JPH08176124A

JPH08176124A - 新規な抗腫瘍性化合物

Info

Publication number: JPH08176124A
Application number: JP7147624A
Authority: JP
Inventors: Dolores G Gravalos; ジー．グラバロスドロレス; Yoel Kashman; カシュマンヨエル; Amira Rudi; ルディアミラ; La Fuente Jesus Angel De; アンゲルデラフェンテジーザス
Original assignee: Pharmamar SA
Current assignee: Pharmamar SA
Priority date: 1994-06-14
Filing date: 1995-06-14
Publication date: 1996-07-09
Also published as: EP0687673A1; CA2151635A1; GB9411841D0

Abstract

(57)【要約】【目的】新規な抗腫瘍性化合物を提供すること。【構成】式（Ｉ）：【化１】［式中、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰は同一
であるか又は異なり、それぞれ水素原子、炭素数１〜６
のアルキル基、ヒドロキシ基又はアシルオキシ基Ｒ−
（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−は炭素数１
〜２６のアシル基である）を表す；但し、Ｒ²、Ｒ³、
Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の少なくとも１つはアシルオ
キシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−
は炭素数１〜２６のアシル基である）であり、さらにＲ
²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の少なくとも１つ
はアシルオキシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−
（Ｃ＝Ｏ）−は炭素数１０〜２６のアシル基である）で
ある］で示される、ベンガゾールＡのテトラアセテート
及びベンガゾールＢのテトラアセテートを除いた化合
物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な抗腫瘍性化合物に
関する。特に、本発明はジャスピススポンジ(Jaspis
sponge) から単離される化合物の誘導体化によって得ら
れる抗腫瘍性化合物及び関連する抗腫瘍性化合物に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】海洋微生物は、抗腫瘍剤としての可能な
用途を有する化合物を含めて、生物学的に活性な分子の
有望な供給源を提供する。クルース(P.Crews) 等はＪ．
Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９８８，１１０，１５９８
〜１６０２頁［参考文献１］とＪ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．
１９９３，５６，２０３４〜２０４０頁［参考文献２］
とにおいてジャスピダエ科(Jaspidae family) のスポン
ジからのベンガゾールアルカロイドの新規な構造と生物
活性(bioactivity) パターンとについて報告する。数種
類のベンガゾールは細胞傷害性(cytotoxicity)に関して
評価されている。親化合物のベンガゾールＡは２種類の
ヒト腫瘍細胞ラインに対してインビトロ(in vitro)効力
を示したことが知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】抗腫瘍剤としての可能
な用途を有する新規な化合物を提供することが、本発明
の目的である。関連する目的は海洋微生物からの問題の
化合物の単離と、また、このような化合物の合成であ
る。

【０００４】

【課題を解決するための手段】我々は知られたインド洋
・西太平洋地域スポンジ、ジャスピスジゴノキセア(J
aspis digonoxea)（デラウベンフェルス(De Laubenfe
ls),１９５０；デモスポンジアエ(Demospongeae)綱、コ
リスチダ(Choristida)目、ジャスピダエ科）から、ジゴ
ナゾールと名付けられた、新規な海洋天然産物を単離し
た。この化合物は抗腫瘍活性を有し、この抗腫瘍活性は
誘導体化によって増強されることができ、したがって、
この化合物はさらに活性な抗腫瘍剤への手がかりを示唆
する。

【０００５】したがって、本発明は式（Ｉ）：

【化４】［式中、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰は同一
であるか又は異なり、それぞれ水素原子、炭素数１〜６
のアルキル基、ヒドロキシ基又はアシルオキシ基Ｒ−
（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−は炭素数１
〜２６のアシル基である）を表す；但し、Ｒ²、Ｒ³、
Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の少なくとも１つはアシルオ
キシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−
は炭素数１〜２６のアシル基である）であり、さらにＲ
²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の少なくとも１つ
はアシルオキシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−
（Ｃ＝Ｏ）−は炭素数１０〜２６のアシル基である）で
ある］で示される、ベンガゾールＡのテトラアセテート
及びベンガゾールＢのテトラアセテートを除いた化合物
を提供する。

【０００６】本発明はまた、薬剤学的キャリヤー又は希
釈剤と共に、式（Ｉ）化合物を含む薬剤組成物をも提供
する。さらに、本発明は式（Ｉ）化合物の抗腫瘍使用方
法を提供する。式（Ｉ）化合物の製造方法も提供する。

【０００７】発明の好ましい実施態様本発明の化合物は、各基が置換基として付着するそれぞ
れの炭素原子によって番号を付けられた基：Ｒ²、
Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰を有する。置換基
Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の中の少なくと
も２つはアシルオキシ基である。１つのアシルオキシ基
は炭素数１〜２６のアシル基を含み、炭素数１〜９の短
いアシル基か又は炭素数１０〜２６の長いアシル基のい
ずれかを有する。第２アシルオキシ基は炭素数１０〜２
６の長いアシル基を含む。短い又は長いアシル基を含む
他のアシルオキシ基も存在することができる。

【０００８】Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の
アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロ
ピル及びブチル基を含む。Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ
⁶及びＲ¹⁰のアシルオキシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−の例
は、アセトキシ、プロポキシ及び炭素数１〜９、より好
ましくは炭素数２〜４の他の短いアシルオキシ基並びに
炭素数１０〜２６の脂肪アシルオキシ基、好ましくは直
鎖基を含む。アシルオキシ基は不飽和アルケノイルオキ
シ基でもよいが、この場合には、例えば天然脂肪酸にお
いて生ずるように、直鎖中に単一不飽和結合(single un
saturation) を有するものが好ましい。

【０００９】本発明の化合物の特に好ましいグループ
は、式中、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴がアセトキシ又は他の短
いアシルオキシ基であり、Ｒ⁵及びＲ¹⁰が水素原子であ
り、Ｒ ⁶がヘニコサノイルオキシ基（すなわち、基Ｃ₂₀
Ｈ₄₁ＣＯＯ−）又は他の脂肪アシルオキシ基である式
（Ｉ）化合物である。

【００１０】本発明の化合物は光心(optical center)を
有するので、本発明は個々の異性体並びにラセミ化合物
を含む混合物にも及ぶ。本発明によって提供される薬剤
組成物の例は、経口投与、局所投与又は非経口投与のた
めに適した組成を有する、固形製剤（錠剤、ピル、カプ
セル剤、顆粒剤等）又は液体製剤（溶液、懸濁液若しく
はエマルジョン）を含む。これらの薬剤組成物は純粋な
化合物又は他の薬理学的に活性な化合物と組合せた化合
物を含むことができる。これらの組成物は、非経口投与
する場合には、無菌である必要がある。

【００１１】式（Ｉ）化合物を含む薬剤組成物の正確な
投与量は薬剤の処方(formulation)、投与形式、特定の
位置(situs) 、ホスト(host)及び治療すべき腫瘍に応じ
て変化する。年齢、体重、性別、ダイエット、投与時
間、排泄速度、ホストの状態、薬物組合せ(drug combin
ation)、反応感受性及び疾患の重症度のような、他の要
素も考慮すべきである。投与は最大許容投与量の範囲内
で連続的に又は定期的に実施することができる。

【００１２】式（Ｉ）化合物は合成方法によって製造す
ることができる。適当な経路の例を、式（ＩＩ）及び
（ＩＩＩ）の中間体を含めて、下記に示す：

【化５】

【００１３】我々がジゴナゾールと呼ぶ式（ＩＶ）出発
物質はスポンジ：ジャスピスジゴノキシエから単離す
ることができる。ジゴナゾールを必要に応じて反応させ
て、下記反応スキームによって示すように、本発明の化
合物、特に式（Ｖ）のジゴナゾールトリアセテートを製
造することができる。

【化６】

【００１４】ジゴナゾールを加水分解して、本発明の化
合物の製造に有用なテトラヒドロキシ化合物を製造する
ことができる。本発明の化合物は他の式（Ｉ）化合物を
含まない個別化合物として得ることができる。

【００１５】

【実施例】ＩＲスペクトルはニコレット(Nicolet)2０５
ＦＴ−ＩＲ分光光度計で記録した。フィニガン（Finnig
an) −４０２１質量分析計で低い分解能の質量スペクト
ルが記録された。ＶＧ７０ＶＳＥＱ機器でｈｒｍｓを測
定した。¹Ｈと¹³Ｃｎｍｒスペクトルをブルーカー(Bru
ker)ＡＭＸ−３６０とＡＲＸ−５００分光計で記録し
た。全ての化学シフトはＴＭＳ（δ＝０）に関して報告
する。旋光度はパーキン−エルマー(Perkin-Elmer)モデ
ル１４１旋光計で、１ｃｍマイクロセルを用いて測定し
た。

【００１６】ジャスピスジゴノキセエ（ジャスピダエ
科）スポンジを南アフリカのソドワナ湾(Sodwana Bay)
においてＳＣＵＢＡを用いてダイバーによって集めた
（１９９２年７月）。証拠の標本(voucher specimen)
（ＴＡＳＡ１１０）をテルアビブ大学動物学部に寄託す
る。新たに採取したスポンジを−２５℃において直ちに
冷凍した。凍結乾燥したスポンジ（３２ｇ）を酢酸エチ
ルによって抽出して、褐色ガム（４９５ｍｇ）を得た。
このガムを最初にセファデックス(Sephadex)ＬＨ−２０
上で（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ₃：ヘキサン／１：１：２で
溶出）、その後、シリカカラム上で数回（ヘキサン−酢
酸エチル混合物（９：１〜１：２０）で溶出）クロマト
グラフィーして、（１）ベンガミドＡ（５ｍｇ）、
（２）ベンガミドＢ（３１ｍｇ）、（４）シクロー（Ｌ
−トランス［４−ヒドロキシ−プロリニル］−Ｌ−フェ
ニルアラニン）（５ｍｇ）、（５）官能化(functionali
zed)ノネンラクトン（５ｍｇ）、（６）ジゴナゾール
（３２ｍｇ）及び（７）シクロー（Ｌ−プロリニルーＬ
−チロシン）（５ｍｇ）を得た。Ｒｆ値（シリカゲル、
酢酸エチル）は（１）０．３、（２）０．３２、（４）
０．２０、（５）０．９５、（６）０．２５、（７）
０．２２であった。化合物（１）、（２）、（４）及び
（５）は既に報告したように同じスペクトルデータを有
した、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１，６４７
（１９８９）［参考文献３］及びＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．５５，２４０（１９９０）［参考文献４］を参照の
こと。

【００１７】

【化７】

【００１８】（６）のトリアセテート誘導体、化合物
（８）室温における乾燥ピリジン（０．５ｍｌ）と無
水酢酸（０．５ｍｌ）中の（６）（８ｍｇ）の溶液を暗
所に２４時間置いた。この反応混合物を真空下で濃縮
し、残渣をシリカゲル（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン／１：
１）上でクロマトグラフィーして、トリアセテート８を
９０％収率で得た；

【化８】ＣＯＳＹ−４５スペクトル（Ｈ／Ｈ）では下記Ｈ／Ｈ相
関が観察された：Ｍｅ−１／Ｈ−２；Ｈ−３／Ｈ−４；
Ｈ−４／Ｈ−５，Ｈ−５’；Ｈ−６／Ｈ−５，Ｈ−
５’。

【００１９】（６）のテトラヒドロキシ誘導体、化合物
（９）１％ＭｅＯＨ−ＫＯＨ（１ｍｌ）中の（６）
（１０ｍｇ）の溶液を暗所に２４時間置いた。ＨＣｌの
１％溶液で中和した後に、混合物をＨ₂Ｏ（５ｍｌ）と
ＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｘ５ｍｌ）とに分配した。一緒にした
有機抽出物を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥させ、蒸発乾固
させて、ｎ−Ｃ₂₁カルボン酸を得た（特徴的なｎｍｒデ
ータとそのメチルエステルのｅｉｍｓ，ｍ／ｚ３４０
（Ｍ⁺）とによって同定）。水性抽出物を真空下で濃縮
し、残渣をＭｅＯＨとＣＨ₃ＣＮの５０％混合物によっ
て抽出して、濾過及び濃縮後に純粋な加水分解生成物９
を８０％収率で得た；

【化９】（ｅｉｍｓはテトラアセテート誘導体１０に対して実施
した）。

【００２０】（６）のテトラアセテート誘導体、化合物
（１０）（６）に関して述べた同じ方法で、化合物
（９）（４ｍｇ）をアセチル化して、テトラアセテート
１０（油状物）を９０％収率で得た；

【化１０】

【００２１】ジゴナゾールはｈｒｍｓと¹³Ｃ−ｎｍｒと
から演繹された組成Ｃ₃₄Ｈ₅₈Ｎ₂Ｏ ₇を有した。¹Ｈ−
ｎｍｒと¹³Ｃ−ｎｍｒはベンガゾールＡに類似した。
Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５０，９９４（１９８７）［参
考文献５］とＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０，１
５９８（１９８８）［参考文献６］を参照のこと。した
がって、（６）のｎｍｒデータは化合物（３）と同じ置
換パターンを有する２つのオキサゾール環（表１）を明
白に示した（以下参照）。参考文献６において既に指摘
されているように、後者のオキサゾールの最大の特徴は
種々な１−〜３−結合炭素−水素結合定数（表１）であ
った。

【００２２】表１：ＣＤＣｌ₃中の（３）と（６）のｎ
ｍｒデータの比較

【表１】 ^*ＪはＨｚで表す。

【００２３】ＨＭＢＣ実験から、（６）の２つのオキサ
ゾールが（３）におけるようなメチンオキシ基ではなく
メチレン基（δ_C２５．２ｔ，δ_H４．２ｓ（２Ｈ−１
０））を介して相互に結合することは明らかであった。
後者のメチレン架橋はＣＨ₂−１０とＣ９、Ｃ１１及び
Ｃ１２との間のＣＨ−相関によって確認された。さら
に、ホモ及びヘテロＣＯＳＹ相関が２，３，４，６−四
酸素化ヘキサン鎖を明確に実証した（δ_H６．０２（Ｈ
−６），４．０３（Ｈ−２），３．８０（Ｈ−４），
３．３０（Ｈ−３），２．３０（Ｈ−５），２．１０
（Ｈ−５’），１．２４（ｍｅ−１））。

【００２４】（３）における対応プロトンに比較して
（６）におけるＨ−６のロアフィールド（lower-field)
共鳴はＣ−６メチンオキシ（（３）におけるＣ−１０で
はなく）が長鎖カルボン酸によってエステル化されるこ
とを示唆した。Ｃ−６におけるエステル基の存在はＨ−
６（δ_H６．０２）とエステルＣＯ基（δ_C１７３．
１）とのＣＨ−相関によって完全に確認された。Ｃ₂₁脂
肪酸鎖は質量スペクトルにおけるｍ／ｚ３２５（１００
％，Ｃ₂₁Ｈ₄₁Ｏ₂ ⁺）フラグメントから明らかであっ
た。６炭素鎖の官能化形式(functionalized mode) は
（６）の２，３，４−トリアセテート誘導体（すなわ
ち、化合物（８））に対して実施したホモＣＯＳＹ実験
によってさらに確認された。トリアセテート８のプロト
ンｎｍｒスペクトルでは、Ｍｅ−１の二重線が６におけ
るδ１．２５からδ１．１０にアップ−フィールド移動
し、その結果、Ｈ−２とのその相関が明白に観察され
た。

【００２５】ジゴナゾールの弱塩基性加水分解（ＭｅＯ
Ｈ中１％ＫＯＨ，室温）はＣ₂₁カルボン酸と、テトラヒ
ドロキシヘキシルジオキサゾール（式（Ｉ），Ｒ²＝Ｒ
³＝Ｒ⁴＝Ｒ⁶＝ＯＨ、Ｒ⁵＝Ｒ¹⁰＝Ｈ）とを生成し
た。比較のために、この化合物を対応テトラアセテート
１０にアセチル化した。

【００２６】生物学的活性−抗腫瘍性分析アール平衡塩類(Earle's Balanced salts)、２．０ｍＭ
Ｌ−グルタミン、非必須アミノ酸を含み、炭酸水素ナ
トリウム（ＥＭＥＭ／ＮＥＡＡ）を含まないイーグル最
少必須培地に、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、１０^-2
Ｍ炭酸水素ナトリウム及び０．１ｇ／ｌペニシリンーＧ
＋ストレプトマイシンスルフェートを補充して、この培
地において細胞を対数増殖期に維持した。

【００２７】簡単なスクリーニング試験を実施して、ベ
ルゲロン(Bergeron)等のＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．（１９８４），１２１８４８
［参考文献７］に記載の方法の適合形(adapted form)を
用いて，これらの化合物の抗腫瘍活性を測定し、比較し
た。用いた抗腫瘍性細胞はＰ−３８８（ＤＢＡ／２マウ
スからのリンパ性腫瘍(lymphoid neoplasm) の懸濁培養
物）、Ａ−５４９（ヒト肺癌の単層培養物）、ＨＴ−２
９（ヒト結腸癌の単層培養物）及びＭＥＬ−２８（ヒト
メラノーマの単層培養物）であった。

【００２８】Ｐ−３８８細胞を指定濃度の薬物を含むＭ
ＥＭ５ＦＣＳの１ｍｌアリコートに含めて、１ｘ１０⁴
細胞／穴の割合で１６ｍｍ穴に接種した。薬物を含まな
い培養物の別のセットを細胞が指数増殖期にあることを
保証するための対照増殖として接種した。全ての測定は
２通りに実施した。３７℃、９８％湿度雰囲気中の１０
％ＣＯ₂において３日間インキュベートした後に、薬物
含有穴中の増殖を対照穴中の増殖と比較することによっ
て、ＩＣ₅₀近似値を算出した。

【００２９】Ａ−５４９、ＨＴ−２９及びＭＥＬ−２８
を、指定濃度の薬物を含むＭＥＭ１０ＦＣＳの１ｍｌア
リコートに含めて、２ｘ１０⁴細胞／穴(well)の割合で
１６ｍｍ穴に接種した。薬物を含まない培養物の別のセ
ットを細胞が指数増殖期にあることを保証するための対
照増殖として接種した。全ての測定は２通りに実施し
た。３７℃、９８％湿度雰囲気中の１０％ＣＯ₂におい
て３日間インキュベートした後に、穴を０．１％クリス
タルバイオレット(Crystal Violet)によって染色した。
薬物含有穴中の増殖を対照穴中の増殖と比較することに
よって、ＩＣ₅₀近似値を算出した。

【００３０】

【表２】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ヨエルカシュマンイスラエル国テル − アビブ（番地なし），テル − アビブユニバーシティ，スクールオブケミストリー気付 (72)発明者アミラルディイスラエル国テル − アビブ（番地なし），テル − アビブユニバーシティ，スクールオブケミストリー気付 (72)発明者ジーザスアンゲルデラフェンテスペイン国マドリッド，28760 トレスカントス，ポリゴノインダストリアルドトレスカントス，カルレドラカレラナンバー３，ファーママー, ソシエダッドアノニマ気付

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）：【化１】［式中、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰は同一
であるか又は異なり、それぞれ水素原子、炭素数１〜６
のアルキル基、ヒドロキシ基又はアシルオキシ基Ｒ−
（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−は炭素数１
〜２６のアシル基である）を表す；但し、Ｒ²、Ｒ³、
Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の少なくとも１つはアシルオ
キシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−
は炭素数１〜２６のアシル基である）であり、さらにＲ
²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ¹⁰の少なくとも１つ
はアシルオキシ基Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ−
（Ｃ＝Ｏ）−は炭素数１０〜２６のアシル基である）で
ある］で示される、ベンガゾールＡのテトラアセテート
及びベンガゾールＢのテトラアセテートを除いた化合
物。
【請求項２】式（Ｖ）：【化２】で示される請求項１記載の化合物。
【請求項３】他の式（Ｉ）化合物を含まない個別化合
物としての請求項１記載の化合物。
【請求項４】実質的に純粋な形である請求項１記載の
化合物。
【請求項５】実質的に純粋な形である請求項２記載の
化合物。
【請求項６】薬剤学的キャリヤー又は希釈剤と共に、
請求項１で定義した式（Ｉ）化合物を含む薬剤組成物。
【請求項７】薬剤学的キャリヤー又は希釈剤と共に、
請求項３で定義した式（Ｉ）化合物を含む薬剤組成物。
【請求項８】薬剤学的キャリヤー又は希釈剤と共に、
請求項４で定義した式（Ｉ）化合物を含む薬剤組成物。
【請求項９】薬剤学的キャリヤー又は希釈剤と共に、
請求項５で定義した式（Ｉ）化合物を含む薬剤組成物。
【請求項１０】式（ＩＶ）：【化３】で示される化合物であるジゴナゾール。