JPH0795012B2 - スライドガラス上に複数の液体試料を同時に引入れるための方法とその装置 - Google Patents

スライドガラス上に複数の液体試料を同時に引入れるための方法とその装置

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JPH0795012B2
JPH0795012B2 JP60501219A JP50121985A JPH0795012B2 JP H0795012 B2 JPH0795012 B2 JP H0795012B2 JP 60501219 A JP60501219 A JP 60501219A JP 50121985 A JP50121985 A JP 50121985A JP H0795012 B2 JPH0795012 B2 JP H0795012B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はスライドガラス上に複数の液体試料、特に細胞
培養で成長した対象物上に多数の血清を同時に引入れる
方法とその装置に関する。
血清が引入れられて成り、培養された細胞の抗原に結合
した抗体の顕微鏡的研究のために標準寸法26×76mm又は
これ以上のスライドガラスに培養基及び細胞を載せかつ
細胞にピペットによって血清を接種することが公知であ
る。このために複数の血清試料の同時引入れ(供給)を
可能にするピペットを複数個結合した多重ピペットが使
用される。この多重ピペットによって培養基及び細胞自
体も前以てスライドガラス上に載せられることができ
る。
比較的狭い格子中の培養基及び細胞をスライドガラス上
に引入れ、かつ細胞の中心に血清を接種することは高い
集中力と経験を必要とする。更に多重ピペットの出口尖
端の不均衡の高さのためにスライドガラス上に不均一な
分布を生じる。従って1つの培養基及び細胞から次の培
養基及び細胞までの血清の展延(スライドガラス上面上
に渡って展延すること)の阻止のために、好ましくはテ
フロンから成る保護層を有するスライドガラスを中に培
養基及び細胞を収容した多数の凹部をもった層で被覆す
ることが公知である。保護層を被覆されたスライドガラ
スの使用は前記血清展延に対する処理及び安全を容易に
するが、対象物上への保護層の層付は試験研究室では不
可能であり、従って既に層付された高価なスライドガラ
スが使用される。入手できる保護層付のスライドガラス
にはその上保護層が特定の清浄液、特にアセトンに対し
て敏感に浸食し、かつ従って制限されてのみ使用される
という欠点を有していた。
保護層を被覆されていないスライドガラスの使用は上記
の研究では狭い限定に制約されていた、そのわけはスラ
イドガラス上に取付けた隣接する培養基及び細胞間の間
隔は展延の阻止のために非常に大きく選ばれており、そ
の結果そのようなスライドガラスの使用は不経済である
からである。
米国特許明細書377699号からスライドガラス上に少量の
液体を規則的に引入れることが行われる装置が公知であ
るが、スライドガラス上に保護層を付けられていないの
で、展延の問題が改善されていない。ここでは液体の引
入れは上方に開いた凹部で行われる。個々の液滴は特定
の高さからスライドガラス上に落下するので、液滴の展
延は排除されない。従ってこの装置によって引入れられ
る最小液体量25μlを越える以前にそのような展延が起
こり得る。
本発明はスライドガラス上への複数の液体試料の同時引
入れのための方法であって、その際展延が行われること
なしにスライドガラス上で小さい間隔で液体試料が配列
されることができるようにする方法を提供することを課
題の基礎とする。本発明の他の課題はこの方法の実施の
ための装置であって、簡単に処理され、安価に作られか
つ試験研究の特別の必要性に適合するものを提供するこ
とであり、これは一連の血清研究が迅速、正確かつ許容
されるように実施されることができるようにすることで
ある。
本発明の課題は請求の範囲に記載された発明によって解
決される。本発明の有利な他の構成は実施態様項、明細
書及び図面に記載されている。
本発明による方法は、特に抗体形成上の血液血清の研究
の際に望まれるようなスライドガラス上への多数の液体
試料の迅速かつ安全な引入れを可能にする。本発明の方
法ステップは特別な技巧なしに実施されることができ
る、そのわけは使用される支持プレートは漏斗機能を有
し、従って多量ピペットの正確な心立てを容易にするか
らである。方法の実施のための任意のガラスが使用され
ることができ、スライドガラスは保護層を有する必要は
ない。しかし好ましくは本発明の実施形態ではあるスラ
イドガラスが使用され、そのスライドガラスは標準化さ
れた培養基及び細胞を付けられている。この場合、研究
されるべき血清の特別に迅速な研究が可能である。
本発明を次に実施例に基づいて説明する。図面は特に本
発明の内容及び実施形態を示す。
第1図は本発明による装置、第2図は本発明の方法の実
施に使用される装置の位置を明らかにするための第1図
の断面図、第3図は液体試料の流出過程を示す図、第4
図は支持板の上面図、第5図は容器の下面図、そして第
6図はホルダの側面図を示す。
薬学研究実験室において、抗体上の血清の研究は毎日の
作業の一部である。抗体形成の決定は一般に蛍光顕微鏡
技術によって行われる。このために培養基及び細胞がス
ライドガラス上に付けられ、細胞上に10〜20μlの量の
血清が引入れられる。潜伏期間の経過後に成果が決定さ
れることができる。
本発明による方法ではまず、80×120mmの大きさの複数
の試料の同時研究のために80×120mmの大きさを有する
スライドガラスが多数の培養基及び細胞によって活性化
される。培養基及び細胞はスライドガラス上で均一に薄
い層に延ばされるか又は等間隔に点状にされることがで
きる。第2の方法は一般的に経済的である、そのわけは
血清の引入れの際種々の血清試料の分離が必要であり、
かつ中間空間に培養基及び細胞が溢流して不経済だから
である。スライドガラス上への培養基及び細胞の引入れ
のために本発明による方法は同様に有利に適用されるこ
とができる。
第1図は本発明による方法の実施のための装置を示す。
スライドガラス2は箱形ホルダ9の底板14上のウエブ15
の間にある。従ってスライドガラス2はホルダ9内に遊
隙なく固定されている。スライドガラス2上に更に以下
に詳しく説明する漏斗板4が載せられている。この漏斗
板4は下方へ向かって狭くなっている多数の漏斗状容器
5を有し、その尖端に向かう下面はスライドガラス2上
にある。スライドガラス2に面した出口開口6を通っ
て、その可撓出口尖端7に容器5の底に取付けられた多
重ピペット3によって液体が押し込まれ、出口開口6を
通って予め定まった量の液体が出る。出口開口6を通る
液体の量はスライドガラス上で出口開口6のまわりに円
形に分布する。この方法でスライドガラス2上に引入れ
られた細胞は漏斗板4の除去後2〜3日で必要な大きさ
に成長する。
漏斗板5の洗浄の後漏斗板は多数のピペット3をスライ
ドガラス上にある細胞上に血清を移すために必要ならば
再び使用されることができる。
第2図はスライドガラス2、支持体板(漏斗板)4及び
多重ピペット3の出口尖端7の配列を拡大して示す。こ
の際出口尖端7は液体試料1、特に血清を有する。スラ
イドガラス2は培養基及び細胞8を有し、培養基及び細
胞上に支持体板4の出口開口6が配置可能である。スラ
イドガラス2上への支持体板4の載置及び漏斗板4上の
容器5中への多重ピペット7の導入後、液体試料1は出
口開口6を通って培養基及び細胞8上に引入れられる。
第3図は液体試料1が培養基及び細胞8上に移される方
法を示す。液体試料は培養基及び細胞8と漏斗板4の下
面の外壁との間にある。それによって培養基及び細胞8
は直接血清を接種されることができる。血清中に含まれ
ている抗体の拡散によって培養基及び細胞の内方の抗原
に接種が行われ、接種には30分〜3時間を要する。この
接種は好ましくはスライドガラス2及び漏斗板4の共通
した配置によって−ホルダ9によって固定されて−イン
キュベータで行われる。この方法で第3図に示すように
液体試料が培養基及び細胞8と支持体板4の壁との間で
アーチ状に保持される。それによって隣接した培養基及
び細胞8中への血清の不所望な流入が回避される。この
方法で一方の培養基及び細胞から他方の培養基及び細胞
への展延のおそれなしに非常に小さく保持される。
本発明の特別な実施形態において、使用されたスライド
ガラス2は標準となる培養基及び細胞を備えたスライド
ガラスであり、これは必要な条件の下に、特に所定の温
度の保持の下に長期間保持されうる。漏斗板4に相当す
る格子中に培養基及び細胞8が配置されている場合、迅
速な研究のために一定の時間後にはじめて使用可能にさ
れるように細胞を成長させることは不必要である。
第4図は漏斗板4の上面図である。米国特許明細書3356
462号には相応した容器配列のプレートが記載されてい
るか、図示のプレートは微量滴定のための液体試料の収
容に使用される。本発明による漏斗板4は米国特許明細
書3356462号による構成とは、本発明では容器の下尖端
が穿孔されていることによって相違する。従って容器5
は本発明では使用された多量ピペット3のための導入漏
斗として使用される。米国特許明細書3356462号も、特
定の際に上記米国特許明細書3356462号の容器中への多
数の液体試料の移行のために役立つ多数の孔明き容器を
備えた可撓フィルムが公知である。しかしフィルムの可
撓性並びに壁厚及び貫通開口の形態は本発明のための使
用には適合しない。フィルムの可撓性によってフィルム
は平坦な下敷き上に均一に伸ばされず、その結果フィル
ムの凹部が下敷きと接触する箇所でのみ、液体が流出で
きる。しかし米国特許明細書3356462号によるプレート
中の微量の移動のためのフィルムの使用の場合にはこの
ことは無用である。従って平坦なガラス表面上の微量の
均一が許容できる引入れはこのような装置によっては不
可能である。
従って正確な配置のために全ての容器に対して同一平面
内にある出口開口を備えた漏斗板は不可欠である。この
ことは特に固定した漏斗板によって達成される。その他
円筒状容器のV塊の下部分の開口角17の形態によってス
ライドガラス2上に第3図に示す液体試料1の特別のア
ーチ形が生じる。角度17は好ましくは90゜以上であるべ
きである。実際上の実施形態においては角度は略120゜
である。
容器の尖端を通る孔又は打ち抜きは略円筒状の形態を有
し、かつ本発明の特別の実施形態においてその外面はば
りとりされず、むしろスライドガラス2と漏斗板4の直
接接触の際に液体1の側方流出を容易にするために粗い
面を有する。漏斗板4は本発明の特別の実施形態におい
て8×12=96個の容器の格子を有する。
第5図は容器5の下面の小孔の粗面の縁を示す。
本発明による構成は小さいスライドガラスをも使用しう
るためホルダ9の底板14上にウエブ16があり、ウエブは
小さいスライドガラス2の相互の移動を阻止する。大き
なスライドガラスの側方を区画するウエブ15が他のウエ
ブ16よりも高く形成されている場合、ホルダ9は大きさ
の異なる2つのスライドガラスに使用できる。大きいス
ライドガラスの使用の際にスライドガラスは別のウエブ
16上に位置し、かつ側方の高いウエブ15によって区画さ
れる。一方小さいスライドガラス2はウエブ16又は16と
15の間に位置する。
好ましくは蓋状の部材が設けられ、この部材はインキュ
ベータへの格納の際にホルダ9中のスライドガラスを外
域から保護する。
本発明は医薬研究技術への使用に限らず、本発明による
方法によって電子工業における導体板上にカラーマーク
を付けられ、或いは化学生成物への適用も可能である。
図中符号 1……液体試料 2……スライドガラス 3……多重ピペット 4……漏斗板 5……容器 6……出口開口 7……出口尖端 8……培養基及び細胞 9……ホルダ 10……蓋 11……縁 12……孔 13……孔の縁 14……底板 15……ウエブ 16……ウエブ 17……開口角
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭58−71462(JP,A) 特開 昭53−144761(JP,A) 実開 昭55−32455(JP,U) 西独特許公開8107964(DE,A) 西独特許公開2116886(DE,A)

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】液体試料を分離するための仕切りなしに平
    なスライドガラス表面に多重ピペットから複数の小さい
    液体試料を同時に移送するための方法にして、その際ス
    ライドガラスの平な上表面上で消失することなく小さい
    広がりで相互に分離した状態に液体試料を保持する、前
    記方法において、 平な上表面を有するスライドガラスをホルダ中に移動不
    可能な方法で固定・配置して保持し、多数の漏斗状容器
    をホルダの内面によって位置決めし、その際各容器はス
    ライドガラスの平な上表面と当接する各尖端によってス
    ライドガラス上の位置にあって、その下端にオリフィス
    を備えた尖端を形成するように収斂しており、漏斗板は
    全ての尖端を平な上表面と接触させかつこれと尖端との
    間のスペースを閉じるのに十分な強度と剛性を有し、多
    重ピペットの尖端が漏斗板の尖端の内面に当接し、それ
    によって直接液体試料を多重ピペットから漏斗板のオリ
    フィスを通って移送しかつスライドガラスの平な上表面
    上に位置決めしかつスライドガラス上に液体試料の広が
    り又はぼたぼたしたたり落ちることなく移送するように
    液体試料を有する多重ピペットの出口尖端を漏斗板の関
    連した尖端に近づけることを特徴とする前記方法。
  2. 【請求項2】液体試料(1)の供給の前に、スライドガ
    ラス(2)は培養基及び細胞(8)を塗布される、請求
    の範囲第1項記載の方法。
  3. 【請求項3】漏斗板(4)が培養基及び細胞(8)によ
    る液体試料(1)の十分な浸透が行われるまでの時間、
    スライドガラス(2)に対して関係位置に止まる、請求
    の範囲第2項記載の方法。
  4. 【請求項4】液体試料(1)が血清である、請求の範囲
    第2項記載の方法。
  5. 【請求項5】スライドガラス(2)及び漏斗板(4)
    は、培養基における細胞(8)が液体試料中の分子の存
    在により反応するまで、相互間の位置を保持される、請
    求の範囲第3項又は第4項記載の方法。
  6. 【請求項6】スライドガラス(2)が横に間隔をおいた
    多数の培養基及び細胞(8)及びその中で血清等の液体
    試料を被覆されている請求の範囲第1項記載の方法。
  7. 【請求項7】漏斗板(4)の出口開口(6)の間隔及び
    配列に相応して培養基及び細胞(8)の間隔及び配列が
    行われる、請求の範囲第1項記載の方法。
  8. 【請求項8】多数の小さい液体試料が同時に多重ピペッ
    トからスライドガラス上に移送され、その際液体試料は
    平な上表面上に消失することなく小さな間隔をおいて分
    離されて保持されている、形式の方法の実施のための装
    置において、 該装置は平らな上表面を有するスライドガラスと、ホル
    ダ内に運動不可能にスライドガラスを保持するホルダ
    と、内面を備えた多数の漏斗状容器を有する漏斗板であ
    って、漏斗板の各々はその下端にオリフィスを備えた尖
    端を形成し、スライドガラスの平な上表面と全ての尖端
    とを接触させるような漏斗板とから成り、 漏斗板は全ての尖端を平な表面と接触させかつ尖端の間
    のスペースを閉鎖するのに十分な強度と剛性を有し、 多重ピペットは少量の液体試料を含む多重ピペット尖端
    を有しかつ全ての多重ピペット尖端が漏斗板尖端の内面
    と当接しかつそれによって直接液体試料を他重ピペット
    から漏斗板のオリフィスを通って移送しそして各液体試
    料の保証された移送のために漏斗板の尖端によって当接
    されたスライドガラスの平な上表面上に液体試料を塗布
    ・位置決めしかつスライドガラス上の液体試料の広がり
    を生じ得るようにぼたぼたしたたり落ちることなく又は
    消失することなく移送するように構成されたことを特徴
    とする前記装置。
  9. 【請求項9】ホルダ(9)は箱形に形成されている、請
    求の範囲第8項記載の装置。
  10. 【請求項10】漏斗状容器(5)が漏斗板(4)の上表
    面(11)から第1の例では円筒状にかつ下部の尖端にお
    ける円筒状孔を有するオリフィスと共にV形にテーパを
    付けられている、請求の範囲第8項記載の装置。
  11. 【請求項11】孔の縁(13)の尖端の外表面が粗くされ
    ている、請求の範囲第10項記載の装置。
  12. 【請求項12】ホルダがベース板(14)を有しかつ使用
    されたスライドガラスの横の固定のためのウエブ(15)
    がホルダ(9)のベース板(14)上に設けられている、
    請求の範囲第8項記載の装置。
  13. 【請求項13】他のウエブ(6)が接触表面を分割し、
    ベース板(14)の全表面よりも小さい数即ち数個がスラ
    イドガラス(2)の傍らに並んで位置することを可能に
    するためにベース板(14)上に設けられる請求の範囲第
    12項記載の装置。
JP60501219A 1984-02-29 1985-02-25 スライドガラス上に複数の液体試料を同時に引入れるための方法とその装置 Expired - Lifetime JPH0795012B2 (ja)

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DE3407849.5 1984-02-29
PCT/DE1985/000058 WO1985003886A1 (fr) 1984-02-29 1985-02-25 Procede et installation pour amener simultanement une pluralite d'echantillons de liquides sur une lame porte-objets

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JPS61501286A JPS61501286A (ja) 1986-06-26
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JP60501219A Expired - Lifetime JPH0795012B2 (ja) 1984-02-29 1985-02-25 スライドガラス上に複数の液体試料を同時に引入れるための方法とその装置

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