JPH07509714A

JPH07509714A - ペプチド肺表面活性剤及び治療用組合せ

Info

Publication number: JPH07509714A
Application number: JP6505303A
Authority: JP
Inventors: マクリーン，ラリー　アール．; エドワーズ，ジェイ．ビンセント
Original assignee: メレルダウファーマスーティカルズ　インコーポレイテット
Priority date: 1992-07-29
Filing date: 1993-07-01
Publication date: 1995-10-26
Also published as: IL106476A0; DE69315849D1; AU671850B2; US5861481A; DE69315849T2; KR100279540B1; MX9304540A; AU4660793A; NZ254503A; WO1994003485A1; ES2114061T3; EP0656902A1; KR950702574A; ATE161271T1; EP0656902B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称　ペプチド肺表面活性剤及び治療用組合せ発明の分野本願は、１９９２年７月２９日に出願された米国特許出願番号第０７／９２２．２７９号の一部継続出願である。

本発明は、その配列が既知哺乳類の肺表面活性剤のタンパク質配列と無関係であるような、一連のトリー及びテトラーボリペブチト類の合成、これらのポリペプチド類と疎水性の外延物との混合物の調製、及びこれらの製法と、哺乳類の呼吸困難症候群の処置に有効な製剤組成物に間する。

発明の背景乳幼児呼吸困難症候群は、生後２８日間の主要な死因である。これは世界で乳児１００名当たり１名の割合で生し、約１０％が死亡している。症候群は予定日を迎えた出生児にはまれにしか起こらないが、一般に胎児の発育不全や出生時の低体重（２に４以下）に関連している。成人のＲ［）Ｓは乳幼児のものと同様な臨床特徴および病理生理学を示し、同様なやり方で集中強化治療施設において管理される。成人の病気は多様な病因をもち、散在性感染、胃内容物又は水の吸引、刺激物や毒物の吸入なとの肺傷害と、過剰投与の麻酔薬なとの給源から生ずる肺水腫の結果として生ずる。呼吸困難症候群（ＲＤＳ）は、ガス交換が起こる場所である肺胞を被覆する肺表面活性剤がないことまたは４１Ｉ能不全と関係してし）る。

肺表面活性剤は主に脂質（９０％）力）らなり、種々のタンパク質類の少量成分（１０％）を、含有する。主要な脂質型は脂質の９７％を構成するリンｌ！ｉ！質である。このＩＪン脂質の８０％はホスファチジルコリン（ＰＣ）であり、ｌＯ％ζよホスファチジルグリセロール（ＰＣ）である、１ノンＮ賞のアシル鎖の７０−８０％が飽和されており、これらの８５−９０％が１６炭素の長さである。主要な脂質もよジＪ＜　Ｊレミトイルホスファチジルコリン（ｏｐｐｃ）である、肺表面活性剤のタンパク質成分は雑多で、特徴は更ζこわ力）つて０なｌｖｌ。主なタンパク質は〜３２ｋｄであり、その配り！ｊζよそのｃＤＮＡ力）ら予１すされているしホワイト（Ｗｈｉｔｅ）ら、（１９Ｂ５年）Ｈａｔｕｒｅ　３１７巻３６１−３６３頁コ。またこれは、クローン（ヒされている［フロロス（Ｆｌｏｒｏｓ）ら、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　（１９８５年）２６０巻４９５−５００頁コ。低分子量の少量タンパク質類も単離されており、幾つ力）の配タ１１力Ｓ報告されている［ウオ−（Ｗａｒｒ）ら、（１９８７年）　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅ　ＵＳＡ、　８２巻７９１５−７９１９頁；グラツサー（Ｇｌａｓｓｅｒ）ら、（１９８８年）　、１　ｏ　ｕ　ｒ　ｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｌｓｔｒｙ　２６３巻９頁；ジョノ１ン゛ノン（，１ｏｈａｎｓｓｏｎ）　ら、　（１９８８年）　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、ｅｒｓ　２３２巻６１−６４頁；クランサーら、（１９８７年）　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　ＵＳＡ　８４巻４００７頁；レヴアク（Ｒｅｖａｋ）　ら、　（１９８８年）　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　ｌｎｖｅｓｔｉｇａｔｉ。

ｎ　８１巻８２６−８３３頁］　。

乳児ＲＤＳの処置は、動物の肺洗浄液［スミス（Ｓｍｙｔｌ））ら、（１９８３年）　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　７１巻９１３−９１７頁；マコード　（ＭｃＣｏｒｄ）　ら、　（１９８８年）　Ａｒｃｈ、Ｄｉｓ、Ｃｈｉ　ｌｄ、６３巻１〇 −１６頁］及びヒトの羊水から得られたヒト肺表面活性剤［ホールマン（Ｈａｌｌｍａｎ）ら、（１９８３年）　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　７１＠　４７３・４８２頁；（１９８５年）　ｊ、Ｐｅｄｉａｔｒ、１０６巻９６３−９６９頁；メリット　（Ｍｅｒｒｉｔｔ）　ら、　（１９８６年）　Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ。

１３巻７８５−７９０頁コによるもので、かなりの成功を見た。

有機溶媒で抽出され、合成脂質と混合された乳牛の肺洗ｉ％　ｉαも有効であった［フジワラ（Ｆｕｊｉｗａｒａ）ら、（１９８０年）　Ｌａｎｃｅｔ　１巻５５−５９頁；ノーチ（Ｎｏａｃｈ）　ら、（１９８６年）Ｅｕｒ、、１．　Ｒｅ５ｐｉｒ、Ｄｉｓ、６９巻３２＋−３３５頁；クオン　（Ｋｗｏｎｇ）ら、（１！１１８５年）　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　７６巻５８５−５９２頁；エンホーニング（Ｅｎｈｏｒｎｉｎｇ）ら、（１９８５年）　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　７６巻１４５−１５３頁：シャピロ（５ｈａｐｉｒｏ）ら、（１９８５年）　ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ７６巻５９３−５９９頁；シトリン　（Ｇｉｔｌｉｎ）　ら、　（１９８７年）　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ　７９巻３１−３７頁；ラジュ（Ｒａ、ｊｕ）ら、（１９８７年）Ｌａｎｃｅｔ　１巻６５１−６５６頁；ハリディ（Ｈａｔ　ｌ　１ｄａｙ）ら（１９８４年）　Ｌａｎｃｅｔ　１巻４７６−４７８頁］。しかし、純粋な合成混合物は一貫して、活性であることは示されなかった［モーリー（Ｍｏｒｌｅｙ）ら、（１９旧年）　Ｌ、ａｎｃｅｔ　１巻６４−６８頁：テンセンター研究グループ（１９８７年）　Ｂｒ、　Ｍｅｄ、　Ｊ、　２９４巻９９１−９９６頁、ミルナー（Ｍｉ　Ｉｎｅｒ）ら、（１９８３年）Ａｒｃｈ、　Ｄｉｓ、　Ｃｈｉｌｄ、　５８巻４５８−４６０頁；ミルナーら、（１９８３年、前掲５９巻３６９−３７１頁；及びウィルキンソン（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ）ら、（１９８５年）　Ｌａｎｃｅｔ　２巻２８７−２９１頁］、成人のＲＤＳで表面活性剤を使用するわずかな臨床研究が知られている［ロックマン（Ｌｏｃｈｍａｎ）ら、（１９８８年）　Ａｄｖ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ。

Ｂｉｏｌ、　２２２巻５１１−５１７頁コ、しかし、このような療法の潜在的な価値は文献中に示されている［パン・ゴルデ（ｖａｎ　Ｇｏｌｄｅ）　ら、Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｒｅｖ、６８巻３７４−４５５頁］　。

純粋な脂質混合物での限られた成功が報告されたけれとも、肺表面活性剤のあるタンパク質成分が、天然の肺表面活性剤で見られるような活性を、劇的に改良すると思われる［ホール（Ｈａｌｌ）ら、Ａｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｓｐｉｒ、　Ｄｉｓ。

（１９９２年）１４５巻２４−３０頁］、一つの方法は、肺表面活性剤タンパク質のｃＤＮＡから予測されるアミノ酸配列に基づく配列をもった、遺伝子工学処理されたタンパク質を使用することである。もう一つの代わりの方法は、本発明の主題であるが、所定の脂質成分と組合せた時に肺表面活性剤の１ヒに適した物理的性質をもつが、肺表面活性剤から単離されたタンパク質の配列とは無間係の配列をもっているペプチド類を合成することである。

本発明は、Ｎ−アシル基をもった３−４個のアミノ酸の短いペプチド類に、モしてＲＤＳの治療に有効な合成ポリペプチド類と脂質類との混合物を含む組成物類に関する。

合成ポリペブチＦ’　ＩＩは、肺洗浄液から単離された哺乳類タンパク質の配列に見られない独特の配列をもって０る。

ポリペプチド類は、脂質との混合物中で単独で、又ζよ脂’ｊｉ　混合物中で組み合せて使用できる。ペプチドζよ表面ン古性剤混合物の一つの少量成分を含めてなる。

最近、脂質結合ペプチド類の幾つかの部類のうち、ｓ′Ｊ１０−２４個のアミノ酸をもつ両性のα−らせん形ペプチドとジパルミトイルホスファチジルコリンｔｗＪ類が、洗浄された肺での生体外のほぼ静的な肺コンプライアンスと生体内のガス交換を回復させるうえて有効であることが立証された。本発明は、アミノ及び力／Ｌ，ポキン末端の変更によって、必要なペプチドの大きさをＪつずか３ −４個のアミノ酸に有意に低下させた。

α−らせん形で１０残基の両性ペプチド（両性のα−らせん影ペプチドの記述については、マクリーン・エル・アール（　ＭｃＬｅａｎ，　Ｌ．Ｒ．）　ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．　１９９１年、３０巻３１頁を誉詔）のらせん形ホイール表示が、３及び４残基のペプチド類のモデルを開発するのに使用される。α−らせんの胴部を見下ろすと、残基の側鎖はらせん上で疎水性の面と親水性の面を示す，　ｒ１残基のペプチドは、必要な疎水面と親水面を存在させたこのα−らせんの１回転を表わす．３残基のペプチドは、なおも疎水面と親水面を備えたα−らせんの締付けられた１回転を表わす。

本発明の化学組成物が新規であるのは、８−２０個の炭素のアシル又は疎水性配列に隣接する３−４個のアミノ酸の短いペプチド成分に関しててあり、また呼吸困難症候群の治療に医学的に有効な合成肺表面活性剤中てのこのようなペプチド類と脂質との朝合せに関してである．本発明の組成物は、合成成分の所定の混合物であるから、高純度で、かつ標準化された方式でｙＡ！！できる．また、成分は動物給源に由来するものでなく、これはウィルスや細菌による汚染の危険性を最小限にする。

図面の簡単な記載図１は、短いペプチド用のモデルを開発するのに使用された１０残基のペプチド表面活性剤のらせん形ホイール表示である。図は、らせんの胴部な見下ろしたもので、残基の側鎖はらせん軸との関係で位置を表示しである。

疎水面は図面の右側の残基を包含し、これらはＴｒｐ８、しｕｌ、Ｌｅｕ５、Ｌｅｕ’、Ｌｅｕ２、Ｌｅｕ’である．親水面は荷電された残基のＬｙｓ’、Ｇｌｕ”、Ｇ１０３、ＬｙＳｌｏを包含している。

図２は、図１に示す１０残基のペプチドのらせん形ホイール投影像の１回転に基づいて設計された４ペプチドの一例である６図１ペプチドの疎水面はＴｒｐ２、Ａｌａ３、バルミチルで置き換えられており、これらはペプチドを脂質に固着させるのに十分な疎水面を表わす．荷電された親水面は、Ｇｌｕ’．　Ｌｙｓ’に置き換えられた。

表の簡単な説明表１は、合成ペプチドのアミノ酸分析からの結果を示す。

表２は、成熟ラットの肺モデルにおける化合物類の有効性を示す圧力−容積実験の結果を示す。

発明の要旨本発明は式ｌＸ　ＡＩ　Ａ２　Ａ３　Ａａ−Ｙ　１のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受は入れられるその塩からなる合成肺表面活性剤を含めてなる０式中、Ｘは８−１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基である。

Ｙは−ＯＨ又は−Ｎ１（２である。

Ａ、は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸である。

Ａ２はＴｒｐ、　Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、　Ｈｉｓ、　Ｖａｌ、　Ｌｅｕ、又はｆｌｅａ）ら選ばれる疎水性アミノ酸である。

Ａ３はＡｉｂ、　Ｇｌｕ、　Ｇｉｎ、Ｌｅｕ、　Ａｌａ、０「ｎ、又は結合である。

またＡ４はＬｙｓ、　Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸である。

ここで、Ａ３が結合の時には、Ａ、とＡ２は交換てきる。

このポリペプチドは脂質と一緒になることができ、その場合に脂質は天然の肺表面活性剤と一緒にされた１以上の種類からなる。

本発明は更に、式２％式％のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受は入れられるその塩からなる合成肺表面活性剤を含めてなる０式中、Ｘは８−１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基である。

Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２である。

Ａ２はＴｒｐＳＴｙｒ、Ｐｈｅ、　１ｌｉｓ、　Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｆｌｅｔＪ）ら選ばれる疎水性アミノ酸である。

Ａ３はＡｉｂ、　Ｇｌｕ、　Ｇｌｎ、　Ｌｅｕ、　Ａｌａ、Ｏｒｎ、又は結合である。

またＡ４はＬｙｓ、　Ａｒｇ、又はＨｉ　ｓ　ｈ）ら選ばれる正に荷電されたアミノ酸である。

このポリペプチドを脂質と一緒になることができ、その場合にＩＩ５質は天然の肺表面活性剤と一緒にされた１以上の種類からなる。

本発明は更に、式３％式％のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受は入れられるその塩からなる合成肺表面活性剤を含めてなる０式中、Ｘは８−１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基である。

Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２である。

Ａ、は結合、Ｇｌｕ、又はＡｓｐである。

Ａ２はＴｒｐ、　Ｇｌｕ、又はＡｓｐである。

Ａ３は結合、＾ｉｂ−Ｇｌｕ、　Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、　Ａｌａ、又はＯｒｎである。

またＡ４はＬｙｓ又はＡｒｇである。

このポリペプチドを脂質と一緒になることができ、その場合に脂質は天然の肺表面活性剤と一緒にされた１以上の種類からなる。

これらのペプチド類、及びペプチド−脂質複合体、及びそれらの製剤組成物類は、哨乳類の呼吸困難症候群の治療に有効である。

発明の詳細な記載天然のアミノ酸の次の一般的な省略形が明細書を通して使用される。

Ａｌａ又はＡ　−アラニンＶａｌ又は■　−バリン１、　ｅ　ｕ又はし　−ロイシン１１ｅ又は１−　イソロイシン１’ｈｅ又はＦ　−フェニルアラニンＴｒｐ又は−−トリプトファンＭｅ＋又は門　−メチオニンＡｓｐ叉はＤ　−アスパラギン酸Ｇｌｕ又は［−グルタミン酸Ｇｌｎ又はＱ　−グルタミンＬｙｓ又はＫ　−リジンＡｒｇ又はＲ−アルギニンＡｉｂ　−アミノイソ酪酸Ｏｒｎ　−オルニチングリシンを例外として、天然アミノ酸はキラル炭素原子を含有している。他で特定してそうでないと示されなければ、本明細書て述へる光学活性アミノ酸類はＬ立体配置のものである。慣習とおり、本明細書て描かれているペプチド類の構造は、アミノ末端が鎖の左側にあり、カルボキシ末端が鎖の右側にあるような構造である。

Ｎ−末端アミノ酸はＮ−アミノ基を経由して８−１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基に共有結合される。　８−１８個の炭素原子のアシル基は、基当たり１個又は２個のカルボニル部分をもった直鎖、分枝鎖、環式、飽和又は不飽和のアシル基を包含することを意味している。アルキル基は、直鎖、分枝鎖、又は環式アルキル基を包含することを意味している。Ｎ−アシルペプチド類の合成は、当業者に知られている。合成は、一般に対応するエステルとしての、活性化されたアシル酸によって、又はペプチドのＮ−アミノ基と反応させたアシル輝水物を通して、例えばヒドロキソヘンシトリアゾールエステル（ＨＯＢＴエステル）によって達成される。アシル又はアルキル鎖はペプチドの脂Ｍ結合親和性を高める。

本明細書で使用される「疎水性アミノ酸」という用語は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅのような、脂肪族炭化水素側鎖をもった非極性残基、又はＰｈｅ、　Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、又ｉ！Ｈｉｓノ、にうな芳香族基をもった非極性残基を意味している。

本明細書で使用される「負に荷電されたアミノ酸」という用語は、Ｇ　ｌ　ｕ又はＡｓｐのような酸性の親水性側鎖をもった極性残基を意味している。

本明細書で使用される「正に荷電されたアミノ酸」という用語は、Ｌｙｓ、　Ａｒｇ、又はＨｉｓのような塩基性の親水性側鎖をもった極性残基を書味している。

これらの小さな合成ペプチド類は、既知の肺表面活性剤タンハク質内のとんな領域とも簾関係な配列をもち、純粋なりＰＰＣと組合せてアルキル基又はアシル基を結合させており、生体外でほぼ静的な肺コンプライアンスを回復させる。

また、好ましい群の置換基を形成するように、置換基が下に挙げたベプチＦ類から独立に選ばれる場合の、式ｌのポリペブチＦ’　Ｋｌも好ましい。

バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ）ハ　ル　ミ　ト　イ　ル　−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−１，ｙｓ−ＮＩＩ２　（ＳＥｏ　１０　ＮＯ：２）バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３）バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−１，ｅｕ−１，ｙｓ−ＮＨ２（ＳＥｏ　１０　ＮＯ：４）バルミトイル−に１ｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−Ｎｌ１２　（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５）バルミトイル−Ｔ　ｒ　ｐ　−Ｇ　ｌ　ｕ　−Ｌ　ｙ　ｓ　−Ｎ　Ｈ、、ｉ（ＳＥｏ　ＩＤ　ＮＯ：６）オクタノイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥｏ　１０　ＮＯニア）そのほか出願人らは、Ｙが独立にアミノ基から選ばれ、またＸがバルミトイルである場合の式ｌのポリペプチド類を好ましいと考える。最適のペプチドはＡ２位置にトリプトファン残基を含有するが、Ｇｌｕを受け入れることもてきるｅＡ４位置には、Ｌｙｓを受け入れるのが最適にはである。更に、Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４の置換幕内で、より好ましい群の置換基を形成するように、アミノ酸と結合を独立に選ぶことができる。

本発明のポリペプチド類は、当業者に容易に知られる種々の手順によって製造できる。そのような手順には、固相配列合成が含まれる。同相配列台手順は、ＡＢＩペプチドシンセサイザーのような確立された自動化方法を使用できる。この手順てα−アミノ保護アミノ酸は樹脂支持体に結合される。使用の樹脂支持体は、ポリペプチド類の同相調製のためにこの技術で慣用的に使用される任意適当な樹脂、好ましくは初朋に導入されるα−アミノ保護アミノ酸とのエステル形成の場を提供するために、これをクロロメチル化又はヒドロキシメチル化した０、５〜約３％のジビニルヘンゼンて架橋されたポリスチレンである。

ヒドロキシメチル樹脂の例はボダンスキー等、Ｃｈｅｗ　。

ｌｎｄ、　（ロンドン）３８、！５９７−９８　（１９６６）に記載されている。

クロロメチル化樹脂はバイオラットラボラトリーズ、カリフォルニア州すツチモントから市販されており、そのような樹脂の製造はステワード及びヤング「ソリ・ソトフェーズペブチトシンセシス　５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓＪ　（フリーマンアントカンパニー、サンフランシスコ　＋９６９）第−章、１〜６頁に記載されている。保護されたアミノ酸はギシン、Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｅｗ、　Ａｃｔａ、　５６．１４７６（１９７３）の手順によって樹脂に結合できる。多くの樹脂結合保護アミノ酸が市販されている１例として本発明のカルボキン末端がＬｙｓ残基であるポリペプチドを造るためには、ヘンシル化されヒドロキシメチル化されたフェニルアセトアミドメチル（ＰＡ門）樹脂に結合した第三ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護Ｌｙｓを使用てき、そしてこれは市販されている。

α−アミノ５ｉ：ＯＦアミノ酸の樹脂支持体へのカップリングに続いて、保護基は塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸のみ、又はジオキサン中の１１Ｃ１を使用するなと、任會適当な手順を用いて除去される。脱侃謹は０ ℃と室温の間の温度で実施される。その他の標準的な開裂試薬と、特定のα−アミノ保護基の除去条件を使用てきる。α−アミノ保護基の除去後、その他のアミノ保護されたアミノＭ類は所望の順序で段階的に結合される。その代わりに、樹脂支持されたアミノ酸配列とのカップリングに先立って、溶液法によって複数のアミノ酸基を結合できる。

ポリペプチド配列に導入される各アミノ酸と共に使用されるα−アミノ保護基はこの分野で知られた任意の保護基てあり得る０本発明での使用に考えられるα− アミノ保護基頚には、（１）ホルミル、トリフルオロアセチル、フタリル、トルエンスルホニル（トシル）、ベンゼンスルホニル、ニトロフェニルスルフェニル、トリチルスルフェニル、０−ニトロフェノキシアセチル、及びγ−クロロブチリルのようなアシル型の保護基；（２）ベンジロキシカルボニル及びｆｆ１ｔｊ！＋ベンジロキシカルボニル、例えばｐ−クロロヘンシロキシカルボニル、ｐ− ニトロベンジロキシカルボニル、ｐ−ブロモヘンシロキシカルボニル、ｐ−メトキシヘンシロキシカルボニル、Ｉ−（ｐ−ビフェニル）−１−メチルエトキシカルボニル、α、α−ジメチルー３．５−ジメトキシヘンシロキシカルボニル、及びベンズヒドロキシカルボニルのような芳香族ウレタン型保護基；（３）第三ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピ台キシカルボニル、エトキシカルボニル、及びアリロキシカルボニルのような脂肪族ウレタン保護基；（４）シクロベンチロキシカルボニル、アダマンチロキシカルボニル、及びシクロへキシロキシカルボニルのようなシクロアルキルウレタン型保護基；（５）フェニルチオカルボニルなとのチオウレタン型の保護基；（６））リフェニルメチルくトリチル）及びヘンシルのようなアルキル型の保護基；（７）トリメチルシランなどのトリアルキルシラン基である。好ましいα −アミノ保護基は第三ブチルオキシカルボニルである。

適当なカップリング試薬の選択は、この技術の範囲内にある。添加アミノ酸がＧｌｎ、　Ａｓｎ又はＡｒｇの場合の特に適したカップリング試薬は、Ｎ、Ｎ’− ジイソプロピルカルボジイミドと１−ヒドロキシヘンシトリアゾールである。

これらの試薬の使用はニトリル及びラクタムの形成を予防する。その池のカップリング剤は（１）カルボジイミド（例えばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミドとＮ−エチル−Ｎ′−＜γ−ジメチルアミノブロビル力ルポジイミト）；（２）シアナミドｇ（例えばＮ、Ｎ’−ジベンジルシアナミド）：（３）ケテンイミンｌ’Ｉ　；　（４）イソキサゾリウム塩（例えばＮ−エチル−５−フェニルーイソキサゾリウム−３′−スルホネート）；（５）環中に１−４個の窒素を含有する芳香族性て単環の窒業含有複素環式アミド類、例えばイミダゾリド類、ビラゾリト類及び１，２．４−　）リアゾリト類（有用な特定的な複素環式アミド類はＮ、Ｎ’−カルボニルジイミダゾールとＮ、Ｎ′−カルボニル−ジー１．２．４−）リアゾールを包含する）；（６）アルコキシル化アセチレン（例えばエトキシアセチレン）；（７）アミノ酸のカルボキシル部分と混合蝿水物を形成する試薬（例えばエチルクロロフォルメートとイソブチルクロロフォルメート）又はカップリングしようとするアミノ酸の対称集水物（例えば（Ｂｏｃ−Ａｌａ）２−０）　：及び（８）一つの環窒素上に１個のヒドロキシ基をもった窒素含有複素環式化合物類（例えばＮ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド及びｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）である、その他の活性化試薬と、ペプチドのカップリングにおけるそれらの使用は、カブール（にａｐｏ。

「）、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｓｃｉ、、　５９巻１−２７頁（１９７０年）に記載されている。出願人らは、カップリング試薬として、対称的無水物の使用を好ましいと考える。

各保護アミノ酸又はアミノ酸配列は、約４倍過剰量で固相反応器に導入され、ジメチルホルムアミド：塩化メチレン（１：Ｉ）又はジメチルホルムアミドのみ、又は好ましくは塩化メチレンのみの媒体の中でカップリングが行なわれる。不完全なカップリングが起こる場合は、固相反応器での次のアミノ酸のカップリングに先立って、α−アミノ保護基の除去前に、カップリング手順を繰り返す０合成の各段階におけるカップリング反応の成功は、イー・カイザー（Ｅ、にａｉｓｅｒ）ら−Ａｎａｌｙｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　３４巻５９５頁（１９７０年）に記載されるように、ニンヒドリン反応によってモニターされる。

所望のアミノ酸配列が得られた後、ペプチドは樹脂から除去される。これはメタツリシスにより行うことが出来、例えば、樹脂結合ポリペプチドを希弗化水素酸水溶液中のジメチルホルム、ｐ−クレゾール、及びチオクレゾールの溶液で処理することによりなし得る。

固相ペプチド合成の技術に知られているように、アミノ酸類の多くは連鎖生成中に保護を必要とするような官能基をもっている。適当なｆ呆護基の使用と選定は、当業者の能力の範囲内で可能であり、保護しようとするアミノ酸と、ペプチド上の他の保護アミノ酸残基の存在に依存する。このような側鎖保護基の選択は、 α−アミノ８８分の保護基の開裂中に除去されないものでなくてなならないという点が臨界的である０例えば、リジンに適した側鎖保護基はヘンシロキシカルボニル及び置換ヘンシロキンカルボニル［この置換基はハロ（例えばクロロ、ブロモ、フルオロ）及びニトロから選ばれるコ（例えば２−クロロヘンシロキンカルボニル、ｐ−ニトロベンジロキシカルボニル、３．４−ジクロロヘンシロキシカルボニル〉、トンル、ｔ−アミロキシカルボニル、ｔ−ブチロキシカルボニル、及びジイソプロピルメトキシカルボニルである。スレオニンとセリンのアルコール性ヒドロキシル基はアセチル、ヘンジイル、第三ブチル、トリチル、ベンジル、２．６−ジクロロヘンジル又はヘンシロキシカルボニル基て保護てきる。好ましい保護基はヘンシルである。

これらの基はこの分野で良く知られた手順で除去される。典型的には保護基の除去はペプチド鎖合成が完了した後ここ行われるが、保護基は他の任意の時に除去できる。

式１のポリペプチド類は、仕置の無毒性有機又はＶ機酸と製薬上受は入れられる塩類を形成できる。適当な塩類を形成する簀機酸類の例は塩酸、臭化水素酸、硫酸及び燐酸、並びにオルト燐酸−水素ナトリウムと硫酸水素カリウムのような酸金属塩類を包含する。適当な塩類を形成する有機酸類の例は、モノ−１、ジー、及びトリカルボン酸類を包含する。このような酸類の例は、例えば酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安、さ、香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安に、香酸、及びメタンスルホン酸と２−ヒドロキシエタンスルホン酸のようなスルホン酸類を包含する。カルボキシ末端アミノ酸部分の塩類は、任意適当な無機又は有機塩基類と形成される無毒性のカルボン酸塩類を包含する。例として、これらの塩類はアルカリ金属、例えばナトリウムとカリウム；アルカリ土類金属、例えばカルシウムとマグネシウム；アルミニウムを含めた第ＨＡ族の軽金属類：及び有機第一級、第二級、及び第三級アミン類、例えばトリエチルアミンを含めたトリアルキルアミンや、プロ力イン、ジヘンジルアミン、１〜エテナミン、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジヒドロアビエチルアミン、Ｎ−（低級）アルキルピペリジン、及びその池任奮適当なアミンとの塩類を包含する。

本発明のタンパクトリン脂質複合体のリン脂質は仕置のリン脂質でよく、本明細書で使用されるこの用語は、ホスホグリセリド類とスフィンゴ脂質類を包含する。ホスホグリセリド類は、グリセロ一ルの二指肪酸エステルであって、ここでグリセロール部分の残りのヒドロキシ基、すなわち末端ヒドロキシ基はリン酸とエステルを形成する。一般に、ホスホグリセリド類のリン酸部分は、エタノールアミン、セリン、コリン、又はグリセロールのようなアルコールと第二のエステルを形成する。スフィンゴ脂質はスフィンゴシンやジヒドロスフィンゴシンの一脂肪酸エステルであり、ここでｌ−位置のヒドロキシ基はリン酸のコリンコースデルとエステルを形成する０本発明のタンバルトリン脂Ｍ複合体の好ましい脂質は、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）　、池の鎖長と飽和度のアシル鎖を含有するホスファチジルコリン分子（ｐ□、カージオリビン（ＣＬ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）フォスフフチジルセリン類（ＰＳ）、脂肪酸１１１（ＦＡ）、及びトリアジルグリセロール類（ＴＧ）を含む、　ＤＰＰＣは肺表面活性剤混合物の主要な成分をなすが、ＰＣ，ＣＩｌ、ＰＣ、ＰＳ、　ＦＡ、及びＴＧは少量成分である０本発明のリン脂質用に適した脂肪ｗｉ順は、典型的には分枝していない、長鎖カルボン酸類（一般に８個以上の炭素原子をもつもの）である、脂肪酸類は飽和又は不飽和でありうる０代表的な脂肪酸類はラウリン酸、ミリスチン酸、バルミチ刈ｌ及びオレイン酸である。

本発明のポリペプチド又はタンパク質−リン脂質複合体の製剤は乾燥混合物又は水性懸Ｊ液として製造できるが、場合によっては水性懸濁液は、例えばエタノール又はトリフルオロエタノールのような少量の有機溶媒、ドデシル硫酸ナトリウムやナトリウムデオキシコレートのような洗剤、塩化カルシウムや塩化ナトリウムのような塩類、ブドウ塘、デキストロース、又はマンニトールのような炭水化物、及びグリシンやアラニンのようなアミノ酸類を含有する。製剤組成物を液体型につくる時は、その液体の、安定剤、防腐剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、及びＱＪ剤を添加できる。所望により、適当な殺菌剤も添加できる。水性懸濁液のｐＨは、２ないし１０の間で変わり、酸と塩基、例えば塩酸、リン酸ナトリウム、又は水酸化ナトリウムで調整できる。乾燥混合物は、製薬上受は入れられる塩類、有機溶媒、及び洗剤を含有する水溶液にもどすことができる。水性製剤は、使用前に製薬上受は入れられる媒体と懸濁媒体を交換するために、透析、濾過、又はクロマトグラフィ処理できる。製剤は乾燥粉末、水性懸ｔｉｉａ、又はアエロゾルとして、呼吸困Ｒ１！者の１こ直接投与できる０本発明の製剤組成物は、バイアルやアンプルのような気密密閉容器に仕込み、無菌的に保存できる。懸１１１１１衝液を含有するバイアル又はアンプルとは別に、組成物をバイアル又はアンプルに保存し、乾燥又は水和組成物を使用前に懸濁緩衝液と混合できる。

脂質は肺表面活性剤製剤の５０〜９９．９％を構成している。

適当なｒｔｌｇは、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン分子（ＰＣ）、カージオリピン（ＣＬ）、ホスファチジルグリセロール（ｐｃ）、ホスファチジルセリンＫｌ（ｐｓ）、脂肪Ｍ（ＦＡ）、及びトリグリセリド　（ＴＧ）を包含する。ＤＰＰＣは主要な脂質種をなしており、全脂質重量の６Ｏ−１００％の濃度で存在する。残りのＴ＃質は低１度で存在する。　ｐｃ、　ｃｔ、ＰＣｌ及びｐｓは、脂質の３０％までをなし得、ＦＡとＴＧは脂質重量の１０％までをなし得る。少量脂質成分の脂肪アシル鎖は、飽和又は不飽和であり得、任意の鎖長てありうる。　＋２−１６個の炭素原子の鎖長と２個までの不飽和結合が好ましい、好ましい脂Ｎ組成物はＤＰＰＣが８５−１００％、それにプラスＰＧが〇−１５％である。最も好ましいのは純粋なりＰＰＣである。

合成肺表面活性剤の脂質成分は、哺乳類の肺表面活性剤中に一般的に見い出され、一般的な工業的供１＆Ｒから高純度で入手できろ、ポリペプチド成分は、当業者になしみ深い方法により、固相ペプチド合成によって調製される。本発明の脂質と哺乳類の肺洗浄法から単離されるタンハク質との混合物は、新生児呼吸困難症候群（ＲＤＳ）の処置に有効であることが示された。しかし、肺表面活性剤製剤中のこれらの脂質と合成ペプチドとの混合物は、最近になって報告されたにすぎない（マクリーン等（１９９２）　Ａｍ、　ｊ、　Ｐｈｙｓｌｏｌ、　Ｌ２９２−Ｌ３００：　ワーリング等（１９８９）Ｐｅｐｔ＋ｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　２（５）、　３０８−３１３：　コクラン等（１９９＋）　５ｃ１ｅｎｃｅ　２５４．　５６６−６８）　。

脂質は、当業者に知られる方法でリポソームとして懸濁されるが、そこで揮発性有機溶媒又は溶媒混合物、例えばクロロホルムとメタノールとの混合物中で混合される。有機溶媒は、窒素、アルゴン下、又は真空下に蒸発によって除去される。有機及び無機酸類、塩基、及び塩類、並びにデキストロースのような糖類を含有しうる水溶液を、乾燥脂質混合物に、１当たり０．１−１００　ＢのＤ　Ｐ　ＰＣ最終濃度が達成されように添加する。概して、混合物を３５−５０℃に暖め、激しく混合し、２５−５０℃で２時間まで培養するのが好ましいが、必ずしも必要ではない０次に、ペプチド又はペプチド混合物を乾燥粉末として加えるか、又はエタノールやトリフルオロエタノールのような適当な有機溶媒、又は水性懸濁液中でペプチドの溶解度を改良するグアニジニウム塩酸塩や尿素のような変性剤を場合によっては含有する水溶液中に懸濁する。ペプチドと脂質との会合は特定ｐＨで促進されるため、水溶液のｐＨは２−１Ｏの範囲にありうる。ペプチドと脂質を混合する好ましい方法は、４５−５０℃の水中で乾燥ペプチドを脂質に加え、４５−５０℃で３０−９０分、浴超音波処理によって混合し、次に凍結乾燥し、−２０℃で保存することである。

別の方法として、少量の水を加えた、又は加えない揮発性有機溶媒中で脂質とペプチドを混合する。揮発性溶媒を水性溶媒の添加前、又は後に、窒素又はアルゴン流下に真空炉内で、又は回転蒸発によって蒸発させる。

上記の方法の一つによって調製される脂質とペプチドの混合物を、好ましくは３５−５０℃で、音波照射しながら２時間まで培養する０次に、水性媒体を製薬上受は入れられる媒体と置き換えるために、混合物を透析、濾過、又はクロマトグラフィ処理できるが、これは必要ではない０次に、混合物を凍結乾燥又はアエロゾル化する。

本発明のポリペプチド−リン脂質複合体を、成人の及び新生児呼吸困難症候群の治療に使用できる。本発明の複合体はＲＤ　Ｓ　患者に投与されるとき、合成肺表面活性剤として作用し、失われている天然の表面活性剤と置き喚ねり、また十分な天然の表面活性剤の不足を改善する。

乳幼児の肺が十分量の天然の肺表面活性剤をつくるようになり、概して正常なガス交換が達成されるときの、それ以上の処置が不要となるまで、治療は継続される。

製剤は、ス管内投与に適したもの、すなわち液体懸濁液、乾燥粉末、又はアエロゾルが好ましい、液体懸濁液には、乾燥混合物又は水性り濁液中の混合物を水、食塩溶液、デキストロース、及びグリセロールのような適当な試薬と混合すると、製薬上有効な組成物が生ずる。好ましい液体懸濁液は０．８−１．０重量％の塩化ナトリウムを含有し、好ましくはカルシウムイオンとしてＩｌ−２０ｆｆ１であろう。次に製剤をフィルター滅菌する。一般に、製剤は１１００ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣを含めてなり、０．２−５　ｍｌ／ｋｇの投与量て投与される。乾燥粉末の！Ｉｌｌ！には、水性懸濁液を凍結乾燥する。アエロゾルは、低級アルカン類や、フレオンのようなフッ化アルカン類のような推進剤中に懸濁された微粉砕乾燥粉末から調製される。アエロゾルは加圧容器内で保存される。

表面活性剤は適量形式に適するように、気管チューブにより、アエロゾル投与により、又は吸入ガスへの懸濁液又は乾燥粉末の噴霧化によって投与される０表面活性剤は　ＩＱ−２００ｍｇ／ｋｇの単−回又は複数回投与量で投与される。好ましい投与法は、生理食塩溶液中のペプチドと脂質の懸濁液として、１当たり表面活性剤５１０ｍｇの濃度で、気管チューブを通して５０−１００＋＊ｇ／ｋｇの投与量を達成するものである。

本発明のポリペプチドは、対象の処置のために投与される。「対象」とは哺乳類、例えばヒトを指すが、これに限定はされない。

実施例１　実験的化学手順ペプチド合成とその他の化学薬品、ペプチド類は、アプライド・バイオシステムズ社（カリフォルニア州フォスター市）のモデル４３０−Ａペプチド合成機で、固相法により、０．５　ａｕ＋ｏｌ規模て合成された０開裂時にＣ−末端アミドを生しさせるために、ｐ−メチルベンゾキシヒドリルアミン（ｐＭＢＨＡ）樹脂を使用した。ペプチド・インターナショナル社からの、Ｃｙｓ　（エチルチオ）、Ｇｌｕ（ヘンシル）及びしｙｓ（２−クロロヘンシロキシカルボニル）で側鎖保護されたＮα−ｔ−Ｂｏｃ（ｔ−ブチロキシカルボニル）アミノ酸類を、事前形成ずみの対称無水物を経由して二重にカップリングさせた。対称無水物をつくるために、酸を活性化することによって、アシル基、すなわちバルミトイルとオクチルをカップリングさせた。Ｎα−ｔ−Ｂｏｃ基を塩化メチレン中の５０％トリフルオロ酢酸（、ＴＦＡ）によって除去し、ジメチルホルムアミド中の１０％ジイソプロピルエチルアミン（ＤＥＡ）で中和した。ペプチドを樹脂から切り離し、５％アニソールと５％硫化ジメチルを含有する簾水ＨＦ中で、−５℃で４５分間、脱保護した。ＨＦを真空中で除き、ペプチドを５０％アセトニトリル水溶液で樹脂から抽出した。−緒にした抽出液を凍結し、凍結乾燥し、２１４　ｎ＋ａてモニターされた０、１％ＴＦＡ水溶液（ｐＨ２）中でのアセトニトリル勾配、毎分４０　＋ａＬの、レイニン・ダイナミックス社の（２１，４ｘ２５０　ｍｍ）　Ｃｔｅカラム上の逆相分離用＋１　Ｐ　Ｌ　Ｃにより精製した。主ピークを集め、凍結乾燥した。合成ペプチド類の純度（〉９７％）と同定は、分析用高性能液体クロマトグラム（ＨＰＬＣ）での単一ピーク、毛細管ゾーンＫＸ泳動、正確な配列と一致する単一分子イオンを与える〜′６分析用ＺＡＢ２−５Ｅ上の高速原子衝撃貿量分析（ＦＡＲ−ＭＳ）　、及び各残基について予測値の１０％以内であったアミノ酸分析によった。し−α−ジパルミトイルボスフ７チジルコリン（ＤＰＰＣ）　（純度〉９９％）はアヴアシティ・ポーラ−・リビッド社（アラバマ州バーミンガム）から得た。これらの手順を用いて、以下のペプチド類を合成した。その分析性質を表１に示す。

１、バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＮＯ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：ｌ）２、バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−ＮＯ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２）３、バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｎ）１２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３）４、バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ −Ｌｙｓ−ＮＯ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４）５、バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＯ２（ＳＥＱ　１０　ＮＯ：５）６、バルミトイル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｎ）１２　（ＳＥＱ　１０　ＮＯ：６）７、オクタノイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＯ２（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニア）１０２．３１９　ペプチド１　［Ｍ＋Ｈコ”＝７７０．４　８７４．９％１０２．６９７　ペプチド２　［門＋１１］”　＝　８２７．４　＠６８．８％１０１．４５９　ペプチド３　［Ｍ＋Ｈ］ゝ＝８２８．５　＠７１．９％１０１．４４７　ペプチド４　ＣＭ＋）ｌ］”＝８１２．７　８７５．９％１０２．７２０　ペプチド５　［Ｍ＋Ｈ］”＝７８４．４　＠４３．９％１０２．７３９　ペプチド６　［門十Ｈ］”＝６９９．５　＠７］、３％実施例２　人工的表面活性剤の調製人工的表面活性剤の調製。合成的肺表面活性剤の三重試料のため、クロロホルム１１中のＤＰＰＣ（Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリン、）９９％純度；アヴアンティ・ポーラ−・リビッズ社、アラバマ州バーミンガム）７５−８を窒素流下に乾燥し、有機溶媒の痕跡量を除くために凍結乾燥機内に一装置いた。乾燥脂質混合物に水９１を添加した。調製物を時おり渦流混合しながら、４５ −５０℃で１時間培養した０次に、幾つかの試料で、乾燥試験ペプチド１．５　Ｂを水性調製物に加えた。ペプチドの分散とペプチド−脂質相互の作用を促進させるために、洗浄浴ソニケーター（ブランソン＋２００）中で、ペプチドを加えて、又は加えずに、４５−５０℃で２時間、調製物を温和に鹸化した。生ずる脂質−ペプチド混合物を３部分に分割し、凍結乾燥し、−２０℃で貯蔵した。

べＪ二Ｌ」」仁ムニｔり二υにυａ−Ｌｙｓ−Ｎｌｌ　（Ｓ東−ＩＤ　ＮＯ：± とλＰｐｃ複合体の調製ペプチドｌを同相合成によって調製した。クロロホルム１１中のＤＰＰＣ（２５ａｇ）を窒素流下に乾燥し、有機溶媒の痕跡量を除くために凍結乾燥した。乾燥脂質？Ｈ合物に水９１を加えた。調製物を４５°Ｃて１時間培養した。次に乾燥ペプチド１（＋、ｓ　ｍｇ）を水性調製物に添加した。浴のウルトラソーケータ −中て：ｒｉ！物を４５℃で２時閏鹸化した。生ずる脂質−へブチト混合物を凍結乾燥し、４℃で１か月まで貯蔵した。調製物に定期的な混合を加えながら、４５℃で１時間培養した。調製物は半透明の白い外イＮ　！倉　ｔ＋　ヰ；　虚　１　す。

観をもち、ＤＰＰＣのみよりやや濁りが少ない。

へ／Ｌ　！　）　、（ユニリユｊヱＬ且罰≦上と工５」■ムー匹ヱ伊道ユ匹！ｐｃ１合体の５ＩｉＩ製ペプチド２を固相合成にょ）て調製し、実施例１に述べたとおりにＤＰＰＣと混合した。

べ」二しΣ／コ島づ工肛ユニニリユヨ」Σ上ＬＬ浄匹エユＤ　ＮＯ：３）＋工！ｐ（複合体の調製同様な方法で、ペプチド３を調製し、そのＱＰＰＣとの複合体を形成した。

べ上ｘｈ盃にμ上二二り遁狙ヨユと工ら」上農−」」則遅Ｊ曳ｙｐｃ複合体の調製同様な方法で、ペプチド４を調製し、その［）ＰＰＣとの複合体を形成した。

同様な方法で、ペプチド５を調製し、そのＤＰＰＣとの複合体を形成した。

腹酉」」＝仁に二Ｔｒｐ−工皿ヨ上とエリ」盈眼」上」１１月どヱ肛３合体の調製同様な方法で、ペプチド６を調製し、そのＤＰＰＣとの複合体を形成した。

Ｌヱづ！ムエに遁土ゴニＬ亙」」上どｙ籏」Σ印−」」伊ヨ上些２谷シトを匙戦し１ご。

実施例３　単離ラット洗浄肺モデル動物の準備、圧力−容積曲線の登録、及び肺洗浄の実験手順は、マクリーン（ＭｃＬｅａｎ）ら［Ａｍ、　ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ。

（１９９２年）　Ｌ２９２−Ｌ３００］により変更された、ラット肺モデル［イケカミ（ｌｋｅｇａｍｉ）ら、（１９７９年）　Ｐｅｄｉａｔｒ、　Ｒｅｓ。

１３巻７７７−７８０頁コに記載されている。要約すると、成熟ラットの肺を３７℃で０．９％食塩水に懸濁し、Ｔ管によって水マノメーター及び空気充填した注射器に連結した。

圧力−容積曲線のデフレーションリム（ｄｅｆｌａｔｉｏｎ　ｌ　ｉｍｂ）を洗浄前、０．９％ＮａＣ１，１０ｍＭ　１−ＩＥＰＥｓ　（ｐＨ７，４）での徹底的な洗浄後、及ＵＯ１９％ＮａＣｌ、ＩＱ　ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝Ｍ（ｐＨ７゜４０）２　ｍｌ中の表面活性剤混合物の投与後に記録した。５０剛及び１０　ｃｍの１１２０圧力（ＰＣ５とＰＣＩＯ）下に肺全容１１１（ｔｏｆａｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ、ＸＴＬＣ）を計算することにより、成熟ラント肺の圧力 −容積（ｒ’−Ｖ）曲線のデフレーションリムを分析した。脂％ｊ　２５　ｍｇ　（３２ｕｍｏｌｅｓ）及びペプチド１吋の投与量で合成肺表面活性剤を成熟ラットの洗浄ずみの肺に添加後に、Ｈ２０圧力５　ｃｍと１０　ｃｍ　（ＰＣ５とＰＣＩＯ）での肺全容量の％を測定した。回復はＰＣ５に基づいている。

値は平均値＋　Ｓ、Ｅ、である、　ｐ＜０．０５で不足＠　（ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ）とは有音に異なる。比較は回復率、すなわちＰＣ５の場合、［ＰＣ５（十分ｊｌ　）−ＰＣ５（試験１ｉ）コ　Ｘ　１００％／ｌ：Ｐｃ５（十分Ｉｔ）−ＰＣ５（不足量）コに基づいており、平均値の特定的コン州キャリー）を使用して、分散量（ｖａｒｉａｎｃｅ）の一方向分析によフて行なわれた。洗浄と試験混合物による処理は、６％より大きい絶対ＴＬＣの変化を起こさなかった。

表２．成熟ラットの洗浄肺モデルでの天然／合成表面活性剤の効力ＰＣ５ＰＣ，。　回復率混合物　ｎ　（ＸＴＬＣ）　（ＳＴＬＣ）　（％）十分な肺　５０６８±１８７ ±１１００不足の肺５０１７±１４５±１０参考試料Ｉ＋　３　５６±３７９±２７７±５参考試料Ｉ４１３±１３１±２　 −Ｉ＋±８Ｓｅｑ　ＩＤ　Ｎｏ：ｌ＋ＤＰＰＣ２５３±５７５±５７９±１１Ｓｅｑ　ＩＤ　Ｎｏ：２＋０１”ＰＣ２４９±１７１±４７３±６Ｓｅｑ　ＩＤ　Ｎｏ：３＋ＤＰＰＣ２５０±３７３±２７３±５Ｓｅｑ　１０　Ｎｏ：４＋ＤＰＰＣ２４３±４６６±３６６±１Ｏ５ｅｑ　１０　Ｎｏ：５＋ＤＰＰＣｌ　３５　５７　３３Ｓｅｑ　１０　Ｎｏ：６＋ＤＰＰＣ２５０±２７２±２６９±４Ｓｅｑ　ＩＤ　Ｎｏニア＋ＤＰＰＣ２２８±　６　５５±　５　２３±　９譬考試料は、それぞれＤＰＰＣのみと犬肺表面活性剤からなり、これらを参考標準として用いた。参考試料１を以下のように調製した。ＤＰＰＣをアヴアンティ・リビット社から購入した。クロロホルム中の０ＰＰＣ（２５ｍｇ）を窒素流下に乾燥し、有機溶媒の痕跡量を除くために（夏結乾燥した。乾燥脂質混合物に水３−１を添加した。Ｅ１１！！物を４５℃で１時間、浴ソニケーター中で超音波処理しながら培養した。脂質を凍結乾燥し、４℃で１週間まで貯蔵し、０．９％ＮａＣｌ、２０−Ｍ　ＩＩＥＰＥｓｉｉ衝Ｗ　（ｐＨ７，４０）　９　ｍｌと混合した。４５℃で１時間培養中に定期的に混合した後、参考試料Ｉを成熟ラット肺モデルで試験した。参考試料■はラット肺のコンプライアンスを改善するうえて効果をもたず、肺表面活性剤として無効であった。参考試料１１を以下のように：ｌ！Ｉ製した。大肺表面活性剤を当業者に知られた方法で調製した。参考試料１１は５　ｃｍの水圧で十分なラット肺の〉７５％まで、肺容量を回復させる。

配列リスト（訂正前）（１）一般情報（１）出願人：マクリーン、ラリ−アール：エトワード、ピンセント　ジェイ（！１、発明の名称：ベブチト肺表面活性剤及び治療上の朝合せ（ｌＩｌ）配列数　°７（１ｖ）通信宛先（Ａ）宛先：メレル　ダウ　フ７−マスーティカルズインコーボレイテット（Ｂ）街　：　２１１０イースト　ガルプライス　ロート（Ｃ）市　：シンシナチ（０）州　ニオバイオ（Ｅ）国　：アメリカ合衆国（Ｆ）郵便番号：　４５２１５−６３００（１ｖ）コンピューター読取り形式（Ａ）　媒体タイプ：フロッピーディスク（Ｂ）　コンピューター：　ＩＢＮ　ＰＣ互換型（Ｃ）　Ｏ５：　ＰＣ−００５／ＭＳ−ＤＯ５（Ｄ）　ソフトウｘｉ ’：Ｐａｔｅｎｌｎ　Ｒｅ１ｅａｓｅ　ｌｔｌ、ｏ＋Ｖｅｒ、１１１．２５（ν ）現在の出願データ（Ａ）　出願番号：　Ｕ　５（Ｂ）　出願日　：（Ｃ）　分類（ｖｌ）前の出願データ（Ａ）　出願番号：　Ｕ　Ｓ　０７／９２２，２７９（Ｂ）　出願日　：１９９２年７月２９日（Ｖ目１）代理人情報（Ａ）　氏名：コリアー、ケネス　ジェイ（Ｂ）　登録番号：　３４．９Ｂ２（Ｃ）　参照／書類番号：Ｍ０１６５３　ＵＳ（ｉｘ）電信電話情報（６）電話：　（５１３）　９４８−７８３４（Ｈ）　テしファクス＋　（５１３）　９４８−７９６１（１）テレックス：　２１４３２０（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：＋＋、１ｍ間する情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ１４個のアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）　配列の種類（ＭＯＬＥＣＵＬＥ　ＴＹＰＥ）　：　ヘブチト（１ｘ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：１（Ｄ）　＃の情報　：／注”’Ｘａａ　＝Ｎ−α−バルーバルーグルタミン酸（）自ミヂトＧｌｕビ（１ｘ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：４（０）他の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　＝リジン十アミド（Ｌｙｓ−Ｎｌ２）” （ＸＩ）　配列（ＳＥＱＬＩＥＮＣＥ　ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥＱ　Ｉｎ　ＮＯ：ｌ：（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２ニ間する情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ１１１個のアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（０）トポロジー：直鎖状（１１）配列のｎ類（ＭＯＬＥＣＵＬＥ　ＴＹＰＥ）　：蛋白質（１ｘ）特徴（Ａ）　名前／キー：＃！飾位置（Ｂ）　位置　：１（Ｄ）　他の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　＝Ｎ−α−バルミチルーグルタミンｒｌＩ（１１”ルミエトＧｌｕ）”（ＩＸ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：　４（Ｄ）　他の情報　：／注＝”Ｘａａ　＝リジンー１−アミド（Ｌｙｓ−Ｎ）１２）　＋＋（ｘｌ）配列（ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２：（２）　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：３ニ関する情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ１４個のアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（０）トポロジー；直鎖状（１１）配列の種類（ＭＯＬＥＣＵＬＥ　ＴＹＰＥ）　：　ヘブチド（１ｘ）特徴（Ａ）　名前／キー：端飾位置（Ｂ）　位置　：　１（Ｄ）　他の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　＝Ｎ−α−バルミチルーグルタミン酸（メピルミｆルーＧｌｕ）“（１ｘ）特徴（＾）名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：４（Ｄ）　他の情報　：／注＝”Ｘａａ　＝リジンー１−アミド（Ｌｙｓ−Ｎｌ２）” （ｘｌ）配列（ＳＥＱＵＥＩＩＣＥ　ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：３：（２）　ＳＥＱ　ＩＩ）　ＮＯ：４に間する情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ１４個のアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（Ｄ）トボロノー：直鎖状（ＩＩ）配列の種類（ＭＯＬＥＣＵＬＥ　ＴＹＰＥ）　：ペプチド（１λ）特徴（Ａ）　名前／キー：ｌＩ飾位置（Ｂ）　位置　：１（Ｄ）　他の情報　：／注＝”Ｘａａ　＝Ｎ−α−バルーバルーグルタミン酸（ｌビルミチルーＧｌｕ）”（ＩＸ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：４（Ｄ）　他の情報　：／注＝“’Ｘａａ　＝リジンー１−アミド（Ｌｙｓ−Ｎｌ２）　” （ｘｉ）　ＩＥ列（ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：４：（２）　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５ニ閏スル情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ１４個のアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ｉｉ）配列ノ種類（ＭＯＬＥＣＵＬＥ　ＴＶＰＥ）　：ペプチド（１χ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（８）位置　：１（Ｄ）　他の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　＝（Ａ）　名前／キー：ｌＩ飾位置（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｌｙｓ−ＮＩＩ２）　” （ｘｌ）配列（ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５：Ｘａａ　Ｔｒｐ　Ｘａａ　Ｘａａ（２）　ＳＥａ　１０　ＮＯ：６に関する情報（１）配列の特徴（Ａ）　長さ：３ｉのアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖状（ＩＩ）配列の種類（ＭＯＬＥＣＵＬＥ　ＴＹｔ”Ｅ）　：ペプチド（１ｘ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　（立　置　：　１（Ｄ）　他の情報　：／注＝”Ｘａａ　：Ｎ−α−バルミチルートリブトファン（ｌＩ″ルミチトエトｐ）ＩＩ（ＩＸ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）イ装置：３（Ｄ）　池の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　＝リジンー１−アミド（Ｌｙｓ −Ｎｌ２）　” （ｘｌ）　配　クリ　（ＳＥＱＩＪ　いＣＥ　０ＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６：Ｘａａ　Ｇｌｕ　Ｘａａ（２）　ＳＥＱ　１０　ＮＯニアに関する情報（り配列の特徴（Ａ）　長さ１４個のアミノ酸（Ｂ）　種類：　アミノ酸（Ｏ）トポロジー：直鎖状り口）配列の種類（ＭＯＬＥＣｌＪＬＥ　ＴＶＰＥ）：ペプチド（１×）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：１（Ｄ）　他の情報　：／注：”Ｘａａ　＝Ｎ−α−オクタノイルーグルタミン酸（Ｉｆ″ルミチル−Ｇｌｕ）”（１ｘ）特徴（Ａ）　名前／キー：修飾位置（Ｂ）　位置　：３（Ｄ）　他の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　：２−アミノイソ酪酸（Ａ）　名前／キー：ｆ１飾位置（８）位置　：４（０）　他の情報　：／注＝　”　Ｘ　ａ　ａ　＝リジンー１−アミド（Ｌｙｓ −Ｎｌ２）” （ｘｌ）配列（ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＤＥＳＣＲＩＰＴＩＯＮ）：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：７：Ｆｉｇｕｒｅ　１スフシニルーＬｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌ　ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｙｓ−Ｎ　Ｈ２Ｆｉｇｕｒｅ　２パルミチルーＧＩＬＩ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＬｙＳ−ＮＨ２補正書の写い１訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成７年１月３０日

Claims

【特許請求の範囲】

１．天然の肺表面活性剤と一緒になった型の一種以上の脂質と一緒になったものである場合もあり得る、式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸であり、Ａ２は下ｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅから選ばれる疎水性アミノ酸であり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、０ｒｎ、又は結合であり、そしてＡ４はＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸であり、ここで、Ａ３が結合の時には、Ａ１とＡ２は入替え可能である。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩。
２．天然の肺表面活性剤と一緒になった型の一種以上の脂質と一緒になったものである場合もあり得る、式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸であり、Ａ２はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅから選ばれる疎水性アミノ酸であり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、又は結合であり、そしてＡ４はＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸である。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩。
３．天然の肺表面活性剤と一緒になった型の一種以上の脂質と一緒になったものである場合もあり得る、式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合、Ｇｌｕ又はＡｓｐであり、Ａ２はＴｒｐ、Ｇｌｕ、又はＡｓｐであり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ−Ｘであり、そしてＡ４はＬｙｓ又はＡｒｇである。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩。
４．Ａ１がＧｌｕである請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
５．Ａ２がＴｒｐである請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
６．Ａ３がＬｅｕである請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
７．Ａ４がＬｙｓである請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
８．Ｘがバルミトィルである請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
９．Ｙが一ＮＨ２である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
１０．バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリベブチド。
１１．バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｃｌｎ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリベブチド。
１２．バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
１３．バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリベブチド。
１４．バルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリベブチド。
１５．バルミトイル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
１６．オクタノイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）である請求項１〜３のいずれか一に記載のポリペプチド。
１７．式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸であり、Ａ２はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅから選ばれる疎水性アミノ酸であり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、又は結合であり、そしてＡ４はＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸であり、ここで、Ａ３が結合の時には、Ａ１とＡ２は入替え可能である。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩と、ＤＰＰＣ、ＰＣ、ＣＬ、ＰＧ、ＰＳ、ＦＡ、及びＴＧからなる群から選択される脂質又は脂質の混合物との複合体。
１８．式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸であり、Ａ２はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅから選ばれる疎水性アミノ酸であり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、又は結合であり、そしてＡ４はＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸である。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩と、ＤＰＰＣ、ＰＣ、ＣＬ、ＰＧ、ＰＳ、ＦＡ、及びＴＧからなる群から選択される脂質又は脂質の混合物の複合体。
１９．式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合又はＧｌｕであり、Ａ２はＴｒｐ又はＧｌｕであり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ−Ｘであり、そしてＡ４はＬｙｓである。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩と、ＤＰＰＣ、ＰＣ、ＣＬ、ＰＧ、ＰＳ、ＦＡ、及びＴＧからなる群から選択される脂質又は脂質の混合物の複合体。
２０．ＤＰＰＣが脂質の主要成分である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２１．脂質がＤＰＰＣとＰＧの混合物である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２２．脂質が、約８５〜１００％のＤＰＰＣと、約０〜１５％のＰＧからなる請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２３．ポリペプチドがアルミチル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２４．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２５．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２６．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２７．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２８．ポリペプチドがバルミトイル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
２９．ポリペプチドがオクタノイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）である請求項１７〜１９の何れか一に記載の複合体。
３０．式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸であり、Ａ２はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅから選ばれる疎水性アミノ酸であり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、又は結合であり、そしてＡ４はＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸であり、ここで、Ａ３が結合の時には、Ａ１とＡ２は入替え可能である。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩の有効量と、ＤＰＰＣ、ＰＣ、ＣＬ、ＰＧ、ＰＳ、ＦＡ、及びＴＧからなる群から選択される脂質又は脂質の混合物との複合体を、必要とする患者に投与することからなる、処置を必要とする患者の呼吸困難症候群を処置する方法。
３１．式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合であるか、又はＧｌｕ又はＡｓｐから選ばれる負に荷電されたアミノ酸であり、Ａ２はＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はｌｌｅから選ばれる疎水性アミノ酸であり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ、又は結合であり、そしてＡ４はＬｙｓ、Ａｒｇ、又はＨｉｓから選ばれる正に荷電されたアミノ酸である。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩と、ＤＰＰＣ、ＰＣ、ＣＬ、ＰＧ、ＰＳ、ＦＡ、及びＴＧからなる群から選択される脂質又は脂質の混合物の複合体を、必要とする患者に投与することからなる、処置を必要とする患者の呼吸困難症候群を処置する方法。
３２．式Ｘ−Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｙ〔式中、Ｘは８〜１８個の炭素原子のアシル又はアルキル基であり、Ｙは−ＯＨ又は−ＮＨ２であり、Ａ１は結合又はＣｌｕであり、Ａ２はＴｒｐ又はＧｌｕであり、Ａ３はＡｉｂ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｏｒｎ−Ｘであり、そしてＡ４はＬｙｓである。〕のポリペプチド、又はその光学活性異性体又は製薬上受け入れられるその塩と、ＤＰＰＣ、ＰＣ、ＣＬ、ＰＧ、ＰＳ、ＦＡ、及びＴＧからなる群から選択ざれる脂質又は脂質の混合物の複合体を、必要とする患者に投与することからなる、処置を必要とする患者の呼吸困難症候群を処置する方法。
３３．ＤＰＰＣが脂質の主要成分である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
３４．ＤＰＰＣが脂質である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
３５．脂質がＤＰＰＣとＰＧの混合物である請求項１７〜１９の何れか一に記載の方法。
３６．脂質が、約８５〜１００％のＤＰＰＣと、約０〜１５％のＰＧからなる請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
３７．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＨＯ：１）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
３８．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
３９．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
４０．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
４１．ポリペプチドがバルミトイル−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
４２．ポリペプチドがバルミトイル−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。
４３．ポリペプチドがオクタノイル−Ｃｌｕ−Ｔｒｐ−Ａｉｂ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）である請求項３０〜３２の何れか一に記載の方法。