JPH08201382A - 体液中成分の分析法及び体液採取用シート - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】安定した測定結果を与える簡便な体液中の成分
の分析法を提供すること 【構成】抗菌性物質又は防腐性物質の存在下に体液を保
存した後、該体液中の成分を分析することを特徴とする
体液中の成分の分析法及び抗菌剤または防腐剤を含む体
液採取用シート

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は体液中の成分を分析する
方法及び体液採取用シートに関する。

【０００２】

【従来の技術】検診などで行われる生化学検査において
は、診断の効率を上げるため、空腹時に採血や採尿した
り、食事、薬物の投与、運動などの負荷後に採血や採尿
するなど、特定の条件下での体液の採取が要求される。
従って、定期検診やドック検診においては、妊娠診断薬
や尿糖検査試験紙など、おおざっぱな定性試験でよいＯ
ＴＣ試薬の場合とは異なり、検体の採取条件の遵守と、
検査の操作上のミスや判定誤差を回避するため、被験者
を施設に拘束して体液を採取し、専任の担当者によって
測定が行われている。また、学童検診などのマス・スク
リーニングにおいては、被験者全員を施設に拘束するこ
とは、時間と費用の点から困難であるため、予め指定し
た条件と方法で検体を採取させ、これを専門の検査機関
に収集し、専任の担当者によって測定が行われている。
一方、検体中の成分を測定する試薬については、酵素を
ベースとする試薬組成物を含有した乾式相試験片が主に
用いられている。この検査法は低価格であること、特別
な装置を必要とせず目視判定が可能であるため使用し易
いこと、比較的正確な試験ができること、及び応答時間
が短いことなどの利点から今日、臨床検査室、開業医の
病院、診療所及び家庭において、尿その他の液体試料中
の対象成分を試験するために広く使用されている。中で
も特に血中及び尿中のブドウ糖の検出及び定量測定はそ
の頻度も高く重要で、糖尿病患者では必須の測定項目で
ある。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】学童検診などのマス・
スクリーニングにおいては、被験者に指定した条件下で
検体を採取させ、これを専門の検査機関に提出させなけ
ればならないが、検体の採取方法が困難であったり、検
体の運搬が嵩高で非衛生的であったり、輸送及び保存中
に検体が腐敗し、測定成分の濃度が低下するなどの問題
が有り、合理的な検体の採取・運搬・保存方法が求めら
れていた。例えば、尿糖による糖尿病のスクリーニング
の場合がある。現在、糖尿病のマス・スクリーニング
は、随時尿や早朝第一尿による尿糖試験が行われている
が、糖尿病の境界型、軽度の糖尿病や発症初期の糖尿病
患者では陰性となる場合が有り、問題となっている。最
も効率の良いスクリーニングには、食事負荷後である夕
食後２時間尿を用いるのが望ましいが、採尿や検体の取
り扱いの煩雑さのため、尿蛋白検査用の早朝第一尿が供
用されており、未だに夕食後２時間尿は、実施されてい
ない。また、検体中の成分を測定する試薬では、酵素を
ベースとする試薬組成物を含有する乾式相試験片を用い
る方法には、熱安定性、保存安定性や湿度安定性が充分
でないなどの問題点が存在していた。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
問題点を解決すべく鋭意検討した結果、本発明を完成し
た。

【０００５】即ち、本発明は （１）抗菌性物質又は防腐性物質の存在下に体液を保存
した後、該体液中の成分を分析することを特徴とする体
液中の成分の分析法、 （２）抗菌性物質又は防腐性物質の存在下に体液を保存
する際に抗菌剤又は防腐剤を含む吸水材を用いる上記
（１）の分析法、 （３）吸水材が濾紙である上記（２）の分析法、 （４）体液が尿である上記（１）、（２）又は（３）記
載の分析法、 （５）体液中の成分が糖である上記（１）、（２）、
（３）又は（４）記載の分析法。 （６）抗菌剤又は防腐剤を含む体液採取用シート。 （７）体液採取用シートが濾紙であり、尿糖検査用に用
いる上記（６）の採尿用シートに関する。

【０００６】これにより、従来使用していた体液試料の
採取容器、例えば、尿採取用の採尿コップや尿検体の輸
送用のかさばるポリ容器の使用は特に必要ではなくな
り、検体の採取が極めて簡便に行えるようになった。ま
た、検体を採取した吸水材を、チャック付きビニール袋
などの密封容器に封入することにより、衛生的でコンパ
クトにすることができ、検体の運搬が容易になった。さ
らに、予め吸水材に保持されている抗菌剤又は防腐剤に
より、保存による検体中の測定成分の濃度低下を防止で
き、安定した測定結果が得られるようになった。これに
より、さらに応用範囲を広げ、郵送による検診も可能に
なるものと考えられる。また、検体中の成分を測定する
試薬としては、酵素をベースとする試薬組成物を含有す
る乾式相試験片に限らず、液状試薬組成物の使用も可能
となり、安価で、使いやすく、安定な試薬の調製が可能
となった。本発明を用いれば、夕食後１〜２時間尿を用
いる尿糖のマス・スクリーニングが容易に行えるように
なり、糖尿病患者の見逃しを大幅に減少でき、スクリー
ニング効率の向上に貢献できる。

【０００７】本発明において、体液としては血清、血
漿、尿及び随液などが挙げられ、特に対象とする重要な
体液は尿である。また体液中の成分としてはブドウ糖な
どの糖、蛋白質、潜血、ビリルビン、ウロビリノーゲ
ン、ケトン体、亜硝酸塩など臨床上重要な成分が挙げら
れ、特にブドウ糖が重要である。

【０００８】抗菌性物質又は防腐性物質としては例えば
抗菌剤又は防腐剤が挙げられるが、その他に、材質自体
が抗菌性又は防腐性を有する吸収材例えば抗菌性繊維を
用いた不織布なども挙げられる。

【０００９】吸水材としては体液を含浸あるいは採取で
きる吸水材であれば特に制限はなく、例えば濾紙、布、
木綿、麻、パルプ、絹、ガラス繊維濾紙、ナイロンメン
ブレンなどの合成プラスチックなどがある。さらにはマ
イクロチップなどの定量的採取容器も吸水材の代用とし
て利用可能である。特に好ましくは濾紙である。吸水材
の大きさは特に限定されないが通常１〜１０ｃｍＸ０．
５〜３ｃｍ好ましくは４〜１０ｃｍＸ１〜３ｃｍのシー
ト状のものを用いる。また、吸水材に含ませる抗菌剤又
は防腐剤としては体液の保存期間において抗菌又は防腐
効果を有するものであればよく、例えばほう酸、ほう酸
エステル、酸類（安息香酸、パラヒドロキシ安息香酸、
パラアミノ安息香酸、サリチル酸、デヒドロ酢酸、ソル
ビン酸など）、フェノール系化合物（フェノール、ジブ
ロモフェノール、ジクロロフェノール、パラオキシ安息
香酸誘導体、クレゾール、クロロクレゾール、ヘキサク
ロロフェン、パラクロロメタキシレノール、イルガサン
ＤＰ−３００など）、アジ化ナトリウム、第４級アンモ
ニウム化合物（塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニ
ウムなど）、両性界面活性剤（アルキルジアミノエチル
グリシン塩酸塩など）、ラウリル硫酸ナトリウム、チメ
ロサール、オキシキノリン硫酸塩、６−アセトキシ−
２，４−ジメチルメタジオキサン、塩酸クロルヘキシジ
ン、グルコン酸クロルヘキシジン、銅剤、抗生物質、ベ
ンゾイミダゾール系殺菌剤、ジカルボキシイミド系殺菌
剤、チアゾリン系化合物（プロクリン３００、プロキセ
ル、ケーソンなど）などがあり、好ましくはほう酸、安
息香酸である。吸水材に含ませる防腐剤、抗菌剤の量は
吸水材に対して０．０１〜１０重量％が好ましく、特に
好ましくは０．５〜４重量％である。防腐剤、抗菌剤は
あらかじめ吸水材に含ませておくことが好ましく、例え
ば吸水材に含浸するのみでも良いし、あるいは吸水材に
強固に化学的に結合しておくことも可能である。

【００１０】吸水材による体液の採取は例えば吸水材を
体液に接触させ体液を吸水材に吸収させることにより容
易に行うことができる。体液を例えば吸水材などに採取
した状態で保存する場合、体液は分析時まで密閉容器中
で保存することが好ましく、密閉容器の形態及び材質な
どに特に制限はないが体液中の成分が乾燥、濃縮される
ことなく、湿潤状態を保持することが可能な密閉度の高
いものがより好ましい。体液中の成分を保存する期間
は、通常１〜６日間くらいであり、検査までに要する移
送などの時間を考慮すると好ましくは１〜４日間くらい
であり、保存温度は好ましくは０〜３０℃である。本発
明によれば体液は安定に保持され、体液中の成分の存在
量を分析時まで安定に保持することができる。

【００１１】保存後の体液中の成分の分析は公知の方法
に準じて行うことができる。例えば酵素・発色試薬を用
いて分析することができる。酵素・発色試薬は当然その
分析対象成分により組成が異なるが、例えばグルコース
が分析対象成分の場合、測定法としてはグルコースデヒ
ドロゲナーゼによる紫外部吸光測定法、ヘキソキナーゼ
／グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼによる紫外
部吸光測定法、ジアホラーゼ等を用いたホルマザン反応
を利用する方法及びグルコースオキシダーゼを用いる方
法などがあり、最も良く用いられるグルコースキシダー
ゼ法ではグルコースの酸化によって発生する過酸化水素
を検知するための酸化触媒のペルオキシダーゼや被酸化
性色原体が酵素・発色試薬の組成因子となる。また、用
いる色原体としては可視部に吸収のあるものであればよ
く、通常良く用いられるo-アニシジン、ベンチジン、o-
トリジン、テトラメチルベンチジン、ロイコ系色原体及
びアミノアンチピリンとフェノール誘導体やアニリン誘
導体を組み合わせるトリンダー系試薬などが用いられ
る。また、オキシダーゼ、色原体及びペルオキシダーゼ
などの酵素・発色試薬はその安定性などを考慮に入れ組
み合わせて用いるがこれらはこれら試薬を乾燥又は半乾
燥状態で含有する吸水性試験紙の形で使用することもで
きるし、また、液状の酵素・発色試薬として使用するこ
とも可能である。

【００１２】１）試薬を乾燥又は半乾燥状態で含有する
吸水性試験紙の形で用いる場合、保存後の体液例えば該
体液を含有する吸水材に該吸水性試験紙を接触させるこ
とにより成分分析を行うことができ、また２）試薬を液
状として用いる場合は、保存後の体液例えば該体液を含
有する吸水材に試薬を添加することにより成分分析を行
うことができる。また１）、２）の場合において吸水材
と体液との接触により発色を生じないような組成であれ
ば体液を含有する吸水材側にあらかじめ色原体及び／又
はペルオキシダーゼなどを含有しておくことも十分可能
である。このようにして体液中の成分の判定あるいは体
液中の成分濃度の測定を行うことができる。本発明の体
液採取用シートは上記の、抗菌剤又は防腐剤を含む吸水
材であってシート状のものであり、特に尿糖検査に用い
る採尿用シート等として有用である。

【００１３】

【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明を具体
的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるも
のではない。

【００１４】実施例１ 抗菌処理及び抗菌処理の濾紙を使用し、６名の尿試
料Ａ〜Ｆを用いて以下に記載の実験を行い、尿採取直後
の結果と２日間保存後の結果を比較した。 比較例１ 処理なしの濾紙を使用して６名の尿試料Ａ〜Ｆを用いて
以下に記載の実験を行い、採尿直後の結果と２日間保存
後の結果を比較した。

【００１５】抗菌処理及びの濾紙の作成法 抗菌剤ほう酸及びプロクリン３００（ROHM AND HAA
S 社製）の１％水溶液をそれぞれ調製し、それぞれ社ア
ドバンテック社製東洋濾紙Ｎｏ．２ ２５×２５ｃｍに
含浸後、室温において自然乾燥し次いで２×８ｃｍに裁
断して、抗菌処理の濾紙（ほう酸処理したもの：ほう
酸含量は濾紙に対して０．９重量％及び抗菌処理の濾
紙（プロクリン３００処理したもの：プロクリン３００
含量は濾紙に対して０．９重量％）を得た。なお以下の
実施例においても同様な方法でそれぞれの抗菌剤を用い
てそれぞれの抗菌処理濾紙を作成した。

【００１６】処理なしの濾紙の作成法 上記のアドバンテック社製東洋濾紙Ｎｏ．２ ２５×２
５ｃｍを２×８ｃｍに裁断して処理なしの濾紙を得た。
以下の比較例においても同様に作成して用いた。発色試薬の組成 グルコースオキシダーゼ ６Ｕ／ｍｌ ＨＲＰ ５Ｕ／ｍｌ フェノール ６ｍＭ ４−アミノアンチピリン ０．６７ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ６．８） ０．１Ｍ なお以下の実施例や比較例においても上記と同一の組成
の発色試薬を使用した。

【００１７】操作法 上記の３種の濾紙に各試料（原尿又は原尿＋100mg/dlグ
ルコース）３００μｌ添加後、密封容器（チャック付き
ビニール袋）へ封入し２日間室温にて放置した。その
後、濾紙を取り出し、発色試薬１０μｌをそれぞれ滴下
し、発色度合いを採尿直後の発色（表１）と比較、観察
した（表２及び表３）。なお、表中の+3,+2,+1, ±とは
発色試薬滴下５分後の発色の強度を示しており、この順
に発色は弱くなる。−とは全く発色のないことである。
以下の実施例や比較例においても同様の判定で行った。
原尿＋100mg/dlグルコースとは糖尿病患者Ａ，Ｂ，Ｃ，
Ｄ，Ｅ，Ｆの尿9ml に対して1000mg/dl グルコース1ml
の割合で混合調製したことを意味し、以下の実施例や比
較例においても各濃度に応じて同様の操作で調製した。

【００１８】

【表１】

【００１９】

【表２】

【００２０】

【表３】

【００２１】結果 比較例１における処理なしの濾紙では、２日間の保存に
より全く発色が認められず、グルコースの消失が見られ
た。それに対し、実施例１における抗菌処理の濾紙及
び抗菌処理の濾紙では、尿採取直後と同等の発色が見
られ、採尿時のグルコース濃度を安定して保持できるこ
とを確認した。

【００２２】実施例２ ４種類の抗菌剤［抗菌剤ほう酸，プロクリン３００
（ROHM AND HAAS 社製），塩化ベンザルコニウム，
安息香酸］を用いて抗菌剤の種類による保存効果の差異
を以下に記載の実験により検討した。 比較例２ 処理なしの濾紙を用いて実施例２と同様にその保存効果
について比較検討した。

【００２３】操作法 抗菌剤〜の抗菌処理を施した濾紙（いずれの濾紙も
抗菌剤含量は濾紙に対して０．９重量％及び処理なしの
濾紙に各試料を３００μｌ添加後、密封容器（チャック
付きビニール袋）へ封入し、室温で２日保存後、発色試
薬１０μｌをそれぞれ滴下し、発色度合いを採尿直後の
発色（表４）と比較、観測した（表５及び表６）。試料
には原尿（糖尿病患者）、原尿+100mg/dl グルコー
ス、原尿（健常者）、原尿+100mg/dl グルコースを
使用した。

【００２４】

【表４】

【００２５】

【表５】

【００２６】

【表６】

【００２７】結果 比較例２に対して実施例２では検討に用いた抗菌処理し
た濾紙全てにおいて、尿採取直後の発色度合いと同等の
色度を保持していた。

【００２８】実施例３ 実施例１の抗菌処理の濾紙を用いて原尿（健常者）及
び2000,1000,500,200,100mg/dlグルコース1ml をそれぞ
れ原尿9ml へ添加して得た試料を用い、発色度の変化を
検討した。 比較例３ 他の比較例と同様に処理なしの濾紙を使用し検討した。

【００２９】操作法 処理なしと抗菌処理の濾紙に原尿＋200,100,50,20,10
mg/dl グルコース及び原尿を３００μｌそれぞれの濾紙
に添加後、それぞれ密封容器（チャック付きビニール
袋）へ封入し室温で２日間保存した。その後各濾紙に発
色試薬１０μｌを滴下し、発色度合いを採尿直後（表
７）と比較した（表８及び表９）。

【００３０】

【表７】

【００３１】

【表８】

【００３２】

【表９】

【００３３】結果 比較例３の処理なし濾紙に対して実施例３の抗菌処理
の濾紙は添加濃度系列の順に尿採取直後の色調変化を保
持していた。

【００３４】実施例４ 実施例１の抗菌処理の濾紙を用いて実施例２の原尿
（糖尿病患者）を濾紙に含浸し、密封容器チャック付き
ビニール袋）へ封入して約４０℃下で保存した。上記
の実施例１と同様の発色試薬を用いて、保存２日後、４
日後の発色度合いを採尿直後の発色と比較した（表１
０）。 比較例４ 処理なし濾紙を用いて実施例４と同様の操作で保存２日
後、４日後の発色度合いを採尿直後の発色と比較した
（表１０）。 ００３５】

【表１０】

【００３６】結果 比較例４に対して実施例４では２日後、４日後とも採尿
直後と同等の発色度合いを有しており、４０℃で少なく
とも４日間は安定にグルコース濃度を保持できることを
確認した。

【００３７】

【発明の効果】本発明によれば、体液を抗菌性物質又は
防腐性物質の存在下に保存することにより、試験測定時
に酵素・発色試薬を用いて体液中の成分の安定した判定
あるいは定量が可能となった。さらに前述の吸水材を防
腐・抗菌剤で処理することにより体液中の成分の移送中
あるいは保存期間中の腐敗、細菌の繁殖などによる分解
を抑え、試験測定時まで安定に体液中の成分を保持でき
るようになった。更に本発明によるところの抗菌剤又は
防腐剤を含む体液採取用シートを用いて食後１〜２時間
尿での尿糖検査を行うことによりこれまでの試験方法で
生じていた糖尿病患者及びその境界型の見逃しの問題を
解消できるようになった。また、本発明はグルコース以
外の体液中の成分、例えば蛋白質、潜血、ビリルビン、
ウロビリノーゲン、ケトン体、亜硝酸塩などの臨床的重
要な項目の分析に利用できるものであることは言うまで
もない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 河津 捷二 群馬県高崎市常磐町58−１ ウイング高崎 507

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】抗菌性物質又は防腐性物質の存在下に体液
   を保存した後、該体液中の成分を分析することを特徴と
   する体液中の成分の分析法。
2. 【請求項２】抗菌性物質又は防腐性物質の存在下に体液
   を保存する際に抗菌剤又は防腐剤を含む吸水材を用いる
   請求項１の分析法。
3. 【請求項３】吸水材が濾紙である請求項２の分析法。
4. 【請求項４】体液が尿である請求項１、２又は３記載の
   分析法。
5. 【請求項５】体液中の成分が糖である請求項１、２、３
   又は４記載の分析法。
6. 【請求項６】抗菌剤又は防腐剤を含む体液採取用シー
   ト。
7. 【請求項７】体液採取用シートが濾紙であり、尿糖検査
   用に用いる請求項６の採尿用シート。