JPH08233796A - カテコールアミン分析方法 - Google Patents
カテコールアミン分析方法Info
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- JPH08233796A JPH08233796A JP7035348A JP3534895A JPH08233796A JP H08233796 A JPH08233796 A JP H08233796A JP 7035348 A JP7035348 A JP 7035348A JP 3534895 A JP3534895 A JP 3534895A JP H08233796 A JPH08233796 A JP H08233796A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】液体クロマトグラフを利用するカテコールアミ
ンの分析において薬物による妨害を受けにくくし、測定
の信頼性を向上させる。 【構成】試料中のカテコールアミンを高速液体クロマト
グラフィーの前処理カラムに導入して粗精製した後、分
離カラムに導入して分離することでその分析を行う方法
において、分離カラムとして逆層カラムを使用すること
を特徴とする、試料中のカテコールアミンの分析方法。
ンの分析において薬物による妨害を受けにくくし、測定
の信頼性を向上させる。 【構成】試料中のカテコールアミンを高速液体クロマト
グラフィーの前処理カラムに導入して粗精製した後、分
離カラムに導入して分離することでその分析を行う方法
において、分離カラムとして逆層カラムを使用すること
を特徴とする、試料中のカテコールアミンの分析方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、高血圧症や神経系疾患
の診断に利用されている、試料中のカテコールアミンの
分析方法に関する。
の診断に利用されている、試料中のカテコールアミンの
分析方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体液等の試料中のカテコールアミン量
の分析は、その量が微量であるため、検出感度を高めた
種々の高速液体クロマトグラフ法で行われている。特に
近年では、カテコールアミンと特異的に反応し蛍光誘導
体となる１、２−ジフェニルエチレンジアミンを用い、
カラムスイッチングを利用した高速液体クロマトグラフ
法が多く使われている（Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ １９９３年、３０巻、１３５〜１４１頁）。即
ち、高速液体クロマトグラフにおいて、カラムスイッチ
ングを利用して逆層系カラム、カチオン交換カラムの２
本の前処理カラムにより前処理を行った後、カチオン交
換カラムでカテコールアミン成分を分離して分析する。
の分析は、その量が微量であるため、検出感度を高めた
種々の高速液体クロマトグラフ法で行われている。特に
近年では、カテコールアミンと特異的に反応し蛍光誘導
体となる１、２−ジフェニルエチレンジアミンを用い、
カラムスイッチングを利用した高速液体クロマトグラフ
法が多く使われている（Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ １９９３年、３０巻、１３５〜１４１頁）。即
ち、高速液体クロマトグラフにおいて、カラムスイッチ
ングを利用して逆層系カラム、カチオン交換カラムの２
本の前処理カラムにより前処理を行った後、カチオン交
換カラムでカテコールアミン成分を分離して分析する。
【０００３】この方法によれば、血中の重要なカテコー
ルアミンの一成分であるが量が極微量であるドーパミン
であっても、１、２−ジフェニルエチレンジアミンと高
感度の蛍光誘導体を生成するため蛍光検出により測定が
可能となる。
ルアミンの一成分であるが量が極微量であるドーパミン
であっても、１、２−ジフェニルエチレンジアミンと高
感度の蛍光誘導体を生成するため蛍光検出により測定が
可能となる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】１、２−ジフェニルエ
チレンジアミンを蛍光誘導体試薬として用いる高速液体
クロマトグラフ法において、被検者が薬物投与を受けて
いる場合、試料中に投与された薬物が混入し、この結
果、カテコールアミン分析が影響を受けてしまい、正確
な測定が行えない場合があることが報告されるようにな
っている（臨床検査機器・試薬、第ＸＩ−４号、６３５
〜６４１頁）。
チレンジアミンを蛍光誘導体試薬として用いる高速液体
クロマトグラフ法において、被検者が薬物投与を受けて
いる場合、試料中に投与された薬物が混入し、この結
果、カテコールアミン分析が影響を受けてしまい、正確
な測定が行えない場合があることが報告されるようにな
っている（臨床検査機器・試薬、第ＸＩ−４号、６３５
〜６４１頁）。
【０００５】
【問題を解決するための手段】本発明者らは、従来から
使用されている１、２−ジフェニルエチレンジアミンを
蛍光誘導体試薬として用いて試料中のカテコ−ルアミン
を高速液体クロマトグラフ法で分析する方法において、
前述のような薬物混入に影響を排除することを目的とし
て鋭意研究を行った結果、本発明を完成するに至った。
使用されている１、２−ジフェニルエチレンジアミンを
蛍光誘導体試薬として用いて試料中のカテコ−ルアミン
を高速液体クロマトグラフ法で分析する方法において、
前述のような薬物混入に影響を排除することを目的とし
て鋭意研究を行った結果、本発明を完成するに至った。
【０００６】即ち本発明は、試料中のカテコールアミン
を高速液体クロマトグラフィーの前処理カラムに導入し
て粗精製した後、分離カラムに導入してその分析を行う
方法において、分離カラムとして逆層カラムを使用する
ことを特徴とする、試料中のカテコールアミンの分析方
法であり、特に好適な態様として、試料中のカテコール
アミンを高速液体クロマトグラフィーの前処理カラムに
導入して粗精製した後、分離カラムに導入してその分析
を行う方法において、分離カラムで分離されたカテコ−
ルアミン含有画分に１、２−ジフェニルエチレンジアミ
ンを添加してカテコールアミンを蛍光誘導体とし、当該
蛍光誘導体を検出することを特徴とする、試料中のカテ
コールアミンの分析方法である。以下、本発明を詳細に
説明する。
を高速液体クロマトグラフィーの前処理カラムに導入し
て粗精製した後、分離カラムに導入してその分析を行う
方法において、分離カラムとして逆層カラムを使用する
ことを特徴とする、試料中のカテコールアミンの分析方
法であり、特に好適な態様として、試料中のカテコール
アミンを高速液体クロマトグラフィーの前処理カラムに
導入して粗精製した後、分離カラムに導入してその分析
を行う方法において、分離カラムで分離されたカテコ−
ルアミン含有画分に１、２−ジフェニルエチレンジアミ
ンを添加してカテコールアミンを蛍光誘導体とし、当該
蛍光誘導体を検出することを特徴とする、試料中のカテ
コールアミンの分析方法である。以下、本発明を詳細に
説明する。
【０００７】従来多く用いられている、１、２−ジフェ
ニルエチレンジアミンを蛍光誘導体試薬として用いる高
速液体クロマトグラフ法では、カラムスイッチングを利
用して逆層カラム及びカチオン交換カラムの２本の前処
理カラムで前処理を行った後、カチオン交換カラムでカ
テコールアミン成分を分離する。しかし本発明において
は、このカラムスイッチング法又はその他の方法により
逆層カラム及びカチオン交換カラムの２本の前処理カラ
ムで前処理を行った後、逆層系カラムでカテコールアミ
ン成分を分離する。
ニルエチレンジアミンを蛍光誘導体試薬として用いる高
速液体クロマトグラフ法では、カラムスイッチングを利
用して逆層カラム及びカチオン交換カラムの２本の前処
理カラムで前処理を行った後、カチオン交換カラムでカ
テコールアミン成分を分離する。しかし本発明において
は、このカラムスイッチング法又はその他の方法により
逆層カラム及びカチオン交換カラムの２本の前処理カラ
ムで前処理を行った後、逆層系カラムでカテコールアミ
ン成分を分離する。
【０００８】前処理カラムとしての逆層カラムは、シリ
カ系又はポリマー系のゲルに交換基としてオクタデシル
基、オクチル基、フェニル基等を導入したゲルを充填し
たカラムを使用することができる。ここで、ポリマ−系
のゲルであってその表面が疎水性の性質を持つゲルであ
れば、交換基を導入していないゲルを充填したカラムで
あっても良い。
カ系又はポリマー系のゲルに交換基としてオクタデシル
基、オクチル基、フェニル基等を導入したゲルを充填し
たカラムを使用することができる。ここで、ポリマ−系
のゲルであってその表面が疎水性の性質を持つゲルであ
れば、交換基を導入していないゲルを充填したカラムで
あっても良い。
【０００９】前処理カラムとしてのカチオン交換カラム
は、シリカ系又はポリマー系のゲルに交換基としてスル
ホン基、カルボキシル基等を導入したゲルを充填したカ
ラムを使用することができる。
は、シリカ系又はポリマー系のゲルに交換基としてスル
ホン基、カルボキシル基等を導入したゲルを充填したカ
ラムを使用することができる。
【００１０】分離カラムとしての逆層カラムは、シリカ
系又はポリマー系のゲルに交換基としてオクタデシル
基、オクチル基、フェニル基等を導入したゲルを充填し
たカラムを使用することができる。
系又はポリマー系のゲルに交換基としてオクタデシル
基、オクチル基、フェニル基等を導入したゲルを充填し
たカラムを使用することができる。
【００１１】以上、本発明では２種類以上のカラムを使
用するが、それぞれのカラムで使用する溶離液は、カラ
ムの種類及び使用目的により組成を変化させるのが普通
である。例えば分離カラムで使用する溶離液は、カテコ
ールアミンの分離能が良くなるように、ｐＨが３〜５
で、硫酸イオンやオクチル硫酸イオン等のイオンペア試
薬を含んだ溶液が好ましい。一方前処理カラムで使用す
る溶離液は、逆層カラム用では効率よくカテコ−ルアミ
ン画分をトラップできるように、酢酸緩衝液やクエン酸
緩衝液等の緩衝液に、硫酸イオンやオクチル硫酸イオン
等のイオンペア試薬を含んだ溶液が好ましい。カチオン
交換カラム用ではカテコ−ルアミン画分以外の疎水性物
質をトラップしないように、酢酸緩衝液やクエン酸緩衝
液等の緩衝液にエタノ−ルやアセトニトリル等の有機溶
媒を含んだ溶液が好ましい。
用するが、それぞれのカラムで使用する溶離液は、カラ
ムの種類及び使用目的により組成を変化させるのが普通
である。例えば分離カラムで使用する溶離液は、カテコ
ールアミンの分離能が良くなるように、ｐＨが３〜５
で、硫酸イオンやオクチル硫酸イオン等のイオンペア試
薬を含んだ溶液が好ましい。一方前処理カラムで使用す
る溶離液は、逆層カラム用では効率よくカテコ−ルアミ
ン画分をトラップできるように、酢酸緩衝液やクエン酸
緩衝液等の緩衝液に、硫酸イオンやオクチル硫酸イオン
等のイオンペア試薬を含んだ溶液が好ましい。カチオン
交換カラム用ではカテコ−ルアミン画分以外の疎水性物
質をトラップしないように、酢酸緩衝液やクエン酸緩衝
液等の緩衝液にエタノ−ルやアセトニトリル等の有機溶
媒を含んだ溶液が好ましい。
【００１２】被検者からの血液や血清等の生体試料につ
いて、上述のような前処理及び分離カラム処理をするこ
とにより、例えば試料が薬物投与を受けている被検者か
らのものであっても、その影響を排除したカテコ−ルア
ミン画分を取得することができる。従って、取得された
カテコ−ルアミン画分について電気化学検出器による測
定等、通常の操作を行うことで、試料中のカテコ−ルア
ミンを検出し、測定することが可能である。ここで、本
発明では前処理カラム及び分離カラムを使用することか
ら、実施例で示すようなカラムスイッチング法を採用す
ることが操作の容易性、短時間化等の面から好ましい。
いて、上述のような前処理及び分離カラム処理をするこ
とにより、例えば試料が薬物投与を受けている被検者か
らのものであっても、その影響を排除したカテコ−ルア
ミン画分を取得することができる。従って、取得された
カテコ−ルアミン画分について電気化学検出器による測
定等、通常の操作を行うことで、試料中のカテコ−ルア
ミンを検出し、測定することが可能である。ここで、本
発明では前処理カラム及び分離カラムを使用することか
ら、実施例で示すようなカラムスイッチング法を採用す
ることが操作の容易性、短時間化等の面から好ましい。
【００１３】例えば分離カラムで分離されたカテコ−ル
アミン画分に対し、１、２−ジフェニルエチレンジアミ
ン等を添加して反応させ、蛍光誘導体を生成させ、蛍光
検出を実施すれば、容易にカテコ−ルアミンを測定する
ことができる。このように蛍光誘導体を生成させるに
は、他に例えばエチレンジアミンと反応させる方法等が
例示できる。また例えば、１、２−ジフェニルエチレン
ジアミン又はエチレンジアミンと反応させて蛍光誘導体
を生成させた後、過シュウ酸エステル化学発光反応を利
用して発光検出器により測定する方法等も使用すること
ができる。
アミン画分に対し、１、２−ジフェニルエチレンジアミ
ン等を添加して反応させ、蛍光誘導体を生成させ、蛍光
検出を実施すれば、容易にカテコ−ルアミンを測定する
ことができる。このように蛍光誘導体を生成させるに
は、他に例えばエチレンジアミンと反応させる方法等が
例示できる。また例えば、１、２−ジフェニルエチレン
ジアミン又はエチレンジアミンと反応させて蛍光誘導体
を生成させた後、過シュウ酸エステル化学発光反応を利
用して発光検出器により測定する方法等も使用すること
ができる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を実施例により更に詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
【００１５】実施例１ 図１に示した構成の装置を用いてカテコ−ルアミンの分
析を行った。ポンプ（１〜４）の流速は、それぞれ１．
４、１．０、０．４、０．４ｍｌ／分に設定した。前処
理カラム１（１０）、２（１１）及び分離カラム（１
２）としては、それぞれ市販のカラム（ＴＳＫｐｒｅｃ
ｏｌｕｍｎＣＡＨＳ１、ＴＳＫｐｒｅｃｏｌｕｍｎＣＡ
２、ＴＳＫｇｅｌＯＤＳ−８０Ｔｍ（６．０ｍｍＩ．
Ｄ．ｘ１５ｃｍ）、東ソー（株）製）を使用した。
析を行った。ポンプ（１〜４）の流速は、それぞれ１．
４、１．０、０．４、０．４ｍｌ／分に設定した。前処
理カラム１（１０）、２（１１）及び分離カラム（１
２）としては、それぞれ市販のカラム（ＴＳＫｐｒｅｃ
ｏｌｕｍｎＣＡＨＳ１、ＴＳＫｐｒｅｃｏｌｕｍｎＣＡ
２、ＴＳＫｇｅｌＯＤＳ−８０Ｔｍ（６．０ｍｍＩ．
Ｄ．ｘ１５ｃｍ）、東ソー（株）製）を使用した。
【００１６】溶液Ａ（２１）及びＢ（２２）は、それぞ
れ酢酸ナトリウムを含む市販のカテコ−ルアミン分析用
の溶離液（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５Ｃ
Ａ用溶離液Ａ、東ソ−（株）製）、アセトニトリルを含
む市販の溶離液（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７
２５ＣＡ用溶離液Ｂ、東ソ−（株）製）を使用した。溶
液Ｃ（２３）としては１５０ｍＭの硝酸ナトリウム、１
０ｍＭのオクチル硫酸ナトリウム及び５ｍＭリン酸ナト
リウムを含むｐＨ３．５の溶液を使用した。溶液Ｄ（２
４）及びＥ（２６）としては、１，２−ジフェニルエチ
レンジアミンを含む市販のカテコ−ルアミン分析用の反
応試薬（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５ＣＡ
用反応試薬、東ソ−（株）製）を５０％エタノ−ル溶液
で調製した溶液、フェリシアン化カリウムを含む市販の
反応液（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５ＣＡ
用反応液Ｅ、東ソ−（株）製）を使用した。
れ酢酸ナトリウムを含む市販のカテコ−ルアミン分析用
の溶離液（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５Ｃ
Ａ用溶離液Ａ、東ソ−（株）製）、アセトニトリルを含
む市販の溶離液（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７
２５ＣＡ用溶離液Ｂ、東ソ−（株）製）を使用した。溶
液Ｃ（２３）としては１５０ｍＭの硝酸ナトリウム、１
０ｍＭのオクチル硫酸ナトリウム及び５ｍＭリン酸ナト
リウムを含むｐＨ３．５の溶液を使用した。溶液Ｄ（２
４）及びＥ（２６）としては、１，２−ジフェニルエチ
レンジアミンを含む市販のカテコ−ルアミン分析用の反
応試薬（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５ＣＡ
用反応試薬、東ソ−（株）製）を５０％エタノ−ル溶液
で調製した溶液、フェリシアン化カリウムを含む市販の
反応液（カテコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５ＣＡ
用反応液Ｅ、東ソ−（株）製）を使用した。
【００１７】三方電磁弁１（６）、２（７）、切り換え
バルブ１（１３）、２（１４）の切り換え時間を、それ
ぞれＯＮ３２．０−ＯＦＦ３４．０、ＯＮ３８．０−Ｏ
ＦＦ４０．０、ＯＮ０．０−ＯＦＦ１．１、ＯＮ５．５
−ＯＦＦ３２．０分とした。測定試料のインジェクショ
ンは４５分ごとにした。既知試料の溶出パタ−ンを得る
ために、ノリエピネフリン（以下ＮＥとする）、エピネ
フリン（以下Ｅとする）及びドーパミン（以下ＤＡとす
る）の３種類がそれぞれ１ｐｍｏｌ／ｍｌの濃度で含ま
れた試料を測定したところ、検出時間はそれぞれ１６．
７６、２０．１６、３０．５０分となった。この結果を
図２に示す。
バルブ１（１３）、２（１４）の切り換え時間を、それ
ぞれＯＮ３２．０−ＯＦＦ３４．０、ＯＮ３８．０−Ｏ
ＦＦ４０．０、ＯＮ０．０−ＯＦＦ１．１、ＯＮ５．５
−ＯＦＦ３２．０分とした。測定試料のインジェクショ
ンは４５分ごとにした。既知試料の溶出パタ−ンを得る
ために、ノリエピネフリン（以下ＮＥとする）、エピネ
フリン（以下Ｅとする）及びドーパミン（以下ＤＡとす
る）の３種類がそれぞれ１ｐｍｏｌ／ｍｌの濃度で含ま
れた試料を測定したところ、検出時間はそれぞれ１６．
７６、２０．１６、３０．５０分となった。この結果を
図２に示す。
【００１８】以下のものを測定試料として測定操作を実
施した。その結果は図３、図４及び表１〜表３に示す。
施した。その結果は図３、図４及び表１〜表３に示す。
【００１９】Ａ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ
０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、イソ
プロテノ−ル ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｂ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、エピニン ０．５ｐ
ｍｏｌ／ｍｌ Ｃ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、ジヒドロキシベンジ
ルアミン ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｄ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、アルファメチルエピ
ネフリン ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｅ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、メチルド−パ ０．
５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｆ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、オフロキサシン １
０μｇ／ｍｌ Ｇ；実際にさまざまな薬物投与を受けている被検者の血
漿検体３５種類。
０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、イソ
プロテノ−ル ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｂ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、エピニン ０．５ｐ
ｍｏｌ／ｍｌ Ｃ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、ジヒドロキシベンジ
ルアミン ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｄ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、アルファメチルエピ
ネフリン ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｅ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、メチルド−パ ０．
５ｐｍｏｌ／ｍｌ Ｆ：ＮＥ ０．５ｐｍｏｌ／ｍｌ、Ｅ ０．５ｐｍｏｌ
／ｍｌ、ＤＡ ０．５ｍｌ／ｍｌ、オフロキサシン １
０μｇ／ｍｌ Ｇ；実際にさまざまな薬物投与を受けている被検者の血
漿検体３５種類。
【００２０】なお、被検者の血漿試料については、文献
に記載された方法（Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ
１９９３年、３０巻、１３５〜１４１頁）と同様に前
処理操作を行い測定を行った。
に記載された方法（Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ
１９９３年、３０巻、１３５〜１４１頁）と同様に前
処理操作を行い測定を行った。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【表２】
【００２３】
【表３】
【００２４】図１に示した装置において、分離カラム
（１２）として市販のカチオン交換カラム（ＴＳＫｇｅ
ｌカテコールパック、東ソ−（株）製）を用い、かつ溶
液Ｃとして市販のカテコ−ルアミン分析用の溶離液（カ
テコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５ＣＡ用溶離液
Ｃ、東ソ−（株）製）を用いた以外は同様の装置を使用
し、同様の操作を行った。
（１２）として市販のカチオン交換カラム（ＴＳＫｇｅ
ｌカテコールパック、東ソ−（株）製）を用い、かつ溶
液Ｃとして市販のカテコ−ルアミン分析用の溶離液（カ
テコ−ルアミン分析装置ＨＬＣ−７２５ＣＡ用溶離液
Ｃ、東ソ−（株）製）を用いた以外は同様の装置を使用
し、同様の操作を行った。
【００２５】測定試料のインジェクションは２５分ごと
にした。既知試料の溶出パタ−ンを得るために、ＮＥ、
Ｅ及びＤＡの３種類がそれぞれ１ｐｍｏｌ／ｍｌの濃度
で含まれた試料を測定したところ、検出時間はそれぞれ
２６．２３、２３．７２、２８．８７分となった。この
結果を図５に示す。
にした。既知試料の溶出パタ−ンを得るために、ＮＥ、
Ｅ及びＤＡの３種類がそれぞれ１ｐｍｏｌ／ｍｌの濃度
で含まれた試料を測定したところ、検出時間はそれぞれ
２６．２３、２３．７２、２８．８７分となった。この
結果を図５に示す。
【００２６】前述と同様の試料を用いて測定を行った。
その結果を図３、図４、表１、表２に前記の結果と合わ
せて示す。これらの結果から、さまざまな薬物を含むカ
テコ−ル標準試料Ａ〜Ｆにおいて、分離カラムにカチオ
ン交換カラムを使用する従来の方法では試料ＡでＥ及び
ＤＡに、Ｂ及びＣでＤＡに、Ｄ及びＥでＮＥ、Ｅ及びＤ
Ａに影響が生じることが分かる。これに対して分離カラ
ムに逆層カラムを使用する本発明の方法では、標準試料
Ａ〜Ｆを精度良く測定可能であった。
その結果を図３、図４、表１、表２に前記の結果と合わ
せて示す。これらの結果から、さまざまな薬物を含むカ
テコ−ル標準試料Ａ〜Ｆにおいて、分離カラムにカチオ
ン交換カラムを使用する従来の方法では試料ＡでＥ及び
ＤＡに、Ｂ及びＣでＤＡに、Ｄ及びＥでＮＥ、Ｅ及びＤ
Ａに影響が生じることが分かる。これに対して分離カラ
ムに逆層カラムを使用する本発明の方法では、標準試料
Ａ〜Ｆを精度良く測定可能であった。
【００２７】また被検者からの試料についても、従来法
では測定不能のものが多数確認されたが、本発明の方法
ではその数が著しく減少した。
では測定不能のものが多数確認されたが、本発明の方法
ではその数が著しく減少した。
【００２８】
【発明の効果】さまざまな薬物の含まれたカテコールア
ミン試料を測定すると、分離カラムにカチオン交換カラ
ムを使用する従来の方法ではエピネフリン、ドーパミン
及びノリエピネフリン等の分析に影響が生じ、正確な測
定が困難となり、時には測定不能の事態が生じることも
ある。
ミン試料を測定すると、分離カラムにカチオン交換カラ
ムを使用する従来の方法ではエピネフリン、ドーパミン
及びノリエピネフリン等の分析に影響が生じ、正確な測
定が困難となり、時には測定不能の事態が生じることも
ある。
【００２９】これに対して本発明では、これら薬物の含
まれたカテコールアミン試料について、より正確な分析
が可能になると同時に、測定不能の事態を減少させるこ
とが可能である。
まれたカテコールアミン試料について、より正確な分析
が可能になると同時に、測定不能の事態を減少させるこ
とが可能である。
【００３０】本発明の分析方法は、例えばカラムスイッ
チング法を使用することにより全自動化することも可能
であり、臨床的に重要なカテコ−ルアミン分析を、より
迅速かつ正確でしかも自動的に実施することを可能とす
るものである。
チング法を使用することにより全自動化することも可能
であり、臨床的に重要なカテコ−ルアミン分析を、より
迅速かつ正確でしかも自動的に実施することを可能とす
るものである。
【図１】実施例１で使用したカテコ−ルアミン分析装置
の概要図。
の概要図。
【図２】実施例１のカテコールアミン標準試料の分析結
果のクロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリ
エピネフリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。
果のクロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリ
エピネフリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。
【図３】実施例１中の対照実験におけるカテコールアミ
ン標準試料の分析結果のクロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、
ＤＡはそれぞれノリエピネフリン、エピネフリン、ドー
パミンを示す。
ン標準試料の分析結果のクロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、
ＤＡはそれぞれノリエピネフリン、エピネフリン、ドー
パミンを示す。
【図４】実施例１の試料Ａ〜Ｆの分析結果のクロマト
図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネフリ
ン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題に´
を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネフリ
ン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題に´
を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
【図５】実施例１の血漿検体１〜８の分析結果のクロマ
ト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネフリ
ン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題に´
を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
ト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネフリ
ン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題に´
を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
【図６】実施例１の血漿検体９〜１６の分析結果のクロ
マト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネフ
リン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題に
´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
マト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネフ
リン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題に
´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
【図７】実施例１の血漿検体１７〜２４の分析結果のク
ロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネ
フリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題
に´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
ロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネ
フリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題
に´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
【図８】実施例１の血漿検体２５〜３２の分析結果のク
ロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネ
フリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題
に´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
ロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネ
フリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題
に´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
【図９】実施例１の血漿検体３３〜３５の分析結果のク
ロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネ
フリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題
に´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
ロマト図。図中のＮＥ、Ｅ、ＤＡはそれぞれノリエピネ
フリン、エピネフリン、ドーパミンを示す。なお、標題
に´を付したのは、対照実験の結果であることを示す。
１：ポンプ１ ２：ポンプ２ ３：ポンプ３ ４：ポンプ４ ５：脱気装置 ６：３方電磁弁１ ７：３方電磁弁２ ８：３方電磁弁３ ９：３方電磁弁４ １０：前処理カラム１ １１：前処理カラム２ １２：分離カラム １３：切り換えバルブ１（図中、実線はＯＦＦを点線は
ＯＮの状態を示す） １４：切り換えバルブ２（図中、実線はＯＦＦを点線は
ＯＮの状態を示す） １５：インジェクションバルブ３ １６：サンプルループ １７：測定試料 １８：シリンジポンプ １９：反応オーブン ２０：蛍光検出器 ２１：溶液Ａ ２２：溶液Ｂ ２３：溶液Ｃ ２４：溶液Ｄ ２５：イオン交換水 ２６：溶液Ｅ
ＯＮの状態を示す） １４：切り換えバルブ２（図中、実線はＯＦＦを点線は
ＯＮの状態を示す） １５：インジェクションバルブ３ １６：サンプルループ １７：測定試料 １８：シリンジポンプ １９：反応オーブン ２０：蛍光検出器 ２１：溶液Ａ ２２：溶液Ｂ ２３：溶液Ｃ ２４：溶液Ｄ ２５：イオン交換水 ２６：溶液Ｅ
Claims (7)
- 【請求項１】 試料中のカテコールアミンを高速液体ク
ロマトグラフィーの前処理カラムに導入して粗精製した
後、分離カラムに導入して分離することでその分析を行
う方法において、分離カラムとして逆層カラムを使用す
ることを特徴とする、試料中のカテコールアミンの分析
方法。 - 【請求項２】 逆層カラムがシリカ系又はポリマ−系の
基材にオクタデシル基、オクチル基又はフェニル基を導
入したゲルを充填したカラムであることを特徴とする、
請求項１の分析方法。 - 【請求項３】 前処理カラムとしてカチオン交換カラム
及び逆層カラムを使用することを特徴とする、請求項１
の分析方法。 - 【請求項４】 前処理用逆層カラムがシリカ系又はポリ
マ−系の基材にオクタデシル基、オクチル基又はフェニ
ル基を導入したゲルを充填したカラムであることを特徴
とする、請求項３の分析方法。 - 【請求項５】 前処理用カチオン交換カラムがシリカ系
又はポリマ−系の基材にスルホン基又はカルボキシル基
を導入したゲルを充填したカラムであることを特徴とす
る、請求項３の分析方法。 - 【請求項６】 蛍光試薬として１、２−ジフェニルエチ
レンジアミンを使用することを特徴とする、請求項１の
分析方法。 - 【請求項７】 試料中のカテコールアミンを高速液体ク
ロマトグラフィーの前処理カラムに導入して粗精製した
後、分離カラムに導入して分離することでその分析を行
う方法において、分離カラムで分離されたカテコ−ルア
ミン含有画分に１、２−ジフェニルエチレンジアミンを
添加してカテコールアミンを蛍光誘導体とし、当該蛍光
誘導体を検出することを特徴とする、試料中のカテコー
ルアミンの分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7035348A JPH08233796A (ja) | 1995-02-23 | 1995-02-23 | カテコールアミン分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7035348A JPH08233796A (ja) | 1995-02-23 | 1995-02-23 | カテコールアミン分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08233796A true JPH08233796A (ja) | 1996-09-13 |
Family
ID=12439363
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7035348A Pending JPH08233796A (ja) | 1995-02-23 | 1995-02-23 | カテコールアミン分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08233796A (ja) |
-
1995
- 1995-02-23 JP JP7035348A patent/JPH08233796A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040324 |
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| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20040325 |