JPH07509718A - タイプ３低含有量のヒト胎盤コラーゲン組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 タイプＩＩＩ氏Ａ　量のヒト胎盤コラ〜ゲン′支血丘１ 本発明は、医療用コラーゲン組成物の分野にあり、そして特に、タイプＩＩＩ低 含有量の胎盤由来ヒトコラーゲンに関する。

五Ｉ コラーゲンは、多くの動物の主要な線維状タンパク質である。コラーゲンは、人 体の全タンパク質の約３０％を占める。コラーゲンは、軟結合組織（例えば、皮 膚、靭帯および騰）の原線雑成分を構成し、そして骨および象牙質のような石灰 化組織の主要成分である。

コラーゲンは、プロリン／ヒドロキシプロリンに富んだ３本のポリペプチド鎖か らなる。少なくとも１２個の、遺伝学的に異なる形のコラーゲンがあることが知 られている。

４つの主要なタイプ（■、ＩＩ、ＩＩ＋、およびＩＶ）が特徴付けられている。

タイプＩは、軟結合組織および硬結合組織の両方の主要部分である。タイプｎコ ラーゲンは、軟骨の主要コラーゲンである。タイプＩＩＩは、血管、胚膜、およ び創傷中に見出される。基底膜コラーゲンは、タイプ＋Ｖとして分類される。

１９８０年代初期以来、注射可能なウシコラーゲンは、軟組織増強用に市販され てきた。このコラーゲンは、ウシの皮に由来し、そして酸に皮を溶解し、可溶性 コラーゲンをタンパク質分解的に消化してテロペプチドを除去し、そしてアテロ ペプチドコラーゲンを精製することにより調製される。次いで、このコラーゲン は、サブミクロン濾過により滅菌され、次いて再構成される。このコラーゲンの ２つの形（一方は架橋しておらず、そして他方は軽く架橋していル）ハ、現在、 ツレツレｚＹＤＥＲ１１１ｏオヨヒＺＹＰＬＡＳＴＯノ商品名テ市販されている 。いずれの形も、約９５％のタイプｎコラーゲンおよび５％のタイプＩＩ＋コラ ーゲンを含有する。

ヒトコラーゲンは、軟組織増強などの多くの適応のための生物材料として提案さ れた。ヒトコラーゲンは、ウシ由来コラーゲンよりも免疫原性が低いという利点 を有する。

ヒトコラーゲンは、ウィルスのようなヒトの病原体を確実に除去するための、追 加の処理工程を必要とするという欠屯を有する。

米国特許第５．００２．０７１号には、軟組織増強用の注射可能なヒトコラーゲ ン処方物が記載されている。この処方物においては、コラーゲンは、絨毛膜およ び／または羊膜のコラーゲンである。羊膜／絨毛膜は、他の、胎盤組織から単離 され、ホモジナイズされ、プロテアーゼで消化され、再構成され、そしてガンマ 照射により滅菌され架橋される。この特許（第１Ｏ欄、３７行目以下参照）によ れば、注射可能なヒト羊膜コラーゲンは、ウシＺＹＤＥＲＭ”およびＺＹＰＬＡ ＳＴ＠’製品よりもタイプＩＩＩコラーゲン、タイプｎコラーゲンの割合が非常 に高い（４３：５７）ことが示されている。この特許およびその実体審査の経過 によれば、タイプＩＩ＋コラーゲンは、タイプＩよりも架橋が多く、従ってタイ プＩよりも持続性が高いことが示されている。

本発明は、羊膜／絨毛膜組織のみの由来ではなく、全胎盤組織に由来し、タイプ ＩＩＩコラーゲンをｌｏＭ量％またはそれ未満にまで激減し、そして照射以外の 手段により滅菌される、コラーゲン材料に関する。米国特許第５．００２．０７ １号の記載に反して、このタイプＩＩＩコラーゲンの非常に少ないヒトコラーゲ ンは、比較的多量のタイプＩＩＩコラーゲンを含有するヒトコラーゲンよりも持 続性が高い。

免五旦皿ｊ 本発明は、タイプＩおよびタイプＩＩＩのヒト胎盤コラーゲンの、ホモジナイズ された非照射滅菌混合物を含有する医療用組成物であり、このタイプＩＩ＋コラ ーゲンは、この混合物の約１０重量％未満を構成する。

本発明のヒトコラーゲンは、米国特許第５，００２．０７１号に記載のヒトコラ ーゲン組成物とは、主に以下の３つの点て異なる　（１）本発明のヒトコラーゲ ンは、羊膜および／または絨毛膜のみの由来ではなく、全胎盤組織（羊膜、絨毛 膜、および他の胎盤組織を含む全胎盤）に由来する；（２）本発明のヒトコラー ゲンは、タイプＩＩ＋コラーゲンが非常に少なく、そして上記特許の組成物より も、タイプＩＩＩコラーゲンの含有量が非常に少ない、そして（３）本発明のヒ トコラーゲンは、照射により滅菌されない。第１の差異は、製造および処理され る胎盤あたりの生成物の収率の観点から重要である。

全胎盤組織を用いるため、羊膜／絨毛膜を手作業により分離する必要がない。羊 膜／絨毛膜のみではなく、全胎盤組織のコラーゲン成分が回収される。第２の差 異は、持続性が向上した（長寿命の）本発明の移植片を与えることであると考え られる。なぜなら、タイプＩＩＩコラーゲンは、タイプＩコラーゲンよりも迅速 に再吸収されることが知られているからである。さらに、４０％のタイプＩおよ び６０％のタイプＩＩＩのヒト胎盤コラーゲンの精製された処方物が評価され、 そしてこの処方物は、酸にはほんの部分的に可溶性であり、モして線維内に再構 成される能力が不十分であることが見出された。最後に、第３の差異により、コ ラーゲンの組成物（すなわち、架橋による）を望ましくない方法および／または 再現性のない方法で変化させ得る滅菌技法（照射）を用いずに済む。

本発明の注射可能な組成物は、約２０〜約１２０ｒｒ１ｇ／ｍｌ、好ましくは約 ３０〜１．ｏｏｎｇ／ａ′ｌｌの、生理学的に受容可能な注射可能な担体中に懸 濁した、ヒト再構成化（すなわち、原線雄性）胎盤コラーゲンを含有する。この コラーゲン自体は、全胎盤組織から得られ、２０°ＣでｐＨ２の塩酸に少なくと も約９５％可溶であり、タイプＩおよびタイプＩＩＩコラーゲンを少なくとも約 ９：ｌの重量比で構成し、そしてコラーゲン１ｍｇあたり約１０μｇ未満の炭水 化物を含有する。担体は、好ましくは、リドカインを含有するまたは含有しない 、Ｎ８２８ＰＯ４を含有する生理食塩水である。あるいは、このコラーゲンは、 薬学的に受容可能な非水性担体と共に処方され得る。

ヒ　コラー゛ンの−１ ヒト胎盤は、好ましくは、試験により肝炎ウィルスおよび旧Ｖに対して陰性であ った既知のドナーがら得られる。胎盤は、まず、酸およびエタノールで洗浄され て、血液および外来性残片を除去する。次いで、洗浄した胎盤組織は、低いｐＨ （２〜３）でプロテアーゼ（例えば、ペプシン）により処理されて、コラーゲン を溶解する。溶解したコラーゲンは、酸性および中性ｐＨで、一連の塩分固化に より処理されて、コラーゲンのタイプＩＩＩ含有量を約１０重量％未満まで低減 させる。タイプ■に富んだコラーゲンは、酸に溶解され、濾過され、溶液から再 構成され、そしてアセトンで洗浄される。得られたコラーゲン粉末は、再度、酸 に溶解され、そして滅菌濾過される。軟組織増強のための注射可能な材料として 使用するためには、このコラーゲンは、滅菌濾過溶液（グルタルアルデヒドまた はポリエチレングリコールのような二官能性化学架橋剤の添加による架橋を有す るまたは有さない）から沈澱し、ホモジナイズされ、そして生理学的に受容可能 なベヒクル中に再懸濁される。この懸濁液は、注射用シリンジ内に充填される。

この懸濁液は、３２ゲージまたはそれより大きい直径の針を介して注射可能であ るべきである。

（且ユ之ニヱ之二月１ 本発明のヒトコラーゲンは、精製ウシコラーゲンが用いられてきた多くの用途の いずれにおいても使用され得る。

このヒトコラーゲンを用いて、軟組織を増強し、多くの先天異常、後天性欠陥ま たは美容的欠陥を治療し得る。例として、片側顔面の小人症、頬部および頬骨の 形成不全、片側性乳房形成不全、漏斗胸、胸部無発育（ポランド（Ｐｏｌａｎｄ ）奇形）、および口蓋製修復または粘膜下口蓋裂く咽頭後浮植物（１ＩＩｌｐｌ ａｎυとして）に対して二次的に生じるロ蓋帆咽頭不全のような先天異常、陥凹 廠痕、皮下萎縮（例えば、円板状エリテマトーデスに対して二次的に生じる）、 摘出眼における眼球陥没（上溝症候群（ｓｕｐｅｒｉｏｒ　５ｕｌｃｕｓ　５ｙ ｎｄｒｏｆｆｌｅ）も）、顔面のざ癒痕、皮下萎縮を伴う線状強皮症、鞍鼻変形 、ロンベルク（Ｒｏｍｂｅｒｇ）病のような後天性欠陥（外傷後、手術後、感染 後）、ならびに眉間のしわ、深い鼻唇線、四周辺の地形的しわ、やせこけた頬、 および乳房形成不全のような美容的欠陥がある。

他の軟組織増強の用途としては、失禁治療用の泌尿器系括約筋または肛門括約筋 のような括約筋を修復または増強することである。

本発明のヒトコラーゲンは、米国特許第４．６００．５３３号；同第４．６５５ ．９８０号；および同第４．７２５．６７１号に記載されているように、膜、シ ート、チューブ、またはレンズ型のような他の成形体中に形成され、そして熱傷 治療、昶修復、または創傷修復のような、生体適合性の成形体を用いる医療用途 に用いられ得る。本発明の架橋された組成物は、脱水した微粒子材料の形態で用 いられ得る。

本発明のヒトコラーゲンは、米国特許第４．７４３．２２９号；同第４．７７６ 、８９０号：同第４．７７５．４６７号；同第４．７７４．２２７号；同第４、 ７８９．６６３号に記載されているように、硬組織の増強修復（例えば、骨、軟 骨、または歯の修復）用に、無機物、骨髄または他の微粒子材料と混合され得る 。

本発明のヒトコラーゲンは、米国特許第５．０２４．８４１号に記載されている ように、スポンジのようなマトリックス内に形成され得、これは、増殖因子また は薬物の担体として働き得る。

本発明のヒトコラーゲンは、米国特許第４．７７２．２８５号に記載されている ように、補綴具上にコートされ得る。

このような用途に関する上記特許の開示は、本明細書中に参考として援用される 。

以下の実施例により、さらに、本発明のヒトコラーゲンの調製およびその特性を 例示する。これらの実施例は、本発明をいかようにも限定することは意図されて いない。

ヒトコラーゲンの１造 ヒト胎盤を切断して小片にし、そしてクエン酸と混合した。この混合物を加圧フ ィルターに通し、そして濾液を捨てた。酸洗浄した組織をエタノールで数回洗浄 し、そして加圧濾過して組織から胎盤血液を除去した。次いで、この組織をＮａ Ｃ１で洗浄し、そして再度、加圧濾過した。

洗浄した組織を、ペプシンＴ１０００（１５５ｇ／１００ｋｇ）を含有する、ｐ Ｈ２，４までのクエン酸緩衝液中で１５時間消化した。消化物をクエン酸および ＮａＣ１で希釈し、そして遠心分離した。残存組織を、ペプシンＴ１０００（４ ５５ｇ／Ｌ）を含有する、ｐｉｔ２．４までのクエン酸緩衝液中で９０時間再消 化した。上記のように、消化物をクエン酸で希釈し、そして遠心分離した。

上清をＮａＣ１分画化により精製した。ＮａＣ１分画からの沈澱物を、ｐＨ２， ４までのクエン酸、ＮａＣｌ、およびペプシンＴ１００Ｏ中で６０時間消化した 。消化物を遠心分離し、そして中性ｐＨでＮａＣ１分画化により、上清を精製し た。

沈澱物を塩酸およびＮａＣ１中に溶解し、そして溶液を濾過した。ＮａＣ１の添 加により濾液からコラーゲンを沈澱させた：この混合物を１５時間放置し、次い で遠心分離した。得られた固形物をアセトンで数回洗浄し、そして滅菌空気を用 いて乾燥した。

得られたコラーゲン粉末は、１０％未満のタイプＩＩＩおよび残りのタイプＩを 含有していた（ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定された）。塩の含有量は、１０％未 満であり、重金属≦２０ｐｐｍ、炭水化物＜１０μｇ／コラーゲン１＋ｎｇであ り、そして内毒素濃度＜０．３内毒素単位／ｆｆ１１であった。この粉末を塩酸 （ｐｉｔ　２　）中１：溶解し、そして限外濾過により脱塩した。脱塩したコラ ーゲン溶液を予備濾過し、そしてオートクレーブ処理した貯蔵容器内に滅菌濾過 した。コラーゲンを、Ｎａ２）ＩＰＯ４の添加およびｐＨを約７．２まで上昇さ せることにより、この溶液から沈澱させた。沈澱したコラーゲンを、０．３％の リドカインを含有する、０．０２ＭのＮａｚｌｌＰＯ＜、０．１３ＭのＮａＣ１ を用いて、ペリスタポンプを介して再循環することによりホモジナイズし、そし て無菌的に滅菌シリンジ内に充填した。使用に備えるために、シリンジを１０℃ で貯蔵した。

インビ　ロの　ｒ何ぷ上 この試験を行い、上記のように調製したヒトコラーゲンが、ウシコラーゲン（Ｚ ＹＤＥＲＭ”コラーゲン移植物、ＺＣＩ）に対する過敏性であることがわかって いる患者から得た血清と反応するかどうかを測定した。

Ｌ屓 上記のように調製された酸溶解した原線雄状ヒト胎盤コラーゲン（ＨＣＩ）懸濁 液をｌｎｇ／ｍｌの初期濃度で用いて、ＥＬＩＳＡ試験用の多ウェルプレートを コートした。製造グレードのＺＣＩを、比較のために用いた。

ＺＣＩに対する過敏性反応が知られている患者からの３２個の血清（抗体力価≧ １６０）を、−８０°Ｃで貯蔵し、そして１年以内に用いた。ペルオキシダーゼ 標識した検出抗体（ヤギ抗ヒト免疫グロブリン）を、市販の供給源から得た。ウ サキ抗ウシ皮膚コラーゲンおよび正常なヒト血清を、それぞれポジティブおよび ネガティブコントロールとして用いｊこ。

酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて血清を試験した。節用に言え ば、ウシコラーゲンに対して過敏性である苧、者から得た血清を希釈し、そして 抗原をコートしたウェルに室温で４５分間添加した。インキュベーション後、プ レートを洗浄し、そして酵素標識した抗免疫グロブリンを、さらに４５分間添加 した。インキュベーション後、プレートを再度洗浄し、ＡＢＴＳ（ペルオキシダ ーゼ基質）で発色させ、そして色を４１４ｎｍの吸光度で読み取った。ヒト胎盤 コラーゲンを用いて、ウシコラーゲンに対するヒト抗体の交差反応性を、競争的 阻害ＥＬＩＳＡにおいてさらに試験した。最適に希釈した抗原を用いて、ガラス 製試験管内で、４°Ｃで一晩振盪しながら、初期の吸収を行った。次いで、同一 の間接ＥＬＩｓＡ系において、予備吸収した抗血清のアリコートを競争抗原にｔ ナシて試験した。

級深 ＺＣＩに対する抗体が示された患者がら得た血清は、測定可能なＨＣＩへの結合 は示さなかったが、ＺＣＩと反応する能力を保持していることを示した。ウサギ 抗ウシ皮膚コラーゲン抗血清を、ポジティブコントロールとして働いた。正常な ヒト血清は、ヒトおよびウシのコラーゲンの両方に対する抗体に対してネガティ ブであった。

競争的阻害Ｅｌ、ＩＳＡでは、ウシコラーゲン予備吸収のみが、ＺＣＩに対する 過敏性を有する患者から得た抗体の、ＺｃＩをコートしたプレートへの付着を低 下させた。ＨＣＩ予備吸収は、効果がなく、これにより、直接イムノアッセイで 見られた結果を確認した。

血２旦工Ωぷ上 動」１ｊ−云」イ：　ＨＣＩ　（３！ｏｎｇ／ｍｌ）を１２匹の成雄Ｓｐｒａｇ ｕｅ−Ｄａｙｌｅｙラットの右および左の肩甲骨上皮下腔内に（各０．５ｃｃ） 注射した。同数のラットがＺＣＩを受けた。各材料に対して４匹の動物を、注射 後７日目、３００日目よび９００日目屠殺した。外植片を湿ったまま秤量し、次 いで中性の緩衝化したホルマリン中に固定し、組織学的検査のために処理した。

ヒトコラーゲン（各０．１ｃｃ）も、４回の異なる時機に、すなわち屠殺前３０ 日、１４日、７日および０日に、麻酔した家畜用ブタの側背真皮肉に病巣ポーラ ス（ｆｏｃａｌ　ｂｏｌｕｓ）とじて注射した。このブタの反対側の側腹をＺＣ Ｉで処置した。

３２個の外植片（２つの材料×４つの時点×４つのサンプル）を、上記のように 、固定し、そして処理した。両方の実験から、パラフィンで固定した検体の切片 を作った；ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、そしてトリクローム染色し た：そして、顕微鏡で評価した。ブタの皮膚注射部位の側面方向の広がりおよび 水平方向の分布を、半定量的にそして接眼マイクロメータを用いて評価した。

での −２ｉｉ＝ラツト皮下組織（ｓｕｂｃｕｔｉｓ）においてインビボで７日後、ヒ トおよびウシの両方のコラーゲン移植物は、非常に凝集力があり、そして最小の 宿主の線維芽細胞の定着および周辺の線維形成を示した。軽度の炎症反応が、ヒ トコラーゲン移植物に隣接した結合組織において顕著であり、ＺＣＩの場合に見 られたよりもやや広範囲であった。両材料（これらは共に、ラットでは異種性で ある）に対する反応における炎症細胞集団は、顆粒球ならびに幾つかの小リンパ 球およびマクロファージからなっていた。すべての外植片について、湿った重量 は、この時点では同等であった。

３００日目、ヒトコラーゲン移植物は、ＺＣＩに非常に類似した原線雄性の特徴 を有していたが、ＺＣＩよりもわずかに微細に分かれた構造を有していた。宿主 の結合組織移植物により、生体適合性（いくらかの脂肪定着および周囲組織での 線維圧縮が厚くなることを含む）が高いことが示された。良性のリンパ組織球増 多浸潤巣が、この時点ではまだ顕著であった。ウシコラーゲン移植物は、外見上 はぼ全く類似していた。いくらがの石灰化がウシコラーゲンで検出されたが、こ の反応はラット皮下組織におけるコラーゲン移植物で観察され、そしてげっ歯頚 に特有である。この無機物の蓄積は、この中間の時点で見られたＨＣＩに比べ、 ＺＣＩの重量増加に寄与していた。ヒト胎盤コラーゲン移植物では、石灰化は観 察されなかった。

９００日目は、ＨＣＩ移植物は、ラット皮下組織でまだ検出可能であり、そして コラーゲン線維はさらにより微細に分かれ、宿主の脂肪細胞により、しばしば広 く定着していた。この時点までに、炎症反応は完全に消散していた。ウシコラー ゲン移植物は、石灰化し続け、これは、ＺＹＤＥＲＭＱコラーゲンがヒト真皮内 に置かれた場合には示されない特徴であった。

スタ：宿主の結合組織移植物の定着または炎症反応はいずれも、ブタの皮膚注射 部位から採取した初期（ｏｎｓｅｔ）サンプルのいずれにおいても顕著ではなか った。ＨＣＩおよびＺＣＩ移植物はいずれも、表皮（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ） 、剥皮（ｍｉｌｄ）、および深度（ｄｅｅｐ）の平面ならびに皮下の位置を占め ていた。

側面からの侵入程度には、材料間にいくらかの差異があった；ＨＣＩでは、注射 のとき、わずかに遠くへ広がっており、これは恐らく、ＭＣＩのあまり丈夫では ない、またはより微細な原線雄性の特徴によるものである。

７日目には、両材料はほんのわずかに定着し、線維芽細胞は、中−深真皮（ｆｆ ｌｉｄ−ｄｅｅｐ　ｄｅｒｍｉｓ）および皮下部（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｕｆｆｌ ）に主に分布された移植物の周辺部にのみ見出された。

いずれの材料も、側面方向の広がりの増大をあまり示さず、このことにより、元 の注射部位からの移動はほとんどないことが示された。この時点で、ヒトコラー ゲンは、好酸球成分との中程度のリンパ組織球増多の脈管周囲の炎症反応を生じ た。コラーゲン移植物内への好酸球細胞の浸潤は、げっ歯頚およびブタモデルで は、一般的かつ生体適合性の出来事である。ＺＣＩに対する細胞性免疫反応は、 類似しているが、幾分軽度であった。

２週間までは、両材料に対して、移植物の定着は依然として最小であった。皮下 組織の深部でのＨＣＩの損失は、ＺＣＩより、幾分進んでいた。一般に範囲およ び強度は低下するが、ＭＣＩに対する炎症反応は続いた。一方、ＺＣＩに対する 炎症反応は完全に消散した。

３０日までには、ＺＣＩ移植物は、線維芽細胞により中程度に定着し、そして時 折、巨大細胞反応があり、そして小細胞反応はなかった。これらの移植物を、頻 繁に皮下部内に配置した。ＺＣＩでは見られたヒトコラーゲン定着は遅れ、そし て移植物は、皮下部にのみ配置され、しばしば側面方向の広がりは減少し、そし て占有体積はより少なかった。ＨＣＩに対する炎症反応は、今や幾つかの移植物 に関連して見られる非常に軽度のリンパ系浸潤巣のみであった。

要約すると、ＨＣＩは、ラット皮下部およびブタ真皮では顕著に生体適合性であ った。ヒトコラーゲンは、ウシコラーゲン（ＺＣＩ）も同様であるように、これ らのレシピエンドでは異種性であることを思い出す必要がある。ＨＣＩは、ＺＣ Ｉに対する場合と同様に、軽度の一過性炎症反応を示しただけであった。

２ケ所のセンターにおいて、２重盲検試験を行った。患者は、ＨＣＩおよびＺＣ Ｉを各０．ｌｃｃずつ、左右の前腕の掌側表面内または左右の耳の後ろの皮膚内 に皮肉注射を受けた。追跡調査訪問を、注射後７日、２１日、および３００日目 設定した。各追跡調査訪問において、写真を撮影し、そして臨床的観察を行って 、臨床的な過敏性症状（例えば、紅斑、腫脹、硬変、掻痒、および圧痛）の存在 を記録した。

医師には、各部位をポジティブまたはネガティブ試験として記載するように依頼 した。この試験の目的のために、ポジティブ試験を、腫脹または掻痒を伴うか否 かに関わらず、４８時間を超えてかなり存在する紅斑または硬変と定義した。

生検を、両方の移植物部位で行った。生検を、７日目または３００日目いずれか に設定した。静脈切開を以下の間隔で行った　予備試験の移植、生検時、および ３００日目抗コラーゲン抗体の存在について、ＥＬＩＳ＾により、検体を調べた 。

患者として選択する基準は、ウシコラーゲン試験または治療に対する過敏性の記 録層を有する健常な患者とした。

患者の治療に対する反応が過去２年以内である場合、または患者が、先のウシコ ラーゲン曝露の後、全身的症状を経験していた場合には、被験者から除外した。

他の評価基準には、アナフィラキシ一様またはアナフィラキシ−反応の病歴、免 疫抑制剤の治療中の患者、および妊娠中または授乳中の女性が包含された。

紘１ ６人の平均年齢４５歳のコーカサス系女性を、試験への登録のために選別した。

年齢範囲は、２９歳から６１歳であった。

６人の患者は全て（１０１，１０２，１０３，１０４，２０１，２０２と命名す る）、ポジティブ皮膚試験の履歴を有していた：そのうち誰もＺＣＩ治療を継続 しなかった。

患者１０１は、右前腕に、掻痒および疼痛を伴う、紅斑、腫脹、および硬変（１ ４ｆｆｌｆｆｌ）を有していた（ＺＣＩ）。左腕（ＨＣＩ）は、他の兆候または 症状のない、４■の紅斑を示した。これらの部位の生検を７日目に行った。被験 者１０１の予備的な組織学的結果により、右腕の部位に中程度のリンパ球浸潤巣 が示され、このことは、コラーゲン移植物に対する過敏性反応と一致する。左腕 の生検の結果では、過敏性の形跡は何も示唆されない。

追跡調査の７日目および２１１日目は、患者１０２において、右腕（ＭＣＩ）の 皮膚試験部位には臨床的兆候または症状がなかったが、左腕（ＺＣＩ）の皮膚試 験部位には１８ｎｏｎの紅斑が現れた。

注射から７日後、患者１０３は、右腕（ＺＣＩ）の試験移植物部位に１８ｍｆｆ Ｉの紅斑、１２ａ＋ｎの硬変、および掻痒および疼痛を伴う腫脹を示したが、左 腕（ＨＣＩ）には、４ｍｆｆ１の紅斑しかなかった。追跡調査２１１日目は、こ の被験者の右腕（ＺＣＩ）は、依然としてポジティブ皮膚試験のように反応して いたが、左前腕の皮膚試験部位には、臨床的兆候または症状はなかった。

患者１０４では、右前腕（ＨＣＩ）および左前腕（ＺＣＩ）のいずれにも紅斑、 腫脹、および硬変が報告され、これらは注射後３６時間持続した。この患者は、 右側（ＨＣＩ）に左側（ＺＣＩ）よりわずかに顕著な反応があるとして記述した 。患者１０４には、いずれの移植物部位のポジティブ試験に対しても、基準に合 致する臨床的症状はなかった。組織学的には、炎症反応は見られず、そして抗ウ シコラーゲン抗体力価も測定不可能であった。

患者２０１は、耳の後ろに注射を受けた。７日目に、この患者は、右側（ＺＣＩ ）に、最初の２日間の痒みを伴った、４■の紅斑および硬変を示した。左耳（Ｈ ＣＩ）の後ろの皮膚試験部位には兆候または症状はなかった。

患者２０２は、左前腕（ＺＣＩ）に紅斑、腫脹、および硬変を経験し、これらは ７日目にはまだ見られた。右前腕（ＨＣＩ）には症状はなかった。

本発明を実施するための上記形態の改変は、生化学分野、医療分野、および関連 分野の当業者には自明であり、そして以下の請求の範囲の範囲内であることが意 図される。

フロントページの続き （７２）発明者　チュ、ジョージ アメリカ合衆国　カリフォルニア　９５０１４゜カパチーノ、ミラ　ビスツ　ア ベニュー

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．原線維状のタイプＩおよびタイプＩＩＩのヒト胎盤コラーゲンの、ホモジナ イズされた非照射滅菌混合物を含有する医療用組成物であって、該タイプＩＩＩ コラーゲンが、該混合物の約１０重量％未満を構成する、医療用組成物。
2. ２．前記コラーゲンが全胎盤組織から得られる、請求項１に記載の組成物。
3. ３．前記コラーゲンが、２０℃でｐＨ２の塩酸に少なくとも約９５％溶解し、そ して該コラーゲン１ｍｇあたり１０μｇ未満の炭水化物を含有する、請求項１に 記載の組成物。
4. ４．前記混合物が水性懸濁液であり、そして該懸濁液中の前記コラーゲンが約２ ０〜約１２０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度である、請求項１に記載の組成物。
5. ５．前記コラーゲンが架橋していない、請求項１に記載の組成物。
6. ６．前記コラーゲンが化学架橋剤で架橋されている、請求項１に記載の組成物。
7. ７．請求項１に記載の組成物の注射可能な処方物。
8. ８．請求項１に記載の組成物と無機物との混合物であって、該混合物が硬組織修 復に適している、混合物。
9. ９．調合薬と組み合わせた、請求項１に記載の組成物。
10. １０．脱水した微粒子材料の形態の、請求項６に記載の組成物。