JPH08220097A - ２種類の生物親和性パートナーの特異的結合反応によって試料液を分析検査するための試験キャリヤー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ２種類の生物親和性パートナーの特異的結合
反応によって試料液を分析検査するための試験キャリヤ
ー 【解決手段】 該試験キャリヤーにおいては、基礎層
（２）上に、液体輸送区間（２０）を形成する毛管活性
試験ゾーン（１１〜１６）が順次に配置されており、同
区間に沿って毛管作用によって駆動される試料液が、水
不溶性結合剤を含有する非膨潤性不織布から成る出発ゾ
ーン（１１）から流れる。この際、所望の分析にとって
特異的な標識物を形成する特異的検出反応が進行し、前
記標識物が検出ゾーン（１６）で検出される。 【効果】 液体保留率が著しく優れている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、試料中および試験キャ
リヤーの試薬中にそれぞれ含有された２種類の生物親和
性結合パートナーの特異的結合反応によって試料液を分
析検査するための試験キャリヤーに関する。該試験キャ
リヤーは次の構造を有する：前記の２種類の結合パート
ナーのうち第一の結合パートナーが試料中に含有されて
いて、第二結合パートナーの試験キャリヤーの試薬系に
含有されており；基礎層上に大体において並置された数
個の毛管活性試験ゾーンを有し、これらのゾーンが液体
接触していて、基礎層に対して平行に延びる液体輸送区
間を形成し、同区間に沿って毛管作用によって駆動され
る液体が出発ゾーンから流れ；この液体輸送区間が順次
に、試験キャリヤーに試料を供給するための試料供給ゾ
ーン、１種類の生物親和性結合パートナーの標識複合体
を含有する複合体ゾーン及び検出ゾーンを包含しており
かつ第一結合パートナーと、第二結合パートナーを含有
する試薬系との間で、所望の分析にとって特異的な標識
物を形成する反応が進行しかつ前記特異的標識物が検出
ゾーンで検出される。

【０００２】

【従来の技術】疾病の診断の際に定性的および定量的分
析測定のために、極最近では所謂キャリヤー結合試験を
次第に使用するようになっている。このような試験の場
合には、試薬は、試料と接触される固体試験キャリヤー
の相応の層中に埋込まれている。試料は大部分が血液ま
たは尿のような体液である。しかしまた先行する試験段
階によって得られた液体も重要である。

【０００３】試験キャリヤーは多数の異った形態で知ら
れている。本発明は、通常吸収性層材料、すなわち紙、
不織布または多孔性プラスチック層材料から成る毛管活
性試験ゾーンが、液体が基礎層に平行に液体区間に沿っ
て流動するように並列的に基礎層上に配置されている構
造の試験キャリヤーに関する。従ってこの試験キャリヤ
ーを“縦輸送装置を有する試験キャリヤー”と称するこ
ともできる。

【０００４】このような試験キャリヤーの構造は、特
に、２種の生物親和性結合パートナーの特異的結合反応
に基く分析法にとって有利である。西独国特許第３４４
５８１６号および米国特許第４，３６１，５３７号明細
書には、例が記載されている。この意味における特異的
結合反応は、特に抗原またはハプテンと抗体との間の免
疫的相互作用である。しかしまた、レクチン−糖のよう
な他の特異的生物親和性相互作用または作用物質−受容
体相互作用も使用することができる。以下には、一般性
を制限することなく例として免疫学的相互作用を挙げる
ことにする。

【０００５】文献、例えば前記引用特許明細書に記載さ
れている極めて異った試験原理を使用することができ
る。

【０００６】免疫的試験操作の第１群は、液体輸送区間
の前部ゾーンの一つが、第一結合パートナー（目標分析
物Ａｎａｌｙｔ）を可溶の標識された形で含有すること
によって優れている。液体輸送区間のさらなる延長上に
配置された試験ゾーンはキャリヤーに固定された第二結
合パートナーを含有する。試料からの目標分析物と試験
からの標識された目標分析物が第二結合パートナーの結
合位置に対して競合する。このような試験は従って競合
試験と称する。

【０００７】公知の免疫学的試験操作の第２群の場合に
は、液体輸送区間の前部ゾーンの一つは、第二結合パー
トナーを可溶な標識された形で含有する。第一結合パー
トナーとの特異的結合反応によって可動性の標識複合体
が形成される。

【０００８】他の試験経過では、キャリヤーに固定され
た形のもう一種の結合パートナーも存在していてよく、
同パートナーは第一または、第二結合パートナーの、複
合体の形成によって飽和されなかった結合位置と特異的
に結合することができる。これによって少なくとも３種
の結合パートナーのサンドイッチができる。従ってサン
ドイッチ試験についても論議する。

【０００９】所謂免疫酵素測定法（ＩＥＭＡ）原理の場
合には、試験経過はキャリヤーに固定された形で目標分
析物を含有する。これによって第二結合パートナーの複
合化されなかった部分が固定される。複合体のみが可動
性であって、検出されうる。

【００１０】すべての免疫学的測定法にとって共通な点
は、就中、両結合パートナーの間の特異的結合反応を包
含する検出反応が、所望の分析にとって特異な標識物を
生じることである。これは、競合試験の場合には結合さ
れたまたは遊離された目標分析物である。サンドイッチ
試験の場合にはこれは結合されたサンドイッチ複合体で
ある。またＩＥＭＡ試験の場合には可動的に遊離された
複合体である。

【００１１】種々の公知免疫学的試験原理の詳細な説明
は、関連文献から知ることができるのでここでは省略す
る。本発明は、特異的な試験経過に関係なく有利に適用
可能であるが、特にＩＥＭＡ原理に従って作業する試験
キャリヤーに向けられている。

【００１２】また種々の免疫学的測定方法は、使用され
た標識に関しても相違している。本発明は、特に酵素標
識を用いる酵素免疫試験に向けられている。標識酵素は
通常標識酵素の基質の呈色反応によって検出される。同
基質は、試験操作に応じて検出ゾーン中にすでに存在し
ていてもよいしまたは検出ゾーンに供給されてもよい。
本発明は原則的には、例えば有色物質または放射性元素
が標識用に使用される方式の非酵素的方法にも適用する
ことができる。

【００１３】発明の構成 特に、免疫学的試験キャリヤーが従来利用されなかった
比較的高濃度の目標分析物を評価にとって適当な、容易
に操作可能で安価に製造できる試験キャリヤーを使用す
るために、本発明は、第一結合パートナーに関して特異
的であって、捕捉試薬として作用する第三結合パートナ
ーを用意し、同パートナーが第一結合パートナーの一部
を結合し、それによって標識物を生ずる検出反応から除
去するような大きさの使用量で、この過程が可能である
ように該第三結合パートナーを液体輸送区間の複合体ゾ
ーン内又は試料供給ゾーンと複合体ゾーンとの間に配置
することを提案する。この場合捕捉試薬を有するゾーン
は出発ゾーンと検出ゾーンとの間に存在する。

【００１４】免疫学的測定は極めて高い感度によって優
れている。これは低濃度の目標分析物の場合には利点で
あるが、すでに従来から、免疫学的測定の利点を高濃度
の目標分析物の場合にも使用するという努力はあった。
この場合には大きな感度が難点であった。もちろん、試
料を手動により適宜希釈することは可能である。しかし
この操作は、訓練された実験用員によってのみ行なわれ
うる、時間のかかる操作段階を要求する。そのために試
験法に対する費用のかかる干渉によって同試験法の感度
を下げる試みが行われた。例えば試験において目標分析
物に対する親和性の減少された結合パートナーを使用す
るか、または標識結合パートナーと標識酵素との間の化
学量論を行った。

【００１５】ところで本発明は、試験キャリヤー上に目
標分析物にとって特異的な捕捉試薬を施すことによっ
て、費用のかかる前記公知方法と比較して意外に簡素な
方法を提案している。これによって、前に接続された別
個の希釈段階を要することなしに、試験キャリヤー上で
目標分析物の濃度の希釈が達成される。本発明による試
験キャリヤーは１０~⁸ｍｏｌ／ｌを越える濃度、特に１
０~⁷ｍｏｌ／ｌを越える濃度にとって有利である。

【００１６】本発明の主たる提案（上記手段の重要な捕
足であるが、独自の重要性を有する）は、試験キャリヤ
ーの操作および機能にとって重要な構造を有する出発ゾ
ーンに関する。

【００１７】すなわち本発明は、冒頭記載の種類の試験
キャリヤーの場合に、出発ゾーンを、室温で水に不溶の
結合剤を含有する非膨潤性不織布から製造することを提
案する。

【００１８】この点で本発明はまた、従来公知の技術で
行なわれた手段と根本的に異なる。つまり、西独国特許
第３４４５８１６号明細書およびヨーロッパ特許第５２
３２８号明細書には、特に、その膨潤性のために極めて
高い吸水量を有する親水性材料から成るスポンジ状プラ
スチックまたは層が適当であると述べられているからで
ある。これによって、出発ゾーンが試料液中に浸漬され
る時十分に同液を吸収し、試料液中への浸漬後にそれ以
上の同液体がもはや供給されなくても、試験キャリヤー
の全液体輸送区間を試料液で満たすことができる。

【００１９】意外にも、本発明の範囲では、その自重の
割には小さい液体吸収量を有するが、試験キャリヤー上
に十分に完全に吸収される比較的疎水性の材料を用いる
と、極めて優れた結果が得られることが判明した。

【００２０】前記特性は、量的に液体保留率と表現され
うる。この液体保留率は、本発明の範囲内では、面積２
５ｃｍ²の試料を、同試料よりも著しく大きくかつ飽和
まで十分に湿潤されるスポンジクロス上に置くことによ
って特定することができる。スポンジから取出した水量
を秤量して測定する。該湿潤試料を、直径１５８ｍｍの
円形フィルタ（西独国、Ｄａｓｓｅｌ在Ｓｃｈｌｅｉｃ
ｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ社製２６６８／８型）上に
置き、２分後に除去する。円形フィルタによって吸収さ
れた水量をまた秤量して測定する。保留率は、該試料中
に残留する水量／初めに吸収された水量の割合（％）と
して特定される。この意味において、試料液にに関して
２５％以下の液体保留率を有する材料が有利である。

【００２１】実施例 次に本発明を、図面に略示した実施例により詳述する：
第１図を、種々の可能な試験原理および試験キャリヤー
上の捕捉試薬の配置を説明するために用いる。それ故に
同図は構造的詳細な点を無視し、試験ゾーン１１〜１６
がそれらの端面で隣接してその上に並列的に配置されて
いる、基礎層２を有する試験キャリヤー１を原理的にの
み示す。試験ゾーンは好ましくはそれぞれ種々の吸収性
材料（紙、不織布、、多孔性プラスチック層等）から成
り、接合縁における液体接触が十分に密接な層の接合に
よって実現される。しかしまた、層が部分的にオーバー
ラップする（第２図参照）かまたは同一材料から成る数
個の隣接ゾーンがワンピースとして製造されていてもよ
い。試験ゾーンは全体として、出発ゾーン１１から目標
ゾーン１６に達する液体輸送区間２０を形成する。

【００２２】試験キャリヤーを使用する際には先づ、好
ましくは同キャリヤーを適宜試料液中に浸漬することに
よって出発ゾーン１１のみを同液と接触させる。次に出
発ゾーンがその含有液体を次第に液体輸送区間に放出す
る。液体はゾーン１１〜１６で支配する毛管作用に基い
て目標ゾーン１６までクロマトグラフィーを行なう。こ
こで重要なゾーンの液体輸送特性の詳細については、第
２図により後述することにする。

【００２３】さて第１図の場合には、出発ゾーン１１に
試料供給ゾーン１２および補助試薬ゾーン１３が接続し
ている。試料供給ゾーンの機能はさらに次下に詳述す
る。補助試薬は、試料のｐＨ値を試験条件に合わせるた
めに、緩衝剤をを含有している。同試薬は所望の場合に
は別の補助試薬、例えば湿潤剤等を含有していてもよ
い。一般には、試験条件に応じて、図示の場合よりも多
数のまたは少数のゾーンが存在していてもよい。

【００２４】個々の場合に適用される免疫学的試験原理
に応じて、相応の試薬系成分が試験キャリヤーのゾーン
中に含有されている。若干の例を次に述べる。

【００２５】試料中に含有された抗原Ａｇを測定するた
めの競合試験の場合には、例えば複合体ゾーン１４が抗
原と標識酵素ＡｇＥとの複合体を可溶性の形で含有する
ことができる。ゾーン１５は、キャリヤーに固定された
形の抗体Ａｋ１（ｆ）を第二結合パートナーとして含有
する。

【００２６】試料が流通するとＡｇＥが溶解される。Ａ
ｇとＡｇＥとがＡｋ１（ｆ）の結合位置をめぐって競合
する。さらに液体が目標ゾーン１６中に流入すると、ゾ
ーン１５においてＡｋ１（ｆ）への結合によって固定さ
れたＡｇＥと、ゾーン１６中に引続き流入する遊離Ａｇ
Ｅとの分離が行なわれる。ゾーン１５で結合されたＡｇ
Ｅ量は特異的であって、分析に関して特徴的であり、例
えば別の方法段階で呈色性基質を酵素に供給し、ゾーン
１５での呈色を観察することによってそこで検出するこ
とができる。この限りにおいて試験経過は慣用的である
（例えば西独国特許第３４４５８１６号明細書参照）。

【００２７】ゾーン１３には捕捉試薬としてキャリヤー
に固定された第三結合パートナーＡｋ２（ｆ）が存在す
る。同パートナーは、試料抗原が抗原複合体と一緒に複
合体ゾーン１４中に入る前に、同抗原の一部を固定する
ために役立つ。それによって抗原（一般的に言えば第一
結合パートナー）の一定部分が、標識物の形成する検出
反応から除去される。

【００２８】上述のように、抗体Ａｋ１（ｆ）およびＡ
ｋ２（ｆ）はそれぞれ同一抗原と特異的に結合できなけ
ればならない。好ましくは同一抗体を使用してもよい。

【００２９】免疫酵素測定法試験原理（ＩＥＭＡ）に従
って動作する、試料中に含有された抗原Ａｇを測定する
ための試験キャリヤーの場合には、複合体ゾーン１４
は、抗原に特異的に結合する抗体と標識酵素ＡｋＥ（第
二結合パートナー）との可溶性複合体を含有する。ゾー
ン１５はキャリヤーに固定された形の抗原（Ａｇ
（ｆ）、別の結合パートナー）を含有する。試料が流通
すると、ＡｋＥが溶解され、Ａｇと共に複合体Ａｇ−Ａ
ｋＥを形成する。未結合ＡｋＥはゾーン１５でＡｇ
（ｆ）に結合され、他方Ａｇ−ＡｋＥ複合体は遊離して
いる。液体をさらにゾーン１６中に輸送すると、結合さ
れたＡｋＥと、分析に関して特徴的な、複合化されそれ
故に遊離されているＡｇ−ＡｋＥとが分離される。後者
はゾーン１６で検出されうるが、有利にはゾーン１６に
は標識酵素の呈色性基質が存在している。この試験過程
も公知である。

【００３０】競合的試験の場合には、検出は好ましくは
ゾーン１５で、つまり固定された第二結合パートナーを
有するゾーンで行なわれるけれども、免疫酵素測定法試
験の場合には、固定ゾーン１５に続くゾーン１６が検出
ゾーンとして用いられる。

【００３１】免疫酵素測定法試験は、極めて高い感度お
よび簡素な操作によって優れている。本発明の範囲内で
は、意外にも、この原理に従って動作する試験キャリヤ
ーが、直接的検出のために比較的多量に計量された目標
分析物（０．１μｍｏｌ／ｌよりも大きい濃度）に関し
ても、操作容易性に関する利点を失うことなく有効に使
用されうることが判明した。

【００３２】さらに捕捉試薬も施されているが、このも
のは前記の競合的試験原理の場合と同様に試験キャリヤ
ーのゾーン１３、つまり複合体ゾーンの前に置かれたゾ
ーンの１つの中に溶けているかまたはキャリヤーに固定
された形で含有されていてもよい。

【００３３】極めて好ましくは、捕捉試薬が可溶性の形
で複合体と一緒に同一ゾーン（例の場合には複合体ゾー
ン１４）に存在している、という他の態様もある。この
場合には、捕捉試薬として使用される抗体は、複合体の
場合に使用される抗体と同じ作用特異性を有しなければ
ならない。従って、同一のモノクロナール抗体、場合に
よってはまた極めて狭いエピトープスペクトルを有する
ポリクロナール抗体が好適である。

【００３４】この態様の場合には、酵素標識を有しない
捕捉試薬が複合体と共に目標分析物の特異な結合位置を
求めて競合する。これによって、大体において百分率の
“希釈度”が得られる。つまり検出反応の捕捉試薬によ
って除去される目標分析物の分量が、捕捉試薬／複合体
の割合に近似的に相応する。

【００３５】捕捉試薬を遊離の形で施す手段は、同試薬
が複合体と同じゾーンに配置されている場合に限定され
ない。それどころか本発明は、この手段の十分なる一般
性において、該捕捉試薬が、同試薬にとって適当な、検
出ゾーンの前に置かれた、液体輸送区間のゾーン中に可
溶性の形で含有されている形式の試験キャリヤーも包含
する。

【００３６】捕捉試薬の量は、特定の必要条件に適合し
ている。理論的には、この量は試料中の目標分析物の被
検出最少量（検出限界）よりも小さくなければならな
い、という前提がある。しかし実際には、種々の要因が
問題になる。このような要因には、使用された抗体の親
和定数、特異的な複合体構造および液体が捕捉試薬を含
有するゾーンを通って流れる速度が挙げられる。また、
試料抗原の捕捉試薬への結合がどの程度まで完全である
か、ということも重要である。理論的考察によると、こ
の場合測定結果の著しい狂いを危惧しなければならない
ような大きい不正確さが存在することを恐れなければな
らないであろう。しかし実際には意外にも、高濃度のパ
ラメータの免疫学的測定が良好な精度をもって可能であ
るように、捕捉試薬の量を経験的に決めることができる
ことが判った。

【００３７】捕捉試薬を有する試験ゾーンを形成する吸
収性層材料を、好ましくは、同試験が分析測定の所望の
検出限界にほぼ相応するモル濃度で含有されている含浸
溶液で含浸する。含浸溶液中の捕捉試薬の濃度は少なく
とも、所望の検出限界の半分の大きさでなければならな
い。濃度は絶対数で少なくとも１０~⁸ｍｏｌ／ｌ、好ま
しくは少なくとも１０~⁷ｍｏｌ／ｌである。

【００３８】試料は、必ずしも出発ゾーン１１に供給し
なくてもよい。むしろ特別な試料供給ゾーン１２が設け
られていてもよい。これは、特に付加な試料の希釈を達
成しようとする場合に有利である。この場合には、試料
を過少量で試料供給ゾーン１２に供給する。ここで、
“過少量で”とは、供給した容量が試料供給ゾーンの吸
収容量よりも小さいことを意味する。次に出発ゾーンを
溶離剤（有利には水または緩衝溶液）に接触させる。

【００３９】これによって希釈が達成されうることが判
明した。希釈の度合いは、試料供給ゾーンにピペットで
供給した容量および出発ゾーンの吸収容量によって影響
されうる。この操作法の著しい利点は、任意の時点で試
料を供給しかつ乾燥させうることである。溶離および分
析は、爾後の時点で初めて行なわれる。これによって一
連の試験片テストが集積されうる。

【００４０】試料供給ゾーンの希釈作用にとっては、分
析を妨害する試料の増量がクロマトグラフィー用液体の
前部で起らないことが重要である。それ故に、試料供給
ゾーンにとって有利には、その特有の性質により前記条
件を満足させる材料を選択する。このためには次の作用
原理が必要である： ａ）供給された目標分析物が固相に弱く結合し、溶離剤
によって遅延的に溶離されるように該物質を選択する。

【００４１】ｂ）試料供給ゾーンの材料が、渦流および
／または非層流によって試料と溶離剤との混合が達成さ
れるような構造を有している。

【００４２】第２図は、比較的多量に計量されたパラメ
ータの測定を免疫酵素測定法試験原理を用いて極めて容
易に可能にする試験キャリヤーを示す。該キャリヤー
は、比較的多量に利用されうる試料液、特に尿の中のこ
のようなパラメーターを測定するのに好適である。

【００４３】基礎層２上には、出発ゾーン２１、補助試
薬ゾーン２３、複合体ゾーン２４および固定ゾーン２５
が大体において並列的に配置されている。固定ゾーン２
５の端部２５ａと基礎層との間に呈色ゾーン２６が存在
する。さらに、固定層２５の端部２５ａは、硬質プラス
チック材料から製造された保持層２８によって呈色層２
６に対して押圧されている。保持層は溶融接着剤片２７
で基礎層２に取付けられている。

【００４４】図面においては、ゾーンの縁における液体
接触を改善するために、層２１〜２５がそれぞれ隣接の
層に少し重なっているのが認められる。しかし液体輸送
は、大体において試験キャリヤーの長手方向において、
従ってゾーンがそれから製造されている層材料の表面に
平行に、液体輸送区間３０に沿って行なわれる。

【００４５】試験キャリヤーは、使用する場合、出発ゾ
ーン２１のみが湿潤される場合には、試料液中に浸漬す
る。つまり出発ゾーン２１のみが試料液と接触する。し
たがって出発ゾーン２１は、同ゾーンが液体を自然にか
つ完全に吸収しかつさらに先へ良好に案内し乃至放出す
るような性質でなければならない。ここに存在する種類
の試験片にとっては、試験キャリヤーの実際の動作領域
を形成する、出発ゾーン２１の後に置かれたすべてのゾ
ーンに十分にかつ再現可能に液体が供給されるのが重要
である。これは成程、試験キャリヤーを試料を含む容器
中に放置し、その結果大きな液体供給源に恒常的に接触
することによって達成することはできる。しかしこれは
操作を困難にする。従って、試験片を試料液から再び取
出した後、出発ゾーン２１が数秒内に十分な液体量を吸
収し、試験要件により再び放出するのが望ましい。

【００４６】本例の出発ゾーンは、ヨーロッパ特許出願
第５２３２８号による従来の前記提案とは反対に、水不
溶性結合剤を含有する非膨潤性不織布から成る。

【００４７】非膨潤性繊維材料としては、不織布の含分
が少なくとも５０％でなければならない完全合成繊維が
極めて好ましい。特にポリアミドおよびポリエステルな
らびにこれらの混合物が有利であった。

【００４８】繊維を固定するための結合剤としては、有
利にはポリビニルアルコールを使用することができる。
この結合剤は、特に、不織布を製造する際大形容器で実
際の不織布とポリビニルアルコール繊維とを混合するよ
うにして使用する。次にこれらの繊維を、不織布製造時
の常法により、乾燥ロール上に引上げる。約９０℃〜１
５０℃の乾燥温度でポリビニルアルコール繊維が溶解
し、不織布の残りの成分上に、この不織布に強度を付与
する被覆を形成する。好ましくは、１．２６〜１．３０
ｇ／ｃｍ³の比重を有する高分子の完全ケン化ポリビニ
ルアルコールを使用する。

【００４９】極めて好ましいポリエステル繊維は、約
１．１７ｇ／ｃｍ³の比重、６〜１２ｍｍの切断長さお
よび１．７〜３．３ｄｔｅｘの繊度を有する。

【００５０】ポリアミド繊維を使用する場合には、同繊
維は好ましくは約１．１４〜１．１５ｇ／ｃｍ³の比
重、４〜６ｍｍの切断長さおよび２．２ｄｔｅｘの繊度
を有する。

【００５１】該不織布は、付加的成分としてリンター
（木綿植物の原綿から得られた繊維であって、化学的に
溶解されかつ漂白される）を含有していてもよい。

【００５２】他のゾーンは、第１図で免疫酵素測定法試
験の場合について記載したのと同じ試薬を含有する：補
助試薬ゾーン２３は緩衝剤および場合により他の補助試
薬を含有し、複合体ゾーン２４は目標分析物に特異的に
結合することのできる（第二）結合パートナーの酵素複
合体を含有し、固定ゾーン２５は固相に結合された目標
分析物（つまり目標分析物同族体）を含有し、呈色ゾー
ン２６は標識酵素の呈色基質を含有する。

【００５３】抗原を測定する場合には、複合体ゾーン２
４では相応の抗体の複合体を使用し、固定ゾーン２５で
は同一の抗原または層２４の抗体と結合することのでき
る抗原を使用する。抗体を測定しようとする場合には、
当業者にとって周知のように、それぞれ抗原を抗体と交
換しなければならない。

【００５４】同様に第１図と一致する場合には、捕捉試
薬が施されており、同試薬は好ましくは溶解しており、
層２４における酵素的に複合されたパートナーと同一で
ある。

【００５５】試験過程は第１図による試験キャリヤーの
免疫酵素測定法と同様であって、ここで再び詳述する必
要はない。

【００５６】また第２図による試験キャリヤーの作用に
とっては、種々のゾーンを形成する層材料の液体輸送特
性も極めて重要である。

【００５７】最適試験過程にとって、分析にとって特異
的な標識物が呈色ゾーン２６でその全面に亘って十分に
均質であって、その結果均質な呈色が行なわれることが
必要である。従って、免疫酵素測定法試験の場合には、
分析にとって特徴的な、呈色ゾーン２６におけるＡｇ−
ＡｋＥ複合体の均質な分配を達成することが要求され
る。

【００５８】この意味では、本発明の範囲において、複
合体ゾーンおよびその直後に続くゾーンが製造されてい
る材料がそれらの吸収性に関して互いに調整されてい
て、複合体ゾーンの材料がその直後に続くゾーンの材料
よりも迅速に液体を輸送するようになっている場合が有
利であることが判明した。

【００５９】図示した例の場合には、これは複合体ゾー
ン２４および一般の場合には必ずしも固定ゾーンでなく
てもよい、その直後に続くゾーン２５に関している。２
つのゾーンは同一液体流の中に存在しているので、両ゾ
ーンが充填されると、これらのゾーンは定常状態で単位
時間当り同一液量を輸送しなければならない。それにも
拘らず、複合体ゾーンがその直後に続くゾーンよりも薄
く、そのためにより小さい流動断面を有しているので、
その流速はより小さい。

【００６０】この手段は複合体の均質化を要求する。複
合体は、複合体ゾーン２４における溶液条件および液体
輸送条件に依存して、同ゾーンで入って来る液体によっ
て程度の差こそあれ鋭い前部濃度の意味で溶解される。
これは液体クロマトグラフィーの場合の吸収性層の普通
の挙動に相当する。ここで議論された手段の目的は、そ
れから生じる濃度差を調整することである。先づ複合体
ゾーンが比較的迅速に充填されるが、複合体はまだ僅か
しか溶けない。次に、続行する液体輸送は、次に続くゾ
ーンの液体輸送特性に従って比較的緩慢に行なわれる。
この緩慢な流動の間に複合体はすでにゾーン２４で比較
的均質に溶解する。さらに緩慢な流動はゾーン２５内の
平衡作用ももたらす。

【００６１】免疫酵素測定法試験の場合には、前記のよ
うに、複合体ゾーンの後に固定ゾーンが存在し、一般の
場合には両ゾーンの間に別のゾーンが存在していてもよ
い。ところで本発明の好ましい手段は、固定ゾーンが複
合体ゾーンよりも大きい流動断面を有することを意図す
る。

【００６２】公知の免疫学的試験の場合には、主とし
て、固定層よりも薄い厚さを有する細孔性プラスチック
材料（膜）を使用する、それというのもこのような材料
がキャリヤーに固定された免疫学的試薬の高い保持密度
を許し、液体が同材料中を緩慢に流れるからである。こ
れによって複合体層からの未結合複合体の信頼できる固
定が達成される。これは測定精度にとって極めて重要で
ある。

【００６３】さて前記の公知法とは異なり、本発明の範
囲では好ましくは、比較的ルーズなキャリヤー材料、例
えば紙、織布または（特に好ましくは）不織布を基材と
して製造されている固定層を使用する。この層材料は比
較的厚いので、該固定ゾーンは複合体ゾーンよりも大き
い流動断面を有している。これによってこの場合にも免
疫試薬を極めて多量に保持することができ、該固定層の
製造は膜の場合よりも著しく少ない費用ですむ。複合体
および固定層の前記の調整によって同時に、過剰な複合
体の完全な結合にとって有利な、固定層における比較的
緩慢な流動が得られる。

【００６４】また第２図の試験キャリヤーの場合には、
呈色ゾーンが固定ゾーンの一部と平行に延びかつ固定ゾ
ーンと平面的に液体接触していることによって、層２６
における呈色の均質性も促進される。同時に呈色ゾーン
は、液体が固定ゾーン２５から極めて遅延的に呈色ゾー
ン２６中に入る、つまり呈色反応の開始前に固定ゾーン
２５が大体において完全に充填されているようにゾーン
２６の基質が遅延的に溶解するように有利に形成されて
いる。この点に関しては、西独国特許出願第Ｐ３８２６
０５６．５号および同第Ｐ３８２６０５７．３号を参照
されたい。

【００６５】例 １ 出発ゾーン１１，２１にとって好適な材料の吸水性およ
び水放出性：ヨーロッパ特許出願第５２３２８号記載の
膨潤性スポンジ材料を、本発明による次の３種の材料と
比較した。

【００６６】ａ）ポリアミドとポリエステルとから成る
混合不織布：上記材料を大形容器でクラロン（Ｋｕｒａ
ｌｏｎ）［ポリビニルアルコール、西独国Ｍｏｅｎｃｈ
ｅｎｇｌａｄｂａｃｈ在Ｒｏｈｔｅｘ−Ｔｅｘｔｉｌ社
製］と一緒にポリアミド：ポリエステル：クラロンの割
合＝３０：２０：２．６で混合し、公知法で加工して基
本重量１６０ｇ／ｍ²および厚さ１．０ｍｍを有する不
織布を製造する。

【００６７】ｂ）純粋ポリエステル不織布：ポリエステ
ルとクロラロンとを１０：１の割合で大形容器で混合
し、基本重量１６６ｇ／ｍ²および厚さ１．０ｍｍの不
織布に加工する。

【００６８】ｃ）リンターを含むポリエステル不織布：
ポリエステル、リンターおよびクラロンを５０：２５：
７．５の重量割合で大形容器中で混合し、基本重量２５
０ｇ／ｍ²および厚さ１．４ｍｍを有する不織布に加工
する。

【００６９】これらの不織布の保留性能を次第に示す： 吸水量 水放出量 保留率 ヨーロッパ特許出願 第５２３２８号によ るスポンジ材料 ５６３２ｍｌ／ｍ² ３８６２ｍｌ／ｍ² ３１．４％ 不織布 １８２５ｍｌ／ｍ² １６３６ｍｌ／ｍ² １０．４％ 不織布 １７５１ｍｌ／ｍ² １５６８ｍｌ／ｍ² １０．５％不織布 １８６６ｍｌ／ｍ² １５４８ｍｌ／ｍ² １７．１％ 上表によれば、従来技術のスポンジ材料の場合の吸水量
が最も高い。水放出量についても同じことがいえる。し
かし試験キャリヤーの動作にとって極めて重要なのは、
保留率、つまり特定の限定された実験条件下でそれぞれ
の試験ゾーン中に残留する液体のパーセントである。本
例からは、本発明による３種のすべて不織布の場合の保
留率が従来技術の出発ゾーン材料の場合よりも著しく優
れていることが判る。

【００７０】例 ２ 尿中のアルブミンを測定するための、特に微量蛋白尿を
検出するための試験キャリヤー：第２図による試験キャ
リヤーを次のように製造する。

【００７１】出発ゾーン１１：ポリエステル不織布（西
独国Ｈａｔｚｆｅｌｄ在Ｂｉｎｚｅｒ社）。これはクラ
ロン１０％で補強された純粋ポリエステル不織布であ
る。厚さ１．０〜１．２ｍｍ、吸収容量＝１８００ｍｌ
／ｍ²。

【００７２】緩衝剤ゾーン２３：厚さ０．７ｍｍおよび
吸収容量４８０ｍｌ／ｍ²を有する不織布材料ＳＬ４２
０７ＫＡ［西独国Ｅｕｓｋｉｒｃｈｅｎ在Ｋａｌｆｆ社
製；ポリエステル９０％、ビスコースステープルファイ
バー１０％およびアクリレート少量から成る］に次の溶
液を含浸し、次に含浸材料を乾燥させる：燐酸ナトリウ
ム（ｐＨ７．８）２００ｍＭ ウシ血清アルブミン１％ 複合体ゾーン２４：ガラス繊維１００重量部から成り、
クラロン１０重量部で補強した、厚さ０．２ｍｍおよび
吸収容量２００ｍｌ／ｍ²のガラス繊維不織布に次の溶
液を含浸し、次に含浸材料を乾燥させる：燐酸ナトリウ
ム（ｐＨ７．４）７０ｍＭ、トレハロース１％ ウシ血清アルブミン０．５％、β−ガラクトシダーゼお
よび目標分析物特異性抗体（ＩｇＧ）から成る複合体６
ｋＵ／ｌ、捕捉試薬としての未標識の目標分析物特異性
抗体（ＩｇＧ）７０ｍｇ／ｌ。

【００７３】固定ゾーン２５：重量比５０：５０：３の
ポリエステル、木綿リンターおよびエタヅリン（Ｅｔａ
ｄｕｒｉｎ：登録商標）から成り、厚さ０．５ｍｍおよ
び吸収容量４５０ｍｌ／ｍ²を有する混合不織布に次の
溶液を含浸し、次にこの含浸布を５０℃で３０分乾燥さ
せる：燐酸ナトリウム１０ｍＭの緩衝液（ｐＨ７．
５）、濃度２００ｍｇ／ｌ（燐酸ナトリウム緩衝液）の
架橋ヒト血清アルブミン。

【００７４】上記架橋ヒト血清アルブミンは次のようし
て製造した：ヒト血清アルビミン１．５ｇを、燐酸カリ
ウム緩衝液（２００ｍＭ、ｐＨ８．０）３０ｍｌ中に仕
込み、スベリン酸ジスクシニジル５０ｍｇ／ｍｌジオキ
サンから成る溶液２．５ｍｌを２時間以内で加えた。架
橋反応経過後に、５００倍容の燐酸カルシウム緩衝液
（２０ｍＭ、ｐＨ７．２）に対して透析した。６５００
００よりも大きい分子量を有する高分子画分をズペロー
ゼ６（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６：登録商標）（西独国Ｆｒｅ
ｉｂｕｒｇ在Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を用いてゲル濾過
によって分離し、サッカロース６ｍｇ／ｍｇタンパク質
を加えた後凍結乾燥する。

【００７５】呈色ゾーン２６：厚さ０．１ｍｍのポリカ
ーボネートシート上に次の調剤で可溶性フィルムを被覆
させる：モヴイオール１８／８８（西独国Ｆｒａｎｋｕ
ｒｔ／Ｍ．在Ｈｏｅｈｓｔ社）４．５ｇ、水５０ｍｌ中
に溶かしたオルトーニトロフェノール−β−ガラクトシ
ド０．３ｇ。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の試験キャリヤーのゾーン列を説明する
ための原理図である。

【図２】本発明の試験キャリヤーの斜視図である。

【符号の説明】

１１〜１６；２１〜２５ 試験ゾーン ２ 基礎層 １１，２１ 出発ゾーン １４，２４ 複合体ゾーン １６，２６ 検出ゾーン ２０，３０ 液体輸送区間

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 デイーター マンゴルト ドイツ連邦共和国 マルクスドルフ ヒユ ツテンミユラーシユトラーセ 33 (72)発明者 ロルフ レルヒ ドイツ連邦共和国 イルフエスハイム レ ツシングシユトラーセ ４ (72)発明者 ヨアヒム シユタインビス ドイツ連邦共和国 ロルシユ アレキサン ダーシユトラーセ 21アー

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ２種類の生物親和性結合パートナーのう
   ち第一の結合パートナーが試料中に含有されていて、第
   二の結合パートナーが試験キャリヤーの試薬系に含有さ
   れており；基礎層（２）上に大体において並置された数
   個の毛管活性試験ゾーン（１１〜１６，２１〜２５）を
   有し、これらのゾーンが液体接触していて、基礎層に対
   して平行に延びる液体輸送区間（２０，３０）を形成
   し、同区間に沿って毛管作用によって駆動される液体が
   出発ゾーン（１１，２１）から流れ；この液体輸送区間
   が順次に、試験キャリヤーに試料を供給するための試料
   供給ゾーン（１２）、１種類の生物親和性結合パートナ
   ーの標試複合体を含有する複合体ゾーン（１４，２４）
   及び検出ゾーン（１６，２６）を包含しておりかつ第一
   結合パートナーと、第二結合パートナーを含有する試薬
   系との間で、所望の分析にとって特異的な標識物を形成
   する反応が進行しかつ前記特異的標識物が検出ゾーン
   （１６，２６）で検出されることから成る構造の前記２
   種類の結合パートナーの特異的結合的反応によって試料
   液を分析検査するための試験キャリヤーにおいて、 出発ゾーン（１１，２１）が水不溶性結合剤を含有する
   非膨潤性不織布から成ることを特徴とする、２種類の生
   物親和性パートナーの特異的結合反応によって試料液を
   分析検査するための試料キャリヤー。