JPH078272A

JPH078272A - Ｖａ菌根菌胞子の分離方法

Info

Publication number: JPH078272A
Application number: JP17463493A
Authority: JP
Inventors: Hideo Miyamoto; 秀夫宮本; Jin Miyamoto; 人宮本; Masakazu Sakai; 昌和坂井
Original assignee: Idemitsu Kosan Co Ltd
Current assignee: Idemitsu Kosan Co Ltd
Priority date: 1993-06-23
Filing date: 1993-06-23
Publication date: 1995-01-13

Abstract

(57)【要約】【構成】ギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ菌
根菌の胞子を分離するにあたり、乾式篩を用いて分離す
ることを特徴とするＶＡ菌根菌胞子の分離方法。【効果】本発明の方法によれば、農業や園芸業などの
分野で有用なギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ
菌根菌の胞子を効率的に分離回収することができる。し
かも本発明の方法では、水などを用いていないため、分
離した後の保存安定性に優れており、高活性な状態のま
まのギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の
胞子を得ることができる。したがって、高活性で、保存
安定性が高く、実用性の高いＶＡ菌根菌接種物を作製す
ることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、農業や園芸等の分野で
有用なギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌
の胞子を効率的に分離回収する方法に関する。このよう
にして得られたギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶ
Ａ菌根菌の胞子は、高活性であり、しかも保存安定性が
高いため、実用性の高いＶＡ菌根菌接種物を作製するこ
とが可能となる。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＶＡ菌
根菌（ Vesicular Arbuscular Mycorrhizae ) は、植物
の根に共生することにより、植物の生長を促進したり、
植物の耐病性等を向上させる働きがあり、その有用性は
古くから知られている（小川眞著：ＶＡ菌根とその働
き，森林立地，第３０（２）巻，第５７〜６５頁，１９
８８年．小林紀彦著：ＶＡ菌根菌と土壌病害への利用，
植物防疫，第４２巻，第２５９〜２６６頁，１９８８年
など）。

【０００３】しかしながら、ＶＡ菌根菌を人工的に増殖
させ、ＶＡ菌根菌接種物として商業的に使えるようなも
のは、これまで殆ど製造されておらず、本出願人がグロ
ムス属ＶＡ菌根菌で実用化したのが最初であると思われ
る（特願平３−３３７８９２号）。そして、これ以外の
他の属に属するＶＡ菌根菌、〔例えば、ギガスポラ（ G
igaspora )属，アカウロスポラ（ Acaulospora )属, エ
ントロフォスポラ（ Entrophospora )属, スクレロシス
ティス（ Sclerocystis ) 属, スカテロスポラ（ Scute
llospora )属〕に関しては、未だ実用化に至っていない
のが現状である。

【０００４】これは、ＶＡ菌根菌、特にギガスポラ（ G
igaspora) 属に属するＶＡ菌根菌の大量培養が非常に難
しく、また培養操作が煩雑であり、コストがかかること
が主な原因とされている。

【０００５】ギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ
菌根菌を接種物として利用する場合、増殖された胞子
を、湿式篩（ウエットシーブ法）により分離回収して、
接種物とするのが一般的であるが、大量に胞子を分離す
る場合、分離作業が煩雑で実用的でなく、しかも、得ら
れるＶＡ菌根菌が保存安定性に欠けると共に、活性の高
い胞子を得ることができないという問題があった。

【０００６】そこで本発明者らは、これらの問題を解決
すべく鋭意研究を進めた結果、驚くべきことに、乾式篩
を用いて胞子を分離することにより、分離作業が簡単で
あるばかりでなく、保存安定性に優れ、しかも活性の高
いＶＡ菌根菌の胞子を得ることができることを見出し、
この知見に基づいて本発明を完成するに到った。

【０００７】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、ギガ
スポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子を分
離するにあたり、乾式篩を用いて分離することを特徴と
するＶＡ菌根菌胞子の分離方法を提供するものである。

【０００８】ＶＡ菌根菌は、土壌中に存在する接合菌の
一種であり、その菌糸が様々な植物の根について菌根を
形成し、両者が共生することが知られている。本発明の
方法においては、種々のＶＡ菌根菌の中でも特に、従
来、高密度で増殖させることが困難であったギガスポラ
( Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌を選択的に用い
る。

【０００９】ここでギガスポラ ( Gigaspora )属に属す
るＶＡ菌根菌としては、例えばギガスポラ・マルガリタ
（ Gigaspora margarita ），ギガスポラ・アルビダ
（ Gigaspora albida ），ギガスポラ・ギガンタ（ Gig
aspora gigantea ），ギガスポラ・カロスポラ（ Gigas
pora calospora ），ギガスポラ・ヘテロガマ（ Gigas
pora heterogama ）等を挙げることができる。

【００１０】本発明は、上記の如きギガスポラ（ Gigas
pora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子を分離するにあた
り、乾式篩を用いて分離することを特徴とするものであ
る。すなわち、ギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶ
Ａ菌根菌の胞子は、自然界から得るにせよ、或いは適当
な手段により増殖させて得るにせよ、用土（基材）等か
ら分離する操作が必要である。本発明では、この分離を
乾式篩を用いて行なうことを特徴とする。ここで乾式篩
とは、湿式篩に相対するものであり、水や水溶液などを
一切用いない。この際に用いる篩としては特に限定はな
く、市販の汎用篩なら何でもよく、ステンレスや真鍮な
どで作られたものが好ましい。ここで例えば、ウエット
シービング法のように、湿式篩を用いた場合には、分離
作業が煩雑であるばかりでなく、ＶＡ菌根菌の保存安定
性に問題があり、胞子の活性が低下し、良好なＶＡ菌根
菌接種物を得ることができない。

【００１１】本発明において、分離の対象とするギガス
ポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子は、天
然界から集めたり（鈴木達彦著，ＶＡ菌根に関する諸問
題５，農業および園芸，第６２巻，第３号，ｐ２８〜３
３，１９８７年）、遠心分離により集めた（特開昭６３
−３０９１７８号公報）ものを用いることができる。ま
た、栄養薄膜培養法（特開昭５５−１１８３９０号公
報）や器官培養した根を使用する方法（特公昭６２−４
９０３７号公報）等により増殖させたものを用いること
ができる。さらに、特開平３−８３５２２号公報、特開
平４−３２０６７６号公報、特開昭６３−８７９７３号
公報、特開平３−７６５７２号公報、特開平３−２４７
２７０号公報等に記載された方法により増殖されたギガ
スポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子を用
いるなど、植物とギガスポラ ( Gigaspora )属に属する
ＶＡ菌根菌を共生させ、ＶＡ菌根菌を増殖させる方法で
あれば、いずれの方法により得られたものであってもよ
い。さらにまた、焼成赤玉土を基材として用いて増殖さ
せたＶＡ菌根菌の胞子を用いることもできる。

【００１２】これらの中でも、分離の対象とするギガス
ポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子として
は、焼成赤玉土を基材として用いて増殖させたギガスポ
ラ（Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子が最も好
ましい。

【００１３】すなわち、ギガスポラ（ Gigaspora )属に
属するＶＡ菌根菌を感染させた植物を、焼成赤玉土を基
材として栽培し、ＶＡ菌根菌を増殖させ、得られるＶＡ
菌根菌の胞子を本発明の方法により分離することによ
り、より高活性で、保存安定性に優れた胞子を得ること
ができる。

【００１４】以下、上記した如き、本発明における分離
の対象となるギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ
菌根菌の胞子の好適な入手方法について説明する。すな
わち、上記したように、ギガスポラ（ Gigaspora )属に
属するＶＡ菌根菌を感染させた植物を、焼成赤玉土を基
材として栽培し、ＶＡ菌根菌を増殖させるわけである。

【００１５】ここでギガスポラ ( Gigaspora )属に属す
るＶＡ菌根菌を感染させる植物、すなわちＶＡ菌根菌培
養のための宿主植物としては、ギガスポラ ( Gigaspora
)属に属するＶＡ菌根菌が感染する植物であれば特に制
限はないが、生長が速く、根がよく張る植物であって、
かつ、ギガスポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌
が感染しやすい植物が好適である。具体的には例えば、
デントコーン，トウモロコシ，メヒシバ，ソルゴー（別
名ソルガム又はモロコシ），ムギ，芝草，スダングラ
ス，バヒアグラス，ギニアグラス等のイネ科植物、赤ク
ローバー，白クローバー，ダイズ，カラスノエンドウ，
マングビーン，ピーナッツ，アルファルファ等のマメ科
植物、ナス，トマト，ピーマン，シシトウ等のナス科植
物、ネギ，玉ネギ等のユリ科植物などが挙げられる。こ
れらの植物は、種や実生苗を用いる他、播種して育苗
後、移植して栽培したり、栄養繁殖したり、挿し芽，挿
し木，接木，球根等により増殖，栽培したりして用いら
れる。

【００１６】上記の如き宿主植物に、ギガスポラ ( Gig
aspora )属に属するＶＡ菌根菌を感染させる場合に用い
る基材（培地）としては、土着の雑菌の混入防止という
観点から、滅菌処理（焼成処理も含む）した基材が好ま
しく、例えば焼成アタパルジャイト，焼成モンモリロナ
イト，焼成赤玉土等が挙げられるが、これらの中でも特
に焼成赤玉土が好ましい。

【００１７】ここで用いられる焼成赤玉土は、２００〜
１０００℃で焼成したものが好ましく、２５０〜８５０
℃で焼成したものがより好ましい。また、粒径は、0.3
〜５ｍｍのものが好ましく、0.5 〜３ｍｍのものがより
好ましい。この他、焼成アタパルジャイト，焼成モンモ
リロナイトとしては、焼成温度が２００〜１３００℃で
得られるものが好ましく、３００〜１０００℃のものが
より好ましい。また、粒径は、0.3 〜５ｍｍの範囲のも
のが好ましく、0.5 〜３ｍｍのものがより好ましい。

【００１８】ギガスポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ
菌根菌の宿主植物への接種・感染方法について述べる
と、施用時期としては宿主植物の発根前後のいずれであ
ってもよいが、特に播種時や挿し芽の前処理時、播種や
挿し芽と同時、或いは苗の移植時などが好ましい。ま
た、施用方法としては、ＶＡ菌根菌を前記の基材と混合
したり、根元に入れたり、種子や芽の下層に層状に施用
したり、或いは定植時の植え穴の中に施用したりするこ
とが好ましい。

【００１９】ＶＡ菌根菌を植物へ感染させる場合、通
常、１植物体に対し、１〜100,000 個、好ましくは５〜
10,000個のギガスポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ菌
根菌胞子を植物へ接種すればよい。ＶＡ菌根菌を接種し
た植物を、常法にて栽培することにより、例えば温度５
〜６０℃、好ましくは１０〜４５℃にて、基材のｐＨ３
〜９．５、好ましくは４〜７．５の条件で栽培すること
により、ＶＡ菌根菌が植物の根に感染する。

【００２０】このようにしてＶＡ菌根菌を感染させた植
物を、焼成赤玉土を基材として用いて栽培し、ＶＡ菌根
菌を増殖させる。すなわち、宿主植物であるＶＡ菌根菌
感染植物を、必要により焼成赤玉土を基材とする培地に
植え替え、ＶＡ菌根菌を増殖させると共に、ＶＡ菌根菌
感染植物を充分に生育させる。なお、場合によっては、
当初から、焼成赤玉土からなる基材中で感染・栽培して
もよい。

【００２１】ここで用いる焼成赤玉土としては、前記し
たものが挙げられる。このような焼成赤玉土を基材とし
て用いることにより、ギガスポラ ( Gigaspora )属に属
するＶＡ菌根菌が盛んに増殖し、ＶＡ菌根菌の菌糸が、
基材を満たした容器全体に効率よく伸長する。ＶＡ菌根
菌感染植物は肥料等を与えられて、栄養生長を続けなが
らＶＡ菌根菌の菌糸も増殖する。宿主植物の栽培は通常
の条件で行なえばよく、温度は通常、５〜６０℃であ
る。

【００２２】なお、植物を旺盛に生育させるために肥料
を与えるが、肥料は調製したものであってもよいし、或
いは市販のものであってもよい。また、固形肥料であっ
てもよいし、施肥を調節しやすいように、液体肥料（液
肥）を与えてもよい。また、肥料中に含まれるリンの濃
度は高すぎないようにすることが望ましく、好ましくは
３００ｐｐｍ以下とする。

【００２３】このようにしてＶＡ菌根菌感染植物は栄養
生長を維持するが、適当な時期に、ギガスポラ ( Gigas
pora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子形成を誘導する。通
常、栽培し始めてから、２〜７ケ月程度経過して、植物
が充分に生育し、ＶＡ菌根菌も増殖したところで、水，
栄養等の供給を絶ち、暫く放置すると、ＶＡ菌根菌は胞
子を形成する。すなわち、胞子密度が充分に上がったと
ころで、焼成赤玉土を回収し、必要に応じて乾燥する。
乾燥は、胞子がダメージを受けない程度の温度、例えば
７０℃以下、好ましくは２０〜５０℃の温度で行なえば
良い。

【００２４】このようにギガスポラ（ Gigaspora )属に
属するＶＡ菌根菌を感染させた植物を、焼成赤玉土を基
材として栽培して、ＶＡ菌根菌を増殖させ、多数の胞子
を含む用土（焼成赤玉土）から、乾式篩を用いてギガス
ポラ ( Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子を分離
する方法が本発明の最も好ましい形態である。

【００２５】さらに、このようにして分離された胞子
に、必要に応じて焼成アタパルジャイト，焼成赤玉土，
焼成モンモリロナイト等の滅菌した増量剤を加えて、Ｖ
Ａ菌根菌接種物を製造することができる。このようにし
て得られたＶＡ菌根菌接種物は、保存安定性に優れ、ま
た、胞子の活性が低下することがほとんどなく、野菜・
果樹苗の育苗時や鑑賞用植物の栽培時に接種することに
より、これら植物に、所望しない土着のＶＡ菌根菌や病
原菌の混入を防止しつつ、ＶＡ菌根菌を効率良く感染さ
せ、植物をさらに良好に生育させることができる。

【００２６】

【実施例】次に本発明を実施例により、さらに詳しく説
明する。実施例１及び比較例１（分離回収胞子数の測定）１５０ミリリットル容のビニールポットに、８００℃で
焼成した赤玉土（粒径0.５〜３mm）を基材として、ポッ
トの深さの約３分の２まで敷き詰め、その上に種菌とし
て、休耕地より採取したＶＡ菌根菌〔ギガスポラ・マル
ガリタ（ Gigaspora margarita )〕〔なお、本菌は工業
技術院生命工学工業技術研究所（旧名称：工業技術院微
生物工業技術研究所において受託を拒否された。）の胞
子を５０個接種し、さらにその上に、上記と同じ焼成赤
玉土を、ポットの残り３分の１の深さに充填した。その
上に、赤クローバーの種子３粒を土の中へ軽くピンセッ
トで押し込むように播種した。

【００２７】このようにセットしたポットを計４個用意
し、各ポットをゆっくりと灌水した後、２５〜３０℃の
範囲の温度にコントロールされているガラス温室内で１
ケ月間栽培して、ＶＡ菌根菌を感染させた後、それぞれ
を４鉢の５号プラスチック鉢（1.５リットル容）へ同じ
焼成赤玉土を添加しながら移植した。そして、下記に示
す液肥を、週１回、各鉢２００ミリリットルずつ散布し
ながら、さらに２ケ月間栽培した。その後、灌水や液肥
の供給を止めて１ケ月間放置し、胞子を形成せしめた。

【００２８】なお、液肥としては、次の（１）に示す微
量金属栄養素液と、（２）に示す栄養液肥を用い、
（１）の微量金属栄養素液を１００倍に希釈し、この希
釈液１リットル当り、（２）の栄養液肥を１０ｇ混合
し、さらに硫酸マグネシウム・７水塩を０．２５ｇ加え
て調製した。

【００２９】（１）微量金属栄養素液の組成 Fe・EDTA 0.12 ｇ H₂BO₃ 2.86 ｇ MnCl₂・4H₂O 0.18 ｇ ZnSO₄・7H₂O 0.22 ｇ CuSO₄・5H₂O 0.08 ｇ Na₂MoO₄・2H₂O 0.027 ｇ CoSO₄・6H₂O 0.053 ｇ CaCl₂ 1.0 ｇ Al₂(SO₄)₃ 0.10 ｇ KI 0.10 ｇ KBr 0.10 ｇ H₂O 10リットル（２）栄養液肥の組成普通液肥（Ｎ：Ｐ：Ｋ＝１５：６：６）

【００３０】このうちの２鉢をビニール袋の上にあけ、
焼成赤玉土をよく手で揉みほぐすようにして赤クローバ
ーの根を回収した。次に、目開き１．４ｍｍのステンレ
ス製篩（直径２００ｍｍ）で数回に分けて篩分けを行っ
た。目開き１．４ｍｍの篩に残った画分を画分Ａとし、
通過した画分を、さらに目開き８５０μｍの篩に通し
て、篩に残った画分を画分Ｂとした。以後、上記と同様
にして、目開き５００μｍ，３００μｍ，１８０μｍの
篩分けを順次行ない、篩上に残った画分をそれぞれ画分
Ｃ，画分Ｄ，画分Ｅとした（画分Ａ〜Ｅ＝実施例１）。
このようにして得られた各画分毎の胞子数と総胞子数を
第１表に示す。

【００３１】また、残りの２鉢はウエットシービング法
により胞子を回収した。すなわち、赤クローバーの葉部
を刈り取った後、２０リットル容のポリバケツに入れ、
水道水１０リットルを加えて、よく手で揉みほぐし根部
を除去した。次に、この懸濁液をよくかき回した後、上
記と同じ目開き１．４ｍｍのステンレス製篩（直径２０
０ｍｍ）に通した。このとき、篩の下には、別のポリバ
ケツを用意しておき、篩上に残っている胞子（画分ａ）
を水道水で軽く洗浄した。

【００３２】全ての懸濁液を数回に分けて、全て目開き
１．４ｍｍのステンレス製篩を通した後、この篩を通過
してポリバケツに回収された懸濁画分をよくかきまぜ、
目開き８００μｍの篩を通過させ、篩に残った画分（画
分ｂ）を少量の水道水で洗った。このようにして、以後
同様に、さらに目開き５００μｍ，３００μｍ，１８０
μｍの篩分けを順次行ない、篩上に残った焼成赤玉土画
分をそれぞれ画分ｃ，画分ｄ，画分ｅとした（画分ａ〜
ｅ＝比較例１）。このようにして得られた各画分の胞子
数と総胞子数を第１表に示す。なお、このウエットシー
ビング法によれば、３００μｍの篩を通過して得られる
懸濁液は、２０リットル容のポリバケツ３杯分ともな
り、その操作が大変煩雑であった。

【００３３】

【表１】

【００３４】実施例２及び比較例２（接種物の感染率の測定）実施例１及び比較例１において、それぞれ３００μｍの
篩上に回収された胞子画分Ｄ及び画分ｄを、ビニール製
の３００ミリリットル容ビーカーにそれぞれ移し変え
た。なお、画分ｄを回収する際には、脱塩水で胞子を流
すように回収し、ビーカーに移し終えた後は、デカンテ
ーションにより不要な水を流し去った。

【００３５】このようにして得られた胞子画分Ｄ及び画
分ｄ各々５０ｇを、５００ミリリットル容ビーカーに採
取し、これに粒径３００〜８００μｍの焼成アタパルジ
ャイト（焼成温度６００℃）１５０ｇを加えてよく混合
し、得られた画分を、それぞれ画分Ｄ’，画分ｄ’とし
た。この画分Ｄ’及び画分ｄ’をそれぞれアルミラミネ
ートの袋に入れ、４℃で１ケ月間放置した後、２０℃の
恒温室に保管した。

【００３６】次に、臭化メチルで殺菌した完熟腐葉土と
焼成赤玉土とを１：１の割合で混合し、水で湿らせた
後、１５０ミリリットル容のビニールポットに上から１
ｃｍの深さまで詰めた。その後、外径１５ｍｍの試験管
を用いて、深さ３ｍｍの穴を開けた。このようにして作
製したポットを２０個用意した。その内の１０個には、
上記画分Ｄ’より分離した胞子５０個ずつを、それぞれ
前記穴の底部から側面に均等に注意深く施用した。残り
のポット１０個については、上記画分ｄ’より分離した
胞子５０個ずつを、同様に施用した。

【００３７】一方、予め、殺菌した腐葉土を用いてガラ
ス温室（２０〜３０℃）で育て、播種後４週間を経て本
葉が２枚でているナス（品種：黒陽）の苗を、水で軽く
根部の腐葉土を除去した後、上記の接種物を施用した各
区１０ポットに移植した。根部へ接種物が触れるように
土寄せした後、さらにガラス温室（２０〜３０℃）で１
ケ月間栽培した。

【００３８】その後、各区１０ポットの内の各区５ポッ
トから、ナスの苗を回収し、根部に付着した腐葉土，焼
成赤玉土を、丁寧に水を流しながら除去した。得られた
苗の根部を切断した後、下記に示す方法により染色を行
ない、感染率を求めた。画分Ｄ’由来の胞子を施用した
苗（実施例２）及び画分ｄ’由来の胞子を施用した苗
（比較例２）の各区５ポットの平均感染率を第２表に示
す。

【００３９】〔感染率の測定方法〕まず、次の手順により、トリパンブルーを用いて染
色した。（ア）感染させた植物根を水できれいに洗った。（イ）水を切った根をビーカーに入れ、１０％ＫＯＨ溶
液で、１時間弱く沸騰させながら煮沸した。（ウ）根が着色している場合は、１０％ＫＯＨ溶液を水
ですすいで除去した後、１０倍に薄めた過酸化水素（約
３％）液で５分間脱色し、さらに水洗した。（エ) 下記に示す組成を有するラクトフェノール−トリ
パンブルー染色液に根を浸し、５〜３０分間弱く沸騰さ
せて染色した。＊ラクトフェノール−トリパンブルー染色液の組成石炭酸( フェノール) ２００ｍｌ蒸留水２００ｍｌ乳酸２００ｍｌグリセリン４００ｍｌトリパンブルー１ｇ合計１０００ｍｌ（オ）染色した根を水洗いし、染色液を洗い流す。（カ）水を張ったシャーレに根を入れ、実体顕微鏡で観
察する。次に、以下の如くして感染率を算出した。１ｃｍ間
隔のグリッドの上に、上記のようにして染色したサンプ
ルを載せ、実体顕微鏡により、グリッド上１００箇所の
中、染色した箇所を計数して感染率とした。

【００４０】

【表２】

【００４１】実施例３及び比較例３（接種物を用いての生育試験）実施例２及び比較例２において、画分Ｄ’及び画分ｄ’
の残りの各区５ポットは、さらに３週間同ガラス温室に
て栽培を続けた。その際、移植後１ケ月の時点でピータ
ー液肥（２０−２０−２０）１０００倍液を、各ポット
５０ミリリットルずつ施用した。このように画分Ｄ’と
画分ｄ’とを用いて栽培し、それぞれ得られた植物の地
上部，地下部の生育調査を行なった。１植物体当りの重
量，長さの平均値を第３表に示す。

【００４２】

【表３】

【００４３】実施例４及び比較例４（接種物中のＶＡ菌
根菌胞子の発芽試験）さらに、画分Ｄ’及び画分ｄ’より、それぞれその一部
を採取し、水に懸濁させ、パスツールピペットを用いて
胞子を分離した。各画分の胞子を別々にガラス製の蒸発
皿（直径６０ｍｍ）に約２００個加え、その中に殺菌水
を１０ミリリットル加え、超音波洗浄機で５秒間処理
し、胞子表面に付着している土壌などを除去した。その
後、殺菌水で２回洗浄後、２％クロラミンＴ, 0.02％ス
トレプトマイシン溶液を１０ミリリットル添加し、１５
分間室温で放置した。その後、上記溶液を除去し、殺菌
水で５回洗浄した。

【００４４】このようにして得られた２種類の滅菌済胞
子（画分Ｄ’＝実施例４、画分ｄ’＝比較例４）を発芽
試験に供した。すなわち、殺菌水を殺菌シャーレに加
え、その上に直径２５ｍｍのメンブレンフィルター（商
品名：ヌクレオポア，ヌクレオポア社製）を浮かべ、各
ヌクレオポア当り１０胞子となるように、合計１００胞
子を発芽試験に供した。その後、３０℃インキュベータ
ーに保存し、４週間目に１００胞子全てについて、発芽
している胞子数を調べた。得られた結果を総胞子数で割
り、発芽率として第４表に示す。

【００４５】

【表４】

【００４６】以上の結果について考察してみると、従来
の湿式法を経て得た胞子は、乾式法で得た胞子よりも何
らかのダメージを多く受けているために感染率が低下し
たと思われる。

【００４７】

【発明の効果】本発明の方法によれば、ギガスポラ（ G
igaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞子を効率的に分離
回収することができる。しかも本発明の方法では、水な
どを用いていないため、分離した後の保存安定性に優れ
ており、高活性な状態のままのギガスポラ（ Gigaspora
)属に属するＶＡ菌根菌の胞子を得ることができる。し
たがって、高活性で、保存安定性が高く、実用性の高い
ＶＡ菌根菌接種物を作製することができる。すなわち、
本発明の方法により分離されたギガスポラ（ Gigaspora
)属に属するＶＡ菌根菌の胞子を用いたＶＡ菌根菌接種
物は、保存安定性に優れ、また、胞子の活性が低下する
ことがほとんどなく、野菜・果樹苗の育苗時や鑑賞用植
物の栽培時に接種することにより、これら植物に、所望
しない土着のＶＡ菌根菌や病原菌の混入を防止しつつ、
ＶＡ菌根菌を効率良く感染させ、植物をさらに良好に生
育させることができる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶ
Ａ菌根菌の胞子を分離するにあたり、乾式篩を用いて分
離することを特徴とするＶＡ菌根菌胞子の分離方法。
【請求項２】焼成赤玉土を基材として用いて増殖させ
たギガスポラ（ Gigaspora )属に属するＶＡ菌根菌の胞
子を用いる請求項１記載の分離方法。