JPH0775565A - 抗変異原性剤及び抗変異原性を有する食品 - Google Patents
抗変異原性剤及び抗変異原性を有する食品Info
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- JPH0775565A JPH0775565A JP6160179A JP16017994A JPH0775565A JP H0775565 A JPH0775565 A JP H0775565A JP 6160179 A JP6160179 A JP 6160179A JP 16017994 A JP16017994 A JP 16017994A JP H0775565 A JPH0775565 A JP H0775565A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】人体に対して安全で、広範な変異原物質に対し
て抗変異原効果を有するとともに、風味の点でも問題の
ない抗変異原性剤を提供すること。 【構成】ラクトバチルス・サンフランシスコ菌体を有効
成分として含有すること。
て抗変異原効果を有するとともに、風味の点でも問題の
ない抗変異原性剤を提供すること。 【構成】ラクトバチルス・サンフランシスコ菌体を有効
成分として含有すること。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、ラクトバチルス・サ
ンフランシスコ（Lactobacillus sanfrancisco）の培養
菌体を有効成分として含有する抗変異原性剤及び抗変異
原性を有する食品に関する。
ンフランシスコ（Lactobacillus sanfrancisco）の培養
菌体を有効成分として含有する抗変異原性剤及び抗変異
原性を有する食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、ヒトの食生活において様々な変異
原物質に曝される危険性が解明されてきており、これら
の変異原物質が発ガンに関与している可能性が示唆され
ている。例えば、食品を調理することにより生成される
ヘテロサイクリックアミンやベンゾ(a) ピレン、また、
アミンと硝酸塩との反応によるニトロソアミン類が挙げ
られる。このような変異原物質の変異原性を抑制した
り、変異原物質自体を不活性化する抗変異原性効果につ
いては、ヒトの発ガンのリスクを少なくすることができ
るため、多くの検討がなされている。
原物質に曝される危険性が解明されてきており、これら
の変異原物質が発ガンに関与している可能性が示唆され
ている。例えば、食品を調理することにより生成される
ヘテロサイクリックアミンやベンゾ(a) ピレン、また、
アミンと硝酸塩との反応によるニトロソアミン類が挙げ
られる。このような変異原物質の変異原性を抑制した
り、変異原物質自体を不活性化する抗変異原性効果につ
いては、ヒトの発ガンのリスクを少なくすることができ
るため、多くの検討がなされている。
【０００３】現在、たとえば乳業用乳酸菌の抗変異原性
効果、野菜の抽出エキスによる抗変異原性効果、チーズ
のスターター菌であるブレビバクテリウム・リネンズに
よる抗変異性原効果を用いた抗変異原性剤（特開平２−
２０２８８号公報）等が知られている。また、乳酸菌あ
るいは乳発酵物に免疫賦活化作用や抗変異原性等の生体
防御効果があることは古くから知られた事実であるが、
それらは乳製品あるいは腸管由来の乳酸菌に関するもの
だけであった。
効果、野菜の抽出エキスによる抗変異原性効果、チーズ
のスターター菌であるブレビバクテリウム・リネンズに
よる抗変異性原効果を用いた抗変異原性剤（特開平２−
２０２８８号公報）等が知られている。また、乳酸菌あ
るいは乳発酵物に免疫賦活化作用や抗変異原性等の生体
防御効果があることは古くから知られた事実であるが、
それらは乳製品あるいは腸管由来の乳酸菌に関するもの
だけであった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし、抗変異原性剤
として実用化できるためには、広範な変異原物質に抗す
ることができるとともに、それ自体が安全であることが
必要である。また、食品中の変異原物質に対しては食品
とともに経口により摂取できることが望ましいが、特に
食品等に添加して使用する場合には、食品の風味を損な
わないことも望まれる。そこで、本発明は、人体に対し
て安全で、広範な変異原物質に対して抗変異原効果を有
するとともに、風味の点でも問題のない抗変異原性剤を
提供することを目的とする。また、本発明は、保存が容
易でかつ摂取しやすい抗変異原性を有する食品を提供す
ることを目的とする。
として実用化できるためには、広範な変異原物質に抗す
ることができるとともに、それ自体が安全であることが
必要である。また、食品中の変異原物質に対しては食品
とともに経口により摂取できることが望ましいが、特に
食品等に添加して使用する場合には、食品の風味を損な
わないことも望まれる。そこで、本発明は、人体に対し
て安全で、広範な変異原物質に対して抗変異原効果を有
するとともに、風味の点でも問題のない抗変異原性剤を
提供することを目的とする。また、本発明は、保存が容
易でかつ摂取しやすい抗変異原性を有する食品を提供す
ることを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記した課題を解決する
ために、本発明者らは、パン生地中に含まれてパンとと
もに従来から食されてきた穀物乳酸菌として有用である
ラクトバチルス・サンフランシスコ菌に着目し、かかる
菌体の抗変異原性効果について鋭意検討したところ、こ
の菌体が各種の変異原物質に対して抗変異原性効果を有
することを見いだし、このラクトバチルス・サンフラン
シスコ菌体を有効成分として含有する抗変異原性剤を創
作した。また、ラクトバチルス・サンフランシスコ AT
CC 27651 の菌体を有効成分として含有する抗変異原性
剤を創作した。また、ラクトバチルス・サンフランシス
コ ATCC 27652 の菌体を有効成分として含有する抗変
異原性剤を創作した。また、ラクトバチルス・サンフラ
ンシスコ ATCC 27653 の菌体を有効成分として含有す
る抗変異原性剤を創作した。さらにラクトバチルス・サ
ンフランシスコ菌体を抗変異原性を有する有効成分とし
て含み、かつ加熱されてなることを特徴とする抗変異原
性を有する食品を創作した。
ために、本発明者らは、パン生地中に含まれてパンとと
もに従来から食されてきた穀物乳酸菌として有用である
ラクトバチルス・サンフランシスコ菌に着目し、かかる
菌体の抗変異原性効果について鋭意検討したところ、こ
の菌体が各種の変異原物質に対して抗変異原性効果を有
することを見いだし、このラクトバチルス・サンフラン
シスコ菌体を有効成分として含有する抗変異原性剤を創
作した。また、ラクトバチルス・サンフランシスコ AT
CC 27651 の菌体を有効成分として含有する抗変異原性
剤を創作した。また、ラクトバチルス・サンフランシス
コ ATCC 27652 の菌体を有効成分として含有する抗変
異原性剤を創作した。また、ラクトバチルス・サンフラ
ンシスコ ATCC 27653 の菌体を有効成分として含有す
る抗変異原性剤を創作した。さらにラクトバチルス・サ
ンフランシスコ菌体を抗変異原性を有する有効成分とし
て含み、かつ加熱されてなることを特徴とする抗変異原
性を有する食品を創作した。
【０００６】前記ラクトバチルス・サンフランシスコ菌
（以下、単にＬＳ菌という。）は、サンフランシスコ地
方のサワードゥ（酸味のあるパン生地）から分離された
穀物乳酸菌であり、マルトースとグルコースのみを資化
しその他の糖類を利用できない点及び生育に適したpHが
5.6 以下である点などから他の乳酸菌とはかなり異なっ
た特徴を有している。このＬＳ菌と同様の乳酸菌種は、
前記地方の他、世界各地域のサワードゥに見いだされて
おり、生地中の酵母とともにパン生地中で発酵して乳酸
等を生成し、独特の酸味のあるサワードゥをつくる。こ
のサワードゥを焼成すると酸味のあるサワーブレッドと
なる。このサワーブレッドは、古くから現在まで食用に
供されており、人体に支障をもたらす報告もされていな
いことより、ＬＳ菌は人体に対して安全であるといえ
る。一方、ＬＳ菌に代表される穀物乳酸菌に抗変異原性
があることはいままで知られていない。なお、サワーブ
レッド１ｇ中には通常、約０．１〜１ｍｇのＬＳ菌が含
まれている。また、ＬＳ菌自体には特有の臭いや味はな
く、発酵生成物であるアルコールや乳酸等の香りがわず
かにする程度であり、同時に食される食品等の風味に影
響を与えることはない。本発明に用いるのに好適な菌株
の一例としては、ラクトバチルス・サンフランシスコ
ＡＴＣＣ ２７６５１、同ＡＴＣＣ ２７６５２、同Ａ
ＴＣＣ ２７６５３が挙げられる。
（以下、単にＬＳ菌という。）は、サンフランシスコ地
方のサワードゥ（酸味のあるパン生地）から分離された
穀物乳酸菌であり、マルトースとグルコースのみを資化
しその他の糖類を利用できない点及び生育に適したpHが
5.6 以下である点などから他の乳酸菌とはかなり異なっ
た特徴を有している。このＬＳ菌と同様の乳酸菌種は、
前記地方の他、世界各地域のサワードゥに見いだされて
おり、生地中の酵母とともにパン生地中で発酵して乳酸
等を生成し、独特の酸味のあるサワードゥをつくる。こ
のサワードゥを焼成すると酸味のあるサワーブレッドと
なる。このサワーブレッドは、古くから現在まで食用に
供されており、人体に支障をもたらす報告もされていな
いことより、ＬＳ菌は人体に対して安全であるといえ
る。一方、ＬＳ菌に代表される穀物乳酸菌に抗変異原性
があることはいままで知られていない。なお、サワーブ
レッド１ｇ中には通常、約０．１〜１ｍｇのＬＳ菌が含
まれている。また、ＬＳ菌自体には特有の臭いや味はな
く、発酵生成物であるアルコールや乳酸等の香りがわず
かにする程度であり、同時に食される食品等の風味に影
響を与えることはない。本発明に用いるのに好適な菌株
の一例としては、ラクトバチルス・サンフランシスコ
ＡＴＣＣ ２７６５１、同ＡＴＣＣ ２７６５２、同Ａ
ＴＣＣ ２７６５３が挙げられる。
【０００７】ＬＳ菌体の培養方法は、特公昭５８−５８
０７０号公報及び特公昭６２−３１９０７号公報に詳述
されている。すなわち、炭素原としてＬＳ菌が利用しう
るマルトース、グルコースあるいは小麦粉などが単独又
は混合して用いられる。また、菌の生育には新鮮な酵母
から抽出した酵母エキスまたはシステインと、オレイン
酸又はツィーン80（ポリオキシエチレンソルビタンの脂
肪酸エステルからなる非イオン系界面活性剤）や大豆レ
シチンなどのオレイン酸含有物の添加が必要である。さ
らに、その他、窒素原、有機天然栄養源、リン酸塩、金
属イオンなどがバランス良く含まれている培地が用いら
れる。また、酢酸やクエン酸などの有機酸またはその塩
類の添加も菌の生育に対して有効である。
０７０号公報及び特公昭６２−３１９０７号公報に詳述
されている。すなわち、炭素原としてＬＳ菌が利用しう
るマルトース、グルコースあるいは小麦粉などが単独又
は混合して用いられる。また、菌の生育には新鮮な酵母
から抽出した酵母エキスまたはシステインと、オレイン
酸又はツィーン80（ポリオキシエチレンソルビタンの脂
肪酸エステルからなる非イオン系界面活性剤）や大豆レ
シチンなどのオレイン酸含有物の添加が必要である。さ
らに、その他、窒素原、有機天然栄養源、リン酸塩、金
属イオンなどがバランス良く含まれている培地が用いら
れる。また、酢酸やクエン酸などの有機酸またはその塩
類の添加も菌の生育に対して有効である。
【０００８】培養液の初発ｐＨは、5.0 〜5.6 、培養中
のｐＨは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモ
ニア水などでこの範囲のｐＨに調節するのが望ましい。
培養温度は20〜35℃、好ましくは25〜30℃である。培養
は静置培養またゆっくりとした撹拌培養が好ましく、16
〜48時間行う。培養終了後、培養液を遠心分離などして
菌体を分離する。
のｐＨは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモ
ニア水などでこの範囲のｐＨに調節するのが望ましい。
培養温度は20〜35℃、好ましくは25〜30℃である。培養
は静置培養またゆっくりとした撹拌培養が好ましく、16
〜48時間行う。培養終了後、培養液を遠心分離などして
菌体を分離する。
【０００９】分離した菌体は、生菌体、凍結乾燥菌体、
加熱菌体(100℃、30分) のいずれでも抗変異原性剤とし
て使用することができるとともに、培養液を分離するこ
となくそのまま抗変異原性剤として使用することもでき
る。なお、ここでいう抗変異原性剤とは、広く変異原物
質の変異原性を低減させることができるものをいい、経
口的に摂取される製剤や食品の他、食品や製剤等に添加
する添加剤も含まれる。なお、凍結乾燥した状態で保存
された菌体でも抗変異原性効果が発揮されるため、抗変
異原性剤としての保存性、安定性が確保される。また、
凍結乾燥体の利用により、必要に応じた菌体の摂取ある
いは摂取のための調製に都合がよいものとなっている。
加熱菌体(100℃、30分) のいずれでも抗変異原性剤とし
て使用することができるとともに、培養液を分離するこ
となくそのまま抗変異原性剤として使用することもでき
る。なお、ここでいう抗変異原性剤とは、広く変異原物
質の変異原性を低減させることができるものをいい、経
口的に摂取される製剤や食品の他、食品や製剤等に添加
する添加剤も含まれる。なお、凍結乾燥した状態で保存
された菌体でも抗変異原性効果が発揮されるため、抗変
異原性剤としての保存性、安定性が確保される。また、
凍結乾燥体の利用により、必要に応じた菌体の摂取ある
いは摂取のための調製に都合がよいものとなっている。
【００１０】加熱菌体でもその抗変異原性効果が発揮さ
れるため、予め加熱した菌体を製剤や食品に添加するこ
とが可能であり、また、菌体を食品中に用いる場合や、
各種製剤化する場合にでも菌体の抗変異原性効果を消滅
させることなく、食品や製剤に適した加熱加工が可能と
なる。また、通常加熱により菌体は死滅するため、食品
等中での腐敗（増殖）を考慮する必要がないため、菌体
を添加した食品や製剤等の保存が容易となり、また安定
性も向上する。さらに、上記菌体及び培養液は、生体に
安全であることから食品分野のみならず化粧品や医薬分
野においても使用することができる。
れるため、予め加熱した菌体を製剤や食品に添加するこ
とが可能であり、また、菌体を食品中に用いる場合や、
各種製剤化する場合にでも菌体の抗変異原性効果を消滅
させることなく、食品や製剤に適した加熱加工が可能と
なる。また、通常加熱により菌体は死滅するため、食品
等中での腐敗（増殖）を考慮する必要がないため、菌体
を添加した食品や製剤等の保存が容易となり、また安定
性も向上する。さらに、上記菌体及び培養液は、生体に
安全であることから食品分野のみならず化粧品や医薬分
野においても使用することができる。
【００１１】次に、得られた抗変異原性剤の抗変異原効
果の試験方法について説明する。本発明においては、シ
ョウジョウバエのＤＮＡ修復試験( 藤川和夫、食品衛生
学雑誌、２９巻、１１５頁（１９８８））に基づいて抗
変異原性を試験した。この方法は、変異原性物質と同時
に抗変異原性剤（ＬＳ菌体）をショウジョウバエに摂取
させて、抗変異原性剤としての効果を測定する方法であ
る。試験には、雄のみにおいてＤＮＡ傷害に対する除去
修復と複製後修復能力が欠損し、雌は正常な修復能力を
有している系統を用いる。この試験法による抗変異原性
の検出は以下のようにして行われる。
果の試験方法について説明する。本発明においては、シ
ョウジョウバエのＤＮＡ修復試験( 藤川和夫、食品衛生
学雑誌、２９巻、１１５頁（１９８８））に基づいて抗
変異原性を試験した。この方法は、変異原性物質と同時
に抗変異原性剤（ＬＳ菌体）をショウジョウバエに摂取
させて、抗変異原性剤としての効果を測定する方法であ
る。試験には、雄のみにおいてＤＮＡ傷害に対する除去
修復と複製後修復能力が欠損し、雌は正常な修復能力を
有している系統を用いる。この試験法による抗変異原性
の検出は以下のようにして行われる。
【００１２】前記系統のショウジョウバエの幼虫に、何
ら変異原物質を摂取させない場合は、成虫になった雄／
雌比は１付近である。しかし、このショウジョウバエの
幼虫に除去修復と複製後修復により修復可能なＤＮＡ傷
害を与えた場合には、雄だけについて成虫になる固体数
が減少することになり、成虫になった雄／雌比の低下か
ら摂取させた変異原物質の変異原性を検出することがで
きる。一方、変異原物質と同時に検体（抗変異原性剤）
を摂取させて、雄の成虫固体数が増加することによる雄
／雌比の上昇により試料の抗変異原性効果を検出するこ
とができる。なお、雄／雌比の大小が変異原物質に対す
る単なる性差による感受性の違いによるものでないこと
を確認するために、雄も正常な修復能力を有する系を対
照として同様の試験が行われる。
ら変異原物質を摂取させない場合は、成虫になった雄／
雌比は１付近である。しかし、このショウジョウバエの
幼虫に除去修復と複製後修復により修復可能なＤＮＡ傷
害を与えた場合には、雄だけについて成虫になる固体数
が減少することになり、成虫になった雄／雌比の低下か
ら摂取させた変異原物質の変異原性を検出することがで
きる。一方、変異原物質と同時に検体（抗変異原性剤）
を摂取させて、雄の成虫固体数が増加することによる雄
／雌比の上昇により試料の抗変異原性効果を検出するこ
とができる。なお、雄／雌比の大小が変異原物質に対す
る単なる性差による感受性の違いによるものでないこと
を確認するために、雄も正常な修復能力を有する系を対
照として同様の試験が行われる。
【００１３】このような変異原性及び抗変異原性の試験
にあっては、ショウジョウバエが細菌等より高等の生物
であること及び検体を経口摂取したときの作用を調べる
ことになるので、ヒトが経口から摂取する変異原物質の
作用及び抗変異原性物質の作用を推測するのにより適切
なモデルとなっている。
にあっては、ショウジョウバエが細菌等より高等の生物
であること及び検体を経口摂取したときの作用を調べる
ことになるので、ヒトが経口から摂取する変異原物質の
作用及び抗変異原性物質の作用を推測するのにより適切
なモデルとなっている。
【００１４】また、乳酸菌の抗変異原性作用としては、
菌体や菌体成分の変異原物質に対する吸着作用について
の報告がなされているので、ＬＳ菌体の変異原物質に対
する吸着実験も合わせて行い、吸着量を確認した。試験
方法は、変異原物質とＬＳ菌体の混合懸濁液を一定時間
放置後、遠心分離によりＬＳ菌体が吸着した変異原物質
を沈殿させ、上清中の未吸着変異原物質を高速液体クロ
マトグラフィー（紫外部検出器）により検出することに
より、ＬＳ菌体に吸着した変異原物質量を求めた。
菌体や菌体成分の変異原物質に対する吸着作用について
の報告がなされているので、ＬＳ菌体の変異原物質に対
する吸着実験も合わせて行い、吸着量を確認した。試験
方法は、変異原物質とＬＳ菌体の混合懸濁液を一定時間
放置後、遠心分離によりＬＳ菌体が吸着した変異原物質
を沈殿させ、上清中の未吸着変異原物質を高速液体クロ
マトグラフィー（紫外部検出器）により検出することに
より、ＬＳ菌体に吸着した変異原物質量を求めた。
【００１５】
【作用】請求項１ないし請求項４に記載の発明によれ
ば、菌体が抗変異原性効果を有する一方、従来より食用
に供されているものであり、人体に対して安全であり、
風味の点も問題がない。請求項５に記載の発明によれ
ば、食品が加熱されてなるため、食品としての風味や保
存性等が向上される一方、かかる状態でも抗変異原性効
果は維持されている。
ば、菌体が抗変異原性効果を有する一方、従来より食用
に供されているものであり、人体に対して安全であり、
風味の点も問題がない。請求項５に記載の発明によれ
ば、食品が加熱されてなるため、食品としての風味や保
存性等が向上される一方、かかる状態でも抗変異原性効
果は維持されている。
【００１６】
【発明の効果】請求項１ないし請求項４に記載の発明に
よれば、多様な変異原物質に対し抗変異原性効果を有
し、従来より食用に供されてきたラクトバチルス・サン
フランシスコ菌体を有効成分として含有するものである
ため、人体に対し安全でしかも実用性の高い抗変異原性
剤となっている。請求項５に記載の発明によれば、加熱
された食品は風味や保存性が向上されており、かかる状
態においてもＬＳ菌体の抗変異原性効果は維持されるた
め、多くのＬＳ菌体を継続して摂取するのに都合がよい
ものとなっている。
よれば、多様な変異原物質に対し抗変異原性効果を有
し、従来より食用に供されてきたラクトバチルス・サン
フランシスコ菌体を有効成分として含有するものである
ため、人体に対し安全でしかも実用性の高い抗変異原性
剤となっている。請求項５に記載の発明によれば、加熱
された食品は風味や保存性が向上されており、かかる状
態においてもＬＳ菌体の抗変異原性効果は維持されるた
め、多くのＬＳ菌体を継続して摂取するのに都合がよい
ものとなっている。
【００１７】
マルトース 40g ペプトン 10g 酵母エキス 15g 硫酸マグネシウム 200mg 硫酸マンガン 40mg ツィーン８０ 300mg システイン 200mg を水に溶解し、ｐＨを５．６に調整後、水にて１Ｌに調
整する。
整する。
【００１８】次に、上記ＬＳ培地に所定濃度になるよう
に寒天を加えてＬＳ寒天培地とし、このＬＳ寒天培地で
２４時間生育させたＬＳ菌体をオートクレーブ滅菌した
200ml の三角フラスコに入った100ml のＬＳ培地に植菌
し、３０℃で２４時間静置培養して種培養とした。この
種培養をオートレーブ滅菌した２Ｌジャーメンターフラ
スコ中のＬＳ培地１Ｌに植菌し、毎分１００回転の撹拌
で３Ｎ水酸化カリウム溶液でｐＨを５．０に調節しなが
ら３０℃で１６時間培養した。
に寒天を加えてＬＳ寒天培地とし、このＬＳ寒天培地で
２４時間生育させたＬＳ菌体をオートクレーブ滅菌した
200ml の三角フラスコに入った100ml のＬＳ培地に植菌
し、３０℃で２４時間静置培養して種培養とした。この
種培養をオートレーブ滅菌した２Ｌジャーメンターフラ
スコ中のＬＳ培地１Ｌに植菌し、毎分１００回転の撹拌
で３Ｎ水酸化カリウム溶液でｐＨを５．０に調節しなが
ら３０℃で１６時間培養した。
【００１９】培養終了後、培養液を遠心分離（３０００
ｒｐｍ，１５分間）により、沈殿したＬＳ菌体を集め、
蒸留水で洗浄後、凍結乾燥を行い抗変異原性を調べる試
料（以下、ＬＳ−ＦＤ菌体という。）とした。また、一
部のＬＳ菌体を１００℃、３０分間加熱処理した後、凍
結乾燥したものを加熱菌体試料（以下、ＬＳ−ＨＦＤ菌
体という。）とした。
ｒｐｍ，１５分間）により、沈殿したＬＳ菌体を集め、
蒸留水で洗浄後、凍結乾燥を行い抗変異原性を調べる試
料（以下、ＬＳ−ＦＤ菌体という。）とした。また、一
部のＬＳ菌体を１００℃、３０分間加熱処理した後、凍
結乾燥したものを加熱菌体試料（以下、ＬＳ−ＨＦＤ菌
体という。）とした。
【００２０】ショウジョウバエを用いた上記ＬＳ−ＦＤ
菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体の抗変異原性試験は、以下の
ように行った。試験に用いたショウジョウバエは、sc Z
w +(TE) mei-9 a mei-41 D5/C(1)DX,Yfの系である。こ
のショウジョウバエの飼育は、試験管内( 内径2.2cm 、
長さ9.5cm ) で継代培地( コーンフラワー;8％、乾燥粉
末酵母;4％、グルコース;10 ％、プロピオン酸;0.4％)
を用いて行った。この試験管培地にて、親バエに18時間
産卵させた後、親バエを捨て、この試験管培地を２５℃
で３日間培養して、卵を孵化・幼虫を生育させ２０％シ
ョ糖溶液を試験管内に注いで幼虫を浮遊させることによ
り、３令幼虫を採集した。なお、ここにいう３令幼虫
は、サナギに変態する１日ないし２日前の状態の幼虫で
ある。
菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体の抗変異原性試験は、以下の
ように行った。試験に用いたショウジョウバエは、sc Z
w +(TE) mei-9 a mei-41 D5/C(1)DX,Yfの系である。こ
のショウジョウバエの飼育は、試験管内( 内径2.2cm 、
長さ9.5cm ) で継代培地( コーンフラワー;8％、乾燥粉
末酵母;4％、グルコース;10 ％、プロピオン酸;0.4％)
を用いて行った。この試験管培地にて、親バエに18時間
産卵させた後、親バエを捨て、この試験管培地を２５℃
で３日間培養して、卵を孵化・幼虫を生育させ２０％シ
ョ糖溶液を試験管内に注いで幼虫を浮遊させることによ
り、３令幼虫を採集した。なお、ここにいう３令幼虫
は、サナギに変態する１日ないし２日前の状態の幼虫で
ある。
【００２１】採集した幼虫を蒸留水で洗浄後、別の試験
管内のアッセイ培地へ試験管一本あたり１５０〜２００
匹移した。アッセイ培地は、表１に示すように試料菌体
の種類（ＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体）及び添
加量（０、５０、２００、４００mg/tube ）並びに変異
原物質の種類（合計４種類）を変えたものについて各種
調製した。すなわち、試験管一本あたり粉末インスタン
ト培地（フォーミュラ４−２４、カリフォルニア バイ
オロジカル サプライ社製）及び試料菌体の合計量を
１．２ｇとし、それぞれに表１に示す各変異原物質の溶
液４ｍｌを混ぜることにより調製した。
管内のアッセイ培地へ試験管一本あたり１５０〜２００
匹移した。アッセイ培地は、表１に示すように試料菌体
の種類（ＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体）及び添
加量（０、５０、２００、４００mg/tube ）並びに変異
原物質の種類（合計４種類）を変えたものについて各種
調製した。すなわち、試験管一本あたり粉末インスタン
ト培地（フォーミュラ４−２４、カリフォルニア バイ
オロジカル サプライ社製）及び試料菌体の合計量を
１．２ｇとし、それぞれに表１に示す各変異原物質の溶
液４ｍｌを混ぜることにより調製した。
【００２２】
【表１】 Trp-P-1 ; 3- アミノ-1,4- ジメチル-5-H- ピリド [4,
3-b]インドール( トリプトファンの加熱生成物） IQ ; 2- アミノ-3- メチルイミダゾ[4,5-f] キノ
リン（焼肉、焼いたイワシ中に存在する） B(a)P ; ベンゾ(a) ピレン（タバコ、排気ガス、焼
肉に存在） NDMA ; ニトロソジメチルアミン（亜硝酸とアミン
とからの生成物） ─ ；未試験
3-b]インドール( トリプトファンの加熱生成物） IQ ; 2- アミノ-3- メチルイミダゾ[4,5-f] キノ
リン（焼肉、焼いたイワシ中に存在する） B(a)P ; ベンゾ(a) ピレン（タバコ、排気ガス、焼
肉に存在） NDMA ; ニトロソジメチルアミン（亜硝酸とアミン
とからの生成物） ─ ；未試験
【００２３】このアッセイ培地に３令幼虫を移して２５
℃で培養を続けると、３令幼虫は、アッセイ培地を摂取
してやがてサナギとなり、さらに培養を続けると成虫と
なる。エチルエーテルにより成虫に麻酔をかけて、眼色
や外部生殖器により雄雌の区別を行い、雄雌の固体数を
調べた。固体数の測定値から雄／雌比を算出した結果を
表１に示す。なお、この雄／雌比が単なる性差による感
受性の違いによるものでないことを雄も正常な修復能力
を有する系を用いた対照群につき確認している。
℃で培養を続けると、３令幼虫は、アッセイ培地を摂取
してやがてサナギとなり、さらに培養を続けると成虫と
なる。エチルエーテルにより成虫に麻酔をかけて、眼色
や外部生殖器により雄雌の区別を行い、雄雌の固体数を
調べた。固体数の測定値から雄／雌比を算出した結果を
表１に示す。なお、この雄／雌比が単なる性差による感
受性の違いによるものでないことを雄も正常な修復能力
を有する系を用いた対照群につき確認している。
【００２４】表１から明らかなように、各変異原物質に
対してＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体ともに、添
加量の増加とともに雄／雌比が上昇することが確認でき
た。すなわち、菌体無添加のアッセイ培地における雄／
雌比に比較してＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体を
添加した培地（ともに２００ｍｇ以上添加したもの）に
あっては、すべての変異原物質について雄／雌比の上昇
が明らかであった。なお、添加した菌体自体のショウジ
ョウバエに対する変異原性は認められていない。このこ
とから、ＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体が食品
（生鮮品の他、調理した食品中や加工食品も含む。）中
に含まれる各種変異原物質の変異原性を抑制することが
確認できた。
対してＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体ともに、添
加量の増加とともに雄／雌比が上昇することが確認でき
た。すなわち、菌体無添加のアッセイ培地における雄／
雌比に比較してＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体を
添加した培地（ともに２００ｍｇ以上添加したもの）に
あっては、すべての変異原物質について雄／雌比の上昇
が明らかであった。なお、添加した菌体自体のショウジ
ョウバエに対する変異原性は認められていない。このこ
とから、ＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体が食品
（生鮮品の他、調理した食品中や加工食品も含む。）中
に含まれる各種変異原物質の変異原性を抑制することが
確認できた。
【００２５】さらに、ＬＳ−ＨＦＤ菌体においてもＬＳ
−ＦＤ菌体とほぼ同様の抗変異原効果を確認できている
ことから、熱に対する安定性が良好な抗変異原性剤と言
える。したがって、予め加熱したＬＳ菌体を添加して
も、また、ＬＳ菌体を添加・含有した製剤や食品を加熱
しても、製剤等中のＬＳ菌体の抗変異原性効果にはほと
んど影響がなく、これらの製剤あるいは食品を食した場
合も、抗変異原性を発揮できることが確認できた。例え
ば、ＬＳ菌を含有するパン生地を焼成して食する場合で
も、ＬＳ菌に起因する抗変異原性が発揮されると考えら
れる。この結果、ＬＳ菌体に他の食品素材や製剤原料を
添加混合し、熱を加えて加工することにより、より摂取
がしやすい状態で提供できることになる。また、加熱に
より菌体が死滅した状態でも、抗変異原性効果を発揮し
うるため、湿気や温度等による菌の発育等による製剤や
食品への悪影響を考慮する必要がなく、その保存が容易
となり、製剤や食品等の安定性が向上される。
−ＦＤ菌体とほぼ同様の抗変異原効果を確認できている
ことから、熱に対する安定性が良好な抗変異原性剤と言
える。したがって、予め加熱したＬＳ菌体を添加して
も、また、ＬＳ菌体を添加・含有した製剤や食品を加熱
しても、製剤等中のＬＳ菌体の抗変異原性効果にはほと
んど影響がなく、これらの製剤あるいは食品を食した場
合も、抗変異原性を発揮できることが確認できた。例え
ば、ＬＳ菌を含有するパン生地を焼成して食する場合で
も、ＬＳ菌に起因する抗変異原性が発揮されると考えら
れる。この結果、ＬＳ菌体に他の食品素材や製剤原料を
添加混合し、熱を加えて加工することにより、より摂取
がしやすい状態で提供できることになる。また、加熱に
より菌体が死滅した状態でも、抗変異原性効果を発揮し
うるため、湿気や温度等による菌の発育等による製剤や
食品への悪影響を考慮する必要がなく、その保存が容易
となり、製剤や食品等の安定性が向上される。
【００２６】さらに、他の変異原物質の種類につき、Ｌ
Ｓ−ＦＤ菌体添加量を一定量（２００ｍｇ／アッセイ培
地／試験管）として、先と同様の手順により３令幼虫に
摂取させて成虫としたときの雄／雌比（表２中の〔Ｒ
値〕）について試験した結果を表２に示す。また、各変
異原物質につき、菌体無添加のアッセイ培地を用いて雄
／雌比（表２中の〔Ｒ０値〕を検出し、さらに変異原物
質を含まない場合についても同様に菌体添加の有無によ
る雄／雌比を確認した。
Ｓ−ＦＤ菌体添加量を一定量（２００ｍｇ／アッセイ培
地／試験管）として、先と同様の手順により３令幼虫に
摂取させて成虫としたときの雄／雌比（表２中の〔Ｒ
値〕）について試験した結果を表２に示す。また、各変
異原物質につき、菌体無添加のアッセイ培地を用いて雄
／雌比（表２中の〔Ｒ０値〕を検出し、さらに変異原物
質を含まない場合についても同様に菌体添加の有無によ
る雄／雌比を確認した。
【００２７】
【表２】 Trp-P-2 ;3-アミノ-1- メチル-5-H- ピリド[4,3-b] イ
ンドール（トリプトファンの加熱生成物） MeIQx ;2-アミノ-3,8- ジメチルイミダゾ[4,5-f] キ
ノキサリン（焼肉中に存在する） NDEA ;ニトロソジエチルアミン( 亜硝酸とアミンか
らの生成物)
ンドール（トリプトファンの加熱生成物） MeIQx ;2-アミノ-3,8- ジメチルイミダゾ[4,5-f] キ
ノキサリン（焼肉中に存在する） NDEA ;ニトロソジエチルアミン( 亜硝酸とアミンか
らの生成物)
【００２８】表２から明らかなように、ＬＳ−ＦＤ菌体
２００ｍｇの添加により、Ｔｒｐ−Ｐ−１及びＭｅＩＱ
ｘ以外の変異原物質に対しては、雄／雌比が２倍以上に
回復しており、顕著な抗変異原性効果〔Ｒ／Ｒ０〕を確
認することができた。
２００ｍｇの添加により、Ｔｒｐ−Ｐ−１及びＭｅＩＱ
ｘ以外の変異原物質に対しては、雄／雌比が２倍以上に
回復しており、顕著な抗変異原性効果〔Ｒ／Ｒ０〕を確
認することができた。
【００２９】〔実施例２〕次に、実施例１で得られたＬ
Ｓ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体各２ｍｇを表３に示
す各変異原物質の水溶液（４００μｇ／ｍｌ）１ｍｌに
懸濁し、２５℃、１時間放置後、遠心分離して、上清中
の存在する菌体に吸着されなかった変異原物質を高速液
体クロマトグラフィーにより分離検出し、未吸着変異原
物質の量から菌体に吸着された変異原物質の量（μｇ変
異原物質／ｍｇ菌体）を算出した。その結果を表３に示
す。
Ｓ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体各２ｍｇを表３に示
す各変異原物質の水溶液（４００μｇ／ｍｌ）１ｍｌに
懸濁し、２５℃、１時間放置後、遠心分離して、上清中
の存在する菌体に吸着されなかった変異原物質を高速液
体クロマトグラフィーにより分離検出し、未吸着変異原
物質の量から菌体に吸着された変異原物質の量（μｇ変
異原物質／ｍｇ菌体）を算出した。その結果を表３に示
す。
【００３０】
【表３】
【００３１】表３から明らかなように、ＬＳ−ＦＤ菌体
及びＬＳ−ＨＦＤ菌体について、各変異原物質の吸着に
関して同様の傾向が観察された。すなわち、ベンゾピレ
ン及びニトロソアミン系（B(a)P 、NDMA、NDEA）の変異
原物質については全く吸着を示さず、ヘテロサイクリッ
ク系（Trp-P-1 、Trp-P-2 、MeIQx 、IQ）の変異原物質
に対して特異的に吸着することがわかった。一方、吸着
しない変異原物質についても実施例１の結果から菌体の
抗変異原性効果が確認されている。なお、ヘテロサイク
リック系の変異原物質にあっては、ＬＳ−ＦＤ菌体とＬ
Ｓ−ＨＦＤ菌体との間に若干の吸着量の差が検出されて
いる。
及びＬＳ−ＨＦＤ菌体について、各変異原物質の吸着に
関して同様の傾向が観察された。すなわち、ベンゾピレ
ン及びニトロソアミン系（B(a)P 、NDMA、NDEA）の変異
原物質については全く吸着を示さず、ヘテロサイクリッ
ク系（Trp-P-1 、Trp-P-2 、MeIQx 、IQ）の変異原物質
に対して特異的に吸着することがわかった。一方、吸着
しない変異原物質についても実施例１の結果から菌体の
抗変異原性効果が確認されている。なお、ヘテロサイク
リック系の変異原物質にあっては、ＬＳ−ＦＤ菌体とＬ
Ｓ−ＨＦＤ菌体との間に若干の吸着量の差が検出されて
いる。
【００３２】〔実施例３〕次に、実施例１と同様の方法
でラクトバチルス・サンフランシスコＡＴＣＣ２７６５
２を培養して得られたＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ
菌体を実施例２と同様の方法で変異原物質の吸着量を調
べた。その結果を表４に示す。
でラクトバチルス・サンフランシスコＡＴＣＣ２７６５
２を培養して得られたＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ
菌体を実施例２と同様の方法で変異原物質の吸着量を調
べた。その結果を表４に示す。
【００３３】
【表４】
【００３４】表４から明らかなように、ラクトバチルス
・サンフランシスコＡＴＣＣ ２７６５２についても、
同ＡＴＣＣ ２７６５１と同様に変異原物質の吸着作用
が観察された。実施例１及び実施例２の結果と本実施例
の結果から、ラクトバチルス・サンフランシスコＡＴＣ
Ｃ ２７６５２についても同様の抗変異原性を有してい
ると解される。また、ＡＴＣＣ２７６５１において観察
されたのと同様のＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体
についての吸着量の差が観察された。すなわち、ベンゾ
ピレン及びニトロソアミン系（B(a)P 、NDMA、NDEA）の
変異原物質については全く吸着を示さず、ヘテロサイク
リック系（Trp-P-1 、Trp-P-2 、MeIQx 、IQ）の変異原
物質に対して特異的に吸着することがわかった。また、
ヘテロサイクリック系の変異原物質にあっては、ＡＴＣ
Ｃ２７６５１の場合と同様に、ＬＳ−ＦＤ菌体とＬＳ−
ＨＦＤ菌体との間に若干の吸着量の差が検出されている
が、大きな差ではなく、抗変異原性剤として有効性に差
異を及ぼすものではない。
・サンフランシスコＡＴＣＣ ２７６５２についても、
同ＡＴＣＣ ２７６５１と同様に変異原物質の吸着作用
が観察された。実施例１及び実施例２の結果と本実施例
の結果から、ラクトバチルス・サンフランシスコＡＴＣ
Ｃ ２７６５２についても同様の抗変異原性を有してい
ると解される。また、ＡＴＣＣ２７６５１において観察
されたのと同様のＬＳ−ＦＤ菌体及びＬＳ−ＨＦＤ菌体
についての吸着量の差が観察された。すなわち、ベンゾ
ピレン及びニトロソアミン系（B(a)P 、NDMA、NDEA）の
変異原物質については全く吸着を示さず、ヘテロサイク
リック系（Trp-P-1 、Trp-P-2 、MeIQx 、IQ）の変異原
物質に対して特異的に吸着することがわかった。また、
ヘテロサイクリック系の変異原物質にあっては、ＡＴＣ
Ｃ２７６５１の場合と同様に、ＬＳ−ＦＤ菌体とＬＳ−
ＨＦＤ菌体との間に若干の吸着量の差が検出されている
が、大きな差ではなく、抗変異原性剤として有効性に差
異を及ぼすものではない。
【００３５】〔実施例４〕実施例１で示した方法と同様
の方法でラクトバチルス・サンフランシスコ ＡＴＣＣ
２７６５３を培養して得られたＬＳ−ＦＤ菌体とＬＳ−
ＨＦＤ菌体についてエームス試験を用いて抗変異原性を
調べた。エームス試験は、サルモネラ菌のヒスチジン要
求性株が変異原物質により、ヒスチジン非要求性への復
帰変異を起こすことを利用した方法である。この復帰変
異した菌のコロニー数により変異原性の強さを調べるこ
とができ、同様にして抗変異原性の強さも調べることが
できる。エームス試験は、文献に記載されているエーム
ス原法（矢作多貴江 蛋白質核酸酵素、２０巻１３号、
１１８６頁（１９７５）に基づいて行った。
の方法でラクトバチルス・サンフランシスコ ＡＴＣＣ
２７６５３を培養して得られたＬＳ−ＦＤ菌体とＬＳ−
ＨＦＤ菌体についてエームス試験を用いて抗変異原性を
調べた。エームス試験は、サルモネラ菌のヒスチジン要
求性株が変異原物質により、ヒスチジン非要求性への復
帰変異を起こすことを利用した方法である。この復帰変
異した菌のコロニー数により変異原性の強さを調べるこ
とができ、同様にして抗変異原性の強さも調べることが
できる。エームス試験は、文献に記載されているエーム
ス原法（矢作多貴江 蛋白質核酸酵素、２０巻１３号、
１１８６頁（１９７５）に基づいて行った。
【００３６】Ｔｒｐ−Ｐ−１溶液又はＴｒｐ−Ｐ−２溶
液（それぞれ２００μｇ／ｍｌ）にＬＳ−ＦＤ菌体とＬ
Ｓ−ＨＦＤ菌体のそれぞれ１０ｍｇを懸濁し２５℃で１
時間放置後、遠心分離により上清を得た。この上清をＴ
ｒｐ−Ｐ−１は１００倍、Ｔｒｐ−Ｐ−１は１０００倍
希釈して試料液とした。この試料液１００μｌに５００
μｌのＳ−９Ｍｉｘと１００μｌのサルモネラ・タイフ
ィミゥリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ）ＴＡ９８株の菌懸濁液を加えて３７℃、２０
分間プレインキュベーションを行った。
液（それぞれ２００μｇ／ｍｌ）にＬＳ−ＦＤ菌体とＬ
Ｓ−ＨＦＤ菌体のそれぞれ１０ｍｇを懸濁し２５℃で１
時間放置後、遠心分離により上清を得た。この上清をＴ
ｒｐ−Ｐ−１は１００倍、Ｔｒｐ−Ｐ−１は１０００倍
希釈して試料液とした。この試料液１００μｌに５００
μｌのＳ−９Ｍｉｘと１００μｌのサルモネラ・タイフ
ィミゥリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ）ＴＡ９８株の菌懸濁液を加えて３７℃、２０
分間プレインキュベーションを行った。
【００３７】これを、所定のソフトアガーに加えた後、
検出用のアガープレート上に注いだ。このプレートを３
７℃で培養して、復帰変異コロニーを数えた。なお、菌
体だけの懸濁液から得られた上清を用いて上記と同様に
操作した場合は、サルモネラ菌の復帰変異コロニーは検
出されなかった。これらの結果から、抗変異原性率を算
出するには次式によればよい。 抗変異原性率（％）＝［（Ｂ−Ａ）／Ｂ］×１００ Ａ：変異原物質と菌体を添加した場合の復帰変異コロニ
ー数 Ｂ：変異原物質のみを添加し、菌体を添加しない場合の
復帰変異コロニー数 結果を表５に示す。
検出用のアガープレート上に注いだ。このプレートを３
７℃で培養して、復帰変異コロニーを数えた。なお、菌
体だけの懸濁液から得られた上清を用いて上記と同様に
操作した場合は、サルモネラ菌の復帰変異コロニーは検
出されなかった。これらの結果から、抗変異原性率を算
出するには次式によればよい。 抗変異原性率（％）＝［（Ｂ−Ａ）／Ｂ］×１００ Ａ：変異原物質と菌体を添加した場合の復帰変異コロニ
ー数 Ｂ：変異原物質のみを添加し、菌体を添加しない場合の
復帰変異コロニー数 結果を表５に示す。
【００３８】
【表５】
【００３９】この結果から明らかなように、菌体とＴｒ
ｐ−Ｐ−１又はＴｒｐ−Ｐ−２とを混合・懸濁してプレ
インキュベートした状態で、菌体がこれらの変異原性物
質に作用し、遠心分離した上清においては、著しくこれ
らの変異原性物質の変異原性が低下されていたと解され
る。また、この結果は、ラクトバチルス・サンフランシ
スコＡＴＣＣ２７６５１及びラクトバチルス・サンフラ
ンシスコＡＴＣＣ２７６５２における吸着試験の結果と
よく一致しており、これらの菌体におけるＦＤ菌体とＨ
ＦＤ菌体間の吸着差及びＴｒｐ−Ｐ−１とＴｒｐ−Ｐ−
２間の吸着差とよく対応されている。
ｐ−Ｐ−１又はＴｒｐ−Ｐ−２とを混合・懸濁してプレ
インキュベートした状態で、菌体がこれらの変異原性物
質に作用し、遠心分離した上清においては、著しくこれ
らの変異原性物質の変異原性が低下されていたと解され
る。また、この結果は、ラクトバチルス・サンフランシ
スコＡＴＣＣ２７６５１及びラクトバチルス・サンフラ
ンシスコＡＴＣＣ２７６５２における吸着試験の結果と
よく一致しており、これらの菌体におけるＦＤ菌体とＨ
ＦＤ菌体間の吸着差及びＴｒｐ−Ｐ−１とＴｒｐ−Ｐ−
２間の吸着差とよく対応されている。
【００４０】また、本実施例においても、ＬＳ−ＦＤ菌
体とＬＳ−ＨＦＤ菌体との差はほとんどなく、加熱後の
菌体であっても有効に抗変異原性剤となり得ることが確
認されている。
体とＬＳ−ＨＦＤ菌体との差はほとんどなく、加熱後の
菌体であっても有効に抗変異原性剤となり得ることが確
認されている。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:225） (72)発明者 古川 秀之 愛知県名古屋市天白区大字八事字裏山15 名城大学内
Claims (5)
- 【請求項１】ラクトバチルス・サンフランシスコ菌体を
有効成分として含有する抗変異原性剤。 - 【請求項２】ラクトバチルス・サンフランシスコ ATCC
27651 の菌体を有効成分として含有する抗変異原性
剤。 - 【請求項３】ラクトバチルス・サンフランシシコ ATCC
27652 の菌体を有効成分として含有する抗変異原性
剤。 - 【請求項４】ラクトバチルス・サンフランシスコ ATCC
27653 の菌体を有効成分として含有する抗変異原性
剤。 - 【請求項５】ラクトバチルス・サンフランシスコ菌体を
抗変異原性を有する有効成分として含有し、かつ加熱さ
れてなることを特徴とする抗変異原性を有する食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6160179A JP2825761B2 (ja) | 1993-07-16 | 1994-07-12 | 抗変異原性剤及び抗変異原性を有する食品 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17678893 | 1993-07-16 | ||
| JP5-176788 | 1993-07-16 | ||
| JP6160179A JP2825761B2 (ja) | 1993-07-16 | 1994-07-12 | 抗変異原性剤及び抗変異原性を有する食品 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0775565A true JPH0775565A (ja) | 1995-03-20 |
| JP2825761B2 JP2825761B2 (ja) | 1998-11-18 |
Family
ID=26486747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6160179A Expired - Fee Related JP2825761B2 (ja) | 1993-07-16 | 1994-07-12 | 抗変異原性剤及び抗変異原性を有する食品 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2825761B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008130036A1 (ja) | 2007-04-18 | 2008-10-30 | Kigen Biogenics Laboratory Co., Ltd. | 乳酸菌を用いた抗変異原性物質の生産方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5858070B2 (ja) | 2014-03-07 | 2016-02-10 | セイコーエプソン株式会社 | プロジェクタおよびプロジェクタの制御方法 |
-
1994
- 1994-07-12 JP JP6160179A patent/JP2825761B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2825761B2 (ja) | 1998-11-18 |
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