JPH08242849A - 限外濾過によるタンパク質溶液からのウイルスの除去 - Google Patents
限外濾過によるタンパク質溶液からのウイルスの除去Info
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- JPH08242849A JPH08242849A JP8022195A JP2219596A JPH08242849A JP H08242849 A JPH08242849 A JP H08242849A JP 8022195 A JP8022195 A JP 8022195A JP 2219596 A JP2219596 A JP 2219596A JP H08242849 A JPH08242849 A JP H08242849A
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- filtration
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
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- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 タンパク質溶液から濾過によって全般的にウ
イルスを除去する方法の提供。 【解決手段】 除去すべきウイルスをリガンドと結合さ
せることによってサイズを増大させ、濾過によってフィ
ルター上に保持させことにより、タンパク質溶液からウ
イルスを除去する。
イルスを除去する方法の提供。 【解決手段】 除去すべきウイルスをリガンドと結合さ
せることによってサイズを増大させ、濾過によってフィ
ルター上に保持させことにより、タンパク質溶液からウ
イルスを除去する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、水溶液、一般的に
はタンパク質溶液から、限外濾過によってウイルスを除
去する方法に関する。これは、除去すべきウイルスを、
それに結合する高分子量リガンド、好ましくは特異的な
抗体とインキュベートすることによりサイズを増大さ
せ、その結果、一方では分離効率を改良し、他方では選
択可能ななった使用フィルターの大きな孔径により、タ
ンパク質溶液中に存在する大きなタンパク分子から小さ
なウイルスを分離することが可能になり、また適宜濾過
速度を増大させることもできるようになる。
はタンパク質溶液から、限外濾過によってウイルスを除
去する方法に関する。これは、除去すべきウイルスを、
それに結合する高分子量リガンド、好ましくは特異的な
抗体とインキュベートすることによりサイズを増大さ
せ、その結果、一方では分離効率を改良し、他方では選
択可能ななった使用フィルターの大きな孔径により、タ
ンパク質溶液中に存在する大きなタンパク分子から小さ
なウイルスを分離することが可能になり、また適宜濾過
速度を増大させることもできるようになる。
【０００２】
【従来技術】ヒト血漿から精製、濃縮されるタンパク質
は、ヒト疾患の治療および予防に用いられる。これらの
製品は約１万人もの個人の供血からなる血漿プールより
調製される。これらの供血の一部は、ヒト病原性ウイル
スたとえばＨＩＶ−１／２、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝
炎ウイルスおよび他のウイルスで汚染されている可能性
もあることから血漿タンパク質の投与により感染を引き
起こす可能性もある。このような感染の危険を最小限に
止めるため、血液は感染マーカー［ＨＩＶ１およびＨＩ
Ｖ２に対する抗体、ＨＢｓＡｇ、ＨＣＶに対する抗体、
および肝機能試験（ＡＬＴ）成績の上昇］について追加
試験を行なった健康ドナーからのみ採血し、陽性の血液
は拒絶して血漿タンパク質の採取には使用されない。血
漿タンパク質の工業的製造に用いられる精製および濃縮
工程、およびウイルスの除去および／または不活性化の
ために製造過程にとくに導入される工程により、血漿タ
ンパク質にはきわめて高い安全基準が達成されている。
は、ヒト疾患の治療および予防に用いられる。これらの
製品は約１万人もの個人の供血からなる血漿プールより
調製される。これらの供血の一部は、ヒト病原性ウイル
スたとえばＨＩＶ−１／２、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝
炎ウイルスおよび他のウイルスで汚染されている可能性
もあることから血漿タンパク質の投与により感染を引き
起こす可能性もある。このような感染の危険を最小限に
止めるため、血液は感染マーカー［ＨＩＶ１およびＨＩ
Ｖ２に対する抗体、ＨＢｓＡｇ、ＨＣＶに対する抗体、
および肝機能試験（ＡＬＴ）成績の上昇］について追加
試験を行なった健康ドナーからのみ採血し、陽性の血液
は拒絶して血漿タンパク質の採取には使用されない。血
漿タンパク質の工業的製造に用いられる精製および濃縮
工程、およびウイルスの除去および／または不活性化の
ために製造過程にとくに導入される工程により、血漿タ
ンパク質にはきわめて高い安全基準が達成されている。
【０００３】血漿タンパク質の安全性をさらに高めるた
め、タンパク質溶液中に存在するウイルスはすべて除去
する目的で、濾過方法、たとえば閉端および接線フロー
濾過の使用が検討されてきた。ウイルスを除去するため
の濾過ユニットは多くの業者で製造されている［DiLeo,
A.J.ら、 Biologicals 21, 275-286 (1993); DiLeo,A.
J.ら、 Biologicals 21, 287-296 (1993); Burnout, T.
ら、Vox Sang. 67, 132-138(1994)］。すなわち、たと
えば、Asahi Chemical Co. Ltd., Tokyo, Japanは特定
の（平均）孔径を規定した濾過ユニットを製造し、一
方、たとえば、Millipore Corp., Bedford, MA, USAは
公称分子量カットオフ値を規定した濾過ユニットを製造
している。
め、タンパク質溶液中に存在するウイルスはすべて除去
する目的で、濾過方法、たとえば閉端および接線フロー
濾過の使用が検討されてきた。ウイルスを除去するため
の濾過ユニットは多くの業者で製造されている［DiLeo,
A.J.ら、 Biologicals 21, 275-286 (1993); DiLeo,A.
J.ら、 Biologicals 21, 287-296 (1993); Burnout, T.
ら、Vox Sang. 67, 132-138(1994)］。すなわち、たと
えば、Asahi Chemical Co. Ltd., Tokyo, Japanは特定
の（平均）孔径を規定した濾過ユニットを製造し、一
方、たとえば、Millipore Corp., Bedford, MA, USAは
公称分子量カットオフ値を規定した濾過ユニットを製造
している。
【０００４】本発明者らの研究から、ウイルスはその直
径（ＨＩＶ：８０−１００nm、ＨＣＶ：４０−６０nm、
ＨＢＶ：４０−４５nm、ピコルナウイルス：２４−３０
nm、パルボウイルス：１８−２５nm）に依存して、孔径
の異なるフィルターにより異なる割合で引き止められる
ことが明らかにされた。すなわち、（Ｉ）平均孔径７５
nmのフィルターでは、ＨＩＶは本質的にフィルター上に
残るが、他の特定したウイルスはろ液中に見出され、
（II）平均孔径３５nmのフィルターではＨＩＶは完全
に、ＨＣＶおよびＨＢＶは大部分がフィルター上に残る
が、たとえばピコルナウイルスやパルボウイルスはろ液
中に見出され、（III）平均孔径１５nmのフィルターで
はＨＩＶ、ＨＣＶおよびＨＢＶと、大部分のたとえばピ
コルナウイルスおよびパルボウイルスがフィルター上に
残る。平均孔径１５nmのフィルターで濾過すれば、血漿
タンパク質のウイルスに対する安全性は全般的に増大す
ることになる。しかしながら、血漿タンパク質は、１５
nmのフィルターでは濾過できない高分子量を有し、すな
わち同様に引き止められ、平均孔径３５nm（もしくは公
称分子量カットオフ値７０,０００Ｄ〜１００,０００
Ｄ）のフィルターのみが大部分の血漿タンパク質の濾過
に適しているが、これらは血漿タンパク質から少なくと
もピコルナウイルス（たとえばＡ型肝炎ウイルス）およ
びパルボウイルス（たとえばヒト病原性パルボウイルス
Ｂ１９）を適当な程度にまでは除去し得ない。
径（ＨＩＶ：８０−１００nm、ＨＣＶ：４０−６０nm、
ＨＢＶ：４０−４５nm、ピコルナウイルス：２４−３０
nm、パルボウイルス：１８−２５nm）に依存して、孔径
の異なるフィルターにより異なる割合で引き止められる
ことが明らかにされた。すなわち、（Ｉ）平均孔径７５
nmのフィルターでは、ＨＩＶは本質的にフィルター上に
残るが、他の特定したウイルスはろ液中に見出され、
（II）平均孔径３５nmのフィルターではＨＩＶは完全
に、ＨＣＶおよびＨＢＶは大部分がフィルター上に残る
が、たとえばピコルナウイルスやパルボウイルスはろ液
中に見出され、（III）平均孔径１５nmのフィルターで
はＨＩＶ、ＨＣＶおよびＨＢＶと、大部分のたとえばピ
コルナウイルスおよびパルボウイルスがフィルター上に
残る。平均孔径１５nmのフィルターで濾過すれば、血漿
タンパク質のウイルスに対する安全性は全般的に増大す
ることになる。しかしながら、血漿タンパク質は、１５
nmのフィルターでは濾過できない高分子量を有し、すな
わち同様に引き止められ、平均孔径３５nm（もしくは公
称分子量カットオフ値７０,０００Ｄ〜１００,０００
Ｄ）のフィルターのみが大部分の血漿タンパク質の濾過
に適しているが、これらは血漿タンパク質から少なくと
もピコルナウイルス（たとえばＡ型肝炎ウイルス）およ
びパルボウイルス（たとえばヒト病原性パルボウイルス
Ｂ１９）を適当な程度にまでは除去し得ない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は小さなウイルスでも濾過による適切な、すなわち
完全なフィルター上への保持を達成すること、単にその
サイズの点で小さなウイルスに類似するタンパク質にも
適用可能な濾過方法を完成することであった。加え濾過
速度を可能な限り増大させることが意図された。
目的は小さなウイルスでも濾過による適切な、すなわち
完全なフィルター上への保持を達成すること、単にその
サイズの点で小さなウイルスに類似するタンパク質にも
適用可能な濾過方法を完成することであった。加え濾過
速度を可能な限り増大させることが意図された。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上述の目的は、除去すべ
きウイルスを、高分子量リガンド好ましくは特異的な抗
体、とくに好ましくはモノクローナル抗体、原理的には
すべてのサブクラスであるが好ましくはサブクラスＩｇ
ＧもしくはＩｇＭまたは依然として結合可能なそれらの
部分であって化学的にまたは遺伝子工学によって適宜修
飾されていてもよいものである、リガンドと結合させる
ことによって、そのサイズを濾過によりフィルター上に
保持できる程度まで増大させる本発明によって達成され
る。サイズの増大は凝集形成によっても達成できる。実
際、この方法により、比較的に大きいタンパク質たとえ
ば第VIII因子およびフォンビルブラント因子でも、サイ
ズの増大したウイルスから濾過によって分離することが
可能であり、タンパク質は通過し、サイズの増大したウ
イルスは引き止められるように孔径を選択することがで
きる。さらに、大きな孔径を選択することによって、濾
過速度を高めることも可能になる。最も一般的な形態で
は、本発明は、水溶液中の任意の構成成分を高分子量リ
ガンドと結合させることによって、そのサイズを、その
時点ではそれより小さくなる構成成分から濾過工程での
分離が可能な程度まで増大させることを可能にするもの
である。
きウイルスを、高分子量リガンド好ましくは特異的な抗
体、とくに好ましくはモノクローナル抗体、原理的には
すべてのサブクラスであるが好ましくはサブクラスＩｇ
ＧもしくはＩｇＭまたは依然として結合可能なそれらの
部分であって化学的にまたは遺伝子工学によって適宜修
飾されていてもよいものである、リガンドと結合させる
ことによって、そのサイズを濾過によりフィルター上に
保持できる程度まで増大させる本発明によって達成され
る。サイズの増大は凝集形成によっても達成できる。実
際、この方法により、比較的に大きいタンパク質たとえ
ば第VIII因子およびフォンビルブラント因子でも、サイ
ズの増大したウイルスから濾過によって分離することが
可能であり、タンパク質は通過し、サイズの増大したウ
イルスは引き止められるように孔径を選択することがで
きる。さらに、大きな孔径を選択することによって、濾
過速度を高めることも可能になる。最も一般的な形態で
は、本発明は、水溶液中の任意の構成成分を高分子量リ
ガンドと結合させることによって、そのサイズを、その
時点ではそれより小さくなる構成成分から濾過工程での
分離が可能な程度まで増大させることを可能にするもの
である。
【０００７】
【発明の実施の形態】特定のウイルスに対して本発明の
目的で使用できるリガンドの例を、さらに以下に掲げ
る。 抗体、場合により修飾 ＨＩＶ ＣＤ４受容体 ＨＩＶ シアル酸(〜誘導体、たとえばシアロオリゴ糖) インフルエンザウイルス ヘパラン硫酸 ＨＳＶ Ｃ３ｄ補体受容体／補体受容体２（ＣＤ２） ＥＢＶ アセチルコリン受容体 狂犬病ウイルス ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子−１） ライノウイルス ガングリオシド パラミクソウイルス ＩｇＡ受容体 ＨＢＶ 上皮成長因子受容体 ワクシニア βアドレナリン性受容体 レオウイルス血清型３ 免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質 ポリオウイルス Ｈ−２抗原 セムリキ森林熱ウイルス
目的で使用できるリガンドの例を、さらに以下に掲げ
る。 抗体、場合により修飾 ＨＩＶ ＣＤ４受容体 ＨＩＶ シアル酸(〜誘導体、たとえばシアロオリゴ糖) インフルエンザウイルス ヘパラン硫酸 ＨＳＶ Ｃ３ｄ補体受容体／補体受容体２（ＣＤ２） ＥＢＶ アセチルコリン受容体 狂犬病ウイルス ＩＣＡＭ−１（細胞間接着分子−１） ライノウイルス ガングリオシド パラミクソウイルス ＩｇＡ受容体 ＨＢＶ 上皮成長因子受容体 ワクシニア βアドレナリン性受容体 レオウイルス血清型３ 免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質 ポリオウイルス Ｈ−２抗原 セムリキ森林熱ウイルス
【０００８】ヒト病原性ウイルス、たとえばＨＢＶ、Ｈ
ＣＶ、ＨＩＶ、ピコルナウイルスおよびパルボウイルス
は、ドナーを選択しても、血漿プール中に存在する可能
性がある。これらのウイルスはタンパク質溶液中に存在
する抗体に結合する。とくに血漿プール中に存在する抗
体と、低温凍結血漿または再懸濁凍結沈殿血漿の、２℃
〜３７℃で１５分〜３６時間、好ましくは２℃〜８℃で
２〜３６時間、とくに４〜１８時間、もしくは１０℃〜
２５℃で１５分〜１８時間好ましくは３０分〜６時間の
インキュベーション時に、または濾過する血漿タンパク
質溶液に濾過のわずか前に特別に添加した抗体に結合す
る。後者の抗体は、ネイティブな形態または化学的にも
しくは遺伝子工学により修飾された形態とすることが可
能で（たとえば、低温凍結血漿免疫グロブリン分画、ヒ
トまたは動物起源の精製免疫グロブリン、モノクローナ
ル抗体）、タンパク質溶液の２℃〜３７℃で１５分〜３
６時間、好ましくは２℃〜８℃で２〜３６時間、とくに
４〜１８時間、もしくは１０℃〜３０℃で１５分〜８時
間好ましくは３０分〜４時間のインキュベーション時に
結合する。この方法で形成したウイルス−抗体複合体は
血漿タンパク質溶液から濾過、たとえば閉端濾過、また
は好ましくは接線フロー濾過によって除去することがで
きる。
ＣＶ、ＨＩＶ、ピコルナウイルスおよびパルボウイルス
は、ドナーを選択しても、血漿プール中に存在する可能
性がある。これらのウイルスはタンパク質溶液中に存在
する抗体に結合する。とくに血漿プール中に存在する抗
体と、低温凍結血漿または再懸濁凍結沈殿血漿の、２℃
〜３７℃で１５分〜３６時間、好ましくは２℃〜８℃で
２〜３６時間、とくに４〜１８時間、もしくは１０℃〜
２５℃で１５分〜１８時間好ましくは３０分〜６時間の
インキュベーション時に、または濾過する血漿タンパク
質溶液に濾過のわずか前に特別に添加した抗体に結合す
る。後者の抗体は、ネイティブな形態または化学的にも
しくは遺伝子工学により修飾された形態とすることが可
能で（たとえば、低温凍結血漿免疫グロブリン分画、ヒ
トまたは動物起源の精製免疫グロブリン、モノクローナ
ル抗体）、タンパク質溶液の２℃〜３７℃で１５分〜３
６時間、好ましくは２℃〜８℃で２〜３６時間、とくに
４〜１８時間、もしくは１０℃〜３０℃で１５分〜８時
間好ましくは３０分〜４時間のインキュベーション時に
結合する。この方法で形成したウイルス−抗体複合体は
血漿タンパク質溶液から濾過、たとえば閉端濾過、また
は好ましくは接線フロー濾過によって除去することがで
きる。
【０００９】
例１：ウシパルボウイルス（ＢＰＶ；ＡＴＣＣ ＶＲ-76
7）をヒト病原性パルボウイルスＢ１９のモデルウイル
スとして、５％ＦＣＳ含有ＥＭＥ培地中の二倍体ウシ胎
児肺細胞内で増殖させ、ついで低速遠心分離（２０００
ｇ、１５分、４℃）により細胞および細胞屑から分離
し、ウイルスを含有する上清をアリコートに分割し、試
験まで−７０℃で保存した。比較のためにブタパルボウ
イルス（ＰＰＶ；ＡＴＣＣＶＲ−７４２）についても検
討した。ＰＰＶは永久ブタ腎臓細胞系（ＩＢ−ＲＳ−２
Ｄ１０；ＡＴＣＣ ＣＲＬ１８３５）を用いた以外はＢ
ＰＶと同様に増殖、単離した。
7）をヒト病原性パルボウイルスＢ１９のモデルウイル
スとして、５％ＦＣＳ含有ＥＭＥ培地中の二倍体ウシ胎
児肺細胞内で増殖させ、ついで低速遠心分離（２０００
ｇ、１５分、４℃）により細胞および細胞屑から分離
し、ウイルスを含有する上清をアリコートに分割し、試
験まで−７０℃で保存した。比較のためにブタパルボウ
イルス（ＰＰＶ；ＡＴＣＣＶＲ−７４２）についても検
討した。ＰＰＶは永久ブタ腎臓細胞系（ＩＢ−ＲＳ−２
Ｄ１０；ＡＴＣＣ ＣＲＬ１８３５）を用いた以外はＢ
ＰＶと同様に増殖、単離した。
【００１０】以下の試験混合物を混合し、２０℃で１時
間インキュベートし、ついでＢＭＭプロセスフィルタ
ー、ＰＬＡＮＯＶＡ（登録商標）３５（Asahi Chemical
Industry Co., Tokyo, Japan）を通して、製造業者の
説明書に従い濾過した。出発材料および濾過後のろ液の
感染価（ＣＣＩＤ50：細胞培養５０％感染用量）を測定
した。
間インキュベートし、ついでＢＭＭプロセスフィルタ
ー、ＰＬＡＮＯＶＡ（登録商標）３５（Asahi Chemical
Industry Co., Tokyo, Japan）を通して、製造業者の
説明書に従い濾過した。出発材料および濾過後のろ液の
感染価（ＣＣＩＤ50：細胞培養５０％感染用量）を測定
した。
【００１１】
【表１】
【００１２】ＢＰＶはＢ１９と血清学的に交差反応する
ので（Bernhardt，D.ら、Tieraerztl. Umschau 49, 481
-483, 1994）、ヒト血漿からのＢ１９に対する抗体はＢ
ＰＶにも結合するがＰＰＶには結合しない。インキュベ
ーションの間に生成した抗原−抗体複合体はきわめて大
きく、非複合抗原とは異なり濾過されない。
ので（Bernhardt，D.ら、Tieraerztl. Umschau 49, 481
-483, 1994）、ヒト血漿からのＢ１９に対する抗体はＢ
ＰＶにも結合するがＰＰＶには結合しない。インキュベ
ーションの間に生成した抗原−抗体複合体はきわめて大
きく、非複合抗原とは異なり濾過されない。
【００１３】例２：承認された経口免疫用ポリオウイル
スワクチン［Oral-Virelon（登録商標）；生存弱毒化ワ
クチン］をＤＭＥＭ中１０％ウシ胎児血清からなるタン
パク質溶液に懸濁し、このウイルス懸濁液の一部に精製
免疫グロブリン［Beriglobin（登録商標）］を加え、他
の部分には同容量のＰＢＳを添加した。１５℃で２時間
インキュベートしたのち、サンプルを濾過した［Sartoc
on（登録商標）-Micro、公称分子量カットオフ：１０
０,０００Ｄ］。免疫グロブリンはポリオウイルスを中
和し、したがってこの試験部分での感染価アッセイでは
濾過による濃度の低下に関しては何の情報も得られない
ので、フィルター上の残留物およびろ液サンプル中のウ
イルスは、ｐＨのシフト後［ｐＨ４、１０分間；ついで
２５％（w/w）スクロースのスクロースクッションを介
して、２０,０００ｇ、４５分間、４℃で遠心分離し、
ペレットをＰＢＳ、ｐＨ７.２中に再懸濁した] 、ニト
ロセルロース上ドットブロットで検出した。再懸濁サン
プルを最初、トリス／グリシン緩衝液、ｐＨ８.３中
１：２に希釈し、ついでさらに１：３希釈系列で希釈し
た。各希釈液１００μlをニトロセルロースフィルター
（孔径０.４μm）に適用し、膜を脱脂粉乳（３％）によ
ってブロックし、ポリオウイルスに対する抗血清（ウサ
ギ）と３７℃で１時間、ついでさらにＰＯＤ−標識抗−
ウサギ抗体とインキュベートした。結合した抗体は、４
−クロロ−１−ナフトール／Ｈ2Ｏ2（Cardosa, M.J. &
Tio, P.H., Bull. WHO, 69, 741-745, 1991に記載され
ているドットブロット操作）で可視化した。
スワクチン［Oral-Virelon（登録商標）；生存弱毒化ワ
クチン］をＤＭＥＭ中１０％ウシ胎児血清からなるタン
パク質溶液に懸濁し、このウイルス懸濁液の一部に精製
免疫グロブリン［Beriglobin（登録商標）］を加え、他
の部分には同容量のＰＢＳを添加した。１５℃で２時間
インキュベートしたのち、サンプルを濾過した［Sartoc
on（登録商標）-Micro、公称分子量カットオフ：１０
０,０００Ｄ］。免疫グロブリンはポリオウイルスを中
和し、したがってこの試験部分での感染価アッセイでは
濾過による濃度の低下に関しては何の情報も得られない
ので、フィルター上の残留物およびろ液サンプル中のウ
イルスは、ｐＨのシフト後［ｐＨ４、１０分間；ついで
２５％（w/w）スクロースのスクロースクッションを介
して、２０,０００ｇ、４５分間、４℃で遠心分離し、
ペレットをＰＢＳ、ｐＨ７.２中に再懸濁した] 、ニト
ロセルロース上ドットブロットで検出した。再懸濁サン
プルを最初、トリス／グリシン緩衝液、ｐＨ８.３中
１：２に希釈し、ついでさらに１：３希釈系列で希釈し
た。各希釈液１００μlをニトロセルロースフィルター
（孔径０.４μm）に適用し、膜を脱脂粉乳（３％）によ
ってブロックし、ポリオウイルスに対する抗血清（ウサ
ギ）と３７℃で１時間、ついでさらにＰＯＤ−標識抗−
ウサギ抗体とインキュベートした。結合した抗体は、４
−クロロ−１−ナフトール／Ｈ2Ｏ2（Cardosa, M.J. &
Tio, P.H., Bull. WHO, 69, 741-745, 1991に記載され
ているドットブロット操作）で可視化した。
【００１４】
【表２】
【００１５】ポリオウイルス−抗体複合体は、非複合抗
原とは異なり濾過できない。すなわち、タンパク質溶液
からの除去が免疫グロブリンの添加によって達成でき
る。
原とは異なり濾過できない。すなわち、タンパク質溶液
からの除去が免疫グロブリンの添加によって達成でき
る。
フロントページの続き (72)発明者 アルブレヒト・グレーナー ドイツ連邦共和国デー−64342ゼーハイム. フアザーネンヴエーク６ (72)発明者 トーマス・ノーヴアーク ドイツ連邦共和国デー−35460シユタウフ エンベルク−マインツラル．シユタウフエ ンベルガーシユトラーセ22
Claims (9)
- 【請求項１】 除去すべきウイルスを、リガンドと結合
させることによってサイズを増大させ、濾過によって引
き止めることからなる、タンパク質溶液からウイルスを
除去する方法。 - 【請求項２】 リガンドは、化学的にまたは遺伝子工学
によって修飾されていてもよい抗体もしくは依然として
ウイルスに結合するその部分である請求項１に記載の方
法。 - 【請求項３】 リガンドは、モノクローナル抗体または
依然としてウイルスに結合するその部分である請求項１
または２に記載の方法。 - 【請求項４】 リガンドまたは依然としてウイルスに結
合するその部分は、化学的にまたは遺伝子工学によって
修飾されていてる請求項１、２または３に記載の方法。 - 【請求項５】 ウイルスに結合するリガンド、抗体、モ
ノクローナル抗体またはその部分は濾過前に添加される
請求項１、３または４に記載の方法。 - 【請求項６】 濾過前に、ウイルスとリガンドを結合さ
せるためにインキュベーション工程を行う請求項１、
２、３、４および５に記載の方法。 - 【請求項７】 特定の孔径を有する中空繊維フィルター
または膜フィルターを使用する請求項１〜６のいずれか
に記載の方法。 - 【請求項８】 濾過は接線フロー法によって行われる請
求項１〜６のいずれかに記載の方法。 - 【請求項９】 除去すべき物質をリガンドと結合させる
ことによってサイズを増大させ、濾過によって引き止め
ることからなる、液体の物質混合物から望ましくない物
質を除去する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19504211A DE19504211A1 (de) | 1995-02-09 | 1995-02-09 | Entfernen von Viren durch Ultrafiltration aus Proteinlösungen |
| DE19504211:5 | 1995-02-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08242849A true JPH08242849A (ja) | 1996-09-24 |
Family
ID=7753509
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