まれる。これらのリンカ−はホモ−またはへテロ −２官能性部分てあり、ジスルフィド、アミド、ヒドラゾンおよび他の多様な結 合を形成しうる官能基を包含する。

他のりンカーには、ポリマー、たとえばポリアミン、ポリエーテル、ポリアミン アルコールケトンを、酸、アルデヒド、イソシアネートまたは他の多様な基によ り上記成分に誘導したものが含まれる。

結合体の有効部分を標的細胞特異性成分に結合させる際に用いられる方法には標 準的手段がいずれも含まれ、結合方法は本発明の一部を構成しない。従ってこれ らの結合体を調製するための当技術分野で知られている有効な方法はいずれも本 発明の範囲に含まれ、よっておおまかにリンカ一部分は共有結合であるか、また は当技術分野で入手しつるいずれかのリンカ一部分もしくはそれから標準的方法 で誘導しうるちのであるとのみ定義される。

本発明の化合物自体または結合体はさらに、薬物を標識した化合物またはイオン に誘導することができる。多様な標識部分を用いることができ、これには放射性 同位体および蛍光性標識か含まれる。放射性同位体標識はインビボで容易に検出 しうるので好ましい。

中油であるか、または特異的結合物質との結合体である化合物を、適切な放射性 カチオンをポルフィリン系内に配位させることにより放射性同位体で標識するこ とができる。有用なカチオンにはテクネチウムおよびインンウムが含まれる。

結合体の場合、特異的結合物質を標識に結合させることもできる。

投与および使用 一般に本発明のビロフエオホルビド化合物は、癌に罹轡している宿主、たとえば ヒトに、療法上有効な量でいずれか適切な手段、たとえば注射（静脈内または筋 肉内）により投与するか、または経皮投与することができる。本発明のピロフエ オホルビト化合物は、周囲の正常組織中に蓄積するよりはるかに高度に腫瘍細胞 中に蓄積する。腫瘍組織に蓄積するのに十分な期間を置いたのち、ピロフエオホ ルヒド化合物を細胞毒性にする特定の波長の光を化合物に照射し、これによりピ ロ７エオホルビド化合物が蓄積している腫瘍または罹患組織を破壊する。ピロフ エオホルビド化合物が蓄積していない周囲の正常な組織に不可逆的な損傷を起こ さずに、これが達成される。

本発明化合物およびそれらと標的細胞特異性物質との結合体は、一般にヘマトポ ルフィリン誘導体およびフォトフリンＩＩの組成物に関して当技術分野で知られ ている様式で用いられる。これらの組成物は、可視光線を用いる照射による破壊 に対して新生細胞または他の異常な組織を増感するのに有用である一一光活性化 に際して、これらの組成物は直接作用をもたず、それらが何らかの生物学的事象 に関与することもない、し力七光活性化のエネルギーが内在性酸素に伝達されて 、それを−重項酸素に変換すると思われる。この−重項酸素が細胞毒性効果に関 与すると考えられる。さらに、蛍光を発する光活性化された形態のポルフィリン 蛍光体は腫瘍の位置を示すのに役立つ。このように本発明の２量体および３量体 化合物は、それらの生物学的効果を発揮する際に消費されず、または変化しない 。

当技術分野で知られている一般的な適応症には、充実性腫瘍の腫瘍＆［１織の破 壊、血管内の粥１ｔ！（ｐｌａｑｕｅ）の溶解（たとえば米国特許第４．５１２ ．７６２号明細書参照）７局所状態、たとえばアクネ、みずむし、いぼ、乳頭腫 および乾鼾の治療、ならびに感染主（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ａ、Ｈｅｎ１）に 関する生物製剤（たとえば輸血用血液）の処理が含まれる。これらの感染主に膜 が存在することにより薬物の蓄積か促進されるからである。他の用途には、アテ ローム性動脈硬化症に罹轡したヒトの治療、および細菌またはウィルス感染の不 活性化が含まれる。

組成物は当技術分野で一般に知られている方法で対象に投与するが、またはイン ビトロ標的に適用するための、薬剤組成物として配合される。これらの薬剤組成 物の要約は、たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’　ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ ｌ　５ｃｉｅｎｃｅ、　？−／り８パブリジング社、ペンシルバニア州イースト ン、最新版に見られる。標識された、または標識されていない組成物を全身に、 特に注射により投与するが、または局所的に用いることができる。

注射は静脈内、皮下、筋肉内、または腹腔内であってもよい。注射用製剤は通常 の形態で、液状の液剤もしくは懸濁剤として、または注射前に液状となすのに適 した固形剤として、または乳剤として調製することができる。適切な賦形剤は、 たとえば水、食塩液、デキストラン、グリセリンなどである。もちろんこれらの 組成物は少量の無毒性助剤、たとえば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤などを含 有しうる。

全身投与は、徐放性もしくは持続放出性の系を埋め込むことにより、坐剤により 、または適切に配合されている場合は経口的に行うこともできる。これらの投与 様式に用いられる配合物は当技術分野で周知であり、これらの方法の要約は、タ ト、ｊｌｆ　Ｒｅ１卵ゆ忙影胴コ壓型卦ｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ　（前掲）に見 られる。

治療を局所的に行う場合、たとえば表在性Ｉｌ！Ｉｉ瘍または皮膚障害の治療の ためには、ＭＵ銭物をローション剤、懸濁剤またはパスタ剤を含めた標準的な局 所用組成物により局所投与することができる。

化合物の投与量は、有効成分の選択、治療すべき状態、投与様式、個々の対象、 および開業医の判定に依存する。製剤の特異性に応じて、少量または多量の投与 量が必要であろう。標的組織に対する特異性が高い組成物、たとえば特異性の高 いモノクローナル免疫グロブリン調製物または特異的レセプターとの結合体につ いては、０．０５−１ｍｇ／ｋｇの用量が推奨される。標的組織に対する特異性 がより低い組成物については、より高い、最高１−１０ｍｇ／ｋｇの用量が必要 である。個々の治療方式に関する変数の数は多く、これらの推奨値からのがなり の逸脱が予想されるので、上記の範囲は推奨にすぎない。さらに本発明のある種 の化合物は水にわずかに溶解しつるので、直接に食塩液または５％グルコース溶 液中において投与し、従って界面〆占性剤または他の可溶化剤の混入を避けるこ とがてきる。

光力学療法および本発明に関連する化合物の分野の当業者は、多数の因子を考　 □慮して、適量および全般的な投与方式をより良く決定することができるであろ う。

たとえば患者の体格、体重および状態を、その療法に対する患者および彼らの疾 轡の反応性と同様に考慮しなければならない。比較的少量を１回投与した場合で すら有益な効果があると考えられる。さらに、著しく大量の投与量＋１もちろん 有毒となる可能性かある。従って投与量および投与間隔に関して詳細な情報を提 供するよりむしろ、本発明のビロフエオホルビト化合物か光力学療法（こ関して 一般に用いられる通常の化合物よりＩｌ！瘍細胞に対して高度の毒性をもち、従 ってより少量投与しうろことを考慮しながら、これらの投与に際して採用される 一般的な因子に注意を払うへきである。

害應伊ｊ 以下の実施例は、当業者に本発明のビロフエオホルビト化合物および薬剤組成物 の調製法の十分な説明および記述を提供するためのものであって、本発明者らか 本発明であるとみなすものの範囲を限定するためのものではなし）。用（八た数 （直（たとえば量、温度なと）に関しては精度を保証する努力を行ったカζ、若 干の実験誤差および偏差を考慮すべきである。特に指示しない限り、部は重量部 であり、温度は０Ｃであり、圧力は大気圧またはその付近である。

害奥燃１ メチル　ビロフエオホルビドーｄ（２）　メチル　フエオホルビドーａ（１゜１ ．０ｇ）は藻類スピルリナ・デストリトラターダから、スミス、ボッおよびシノ ブソン（Ｎ、　Ｍ、　Ｓｍ１ｔｈ、　Ｄ、　Ａ、　Ｇｏｌｆ、Ｄ、　Ｊ、　Ｓｉ ｍｐｓｏｎ）　Ｊ、八ｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　、　P９８５．１０７．４ ９４１− ４９５４　：ならびにパンディ、ヘルニール、スミスおよびトールティー（Ｒ， Ｋ、　Ｐａｎｄｅｙ。

Ｄ、　Ａ、　Ｂｅ１ｌｎｉｅｒ、　Ｋ、　Ｍ、　Ｓｍ１ｔｈ、　Ｔ、　Ｊ、　Ｄ ｏｕｇｈｅｒｔｙ）　、　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ、　Ｐｈｏｔ盾ｂ奄盾戟A　、　 １９９１．５３．６５−７２に記載の方法に従って得られた。これら両者を本明 細書に参考として引用する。

メチル　フエオホルビト−ａをコリシン（ＬＯＯｍＩ）中で９０分間、窒素流を 徐々に導通しなから加熱還流した。参照・ケンナー、マ・７コンビーおよびスミ ス（Ｇ、　Ｗ、　Ｋｅｎｎｅｒ、　Ｓ、　Ｙ、　ｊ［ｃｃｏｍｂｉｅ、　Ｌ　Ｍ 、　Ｓ！ｌ１ｉｔｈ）　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｐｅｒ汲奄獅P工り、　 １９７３．１．２５１ ７−２５２３　、本明細書に参考として引用する。溶液を蒸発させ（領　１ｍｍ Ｈｇ）、残渣をジクロロメタン／メタノールから再結晶した。収率８２０ｍｇ； ９１％、融点２１７−２１９°Ｃ１文献２２０−２２５°Ｃ，フ什ｌシャーおよ びステルン（Ｈ，Ｆｉｓｈｅｒ、＾、５ｔｅｒｎ）　、　Ｄｉｅ　Ｃｈｅｍｉｅ 　ｄｅｓ　Ｐｙｒｒｏｌｅ、　ｖｏｌ　ＩＩ、　Ｐａｒｔ　２．　ｐ、@６４お よび７４、 アカデミソシエ出版は、ライブツイノヒ１本明細書に参考として引用する。

Ｖ釉：　（ｍａｘ）　４１０　（１１２０００１；　ｓｏａ　（１１６００１； 　５３６（９６００１：　６１０　（８２００）；　６６６　（４５０００）； 　ＮＭＲ，ｐｐｍ；　９．５０．９．３Ｂ。

１０−ＣＭ２１；　４．５０　（ｍ、　８−ＨＯ７４，２８（ｆｆｌ、　７−Ｈ ）ｉ　３．７０　＋（Ｚ、　２Ｋ。

ＣＨ２ＣＨ３１；　３．６８　（！９．３Ｈ，ＣＨＣＨＣＯ２ＣＭ３１；　３． ６２．３．４０．３．２２　（各々ｓ、３Ｈ，３０！３）；　２．７０　（７ａ −Ｈｌ；　２．３１（７ａ’−Ｈｌ；　２．５６　（］ｂ−Ｈ）；　２．２９＋ ７ｂ’−ＨｌＨ１，８２（ｄ、　３Ｈ，８−ＣＭ３１；　１．７０　（！、　３ Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２）；　−１，７０（８，２Ｈ，２ＮＨ） ピロ７エオホルビトーｄ（３）　メチル　ピロフェオ小ルビドーａ　（２，２５ ０ｍｇ）を蒸留テトラヒドロ７ランＣ３０ｒｎｌ）に溶解し、４Ｎ　ｌｌＣｌ　 （１２５ｍｌ）を一度に添加した。反応混合物を窒素雰囲気下に室温で４時間撹 拌した。

反応は分析用Ｌｌｃ（ンリカプレート）により、１０％メタノール／ジクロロメ タンを移動相として用いて監視された。次いで反応混合物を氷水に注入し、ジク ロロメタンで抽出した。ジクロロメタン柑を水でｖｉ口洗浄した（２００ｍｌで ３回）。有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムて乾燥させた。溶剤を蒸発させる ことにｊ−り残渣が得られ、これをンクロロメタン／パ＼キサンから結晶化した 。収量２２５ｍｇ、化合物の純度をＬｉｅにより確認し、ＮＭＲスペクトル分析 により構造を確認した。Ｎ〜ＩＲデータは、プロピオン酸エステル（−ＣＩ２Ｃ １，、Ｃｏ□ＣＨＩ）の−ＯＣ１１、プロトンに関する共鳴が失われた点以外は 、２に関して記載したものと同様であった。

メチル−２−１１−（０−ヘキシル）エチル１デビニルビロフエオホルビド（４ ）・ピロ７エオホルビトーａ　（２，２００ｍｇ）を３０％ＨＢ　ｒ／ｆｆ’ｌ ［ｔ　（５，０ｍ　ｌ）に溶解し、ガラス栓をしたフラスコ（ゴム膜を用いても よい）内で反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。溶剤を高真空下に（１ｍｍ Ｈｇ）除去し、得られた１−フロモエチル誘導体を直ちにｎ−ヘキサノール（３ ゜０ｍ１）で窒素雰囲気下に処理した。反応混合物を室温で４５分間撹拌し、ジ クロロメタン（ＬＯＯｍＩ）で４釈した。ジクロロメタン柑をノ８相が中性にな るまで水で洗浄しく２００ｍ１で３回）、次いて無水硫酸ナトリウムで乾燥させ た。溶剤の蒸発により残渣が得られ、これをグレードＩＩＩアルミナ（６％水水 中中性アルミナ上でンクロロメタンにより溶離してクロマトグラフィー処理した 。最初の両分は出発原料と目的生成物（料量）の混合物であった。さらに同一溶 剤で溶離して、目的生成物を得た。適宜な溶出液を混和した。溶剤を蒸発させる と、粘稠な固体が得られ、これはシクロｌコメタン／ヘキサンから結晶化させる ことができた。収率７０％。

（反応経路１を参照されたい） Ｖｉｓバｍａｘ）７４０Ｂ　＋９０ ｏｏｏ）；　４７１　（３２００１，５０６（８６００）；　５３６　（ｓ、５ ｏｏ）；　６０４　（７，２５０１；６６０　（４１５００＋、ＮＭＲ，ｐｐｍ ；　９．７９．９．５１．８．５３　＋各々　ｓ、　ＬＭ。

ｍｅｓｏ　、Ｈｌ　Ｂ　５．９０　（ｑ、２Ｊ　−０１（０−ｈａｘｙＬｌｃＨ ３；　５．０８−５．３０　（ｑ、２Ｈ。

１０−０（２）；　４．４７　（ｍ、　８Ｈ１２４，２９［ｍ、　７−ＨＯ；　 ３．７５　（ｑ、　２Ｈ。

２１１−（０−ヘキシル）エチル）デビニルビロフエオホルビドーｄ　（５）： ビロフエオホルヒトーｄ（３，２００ｒｒ＋ｇ）を・１につき述へた方法に従っ て３０％）Ｉ　Ｂ　ｒ　／酢酸と反応させ、次いでｎ−ヘキサ、ノールと反応さ せて、目的生成物を６０．−６５％の収率で得た。構造はＮＭＲスペクトル分析 により確認された。

上：己により合成した２−［Ｌ−（０−ヘキシル）エチル）デビニルピｌコフエ オホルビ）へ−ｄ−反応紅路１の構造式（５）：５−ＲＯ−ここでＲ＝　（ＣＨ ２）ｓＣｌ（、およびｍ＝Ｈ１（式１［ａ）（５，０）；）をツイーン８０（領 　Ｌｍｌ）に溶解し、そしてＬＯｍｌのハンクス平衡塩類溶を伎（ＨＩ３ＳＳ） と混合すると、０．２２μＭミリポアフィルターにより超過したのち、０１−％ ツイーン８０中の約０．５ｍｇ／ｍｌ溶液か得られる。腋窩に直径０．４−０． ５ｍｍの皮下ＳＭＴ−Ｆ肺瘍を有するＤＢＡ／２マウス１０匹に、０．３ｍｇ／ ｋｇ’（体重）の上記溶液を（マウス当たりの注射容量が約０．２ｍｌとなるよ うにＨＢＳＳに希釈したのち〕静脈内注射する。約２４時間後に腫瘍領域（腫瘍 移植前に毛を剃り、脱毛されている）を６６０−６７０ｎｍのレーザー光線で３ ０分間、７５ｍＷ／ｃｍ２の電力で照射して、１３５ンユ一ル／ａｍ２を付与す る。あるいは６７０ｎｍ付近の比較的広いハント幅および約２８３ジユール／ｃ ｍ２を放出するようにフィルター処理したキセノンアーク灯を用いることができ る。

光処理の翌日、すへての腫瘍は平坦に見え（触診不可能）、その領域上にわずか な皮膚の蒼白化か認められる。これはその後数日間にわたって進行して、明白な 腫瘍壊死となる。処Ｆ！後７目土には、すへての腫瘍は依然として触診不可能で あり、壊死性である。処理後３０日１には１０例中子例の腫瘍は依然として触診 不可能であり、１例は処理後９０日目土で腫瘍を有しないままである。

白子スイスマウス（ＨａｌＣＲ）に実施例１に従って調製した式１１ａの化合物 Ｑ、１ｍ４／ｋｇ　（体重）を静脈内注射する。約２４時間後に動物の後足を上 記と同一線量の６６０−６７０ｎｍのレーザー光線（１３５ジユ一ル／ｃｍ”） またはキセノンアーク灯（２８３ジユール／　ｃ　ｍりで照射する。足の反応を その後数日間にわたって損傷に関して採点し、最大作用を判定する。これはこの 場合、わずかなａｌｌ！ｉに相当する数値０．　３である。注射と光処理の間隔 を約４８時間に延長すると、足の反応はセロとなり（損傷を受けない）、これは 増感剤のクリアランスまたは代謝を示す。

実施した実験の結果として得られたデータを下記の第１表に小す。

’　ＤＢＡ／２マウスにおけるＳ　ｌ’ｖｌ　Ｔ−Ｆ腫瘍；　７５　ｍＷ／　ｃ 　ｍ”のレーザー光線からの光１３５　Ｊ／ｃｍ′。

２　光処理後の（旨示された日における触診不可能な腫瘍の数／処理された腫瘍 の数。

１　白モスイスマウス、腫瘍の治療と同じ条件を用いて足を照射。採点０．３− わずかな浮腫、〇−反応なし。

第１表に示したデータは、本発明のビロフエオホルビド化合物が約６６０ｎｍの 波長の光で活性化されることを明らかに証明する。さらにこれらの化合物を注射 により投与し、約６６０ｎｍの波長の光で照射すると、この処理は７日程度の短 い期間で腫瘍の大きさを縮小することに関して効果が高いことが認められた。

さらに第１表のデータは、本発明の化合物が投与後２４１８時間で皮膚から清掃 されることを示す。これは、患者が長期間にわたる皮膚の光感受性をもたないと いう点て望ましい特色である。また第１表のデータは、光力学寮法式に用いた場 合にＩＩ！瘍の増殖に影響を及はすことに関して、式ＩＩのヘキシルエーテルの 方かメチルエーテルより好ましいにとも示す。

本発明を特定の化合物、配合物および方法に関して記載したが、本発明の真の精 神および範囲から逸脱することなく種々の変更をｆ、ｌうること、および均等物 と胃換しうろことは、当業者には理解されるであろう。さらに、その個体、投与 法、合成法などに合わせて本発明の範囲内で多様な修正をなすことができる。こ れらの修正は以下に示す請求の範囲に含まれるものとする。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．式Ｉの化合物 Ｉ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中のＲ１はＣＨ２ＯＲ２であり、ここでＲ２は１−２０個の炭素を含む第一 または第二アルキルであり；Ｒ３は−ＣＯ２Ｒ４であり、ここでＲ４はＨ、また は１−２０個の炭素を含むアルキルである）。
2. ２．Ｒ１がＣＨ２−Ｏ−ヘキシルであり；Ｒ２が−ＣＨ３であり；Ｒ３が−ＣＯ ２ＣＨ３である、請求の範囲第１項に記載の化合物。
3. ３．標的であるウイルス、細胞または組織の破壊を行う方法であって；該標的を 有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させ；そして該化合物により吸 収される光で照射することよりなる方法。
4. ４．有効量の請求の範囲第１項に記載の化合物を薬剤学的に許容しうる賦形剤と 混和したもの からなる、標的であるウイルス、細胞または組織の処置に有用な薬剤組成物。
5. ５．本質的に、免疫グロブリンおよびレセプターリガンドよりなる群から選ばれ る標的特異性成分に共有結合した請求の範囲第１項に記載の化合物からなる結合 体。
6. ６．標識と結合した請求の範囲第１項に記載の化合物からなる、悪性組織の標識 に有用な薬剤組成物。
7. ７．式ＩＩの化合物： ＩＩ▲数式、化学式、表等があります▼（式中のＲ５は−ＯＲ６であり、ここで Ｒ６は１−２０個の炭素を含む第一または第二アルキルであり、Ｒ７は−ＣＯ２ Ｒ８であり、ここでＲ８はＨ、または１−２０個の炭素を含むアルキルである） 。
8. ８．Ｒ５が−Ｏ−ヘキシルおよび−Ｏ−（ＣＨ２）５ＣＨ３よりなる群から選ば れ、かつＲ７が−ＣＯ２ＣＨ３および−ＣＯ２Ｈよりなる群から選ばれる、請求 の範囲第７項に記載の化合物。
9. ９．標的であるウイルス、細胞または組織の破壊を行う方法であって；該標的を 有効量の請求の範囲第７項に記載の化合物と接触させ；そして該化合物により吸 収される光で照射することよりなる方法。
10. １０．有効量の請求の範囲第７項に記載の化合物を薬剤学的に許容しうる賦形剤 と混和したもの からなる、標的であるウイルス、細胞または組織の処置に有用な薬剤組成物。
11. １１．本質的に、免疫グロブリンおよびレセプターリガンドよりなる群から選ば れる標的特異性成分に共有結合した請求の範囲第７項に記載の化合物からなる結 合体。
12. １２．異常に高い速度で複製する異常な細胞を有するヒトを治療する方法であっ て： 該ヒトに療法上有効な量の式ＩＩの化合物：ＩＩ▲数式、化学式、表等がありま す▼（式中のＲ５は−ＯＲ６であり、ここでＲ６は５−２０個の炭素を含む第一 または第二アルキルであり、Ｒ７は−ＣＯ２Ｒ３であり、ここでＲ８はＨまたは −ＣＨ３である）を投与し； 式Ｉの化合物を異常な細胞に蓄積させ；そして式Ｉの化合物を式Ｉの化合物によ り吸収される波長の光で照射し、これによって異常な細胞に対する細胞毒性作用 を生じさせる段階を含む方法。
13. １３．化合物が０．０１−１．０ｍｇ／ｋｇ（体重）の量で投与され、かつ３− ７２時間毎の間隔で１−３０日間にわたって投与され、かつ光の波長が約６００ −７００ｎｍである、請求の範囲第１２項に記載の方法。
14. １４．Ｒ５が−Ｏ−ヘキシルであり、かつＲ７が−ＣＯ２Ｈであり、かつ光の波 長が約６６０ｎｍである、請求の範囲第１２項に記載の方法。