JPH08129014A - 検査用プレート及び検査方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 顕微鏡で観察するスライドプレートと、該ス
ライドプレート上に着脱可能な上方部材とを有し、該上
方部材には複数個の通孔が設けられ、上方部材をスライ
ドプレート上に取り付けた際に上方部材に設けられた複
数個の通孔がそれぞれ独立した区画を形成する検査用プ
レート。 【効果】 顕微鏡を用いた蛍光抗体法又は酵素抗体法に
使用した際に効率よく検査を行うことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、顕微鏡を用いた臨床検
査又は研究の際に使用する検査用プレート、抗原が固定
されたスライドプレートを有する検査用プレート、抗原
が固定されたスライドプレートを有する検査用プレート
の製造方法並びにそれらの検査用プレートを使用した検
査方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】顕微鏡を用いた蛍光抗体法、酵素抗体法
又は病理組織化学は、自己免疫疾患、感染症、病理等の
検査で極めて重要な検査法となっている。即ち、自己免
疫疾患では抗核抗体、抗ＤＮＡ抗体（クリシディア
法）、抗ミトコンドリア抗体等の検査、感染症では梅毒
検査（ＦＴＡ−ＡＢＳ）、病理ではガンの組織診断等、
多くの検査が行われている。

【０００３】この検査方法は、間接法と直接法に分類さ
れる。間接法は通常スライドプレート上に細胞や組織等
の抗原を固定し、被験サンプル中のこの抗原に対する抗
体を検出する方法である。例えば、抗核抗体では、Ｈｅ
ｐ２細胞等をスライドプレート上に固定して抗原とす
る。これに、血清又は血漿等の被験サンプルを反応さ
せ、被験サンプル中の特異抗体を固定細胞中の抗原物質
と反応させる。その結合した抗体を蛍光又は酵素で標識
された抗イムノグロブリン（標識抗体）と反応させた
後、顕微鏡でその染色像を観察する。この方法による
と、複数の抗原に対する抗体が検出可能であり、染色パ
ターンによって抗体が対応する抗原が推定できる。直接
法は組織、細胞等の被験サンプルをスライドプレート上
に固定し、これに蛍光、酵素又はビオチンで標識された
抗体を反応させ、その免疫的染色像を顕微鏡で観察する
検査方法であり、ガン細胞の検出等に用いられる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】これまでの顕微鏡を用
いた蛍光抗体法又は酵素抗体法の検査では、スライドプ
レート上に被験サンプルや試薬を分注することとスライ
ドプレートをビーカー等の洗浄漕中で洗浄することの２
種類の操作が交互に繰り返されるため、検査工程の自動
化が最も困難な分野であった。また、スライドプレート
上に抗原を固定する方法に於いても検査と同様の工程が
多く、自動化が困難な為に手作業によらざるを得なかっ
た。

【０００５】抗核抗体の間接蛍光抗体法を例にとり、詳
しく説明する。従来行われている一般的なスライドプレ
ート上に抗原を固定して検査用プレートを製造する手順
は、以下の如くである。

【０００６】スライドプレート上にガン細胞Ｈｅｐ２
懸濁液を載せ、細胞をガラスに付着させる。 スライドプレートを生理食塩水等で洗浄する。

【０００７】アセトンで細胞を固定する。 風乾して検査用プレートとする。 次いで、検査用プレートを使用した一般的な検査手順を
示す。

【０００８】血清を生理食塩水等で希釈したものを、
スライドプレート上に載せ、血清中の特異抗体（抗核抗
体）をスライドプレート上の抗原と反応させる。 スライドプレートをビーカー中の生理食塩水に漬けて
洗浄する。

【０００９】蛍光で標識された抗イムノグロブリンを
スライドプレートに載せ、スライドプレート上の抗原と
結合した特異抗体と反応させる。 スライドプレートをビーカー中の生理食塩水に漬けて
洗浄する。

【００１０】グリセリン水溶液をスライドプレートに
載せ、カバーグラスを被せて蛍光顕微鏡で観察する。 このように、スライドプレート上への抗原の固定及び抗
原を固定したスライドプレートを使用した検査の工程で
は、スライドプレート上への分注と、スライドプレート
のビーカー中での洗浄が繰り返される為、自動化が行い
難く、殆どの工程が手作業で行われてきた。その結果、
このような顕微鏡を用いる蛍光抗体法及び酵素抗体法は
それ以外の検査の多くが自動化されていく中で最も自動
化が遅れた分野となっている。

【００１１】このような現状で、従来からの古典的方法
に改良を試みた例としては、Ｎｕｎｃ社のチェンバース
ライドがある。このチェンバースライドは、スライドプ
レート上での細胞の培養を可能にするために開発された
もので、スライドプレートの上に一体に形成された複数
個の通孔をシリコンゴムを介して付着させたものであ
り、この複数個の通孔は取り外すことが可能であるが、
一度外した通孔は二度と装着することができない為に自
動化機器を利用した効率的な検査に使用することができ
なかった。

【００１２】本発明者等は、自動化機器を利用した効率
的な検査に使用することができる検査用プレートについ
て鋭意研究を進めた結果、本発明に到達した。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明は、顕微鏡で観察
するスライドプレートと、該スライドプレート上に着脱
可能な上方部材とを有し、該上方部材には複数個の通孔
が設けられ、上方部材をスライドプレート上に取り付け
た際に上方部材に設けられた複数個の通孔がそれぞれ独
立した区画を形成することを特徴とする検査用プレート
に関する。

【００１４】更に、本発明は、顕微鏡で観察する抗原が
固定されたスライドプレートと、該スライドプレート上
に着脱可能な上方部材とを有し、該上方部材には複数個
の通孔が設けられ、上方部材をスライドプレート上に取
り付けた際に上方部材に設けられた複数個の通孔がそれ
ぞれ独立した区画を形成することを特徴とする抗原が固
定されたスライドプレートを有する検査用プレートに関
する。

【００１５】更に、本発明は、スライドプレート上に上
方部材を取り付けた状態で検査用プレートの通孔内のス
ライドプレート上に抗原を付着させ、次いでスライドプ
レートを取り外して洗浄、抗原の固定、風乾を行った後
に、抗原を固定したスライドプレートを再度検査用プレ
ートに取り付けることを特徴とする抗原が固定されたス
ライドプレートを有する検査用プレートの製造方法に関
する。

【００１６】更に、スライドプレート上に上方部材を取
り付けた状態で抗原が固定されたスライドプレートを有
する検査用プレートの通孔内への被験サンプルの分注と
洗浄、標識抗体の分注と洗浄、必要に応じて染色基質の
分注と洗浄を行った後に、封入剤の分注を行い、次いで
検査用プレートから取り外したスライドプレートを顕微
鏡で観察することを特徴とする検査方法に関する。

【００１７】更に、本発明は、検査用プレートからスラ
イドプレートを取り外してスライドプレート上に被験サ
ンプルを付着若しくは固定し、該スライドプレートを検
査用プレートに取り付け、検査用プレートの通孔内への
標識抗体若しくは染色液の分注と洗浄及び必要に応じて
染色基質の分注と洗浄を行った後に、封入剤の分注を行
い、次いでスライドプレートを検査用プレートから取り
外して顕微鏡で観察することを特徴とする検査方法に関
する。

【００１８】以下、本発明を図面を参照して詳細に説明
する。図１は本発明に係わる下方部材を有する検査用プ
レートの一例を示す斜め上方から見た分解斜視図、図２
は図１に示した検査用プレートをセットした組立斜視
図、図３は図１に示した検査用プレートの平面図、図４
は図１に示した検査用プレートの底面図、図５は図３に
おけるＡ−Ａ線に沿った断面図、図６は図３におけるＢ
−Ｂ線に沿った断面図、図７は図３におけるＣ−Ｃ線に
沿った断面図、図８は上方部材を上方部材支持部を支点
にし開蓋した図５に相当する断面図、図９は上方部材を
上方部材支持部を支点にし開蓋した図６に相当する断面
図、図１０はスライドプレートと、上方部材を外しスラ
イドプレートを下方部材にセットした状態とを示す平面
図、図１１はスライドプレートと、上方部材を外しスラ
イドプレートを下方部材にセットした状態とを示す平面
図及び図１２は本発明に係わる下方部材を有する検査用
プレートの他の一例を示す斜め上方から見た分解斜視図
である。

【００１９】また、図１３は本発明に係わる下方部材を
有していない検査用プレートの例を示す斜め上方から見
た分解斜視図、図１４は図１３に示した検査用プレート
の平面図、図１５は図１３に示したスライドプレートが
セットされていない検査用プレートの底面図、図１６は
図１４におけるＤ−Ｄ線に沿った断面図、図１７は図１
４におけるＥ−Ｅ線に沿った断面図、図１８はスライド
プレートと、上方部材にスライドプレートをセットした
状態とを示す底面図及び図１９はスライドプレートと、
上方部材にスライドプレートをセットした状態とを示す
底面図である。

【００２０】図１乃至図１１に示す検査用プレートは、
上方部材１と、スライドプレート２若しくはスライドプ
レート３と、下方部材４とを有している。上方部材１
は、通常四角形の形状であり、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリスチレン、アクリル樹脂、ポリカーボネー
ト、ＡＢＳ樹脂、ポリスルホン等の熱可塑性樹脂によっ
て成形することができ、自動洗浄機、自動分注機、ＥＬ
ＩＳＡプロセッサー、マルチピペット等の各種検査機器
に対応可能な９６穴マイクロプレートと同様のピッチを
もつ複数個の通孔５を有しているのが好ましい。通孔５
は、通常９６穴であるが、検査機器等の変更によりその
数を増減してもよい。また、かかる通孔は例えば、通孔
５から通孔５までのピッチを９．０ｍｍとし、上部直径
を７．０ｍｍ、下部直径を６．０ｍｍ、深さを８．０ｍ
ｍとすることが好ましい。

【００２１】上方部材１の下面には溝６が形成され、シ
ール材７の突出部８がこの溝６内に侵入することによ
り、上方部材１の下面には通孔５の周辺にシール材７が
取り付けられている。シール材７は、流動性、接着性及
び適度な弾性等の物性を持つシリコンゴム、エチレンゴ
ム、プロピレンゴム等からなることが好ましく、また硬
度を１８乃至５０度とし、肉厚を１．０乃至２．０ｍｍ
とすることが望ましい。シール材７は独立発砲させてク
ッション性を高めてもよい。上方部材１の下面にシール
材７を取り付けるには、例えばシリコンゴム板を打ち抜
くか、或いは射出成形により、上方部材１の通孔５と同
様のピッチで直径が５．５ｍｍの穴を９６個有する板状
体を形成し、上方部材１の溝６内に硬化性液状シリコン
ゴムを充填した後に板状体を貼り合わせ、硬化性液状シ
リコンゴムを硬化させてシール材７の突出部８とするこ
とによって上方部材１の下面にシール材７を取り付けて
もよいし、或いはシール材７を射出成形する際に上方部
材１を金型内にセットしてインサート成形しても良い
し、或いはシール材７と上方部材１を同時成形しても良
いし、或いは上方部材１の通孔５の開口部を除く下面の
みに粘着シートを貼着し、次いでその上にシール材７を
貼り合わせてもよい。

【００２２】また、上方部材１は、下方部材４に支持さ
れており、好ましくは上方部材１の一端が下方部材４に
軸支されるようにその左右に支軸１１を有する構造のも
のである。尚、かかる上方部材１は図１２に示すように
下方部材４に軸支されずに載せられ、下方部材４から取
り外すことができる構造のものであってもよい。この場
合、上方部材１は支軸１１が形成されない形状となって
いる。

【００２３】下方部材４は、内側にスライドプレート２
若しくはスライドプレート３を支持する支持部９を有す
る枠状体であり、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ
スチレン、アクリル樹脂、ポリカーボネート、ＡＢＳ樹
脂等の熱可塑性樹脂によって成形することができ、必要
に応じてガラス繊維等の強化材を混入してもよい。

【００２４】下方部材４の一端の左右両側には、支軸受
け穴１０が形成され、上方部材１の支軸１１を支軸受け
穴１０に嵌合させることによって上方部材１を下方部材
４に対して繰り返し開閉させることができる。下方部材
４には、支軸受け穴１０と反対側の端部に突部１２が形
成されている。上方部材１を下方部材４に閉じ、突部１
２を上方部材１に設けられたロック穴１３に嵌合させる
ことにより、上方部材１を下方部材４の支持部９上に置
いたスライドプレート２若しくはスライドプレート３に
取り付けることができ、上方部材１のシール材７がスラ
イドプレート２若しくはスライドプレート３に圧着され
ることにより、スライドプレート２若しくはスライドプ
レート３上で上方部材１の各通孔５が独立区画され、各
通孔５に希釈液、洗浄液等を注入しても希釈液、洗浄液
等が通孔５から漏れないように密閉される。尚、上方部
材１が下方部材４に軸支されない場合、下方部材４は支
軸受け穴が形成されない形状のものである。

【００２５】スライドプレートは、ガラス及びポリエス
テル、ポリメチルテルペン、エチレン−メタクリル酸共
重合体、ポリスチレン、アクリル樹脂、ポリカーボネー
ト、環状オレフィンコーポリマー等の合成樹脂によって
形成することができ、抗原又は被験サンプルを固定する
部位１４が例えば９６穴マイクロプレートと同様のピッ
チで設けられた直径４．５ｍｍの区域の場合、１６箇所
設けられた１６穴タイプの分割形式のスライドプレート
２でもよいし、９６箇所設けられた９６穴タイプの一枚
形式のスライドプレート３でもよく、必要に応じて８穴
タイプ若しくは２４穴タイプのスライドプレート２でも
よい。スライドプレートの抗原又は被験サンプルを固定
する部位１４以外は、テフロン等をバインダーとする印
刷インキを使用して着色及び溌水処理することが好まし
い。これにより、抗原又は被験サンプルを固定する区域
を明確に識別することができる上に抗原又は被験サンプ
ルが部位１４をはみ出した際にそれを弾くことができ
る。

【００２６】スライドプレート２及びスライドプレート
３は下方部材４の支持部９上にセットされる。即ち、ス
ライドプレート２を使用する場合には、その各々を区
分、固定させる為に下方部材４の支持部９上で分割リブ
１５のピッチ内に１枚乃至６枚セットし、スライドプレ
ート２のａ寸法及びｃ寸法を支持部９におけるｅ寸法及
びｇ寸法のそれぞれにほぼ同寸法で対応させるのが好ま
しい。また、スライドプレート３を使用する場合には、
分割リブ１５の先端より内側に１枚セットし、スライド
プレート３のｂ寸法及びｄ寸法を支持部９におけるｆ寸
法及びｈ寸法のそれぞれにほぼ同寸法で対応させるのが
実用上好ましい。スライドプレート２及びスライドプレ
ート３の寸法をこのように定めることにより、２種類の
スライドプレート２及びスライドプレート３を確実に支
持部９上にセットすることができる。

【００２７】図１乃至図１１に示す本発明の検査用プレ
ートの例は、下方部材４の一端を軸にして上方部材１を
開閉させることにより、下方部材４上に置いてスライド
プレート２若しくはスライドプレート３に対して上方部
材１を着脱し得るようにしているものである。また、図
１２は本発明の検査用プレートの他の例を示すものであ
る。この検査用プレートは、図１乃至１１の検査プレー
トのような上方部材の支軸及び下方部材の支軸受け穴を
設けないもので、下方部材４上にスライドプレート２若
しくはスライドプレート３を置き、その上に上方部材１
を被せ、下方部材４に形成した凸部１６に上方部材１の
垂下部１７の内面に形成した凹部（図示せず）を嵌合さ
せる形式のものである。

【００２８】また、本発明の検査用プレートは、上記図
１乃至１２に示すような下方部材４を有する検査用プレ
ートが好ましいが、図１３乃至１９に示すような上方部
材とスライドプレートとからなるものであってもよい。
図１３乃至１９に示す下方部材のない検査用プレートに
あっては、図１７に示すような上方部材の両側壁に設け
られたツメ部１７でスライドプレート２または３を保持
する機構になっており、該ツメ部が弾性を有し、それを
外側にやや開くことによってスライドプレートを検査用
プレートから取り外すことができる。かかるツメ部は分
割形式のスライドプレート２を保持するために２以上の
対となるように上方部材側壁に形成される。尚、図１３
乃至１９の検査用プレートにおける上方部材は、図１乃
至１２の検査用プレートの上方部材で形成される通孔や
シール材と同様のものが形成される。

【００２９】本発明に係わる検査用プレートは、間接蛍
光抗体法または間接酵素抗体法及び直接蛍光抗体法また
は直接酵素抗体法等の検査に使用することができる。間
接蛍光抗体法または間接酵素抗体法としては、抗核抗
体、抗ＤＮＡ抗体（クリシジア法）、抗セントロメア抗
体、抗平滑筋抗体、抗ミトコンドリア抗体、抗胃壁細胞
抗体、抗好中球抗体等の自己免疫疾患診断及びクラミジ
ア抗体、トキソプラズマ抗体、梅毒抗体（ＦＴＡ−ＡＢ
Ｓ）、ＡＴＬＶ抗体、ＥＢウイルス抗体、風疹ウイルス
抗体、ヘルペス抗体、サイトメガロウイルス抗体等の感
染症診断を挙げることができる。また、直接蛍光抗体法
または直接酵素抗体法としては、ヘルペス抗原、クラミ
ジア抗原等の感染症診断及びガンの細胞診断やＩｇＡ腎
症検査等の病理学的検査を挙げることができる。

【００３０】前記検査用プレ−トを使用して抗原を固定
したスライドプレートを有する検査用プレート（間接
法）の製造法について説明する。 （１）スライドプレ−ト上への抗原の付着 間接法に於ては、スライドプレ−ト上に抗原を固定す
る。抗原としては、自己免疫疾患診断では、Ｈｅｐ２細
胞、クリシジア、染色体、平滑筋、腎組織、胃壁組織、
好中球などの自己抗原を持つ細胞や組織が利用可能であ
り、感染症診断では、バクテリアやウイルスなどの病原
体微生物がもちいられる。これらの抗原は適当な培地や
緩衝液に懸濁しスライドプレ−ト上に分注してインキュ
ベ−トすることにより、スライドプレ−ト上に付着させ
得る。この際、スライドプレ−トが取り付けられた検査
用プレートの上方部材の各通孔の上部より、自動分注機
などを用いて自動的に抗原懸濁液を分注することができ
る。

【００３１】（２）洗浄 抗原がスライドプレ−ト面に付着したら、余分の抗原及
び培地や緩衝液を生理食塩水、ＰＢＳ溶液等の洗浄液に
より洗浄、除去する。この場合にも抗原が付着したスラ
イドプレートをセットしたまま検査用プレートの上方部
材の通孔の上部から洗浄機により洗浄することができ
る。

【００３２】（３）抗原の固定及び風乾 スライドプレ−ト上へ付着した抗原は、エタノ−ル、ア
セトン、グルタ−ルアルデヒド、パラホルムアルデヒ
ド、ホルマリン、メタノ−ル、又はこれらを組合せた固
定液によって固定される。この場合には、上記（２）で
抗原が固定されたスライドプレートを検査用プレートか
ら取り出し、該スレイドプレートのみを固定液に浸して
抗原を固定する。抗原が固定されたスライドプレ−ト
は、風乾される。

【００３３】（４）抗原が固定されたスライドプレ−ト
のセット 抗原が固定されたスライドプレ−トを下方部材上に置
き、ついで上方部材を被せて検査用プレートとする。こ
のように予め抗原が固定されたスライドプレ−トをセッ
トすることによって、多数の被験サンプルを検査する際
にその都度抗原が固定されたスライドプレ−トを作成す
ることなく直ちに検査を行うことができるメリットがあ
る。

【００３４】上述のような抗原が固定されたスライドプ
レ−トがセットされた検査用プレートの製造法であれ
ば、上方部材を開閉し若しくは取り外して該スライドプ
レートを取り出すことなく自動分注機によって抗原懸濁
液を分注してスライドプレート上に抗原を付着させ、次
いでそのまま洗浄液で洗浄できることになるため、効率
よく抗原を固定したスライドプレートを有する検査用プ
レートを製造することができる。

【００３５】次に、前記検査用プレートを使用した検査
法（間接法）を説明する。 （１）被験サンプルの分注 被験サンプルは通常血清であることが多いが、ヘパリン
血漿、ＥＤＴＡ血漿、クエン酸血漿、あるいは腹水、髄
液、唾液、尿などあらゆる体液が被験サンプルとなりう
る。これらの被験サンプルはリン酸緩衝生理食塩水（Ｐ
ＢＳ）、生理食塩水など通常よく用いられている緩衝液
で希釈される。これらの被験サンプルを抗原が固定され
たスライドプレートを取り付けた検査用プレートの上方
部材の通孔上部から分注する。この時自動分注機を用い
ることにより、この工程を自動化することができる。被
験サンプルを検査用プレートの通孔内に分注すると、被
験サンプル中の抗体がスライドプレ−ト上に固定された
抗原に結合する。

【００３６】（２）洗浄１ 抗原に結合しなかった余分の抗体（イムノグロブリン）
を洗浄操作により除去する。洗浄操作は洗浄液の分注、
吸引を繰り返すのであるが、この工程もスライドプレー
トを検査用プレートから取り出すことなく自動洗浄機の
使用により洗浄を自動化することができる。

【００３７】（３）標識抗体の分注 一回めの洗浄後、標識抗体を分注し、スライドプレ−ト
上に固定された抗原に結合した抗体に標識抗体を反応さ
せる。標識抗体としては、蛍光抗体法であれば、抗イム
ノグロブリン、抗ＩｇＧ、抗ＩｇＭ、抗ＩｇＡ、抗Ｉｇ
Ｅなどの抗体を、フルオロセイン、ロ−ダミン、フィコ
エリスリンなどの蛍光物質で標識したものを挙げること
ができ、又酵素抗体法であれば、ペルオキシダ−ゼ、ア
ルカリ性フォスファタ−ゼなどの酵素、またはビオチン
などで標識したものを挙げることができる。この場合、
検査用プレートの上方部材の通孔上部から自動分注機に
より標識抗体の分注を自動化することができる。

【００３８】（４）洗浄２ 洗浄１と同様の方法で抗体に結合しなかった標識抗体を
洗浄により除去する。 （５）染色基質の分注（酵素抗体法の場合） 酵素抗体法の場合は、染色基質を分注し、標識抗体（酵
素）が結合した部位を染色基質により染色する。染色基
質としては、標識抗体（酵素）がペルオキシダ−ゼの場
合、ジアミノベンチジンなどが用いられる。この染色基
質の分注も上記ように自動分注機により自動化すること
ができる。

【００３９】（６）洗浄３ 染色後、洗浄１と同様の方法で余分の染色基質を洗浄に
より取り除く。 （７）封入剤の分注 以上の操作が終了したスライドプレ−ト上の抗原に封入
剤を分注する。これは、染色された抗原などの乾燥を防
ぎ、次にスライドプレ−トの上にかぶせるカバ−グラス
を密着させる意味がある。この封入剤には、通常１０−
１００％のグリセリン水溶液が用いられるが、これに限
るわけではない。この工程もスライドプレートを外すこ
となく自動分注機による自動化が可能である。

【００４０】以上の（１）乃至（７）の工程に於いて、
自動化機器としては、被験サンプルの分注、洗浄、標識
抗体の分注、染色基質の分注、封入剤の分注など個々の
工程に対応した自動機器を使用することも可能である
し、上方部材の通孔のピッチが９６穴マイクロタイタ−
プレ−トと同じであれば、例えば、ベ−リング社のプロ
セッサ−２、プロセッサ−３、ベックマン社のバイオメ
ック、国際試薬社のエルジアオ−トなどのマイクロプレ
−ト用の自動化機器を用いれば、これらのすべての工程
を連続して自動化することも可能である。

【００４１】以上の工程が終了した後、スライドプレ−
トを取り出し、スライドプレ−トにカバ−グラスを被
せ、顕微鏡にて測定、観察がなされる。本発明に於いて
は、上方部材１がスライドプレート上に着脱可能である
ことにより、顕微鏡にて少数の被験サンプルを測定、観
察する際に、８穴タイプ、１６穴タイプ若しくは２４穴
タイプのスライドプレートが収納された検査用プレート
を使用すると、経済的となる。例えば、１６穴タイプの
スライドプレート２が６枚収納された検査用プレートに
於いて、２枚のスライドプレート２を使用する必要があ
る場合には、スライドプレート２から上方部材１を取り
外し、４枚のスライドプレート２を取り出し、取り出し
た４枚のスライドプレート２の代わりにガラスプレート
を収納し、スライドプレート２及びガラスプレート上に
上方部材１を取り付け、前記の（１）乃至（７）の操作
を行った後に２枚のスライドプレート２を取り出して測
定、観察をすればよく、先に取り出した４枚のスライド
プレート２を後で別の機会で使用することにより、抗原
が固定された高価なスライドプレートが無駄になること
を防ぐことができる。

【００４２】次に直接法について説明する。 （１）被験サンプルの付着若しくは固定 直接法では、細胞、組織、喀痰などが被験サンプルとな
り、被験サンプルをスライドプレ−ト上に付着させる。
これらの被験サンプルは未固定のまま次の工程も行える
し、必要に応じて化学的な固定を行ってもよい。化学的
固定には、ホルマリン、パラホルムアルデヒド、グルタ
−ルアルデヒド、メタノ−ル、エタノ−ル、アセトン又
はこれらの組み合わせなどを利用した固定液が使用可能
である。この工程もスライドプレ−トから上方部材をは
ずすことなく自動分注機による自動化が可能であるが、
上方部材をはずした状態で直接スライドプレートに固定
することも可能である。

【００４３】（２）標識抗体若しくは染色液の分注 検査しようとする特異抗原に対する抗体、例えばガンの
組織診断の場合にはＣＥＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＣＡ−１
９−９などのガン特異抗原や、ケラチン、ビメンチンな
どの組織特異抗原に対する抗体、腎臓に於ける免疫複合
体の検出では、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡなどに対する抗
体などを標識したものが用いられる。これらの抗体の標
識には蛍光法の場合フルオロセイン、ロ−ダミン、フィ
コエリスリンなどが使用可能であり、酵素法の場合はペ
ルオキシダ−ゼやアルカリ性フォスファタ−ゼなどが使
用可能であり、またビオチンを用いた間接的標識も可能
である。また、標識抗体の代わりにパパニコロ染色ヘマ
トキシリン液１００、パパニコロ染色液ＯＧ−１００、
パパニコロ染色液ＥＡ−１００等の染色液を用いた染色
法も利用できる。この工程では、標識抗体や染色液など
がスライドプレ−ト上の被験サンプル上に分注するので
あるが、上方部材をスライドプレ−ト上に取り付けたま
までの分注を自動分注機などによる自動化することが可
能である。

【００４４】（３）洗浄１ 被験サンプル中の抗原物質に結合しなかった標識抗体や
余分の染色液を洗浄操作により取り除く。洗浄は洗浄液
の分注と吸引を繰り返すのであるが、自動洗浄機などに
より検査用プレートからスライドプレートを取り外すこ
となく自動化が可能である。

【００４５】（４）染色基質の分注（酵素標識抗体の場
合） 酵素抗体法の場合は、酵素の結合した部位を染色するた
め、染色基質を分注する。染色基質としては、酵素がペ
ルオキシダ−ゼの場合、ジアミノベンチジンを含有する
緩衝液などが用いられる。また、ビオチンによる標識の
場合は、ＰＡＰ法やＡＢＣ法などの増幅法も利用可能で
ある。

【００４６】（５）洗浄２ 染色後洗浄し、余分の染色基質を取り除く。この染色基
質の分注、洗浄もスライドプレートを検査用プレートに
セットしたままでの自動化機器への対応が可能である。

【００４７】（６）封入剤の分注 以上の操作が終了した後、スライドプレ−ト上の抗原物
質に封入剤が分注される。これは、染色された抗原など
の乾燥を防ぎ、次にスライドプレ−ト上にかぶせるカバ
−グラスを密着させる意味がある。この工程もスライド
プレ−ト上に上方部材を取り付けることにより、自動分
注機による自動化が可能となる。

【００４８】以上の工程が終了した後、上方部材をスラ
イドプレ−トからはずしてカバ−グラスをかけ、顕微鏡
により測定がなされる。本発明に係わる検査用プレート
を使用すれば、検査用プレートからスライドプレートを
取り外してスライドプレート上に被験サンプルを付着若
しくは固定し、次いでスライドプレートを検査用プレー
トに取り付けて自動化機器を使用して標識抗体若しくは
染色液の分注、洗浄、染色基質の分注等を行い、次いで
スライドプレートを検査用プレートから取り外して顕微
鏡で測定することにより、効率よく測定を行うことがで
きる。

【００４９】尚、本発明に係る検査用プレートは、予め
抗原が固定されたスライドプレートをセットしたもので
あっても、また、抗原が固定されていないスライドプレ
ートがセットされたものであってもよく、それぞれ用途
に応じて使用することができる。

【００５０】

〔実施例１〕

上方部材の製造 ポリスチレンを使用し、射出成形により、図１乃至図１
１に示す上方部材１を成形した。上方部材１には、通孔
５から通孔５までのピッチを９．０ｍｍとし、長手側を
１２列、短手側を８列として合計９６個の通孔５を形成
した。通孔５は、上部直径を７．０ｍｍ、下部直径を
６．０ｍｍ、深さを８．０ｍｍ、容量を約０．３１ｍｌ
とした。上方部材１の下面にはシール材７を嵌着させる
為に幅１．０ｍｍ、深さ１．０ｍｍの溝６を形成した。
上方部材１の一端には支軸１１を形成した。

【００５１】シール材の固定 プレス加工により、肉厚１．０ｍｍ、硬度４０度のシリ
コーンゴム板（東レ・ダウコーニング・シリコーン社製
熱加硫型シリコンゴムＳＨ８４１Ｖ）を上方部材１の下
面形状に相当する外形状に打ち抜いた後に、上方部材１
と同じピッチで直径５．５ｍｍの穴を９６個形成した。
上方部材１の下面に形成した溝６内に硬化性液状シリコ
ーンゴム（東レ・ダウコーニング・シリコーン社製電子
部品用コーティング材ＳＥ９１８７ＲＴＶ）を充填し、
通孔５と穴を合致させながら上方部材１の下面にシリコ
ーンゴム板を貼り合わせ、２５℃で、１２時間保持して
液状シリコーンゴムを硬化させて突出部とすることによ
り、上方部材１の下面にシール材７を固定した。

【００５２】下方部材の製造 ガラスフィラーを１５重量％含有したポリカーボネート
を使用し、図１乃至図１１に示す下方部材４を成形し
た。下方部材４には、支持部９上に約１８．０ｍｍの間
隔をおいて高さ約５．０ｍｍ、長さ約２．０ｍｍ、肉厚
約０．８ｍｍの分割リブ１５を片側に８個づつとして合
計１６個形成した。下方部材４の一端には支軸受け穴１
０を形成した。

【００５３】スライドプレートの製造 肉厚１．０ｍｍのガラス板を長手寸法（ａ寸法）が７
６．７ｍｍ、短手寸法（ｃ寸法）が１６．８ｍｍとなる
ように裁断し、抗原若しくは被験サンプルを固定する部
位（９６穴マイクロプレートと同様のピッチで設けられ
た直径４．５ｍｍの区域）１４以外をテフロンをバイン
ダーとする印刷インキで印刷して着色、撥水処理を施す
ことにより、スライドプレート２を製造した。

【００５４】また、肉厚１．０ｍｍのガラス板を長手寸
法（ｄ寸法）が１１１．３ｍｍ、短手寸法（ｂ寸法）が
７２．７ｍｍとなるように裁断し、抗原若しくは被験サ
ンプルを固定する部位（９６穴マイクロプレートと同様
のピッチで設けられた直径４．５ｍｍの区域）１４以外
をテフロンをバインダーとする印刷インキで印刷して着
色、撥水処理を施すことにより、スライドプレート３を
製造した。

【００５５】検査用プレートの作製 上方部材１の支軸１１を下方部材４の支軸受け穴１０に
嵌合させた後に、下方部材４の支持部９上にスライドプ
レート２を６枚セットするか、或いはスライドプレート
３を１枚セットすることにより、本発明に係わる検査用
プレートを作製した。 〔実施例２〕空気中に５％の炭酸ガスを含有した炭酸ガ
スインキュベータ中に於いて３７℃で９０容量部のＭＥ
Ｍ−Ｅ培地に１０容量部の牛胎児血清を加えた培地（以
下、培地という）でＨｅｐ２細胞を３日間培養した。培
養容器に付着したＨｅｐ２細胞を１０ミリモル濃度の燐
酸緩衝液に０．１５モル濃度となるように塩化ナトリウ
ムを加えた溶液（以下、ＰＢＳ溶液という）で洗浄した
後、０．１２５重量％のトリプシンと０．０１重量％の
エチレンジアミンテトラアセテートとを含む緩衝液中に
懸濁させ、培地を加えた後、遠心分離を行いＨｅｐ２細
胞を集めた。次いで、Ｈｅｐ２細胞を再び培地に懸濁
し、遠心分離してＨｅｐ２細胞を集めることにより洗浄
を行った。Ｈｅｐ２細胞を再び培地に１０⁴個／ｍｌ乃
至１０⁵個／ｍｌとなるように懸濁し、自動分注機によ
りスライドプレート３を装着した実施例１の検査用プレ
ートの通孔５内に懸濁液を２００μｌづつ分注した。

【００５６】空気中に５％の炭酸ガスを含有した炭酸ガ
スインキュベータ中に於いて検査用プレートを３７℃で
１２時間放置し、Ｈｅｐ２細胞をスライドプレート３上
に付着させた。

【００５７】検査用プレートの通孔５内の培地を捨て、
検査用プレートからスライドプレート３を取り外し、Ｐ
ＢＳ溶液に浸漬して洗浄した後、アセトン中に浸漬して
Ｈｅｐ２細胞をスライドプレート３上に固定した。

【００５８】Ｈｅｐ２細胞を固定したスライドプレート
３を風乾し、検査用プレート内に取り付けることによ
り、スライドプレート３上に抗原を固定した検査用プレ
ートを作製した。 〔実施例３〕ヤギ由来抗ヒト・イムノグロブリン抗体を
フルオロセインイソチオシアネートで標識して標識抗体
を調整し、得られた標識抗体をＰＢＳ溶液で希釈した。

【００５９】被験サンプルである５０例の血清を自動希
釈機を使用してＰＢＳ溶液で２０倍、４０倍、８０倍、
１６０倍、３２０倍、６４０倍及び１２８０倍に希釈し
た。実施例２に記載されたスライドプレート３上に抗原
を固定した検査用プレートに於いて上方部材１をスライ
ドプレート３上に取り付けた後に、検査用プレートの通
孔５内に自動分注機を使用して前記血清希釈液を１００
μｌ分注した後、室温で３０分間放置した。

【００６０】次いで、自動洗浄機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に３００μｌのＰＢＳ溶液を分注、吸引
して洗浄する操作を４回繰り返した。自動分注機を使用
して検査用プレートの通孔５内に前記標識抗体希釈液を
１００μｌ分注した後、２５℃で３０分間放置した。

【００６１】次いで、前記と同様に検査用プレートの通
孔５内を洗浄した。次いで、自動分注機を使用して検査
用プレートの通孔５内に８０重量％グリセリン水溶液を
１０μｌ分注した後、スライドプレート３を検査用プレ
ートから取り外し、スライドプレート３上にカバーグラ
スを被せ、蛍光顕微鏡で観察した。

【００６２】本発明に係わる前記の測定方法に於いて、
５０例の血清の内で１５例が陽性と判断されたが、これ
はＭＢＬ社のフルオローＨＥＰＡＮＡ検査用プレートを
使用した従来最も広く使用されている測定方法と同様の
結果であった。

【００６３】また、陽性と判断された血清の内で６例に
ついて抗体価（希釈限界倍率）と染色パターンを示す
と、表１の通りであり、本発明方法によれば従来法と同
等以上の精度で測定し得ることが明かであった。

【００６４】

【表１】 〔実施例４〕ヤギ由来抗ヒト・イムノグロブリン抗体を
ペルオキシダーゼで標識して標識抗体を調製し、得られ
た標識抗体をＰＢＳ溶液で希釈した。

【００６５】実施例３で使用した５０例の血清を自動希
釈機を使用してＰＢＳ溶液で２０倍、４０倍、８０倍、
１６０倍、３２０倍、６４０倍及び１２８０倍に希釈し
た。実施例２に記載されたスライドプレート３上に抗原
を固定した検査用プレートに於いて上方部材１をスライ
ドプレート３上に取り付けた後に、検査用プレートの通
孔５内に自動分注機を使用して前記血清希釈液を１００
μｌ分注した後、室温で３０分間放置した。

【００６６】次いで、自動洗浄機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に３００μｌのＰＢＳ溶液を分注、吸引
して洗浄する操作を４回繰り返した。次いで、自動分注
機を使用して検査用プレートの通孔５内に前記標識抗体
希釈液を１００μｌ分注した後、室温で３０分間放置し
た。

【００６７】次いで、前記と同様に検査用プレートの通
孔５内を洗浄した。次いで、自動分注機を使用して検査
用プレートの通孔５内に１００μｌの染色基質（０．０
０５重量％の過酸化水素、０．０２重量％のジアミノベ
ンチジンを含有する５０ミリモル濃度のトリス緩衝液、
ＰＨ７．６）を分注した後、室温で１０分間放置した。

【００６８】次いで、前記と同様に検査用プレートの通
孔５内を洗浄した。次いで、自動分注機を使用して検査
用プレートの通孔５内に濃度８０重量％のグリセリン水
溶液を１０μｌ分注した後、スライドプレート３を検査
用プレートから取り外し、スライドプレート３上にカバ
ーグラスを被せ、顕微鏡で観察したところ、実施例３と
ほぼ同様の結果が得られた。 〔実施例５〕検査用プレートから取り外したスライドプ
レート３上に被験サンプルである肺ガン（編平上皮ガ
ン）患者１０例と正常者１０例の新鮮な喀痰を塗布し
た。

【００６９】次いで、スライドプレート３を１容量部の
エタノールと１容量部のジエチルエーテルとからなる固
定液に浸漬してスライドプレート３上に喀痰を固定し
た。次いで、スライドプレート３を検査用プレートに取
り付け、スライドプレート３上に上方部材１を取り付け
た。

【００７０】次いで、自動洗浄機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に濃度７０容量％のエタノール水溶液を
３００μｌ分注して吸引する操作、濃度５０容量％のエ
タノール水溶液を３００μｌ分注して吸引する操作及び
蒸留水を３００μｌ分注して吸引する操作を２回づつ繰
り返し、通孔５内を洗浄した。

【００７１】次いで、自動分注機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内にパパニコロ染色ヘマトキシリン液１０
０（和光純薬社製染色液）を２００μｌ分注し、５分間
保持して染色した。

【００７２】次いで、自動洗浄機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に蒸留水を３００μｌ分注して吸引する
操作、濃度７０容量％のエタノール水溶液に１容量％の
塩酸を加えた水溶液を３００μｌ分注して吸引する操
作、濃度７０容量％のエタノール水溶液に３容量％のア
ンモニアを加えた水溶液を３００μｌ分注して吸引する
操作、濃度７０容量％のエタノール水溶液を３００μｌ
分注して吸引する操作及び濃度９０容量％のエタノール
水溶液を３００μｌ分注して吸引する操作をそれぞれ２
回づつ繰り返し、通孔５内を洗浄した。

【００７３】次いで、自動分注機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内にパパニコロ染色液ＯＧ−１００（和光
純薬社製染色液）を２００μｌ分注し、２分間保持して
染色した。

【００７４】次いで、自動洗浄機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に濃度９５容量％のエタノール水溶液を
３００μｌ分注して吸引する操作を２回繰り返し、通孔
５内を洗浄した。

【００７５】次いで、自動分注機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内にパパニコロ染色液ＥＡ−１００（和光
純薬社製染色液）を２００μｌ分注し、３分間保持して
染色した。

【００７６】次いで、自動洗浄機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に濃度９５容量％のエタノール水溶液を
３００μｌ分注して吸引する操作を３回繰り返して洗浄
した後、通孔５内にキシロールを２００μｌ分注し、５
分間放置した。

【００７７】次いで、自動分注機を使用して検査用プレ
ートの通孔５内に濃度８０容量％のグリセリン水溶液を
１０μｌ分注した後、スライドプレート３を検査用プレ
ートから取り外し、スライドプレート３上にカバーグラ
スを被せ、蛍光顕微鏡で観察したところ、肺ガン患者１
０例は全て陽性を示した。

【００７８】

【発明の効果】本発明に従って、スライドプレ−トと、
それに着脱可能な上方部材とを有する検査用プレートを
使用すると、これまで自動化が困難であった、顕微鏡を
用いた間接蛍光抗体法、間接酵素抗体法、直接蛍光抗体
法、直接酵素抗体法、また免疫組織化学等に於いて、顕
微鏡で観察する工程よりも以前の工程を極めて効率良く
実施することが可能となり、またスライドプレートに抗
原を固定した検査用プレートを極めて効率よく製造する
ことが可能となる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に係わる検査用プレートの一例を示す斜
め上方から見た分解斜視図である。

【図２】図１に示した検査用プレートをセットした組立
斜視図である。

【図３】図１に示した検査用プレートの平面図である。

【図４】図１に示した検査用プレートの底面図である。

【図５】図３におけるＡ−Ａ線に沿った断面図である。

【図６】図３におけるＢ−Ｂ線に沿った断面図である。

【図７】図３におけるＣ−Ｃ線に沿った断面図である。

【図８】上方部材を開蓋した図５に相当する断面図であ
る。

【図９】上方部材を開蓋した図６に相当する断面図であ
る。

【図１０】スライドプレートと上方部材を外した状態で
スライドプレートを下方部材にセットした状態を示す平
面図である。

【図１１】スライドプレートと上方部材を外した状態で
スライドプレートを下方部材にセットした状態を示す平
面図である。

【図１２】本発明に係わる検査用プレートの他の一例を
示す斜め上方から見た分解斜視図である。

【図１３】本発明に係わる検査用プレートの他の一例を
示す斜め上方から見た分解斜視図である。

【図１４】図１３に示した検査用プレートの平面図であ
る。

【図１５】図１３に示した検査用プレートの底面図であ
る。

【図１６】図１４におけるＤ−Ｄ線に沿った断面図であ
る。

【図１７】図１４におけるＥ−Ｅ線に沿った断面図であ
る。

【図１８】スライドプレートを上方部材にセットした状
態を示す底面図である。

【図１９】スライドプレートを上方部材にセットした状
態を示す底面図である。

【符号の説明】

１ 上方部材 ２ スライドプレート ３ スライドプレート ５ 通孔

フロントページの続き (72)発明者 倉井 直樹 東京都八王子市片倉町519−３ (72)発明者 松田 智昌 群馬県館林市大手町７−18，シャトルコー トＢ−203 (72)発明者 川村 雅英 千葉県千葉市稲毛区柏台１−18−206 (72)発明者 黒田 隆 千葉県千葉市根田456，カネソハイツ国分 寺台101 (72)発明者 小野 哲也 千葉県千葉市辰巳台東４−４

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 顕微鏡で観察するスライドプレートと、
   該スライドプレート上に着脱可能な上方部材とを有し、
   該上方部材には複数個の通孔が設けられ、上方部材をス
   ライドプレート上に取り付けた際に上方部材に設けられ
   た複数個の通孔がそれぞれ独立した区画を形成すること
   を特徴とする検査用プレート。
2. 【請求項２】 検査用プレートが下方部材と、下方部材
   上に支持されたスライドプレートと、スライドプレート
   上に着脱可能で、且つ下方部材で支持された上方部材と
   を有する請求項１記載の検査用プレート。
3. 【請求項３】 上方部材の一端が下方部材に軸支され、
   上方部材を開閉させることによって上方部材をスライド
   プレートに着脱可能とした請求項２記載の検査用プレー
   ト。
4. 【請求項４】 上方部材のスライドプレートと接する部
   分がシール材で構成されている請求項１、請求項２又は
   請求項３記載の検査用プレート。
5. 【請求項５】 スライドプレートの抗原若しくは被験サ
   ンプルが固定される部分以外が撥水処理されている請求
   項１、請求項２、請求項３又は請求項４記載の検査用プ
   レート。
6. 【請求項６】 スライドプレートの上に抗原若しくは被
   験サンプルが固定されている請求項１、請求項２、請求
   項３又は請求項４記載の検査用プレート。
7. 【請求項７】 スライドプレートに固定された抗原が抗
   核抗体検査用の動物の細胞又は組織である請求項６記載
   の検査用プレート。
8. 【請求項８】 請求項１、請求項２、請求項３又は請求
   項４の検査用プレートの上方部材の通孔の上部からスラ
   イドプレート上に抗原を付着させ、次いで上方部材を開
   閉してスライドプレートを取り外し、洗浄、風乾を行っ
   た後、抗原が固定されたスライドプレートを再度検査用
   プレートに取り付けることを特徴とする抗原が固定され
   たスライドプレートを有する検査用プレートの製造方
   法。
9. 【請求項９】 請求項８で得られた抗原が固定されたス
   ライドプレートを有する検査用プレートの上方部材の通
   孔内への被験サンプルの分注と洗浄、標識抗体の分注と
   洗浄、染色基質の分注と洗浄及び封入剤の分注を行い、
   次いで検査用プレートから取り外したスライドプレート
   を顕微鏡で観察することを特徴とする検査方法。
10. 【請求項１０】 請求項１、請求項２、請求項３又は請
    求項４の検査用プレートからスライドプレートを取り外
    してスライドプレート上に被験サンプルを付着若しくは
    固定し、該スライドプレートを検査用プレートに取り付
    け、検査用プレートの上方部材の通孔内への標識抗体若
    しくは染色液の分注と洗浄及び必要により染色基質の分
    注と洗浄を行った後、封入剤の分注を行い、次いでスラ
    イドプレートを検査用プレートから取り外して顕微鏡で
    観察することを特徴とする検査方法。