JPH0771491B2 - 細菌のプロモ−タ−の活性のための方法 - Google Patents
細菌のプロモ−タ−の活性のための方法Info
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- JPH0771491B2 JPH0771491B2 JP60118983A JP11898385A JPH0771491B2 JP H0771491 B2 JPH0771491 B2 JP H0771491B2 JP 60118983 A JP60118983 A JP 60118983A JP 11898385 A JP11898385 A JP 11898385A JP H0771491 B2 JPH0771491 B2 JP H0771491B2
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- genes
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 A.ツメファシエンス（A.tumefaciens）のTi−プラスミ
ドのvir−領域の遺伝子（これは細菌のビルレンス性の
ために必須である）は、この細菌が標準合成培地上で培
養される場合、発現しないか又はかろうじて発現するに
過ぎない。この事は、前記遺伝子の適切なプロモーター
領域が十分に活性化されていない事実に基づいている。
ドのvir−領域の遺伝子（これは細菌のビルレンス性の
ために必須である）は、この細菌が標準合成培地上で培
養される場合、発現しないか又はかろうじて発現するに
過ぎない。この事は、前記遺伝子の適切なプロモーター
領域が十分に活性化されていない事実に基づいている。
細菌は、完全な活性化のために傷つけられた又は傷つけ
られていない植物又は植物由来のする物質と接触される
べきであるということがわかった。ここで記載するvirC
のプロモーターの誘発は、A.ツメファシエンスだけでな
く、またプロモーターがE.コライ（E.coli）（この細菌
はA.ツメファシエンスとほとんど関係ない）において構
成される場合にも生じる。これらの又は同じ様なプロモ
ーターは、また他のTi−プラスミド、Ri−プラスミド
〔A.リゾジンズ（A.rhizogenes）〕，リゾビアム（Rhiz
obium）のsym−プラスミドそして多分、また他の植物関
与の微生物中に存在する。今や、この発見は、ある遺伝
子の前にそのようなプロモーターを構成する事によって
これらの遺伝子発現を条件付きで生じさせることを可能
にする。この発明は広範囲の微生物に適用できる。たと
えばこのプロモーターは、植物と接触している細菌がサ
イダーオフォアー（Siderophores）（これは植物病原菌
に対する防護によって増収効果を有する物質である）の
産生に進行したプスードモナスPseudomonas菌株の造成
に適用されうる。これに関連して、防護，増殖促進，及
び収穫の産生物増加（これは問題の微生物と接触され
る）のために適切な微生物によって産生される他のタン
パク質を、たとえどの方法においてもだれでもがまた考
えるかも知れない。従って、防護は、農業化学薬品、昆
虫、病原菌、寒冷、乾燥化及び塩性化（“塩”抵抗性）
に対して抵抗性をもたらす事に向けられることができ
る。このタイプのプロモーターは、また、産生性微生物
又は細胞のために有害であり又はさもなければ増殖抑制
である物質のバッチ培養において、いつでも所望する時
に、産生を開始させるための可能性を開く。
られていない植物又は植物由来のする物質と接触される
べきであるということがわかった。ここで記載するvirC
のプロモーターの誘発は、A.ツメファシエンスだけでな
く、またプロモーターがE.コライ（E.coli）（この細菌
はA.ツメファシエンスとほとんど関係ない）において構
成される場合にも生じる。これらの又は同じ様なプロモ
ーターは、また他のTi−プラスミド、Ri−プラスミド
〔A.リゾジンズ（A.rhizogenes）〕，リゾビアム（Rhiz
obium）のsym−プラスミドそして多分、また他の植物関
与の微生物中に存在する。今や、この発見は、ある遺伝
子の前にそのようなプロモーターを構成する事によって
これらの遺伝子発現を条件付きで生じさせることを可能
にする。この発明は広範囲の微生物に適用できる。たと
えばこのプロモーターは、植物と接触している細菌がサ
イダーオフォアー（Siderophores）（これは植物病原菌
に対する防護によって増収効果を有する物質である）の
産生に進行したプスードモナスPseudomonas菌株の造成
に適用されうる。これに関連して、防護，増殖促進，及
び収穫の産生物増加（これは問題の微生物と接触され
る）のために適切な微生物によって産生される他のタン
パク質を、たとえどの方法においてもだれでもがまた考
えるかも知れない。従って、防護は、農業化学薬品、昆
虫、病原菌、寒冷、乾燥化及び塩性化（“塩”抵抗性）
に対して抵抗性をもたらす事に向けられることができ
る。このタイプのプロモーターは、また、産生性微生物
又は細胞のために有害であり又はさもなければ増殖抑制
である物質のバッチ培養において、いつでも所望する時
に、産生を開始させるための可能性を開く。
アグロバクテリアム ツメファシエンス（Agrobacteriu
m tumefaciens）は、新しい遺伝特性によりほとんどの
被子植物の細胞を供給することができる。この形質転換
は双子葉植物に腫瘍をもたらす。腫瘍形成はすべての単
子葉植物にわ存在しないが、しかし最近見つけられたよ
うに、いくらかの単子葉類種がA.ツメファシエンスによ
って形質転換されることができる（オランダ特許出願84
01048）．この形質転換の原因である遺伝子は、ウィル
ス菌株に存在する腫瘍−誘発性（Ti）プラスミドに位置
されている〔ヴァン ラーレビィク，など.,ネイチュア
ー（Nature）（ロンドン）252,169〜170（1974）；ザァ
エネン，など.,ジャーナル オブ ザ モレキュラーバ
イオロジィ（Journal of the Molecular Biology）86,1
09〜127（1979）〕.Ti−プラスミド上の２つの領域が、
腫瘍誘発のために不可欠である。Ｔ−領域は、植物細胞
に移され、その核のDNAに挿入され、そして形質転換さ
れた植物細胞の腫瘍性質の原因である遺伝子を含むTi−
プラスミドの一部である〔チルハン，など.,セル（Cel
l）11,263〜271（1977）；オームズ，など.,ジーン（Ge
ne）14,33〜50（1981）〕． Ｔ−領域に加えて、細菌のビルレンス性質に必須のTi−
プラスミド上にまだ第２の領域がある〔オームズ，な
ど.,ジャーナル オブ ザ バクテリオロジィ（Journa
l of the Bacteriology）144,82〜91（1980）；ガーフ
ィンクル，など.,ジャーナル オブ ザ バクテリオロ
ジィ（Journal of the Bacteriology）144,732〜743
（1980）〕．このvir（ビルレンス）領域における突然
変異は、非ビルレンス性又は宿主−特異弱化ビルレンス
性を引き起こす。vir−領域においては、７つの遺伝子
座（vir A,B,C,D,E,F,及びＯ）が指定されている。これ
らの遺伝子座における突然変異体は、自然に存在する又
は、クローン又はＲ′−プラスミド上に存在する遺伝子
によって、transにおいて十分にそれらに補足的である
〔ヒル，など.,プラスミド７（Plasmid 7）,107〜118
（1982）；クリー，など.,ジャーナル オブ ザ バク
テリオロジィ（Journal of the Bacteriology）150,327
〜331（1982）〕．これは、これらの遺伝子の生産物が
細菌内でそれらの機能を実施するという事を指的してい
る。
m tumefaciens）は、新しい遺伝特性によりほとんどの
被子植物の細胞を供給することができる。この形質転換
は双子葉植物に腫瘍をもたらす。腫瘍形成はすべての単
子葉植物にわ存在しないが、しかし最近見つけられたよ
うに、いくらかの単子葉類種がA.ツメファシエンスによ
って形質転換されることができる（オランダ特許出願84
01048）．この形質転換の原因である遺伝子は、ウィル
ス菌株に存在する腫瘍−誘発性（Ti）プラスミドに位置
されている〔ヴァン ラーレビィク，など.,ネイチュア
ー（Nature）（ロンドン）252,169〜170（1974）；ザァ
エネン，など.,ジャーナル オブ ザ モレキュラーバ
イオロジィ（Journal of the Molecular Biology）86,1
09〜127（1979）〕.Ti−プラスミド上の２つの領域が、
腫瘍誘発のために不可欠である。Ｔ−領域は、植物細胞
に移され、その核のDNAに挿入され、そして形質転換さ
れた植物細胞の腫瘍性質の原因である遺伝子を含むTi−
プラスミドの一部である〔チルハン，など.,セル（Cel
l）11,263〜271（1977）；オームズ，など.,ジーン（Ge
ne）14,33〜50（1981）〕． Ｔ−領域に加えて、細菌のビルレンス性質に必須のTi−
プラスミド上にまだ第２の領域がある〔オームズ，な
ど.,ジャーナル オブ ザ バクテリオロジィ（Journa
l of the Bacteriology）144,82〜91（1980）；ガーフ
ィンクル，など.,ジャーナル オブ ザ バクテリオロ
ジィ（Journal of the Bacteriology）144,732〜743
（1980）〕．このvir（ビルレンス）領域における突然
変異は、非ビルレンス性又は宿主−特異弱化ビルレンス
性を引き起こす。vir−領域においては、７つの遺伝子
座（vir A,B,C,D,E,F,及びＯ）が指定されている。これ
らの遺伝子座における突然変異体は、自然に存在する又
は、クローン又はＲ′−プラスミド上に存在する遺伝子
によって、transにおいて十分にそれらに補足的である
〔ヒル，など.,プラスミド７（Plasmid 7）,107〜118
（1982）；クリー，など.,ジャーナル オブ ザ バク
テリオロジィ（Journal of the Bacteriology）150,327
〜331（1982）〕．これは、これらの遺伝子の生産物が
細菌内でそれらの機能を実施するという事を指的してい
る。
Ti−プラスミドのビルレンス性遺伝子は、細菌が標準培
地上で培養される場合、発現しないが、しかしそれらに
まったく関係ないA.ツメファシエンス及びE.コライの両
方において、それらは植物によって出液される物質によ
って刺激されることができる事を、得られた結果は示し
ている。これらの物質の出液は、また、微生物の非存在
下においても生じる。
地上で培養される場合、発現しないが、しかしそれらに
まったく関係ないA.ツメファシエンス及びE.コライの両
方において、それらは植物によって出液される物質によ
って刺激されることができる事を、得られた結果は示し
ている。これらの物質の出液は、また、微生物の非存在
下においても生じる。
ビルレンス性遺伝子の活性を検出するために、lacZプラ
スミドが使用された。virCのプロモーター領域（プロモ
ーターは、ペプチド鎖に翻訳される遺伝子の一部の前に
位置している。プロモーターは、遺伝子の発現のために
必要なシグナルすべてを含んでいる）は、もはやプロモ
ーター構造を持っていないE.コライのlacZ遺伝子のため
にクローン化された。プラスミドpMP30（第１図を参照
のこと）は、プロモーターを伴わない完全なlacZ遺伝子
を含んでいる。LacZは酵素β−ガラクトシダーゼをコー
ドする。この酵素の活性は、簡単に、クロモフォア−５
−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラ
クトピラノサイド（Ｘ−gal.と略される）を含む指示薬
培地上で検出されることができる。この酵素によるＸ−
gal.の分解は、青色着色の分解生成物を生ぜしめる。
スミドが使用された。virCのプロモーター領域（プロモ
ーターは、ペプチド鎖に翻訳される遺伝子の一部の前に
位置している。プロモーターは、遺伝子の発現のために
必要なシグナルすべてを含んでいる）は、もはやプロモ
ーター構造を持っていないE.コライのlacZ遺伝子のため
にクローン化された。プラスミドpMP30（第１図を参照
のこと）は、プロモーターを伴わない完全なlacZ遺伝子
を含んでいる。LacZは酵素β−ガラクトシダーゼをコー
ドする。この酵素の活性は、簡単に、クロモフォア−５
−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラ
クトピラノサイド（Ｘ−gal.と略される）を含む指示薬
培地上で検出されることができる。この酵素によるＸ−
gal.の分解は、青色着色の分解生成物を生ぜしめる。
pMP30中のlacZ遺伝子がプロモーターを含んでいないの
で、このプラスミドを含むE.コライlacはβ−ガラクト
サイダーゼ活性を示さない。pMP30のユニークHind III
位置において、2.6kbp Hind IIIフラグメントは、その
上に位置するプロモータ領域及びvirCの構造遺伝子の一
部をクローン化した。得られるプラスミドpMP31におけ
る2.6kbpフラグメントの方位は、virCのプロモーターが
lacZに向けられているのと同じである（第１図）． 〔具体的な説明〕 プラスミドpMP31を含むE.コライdel.lac菌株は、Ｘ−ga
l.を含む寒天平板上で、60時間培養の後、弱いがしかし
暗示的な青色を示す。E.コライdel.lac菌株は、E.コラ
イ自身のlac−遺伝子が欠失されている菌株である。液
体培地において、β−ガラクトシターゼ活性は検出され
なかった。プラスミドpMP30及びpMP31はA.ツメファシエ
ンにおいては推持されることはできない。A.ツメファシ
エンスにおいて、それらの活性に基づいてプラスミドを
テストすることができるようにするために、共同挿入体
がプラスミドR772（広い宿主範囲を持つ接合性プラスミ
ド）と共に構成された。R772を含むpMP30及びpMP31の共
同挿入体はそれぞれpMP32及びpMP33と呼ばれた。pMP32
又はpMP33を含くむアグロバクテリウム菌株は、たとえ
これらのプラスミドに加えて、Ti−プラスミドが存在す
る場合でもβ−ガラクトサイダーゼ活性を示さない。従
って、標準条件のもとでvirCは、A.ツメファシエンス又
はE.コライ中で発現しないし又はかろうじて少く発現す
るだけである。
で、このプラスミドを含むE.コライlacはβ−ガラクト
サイダーゼ活性を示さない。pMP30のユニークHind III
位置において、2.6kbp Hind IIIフラグメントは、その
上に位置するプロモータ領域及びvirCの構造遺伝子の一
部をクローン化した。得られるプラスミドpMP31におけ
る2.6kbpフラグメントの方位は、virCのプロモーターが
lacZに向けられているのと同じである（第１図）． 〔具体的な説明〕 プラスミドpMP31を含むE.コライdel.lac菌株は、Ｘ−ga
l.を含む寒天平板上で、60時間培養の後、弱いがしかし
暗示的な青色を示す。E.コライdel.lac菌株は、E.コラ
イ自身のlac−遺伝子が欠失されている菌株である。液
体培地において、β−ガラクトシターゼ活性は検出され
なかった。プラスミドpMP30及びpMP31はA.ツメファシエ
ンにおいては推持されることはできない。A.ツメファシ
エンスにおいて、それらの活性に基づいてプラスミドを
テストすることができるようにするために、共同挿入体
がプラスミドR772（広い宿主範囲を持つ接合性プラスミ
ド）と共に構成された。R772を含むpMP30及びpMP31の共
同挿入体はそれぞれpMP32及びpMP33と呼ばれた。pMP32
又はpMP33を含くむアグロバクテリウム菌株は、たとえ
これらのプラスミドに加えて、Ti−プラスミドが存在す
る場合でもβ−ガラクトサイダーゼ活性を示さない。従
って、標準条件のもとでvirCは、A.ツメファシエンス又
はE.コライ中で発現しないし又はかろうじて少く発現す
るだけである。
ビルレンス性遺伝子が植物性物質影響のもとでだけ発現
する可能性は、双子葉類及び単子葉類植物タイプの出液
水の存在においてE.コライ（pMP31）及びA.ツメファシ
エンス（pMP33）を増殖させる事によってテストされ
た。出液水の調製のために、E.コライ又はA.ツメファシ
エンスのための合成増殖培地で洗浄した後、ちようど発
芽した種子又は根組織が同じ培地で４〜５時間培養され
た（1mlの培地につき１〜３の種子;1mlの培地につき0.1
gの根組織）．過の後、植物のフラグメントを除くた
めに、出液水は細菌（1mlにつき５×107の細菌）により
接種されそして120μg/mlのＸ−gal.の存在において29
℃で16時間培養された。その後ただちに測定された青色
着色化は、virC−プロモーターの指図のもとでβ−ガラ
クトサイダーゼ活性についての測定を示す。第１表に示
されるように、いくらかの単子葉植物の出液水と同様双
子葉植物の出液物は、かなりのβ−ガラクトサイダーゼ
活性をもたらしながら、強いvirC−プロモーターの誘発
能力があるように見えた。驚いたことには、この誘発効
果はまた、E.コライ菌株にも見つけられた。
する可能性は、双子葉類及び単子葉類植物タイプの出液
水の存在においてE.コライ（pMP31）及びA.ツメファシ
エンス（pMP33）を増殖させる事によってテストされ
た。出液水の調製のために、E.コライ又はA.ツメファシ
エンスのための合成増殖培地で洗浄した後、ちようど発
芽した種子又は根組織が同じ培地で４〜５時間培養され
た（1mlの培地につき１〜３の種子;1mlの培地につき0.1
gの根組織）．過の後、植物のフラグメントを除くた
めに、出液水は細菌（1mlにつき５×107の細菌）により
接種されそして120μg/mlのＸ−gal.の存在において29
℃で16時間培養された。その後ただちに測定された青色
着色化は、virC−プロモーターの指図のもとでβ−ガラ
クトサイダーゼ活性についての測定を示す。第１表に示
されるように、いくらかの単子葉植物の出液水と同様双
子葉植物の出液物は、かなりのβ−ガラクトサイダーゼ
活性をもたらしながら、強いvirC−プロモーターの誘発
能力があるように見えた。驚いたことには、この誘発効
果はまた、E.コライ菌株にも見つけられた。
単子葉植物の出液水は使用した植物タイプに依存する結
果を生ぜしめた。アリアム セパ（Allium cepa）（タ
マネギ）出液水は、双子葉植物の出液水による誘発に匹
敵するvirC−プロモーターの誘発を生ぜしめ、一方、ゼ
ア マイズ（Zea mays）（トウモロコシ）の出液水は、
どんな誘発もほとんど示さなかった。誘発性物質は、ま
た、すでに形質転換された植物細胞によって出液された
ように見えた。E.コライ（pMP30）及びA.ツメファシエ
ンス（pMP32）による対照実験は、植物の出液水の存在
で強いか又は少し弱いβ−ガラクトサイダーゼ活性を生
ぜしめた。A.ツメファシエンス（pMP32）のひじように
弱い活性は、またlacZを含むプラスミドが存在しない場
合に生じそしてだからA.ツメファシエンスの内在性β−
ガラクトサイダーゼ活性の結果である。それは、virCの
プロモーターは標準条件のもとで活動的でないが、しか
しこの同じvirCのプロモーターは、双子葉植物及単子葉
植物によって出液される１つの物質（複数の物質）によ
って強く活性化されるということがこれらの結果から結
論づけられた。これは、細菌のプロモーター（これは植
物で通常生じる物質の影響のもとで活性化される）が記
載されている最初である。この物質又はこれらの物質
が、また腫瘍組織によって分離されるという事はまた腫
瘍組織がA.ツメファシエンスにより形質転換可能である
ということを指的する最近の結果〔バン スログテレ
ン，など.,ネイチュアー（Nature）,1984年に出版され
た〕と一致している。
果を生ぜしめた。アリアム セパ（Allium cepa）（タ
マネギ）出液水は、双子葉植物の出液水による誘発に匹
敵するvirC−プロモーターの誘発を生ぜしめ、一方、ゼ
ア マイズ（Zea mays）（トウモロコシ）の出液水は、
どんな誘発もほとんど示さなかった。誘発性物質は、ま
た、すでに形質転換された植物細胞によって出液された
ように見えた。E.コライ（pMP30）及びA.ツメファシエ
ンス（pMP32）による対照実験は、植物の出液水の存在
で強いか又は少し弱いβ−ガラクトサイダーゼ活性を生
ぜしめた。A.ツメファシエンス（pMP32）のひじように
弱い活性は、またlacZを含むプラスミドが存在しない場
合に生じそしてだからA.ツメファシエンスの内在性β−
ガラクトサイダーゼ活性の結果である。それは、virCの
プロモーターは標準条件のもとで活動的でないが、しか
しこの同じvirCのプロモーターは、双子葉植物及単子葉
植物によって出液される１つの物質（複数の物質）によ
って強く活性化されるということがこれらの結果から結
論づけられた。これは、細菌のプロモーター（これは植
物で通常生じる物質の影響のもとで活性化される）が記
載されている最初である。この物質又はこれらの物質
が、また腫瘍組織によって分離されるという事はまた腫
瘍組織がA.ツメファシエンスにより形質転換可能である
ということを指的する最近の結果〔バン スログテレ
ン，など.,ネイチュアー（Nature）,1984年に出版され
た〕と一致している。
誘発原因物質がエンドウの出液水中に存在する場合、vi
rCプロモーターの誘発原因物質の特性決定が始められ
た。いくらかの低分子物質（これは出液水中に存在する
と思われている）の存在において、virCプロモーターの
誘発は、E.コライに見つけられなかった（第２表）．誘
発性物質（又は複数の物質）は熱不安定であることが判
明した。この出液物を55℃で15分間培養した後、virC−
プロモーターへの誘発効果は、完全に消滅した。RNase,
DNase、ホスフォリペーゼA2及びホスフォリペーゼＤに
よる出液物の処理は、出液水の誘発活性に何の効果も示
さなかった。しかしながらタンパク質分解酵素、プロナ
ーゼ及びトリプシン（20μg/ml）による出液水の処理
は、誘発活性の完全な消滅をもたらした。これらの酵素
による処理は、菌株E.コライFlac+:del（lac−pro）に
おけるlac−遺伝子の誘発能力には、影響を及ぼさなか
った（第３表）． 7KDより小さな質量を持つ分子を透過させる気孔サイズ
を持つ膜によるエンドウマメの出液水の透析は、誘発活
性の減少を示さなかった。これらの結果は、前記誘発原
因物質がタンパク質成分を含みそして7KD以上の分子サ
イズを持っているという事を指的する。
rCプロモーターの誘発原因物質の特性決定が始められ
た。いくらかの低分子物質（これは出液水中に存在する
と思われている）の存在において、virCプロモーターの
誘発は、E.コライに見つけられなかった（第２表）．誘
発性物質（又は複数の物質）は熱不安定であることが判
明した。この出液物を55℃で15分間培養した後、virC−
プロモーターへの誘発効果は、完全に消滅した。RNase,
DNase、ホスフォリペーゼA2及びホスフォリペーゼＤに
よる出液物の処理は、出液水の誘発活性に何の効果も示
さなかった。しかしながらタンパク質分解酵素、プロナ
ーゼ及びトリプシン（20μg/ml）による出液水の処理
は、誘発活性の完全な消滅をもたらした。これらの酵素
による処理は、菌株E.コライFlac+:del（lac−pro）に
おけるlac−遺伝子の誘発能力には、影響を及ぼさなか
った（第３表）． 7KDより小さな質量を持つ分子を透過させる気孔サイズ
を持つ膜によるエンドウマメの出液水の透析は、誘発活
性の減少を示さなかった。これらの結果は、前記誘発原
因物質がタンパク質成分を含みそして7KD以上の分子サ
イズを持っているという事を指的する。
A.ツメファシエンスのTi−プラスミドのビルランス遺伝
子は、細菌が標準培地で増殖する場合、発現しないが、
しかし、それらが植物又は植物物質と接触する場合それ
らは誘発されるということが示された。この発明は科学
的に本質的である、なぜならば、それは、腫瘍誘発及び
形質転換の過程においてビルランス遺伝子の機能をさら
に明らかにする糸口を提供する。その上、この発明は、
生物工学の用途のためにそのような遺伝子のプロモータ
ーを使用する可能性を提供する。virC−プロモーターの
誘発がアグロバクテリウムにおいてだけ生じるのでな
く、またE.コライのような、アグロバクテリウムからひ
じように遠縁の細菌においても生じるという事実は、こ
のタイプのプロモーターを、広範囲の細菌又は一般的に
微生物（これらは植物と相互作用を示す）において、使
用させるために適切にする。植物のために有益であるが
しかし細菌自身にとって有害になる細菌方法は、特に、
前記プローモーターがそれらの機能を実行することにな
っている位置において開始されることができる。
子は、細菌が標準培地で増殖する場合、発現しないが、
しかし、それらが植物又は植物物質と接触する場合それ
らは誘発されるということが示された。この発明は科学
的に本質的である、なぜならば、それは、腫瘍誘発及び
形質転換の過程においてビルランス遺伝子の機能をさら
に明らかにする糸口を提供する。その上、この発明は、
生物工学の用途のためにそのような遺伝子のプロモータ
ーを使用する可能性を提供する。virC−プロモーターの
誘発がアグロバクテリウムにおいてだけ生じるのでな
く、またE.コライのような、アグロバクテリウムからひ
じように遠縁の細菌においても生じるという事実は、こ
のタイプのプロモーターを、広範囲の細菌又は一般的に
微生物（これらは植物と相互作用を示す）において、使
用させるために適切にする。植物のために有益であるが
しかし細菌自身にとって有害になる細菌方法は、特に、
前記プローモーターがそれらの機能を実行することにな
っている位置において開始されることができる。
第１図はプラスミドpMP30からプラスミドpMP33を構成す
るための方法を示す。
るための方法を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 ロベルタ アドリアン シユイルペロルト オランダ国，2334 ジーデ リーデン，ア ンソニエ デユイクラン 10シー
Claims (9)
- 【請求項１】遺伝子−プロモーター構成体（該構成体は
発現されるべき遺伝子に結合されるプロモーターを含ん
で成る）を含む細菌を植物出液、植物又はその一部と共
にインキュベートすることを含んで成る、細菌中の遺伝
子の活性化方法であって、前記プロモーターが前記植物
出液、植物又はその一部により誘発できるvir−プロモ
ーターであり、そして前記遺伝子が前記vir−プロモー
ターに天然において結合されていないことを特徴とする
方法。 - 【請求項２】前記プロモーターがVirCプロモーターであ
る特許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】前記植物が双子葉植物であり、そして前記
植物出液が双子葉植物からの出液である特許請求の範囲
第１項記載の方法。 - 【請求項４】前記細菌がアグロバクテリウム（Agrobact
erium）細菌を包含する特許請求の範囲第１項記載の方
法。 - 【請求項５】前記細菌がE.コリ（E.coli）細菌である特
許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項６】前記遺伝子−プロモーター構成体が、pMP3
1及びアグロバクテリウムを包含する宿主範囲を有する
第２プラスミドの同時組込み体として形成される同時組
込み体プラスミド上に位置し、それによって前記同時組
込み体プラスミドがアグロバクテリウムに維持できる特
許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項７】発現されるべき遺伝子に結合されるプロモ
ーターを含んで成る遺伝子−プロモーター構成体を含ん
で成る細菌であって、前記プロモーターが植物出液、植
物又はその一部により誘発できるvir−プロモーターで
あり、そして前記遺伝子が前記vir−プロモーターに天
然において結合されていないことを特徴とする細菌。 - 【請求項８】前記プロモーターがVirCプロモーターであ
る特許請求の範囲第７項記載の細菌。 - 【請求項９】アグロバクテリウム細菌及びE.コリ細菌か
ら成る群から選択される特許請求の範囲第７又は８項記
載の細菌。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8401781 | 1984-06-04 | ||
| NL8401781A NL8401781A (nl) | 1984-06-04 | 1984-06-04 | Werkwijze voor het activeren van promotoren van bacterien. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6152295A JPS6152295A (ja) | 1986-03-14 |
| JPH0771491B2 true JPH0771491B2 (ja) | 1995-08-02 |
Family
ID=19844040
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60118983A Expired - Lifetime JPH0771491B2 (ja) | 1984-06-04 | 1985-06-03 | 細菌のプロモ−タ−の活性のための方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5019501A (ja) |
| EP (1) | EP0167192B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0771491B2 (ja) |
| AT (1) | ATE47153T1 (ja) |
| DE (1) | DE3573612D1 (ja) |
| NL (1) | NL8401781A (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| GB8619008D0 (en) * | 1986-08-04 | 1986-09-17 | Ashby A M | Plant treatment method |
Family Cites Families (4)
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|---|---|---|---|---|
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- 1984-06-04 NL NL8401781A patent/NL8401781A/nl not_active Application Discontinuation
-
1985
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- 1985-06-03 JP JP60118983A patent/JPH0771491B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-03 EP EP85200872A patent/EP0167192B1/en not_active Expired
-
1989
- 1989-02-28 US US07/317,062 patent/US5019501A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
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| EP0167192B1 (en) | 1989-10-11 |
| DE3573612D1 (en) | 1989-11-16 |
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| JPS6152295A (ja) | 1986-03-14 |
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