JPH0768111B2

JPH0768111B2 - 口腔用組成物

Info

Publication number: JPH0768111B2
Application number: JP2059522A
Authority: JP
Inventors: 裕久水道; 倫子勝田; 正一中村
Original assignee: Sunstar Inc
Current assignee: Sunstar Inc
Priority date: 1990-03-09
Filing date: 1990-03-09
Publication date: 1995-07-26
Anticipated expiration: 2010-07-26
Also published as: JPH03261717A

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は口腔内細菌の歯牙および歯周組織への付着を抑
制する効果を有し、かつ、う蝕および歯周病の予防、治
療効果を有する口腔用組成物に関する。

従来の技術および課題う蝕や歯周病は、ある種の口腔内細菌が原因で発症する
ことが明らかであり、例えば、バクテロイデス・ジンジ
バリス（Bacteroides gingivalis）等の歯周病原性菌は
歯牙や歯周組織に付着、定着し、それらの菌の産生する
酵素や内毒素等により歯周組織を破壊し、歯周病を引き
起こす。

そのため、歯周病の発症を防止する目的でバクテロイデ
ス・ジンジバリスの付着を抑制する方法が検討され、例
えば、アミノ酸の一種であるアルギニンやリジンが該細
菌の頬粘膜上皮細胞への付着を抑制する等の報告がある
（口腔衛生学会誌38:590〜591、1988）。しかしなが
ら、これらは対象とする細胞が歯周組織由来のものでな
かったり、また、その効果が弱いという問題がある。

このような事情に鑑み、本発明者らは、う蝕および歯周
病の予防、治療に有効な薬剤について種々、検討したと
ころ、意外にも、特定のペプチドが適していることを見
出し、本発明を完成するに至った。

課題を解決するための手段本発明は、分子内に塩基性アミノ酸が２つ以上連続して
結合したペプチド部分を１ヶ所以上有する合計３〜34個
のアミノ酸からなるペプチドを配合してなる口腔用組成
物を提供するものである。

該ペプチドはバクテロイデス・ジンジバリス等の歯牙や
歯周組織への付着を効果的に抑制するので、本発明の口
腔用組成物はう蝕や歯周病の予防、治療用の歯磨剤や医
薬品として有用である。なお、本明細書で用いるペプチ
ドの構成アミノ酸およびその保護基等についての略号は
ペプチドの分野で通常用いられるものである。例えば、
Glyはグリシン、Hisはヒスチジン、Lysはリジン、Argは
アルギニン、Proはプロリン、Gluはグルタミン酸、Gln
はグルタミン、Serはセリン、Asnはアスパラギン、Val
はバリン、Ileはイソロイシン、Leuはロイシン、Tyrは
チロシン、Bocはｔ−ブトキシカルボニルを表す。

用いるペプチドは、分子内に塩基性アミノ酸、好ましく
は、アルギニン、リジン、ヒスジンが２つ以上、好まし
くは２〜４つ連続して結合したペプチド部分を１ヶ所以
上有する合計７〜34個のアミノ酸、好ましくは７〜24個
のアミノ酸からなるものである。かかるペプチドは、例
えば、後記の参考例に示すように、公知の方法によって
容易に合成できる。代表的なものとしては、Arg−Lys−
Arg−Ala−Arg−Lys−Glu、Lys−Arg−Gln−His−Pro−
Gly−Lys−Arg、Cys−Lys−Arg−Gln−His−Pro−Gly−
Lys−Arg−Cys、Lys−Lys−Arg−Pro−Gln−Arg−Ala−
Thr−Ser−Asn−Val−Phe−Ser、Ser−Tyr−Ser−Met−
Glu−His−Phe−Arg−Trp−Gly−Lys−Pro−Val−Gly−
Lys−Lys−Arg−Arg−Pro−Val−Lys−Val−Tyr−Pro、
Ala−Val−Ser−Glu−Ile−Gln−Leu−Met−His−Asn−
leu−Gly−Lys−His−Leu−Ala−Ser−Val−Glu−Arg−
Met−Gln−Trp−Leu−Arg−Lys−Lys−Leu−Gln−Asp−
Val−His−Asn−Phe、His−Arg−Gly−Tyr、Lys−His−
His−Ser−His−Arg−Gly−Tyr、Gly−Tyr−Lys−Arg−
Lys−Phe−His−Glu−Lys−His−His−Ser−His−Arg−
Gly−Tyr、Asp−Ser−His−Ala−Lys−Arg−His−His−
Gly−Tyr−Lys−Arg−Lys−Phe−His−Glu−Lys−His−
His−Ser−His−Arg−Gly−Tyrおよびこれらの−COOHお
よび−NH₂における製剤上許容される塩が挙げられる。

本発明の口腔用組成物においては、これらペプチドは単
独で、あるいは２種以上組合せて用いることができ、組
成物中の該ペプチド配合量は0.001〜５重量％、特に0.0
1〜0.5重量％が好ましい。

本発明の口腔用組成物は常法に従って、練歯磨、粉歯
磨、液状歯磨、マウスウオッシュ、チュウインガム、う
がい液、トローチ、パスタ、クリーム、軟膏剤、貼付
剤、錠剤のごとき歯磨類や医薬品とすることができる。
他の配合成分は特に限定するものではなく、通常、この
種の組成物に用いられる成分を配合できる。例えば、練
歯磨であれば研磨剤、粘結剤、湿潤剤、甘味剤、香料、
防腐剤、他の薬効剤等が適宜配合される。

医薬品の場合、内服の場合は、成人１日当たり、ペプチ
ド量として５〜50mg、外用の場合、ペプチド量として１
回に１〜数10mgの用量で、有害な副作用なしにう蝕や歯
周病の予防、治療に用いることができ、歯磨類の場合
は、これらの用量を勘案して常法に従って使用する。

作用以下、実験により本発明に用いるペプチドの作用を具体
的に示す。

（実験１）歯肉上皮細胞へのバクテロイデス・ジンジバリス381株
の付着に及ぼす影響嫌気条件下で、48時間培養したバクテロイデス・ジンジ
バリス381株を0.15M NaClを含む10mMリン酸塩緩衝液（p
H7.0、PBS）にてよく洗浄した後、PBSに懸濁した。一
方、ヒト歯肉上皮細胞を歯周炎の認められない成人より
採取し、よく洗浄した後、PBSに懸濁した。該細菌懸濁
液（１×10⁸菌体/ml）と上皮細胞懸濁液（１×10⁵細胞/
ml）を1mlずつ混合し、37℃で30分間、振盪しながらイ
ンチューベートし、バクテロイデス・ジンジバリス381
株の人歯肉上皮細胞への付着反応を行わせた。反応終了
後、上皮細胞を穴径12μｍのメンブレンフィルターにて
集めた。集めた上皮細胞をPBSに懸濁し、ガラススライ
ドに塗抹し、自然乾燥させた後、火炎固定してゲンチア
ナバイオレットで染色した。上皮細胞に付着した菌体数
を、光学顕微鏡下（倍率10〜40）で無作為に30個の上皮
細胞を選び、上皮細胞２個当たりの付着菌数で算定し
た。また、陰性対照として、上皮細胞をPBSのみと反応
させ、上皮細胞に初めから付着していた細菌数を求めて
陰性対照値とし、バクテロイデス・ジンジバリスの上皮
細胞への付着数として、前記算定値から陰性対照値を差
し引いた値を用いた。バクテロイデス・ジンジバリスの
上皮細胞への付着に及ぼすペプチドの影響はバクテロイ
デス・ジンジバリスを予め室温にて15時間、これらの物
質と反応させた後、前記と同様の方法で調べた。結果を
以下の第１表に示す。

第１表に示すごとく、比較例のペプチドでは抑制は認め
られなかったが、本発明に用いるペプチドは細胞の上皮
細胞への付着を著しく抑制した。

（実験２）唾液被覆ヒドロキシアパタイト（HAP）ビーズ上へのバ
クテロイデス・ジンジバリス381株の付着に及ぼす影響 20mgのHAPビーズをヒトの唾液（血液型Ｏ）0.5mlととも
に室温にて１時間インキュベートした。該ビーズを0.05
M KCl、1mM KH₂−PO₄、1mM CaCl₂および1mM MgCl₂から
なるpH6.0の緩衝液（この緩衝液は、唾液無機成分のモ
デルである）1mlで２回洗浄した。ついで、室温にて、
該ビーズをpH7.0の試料溶液0.5mlとともに１時間インキ
ュベートし、前記緩衝液1mlで２回洗浄した。

つぎに、前記緩衝液0.5ml中に［³H］チミジン標識バク
テリア（バクテロイデス・ジンジバリス）を5.0×10⁷個
含む懸濁液を該ビーズに添加し、室温にて１時間インキ
ュベートした。前記緩衝液1mlで３回洗浄し、ビーズを
バイアルに移し、液体シンチュレーションカウンターを
用いて放射能を計測した。一方、既知の［³H］標識細胞
の割合を同じ方法で計数し、バクテリア数の検量線を作
成した。結果を以下の第２表に示す。

第２表に示すごとく、本発明に用いるペプチドにより細
菌の唾液被覆HAPへの付着が著しく抑制された。

（実験３）バクテロイデス・ジンジバリスの付着阻害におけるペプ
チドの濃度依存性種々の濃度を有するペプチド用い、実験１の方法と同様
にペプチドによるバクテロイデス・ジンジバリスの歯肉
上皮細胞への付着阻害効果を調べた。結果を以下の第３
表に示す。

第３表に示すごとく、濃度0.001mMにおいてもペプチド
の付着阻害効果が認められた。

（実験４）ペプチドによる歯周局所へのバクテロイデス・ジンジバ
リスの定着阻害効果５週令の無菌ハムスター６匹を２群に分け、実験開始
日、第１群のハムスターの下顎臼歯に綿棒で0.1mM薬液
を塗布し、第２群には対照としてPBSを塗布した。引き
続き、対象の臼歯に結紮糸を施し、約10⁹/mlに調製した
バクテロイデス・ジンジバリスESO132株生菌液を投与し
た。

その後、薬液およびPBS溶液の塗布は１日１回で、毎日
行い、菌液の投与は１週間に２回の割合で６週間にわた
って行った。

最終菌液投与後、１週間後に被験部位の歯肉の炎症の程
度を観察すると共に、結紮糸をはずした後、その部位の
プラークをキュレットで採取し、嫌気的に保持したリン
ガー液に懸濁し、このサンプル中のバクテロイデス・ジ
ンジバリス数を培養法により計数した。結果を以下の第
４表に示す。

第４表に示すごとく、薬液処理群では、対照群に比べて
歯周局所へのバクテロイデス・ジンジバリスの定着が著
しく抑制されると共に、歯肉の炎症の程度も軽かった。

実施例つぎに参考例および実施例を挙げて本発明をさらに詳し
く説明する。実施例中、「％」はいずれも重量％であ
る。

参考例用いたペプチドはBoc−アミノ酸無水物法を採用してい
るABIペプチドシンセサイザー430Aを用いて固相法によ
り合成した。側鎖を保護したBoc−アミノ誘導体はAsp
（ＯｃHex）、Ser（Bzl）、His（π−Bom）、Lys（１−
ｚ）、Arg（Tos）、Tyr（Br−Ｚ）およびGlu（ＯｃHe
x）であり、合成の出発物質としてBoc−Tyr（Br−Ｚ）
−PAM樹脂を用いたペプチド鎖の組み立てが終了した
後、ペプチドが結合した樹脂を10％アニソールを含む無
水HFで、０℃にて75分処理した。HFを蒸発させた後、遊
離したペプチドを５％酢酸で抽出し、凍結乾燥した。粗
ペプチドはODSカラムで精製し、凍結乾燥した。つい
で、得られたペプチドを塩酸110℃にて24時間加水分解
し、各々、アミノ酸含量を測定した。代表的なペプチド
のアミノ酸含量を以下に示す。

実施例１（練歯磨）つぎの処方により、常法に従って練歯磨を製造した。

成分配合量（重量％）第二リン酸カルシウム 45.0 カルボキシメチル Lys−His−His−Ser−His−Arg−Gly−Tyr 0.5 Gly−Tyr−Lys−Arg−Lys−Phe−His−Glu−Lys−His−
His−Ser−His−Arg−Gly−Tyr 0.5 セルロースナトリウム 0.5 グリセリン 20.0 ラウリル硫酸ナトリウム 1.5 サッカリンナトリウム 0.1 蒸留水 100％に調製実施例２（練歯磨）つぎの処方により、常法に従って練歯磨を製造した。

成分配合量（重量％）炭酸カルシウム 45.0 Gly−Tyr−Lys−Arg−Lys−Phe−His−Glu−Lys−His−
His−Ser−His−Arg−Gly−Tyr 1.0 セルロースナトリウム 1.0 グリセリン 20.0 ラウリル硫酸ナトリウム 1.5 サッカリンナトリウム 0.1 香料 1.2 蒸留水 100％に調製実施例３（マウスウオッシュ）つぎの処方により、常法に従ってマウスウオッシュを製
造した。

成分配合量（重量％）エタノール 10.0 Lys−His−His−Ser−His−Arg−Gly−Tyr 0.1 ポリオキシエチレン（60EO） 0.5 硬化ヒマシ油モノオレイン酸ポリオキシエチレン 0.5 （20EO）ソルビタンサッカリンナトリウム 0.2 防腐剤および香料 0.8 蒸留水 100％に調製実施例４（マウスウオッシュ）つぎの処方により、常法に従ってマウスウオッシュを製
造した。

成分配合量（重量％）エタノール 15 グリセリン 15 ポリオキシエチレン（60EO） 1 硬化ヒマシ油 Asp−Ser−His−Ala−Lys−Arg−His−His−Gly−Tyr−
Lys−Arg−Lys−Phe−His−Glu−Lys−His−His−Ser−
His−Arg−Gly−Tyr 0.05 塩化セチルピリジニウム 0.05 サッカリンナトリウム 0.1 香料 0.5 蒸留水 100％に調製実施例５（口腔用パスタ）つぎの処方により、常法に従って口腔用パスタを製造し
た。

成分配合量（重量％）白色ワセリン 10.0 ステアリンアルコール 8.0 プロピレングリコール 5.6 ラウリル硫酸ナトリウム 0.6 パラオキシ安息香酸エチル 0.01 蒸留水 16.0 Lys−His−His−Ser−His−Arg−Gly−Tyr 2.0 カルボキシメチルセルロース 100％に調製ナトリウム発明の効果本発明によれば、う蝕および歯周病の予防、治療に有用
な口腔用組成物が得られる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】分子内に塩基性アミノ酸が２つ以上連続し
て結合したペプチド部分を１ケ所以上有する合計７〜34
個のアミノ酸からなるペプチドを配合してなることを特
徴とする口腔用組成物。