JPH0792455B2 - 免疫学的試験用水性溶媒 - Google Patents
免疫学的試験用水性溶媒Info
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- JPH0792455B2 JPH0792455B2 JP61157528A JP15752886A JPH0792455B2 JP H0792455 B2 JPH0792455 B2 JP H0792455B2 JP 61157528 A JP61157528 A JP 61157528A JP 15752886 A JP15752886 A JP 15752886A JP H0792455 B2 JPH0792455 B2 JP H0792455B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はモノクローナル抗体を用いた免疫学的測定法
（PHA法、RPHA法、EIA法、RIA法等）において利用可能
な免疫学的試験用水性溶媒に関するものである。
（PHA法、RPHA法、EIA法、RIA法等）において利用可能
な免疫学的試験用水性溶媒に関するものである。
免疫反応に基づくマーカーを追跡することにより、抗
原、抗体、ウイルスなどを定量的に測定する方法は、赤
血球凝集反応（PHA法）、逆受身赤血球凝集反応（RPHA
法）、細菌の凝集反応、ラテックス凝集反応、酵素免疫
反応（EIA法）、放射免疫反応（RIA法）などとしてひろ
く臨床検査の分野で利用されている。たとえば、RPHA法
について説明すれば、精製したHBs抗体を凝集試験用担
体としてヒツジ赤血球に感作せしめHBs抗体感作赤血球
を得、このものと血液検体とを混合させた時に水性溶媒
中で凝集反応がみられるか否かによって検体中にHBs抗
原が存在しているか否かを判定することができる。
原、抗体、ウイルスなどを定量的に測定する方法は、赤
血球凝集反応（PHA法）、逆受身赤血球凝集反応（RPHA
法）、細菌の凝集反応、ラテックス凝集反応、酵素免疫
反応（EIA法）、放射免疫反応（RIA法）などとしてひろ
く臨床検査の分野で利用されている。たとえば、RPHA法
について説明すれば、精製したHBs抗体を凝集試験用担
体としてヒツジ赤血球に感作せしめHBs抗体感作赤血球
を得、このものと血液検体とを混合させた時に水性溶媒
中で凝集反応がみられるか否かによって検体中にHBs抗
原が存在しているか否かを判定することができる。
また凝集反応がみられた場合は、その検体を更に段階的
に希釈して凝集反応が観察できなくなるまでの希釈倍数
を求めることにより検体中のHBs抗原を定量的に測定す
ることができる。
に希釈して凝集反応が観察できなくなるまでの希釈倍数
を求めることにより検体中のHBs抗原を定量的に測定す
ることができる。
このような免疫学的測定法における免疫反応は水性溶媒
中で行われ、この分析方法は、簡便でかつ測定感度も高
いので各種抗原や抗体等の検査に広く利用されているこ
とは周知の通りである。
中で行われ、この分析方法は、簡便でかつ測定感度も高
いので各種抗原や抗体等の検査に広く利用されているこ
とは周知の通りである。
しかし、これらの水性溶媒中でのモノクローナル抗体を
用いた免疫反応は、用いたモノクローナル抗体に起因す
る明瞭な免疫反応がみられなかったり、非特異反応を示
したりするという問題点がある。
用いた免疫反応は、用いたモノクローナル抗体に起因す
る明瞭な免疫反応がみられなかったり、非特異反応を示
したりするという問題点がある。
ところで、水性溶媒中に測定に用いるモノクローナル抗
体と同種の血清または免疫グロブリン（マウスモノクロ
ーナル抗体の場合、マウス血清または免疫グロブリン）
を添加してこの非特異反応はある程度抑制できる（特開
昭60−57255号）が、未だ不充分なものである。
体と同種の血清または免疫グロブリン（マウスモノクロ
ーナル抗体の場合、マウス血清または免疫グロブリン）
を添加してこの非特異反応はある程度抑制できる（特開
昭60−57255号）が、未だ不充分なものである。
従って、本発明の目的は、免疫反応における非特異反応
を抑制せしめ、極めて検出感度の優れた免疫学的試験用
水性溶媒を提供せんとすることにある。
を抑制せしめ、極めて検出感度の優れた免疫学的試験用
水性溶媒を提供せんとすることにある。
本発明は、モノクローナル抗体を用いた免疫学的測定法
において、測定に用いた特定のモノクローナル抗体と同
一由来でかつ同クラスであって、しかも該測定系に対し
て免疫反応的に影響を与えない抗原決定基を認識するモ
ノクローナル抗体を添加したことを特徴とする免疫学的
試験用水性溶媒からなる。
において、測定に用いた特定のモノクローナル抗体と同
一由来でかつ同クラスであって、しかも該測定系に対し
て免疫反応的に影響を与えない抗原決定基を認識するモ
ノクローナル抗体を添加したことを特徴とする免疫学的
試験用水性溶媒からなる。
本発明では水性溶媒中に添加されるモノクローナル抗体
は、測定に用いるモノクローナル抗体と同じ由来（たと
えば、マウス由来のモノクローナル抗体を用いたときは
マウス）で、かつ同じ免疫グロブリンのクラス（例えば
IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgAまたはIgM等のクラスが
ある）であって、しかも当該測定系に対して免疫反応的
に影響を与えない抗原決定基を認識するモノクローナル
抗体（例えば、HBsAg−抗HBsマウスモノクローナル抗体
測定系において抗インターフェロンマウスモノクローナ
ル抗体を添加）である。
は、測定に用いるモノクローナル抗体と同じ由来（たと
えば、マウス由来のモノクローナル抗体を用いたときは
マウス）で、かつ同じ免疫グロブリンのクラス（例えば
IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgAまたはIgM等のクラスが
ある）であって、しかも当該測定系に対して免疫反応的
に影響を与えない抗原決定基を認識するモノクローナル
抗体（例えば、HBsAg−抗HBsマウスモノクローナル抗体
測定系において抗インターフェロンマウスモノクローナ
ル抗体を添加）である。
添加するモノクローナル抗体は、マウス、ラビット等を
用いた細胞融合法または形質転換法で提供される。
用いた細胞融合法または形質転換法で提供される。
細胞融合法は自体既知の手段にて行われ、その一例は増
殖性を持ったリンパ球と目的とする抗体を産生している
リンパ球とをポリエチレングリコールの存在下で反応せ
しめることにより、増殖性と抗体生能を同時に兼ね備え
た細胞を製するもので、この細胞の産生する抗体は一個
の抗原決定基に対してのみ反応する単一の抗体である。
この細胞融合法により産生されるモノクローナル抗体の
例としては、例えば抗HBs抗体（特開昭56−73029号）、
抗悪性黒色腫細胞抗体〔プロシーディング・ナショナル
・アカデミー・サイエンス（Proc.Natl.Acad.Sci.,75
巻,7号,3405頁,1978年）〕、抗インフルエンザウイルス
抗体（特開昭54−17185号）、抗AFP抗体（特開昭55−43
06号）等が知られている。
殖性を持ったリンパ球と目的とする抗体を産生している
リンパ球とをポリエチレングリコールの存在下で反応せ
しめることにより、増殖性と抗体生能を同時に兼ね備え
た細胞を製するもので、この細胞の産生する抗体は一個
の抗原決定基に対してのみ反応する単一の抗体である。
この細胞融合法により産生されるモノクローナル抗体の
例としては、例えば抗HBs抗体（特開昭56−73029号）、
抗悪性黒色腫細胞抗体〔プロシーディング・ナショナル
・アカデミー・サイエンス（Proc.Natl.Acad.Sci.,75
巻,7号,3405頁,1978年）〕、抗インフルエンザウイルス
抗体（特開昭54−17185号）、抗AFP抗体（特開昭55−43
06号）等が知られている。
当該モノクローナル抗体は、硫安分画・陰イオン交換体
処理をした精製品でもよいが、精製処理としては硫安分
画処理のみで必要十分である。
処理をした精製品でもよいが、精製処理としては硫安分
画処理のみで必要十分である。
当該モノクローナル抗体の添加量は、一般的には0.001
〜0.1mg/ml程度であり、好ましくは0.002〜0.02mg/mlで
ある。0.001mg/ml未満では、非特異反応の抑制には不充
分であり、0.1mg/mlを超えても非特異反応の抑制の効果
には差がない。
〜0.1mg/ml程度であり、好ましくは0.002〜0.02mg/mlで
ある。0.001mg/ml未満では、非特異反応の抑制には不充
分であり、0.1mg/mlを超えても非特異反応の抑制の効果
には差がない。
水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試験用水性
溶媒が利用でき、たとえば水、生理食塩水、各種緩衝液
（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グ
リシン緩衝液）、アルブミン溶液、正常ヒトおよび動物
血清溶液、およびこれらの組み合わせからなる溶液が例
示される。本発明水性溶媒のpHは、約5.5〜８程度が好
ましく、その調整は緩衝液でおこなわれることが好まし
い。本発明水性溶媒中に含まれる塩の濃度は、比較的低
濃度、たとえば0.05〜0.3M程度であることが好ましく、
より好ましくは、生理的等張な溶液である。
溶媒が利用でき、たとえば水、生理食塩水、各種緩衝液
（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グ
リシン緩衝液）、アルブミン溶液、正常ヒトおよび動物
血清溶液、およびこれらの組み合わせからなる溶液が例
示される。本発明水性溶媒のpHは、約5.5〜８程度が好
ましく、その調整は緩衝液でおこなわれることが好まし
い。本発明水性溶媒中に含まれる塩の濃度は、比較的低
濃度、たとえば0.05〜0.3M程度であることが好ましく、
より好ましくは、生理的等張な溶液である。
かくして本発明によって提供される免疫学的試験用水性
溶媒は、PHA法、RPHA法、EIA法、RIA法における免疫反
応の溶媒として使用することができ、その際免疫反応に
おける非特異反応を抑制するものであるから、各種生物
学的微量成分の検出用試薬の水性溶媒として有用であ
る。
溶媒は、PHA法、RPHA法、EIA法、RIA法における免疫反
応の溶媒として使用することができ、その際免疫反応に
おける非特異反応を抑制するものであるから、各種生物
学的微量成分の検出用試薬の水性溶媒として有用であ
る。
以下で本発明を具体的に説明するために、実験例、実施
例を示す。
例を示す。
実験例１ 抗HBsモノクローナル抗体（マウスIgG1）を常法に従い
感作した羊赤血球を用いたRPHA法によって、人血清中の
HBs抗原の測定を行った。而して、マウス血清を測定用
緩衝液に１％添加した場合、抗インターフェロンαモノ
クローナル抗体（マウスIgG1）を測定用緩衝液に10μg/
ml添加した場合及び無添加の場合との間で、その非特異
反応の程度を比較すると表１のようになる。
感作した羊赤血球を用いたRPHA法によって、人血清中の
HBs抗原の測定を行った。而して、マウス血清を測定用
緩衝液に１％添加した場合、抗インターフェロンαモノ
クローナル抗体（マウスIgG1）を測定用緩衝液に10μg/
ml添加した場合及び無添加の場合との間で、その非特異
反応の程度を比較すると表１のようになる。
なお、測定用緩衝液としては0.1Mリン酸緩衝液に0.05M
NaCl、0.5％牛血清アルブミンおよび１％ヒツジ赤血球
膜成分を加え、かつpH7.2に調整したものを使用した。
NaCl、0.5％牛血清アルブミンおよび１％ヒツジ赤血球
膜成分を加え、かつpH7.2に調整したものを使用した。
表１に示した結果によれば、HBsAg陽性血清では測定値
に差はないが、HBsAg陰性血清では、マウス血清添加で
無添加の場合に比べて1/2〜1/4にそのRPHA価が低下し非
特異反応を抑えていることが判る。抗インターフェロン
αモノクローナル抗体（マウスIgG1）添加の場合は、マ
ウス血清添加の場合より、さらに非特異反応が1/2〜1/4
低下した。
に差はないが、HBsAg陰性血清では、マウス血清添加で
無添加の場合に比べて1/2〜1/4にそのRPHA価が低下し非
特異反応を抑えていることが判る。抗インターフェロン
αモノクローナル抗体（マウスIgG1）添加の場合は、マ
ウス血清添加の場合より、さらに非特異反応が1/2〜1/4
低下した。
実験例2:抗HBsモノクローナル抗体を用いたEIA法での実
施例 抗HBsモノクローナル抗体（マウスIgM）をコートしたプ
レート（96穴平底）に測定用緩衝液（0.5％牛血清アル
ブミンを含む0.1Mリン酸緩衝液、pH7.2）50μｌと検体
（人血清）50μｌを加えて40℃２時間インキュベートす
る。インキュベート終了後、0.05％Tween−20を含むリ
ン酸緩衝液で３回洗浄する。ペルオキシダーゼで標識し
た抗HBsモノクローナル抗体（マウスIgG1）100μｌを加
え、40℃で２時間インキュベートする。インキュベート
終了後、0.05％Tween−20を含むリン酸緩衝液で４回洗
浄する。洗浄したプレートに10mg/mlのオルトフェニレ
ンジアミンを溶解したクエン酸−リン酸緩衝液pH5.0を1
00μｌ添加し、室温で30分間反応させる。30分後5N−H2
SO4を50μｌ添加し反応を停止させ、A492nmの吸光度を
測定する。
施例 抗HBsモノクローナル抗体（マウスIgM）をコートしたプ
レート（96穴平底）に測定用緩衝液（0.5％牛血清アル
ブミンを含む0.1Mリン酸緩衝液、pH7.2）50μｌと検体
（人血清）50μｌを加えて40℃２時間インキュベートす
る。インキュベート終了後、0.05％Tween−20を含むリ
ン酸緩衝液で３回洗浄する。ペルオキシダーゼで標識し
た抗HBsモノクローナル抗体（マウスIgG1）100μｌを加
え、40℃で２時間インキュベートする。インキュベート
終了後、0.05％Tween−20を含むリン酸緩衝液で４回洗
浄する。洗浄したプレートに10mg/mlのオルトフェニレ
ンジアミンを溶解したクエン酸−リン酸緩衝液pH5.0を1
00μｌ添加し、室温で30分間反応させる。30分後5N−H2
SO4を50μｌ添加し反応を停止させ、A492nmの吸光度を
測定する。
以上の測定系において測定用緩衝液にマウス血清を１％
添加したもの、抗インターフェロンαモノクローナル抗
体（マウスIgM）を10μg/ml添加したもの及び無添加の
ものについてその測定結果を比較すると表２のようにな
る。
添加したもの、抗インターフェロンαモノクローナル抗
体（マウスIgM）を10μg/ml添加したもの及び無添加の
ものについてその測定結果を比較すると表２のようにな
る。
陽性検体ではA492nm値にほとんど差はないが、陰性検体
では、抗インターフェロンαモノクローナル抗体（マウ
スIgM）を10μg/ml添加したもの、マウス血清添加のも
のおよび無添加の順にA492nm値が減少しており、マウス
IgM添加で最も非特異反応効果の高いことが判った。
では、抗インターフェロンαモノクローナル抗体（マウ
スIgM）を10μg/ml添加したもの、マウス血清添加のも
のおよび無添加の順にA492nm値が減少しており、マウス
IgM添加で最も非特異反応効果の高いことが判った。
実験例３ 実験例１で測定用緩衝液に添加する抗インターフェロン
αモノクローナル抗体（マウスIgG1）の量を0mg/mlから
0.2mg/mlまで変化させてその非特異反応抑制効果の程度
を比較スル表３のようになる。
αモノクローナル抗体（マウスIgG1）の量を0mg/mlから
0.2mg/mlまで変化させてその非特異反応抑制効果の程度
を比較スル表３のようになる。
表３に示した結果のように、HBsAg陽性血清では測定値
に差はないが、HBsAg陰性血清では、抗インターフェロ
ンαモノクローナル抗体（マウスIgG1）の添加量が多く
なるに従ってRPHA価が低下し、非特異反応を抑えている
ことが判る。抗インターフェロンαモノクローナル抗体
（マウスIgG1）の添加量は、0.0005mg/mlでは非特異反
応の抑制には不充分であり、また0.01〜2mg/mlの範囲で
は、その非特異反応の抑制効果に大差なく、0.1mg/mlを
越えても効果に全く差はなかった。
に差はないが、HBsAg陰性血清では、抗インターフェロ
ンαモノクローナル抗体（マウスIgG1）の添加量が多く
なるに従ってRPHA価が低下し、非特異反応を抑えている
ことが判る。抗インターフェロンαモノクローナル抗体
（マウスIgG1）の添加量は、0.0005mg/mlでは非特異反
応の抑制には不充分であり、また0.01〜2mg/mlの範囲で
は、その非特異反応の抑制効果に大差なく、0.1mg/mlを
越えても効果に全く差はなかった。
実施例１ １バイアル中、除菌濾過した塩化ナトリウム加等張リン
酸緩衝液（pH7.2）50mlを含有する下記組成の免疫学的
試験用水性溶媒を得た。
酸緩衝液（pH7.2）50mlを含有する下記組成の免疫学的
試験用水性溶媒を得た。
（組成） リン酸二ナトリウム（無水） 395mg リン酸一カリウム 155mg 塩化ナトリウム 225mg ストローマ（ヒンジ） ３％ 動物血清（ヒンジ） １％ ナトリウムアジド 50mg 抗インターフェロンαマウスモノクローナル抗体（マウ
スIgG1） 0.5mg 実施例2:RPHA試薬キットの構成例 抗HBsマウスモノクローナル抗体（（マウスIgG1）
感作ヒツジ赤血球： １バイアルの内容物は、乾燥感作ヒツジ赤血球及び保存
剤で、の免疫試験用水性溶媒の5mlをこれに加えて懸
濁させるとき、0.5％（w/v）赤血球浮遊液が得られる。
保存剤としてナトリウムアジド0.5mgが添加されてい
る。
スIgG1） 0.5mg 実施例2:RPHA試薬キットの構成例 抗HBsマウスモノクローナル抗体（（マウスIgG1）
感作ヒツジ赤血球： １バイアルの内容物は、乾燥感作ヒツジ赤血球及び保存
剤で、の免疫試験用水性溶媒の5mlをこれに加えて懸
濁させるとき、0.5％（w/v）赤血球浮遊液が得られる。
保存剤としてナトリウムアジド0.5mgが添加されてい
る。
陽性コントロール： １バイアル中、凍結乾燥したHBsAgを含有する。1mlの蒸
留水で溶解したときの本溶液のRPHA法によるHBsAg量は
1:32以上である。
留水で溶解したときの本溶液のRPHA法によるHBsAg量は
1:32以上である。
陰性コントロール： １バイアル中、抗HBsAg交体並びにHBsAgが共に陰性の除
菌濾過した生理食塩液1mlを含有する。保存剤としてナ
トリウムアジド1mg（0.1％）が添加されている。
菌濾過した生理食塩液1mlを含有する。保存剤としてナ
トリウムアジド1mg（0.1％）が添加されている。
リン酸緩衝液：実施例１の水性溶媒 特異性判定のための確認試薬： １バイアル中、除菌濾過した精製抗HBsマウスモノクロ
ーナル抗体（PHA価で1:512以上）を含む凍結乾燥品であ
る。これをのリン酸緩衝液の5mlで溶解する。
ーナル抗体（PHA価で1:512以上）を含む凍結乾燥品であ
る。これをのリン酸緩衝液の5mlで溶解する。
Claims (1)
- 【請求項１】モノクローナル抗体を用いた免疫学的測定
法において、測定に用いた特定のモクローナル抗体と同
一由来でかつ同クラスであって、かつ該測定系に対して
免疫反応的に影響を与えない抗原決定基を認識するモノ
クローナル抗体を添加してなることを特徴とする免疫学
的試験用水性溶媒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61157528A JPH0792455B2 (ja) | 1986-07-04 | 1986-07-04 | 免疫学的試験用水性溶媒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61157528A JPH0792455B2 (ja) | 1986-07-04 | 1986-07-04 | 免疫学的試験用水性溶媒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6312960A JPS6312960A (ja) | 1988-01-20 |
| JPH0792455B2 true JPH0792455B2 (ja) | 1995-10-09 |
Family
ID=15651635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61157528A Expired - Lifetime JPH0792455B2 (ja) | 1986-07-04 | 1986-07-04 | 免疫学的試験用水性溶媒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0792455B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2509001B2 (ja) * | 1989-11-02 | 1996-06-19 | 帝人株式会社 | ヒト・トロンボモジユリンの免疫学的測定方法、そのための試薬及びそのためのキツト |
| IL102495A (en) * | 1992-07-14 | 1998-06-15 | Patchornik Avraham | Universal standard reagents, method of preparing same and use thereof |
| JPH0968531A (ja) * | 1995-08-31 | 1997-03-11 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫測定法 |
| WO2009031228A1 (ja) * | 2007-09-06 | 2009-03-12 | Kuni Enterprise, Inc. | ウイルス抗原の検出方法及びウイルス抗原の検出キット |
| DK3108249T3 (en) | 2014-02-18 | 2019-03-18 | Laboratory Corp America Holdings | METHOD AND SYSTEMS FOR QUICK DETECTION OF MICROORGANISMS USING FREE ANTIBODIES |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5512419A (en) * | 1978-07-13 | 1980-01-29 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | Immunological measurement and reagent therefor |
| JPH0799372B2 (ja) * | 1985-07-13 | 1995-10-25 | 富士レビオ株式会社 | 逆受身凝集反応用非特異反応吸収剤 |
-
1986
- 1986-07-04 JP JP61157528A patent/JPH0792455B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6312960A (ja) | 1988-01-20 |
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