JPH0799995A - ビフィドバクテリウム菌数の測定法 - Google Patents
ビフィドバクテリウム菌数の測定法Info
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- JPH0799995A JPH0799995A JP27123193A JP27123193A JPH0799995A JP H0799995 A JPH0799995 A JP H0799995A JP 27123193 A JP27123193 A JP 27123193A JP 27123193 A JP27123193 A JP 27123193A JP H0799995 A JPH0799995 A JP H0799995A
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- JP
- Japan
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- bifidobacterium
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- bacteria
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 選択性が完全ではない選択培地を用いてもコ
ロニーの識別が不要で一部乳酸菌の増殖による妨害を受
けにくい、実施容易なビフィドバクテリウム菌数測定法
を提供する。 【構成】 ビフィドバクテリウム菌用選択培地を用いて
発酵乳等に含まれるビフィドバクテリウム菌の数を測定
するに当たり、上記選択培地により液体培地を調製し、
該液体培地を用いる試験管培養においてビフィドバクテ
リウム菌の増殖が認められた試験管を陽性管として扱う
最確数法により菌数測定を行う。
ロニーの識別が不要で一部乳酸菌の増殖による妨害を受
けにくい、実施容易なビフィドバクテリウム菌数測定法
を提供する。 【構成】 ビフィドバクテリウム菌用選択培地を用いて
発酵乳等に含まれるビフィドバクテリウム菌の数を測定
するに当たり、上記選択培地により液体培地を調製し、
該液体培地を用いる試験管培養においてビフィドバクテ
リウム菌の増殖が認められた試験管を陽性管として扱う
最確数法により菌数測定を行う。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ビフィドバクテリウム
菌を含有する飲食品、医薬品等の中のビフィドバクテリ
ウム菌数を測定する方法に関するものである。
菌を含有する飲食品、医薬品等の中のビフィドバクテリ
ウム菌数を測定する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ビフィドバクテリウム菌は整腸作用や健
康増進作用を有する有用細菌として近年注目されてお
り、その生菌を含有させた発酵乳、医薬品、いわゆる健
康食品等が、多数商品化されている。これらビフィドバ
クテリウム菌を含有させた商品を製造するに当たって
は、ビフィドバクテリウム菌生菌数を測定することが品
質管理上、あるいは製造技術の開発上、不可欠である。
しかしながら、ビフィドバクテリウム菌のみの純粋培養
物を用いた商品ならばビフィドバクテリウム菌数の測定
はさほど困難なことではないが、現在市販されている大
多数の製品のようにビフィドバクテリウム菌と乳酸菌と
の混合培養物（または各菌単独培養物の混合物）からな
るものにおけるビフィドバクテリウム菌数を正確に測定
することはきわめて困難であった。
康増進作用を有する有用細菌として近年注目されてお
り、その生菌を含有させた発酵乳、医薬品、いわゆる健
康食品等が、多数商品化されている。これらビフィドバ
クテリウム菌を含有させた商品を製造するに当たって
は、ビフィドバクテリウム菌生菌数を測定することが品
質管理上、あるいは製造技術の開発上、不可欠である。
しかしながら、ビフィドバクテリウム菌のみの純粋培養
物を用いた商品ならばビフィドバクテリウム菌数の測定
はさほど困難なことではないが、現在市販されている大
多数の製品のようにビフィドバクテリウム菌と乳酸菌と
の混合培養物（または各菌単独培養物の混合物）からな
るものにおけるビフィドバクテリウム菌数を正確に測定
することはきわめて困難であった。
【０００３】従来、ビフィドバクテリウム菌と乳酸菌と
が混在する発酵乳等におけるビフィドバクテリウム菌数
の測定法としては、まず、検体希釈液を非選択的な平板
培地に塗布して培養し、培養終了後、発育したコロニー
の性状、菌の形態、好気性条件下での発育の有無などを
検査することによってビフィドバクテリウム菌の同定と
生菌数の測定を行う方法があったが、操作が繁雑で熟練
を要するという問題点があった。
が混在する発酵乳等におけるビフィドバクテリウム菌数
の測定法としては、まず、検体希釈液を非選択的な平板
培地に塗布して培養し、培養終了後、発育したコロニー
の性状、菌の形態、好気性条件下での発育の有無などを
検査することによってビフィドバクテリウム菌の同定と
生菌数の測定を行う方法があったが、操作が繁雑で熟練
を要するという問題点があった。
【０００４】一方、乳酸菌は増殖させずビフィドバクテ
リウム菌のみを選択的に増殖させることができる選択培
地を用いて平板培地培養とコロニー計数を行う方法があ
る。この方法の成否は用いる選択培地の良否に依存する
が、完全な選択性を備えたビフィドバクテリウム菌用選
択培地はまだ提供されていない。
リウム菌のみを選択的に増殖させることができる選択培
地を用いて平板培地培養とコロニー計数を行う方法があ
る。この方法の成否は用いる選択培地の良否に依存する
が、完全な選択性を備えたビフィドバクテリウム菌用選
択培地はまだ提供されていない。
【０００５】すなわち、従来代表的なビフィドバクテリ
ウム菌用選択培地として知られている特公平４−２９３
５９号公報記載の選択培地を用いても、酪農乳酸菌の中
でもL.アシドフルス、L.カゼイ等、一部のものは僅かな
がら増殖し、習熟者にとっては容易に識別可能なもので
はあるがピンポイントコロニーを形成する。この問題点
を解決するため、特開平４−２０２８３号公報記載の選
択培地は培地構成成分のうち乳酸菌の増殖を助ける成分
を含有する可能性ある有機窒素源や炭素源をあらかじめ
乳酸菌で処理して用いることにしているが、前処理に手
間がかかり過ぎるという欠点がある。
ウム菌用選択培地として知られている特公平４−２９３
５９号公報記載の選択培地を用いても、酪農乳酸菌の中
でもL.アシドフルス、L.カゼイ等、一部のものは僅かな
がら増殖し、習熟者にとっては容易に識別可能なもので
はあるがピンポイントコロニーを形成する。この問題点
を解決するため、特開平４−２０２８３号公報記載の選
択培地は培地構成成分のうち乳酸菌の増殖を助ける成分
を含有する可能性ある有機窒素源や炭素源をあらかじめ
乳酸菌で処理して用いることにしているが、前処理に手
間がかかり過ぎるという欠点がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】そこで本発明の目的
は、選択培地を用いる従来のビフィドバクテリウム菌数
測定法における上述のような問題点を解決し、選択性が
完全ではない選択培地を用いてもコロニーの識別が不要
で一部乳酸菌の増殖による妨害を受けにくい、実施容易
なビフィドバクテリウム菌数測定法を提供することにあ
る。
は、選択培地を用いる従来のビフィドバクテリウム菌数
測定法における上述のような問題点を解決し、選択性が
完全ではない選択培地を用いてもコロニーの識別が不要
で一部乳酸菌の増殖による妨害を受けにくい、実施容易
なビフィドバクテリウム菌数測定法を提供することにあ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成した本発
明は、ビフィドバクテリウム菌用選択培地を用いてビフ
ィドバクテリウム菌含有物中のビフィドバクテリウム菌
数を測定するに当たり、ビフィドバクテリウム菌用選択
培地により液体培地を調製し、該液体培地を用いる試験
管培養においてビフィドバクテリウム菌の増殖が認めら
れた試験管を陽性管として扱う最確数法により菌数測定
を行うことを特徴とするものである。
明は、ビフィドバクテリウム菌用選択培地を用いてビフ
ィドバクテリウム菌含有物中のビフィドバクテリウム菌
数を測定するに当たり、ビフィドバクテリウム菌用選択
培地により液体培地を調製し、該液体培地を用いる試験
管培養においてビフィドバクテリウム菌の増殖が認めら
れた試験管を陽性管として扱う最確数法により菌数測定
を行うことを特徴とするものである。
【０００８】
【作用】最確数法は、試料の数段階の連続希釈系列の一
定量を数本の液体培地に加えて所定の条件で培養し、測
定対象菌の増殖またはそれに基づく所定の反応の認めら
れた試験管数から試料中の細菌数を最確数・ＭＰＮ（統
計学的に最も確からしい数値；most probable number）
として確率論的に推計する、それ自体は周知の方法であ
る（たとえば水や食品中の大腸菌数の標準的な測定法と
して、世界的に普及している。）。
定量を数本の液体培地に加えて所定の条件で培養し、測
定対象菌の増殖またはそれに基づく所定の反応の認めら
れた試験管数から試料中の細菌数を最確数・ＭＰＮ（統
計学的に最も確からしい数値；most probable number）
として確率論的に推計する、それ自体は周知の方法であ
る（たとえば水や食品中の大腸菌数の標準的な測定法と
して、世界的に普及している。）。
【０００９】最確数法による菌数測定は、通常、次のよ
うにして行われる（参考文献：日本薬学会編「衛生試験
法・注解」１９９０年版，第１５０〜１５４頁）。 適当濃度の試料溶液を調製し滅菌希釈水を用いて１
０倍段階希釈を行う。 希釈試料溶液１０ml、１ml、および０.１mlを、所
定の液体培地１０mlを入れた試験管３本または５本に無
菌的に添加し、培養する。 培養後、測定対象菌の増殖または所定の反応が認め
られた試験管数を陽性管数とし、最確数表より試料１０
０mlまたは１００ｇ中の菌数を求める。
うにして行われる（参考文献：日本薬学会編「衛生試験
法・注解」１９９０年版，第１５０〜１５４頁）。 適当濃度の試料溶液を調製し滅菌希釈水を用いて１
０倍段階希釈を行う。 希釈試料溶液１０ml、１ml、および０.１mlを、所
定の液体培地１０mlを入れた試験管３本または５本に無
菌的に添加し、培養する。 培養後、測定対象菌の増殖または所定の反応が認め
られた試験管数を陽性管数とし、最確数表より試料１０
０mlまたは１００ｇ中の菌数を求める。
【００１０】最確数表は、各希釈段階の試料溶液につき
試験管３本を用いた場合と５本を用いた場合との両方に
ついて、すべての陽性管数の組み合わせとその場合の最
確数を一覧表にしたものであって、複数の表が報告され
利用されているが、どの表を用いても、求められる菌数
に大きな相違はない。試験管５本を用いる場合の一例を
表１〜表３に示す。
試験管３本を用いた場合と５本を用いた場合との両方に
ついて、すべての陽性管数の組み合わせとその場合の最
確数を一覧表にしたものであって、複数の表が報告され
利用されているが、どの表を用いても、求められる菌数
に大きな相違はない。試験管５本を用いる場合の一例を
表１〜表３に示す。
【００１１】ビフィドバクテリウム菌用選択培地により
調製された液体培地を用いて最確数法を実施すると、ビ
フィドバクテリウム菌が増殖した試験管では、透明であ
った液体培地が増殖した菌体のため不透明化する。この
変化は十分明確であるから、液体培地の透明度の変化を
肉眼で観察するだけで容易に陽性管を見いだすことがで
きる。
調製された液体培地を用いて最確数法を実施すると、ビ
フィドバクテリウム菌が増殖した試験管では、透明であ
った液体培地が増殖した菌体のため不透明化する。この
変化は十分明確であるから、液体培地の透明度の変化を
肉眼で観察するだけで容易に陽性管を見いだすことがで
きる。
【００１２】液体培地におけるビフィドバクテリウム菌
の増殖は、pＨ５〜６で変色するpＨ指示薬を培地に添加
しておくと一層容易に判定することができる。すなわ
ち、ビフィドバクテリウム菌が増殖すると必ず有機酸が
産生されて培地pＨが低下するので、培地に上記pＨ指示
薬を添加しておくと該pＨ指示薬が変色したものは陽性
管と判定することができるのである。
の増殖は、pＨ５〜６で変色するpＨ指示薬を培地に添加
しておくと一層容易に判定することができる。すなわ
ち、ビフィドバクテリウム菌が増殖すると必ず有機酸が
産生されて培地pＨが低下するので、培地に上記pＨ指示
薬を添加しておくと該pＨ指示薬が変色したものは陽性
管と判定することができるのである。
【００１３】寒天培地にして用いたとき乳酸菌のピンポ
イントコロニーを生じさせるような選択培地を用いた場
合、同程度の乳酸菌増殖が液体培地にした場合にも生じ
得るが、その程度の乳酸菌は培地全体を濁らせるには至
らず、またそれによって産生される僅かな有機酸はpＨ
指示薬を変色させるほどのpＨ低下をもたらさない。し
たがって、透明度の変化やpＨ指示薬の変色はビフィド
バクテリウム菌の増殖があったことを示すと判断してよ
い。
イントコロニーを生じさせるような選択培地を用いた場
合、同程度の乳酸菌増殖が液体培地にした場合にも生じ
得るが、その程度の乳酸菌は培地全体を濁らせるには至
らず、またそれによって産生される僅かな有機酸はpＨ
指示薬を変色させるほどのpＨ低下をもたらさない。し
たがって、透明度の変化やpＨ指示薬の変色はビフィド
バクテリウム菌の増殖があったことを示すと判断してよ
い。
【００１４】
【表１】 最確数表（その１）
【００１５】
【表２】 最確数表（その２）
【００１６】
【表３】 最確数表（その３）
【００１７】これにより、本発明の方法では選択培地の
選択的増殖性に多少の問題があっても乳酸菌に妨害され
ないビフィドバクテリウム菌数測定が可能になる。
選択的増殖性に多少の問題があっても乳酸菌に妨害され
ないビフィドバクテリウム菌数測定が可能になる。
【００１８】本発明のビフィドバクテリウム菌数測定法
は上述の原理により選択培地のいかんにかかわらず乳酸
菌による妨害を受けにくいが、それでも、液体培地にし
て用いるビフィドバクテリウム菌用選択培地はビフィド
バクテリウム菌のみを選択的に増殖させる性質がなるべ
く優れたものを用いるほど好結果が得られることはいう
までもない。したがって、選択培地構成成分のうち特に
糖源と窒素源については、乳酸菌が資化可能なものが混
入する可能性をできるかぎり排除し、一方、ビフィドバ
クテリウム菌による資化性はなるべく良いものを選ぶこ
とが望ましい。
は上述の原理により選択培地のいかんにかかわらず乳酸
菌による妨害を受けにくいが、それでも、液体培地にし
て用いるビフィドバクテリウム菌用選択培地はビフィド
バクテリウム菌のみを選択的に増殖させる性質がなるべ
く優れたものを用いるほど好結果が得られることはいう
までもない。したがって、選択培地構成成分のうち特に
糖源と窒素源については、乳酸菌が資化可能なものが混
入する可能性をできるかぎり排除し、一方、ビフィドバ
クテリウム菌による資化性はなるべく良いものを選ぶこ
とが望ましい。
【００１９】本発明の方法で用いる選択培地として特に
好ましいものの具体例を示すと、前記特公平４−２９３
５９号公報、特開平４−２０２８３号公報等に記載され
ている一般式 Ｇal‐(Ｇal)n‐Ｇlc (但し式中 Ｇal は
ガラクトース残基、Ｇlc はグルコース残基、n は１〜
４の整数を、それぞれ表わす）で示されるオリゴ糖、ま
たはこれとキシロースを、糖源として約１〜５重量％含
有するものである。上記オリゴ糖も、その製造法に由来
する共存単糖類が多量に含まれているとその単糖類が乳
酸菌を増殖させるので、単糖類含有率が１重量％未満ま
で精製されたものであることが望ましい。
好ましいものの具体例を示すと、前記特公平４−２９３
５９号公報、特開平４−２０２８３号公報等に記載され
ている一般式 Ｇal‐(Ｇal)n‐Ｇlc (但し式中 Ｇal は
ガラクトース残基、Ｇlc はグルコース残基、n は１〜
４の整数を、それぞれ表わす）で示されるオリゴ糖、ま
たはこれとキシロースを、糖源として約１〜５重量％含
有するものである。上記オリゴ糖も、その製造法に由来
する共存単糖類が多量に含まれているとその単糖類が乳
酸菌を増殖させるので、単糖類含有率が１重量％未満ま
で精製されたものであることが望ましい。
【００２０】選択培地に上記糖源と組み合わせて含有さ
せる窒素源として適当なものは、酵素による蛋白質加水
分解物（たとえばカゼイン、ゼラチン等の加水分解
物）、酵母エキス等のうち、乳酸菌の増殖を助ける成分
の含有量がなるべく少ないものである。
せる窒素源として適当なものは、酵素による蛋白質加水
分解物（たとえばカゼイン、ゼラチン等の加水分解
物）、酵母エキス等のうち、乳酸菌の増殖を助ける成分
の含有量がなるべく少ないものである。
【００２１】その他、選択培地に通常含有させる各種無
機金属塩、還元剤 (たとえばシステイン）等は、本発明
で用いる選択培地にも同様に含有させることができる。
培地pＨは、ビフィドバクテリウム菌の増殖に好適な値
すなわち約６.４〜７であることが望ましいが、６〜７
であれば特に不都合はない。
機金属塩、還元剤 (たとえばシステイン）等は、本発明
で用いる選択培地にも同様に含有させることができる。
培地pＨは、ビフィドバクテリウム菌の増殖に好適な値
すなわち約６.４〜７であることが望ましいが、６〜７
であれば特に不都合はない。
【００２２】選択培地にpＨ指示薬を添加しておく場
合、適当な指示薬としてはブロモクレゾールパープルが
ある。この指示薬は、上記培地pＨでは赤紫色であるがp
Ｈ５.２以下で黄色に変わるので、ビフィドバクテリウ
ム菌の増殖にともなう培地pＨの低下を感度よく検出す
るのに適している。
合、適当な指示薬としてはブロモクレゾールパープルが
ある。この指示薬は、上記培地pＨでは赤紫色であるがp
Ｈ５.２以下で黄色に変わるので、ビフィドバクテリウ
ム菌の増殖にともなう培地pＨの低下を感度よく検出す
るのに適している。
【００２３】
【実施例】以下、実施例および比較例を示して本発明を
説明するが、最初に各例において用いた培地および基本
操作について説明する。
説明するが、最初に各例において用いた培地および基本
操作について説明する。
【００２４】１．本発明法（最確数法） (1) 選択培地 トリプチケース（BBL） 1.0％ 酵母エキス（Difco） 0.1 ＫＨ2ＰＯ4 0.3 Ｋ2ＨＰＯ4 0.48 (ＮＨ4)2ＳＯ4 0.2 ＭgＳＯ4・７Ｈ2Ｏ 0.05 システイン・ＨＣl・Ｈ2Ｏ 0.03 前記一般式のオリゴ糖 1.0 pＨ 6.4 上記組成の選択培地に指示薬・ブロモクレゾールパープ
ル（BCP）を0.004％含有させたものを小試験管（１２φ
×100mm）に３mlずつ分注、気相を窒素ガスで置換した
のちブチルゴム栓で密栓し、１１５℃で１５分間加熱し
て滅菌した。
ル（BCP）を0.004％含有させたものを小試験管（１２φ
×100mm）に３mlずつ分注、気相を窒素ガスで置換した
のちブチルゴム栓で密栓し、１１５℃で１５分間加熱し
て滅菌した。
【００２５】(2) 液体培養 試料は希釈水（０.１％酵母エキス水溶液）で１０倍段
階希釈した。段階希釈した各希釈液は、ＣＯ2気流下で
上記液体培地の入った試験管５本に０.１mlずつ接種し
た。接種後の試験管はブチルゴム栓で密栓し、３７℃で
４日間嫌気培養した。培養中は毎日増殖の有無（指示薬
変色の有無）を確認し、指示薬が黄変したものを陽性管
とした。
階希釈した。段階希釈した各希釈液は、ＣＯ2気流下で
上記液体培地の入った試験管５本に０.１mlずつ接種し
た。接種後の試験管はブチルゴム栓で密栓し、３７℃で
４日間嫌気培養した。培養中は毎日増殖の有無（指示薬
変色の有無）を確認し、指示薬が黄変したものを陽性管
とした。
【００２６】(3) 菌数の推計 各段階の希釈液を接種した液体培地各５本のうちの陽性
管の数から、最確数表（前出の表１〜３）によりビフィ
ドバクテリウム菌数を求めた。なお、必要に応じて増殖
した菌を検鏡し、ビフィドバクテリウム菌であることの
確認を行ったが、乳酸菌が増殖していた例はなかった。
管の数から、最確数表（前出の表１〜３）によりビフィ
ドバクテリウム菌数を求めた。なお、必要に応じて増殖
した菌を検鏡し、ビフィドバクテリウム菌であることの
確認を行ったが、乳酸菌が増殖していた例はなかった。
【００２７】２．従来法１（寒天培地とした選択培地を
使用） (1) 選択培地 上記最確数法で用いた選択培地と同一組成の選択培地に
寒天を１.５％加え、平板培地を調製した。 (2) 菌数測定 表面塗末により試料希釈液を接種した平板を、steel wo
olを入れた嫌気ジャー中、３７℃で２日間培養した。出
現したコロニーのうちビフィドバクテリウム菌と思われ
るものについて分別カウントし、ビフィドバクテリウム
菌数とした。必要に応じてコロニーの検鏡を行い、ビフ
ィドバクテリウム菌のコロニー形態を確認した。
使用） (1) 選択培地 上記最確数法で用いた選択培地と同一組成の選択培地に
寒天を１.５％加え、平板培地を調製した。 (2) 菌数測定 表面塗末により試料希釈液を接種した平板を、steel wo
olを入れた嫌気ジャー中、３７℃で２日間培養した。出
現したコロニーのうちビフィドバクテリウム菌と思われ
るものについて分別カウントし、ビフィドバクテリウム
菌数とした。必要に応じてコロニーの検鏡を行い、ビフ
ィドバクテリウム菌のコロニー形態を確認した。
【００２８】３．従来法２（非選択培地を使用） (1) 培地 ＢＬ寒天培地（栄研化学）を所定の方法で溶解、滅菌
後、２００ml当たり１０mlの馬脱繊血を添加して平板と
した。 (2) 菌数測定 表面塗末により試料希釈液を接種したのち従来法１と同
様にして培養を行い、ビフィドバクテリウム菌のコロニ
ーを識別しながら数える方法で行なった。
後、２００ml当たり１０mlの馬脱繊血を添加して平板と
した。 (2) 菌数測定 表面塗末により試料希釈液を接種したのち従来法１と同
様にして培養を行い、ビフィドバクテリウム菌のコロニ
ーを識別しながら数える方法で行なった。
【００２９】実施例１ 脱脂粉乳１２％、酵母エキス０.１％、システイン・HCl
０.０３％、ＣaＣＯ3０.２％を含有する培地で培養し
た新鮮なビフィドバクテリウム菌培養物について、上記
３法によるビフィドバクテリウム菌数測定を行なった。
供試ビフィドバクテリウム菌は由来を異にする１０菌株
である。測定結果は表４のとおりであって、供試ビフィ
ドバクテリウム菌株すべてについて、最確数法による本
発明法測定値と従来法による測定値との間に差は認めら
れなかった。なお、表示した数値は試料１ml当たりの菌
数である（以下の各表において同じ）。
０.０３％、ＣaＣＯ3０.２％を含有する培地で培養し
た新鮮なビフィドバクテリウム菌培養物について、上記
３法によるビフィドバクテリウム菌数測定を行なった。
供試ビフィドバクテリウム菌は由来を異にする１０菌株
である。測定結果は表４のとおりであって、供試ビフィ
ドバクテリウム菌株すべてについて、最確数法による本
発明法測定値と従来法による測定値との間に差は認めら
れなかった。なお、表示した数値は試料１ml当たりの菌
数である（以下の各表において同じ）。
【００３０】
【表４】 本発明法 従来法１ 従来法２ B. bifidum YIT4013 1.1×109 3.6×109 3.8×109 〃 1.7×109 1.9×109 2.4×109 B. bifidum YIT4029 1.3×1010 4.6×109 4.5×109 〃 3.3×109 3.4×109 4.1×109 B. breve YIT4014 4.9×109 6.9×109 6.3×109 B. breve YIT4015 3.3×109 4.7×109 4.5×109 B. infantis YIT4018 7.5×109 5.2×109 B. infantis YIT4019 3.9×109 3.8×109 B. infantis YIT4020 4.3×109 6.1×109 B. longum YIT4021 9.3×108 1.6×109 〃 3.3×109 4.5×109 3.5×109 〃 7.9×109 3.0×109 2.4×109 B. longum YIT4037 4.6×108 9.3×108 6.4×108 〃 2.3×108 6.6×108 5.7×108 B. longum YIT4057 4.3×109 2.7×109 〃 1.3×1010 2.6×109 2.8×109 （註：B. はBifidobacterium）
【００３１】実施例２ １０％還元脱脂粉乳培地で培地で培養した新鮮な乳酸菌
培養物を、本発明法によるビフィドバクテリウム菌数測
定で使用する液体培地（１培地３ml；１００培地）に接
種し、４日間、増殖適温に維持し、指示薬変色の有無を
観察した。供試乳酸菌は、上記従来法１において使用す
る寒天培地ではピンポイントコロニーを形成するよう
な、栄養欠乏状態でも増殖する傾向が強い菌株である。
培養物を、本発明法によるビフィドバクテリウム菌数測
定で使用する液体培地（１培地３ml；１００培地）に接
種し、４日間、増殖適温に維持し、指示薬変色の有無を
観察した。供試乳酸菌は、上記従来法１において使用す
る寒天培地ではピンポイントコロニーを形成するよう
な、栄養欠乏状態でも増殖する傾向が強い菌株である。
【００３２】測定結果は表５のとおりであって、いずれ
の乳酸菌も指示薬を変色させるほど増殖しなかった。L
b. casei、Enterococcus faecalisおよびLactococcus l
actisの場合は、試験管の底に微量の菌体が沈殿するの
が認められたが、その場合も指示薬ＢＣＰの黄変は起こ
らず、培地pＨは初発pＨと変わりがなかった。
の乳酸菌も指示薬を変色させるほど増殖しなかった。L
b. casei、Enterococcus faecalisおよびLactococcus l
actisの場合は、試験管の底に微量の菌体が沈殿するの
が認められたが、その場合も指示薬ＢＣＰの黄変は起こ
らず、培地pＨは初発pＨと変わりがなかった。
【００３３】
【表５】 指示薬変色の有無 接種菌数 Lb. casei YIT9029 − 2.2×103 Enterococcus faecalis ATCC19433 − 1.6×103 Lactococcus lactis（市販発酵乳より分離） − 5.3×102 S．thermophilus（市販発酵乳より分離） − 6.1×102 Lb. bulgaricus (市販発酵乳より分離) − 2.5×102 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 2.1×10 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 3.7×10 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 7.9×102 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 1.6×103 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 7.1×102 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 5.5×102 S. thermophilus (市販発酵乳より分離) − 3.2×102 S. thermophilus (市販発酵乳より分離） − 6.8×102 Lb. acidophilus (市販発酵乳より分離） − 4.8×102 （Lb.：Lactobacillus， S.：Streptococcus）
【００３４】実施例３ ビフィドバクテリウム菌と乳酸菌を含有する市販の発酵
乳（５メーカー，５種類）を購入し、各商品中のビフィ
ドバクテリウム菌数を上記３法により測定した。測定結
果は表６のとおりであって、最確数法による本発明法測
定値と従来法による測定値との差はほとんど認められな
かった。
乳（５メーカー，５種類）を購入し、各商品中のビフィ
ドバクテリウム菌数を上記３法により測定した。測定結
果は表６のとおりであって、最確数法による本発明法測
定値と従来法による測定値との差はほとんど認められな
かった。
【００３５】なお、各発酵乳が含有するビフィドバクテ
リウム菌および乳酸菌は次のとおりである。 発酵乳 ビフィドバクテリウム菌 乳酸菌 Ａ B. longum S. thermophilus，Lb. bulgaricus Ｂ B. longum S. thermophilus，Lb. acidophilus Ｃ B. longum S. thermophilus，Lb. acidophilus Ｄ 未同定 Lactococcus lactis Ｅ B. breve，B. bifidum Lb. acidophilus
リウム菌および乳酸菌は次のとおりである。 発酵乳 ビフィドバクテリウム菌 乳酸菌 Ａ B. longum S. thermophilus，Lb. bulgaricus Ｂ B. longum S. thermophilus，Lb. acidophilus Ｃ B. longum S. thermophilus，Lb. acidophilus Ｄ 未同定 Lactococcus lactis Ｅ B. breve，B. bifidum Lb. acidophilus
【００３６】
【表６】 発酵乳 製造後経過日数 本発明法 従来法１ 従来法２ Ａ １ 2.4×108 1.7×108 3.4×108 〃 ６ 3.5×108 1.8×108 1.5×108 〃 13 2.7×106 1.3×107 5.7×106 Ｂ ４ 1.1×108 1.6×108 1.6×108 〃 ８ 3.3×106 7.4×106 3.2×106 Ｃ ３ 4.9×106 8.5×106 1.1×107 〃 ６ 2.8×106 4.2×106 4.7×106 〃 ９ 2.4×106 2.0×106 2.1×106 〃 11 4.9×105 4.6×105 4.1×105 Ｄ ４ 1.3×107 2.3×107 1.6×107 〃 ９ 1.7×107 1.9×107 2.1×107 〃 15 3.5×107 1.9×107 2.0×107 Ｅ ２ 3.5×108 8.5×108 8.6×108 〃 ５ 9.2×108 5.9×108 5.3×108 〃 12 3.5×108 3.6×108 2.7×108
【００３７】
【発明の効果】上述のように、選択培地からなる液体培
地を用い最確数法により菌数推計を行う本発明によれ
ば、選択性が完全ではない選択培地を用いてもコロニー
の識別が不要であり、選択培地においても僅かながら増
殖する一部乳酸菌の妨害を受けることなしに容易にビフ
ィドバクテリウム菌数を測定することが可能になる。
地を用い最確数法により菌数推計を行う本発明によれ
ば、選択性が完全ではない選択培地を用いてもコロニー
の識別が不要であり、選択培地においても僅かながら増
殖する一部乳酸菌の妨害を受けることなしに容易にビフ
ィドバクテリウム菌数を測定することが可能になる。
Claims (4)
- 【請求項１】 ビフィドバクテリウム菌用選択培地を用
いてビフィドバクテリウム菌含有物中のビフィドバクテ
リウム菌数を測定するに当たり、ビフィドバクテリウム
菌用選択培地により液体培地を調製し、該液体培地を用
いる試験管培養においてビフィドバクテリウム菌の増殖
が認められた試験管を陽性管として扱う最確数法により
菌数測定を行うことを特徴とするビフィドバクテリウム
菌数の測定法。 - 【請求項２】 ビフィドバクテリウム菌用選択培地を用
いてビフィドバクテリウム菌含有物中のビフィドバクテ
リウム菌数を測定するに当たり、pＨ５〜６で変色するp
Ｈ指示薬を選択培地に加えて液体培地を調製し、該液体
培地を用いる試験管培養においてpＨ指示薬の変色を生
じた試験管をビフィドバクテリウム菌陽性管として扱う
最確数法により菌数測定を行うことを特徴とするビフィ
ドバクテリウム菌数の測定法。 - 【請求項３】 一般式 Ｇal‐(Ｇal)n‐Ｇlc (但し式中
Ｇal はガラクトース残基、Ｇlc はグルコース残基、n
は１〜４の整数を、それぞれ表わす）で示されるオリ
ゴ糖を糖源として含有するビフィドバクテリウム菌用選
択培地を使用する請求項１または請求項２記載のビフィ
ドバクテリウム菌数の測定法。 - 【請求項４】 一般式 Ｇal‐(Ｇal)n‐Ｇlc (但し式中
Ｇal はガラクトース残基、Ｇlc はグルコース残基、n
は１〜４の整数を、それぞれ表わす）で示されるオリ
ゴ糖およびキシロースを糖源として含有するビフィドバ
クテリウム菌用選択培地を使用する請求項１または請求
項２記載のビフィドバクテリウム菌数の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27123193A JPH0799995A (ja) | 1993-10-05 | 1993-10-05 | ビフィドバクテリウム菌数の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27123193A JPH0799995A (ja) | 1993-10-05 | 1993-10-05 | ビフィドバクテリウム菌数の測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0799995A true JPH0799995A (ja) | 1995-04-18 |
Family
ID=17497189
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27123193A Pending JPH0799995A (ja) | 1993-10-05 | 1993-10-05 | ビフィドバクテリウム菌数の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0799995A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006136272A (ja) * | 2004-11-15 | 2006-06-01 | Prima Meat Packers Ltd | 乳酸菌検出用半流動培地 |
| KR101464109B1 (ko) * | 2014-06-10 | 2014-11-24 | 중앙대학교 산학협력단 | 젖산균 및 비피더스균을 검출하기 위한 선택배지 조성물 |
-
1993
- 1993-10-05 JP JP27123193A patent/JPH0799995A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006136272A (ja) * | 2004-11-15 | 2006-06-01 | Prima Meat Packers Ltd | 乳酸菌検出用半流動培地 |
| KR101464109B1 (ko) * | 2014-06-10 | 2014-11-24 | 중앙대학교 산학협력단 | 젖산균 및 비피더스균을 검출하기 위한 선택배지 조성물 |
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