JPH0769901A - デキストランサルフェイトのプラスミノゲンアクチベータ インヒビター抑制による線溶活性増強法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 血栓溶解療法において血栓溶解酵素とともに
デキストランサルフェイト（ＤＳ）を併用することによ
り、血液中のプラスミゲンアクチベータインヒビターの
活性をＤＳにより抑制することにより、血栓溶解酵素に
よる線溶活性を増強させ、効率的な血栓溶解効果を実現
する。 【構成】 デキストランサルフェイト（ＤＳ）は血栓溶
解酵素であるプラスミノゲンアクチベータ（本実施例で
は ｕ−ＰＡ）の酵素活性を直接的に増強させるだけで
なく、血液中に大量に存在するプラスミノゲンアクチベ
ータインヒビター（ＰＡＩ、特に１型ＰＡＩ、ＰＡＩ−
１）の阻害活性を抑制する。本発明は特にＤＳがＰＡＩ
−１の阻害活性を抑制する機構を利用し、結果的に血栓
溶解酵素による線溶活性を増強させることから構成され
る。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、血栓溶解療法におけるデキストランサルフェ
イトの血栓溶解酵素との併用法に関する。具体的には血
栓溶解治療においてデキストランサルフェイト（ＤＳ）
の併用により、ＤＳによるプラスミノゲンアクチベータ
（ＰＡ）の酵素活性の増強作用および血中のＰＡインヒ
ビター（ＰＡＩ）の抑制作用の両作用により、血栓溶解
酵素としてのＰＡによる血栓溶解効率の上昇効果を実現
するものである。血液の線溶系は生体内のＰＡ（ｔ−Ｐ
Ａ，ｕ−ＰＡ）が血中に存在する前駆体のプラスミノゲ
ンをプラスミンに活性化し、プラスミンが血栓の主構成
成分のフィブリンを溶解する機構である。従って、血管
内に形成された血栓により発症する心筋梗塞などの治療
には酵素製剤としてのｔ−ＰＡやｕ−ＰＡ（ウロキナー
ゼ）が使用されてきた。線溶系には抑制系も存在し、Ｐ
ＡにはＰＡインヒビター（ＰＡＩ）が、プラスミンには
α２−プラスミンインヒビター（α２−ＰＩ）が、それ
ぞれ特異的に阻害するためプラスミンへの活性化および
プラスミン活性の抑制によりフィブリン分解が抑制され
る。血液内には主に血管内皮細胞から分泌される１型の
ＰＡＩ（ＰＡＩ−１）が大量に存在し、ｕ−ＰＡやｔ−
ＰＡ投与時にはこれらのＰＡ活性は主にＰＡＩ−１によ
り失活化されることが考えられる。以上のことから、血
栓溶解を効率的かつ効果的に実現するためにはＰＡ活性
を増強させること、およびＰＡＩによる阻害活性を抑制
することの両面から考えることが合理的である。ＤＳを
ウサギに静注するとその血漿のユーグロブリン分画の線
溶活性の増加がみられる（松尾ら、トロンボシス リサ
ーチ１３：１１２５−１１３０，１９８７）。この線溶
活性の増加の一部は凝固系第１２因子／プレカリクレイ
ン系を介していると考えられる。またヒトにおいては人
工骨移植中、後に際する血栓症発症の予防および治療の
目的でＤＳが使用されている。しかしながら、ＤＳによ
る上述の線溶系因子（ｕ−ＰＡ，ｔ−ＰＡ，ＰＡＩ−１
など）への直接的な作用機構は明らかにされておらず、
従って、ＤＳを血栓溶解酵素との併用に用いた例はな
い。本発明では、ＤＳがこれらの線溶系因子のうち、ｕ
−ＰＡに対してはその酵素活性増強効果を、ＰＡＩ−１
に対してはその阻害活性の抑制効果を有することを見だ
した。従って、本発明は、ＰＡによる血栓溶解療法に際
して、ＤＳをＰＡと併用することに関する。本発明が使
用できる疾患の例としては、心筋梗塞をはじめ、脳梗
塞、肺塞栓、深部静脈血栓などすべての血栓、塞栓症、
あるいは整形外科領域における人工骨移植に伴う血栓症
などである。本発明の有効性はフィブリンクロット溶解
時間、合成基質分解活性の測定法により、以下の実施例
を用いて詳細に説明する。 実施例 １ ＤＳ存在下におけるｕ−ＰＡによるフィブリンクロット
溶解時間の測定 本実施例では平均分子量 ５００，０００のＤＳ（ＤＳ
−Ｐ）、分子量 ７，０００−８，０００のＤＳ（ＤＳ
−Ｔ）および分子量３，５００−４，０００のＤＳ（Ｄ
Ｓ−Ａ）を用いての評価を示す。精製フィブリノゲン
（４ｍｇ／ｍｌただし１％のプラスミノゲンを含む）に
２本鎖型ｕ−ＰＡ（１２５国際単位／ｍｌ）、各ＤＳの
高濃度（ＤＳ−Ａ，ＤＳ−Ｔは１０μｇ／ｍｌ、ＤＳ−
Ｐは１μｇ／ｍｌ）、低濃度（ＤＳ−Ａ，ＤＳ−Ｔは１
μｇ／ｍｌ、ＤＳ−Ｐは０．１μｇ／ｍｌ）を加え、抗
第１２因子抗体および抗プレカリクレイン抗体存在化で
トロンビン（５単位／ｍｌ／塩化カルシウム（２５ｍ
Ｍ）により、フィブリンクロットを作製した。このフィ
ブリンクロットを３７℃下でフィブリンクロット溶解に
伴う吸光度（４０５ｎｍ）の減少を経時的に測定した。
フィブリンクロットが１００％溶解するのに要する時間
の１／２（ｔ１／２）を求めた（表１）。その結果、各
ＤＳ（高濃度、低濃度）存在下ではいずれもＤＳ非存在
下に比べ、明らかに有意なフィブリンクロット溶解時間
の短縮が見られた。以上から、ＤＳによるｕ−ＰＡを介
した線溶活性の増加が示された。 実施例 ２ ＤＳ存在下におけるＰＡＩ−１、ｕ−ＰＡによるフィブ
リンクロット溶解時間の測定 本実施例ではフィブリンクロット作製の際、各ＤＳの高
濃度を用いて、ｕ−ＰＡ（１２５国際単位／ｍｌ）およ
びＰＡＩ−１を添加し、実施例１と同様に解析した（表
２）。その結果、ＰＡＩ−１によるフィブリンクロット
溶解の抑制もＤＳ存在下で改善された。以上から、ＤＳ
によるＰＡＩ−１阻害活性の抑制を介した線溶活性の増
加が示された。 実施例 ３ ＤＳ存在下におけるｕ−ＰＡによる合成基質水解活性の
測定 本実施例ではＤＳ−Ａ（１０ｕｇ／ｍｌ）を用いた。ｕ
−ＰＡに対する特異的合成基質Ｌ−ｐｙｒｏｇｌｕ−ｔ
ａｍｙｌ−ｇｌｙｃｙｌ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ−ｐ−
ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ（Ｓ−２４４４）を用いて、
ＤＳ存在下でのｕ−ＰＡによるＳ−２４４４水解活性を
測定した（図１）。この反応系において、まず、ｕ−Ｐ
Ａ（５０国際単位／ｍｌ）単独の場合（符号−５）、ｕ
−ＰＡとＤＳ−Ａ（１０μｇ／ｍｌ）を３７℃、１５分
反応させたもの（符号−４）、ｕ−ＰＡとＤＳ−Ａ（１
０μｇ／ｍｌ）を３７℃、１５分反応させた後、さらに
ＰＡＩ−１を加えたもの（符号−２）、ｕ−ＰＡとＰＡ
Ｉ−１を３７℃、１５分反応させたもの（符号−６）、
ｕ−ＰＡとＰＡＩ−１を３７℃、１５分反応させた後、
ＤＳを加えたもの（符号−３）、および、ＰＡＩ−１と
ＤＳを３７℃、１５分反応させた後、ｕ−ＰＡを加えた
もの（符号−１）に対してＳ−２４４４の水解活性を吸
光度４０５ｎｍにて測定した。その結果、ｕ−ＰＡによ
るＳ−２４４４の水解活性はＤＳにより著明に増加し
た。一方、ＰＡＩ−１存在下でのｕ−ＰＡによるＳ−２
４４４の水解活性の減少はＤＳの添加により改善され、
ｕ−ＰＡ単独の場合よりも高値を示した。さらに、ＰＡ
Ｉ−１をＤＳで処理したものはｕ−ＰＡによるＳ−２４
４４の水解活性をわずかしか抑制しなかった。また、ｕ
−ＰＡをＤＳで処理しておくと、ＰＡＩ−１による阻害
を受けにくかった。以上のことから、本実施例において
も、ＤＳはｕ−ＰＡの活性増強作用とＰＡＩ−１による
阻害活性の抑制作用のあることが示された。

【図面の簡単な説明】 ［図１］ＤＳ存在下におけるｕ−ＰＡによる合成基質水
解活性を示した説明図である。 ［符号の説明］ １ ＰＡＩ−１のＤＳ処理後のｕ−ＰＡとの反応系 ２ ｕ−ＰＡのＤＳ処理後のＰＡＩ−１との反応系 ３ ｕ−ＰＡのＰＡＩ−１処理後のＤＳ下での反応系 ４ ｕ−ＰＡのＤＳ存在下での反応系 ５ ｕ−ＰＡ単独の反応系 ６ ｕ−ＰＡとＰＡＩ−１との反応系 【表１】 【表２】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［請求項１］ デキストランサルフェイト（ＤＳ）のプ
   ラスミノゲンアクチベータインヒビター抑制による線溶
   活性増強法。 ［請求項２］ 請求項１による血栓溶解療法の補充療
   法。 ［請求項３］ 低分子−高分子量のすべてのＤＳを含む
   ポリサッカライドを用いる請求項１に記載の使用。 ［請求項４］ 血栓溶解酵素としては組織性プラスミノ
   ゲンアクチベータ（ｔ−ＰＡ）、およびｔ−ＰＡの遺伝
   子操作などによる変異体、ウロキナーゼ型プラスミノゲ
   ンアクチベータ（ｕ−ＰＡ）、およびｕ−ＰＡの遺伝子
   操作などによる変異体、ストレプトキナーゼ（ＳＫ）、
   アシル化プラスミノゲン／ＳＫ複合体（ＡＰＳＡＣ）、
   スタフィロキナーゼ（ＳＡＫ）、その他これらから誘導
   されるプラスミノゲンアクチベータ（ＰＡ）を用いる請
   求項１に記載の使用。 ［請求項５］ 請求項１に記載のＰＡと請求項２に記載
   のＤＳとの組み合わせでＰＡとＤＳの同時投与、ＤＳ投
   与後のＰＡ投与、およびＰＡ投与後のＤＳ投与による請
   求項１に記載の使用。