JPH0797985B2

JPH0797985B2 - 植物カルス細胞分化剤の製造法

Info

Publication number: JPH0797985B2
Application number: JP62037529A
Authority: JP
Inventors: 隆廣岡本
Original assignee: エヌオーケー株式会社
Priority date: 1987-02-20
Filing date: 1987-02-20
Publication date: 1995-10-25
Anticipated expiration: 2010-10-25
Also published as: JPS63207379A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、植物カルス細胞分化剤の製造法に関する。更
に詳しくは、微生物を培養して植物カルス細胞分化剤を
製造する方法に関する。

〔従来の技術〕

分化した植物組織の一部（外植片）を適当な培地に移し
て培養すると脱分化が起り、細胞分裂をくり返して無定
形の組織塊である植物カルスを生ずる。外植片からカル
スを誘導し、増殖するには、一般に基本培地に植物ホル
モンであるサイトカイニン類（カイネチンなど）または
オーキシン類（2,4−ジクロル酢酸、インドール酢酸、
インドール酪酸など）が添加されて用いられる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

このように、現在植物カルス細胞の再分化には種々の植
物ホルモンが使用されているが、その際厳密な濃度のコ
ントロールが要求され、そのため多くの実験例を必要と
し、また培地の選択が難かしいなどの難点がみられる。

そこで、本発明者はかかる難点のみられない植物カルス
細胞分化剤を求めて種々検討を重ねた結果、先に本発明
者によって見出されたエンターバクター属に属する微生
物（特願昭61−186,228号参照）の培養液が有効な植物
カルス細胞分裂促進効果を有することを見出した。

〔問題点を解決するための手段〕

従って、本発明はかかる植物カルス細胞分化剤の製造法
に係り、植物カルス細胞分化剤の製造は、エンターバク
ター属に属する微生物Enterobacter sp No.11−５（FER
M P−8884）を培養し、好ましくはトリプトファンの存
在下において培養し、培養液中の菌を死滅させた後、植
物カルス細胞分化剤を採取することにより行われる。

本発明において使用される微生物Enterobacter sp No.1
1−５（FERM P−8884）は、本発明者によって兵庫県城
崎郡竹野町の土壌から、昭和61年１月下記の方法により
分離されたものである。

即ち、Ｌ−ブイヨン（トリプトン１％、酵母エキス0.5
％、NaCl 0.5％、殺菌前のpH7.2）5mlを試験管に入
れ、これに上記土壌1gを添加して、37℃で24時間振とう
培養した。

Enterobacter sp No.11−５は、下記の菌学的性質を有
する。

A.形態（１）細胞の形、大きさ：グラム陰性杆菌、1.5〜２μ
ｍ×１μｍ（２）細胞の多形性：なし（３）運動性：なし（４）胞子：なし（５）グラム染色性：陰性（６）抗菌性：不明 B.培地における成育状態（１）肉汁寒天平板培養：茶色、光沢あり、拡散性なし（２）肉汁寒天斜面培養：茶色、光沢あり、拡散性なし（３）肉汁液体培養：茶色、光沢あり、拡散性なし C.生理学的性質（１）硝酸塩の還元：陽性（２）脱窒反応：不明（３）MRテスト：陰性（４）VPテスト：陽性（５）インドールの生成：陰性（６）硫化水素の生成：陰性（７）でん粉の加水分解：陰性（８）クエン酸の利用：陽性（９）無機窒素源の利用：陽性（10）色素の生成：陰性（11）ウレアーゼ：陽性（12）オキシダーゼ：陰性（13）カタラーゼ：不明（14）生育の範囲:pH4〜10、温度15〜45℃ （15）酸素に対する態度：通性嫌気性（16）Ｏ−Ｆテスト：発酵（17）糖類からの酸の生成培地：ペプトン2g、NaCl 5g、K₂HPO₄ 0.3g、炭水化物
10g、ブロムチモールブルー0.08g、寒天15g、蒸留水100
0ml（pH7.1）添加濃度:1％Ｌ−アラビノーズ − Ｄ−キシロース（不明）Ｄ−グルコース＋Ｄ−マンノース（不明）Ｄ−フラクトース（不明）Ｄ−ガラクトース（不明）麦芽糖＋しょ糖＋乳糖＋トレハロース（不明）Ｄ−ソルビット＋Ｄ−マンニット − イノシット＋グリセリン（不明）でん粉 − 以上の菌学的性質に基いて、本菌をBergey's Mannual o
f Determinative Bacteriology 第８版およびその他の
文献により検索した結果、エンターバクター属に属する
菌であることが確認された。

本菌Enterobacter sp No.11−５の培養は、任意の培地
を用い、振とう条件下で37℃で約72〜90時間程度行われ
る。その際、培地１当り約１〜4mg程度のトリプトフ
ァンを添加しておくと、それから得られる植物カルス細
胞分化剤の再分化作用は一層高められる。培養後は、培
養液に塩酸によって代表される無機酸などを加えて菌を
死滅させ、その上澄液を細胞分化剤として採取する。

かかる植物カルス細胞分化剤を用いての植物カルス細胞
の再分化は、Murashige＆Skoog培地（1962）などを基本
培地に用い、これに上記細胞分化剤を基本培地１当り
約４〜16ml添加したものに、イネカルス細胞、レッドキ
ャベツカルス細胞などの植物カルス細胞をピンセットな
どで移し、光の照射下または遮光下に、25〜30℃で１〜
２週間培養することにより行われる。

〔発明の効果〕

本発明により、植物カルス細胞分化剤として有効な、植
物ホルモン様の活性を有する物質が、微生物の培養物か
ら得られる。この細胞分化剤は、その濃度のコントロー
ルおよび培地の選択の点において従来の植物ホルモンの
場合程厳格さを要せず、またその活性も大である。

〔実施例〕

次に、実施例について本発明を説明する。

実施例１ Enterobacter sp No.11−５（FERM P−8884）を、次の
組成を有する培地（Mineral Medium）を用いて、振とう
回数100rpmで振とうさせながら37℃で90時間培養した。

（NH₄）₂SO₄ 1.0 （ｇ） KH₂PO₄ 10.0 KOH 1.94 MgSO₄・7H₂O 0.1 クエン酸ナトリウム 0.5 蒸留水（pH7.0） 1000 （ml）この培養液に、1N塩酸500μを加えて菌を死滅させ、
遠心機（7000rpm、15分間、室温）で集菌し、上澄液を
採取して細胞分化剤Ｉとした。

実施例２実施例１において、最終濃度が3mg/mlとなる量のトリプ
トファンが培地成分として更に添加されて用いられ、細
胞分化剤IIを得た。

比較例細胞分化剤IIIとして、それぞれ濃度1mg/mlの2,4−ジク
ロルフェノキシ酢酸およびカイネチン（６−フルフリル
アミノプリン）の等量混合物が用いられた。

〔分化試験〕

以上の各細胞分化剤を、Murashige＆Skoog培地（培地１
当り更にイノシトール100mg、しょ糖30g、チアミン・
塩酸塩0.4mgおよび緩衝液159mgを添加したもの;GIBCO社
製品）１当り、それぞれ次の表１に示されるような量
で添加し、イネカルス細胞の再分化テストを行なった。
再分化テストは、約100mgのイネカルス細胞を用い、25
℃、10日間、200ルックスのライトを連続的に照射しな
がら行ない、４サンプル中何個のサンプルが分化したか
を観察することによって行われ、次のような結果を得
た。

また、イネカルス細胞の代わりにレッドキャベツカルス
細胞を用いると、次のような結果が得られた。

なお、Murashige＆Skoog培地のみを用い、細胞分化剤を
用いない場合（表１〜２のNo.8）には、分化したサンプ
ルは、イネ、レッドキャベツ共ある程度は生育がみられ
るものの、一定のところで生育を停止してしまった。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】エンターバクター属に属する微生物Entero
bacter sp No.11−５（FERM P−8884）を培養し、培養
液中の菌を死滅させた後、植物カルス細胞分化剤を採取
することを特徴とする植物カルス細胞分化剤の製造法。
【請求項２】エンターバクター属に属する微生物Entero
bacter sp No.11−５（FERM P−8884）をトリプトファ
ンの存在下において培養し、培養液中の菌を死滅させた
後、植物カルス細胞分化剤を採取することを特徴とする
植物カルス細胞分化剤の製造法。