JPH08109165A - 一酸化窒素合成酵素阻害作用を有するアミノ酸誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構 成】 式（１）（式中、Ｒ_１、Ｒ_２は、各々独立に水素原子を
表し；Ｒ_３は、置換基を有していてもよい直鎖または分
岐鎖状の炭素数１〜６の低級アルキル基、置換基を有し
ていてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数２〜６の低級
アルケニル基を表し；Ｒ_４は、水素原子を表し；また
は、Ｒ_３、Ｒ_４は一緒になって、置換基を有していても
よい５〜７員環を形成してもよい；ｎは、２〜４の整数
を表し；ただし、Ｒ_３がメチル基であるときに同時にｎ
が３であることはないものとする）で表される化合物ま
たは医薬として許容されるその塩。 【効 果】 上記化合物は強力な一酸化窒素合成酵素阻
害作用を有し、脳血管障害治療剤、敗血症における低血
圧治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、アミノ酸誘導体、
さらに詳しくは一酸化窒素合成酵素（Ｎｉｔｒｉｃ Ｏ
ｘｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ、以下ＮＯＳと略す）阻害
作用を有し、一酸化窒素（Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ、
以下ＮＯと略す）生成を抑制することにより、ＮＯ或い
はＮＯの代謝産物の関与が考えられている脳血管障害、
特に、閉塞性脳血管障害の急性期の病態ならびに敗血症
における低血圧に対して有用な一般式（Ｉ）で表される
化合物または医薬として許容されるその塩とこれらを有
効成分として含有することを特徴とする予防及び治療剤
に関する。

【０００２】

【従来の技術】脳血流の途絶した領域では、まず、細胞
性の脳浮腫が起こり、続いて血管性の脳浮腫が起こって
くる。血管性の脳浮腫は脳虚血後数時間後に出現し、発
症１週間後までその進行が続く。その後、脳浮腫は次第
に減少し、梗塞巣の範囲にもよるが、１ヶ月から３ヶ月
の間に梗塞巣病変として固定する。脳は固い頭蓋に被わ
れているため、脳浮腫は脳の容量増大を引き起こす。脳
浮腫がある程度を越えると急激な組織圧及び頭蓋内圧の
上昇を引き起こし、しばしば致命的なヘルニアを招来
し、結果的に脳障害を増悪し、その後の梗塞巣病変の範
囲を決定してしまう 。この様に、患者の生命予後を左右する脳浮腫の治療
は、臨床上極めて重要な課題である。現在のところ、脳
浮腫に対する治療法は、過呼吸や脳脊髄液ドレナージと
平行して高張液やステロイド剤等の使用が主流である
が、これらの効果はほとんどの場合一過性であり、最終
的な治療効果にそれ程大きな期待は持てない（ 。従って、虚血性脳血管障害に対する治療法として従来
とは異なる全く新しい作用機序の薬剤を開発することが
望まれる。

【０００３】本発明者らは、ＮＯＳ阻害剤として知られ
るＮ^Ｇ−ｎｉｔｒｏ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ−ＮＮ
Ａ）が、脳虚血後に発症する脳浮腫、脳梗塞（Ｎａｇａ
ｆｕｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔ
ｔ．，１４７，１５９−１６２，１９９２）、神経細胞
壊死（Ｎａｇａｆｕｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｎｖ．Ｔｏｘ．，２４８，３２
５−３２８，１９９３）を改善する作用を有することを
見いだした。しかしながら、比較的高用量のＮＯＳ阻害
剤は、虚血性脳損傷に対して無効であるばかりか場合に
よってはかえって増悪させることも報告されている（Ｉ
ａｄｅｃｏｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌ
ｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．，１４，１７５−１９
２，１９９４）。

【０００４】ＮＯＳのアイソフォームは少なくとも三種
類存在するという説が、遺伝子ＤＮＡ解析から現在のと
ころ有力である。即ち、神経細胞中に恒久的に存在する
Ｎ−ｃＮＯＳ、血管内皮細胞中に恒久的に存在するＥ−
ｃＮＯＳ、そしてマクロファージやその他多くの細胞で
サイトカインや生体内微量毒素により誘導合成されるｉ
ＮＯＳである。この中でＮ−ｃＮＯＳ、Ｅ−ｃＮＯＳは
カルシウム依存性であり、ｉＮＯＳはカルシウム非依存
性である（Ｎａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ
Ｊ．１６，３０５１−３０６４，１９９２）。

【０００５】脳虚血に伴う脳組織障害の有力な機序とし
て、細胞外グルタミン酸濃度の上昇、シナプス後部に存
在するグルタミン酸受容体の過剰な活性化、細胞内カル
シウム濃度の上昇、カルシウム依存性酵素の異常な活性
化という一連の経路が提唱さ ０，８８３−９０８，１９８４；Ｃｈｏｉ，Ｔｒｅｎｄ
ｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ｎ，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａ
ｂ．９，１２７−１４０，１９８９）。前述した様に、
Ｎ−ｃＮＯＳはカルシウム依存性であるので、このタイ
プのＮＯＳアイソフォームの異常な活性化を阻害するこ
とが、ＮＯＳ阻害剤による神経細胞の保護作用を発揮し
ているものと考えられている（Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎｅｕｒｏｌ．３２，２９７−３
１１，１９９２）。

【０００６】一方、ＮＯは血管内皮由来弛緩因子（ｅｎ
ｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｒｅｌａｘｉｎ
ｇ ｆａｃｔｏｒ；ＥＤＲＦ）の本体の一つであるた
め、Ｅ−ｃＮＯＳを必要以上に阻害した場合、脳血流量
の低下と体血圧の上昇が生じ、微小循環動態が悪化し、
最終的には虚血病変が拡大してしまうことが考えられ
る。

【０００７】従って、虚血性脳疾患治療剤の場合、Ｅ−
ｃＮＯＳに対しての阻害作用が弱く、Ｎ−ｃＮＯＳを強
く阻害するＮＯＳ阻害剤が望ましいと考えられている
（Ｎｏｗｉｃｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．，２０４，３３９−３４０，１９９１；
Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，６３６８−６３７１，
１９９１）。これまでに知られているＮＯＳ阻害剤で、
前述した様にＥ−ｃＮＯＳに対する阻害作用との比較に
おいて、Ｎ−ｃＮＯＳに対して選択性を示すという報告
は未だ無い。

【０００８】また、ある種のサイトカインや生体内微量
毒素によってマクロファージやグリア細胞等の免疫担当
細胞やその他の細胞中にｉＮＯＳが誘導合成される結
果、発生する大量のＮＯにより致命的な血圧低下が生し
る。従って、ｉＮＯＳに対して選択的な阻害剤は敗血症
における低血圧等に有効ではないかと考えられている
（Ｋｉｌｂｏｕｒｎ ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｊ．
Ｎａｔｌ．Ｃｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８４，８２７−８３
１，１９９２；Ｃｏｂｂ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｃ
ａｒｅ Ｍｅｄ．２１，１２６１−１２６３，１９９
３；Ｌｏｒｅｎｔｅｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ
Ｍｅｄ．２１，１２８７−１２９５，１９９３）。

【０００９】これまでに唯一、Ａｍｉｎｏｇｕａｎｉｄ
ｉｎｅ（ＡＧ）が、Ｅ−ｃＮＯＳに対する阻害作用との
比較においてｉ−ＮＯＳに対して選択性を示すことが報
告されている（Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂ
ｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１０，９６３−９６
８，１９９３）が、阻害作用自体は、敗血症における低
血圧に対して有用な治療剤としては、十分なものではな
い。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、特定
のＮＯＳアイソフォームを選択的に阻害し、過剰なＮＯ
またはＮＯ代謝産物の関与が示唆される疾病に対して有
用な化合物を提供することにある。即ち、Ｅ−ｃＮＯＳ
に対しての阻害作用が弱く、Ｎ−ｃＮＯＳを強く阻害す
る、脳血管障害治療剤として有用なＮＯＳ阻害剤を提供
するものである。また、ｉＮＯＳに対して選択的な阻害
作用を有する、敗血症における低血圧に対して有用なＮ
ＯＳ阻害剤を提供するものである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる課
題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、一般式（Ｉ）で
表される化合物の中で特にＲ_３がハロゲン原子で置換さ
れた直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基で
あるものまたはそれらの塩が既存のＮＯＳ阻害剤に比し
格段に優る脳内Ｎ−ｃＮＯＳ選択的阻害作用を有し、脳
血管障害治療剤として有用であることを見い出し、本発
明を完成するに到った。また、一般式（Ｉ）で表される
化合物の中で特にＲ_３がアリル基であるものまたはそれ
らの塩が既存のＮＯＳ阻害剤に比し格段に優るｉＮＯＳ
選択的阻害作用を有し、敗血症治療剤として有用である
ことを見い出し、本発明を完成するに到った。

【００１２】すなわち、本発明は、以下の（１）〜
（６）に記載の化合物または医薬として許容されるその
塩を提供するものである。

【００１３】（１）一般式（Ｉ）

【化５】 （式中、Ｒ_１は、水素原子、アルキル部分が置換基を有
していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のア
ルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい直鎖
または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；Ｒ_２
は、水素原子、置換基を有していてもよい直鎖または分
岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；Ｒ_３は、置
換基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１
〜６のアルキル基、置換基を有していてもよい直鎖また
は分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基を表し；Ｒ_４
は、水素原子を表し；または、Ｒ_３、Ｒ_４は一緒になっ
て、置換基を有していてもよい５〜７員環を形成しても
よい；ｎは、２〜４の整数を表す。ただし、Ｒ_３がメチ
ル基であるときに同時にｎが３であるものは除く）で表
される化合物または医薬として許容されるその塩。

【００１４】（２）一般式（Ｉ）

【化６】 （式中、Ｒ_１は、水素原子、アルキル部分が置換基を有
していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のア
ルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい直鎖
または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；Ｒ_２
は、水素原子、置換基を有していてもよい直鎖または分
岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；Ｒ_３は、ハ
ロゲン原子で置換された直鎖または分岐鎖状の炭素数１
〜６のアルキル基を表し；Ｒ_４は、水素原子を表し；ｎ
は、２〜４の整数を表す。）で表される（１）記載の化
合物または医薬として許容されるその塩。

【００１５】（３）一般式（Ｉ）

【化７】 （式中、Ｒ_１は、水素原子、アルキル部分が置換基を有
していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のア
ルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい直鎖
または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；Ｒ_２
は、水素原子、置換基を有していてもよい直鎖または分
岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；Ｒ_３は、２
−フルオロエチル基を表し；Ｒ_４は、水素原子を表し；
ｎは、２〜４の整数を表す。）で表される（１）記載の
化合物または医薬として詐容されるその塩。

【００１６】（４）一般式（１）

【化８】 （式中、Ｒ_１、Ｒ_２は、各々独立に水素原子を表し；Ｒ
_３は、置換基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の
炭素数１〜６のアルキル基、置換基を有していてもよい
直鎖または分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基を表
し；Ｒ_４は、水素原子を表し；または、Ｒ_３、Ｒ_４は一
緒になって、置換基を有していてもよい５〜７員環を形
成してもよい；ｎは、２〜４の整数を表す。ただし、Ｒ
_３がメチル基であるときに同時にｎが３であることはな
いものとする）で表される（１）記載の化合物または医
薬として許容されるその塩。

【００１７】（５）δ−（Ｓ−（２−フルオロエチル）
イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン、δ−（Ｓ−エチ
ルイソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン、および、δ−
（Ｓ−（３−クロロプロピル）イソチオウレイド）−Ｌ
−ノルバリンからなる化合物群から選択される（１）記
載の化合物または医薬として許容されるその塩。 （６）δ−（Ｓ−アリルイソチオウレイド）−Ｌ−ノル
バリンである（１）記載の化合物または医薬として許容
されるその塩。

【００１８】特に、δ−（Ｓ−（２−フルオロエチル）
イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリンおよびδ−（Ｓ−
エチルイソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリンは、既存の
ＮＯＳ阻害剤に比し格段に優る脳内Ｎ−ｃＮＯＳ選択的
阻害作用を有し、しかもＥ−ｃＮＯＳに対する阻害作用
が弱く、脳血管障害治療剤として有用である。

【００１９】また、δ−（Ｓ−アリルイソチオウレイ
ド）−Ｌ−ノルバリンは、既存のＮＯＳ阻害剤に比し格
段に優るｉＮＯＳ選択的阻害作用を有し、敗血症治療剤
として有用である。

【００２０】

【発明の実施の形態】一般式（Ｉ）で表される本発明化
合物は、文献未記載の新規化合物であり、例えば以下の
ようにして製造することができる。

【００２１】

【化９】 一般式（ＩＩ）（式中、Ｒ_１は、アルキル部分が置換基
を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６
のアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい
直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；
Ｒ_２は置換基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の
炭素数１〜６のアルキル基を表し；ｎは２〜４の整数を
表す。）で表される化合物を一般式（ＩＩＩ）（式中、
Ｒ_３は置換基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の
炭素数１〜６のアルキル基、置換基を有していてもよい
直鎖または分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基を表
す。ただし、一般式（ＩＩ）においてｎが３のときに、
Ｒ_３はメチル基であることはない；Ｘはハロゲン原子を
表す。）で表される化合物とアセトニトリル、アセト
ン、１，４−ジオキサン、メタノール、エタノール等の
溶媒中、室温から反応混合物の沸点までの温度で反応さ
せて得ることができる。好ましくは、アセトニトリル中
で反応混合物を加熱還流して行う。次いで、加水分解ま
たは脱保護剤で直接処理して脱保護することにより、一
般式（ＩＶ）（式中、Ｒ_１およびＲ_２は水素原子を表
し；ｎは２〜４の整数を表す。）で表される化合物また
はその塩が得られる。

【００２２】また、一般式（ＩＩ）（式中、Ｒ_１は、ア
ルキル部分が置換基を有していてもよい直鎖または分岐
鎖状の炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基、置換基
を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜９
のアシル基を表し；Ｒ_２は置換基を有していてもよい直
鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；
ｎは２〜４の整数を表す。）で表される化合物を一般式
（Ｖ）（式中、Ｒ_５は置換基を有していてもよい炭素数
２〜４のアルキレン基を表し；Ｘはハロゲン原子を表
し；Ｙはハロゲン原子または炭素数１〜６のアルコキシ
カルボニル基を表す。で表される化合物とアセトニトリ
ル、アセトン、１，４−ジオキサン、メタノール、エタ
ノール等の溶媒中、室温から反応混合物の沸点までの温
度で反応させて得ることができる。好ましくは、アセト
ニトリル中で反応混合物を加熱還流して行う。次いで、
加水分解または脱保護剤で直接処理して脱保護すること
により、一般式（ＶＩ）（式中、Ｒ_１およびＲ_２は水素
原子を表し；Ｒ_５は置換基を有していてもよい炭素数２
〜４のアルキレン基またはこのアルキレン基の末端にカ
ルボニル基が結合したものを表し；ｎは２〜４の整数を
表す。）で表される化合物または、一般式（ＶＩＩ）
（式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５、ｎは前記と同一のものを表
す。）で表される化合物またはこれらの塩が得られる。

【００２３】脱保護反応は、保護基の種類に応じて通常
使用される条件で行なわれ、例えば、Ｒ_１がベンジルオ
キシカルボニル基、Ｒ_２がベンジル基の場合は、室温
下、酢酸エチル、メタノール、エタノール等の溶媒中パ
ラジウム−炭素の存在下の接触還元反応が挙げられる。
Ｒ_１がｔ−ブトキシカルボニル基、Ｒ_２がｔ−ブチル基
の場合、反応に悪影響を及ぼさない溶媒例えば、塩化メ
チレン、酢酸エチル、メタノール、エタノール、１，４
−ジオキサン、水中または無溶媒で０℃から室温の条件
下でトリフルオロ酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸
等の脱保護剤を用いて行うのが好ましく、特に室温下無
水条件でトリフルオロ酢酸を用いるのが好ましい。

【００２４】一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、
（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）の定義中、ア
ルキル部分が置換基を有していてもよい直鎖または分岐
鎖状の炭素数１〜６のアルコキシカルボニル基とは、例
えばベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボ
ニル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基等
が挙げられ、置換基を有していてもよい直鎖または分岐
鎖状の炭素数１〜９のアシル基とは、例えば、アセチル
基等が挙げられる。Ｒ_１としては、特にｔ−ブトキシカ
ルボニル基が好ましい。置換基を有していてもよい直鎖
または分岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基における直
鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基とは、メ
チル基、エチル基、ｔ−ブチル基等が挙げられる。置換
基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜
６のアルキル基および置換基を有していてもよい直鎖ま
たは分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基における置
換基とは、例えば、ハロゲン、アルキル基、アリール基
等が挙げられ、フッ素原子、シクロプロピル基等が好ま
しい。Ｒ_２としては、特にｔ−ブチル基が好ましい。Ｒ
_３としては、例えば、２−フルオロエチル基、シクロプ
ロピルメチル基、フェニル基等が挙げられ、特に２−フ
ルオロエチル基が好ましい。置換基を有していてもよい
直鎖または分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基と
は、例えば、１−プロペニル基が挙げられる。Ｘとして
は、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子が好ましい。
Ｙとしては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、メトキ
シカルボニル基またはエトキシカルボニル基が好まし
い。置換基を有していてもよい炭素数２〜４のアルキレ
ン基としては、例えば、エチレン基、プロピレン基等が
挙げられる。Ｒ_５としては、エチレン基、プロピレン基
が好ましい。

【００２５】本発明化合物（Ｉ）の医薬として許容され
る塩は、例えば、酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メ
タンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、蟻酸塩、ｐ
−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等の有機
酸塩、例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、燐酸塩
等の無機酸塩が挙げられ、二塩酸塩が好ましい。

【００２６】以下に本発明の化合物の製造について実施
例に基づき、さらに詳細に説明するが、本発明はこれら
の例によって何ら制限されるものではない。また、本発
明の有用性を示すために、一般式（Ｉ）で示される化合
物の各種ＮＯＳに対する選択的阻害作用を試験例に示
す。

【００２７】

【実施例】

【実施例１】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−エチルイ
ソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステ
ル・ヨウ化水素酸塩の合成 Ｐａｕｌ Ｌ．Ｆｅｌｄｅｒｍａｎの方法（Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，３２，７，８７５−８７
８，１９９１）に従って合成したα−Ｎ−ｔ−ブトキシ
カルボニル−δ−チオウレイド−Ｌ−ノルバリン−ｔ−
ブチルエステル（０．４８ｇ）およびアセトニトリル
（５ｍｌ）の混合物にヨウ化エチル（０．１７ｍｌ）を
加え、２時間加熱還流した。反応液を減圧下濃縮した
後、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展
開液、塩化メチレン：メタノール＝９５：５）で精製
し、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−エチ
ルイソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエ
ステル・ヨウ化水素酸塩０．６７ｇを得た。^１ Ｈ＝ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．３９−１．４７（１２Ｈ，ｍ），１．４８（９
Ｈ，ｓ），１．６３−１．９７（４Ｈ，ｍ），３．３６
−３．６２（４Ｈ，ｍ），４．０７−４．１９（１Ｈ，
ｍ），５．２２−５．４１（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３７６（Ｍ^＋＋１）

【００２８】

【実施例２】δ−（Ｓ−エチルイソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン
の合成 α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−エチルイ
ソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステ
ル・ヨウ化水素酸塩（０．６７ｇ）およびトリフルオロ
酢酸（５ｍｌ）の混合物を室温下２時間攪拌した後、減
圧下濃縮した。残留物をエタノールに溶解した後、塩化
水素の１，４−ジオキサン溶液（４規定、１ｍｌ）を室
温下加え、反応液を減圧下濃縮した。残留物をイオン交
換クロマトグラフィー（ＤＯＷＥＸ、５０Ｗ−Ｘ８，Ｈ
^＋フォーム）で精製し、δ−（Ｓ−エチルイソチオウレ
イド）−Ｌ−ノルバリン０．２５ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．３０−１．３５（３Ｈ，ｍ），１．５６−１．
８９（４Ｈ，ｍ），３．０３−３．１０（２Ｈ，ｍ），
３．３５−３．３８（２Ｈ，ｍ），３．４３−３．５０
（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２２０（Ｍ^＋＋１）

【００２９】

【実施例３】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−（２−フ
ルオロエチル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−
ｔ−ブチルエステル・臭化水素酸塩の合成 実施例１と同様に、反応剤として臭化２−フルオロエタ
ンを用いて反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニ
ル−δ−（Ｓ−（２−フルオロエチル）イソチオウレイ
ド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステル・臭化水素
酸塩０．２９ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．４８（９Ｈ，ｓ），
１．６２−１．９６（４Ｈ，ｍ），３．３８−３．６１
（２Ｈ，ｍ），３．７７（２Ｈ，ｄｅｓｔｏｒｔｅｄ
ｄｔ，Ｊ＝２５．１Ｈｚ，４．９５−５．２８Ｈｚ），
４．０３−４．１９（１Ｈ，ｍ），４．７５（２Ｈ，ｄ
ｅｓｔｏｒｔｅｄ ｄｔ，Ｊ＝４６．９Ｈｚ，４．９５
−５．２８Ｈｚ），５．２４−５．３７（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３９４（Ｍ^＋＋１）

【００３０】

【実施例４】δ−（Ｓ−（２−フルオロエチル）イソチオウレイド）
−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩の合成 実施例３で得られた化合物とトリフルオロ酢酸（１０ｍ
ｌ）の混合物を室温下２時間攪拌した後、減圧下濃縮し
た。残留物をエタノール（５ｍｌ）に溶解後、塩化水素
の１，４−ジオキサン溶液（４規定、０．６ｍｌ）を室
温下加え、反応液を減圧下濃縮した。残留物を水に溶解
後、凍結乾燥してδ−（Ｓ−（２−フルオロエチル）イ
ソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩０．１７
ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．７６−２．０６（４Ｈ，ｍ），３．４３−３．
５６（４Ｈ，ｍ），４．０５−４．０９（１Ｈ，ｍ），
４．８０（２Ｈ，ｄｅｓｔｏｒｔｅｄ ｄｔ，Ｊ＝４
６．５Ｈｚ，４．９５−５．６１Ｈｚ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２３８（Ｍ^＋＋１）

【００３１】

【実施例５】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−（２−プ
ロペニル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−
ブチルエステル・臭化水素酸塩の合成 実施例１と同様に反応剤として臭化アリルを用いて反応
を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−
（２−プロペニル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリ
ン−ｔ−ブチルエステル・臭化水素酸塩０．５１ｇを得
た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．４７（９Ｈ，ｓ），
１．６７−１．９９（４Ｈ，ｍ），３．３２−３．６３
（４Ｈ，ｍ），３．８１−３．９１（１Ｈ，ｍ），３．
９９−４．１８（２Ｈ，ｍ），５．３５−５．４４（１
Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３８８（Ｍ^＋＋１）

【００３２】

【実施例６】δ−（Ｓ−（２−プロペニル）イソチオウレイド）−Ｌ
−ノルバリン・二塩酸塩の合成 実施例５で得られた化合物を出発原料として実施例４と
同様に脱保護反応を行いδ−（Ｓ−（２−プロペニル）
イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩０．３
３ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．７２−２．０９（４Ｈ，ｍ），３．４１−３．
４６（２Ｈ，ｍ），３．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈ
ｚ），４．０７−４．１２（１Ｈ，ｍ），５．２６−
５．４０（２Ｈ，ｍ），５．８５−５．９９（１Ｈ，
ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２３２（Ｍ^＋＋１）

【００３３】

【実施例７】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（２，３−デヒ
ドロチアゾリン−２−イル）アミノ−Ｌ−ノルバリン−
ｔ−ブチルエステル・臭化水素酸塩の合成 実施例１と同様に反応剤として１，２−ジブロモエタン
を用いて反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル
−δ−（２，３−デヒドロチアゾリン−２−イル）アミ
ノ−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステル・臭化水素酸
塩０．２３ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．４７（９Ｈ，ｓ），
１．６７−１．９９（４Ｈ，ｍ），３．３２−３．６３
（４Ｈ，ｍ），３．８１−３．９１（１Ｈ，ｍ），３．
９９−４．１８（２Ｈ，ｍ），５．３５−５．４４（１
Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３７４（Ｍ^＋＋１）

【００３４】

【実施例８】δ−（２，３−デヒドロチアゾリン−２−イル）アミノ
−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩の合成 実施例７で得られた化合物を出発原料として実施例４と
同様に脱保護反応を行いδ−（２，３−デヒドロチアゾ
リン−２−イル）アミノ−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩
０．１１ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．６８−１．８９（４Ｈ，ｍ），３．２８−３．
４９（４Ｈ，ｍ），３．９８−４．０４（１Ｈ，ｍ），
４．６９−４．７８（２Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２１８（Ｍ^＋＋１）

【００３５】

【実施例９】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ε−（Ｓ−メチルイ
ソチオウレイド）−Ｌ−ノルロイシン−ｔ−ブチルエス
テル・ヨウ化水素酸塩の合成 Ｋ．Ｎａｒａｙａｎａｎの方法（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．，３７，８８５−８８７，１９９４）に従って合成
したα−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ε−チオウレイ
ド−Ｌ−ノルロイシン−ｔ−ブチルエステル（０．１９
ｇ）を反応剤としてヨウ化メチルを用いて実施例１と同
様に反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ε
−（Ｓ−メチルイソチオウレイド）−Ｌ−ノルロイシン
−ｔ−ブチルエステル・ヨウ化水素酸塩０．２９ｇを得
た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．４７（９Ｈ，ｓ），
１．６７−１．８５（６Ｈ，ｍ），２．８１（３Ｈ，
ｓ），３．３２−３．５３（２Ｈ，ｍ），４．０５−
４．１８（１Ｈ，ｍ），５．１６−５．２７（１Ｈ，
ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３７６（Ｍ^＋＋１）

【００３６】

【実施例１０】ε−（Ｓ−メチルイソチオウレイド）−Ｌ−ノルロイシ
ン・二塩酸塩の合成 実施例９で得られた化合物を出発原料として実施例４と
同様に脱保護反応を行いε−（Ｓ−メチルイソチオウレ
イド）−Ｌ−ノルロイシン・二塩酸塩０．１５ｇを得
た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．４２−１．６４（２Ｈ，ｍ），１．６８−１．
８１（２Ｈ，ｍ）１．９０−２．１０（２Ｈ，ｍ），
２．６０（３Ｈ，ｓ），３．３８−３．４３（２Ｈ，
ｍ），４．０９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２２０（Ｍ^＋＋１）

【００３７】

【実施例１１】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−（ｎ−プ
ロピル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブ
チルエステル・ヨウ化水素酸塩の合成 実施例１と同様に反応剤としてヨウ化ｎ−プロピルを用
いて反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ
−（Ｓ−（ｎ−プロピル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノ
ルバリン−ｔ−ブチルエステル・ヨウ化水素酸塩０．７
５ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．０９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）１．４４
（９Ｈ，ｓ），１．４８（９Ｈ，ｓ），Ｉ．７７−１．
９２（６Ｈ，ｍ），３．３３−３．３８（２Ｈ，ｍ），
３．３９−３．７２（２Ｈ，ｍ），４．０５−４．１７
（１Ｈ，ｍ），５．２０−５．５２（１Ｈ，ｍ）

【００３８】

【実施例１２】δ−（Ｓ−（ｎ−プロピル）イソチオウレイド）−Ｌ−
ノルバリンの合成 実施例１１で得られた化合物を出発原料とし、実施例２
と同様にしてδ−（Ｓ−（ｎ−プロピル）イソチオウレ
イド）−Ｌ−ノルバリン０．３１ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ：０．９５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．５４
−１．６７（６Ｈ，ｍ），１．９２〜２．０２（２Ｈ，
ｍ），３．１３−３．３０（２Ｈ，ｍ），４．１７−
４．２７（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２３４（Ｍ^＋＋１）

【００３９】

【実施例１３】 α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（４Ｈ−５，６
−ジヒドロ−１，３−チアジン−２−イル）アミノ−Ｌ
−ノルバリン−ｔ−ブチルエステル・臭化水素酸塩の合
成 実施例１と同様に反応剤として１、３−ジブロモプロパ
ンを用いて反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニ
ル−δ−（４Ｈ−５，６−ジヒドロ−１，３−チアジン
−２−イル）アミノ−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエス
テル・臭化水素酸塩０．１９ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．４６（９Ｈ，ｓ），
１．５５−１．９１（４Ｈ，ｍ），２．０６−２．１８
（２Ｈ，ｍ），２．９６−３．００（２Ｈ，ｍ），３．
２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），４．１１−４．２
３（１Ｈ，ｍ），５．３９−５．４８（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３８８（Ｍ^＋＋１）

【００４０】

【実施例１４】δ−（４Ｈ−５，６−ジヒドロ−１，３−チアジン−２
−イル）アミノ−Ｌ−ノルバリンの合成 実施例１３で得られた化合物を出発原料とし、実施例２
と同様にしてδ−（４Ｈ−５，６−ジヒドロ−１，３−
チアジン−２−イル）アミノ−Ｌ−ノルバリン０．１３
ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．６９−１．８１（６Ｈ，ｍ），２．２０−２．
２８（２Ｈ，ｍ），３．１７−３．３０（２Ｈ，ｍ），
３．５５−３．７３（３Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２３２（Ｍ^＋＋１）

【００４１】

【実施例１５】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（２，３−デヒ
ドロ−４−オキソチアゾリン−２−イル）アミノ−Ｌ−
ノルバリン−ｔ−ブチルエステルの合成 実施例１と同様に反応剤としてブロモ酢酸メチルを用い
て反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−
（２，３−デヒドロ−４−オキソチアゾリン−２−イ
ル）アミノ−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステル０．
２８ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．４６（９Ｈ，ｓ），
１．６１−１．７８（４Ｈ，ｍ），３．３５−３．４０
（２Ｈ，ｍ），３．８６（２Ｈ，ｓ），４．１１−４．
２６（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３８８（Ｍ^＋＋１）

【００４２】

【実施例１６】δ−（２，３−デヒドロ−４−オキソチアゾリン−２−
イル）アミノ−Ｌ−ノルバリンの合成 実施例１５で得られた化合物を出発原料とし、実施例２
と同様にしてδ−（２，３−デヒドロ−４−オキソチア
ゾリン−２−イル）アミノ−Ｌ−ノルバリン０．１２ｇ
を得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：１．７４−１．９３（４Ｈ，ｍ），３．４２−３．
５７（２Ｈ，ｍ），３．７２−３．７６（１Ｈ，ｍ），
４．０６（２Ｈ，ｓ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２３２（Ｍ^＋＋１）

【００４３】

【実施例１７】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−（シクロ
プロピルメチル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン
−ｔ−ブチルエステル・臭化水素酸塩の合成 実施例１と同様に反応剤として臭化シクロプロピルメチ
ルを用いて反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニ
ル−δ−（Ｓ−（シクロプロピルメチル）イソチオウレ
イド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステル・臭化水
素酸塩０．５４ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：０．３８−０．４９（２Ｈ，ｍ），０．６３−０．
７５（２Ｈ，ｍ），１．００−１．１８（１Ｈ，ｍ），
１．４８（９Ｈ，ｓ），１．７６（９Ｈ，ｓ），１．６
２−１．９６（４Ｈ，ｍ），３．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），３．３６−３．５３（２Ｈ，ｍ），４．
０７−４．２１（１Ｈ，ｍ），５．２０−５．３３（１
Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４０２（Ｍ^＋＋１）

【００４４】

【実施例１８】δ−（Ｓ−（シクロプロピルメチル）イソチオウレイ
ド）−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩の合成 実施例１７で得られた化合物を出発原料として実施例４
と同様に脱保護反応を行いδ−（Ｓ−（シクロプロピル
メチル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン・二塩酸
塩０．３６ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：０．３３−０．３６（２Ｈ，ｍ），０．６４−０．
６６（２Ｈ，ｍ）１．０９−１．１４（２Ｈ，ｍ），
１．７６−２．０７（４Ｈ，ｍ），３．１０（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．４２−３．４７（２Ｈ，
ｍ），４．０９−４．１３（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）２４６（Ｍ^＋＋１）

【００４５】

【実施例１９】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−（２−Ｓ−メチ
ルイソチオウレイドエチル）グリシン−ｔ−ブチルエス
テル・ヨウ化水素酸塩の合成 α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２−（２−チオウレ
イドエチル）グリシン−ｔ−ブチルエステルを出発原料
とし、反応剤としてヨウ化メチルを用いて実施例１と同
様に反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−２
−（２−Ｓ−メチルイソチオウレイドエチル）グリシン
−ｔ−ブチルエステル・ヨウ化水素酸塩０．３２ｇを得
た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４５（９Ｈ，ｓ），１．４９（９Ｈ，ｓ），
１．７７−２．０６（１Ｈ，ｍ），２．２１−２．３８
（１Ｈ，ｍ），２．７９（３Ｈ，ｓ），３．３８−３．
５６（２Ｈ，ｍ），４．０６−４．２０（１Ｈ，ｍ），
５．３０−５．６７（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）３４８（Ｍ^＋＋１）

【００４６】

【実施例２０】２−（２−Ｓ−メチルイソチオウレイドエチル）グリシ
ン・二塩酸塩の合成 実施例１９で得られた化合物を出発原料として実施例４
と同様に脱保護反応を行い２−（２−Ｓ−メチルイソチ
オウレイドエチル）グリシン・二塩酸塩０．１８ｇを得
た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ） δ：２．２３−２．３５（２Ｈ，ｍ），２．６０（３
Ｈ，ｓ），３．６０−３．６５（２Ｈ，ｍ），４．０４
−４．０９（１Ｈ，ｍ） ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）１９２（Ｍ^＋＋１）

【００４７】

【実施例２１】α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−δ−（Ｓ−（３−ク
ロロプロピル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン−
ｔ−ブチルエステル・ヨウ化水素酸塩の合成 実施例１と同様に、反応剤として１−クロロ−３−ヨー
ドプロピルを用いて反応を行い、α−Ｎ−ｔ−ブトキシ
カルボニル−δ−（Ｓ−（３−クロロプロピル）イソチ
オウレイド）−Ｌ−ノルバリン−ｔ−ブチルエステル・
ヨウ化水素酸塩０．４７５ｇを得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３） δ：１．４５（９Ｈ，ｓ），１．４９（９Ｈ，ｓ），
１．６０−２．０３（４Ｈ，ｍ），２．１８−２．３２
（２Ｈ，ｍ），３．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈ
ｚ），３．４６−３．６５（２Ｈ，ｍ），３．７１−
３．７６（２Ｈ，ｍ），３．９９−４．２２（２Ｈ，
ｍ），５．１６（１Ｈ，ｍ）

【００４８】

【実施例２２】δ−（Ｓ−（３−クロロプロピル）イソチオウレイド）
−Ｌ−ノルバリン・二塩酸塩の合成 実施例２１で得られた化合物を出発原料として実施例４
と同様に脱保護反応を行い、δ−（Ｓ−（３−クロロプ
ロピル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノルバリン・二塩酸
塩を得た。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ：１．５４−１．９５（４Ｈ，ｍ），１．９８−２．
１３（２Ｈ，ｍ），３．２２−３．６５（４Ｈ，ｍ），
３．６９−３．７８（２Ｈ，ｍ），３．８５−３．９８
（１Ｈ，ｍ）

【００４９】

【表１】 表１〜３に実施例化合物の化学構造式を示す。

【００５０】

【試験例】本発明化合物のＮＯＳアイソフォームに対す
る阻害作用を、既存のＮＯＳ阻害剤と比較検討した。各
ＮＯＳアイソフォームの粗酵素画分として、Ｎ−ｃＮＯ
Ｓはラット大脳皮質可溶性分画、Ｅ−ｃＮＯＳはウシ肺
動脈血管内皮細胞株（ＣＰＡＥ）のホモジネート、ｉＮ
ＯＳはラットにＬＰＳ（１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）を
投与し、６時間後に摘出した肺の可溶性分画をそれぞれ
用いた。

【００５１】対照化合物として、以下のＮＯＳ阻害剤を
使用した。Ｎ^Ｇ−ｎｉｔｒｏ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ
（Ｌ−ＮＮＡ），Ｎ^Ｇ−ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ−Ｌ−
ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ−ＣＰＡ），Ｎ^Ｇ−ｎｉｔｒｏ−
Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ（Ｌ
−ＮＡＭＥ），Ｎ^Ｇ−ａｍｉｎｏ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎ
ｅ（Ｌ−ＡＡ），Ｎ^Ｇ−ｉｍｉｎｏｅｔｈｙｌ−ｏｒｎ
ｉｔｈｉｎｅ（Ｌ−ＮＩＯ），Ｎ^Ｇ−ｍｏｎｏｍｅｔｈ
ｙｌ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ−ＮＭＭＡ），Ｎ^Ｇ−
ａｌｌｙｌ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ−ＡＬＡ），７
−ｎｉｔｒｏｉｎｄａｚｏｌｅ（７−ＮＩ）、およびａ
ｍｉｎｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ（ＡＧ）。

【００５２】Ｎ−ｃＮＯＳの粗酵素標品は以下の手順で
調製した。無処置の雄性ＳＤ系ラット（体重３００−４
００ｇ）を断頭し、素早く全脳を取り出し、氷上で大脳
皮質を分取した。次いで、５倍量の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ，１ｍＭ ＤＴＴ（ｐＨ７．４）溶液を加え、
３分間ホモゲナイズし、これを１，０００ｘｇで１０分
間遠心した。得られた上清を、１００，０００ｘｇで６
０分間遠心し、最終的に得られた上清の可溶性細胞質画
分をＮ−ｃＮＯＳの粗酵素標品とした。

【００５３】Ｅ−ｃＮＯＳの粗酵素標品は以下の手順で
調製した。ウシ肺動脈血管内皮細胞株（ＣＰＡＥ）を２
０％ＦＢＳ含有のＭＥＭ倍地中で培養した。数日後、こ
れを０．２５％ｔｒｉｐｓｉｎ，１ｍＭ ＥＤＴＡ溶液
でフラスコから剥離し、生理食塩水で希釈した０．１Ｍ
リン酸緩衝溶液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅ
ｄ ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）を加え、
１，０００ｒｐｍで５分間遠心した。次に上清を捨て、
ＰＢＳを適当量加え、１，０００ｒｐｍで５分間遠心す
ることによって細胞を洗浄した。さらに、５０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ ＤＴＴ（ｐＨ７．４）でもう
一度同様な操作を行い細胞を洗浄した。沈査の細胞に適
当量の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１ｍＭ ＤＴＴ
（ｐＨ７．４）溶液を加え、３分間ホモゲナイズしたも
のをＥ−ｃＮＯＳの粗酵素標品とした。

【００５４】ｉＮＯＳの粗酵素標品は以下の手順で調製
した。リポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ
ｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）（１０ｍｇ／ｋｇ）をラット
に腹腔内投与し、６時間後に経心的に１０Ｕ／ｍｌのヘ
パリン含有の生理食塩水でかん流した後、肺を摘出し
た。次いで、５倍量の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，１
ｍＭ ＤＴＴ（ｐＨ７．４）溶液を加え、３分間ホモゲ
ナイズし、これを１，０００ｘｇで１０分間遠心した。
得られた上清を、１００，０００ｘｇで６０分間遠心
し、最終的に得られた上清の可溶性細胞質画分をｉＮＯ
Ｓの粗酵素標品とした。

【００５５】ＮＯＳ活性の測定は、基本的に本発明者ら
の報告した方法に従い、基質の一つであるＬ−［^３Ｈ］
ａｒｇｉｎｉｎｅから反応産物の一つであるＬ−
［^３Ｈ］ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅへの変換量を定量するこ
とによって求めた（Ｎａｇａｆｕｊｉ ｅｔ ａｌ．，
ｉｎ Ｂｒａｉｎ Ｅｄｅｍａ ＩＸ（Ｉｔｏ ｅｔ
ａｌ．ｅｄｓ．）６０，ｐｐ．２８５−２８８，１９９
４，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｃｈｉｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。

【００５６】反応液は、１００μＭ Ｌ−［^３Ｈ］ａｒ
ｇｉｎｉｎｅ，可溶性分画（６−２０μｇ／ｍｌ蛋
白），１．２５ｍＭ ＣａＣｌ_２，１ｍＭ ＥＤＴＡ，
１０μｇ／ｍｌ ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，１ｍＭ ＮＡ
ＤＰＨ，１００μＭ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｂｉｏｐｔ
ｅｒｉｎｅ，１０μＭ ＦＡＤ，１０μＭ ＦＭＮ，５
０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）から構成さ
れ、これに、本発明の化合物、あるいは対照化合物を加
えた。

【００５７】Ｌ−［^３Ｈ］ａｒｇｉｎｉｎｅを加えて反
応を開始し、３７℃で１０分間インキュベーションした
後、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ５．５），１ｍ
ＭＥＤＴＡを２ｍｌ加え、氷中に置いて反応を停止させ
た。反応溶液を陽イオン交換樹脂カラム（Ｄｏｗｅｘ
ＡＧ５０ＷＸ−８，Ｎａ^＋ｆｏｒｍ，３．２ｍｌ）に通
して、未反応で残存する基質Ｌ−［^３Ｈ］ａｒｇｉｎｉ
ｎｅと反応産物であるＬ−［^３Ｈ］ｃｉｔｒｕｌｌｉｎ
ｅを分離した。この溶出液と、さらに蒸留水３ｍｌをカ
ラムに通して得た溶出液をミニバイアルに入れ、Ｌ−［
^３Ｈ］ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅを回収した。その後、５ｍ
ｌのシンチレーターを加え、放射能を液体シンチレーシ
ョンカウンターで計測し、Ｌ−［^３Ｈ］ｃｉｔｒｕｌｌ
ｉｎｅを定量した。粗酵素標品中の蛋白濃度は、バイオ
ラッド社のマイクロアッセイキットを用いて決定した。

【００５８】表４に、全ての試験化合物の各ＮＯＳアイ
ソフォームに対するＩＣ_５０値（５０％活性阻害に必要
な濃度）と、選択性を示す指標としてＮ−ｃＮＯＳに対
するＩＣ_５０値のＥ−ｃＮＯＳとｉＮＯＳに対するＩＣ
_５０値の割合をそれぞれ示した。表中の値は、全て平均
値±標準誤差で表示し、例数を括弧内に表示した。

【００５９】表４より、 １．実施例２、４の化合物は、既存のＮＯＳ阻害剤より
強いＮ−ｃＮＯＳ阻害作用を有する。 ２．実施例２、４の化合物は、Ｎ−ｃＮＯＳとＥ−ｃＮ
ＯＳに対する選択性において、既存のＮＯＳ阻害剤より
高いＮ−ｃＮＯＳ選択性を示す。 ３．実施例２の化合物は、Ｎ−ｃＮＯＳとｉＮＯＳに対
する選択性において、既存のＮＯＳ阻害剤より格段に高
いＮ−ｃＮＯＳ選択性を示す。 ４．実施例６の化合物は、既存のＮＯＳ阻害剤より格段
に強いｉＮＯＳ阻害作用を有する。 ５．実施例６の化合物は、Ｎ−ｃＮＯＳとｉＮＯＳに対
する選択性において極めて高いｉＮＯＳ選択性を示す。 ことが明らかである。

【００６０】

【発明の効果】本発明化合物は、既存のＮＯＳ阻害剤に
比し格段に優る脳内Ｎ−ｃＮＯＳ選択的阻害作用を有
し、脳血管障害治療剤（特に閉塞性脳血管障害の急性期
に於ける治療剤）として有用である。特に、実施例２、
４の化合物は、強い脳内Ｎ−ｃＮＯＳ阻害作用を有する
と同時に、Ｎ−ｃＮＯＳとＥ−ｃＮＯＳに対する選択性
において、格段に高い脳内Ｎ−ｃＮＯＳ選択性を有し、
脳血管障害治療剤（特に閉塞性脳血管障害の急性期に於
ける治療剤）として有用である。また、既存のＮＯＳ阻
害剤に比し格段に優るｉＮＯＳ選択的阻害作用を有し、
敗血症における低血圧治療剤として有用である。特に、
実施例６の化合物は、強いｉＮＯＳ阻害作用を有すると
同時に、Ｎ−ｃＮＯＳとｉＮＯＳに対する選択性におい
て、高いｉＮＯＳ選択性を有し、敗血症における低血圧
治療剤として有用である。

【表２】

【表３】

【表４】

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/425 31/54 ＡＢＶ 31/55

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式（Ｉ） 【化１】 （式中、Ｒ_１は、水素原子、アルキル部分が置換基を有
   していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のア
   ルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい直鎖
   または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；Ｒ_２
   は、水素原子、置換基を有していてもよい直鎖または分
   岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；Ｒ_３は、置
   換基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１
   〜６のアルキル基、置換基を有していてもよい直鎖また
   は分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基を表し；Ｒ_４
   は、水素原子を表し；または、Ｒ_３、Ｒ_４は一緒になっ
   て、置換基を有していてもよい５〜７員環を形成しても
   よい；ｎは、２〜４の整数を表す。ただし、Ｒ_３がメチ
   ル基であるときに同時にｎが３であるものは除く）で表
   される化合物または医薬として許容されるその塩。
2. 【請求項２】一般式（Ｉ） 【化２】 （式中、Ｒ_１は、水素原子、アルキル部分が置換基を有
   していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のア
   ルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい直鎖
   または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；Ｒ_２
   は、水素原子、置換基を有していてもよい直鎖または分
   岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；Ｒ_３は、ハ
   ロゲン原子で置換された直鎖または分岐鎖状の炭素数１
   〜６のアルキル基を表し；Ｒ_４は、水素原子を表し；ｎ
   は、２〜４の整数を表す。）で表される請求項１記載の
   化合物または医薬として許容されるその塩。
3. 【請求項３】一般式（Ｉ） 【化３】 （式中、Ｒ_１は、水素原子、アルキル部分が置換基を有
   していてもよい直鎖または分岐鎖状の炭素数１〜６のア
   ルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよい直鎖
   または分岐鎖状の炭素数１〜９のアシル基を表し；Ｒ_２
   は、水素原子、置換基を有していてもよい直鎖または分
   岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を表し；Ｒ_３は、２
   −フルオロエチル基を表し；Ｒ_４は、水素原子を表し；
   ｎは、２〜４の整数を表す。）で表される請求項１記載
   の化合物または医薬として許容されるその塩。
4. 【請求項４】一般式（Ｉ） 【化４】 （式中、Ｒ_１、Ｒ_２は、各々独立に水素原子を表し；Ｒ
   _３は、置換基を有していてもよい直鎖または分岐鎖状の
   炭素数１〜６のアルキル基、置換基を有していてもよい
   直鎖または分岐鎖状の炭素数２〜６のアルケニル基を表
   し；Ｒ_４は、水素原子を表し；または、Ｒ_３、Ｒ_４は一
   緒になって、置換基を有していてもよい５〜７員環を形
   成してもよい；ｎは、２〜４の整数を表す。ただし、Ｒ
   _３がメチル基であるときに同時にｎが３であるものは除
   く）で表される請求項１記載の化合物または医薬として
   許容されるその塩。
5. 【請求項５】δ−（Ｓ−（２−フルオロエチル）イソチ
   オウレイド）−Ｌ−ノルバリン、δ−（Ｓ−エチルイソ
   チオウレイド）−Ｌ−ノルバリン、および、δ−（Ｓ−
   （３−クロロプロピル）イソチオウレイド）−Ｌ−ノル
   バリンからなる化合物群から選択される請求項１記載の
   化合物または医薬として許容されるその塩。
6. 【請求項６】δ−（Ｓ−アリルイソチオウレイド）−Ｌ
   −ノルバリンである請求項１記載の化合物または医薬と
   して許容されるその塩。