JPH08143471A - アンチトロンビンｉｉｉ及び組織因子凝固系インヒビター含有血栓症治療剤 - Google Patents
アンチトロンビンｉｉｉ及び組織因子凝固系インヒビター含有血栓症治療剤Info
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- JPH08143471A JPH08143471A JP6309555A JP30955594A JPH08143471A JP H08143471 A JPH08143471 A JP H08143471A JP 6309555 A JP6309555 A JP 6309555A JP 30955594 A JP30955594 A JP 30955594A JP H08143471 A JPH08143471 A JP H08143471A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 血栓症治療剤、特に汎発性血管内凝固症候群
（ＤＩＣ）治療剤を提供する。 【構成】 アンチトロンビンIIIと組織因子凝固系イン
ヒビターを有効成分として含有する血栓症、特にＤＩＣ
治療剤。
（ＤＩＣ）治療剤を提供する。 【構成】 アンチトロンビンIIIと組織因子凝固系イン
ヒビターを有効成分として含有する血栓症、特にＤＩＣ
治療剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アンチトロンビンIII
（ＡＴIII）と組織因子凝固系インヒビター（Tissue Fa
ctor Pathway Inhibitor，ＴＦＰＩ）を有効成分として
含有する血栓症の治療剤に関するものである。さらに詳
細には、本発明はＡＴIIIとＴＦＰＩを有効成分として
含有する汎発性血管内凝固症候群（Disseminated Intra
vascular Coagulation，ＤＩＣ）の治療剤である。
（ＡＴIII）と組織因子凝固系インヒビター（Tissue Fa
ctor Pathway Inhibitor，ＴＦＰＩ）を有効成分として
含有する血栓症の治療剤に関するものである。さらに詳
細には、本発明はＡＴIIIとＴＦＰＩを有効成分として
含有する汎発性血管内凝固症候群（Disseminated Intra
vascular Coagulation，ＤＩＣ）の治療剤である。
【０００２】
【発明の背景及び従来技術】血液凝固は損傷した血管で
の止血や、細菌並びにウイルス等の感染進展の防御等の
様々な役割を果たす重要な生体防御機構の一つである。
そのため、血液凝固反応に関する研究は古くから活発に
行なわれ、それに伴い血液凝固反応の詳細な機序も明ら
かにされてきた。その結果、血液凝固反応は内因系凝固
系と外因系凝固系の２経路の開始反応を中心としたカス
ケード反応により構成され、最終的にフィブリンネット
ワークを形成する事によって終了することが明らかにな
った。さらに、近年の血液凝固開始機構に関する研究か
ら、組織因子（Tissue Factor：ＴＦ)と活性型第VII因
子複合体（ＴＦ−Ｆ.VIIa)により第Ｘ因子及び第IX因子
が活性化される反応、いわゆる外因系凝固反応が血液凝
固の開始反応として非常に重要である事が明らかにされ
ている［Davie, E.V. et al, Biochem., 30, p10363(19
91)］。
の止血や、細菌並びにウイルス等の感染進展の防御等の
様々な役割を果たす重要な生体防御機構の一つである。
そのため、血液凝固反応に関する研究は古くから活発に
行なわれ、それに伴い血液凝固反応の詳細な機序も明ら
かにされてきた。その結果、血液凝固反応は内因系凝固
系と外因系凝固系の２経路の開始反応を中心としたカス
ケード反応により構成され、最終的にフィブリンネット
ワークを形成する事によって終了することが明らかにな
った。さらに、近年の血液凝固開始機構に関する研究か
ら、組織因子（Tissue Factor：ＴＦ)と活性型第VII因
子複合体（ＴＦ−Ｆ.VIIa)により第Ｘ因子及び第IX因子
が活性化される反応、いわゆる外因系凝固反応が血液凝
固の開始反応として非常に重要である事が明らかにされ
ている［Davie, E.V. et al, Biochem., 30, p10363(19
91)］。
【０００３】しかし、一度この血液凝固反応に異常が生
じると、血友病に見られる出血症や心筋梗塞等の血栓症
が発症する事も良く知られている。特に、血栓症は心筋
梗塞や脳梗塞等に代表されるように、致死率も非常に高
く、現在最も重篤な疾患の一つに数えられている。この
ような重篤な血栓症を防止するための療法としては、血
液凝固の亢進状態を適切に防御する抗凝固療法及び抗血
小板療法と、形成される血栓を効率良く溶解させる線溶
療法がある。現在、抗凝固療法としては、生体に存在す
る凝固阻害因子や制御因子を中心として、合成された凝
固因子活性阻害剤や凝固因子産生阻害剤（ワーファリ
ン）等が臨床応用されている。線溶療法としては、ウロ
キナーゼやｔＰＡ等のプラスミノゲンアクチベーターが
臨床応用されている。
じると、血友病に見られる出血症や心筋梗塞等の血栓症
が発症する事も良く知られている。特に、血栓症は心筋
梗塞や脳梗塞等に代表されるように、致死率も非常に高
く、現在最も重篤な疾患の一つに数えられている。この
ような重篤な血栓症を防止するための療法としては、血
液凝固の亢進状態を適切に防御する抗凝固療法及び抗血
小板療法と、形成される血栓を効率良く溶解させる線溶
療法がある。現在、抗凝固療法としては、生体に存在す
る凝固阻害因子や制御因子を中心として、合成された凝
固因子活性阻害剤や凝固因子産生阻害剤（ワーファリ
ン）等が臨床応用されている。線溶療法としては、ウロ
キナーゼやｔＰＡ等のプラスミノゲンアクチベーターが
臨床応用されている。
【０００４】また、血栓症の中でも、特に汎発性血管内
凝固症候群（ＤＩＣ）は癌や白血病、感染症等の多彩な
基礎疾患に伴って発症し、診断や治療法が多様であるた
めに、臨床各領域で注目されている疾患の１つである。
そして、その併発によって基礎疾患の病態は大きく修飾
され、生命の予後をも左右する可能性があるので、迅速
かつ的確な診断と治療が必要とされている。一般的にＤ
ＩＣでは、何らかの機序により血管内で血液凝固が亢進
し、その結果生じた大量のトロンビンにより多数の微小
血栓が複数の臓器に形成され、循環障害に基づく多様な
臓器症状と、血小板や凝固因子の消費による消費性凝固
障害及び二次性に亢進した線溶に基づく著明な出血症状
とが同時に見られる。
凝固症候群（ＤＩＣ）は癌や白血病、感染症等の多彩な
基礎疾患に伴って発症し、診断や治療法が多様であるた
めに、臨床各領域で注目されている疾患の１つである。
そして、その併発によって基礎疾患の病態は大きく修飾
され、生命の予後をも左右する可能性があるので、迅速
かつ的確な診断と治療が必要とされている。一般的にＤ
ＩＣでは、何らかの機序により血管内で血液凝固が亢進
し、その結果生じた大量のトロンビンにより多数の微小
血栓が複数の臓器に形成され、循環障害に基づく多様な
臓器症状と、血小板や凝固因子の消費による消費性凝固
障害及び二次性に亢進した線溶に基づく著明な出血症状
とが同時に見られる。
【０００５】ＤＩＣ治療の原則は、基礎疾患の治療とと
もに、血液凝固亢進状態を是正することにある。しか
し、その治療が必ずしも容易でない場合、出血や臓器不
全による合併症を防止するために、ヘパリンまたは合成
プロテアーゼ阻害剤等による抗血栓療法が用いられる。
また、必要に応じてＡＴIII製剤等による補充療法が行
なわれる。さらに、近年トロンボモジュリン（ＴＭ）や
活性型プロテインＣ（ＡＰＣ）［Okajima, K. et al.,
Am.J.Haematol., 33, p277(1990)］による療法も臨床検
討されはじめている。
もに、血液凝固亢進状態を是正することにある。しか
し、その治療が必ずしも容易でない場合、出血や臓器不
全による合併症を防止するために、ヘパリンまたは合成
プロテアーゼ阻害剤等による抗血栓療法が用いられる。
また、必要に応じてＡＴIII製剤等による補充療法が行
なわれる。さらに、近年トロンボモジュリン（ＴＭ）や
活性型プロテインＣ（ＡＰＣ）［Okajima, K. et al.,
Am.J.Haematol., 33, p277(1990)］による療法も臨床検
討されはじめている。
【０００６】ＡＴIIIは分子量59,000の糖蛋白質で、ト
ロンビンをはじめとする血液凝固反応に関与するセリン
プロテアーゼに対する阻害因子で、その活性はヘパリン
により著しく促進される［Rosenberg, R.D. et al., J.
Biol.Chem., 248, p6490 (1973)］。ＤＩＣでは、ＡＴI
IIの血管外への露出や消費性等の理由により血液中のＡ
ＴIIIレベルが低下するが、ヘパリン療法を行なう際に
は、ヘパリンの効果を発揮するために、ＡＴIIIの血中
レベルを70％以上に保つ事が必要とされている。よっ
て、ＡＴIII低下に伴うＤＩＣにおいて、ＡＴIIIの補充
療法が行なわれている［Schipper, H.G. et al., Lance
t II, p754(1978)、小林紀夫他、臨床医薬、1, p773(19
85)］。
ロンビンをはじめとする血液凝固反応に関与するセリン
プロテアーゼに対する阻害因子で、その活性はヘパリン
により著しく促進される［Rosenberg, R.D. et al., J.
Biol.Chem., 248, p6490 (1973)］。ＤＩＣでは、ＡＴI
IIの血管外への露出や消費性等の理由により血液中のＡ
ＴIIIレベルが低下するが、ヘパリン療法を行なう際に
は、ヘパリンの効果を発揮するために、ＡＴIIIの血中
レベルを70％以上に保つ事が必要とされている。よっ
て、ＡＴIII低下に伴うＤＩＣにおいて、ＡＴIIIの補充
療法が行なわれている［Schipper, H.G. et al., Lance
t II, p754(1978)、小林紀夫他、臨床医薬、1, p773(19
85)］。
【０００７】さらに、最近の外因系凝固反応に関する一
連の研究を通じて、ＴＦがさまざまな病態の凝固亢進状
態に関与している事が推定されている。それは、血管損
傷やサイトカイン等の刺激により、血管内皮細胞、平滑
筋細胞や単球／マクロファージ等で過剰に発現される
と、容易に凝固亢進状態になることが明らかにされてい
るからである。よって、このＴＦ活性を阻害する事はＤ
ＩＣ等の血栓症の早期治療を可能にすると考えられてい
る。
連の研究を通じて、ＴＦがさまざまな病態の凝固亢進状
態に関与している事が推定されている。それは、血管損
傷やサイトカイン等の刺激により、血管内皮細胞、平滑
筋細胞や単球／マクロファージ等で過剰に発現される
と、容易に凝固亢進状態になることが明らかにされてい
るからである。よって、このＴＦ活性を阻害する事はＤ
ＩＣ等の血栓症の早期治療を可能にすると考えられてい
る。
【０００８】ＴＦＰＩは分子量42,000の糖蛋白質で、ア
プロチニン等と同じクニッツ型プロテアーゼインヒビタ
ーに属し、活性型Ｘ因子を介してＴＦ−Ｆ.VIIaに結合
して、その活性を抑制すると考えられている。ＴＦＰＩ
は、蛋白構造的には主にクニッツ１、クニッツ２、クニ
ッツ３の３つの領域から構成されており、クニッツ１が
活性型第VII因子との結合部位、クニッツ２が活性型第
Ｘ因子との結合部位である事が明らかとなっている［Gi
rard,T.J. et al., Nature, 338, p518(1989)］。生体
中のＴＦＰＩは主に生体中で血管内皮細胞で合成された
後、内皮細胞のヘパリン様物質に結合して、内皮細胞の
抗血栓作用に重要な機能を果たしている事が推定されて
いる［Novotny, W.F. et al., Blood, 78, p394(199
1)；Sandset, P.M. et al., Proc.Natl.Acad.Sci., 88,
p708(1991)］。
プロチニン等と同じクニッツ型プロテアーゼインヒビタ
ーに属し、活性型Ｘ因子を介してＴＦ−Ｆ.VIIaに結合
して、その活性を抑制すると考えられている。ＴＦＰＩ
は、蛋白構造的には主にクニッツ１、クニッツ２、クニ
ッツ３の３つの領域から構成されており、クニッツ１が
活性型第VII因子との結合部位、クニッツ２が活性型第
Ｘ因子との結合部位である事が明らかとなっている［Gi
rard,T.J. et al., Nature, 338, p518(1989)］。生体
中のＴＦＰＩは主に生体中で血管内皮細胞で合成された
後、内皮細胞のヘパリン様物質に結合して、内皮細胞の
抗血栓作用に重要な機能を果たしている事が推定されて
いる［Novotny, W.F. et al., Blood, 78, p394(199
1)；Sandset, P.M. et al., Proc.Natl.Acad.Sci., 88,
p708(1991)］。
【０００９】実際に、動物モデルを用いた解析結果から
ＴＦＰＩは、抗敗血症作用［Creasey, A.A. et al., J.
Clin.Invest., 91, p2850(1993)］、抗ＤＩＣ作用［Ka
thleen, C. et al., Blood, 76, p1538(1990)］等を有
することが報告されている。さらに、ＴＦＰＩはＡＴII
Iと同様にヘパリンにより活性が増強される事から、ヘ
パリンとの併用による相乗作用も期待されている［Wun,
T.C., Blood, 79, p430(1992)］。このように、ＴＦＰ
Ｉは血液凝固の開始因子であるＴＦ−Ｆ.VIIa活性を直
接阻害する事から、ＤＩＣ等の凝固亢進状態を早期にか
つ効率的に抑制する新規治療薬として非常に期待されて
いる。
ＴＦＰＩは、抗敗血症作用［Creasey, A.A. et al., J.
Clin.Invest., 91, p2850(1993)］、抗ＤＩＣ作用［Ka
thleen, C. et al., Blood, 76, p1538(1990)］等を有
することが報告されている。さらに、ＴＦＰＩはＡＴII
Iと同様にヘパリンにより活性が増強される事から、ヘ
パリンとの併用による相乗作用も期待されている［Wun,
T.C., Blood, 79, p430(1992)］。このように、ＴＦＰ
Ｉは血液凝固の開始因子であるＴＦ−Ｆ.VIIa活性を直
接阻害する事から、ＤＩＣ等の凝固亢進状態を早期にか
つ効率的に抑制する新規治療薬として非常に期待されて
いる。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】現在、ＤＩＣの治療に
当たっては上述したように、ヘパリンやＡＴIII、合成
プロテアーゼインヒビター等の薬剤が臨床応用されてい
る。しかし、現状の薬剤だけではその有効率も約60〜70
％と十分な治療が行なえているとは言い難い状況にあ
る。その原因としては、ＤＩＣを惹起する基礎疾患が
多種多様である事から、従来の薬剤による画一的治療法
では十分な治療が行なえない、従来の薬剤は凝固反応
の結果生じたプロテアーゼを阻害するために、凝固反応
が起こる前の早期段階での治療が行なえない等が考えら
れる。
当たっては上述したように、ヘパリンやＡＴIII、合成
プロテアーゼインヒビター等の薬剤が臨床応用されてい
る。しかし、現状の薬剤だけではその有効率も約60〜70
％と十分な治療が行なえているとは言い難い状況にあ
る。その原因としては、ＤＩＣを惹起する基礎疾患が
多種多様である事から、従来の薬剤による画一的治療法
では十分な治療が行なえない、従来の薬剤は凝固反応
の結果生じたプロテアーゼを阻害するために、凝固反応
が起こる前の早期段階での治療が行なえない等が考えら
れる。
【００１１】
【課題を解決するための手段】このような状況におい
て、本発明者らはＤＩＣ等の血栓症に対して十分な治療
効果をもつ早期治療薬剤を開発すべく鋭意研究を重ねた
結果、ＡＴIII及びＴＦＰＩを有効成分とする製剤が、
それぞれの単独製剤よりもはるかに有効であることを見
いだし、本発明を完成するに至った。すなわち本発明
は、有効成分として実質的にＡＴIIIとＴＦＰＩを含有
する血栓症、好ましくはＤＩＣの治療剤である。
て、本発明者らはＤＩＣ等の血栓症に対して十分な治療
効果をもつ早期治療薬剤を開発すべく鋭意研究を重ねた
結果、ＡＴIII及びＴＦＰＩを有効成分とする製剤が、
それぞれの単独製剤よりもはるかに有効であることを見
いだし、本発明を完成するに至った。すなわち本発明
は、有効成分として実質的にＡＴIIIとＴＦＰＩを含有
する血栓症、好ましくはＤＩＣの治療剤である。
【００１２】本発明におけるＡＴIII及びＴＦＰＩは、
ヒト、その他の哺乳動物の血液から得られるＡＴIII及
びＴＦＰＩ、または遺伝子組換え技術によって製造され
るヒト、その他の哺乳動物由来のＡＴIII及びＴＦＰＩ
を含むものをいう。さらに、本発明のＡＴIII及びＴＦ
ＰＩとしては、これらの中でもヒト血液由来又は遺伝子
組換え技術によって製造されるヒトＡＴIIIとヒトＴＦ
ＰＩをあげる事ができる。なお、本発明の目的とするＤ
ＩＣ等の血栓症の治療剤としての効果が得られる限り、
血液由来及び遺伝子組換え技術によって製造されるＡＴ
IIIやＴＦＰＩと生理学的に同等の活性を有するＡＴIII
やＴＦＰＩの全アミノ酸配列の一部が欠損、置換、挿
入、追加等のなされた誘導体も本発明に含まれる。
ヒト、その他の哺乳動物の血液から得られるＡＴIII及
びＴＦＰＩ、または遺伝子組換え技術によって製造され
るヒト、その他の哺乳動物由来のＡＴIII及びＴＦＰＩ
を含むものをいう。さらに、本発明のＡＴIII及びＴＦ
ＰＩとしては、これらの中でもヒト血液由来又は遺伝子
組換え技術によって製造されるヒトＡＴIIIとヒトＴＦ
ＰＩをあげる事ができる。なお、本発明の目的とするＤ
ＩＣ等の血栓症の治療剤としての効果が得られる限り、
血液由来及び遺伝子組換え技術によって製造されるＡＴ
IIIやＴＦＰＩと生理学的に同等の活性を有するＡＴIII
やＴＦＰＩの全アミノ酸配列の一部が欠損、置換、挿
入、追加等のなされた誘導体も本発明に含まれる。
【００１３】本発明におけるＡＴIII及びＴＦＰＩの製
造方法は特に限定されないが、ヒト血液より分離される
もの、あるいは遺伝子組換え技術によって製造されるも
のが含まれる。特に、血液由来のＴＦＰＩについては血
液中の含量が非常に少なく（約100ng/ml)、殆どのＴＦ
ＰＩがリポ蛋白質と結合している事から、比活性の高い
遊離型のＴＦＰＩを大量に製造する事は非常に困難であ
る。よって、遺伝子組換え技術によって組換え型ＴＦＰ
Ｉ（ｒＴＦＰＩ）を調製する事が好ましいと考えられ
る。そのｒＴＦＰＩの製法としては、特願平5-188746号
（亀井ら）や特願平6-239532号（神窪ら）に記載された
以下の方法がある。
造方法は特に限定されないが、ヒト血液より分離される
もの、あるいは遺伝子組換え技術によって製造されるも
のが含まれる。特に、血液由来のＴＦＰＩについては血
液中の含量が非常に少なく（約100ng/ml)、殆どのＴＦ
ＰＩがリポ蛋白質と結合している事から、比活性の高い
遊離型のＴＦＰＩを大量に製造する事は非常に困難であ
る。よって、遺伝子組換え技術によって組換え型ＴＦＰ
Ｉ（ｒＴＦＰＩ）を調製する事が好ましいと考えられ
る。そのｒＴＦＰＩの製法としては、特願平5-188746号
（亀井ら）や特願平6-239532号（神窪ら）に記載された
以下の方法がある。
【００１４】例えば、ヒトＴＦＰＩのｃＤＮＡを導入し
たＣＨＯ細胞の培養上清から、(１)Pedersen等の方法
［J.Biol.Chem.,265,p16786(1990)］に従って、ヘパリ
ンゲルによるアフィニティークロマトグラフィーを行っ
た後、MonoQ HR5/5カラム(Pharmacia-LKB)とMonoS HR5/
5カラム(Pharmacia-LKB)によるイオン交換クロマトグラ
フィーで精製する方法、または、(２)抗ＴＦＰＩ抗体
（好ましくはモノクローナル抗体)を結合させたゲルに
よるアフィニティークロマトグラフィーを行なった後、
ヘパリンゲル(Pharmacia-LKB)によるアフィニティーク
ロマトグラフィーで精製する方法である。なお、上記の
方法で得られるｒＴＦＰＩは、アミノ酸配列分析やSDS-
PAGE等の分析より、殆どが分解を受けていない比活性の
高いFull-length型のＴＦＰＩである。
たＣＨＯ細胞の培養上清から、(１)Pedersen等の方法
［J.Biol.Chem.,265,p16786(1990)］に従って、ヘパリ
ンゲルによるアフィニティークロマトグラフィーを行っ
た後、MonoQ HR5/5カラム(Pharmacia-LKB)とMonoS HR5/
5カラム(Pharmacia-LKB)によるイオン交換クロマトグラ
フィーで精製する方法、または、(２)抗ＴＦＰＩ抗体
（好ましくはモノクローナル抗体)を結合させたゲルに
よるアフィニティークロマトグラフィーを行なった後、
ヘパリンゲル(Pharmacia-LKB)によるアフィニティーク
ロマトグラフィーで精製する方法である。なお、上記の
方法で得られるｒＴＦＰＩは、アミノ酸配列分析やSDS-
PAGE等の分析より、殆どが分解を受けていない比活性の
高いFull-length型のＴＦＰＩである。
【００１５】また、血液から調製する方法としては、
(１)Novotnyらの報告［J.Biol.Chem.,264,p18832(198
9)］に従って、Phenyl-Sepharose(Pharmacia-LKB)、Q-S
epharose(Pharmacia-LKB)と活性型第Ｘ因子によるアフ
ィニティークロマトグラフィーを併用して調製する方
法、(２)抗ＴＦＰＩ抗体ゲルによるアフィニティークロ
マトグラフィーとヘパリンゲルによるアフィニティーク
ロマトグラフィーを併用する方法がある。
(１)Novotnyらの報告［J.Biol.Chem.,264,p18832(198
9)］に従って、Phenyl-Sepharose(Pharmacia-LKB)、Q-S
epharose(Pharmacia-LKB)と活性型第Ｘ因子によるアフ
ィニティークロマトグラフィーを併用して調製する方
法、(２)抗ＴＦＰＩ抗体ゲルによるアフィニティークロ
マトグラフィーとヘパリンゲルによるアフィニティーク
ロマトグラフィーを併用する方法がある。
【００１６】一方、ＡＴIIIを調製する方法としては、
血液及び組換え細胞の培養上清からヘパリンゲルを用い
たアフィニティークロマトグラフィー等の公知の確立さ
れた方法［Miller-Anderson et al., Thromb. Res., 5,
p439(1974)］に従って調製する事が可能である。
血液及び組換え細胞の培養上清からヘパリンゲルを用い
たアフィニティークロマトグラフィー等の公知の確立さ
れた方法［Miller-Anderson et al., Thromb. Res., 5,
p439(1974)］に従って調製する事が可能である。
【００１７】上述の方法で調製されたＡＴIIIとＴＦＰ
Ｉの活性を最大限に維持するためには、本発明のＡＴII
IとＴＦＰＩが新鮮であるか、凍結保存しておく方が好
ましい。あるいは、好適な安定化剤と共に凍結乾燥して
保存する事も可能である。本発明では、有効成分として
のＡＴIIIとＴＦＰＩとを公知の適当な賦形剤（人血清
アルブミン、マンニトール等）を組み合わせ、公知の方
法で非経口投与剤、好ましくは静脈投与用製剤とする事
により本発明の血栓症の治療剤とする事ができる。
Ｉの活性を最大限に維持するためには、本発明のＡＴII
IとＴＦＰＩが新鮮であるか、凍結保存しておく方が好
ましい。あるいは、好適な安定化剤と共に凍結乾燥して
保存する事も可能である。本発明では、有効成分として
のＡＴIIIとＴＦＰＩとを公知の適当な賦形剤（人血清
アルブミン、マンニトール等）を組み合わせ、公知の方
法で非経口投与剤、好ましくは静脈投与用製剤とする事
により本発明の血栓症の治療剤とする事ができる。
【００１８】本発明により得られるＡＴIII及びＴＦＰ
Ｉ含有製剤は、ＤＩＣの動物モデルを用いた実験によ
り、各々単独で使用した場合と比較して、極めて有効な
治療効果を有することが確認された。このことから、Ｄ
ＩＣ等の血栓症の治療において、従来のＡＴIII補充療
法に加えて、ＴＦＰＩを同時に併用することが有効であ
ることが明らかとなった。また、本発明のＡＴIII及び
ＴＦＰＩ含有製剤は、従来抗血栓療法として使用されて
いる製剤、例えばヘパリンや合成プロテアーゼ等との併
用投与によりさらに大きな血栓治療効果が期待される。
Ｉ含有製剤は、ＤＩＣの動物モデルを用いた実験によ
り、各々単独で使用した場合と比較して、極めて有効な
治療効果を有することが確認された。このことから、Ｄ
ＩＣ等の血栓症の治療において、従来のＡＴIII補充療
法に加えて、ＴＦＰＩを同時に併用することが有効であ
ることが明らかとなった。また、本発明のＡＴIII及び
ＴＦＰＩ含有製剤は、従来抗血栓療法として使用されて
いる製剤、例えばヘパリンや合成プロテアーゼ等との併
用投与によりさらに大きな血栓治療効果が期待される。
【００１９】以下、本発明の理解を深めるために実施例
に添って説明するが、本発明はこれらの実施例に必ずし
も限定されるものではない。
に添って説明するが、本発明はこれらの実施例に必ずし
も限定されるものではない。
【００２０】
【実施例】ラットで作製したＤＩＣモデルにＡＴIIIと
ｒＴＦＰＩを投与して、凝血学的パラメーターと臓器障
害を指標にして、その治療効果を確認した。
ｒＴＦＰＩを投与して、凝血学的パラメーターと臓器障
害を指標にして、その治療効果を確認した。
【００２１】《参考例１》 ＡＴIII及びＴＦＰＩの調
製 ＡＴIIIは、ヘパリンゲルを用いたアフィニティークロ
マトグラフィーを用いてヒト血漿から精製して得たもの
を使用した［Miller-Anderson et al., Thromb. Res.,
5, p439(1974)］。ヒト組換えＴＦＰＩ（ｒＴＦＰＩ）
は、ヒトＴＦＰＩのｃＤＮＡを導入したＣＨＯ細胞の培
養上清から、Pedersenらの方法［J.Biol.Chem., 265, p
16786(1990)］に従い、ヘパリンゲル（Pharmacia-LKB）
によるアフィニティークロマトグラフィーを行った後、
MonoQ HR5/5カラム（Pharmacia-LKB）とMonoS HR5/5カ
ラム（Pharmacia-LKB）によるイオン交換クロマトグラ
フィーを用いて精製することにより得られた。
製 ＡＴIIIは、ヘパリンゲルを用いたアフィニティークロ
マトグラフィーを用いてヒト血漿から精製して得たもの
を使用した［Miller-Anderson et al., Thromb. Res.,
5, p439(1974)］。ヒト組換えＴＦＰＩ（ｒＴＦＰＩ）
は、ヒトＴＦＰＩのｃＤＮＡを導入したＣＨＯ細胞の培
養上清から、Pedersenらの方法［J.Biol.Chem., 265, p
16786(1990)］に従い、ヘパリンゲル（Pharmacia-LKB）
によるアフィニティークロマトグラフィーを行った後、
MonoQ HR5/5カラム（Pharmacia-LKB）とMonoS HR5/5カ
ラム（Pharmacia-LKB）によるイオン交換クロマトグラ
フィーを用いて精製することにより得られた。
【００２２】《実施例１》 ＤＩＣモデル動物の作製 ＤＩＣモデル動物は、山崎らの方法［日本血栓止血学会
誌、4、p325(1993)］に従い、200〜250gのWistar系ラッ
トにリポポリサッカライド（ＬＰＳ；Escherichia coli
serotype 0111:B4 由来 シグマ社）を50mg/kgのドーズ
で大腿静脈からボーラス投与して作製した。ＡＴIIIと
ｒＴＦＰＩの薬剤はＬＰＳを投与した直後に大腿静脈か
らボーラス投与した。
誌、4、p325(1993)］に従い、200〜250gのWistar系ラッ
トにリポポリサッカライド（ＬＰＳ；Escherichia coli
serotype 0111:B4 由来 シグマ社）を50mg/kgのドーズ
で大腿静脈からボーラス投与して作製した。ＡＴIIIと
ｒＴＦＰＩの薬剤はＬＰＳを投与した直後に大腿静脈か
らボーラス投与した。
【００２３】《実施例２》 ＡＴIII及びｒＴＦＰＩの
治療効果 上記のモデル動物を以下の５群に分類し、ＡＴIII及び
ｒＴＦＰＩの治療効果を検討した。なお、各群ラット５
匹を用いた。 第Ｉ群 ；ＬＰＳ非投与群． 第II群 ；ＬＰＳ（50mg/kg）投与群． 第III群；ＬＰＳ（50mg/kg）投与直後、ＡＴIII(250U/k
g)を投与． 第IV群 ；ＬＰＳ（50mg/kg）投与直後、ｒＴＦＰＩ(１m
g/kg)を投与． 第Ｖ群 ；ＬＰＳ（50mg/kg）投与直後、ＡＴIII( 250U/
kg)及びｒＴＦＰＩ(１mg/kg)を投与．
治療効果 上記のモデル動物を以下の５群に分類し、ＡＴIII及び
ｒＴＦＰＩの治療効果を検討した。なお、各群ラット５
匹を用いた。 第Ｉ群 ；ＬＰＳ非投与群． 第II群 ；ＬＰＳ（50mg/kg）投与群． 第III群；ＬＰＳ（50mg/kg）投与直後、ＡＴIII(250U/k
g)を投与． 第IV群 ；ＬＰＳ（50mg/kg）投与直後、ｒＴＦＰＩ(１m
g/kg)を投与． 第Ｖ群 ；ＬＰＳ（50mg/kg）投与直後、ＡＴIII( 250U/
kg)及びｒＴＦＰＩ(１mg/kg)を投与．
【００２４】ＬＰＳ投与後、腹部大静脈から採血して、
凝血パラメーターや臓器障害の酵素マーカーを測定し
た。ＤＩＣの診断基準の項目のうち、凝血パラメーター
として、フィブリノゲン量、第VIII因子活性量を測定し
た。また、臓器障害のマーカーとして、ＧＰＴを測定し
た。なお、いずれの測定項目も、ヒト由来の標準品もし
くは正常ヒト血漿をもとにしてその濃度を算出した。
凝血パラメーターや臓器障害の酵素マーカーを測定し
た。ＤＩＣの診断基準の項目のうち、凝血パラメーター
として、フィブリノゲン量、第VIII因子活性量を測定し
た。また、臓器障害のマーカーとして、ＧＰＴを測定し
た。なお、いずれの測定項目も、ヒト由来の標準品もし
くは正常ヒト血漿をもとにしてその濃度を算出した。
【００２５】ＬＰＳと薬剤投与後４時間の凝血学的パラ
メーターを表１に示した。第II群において、ＬＰＳ投与
後、ＤＩＣの特異的症状であるフィブリノゲン量及び第
VIII因子活性量の減少が観察されたことより、ＬＰＳ投
与によりＤＩＣ症状を示す動物モデルが作製できること
がわかる。
メーターを表１に示した。第II群において、ＬＰＳ投与
後、ＤＩＣの特異的症状であるフィブリノゲン量及び第
VIII因子活性量の減少が観察されたことより、ＬＰＳ投
与によりＤＩＣ症状を示す動物モデルが作製できること
がわかる。
【００２６】ＬＰＳ投与直後、ＡＴIII（第III群）もし
くはｒＴＦＰＩ（第IV群）を単独で投与した群におい
て、ＤＩＣにおける凝血パラメーターの改善効果が確認
されたが、その効果は十分とは言い難いものであった。
これに対して、両者を併用投与した群（第Ｖ群）におい
ては、さらにＤＩＣによるフィブリノゲンと第VIII因子
の消費が抑制され、その改善効果は単独投与と比較して
非常に顕著であることが確認された。また、スチューデ
ントｔ検定による統計解析を行なった結果、本試験結果
は、危険率が0.1％以下で有意差が確認された。
くはｒＴＦＰＩ（第IV群）を単独で投与した群におい
て、ＤＩＣにおける凝血パラメーターの改善効果が確認
されたが、その効果は十分とは言い難いものであった。
これに対して、両者を併用投与した群（第Ｖ群）におい
ては、さらにＤＩＣによるフィブリノゲンと第VIII因子
の消費が抑制され、その改善効果は単独投与と比較して
非常に顕著であることが確認された。また、スチューデ
ントｔ検定による統計解析を行なった結果、本試験結果
は、危険率が0.1％以下で有意差が確認された。
【００２７】
【表１】 *：P ＜0.001 vs 第II群(LPS投与群)
【００２８】また、ＤＩＣにおいては、臓器障害、特に
肝臓障害が高頻度で起こることが知られている。そこ
で、ＬＰＳと薬剤投与後４時間の血液中の臓器障害のマ
ーカーとしてＧＰＴ値を測定し、その結果を表２に示し
た。表２から明らかなように、ＡＴIIIとＴＦＰＩの併
用群（第Ｖ群）は、単独投与群（第III群及び第IV群）
と比較して、ＧＰＴ値が低く、肝臓障害の程度が軽度で
あることから、併用投与がＤＩＣにより惹起される臓器
障害の軽減に有効であることが確認された。また、スチ
ューデントｔ検定による統計解析を行なった結果、本試
験結果は、危険率が２％以下で有意差が確認された。
肝臓障害が高頻度で起こることが知られている。そこ
で、ＬＰＳと薬剤投与後４時間の血液中の臓器障害のマ
ーカーとしてＧＰＴ値を測定し、その結果を表２に示し
た。表２から明らかなように、ＡＴIIIとＴＦＰＩの併
用群（第Ｖ群）は、単独投与群（第III群及び第IV群）
と比較して、ＧＰＴ値が低く、肝臓障害の程度が軽度で
あることから、併用投与がＤＩＣにより惹起される臓器
障害の軽減に有効であることが確認された。また、スチ
ューデントｔ検定による統計解析を行なった結果、本試
験結果は、危険率が２％以下で有意差が確認された。
【００２９】
【表２】 *：P ＜ 0.02 vs 第II群(LPS投与群)
【００３０】今回、本実施例において、実際に臨床で使
用される量に対して過剰のＡＴIIIを投与しており、さ
らに過剰に投与しても効果は期待できないと考えられ
る。このように、過剰な濃度のＡＴIIIによる補充療法
で十分な効果が果たせないＤＩＣ治療において、ＴＦＰ
Ｉを併用することで、より十分な治療効果が得られるこ
とが明らかとなった。
用される量に対して過剰のＡＴIIIを投与しており、さ
らに過剰に投与しても効果は期待できないと考えられ
る。このように、過剰な濃度のＡＴIIIによる補充療法
で十分な効果が果たせないＤＩＣ治療において、ＴＦＰ
Ｉを併用することで、より十分な治療効果が得られるこ
とが明らかとなった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 宮本 誠二 熊本県菊池郡西合志町須屋2066−８ (72)発明者 船津 昭信 熊本県熊本市清水町麻生田1775−７ (72)発明者 中村 伸 愛知県犬山市塔野地大畔178−44 (72)発明者 加藤 久雄 大阪府吹田市青山３丁目50 Ｄ12−110
Claims (6)
- 【請求項１】 アンチトロンビンIII（ＡＴIII）と組織
因子凝固系インヒビター（ＴＦＰＩ）を有効成分として
含有する血栓症治療剤。 - 【請求項２】 血栓症が、汎発性血管内凝固症候群であ
る請求項１記載の治療剤 - 【請求項３】 ＡＴIIIがヒト血液由来のＡＴIIIである
請求項１または請求項２記載の治療剤。 - 【請求項４】 ＡＴIIIが遺伝子組換え技術によって製
造されるＡＴIIIである請求項１または請求項２記載の
治療剤。 - 【請求項５】 ＴＦＰＩがヒト血液由来のＴＦＰＩであ
る請求項１または請求項２記載の治療剤。 - 【請求項６】 ＴＦＰＩが遺伝子組換え技術によって製
造されるＴＦＰＩである請求項１または請求項２に記載
の治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30955594A JP3761914B2 (ja) | 1994-11-17 | 1994-11-17 | アンチトロンビンｉｉｉ及び組織因子凝固系インヒビター含有血栓症治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30955594A JP3761914B2 (ja) | 1994-11-17 | 1994-11-17 | アンチトロンビンｉｉｉ及び組織因子凝固系インヒビター含有血栓症治療剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08143471A true JPH08143471A (ja) | 1996-06-04 |
| JP3761914B2 JP3761914B2 (ja) | 2006-03-29 |
Family
ID=17994430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30955594A Expired - Fee Related JP3761914B2 (ja) | 1994-11-17 | 1994-11-17 | アンチトロンビンｉｉｉ及び組織因子凝固系インヒビター含有血栓症治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3761914B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005506345A (ja) * | 2001-10-15 | 2005-03-03 | カイロン コーポレイション | 組織因子経路インヒビター（ｔｆｐｉ）の投与による重症な肺炎の処置 |
-
1994
- 1994-11-17 JP JP30955594A patent/JP3761914B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005506345A (ja) * | 2001-10-15 | 2005-03-03 | カイロン コーポレイション | 組織因子経路インヒビター（ｔｆｐｉ）の投与による重症な肺炎の処置 |
| US7674769B2 (en) * | 2001-10-15 | 2010-03-09 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Treatment of severe pneumonia by administration of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3761914B2 (ja) | 2006-03-29 |
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