JPH08256789A - β−ラクタム抗生物質の酵素阻害剤の存在下での酵素合成法 - Google Patents

β−ラクタム抗生物質の酵素阻害剤の存在下での酵素合成法

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JPH08256789A
JPH08256789A JP8036837A JP3683796A JPH08256789A JP H08256789 A JPH08256789 A JP H08256789A JP 8036837 A JP8036837 A JP 8036837A JP 3683796 A JP3683796 A JP 3683796A JP H08256789 A JPH08256789 A JP H08256789A
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penicillin
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Maurizio Zenoni
マウリツイオ・ツエノーニ
Auro Roberto Tagliani
アウロ・ロベルト・タツリアーニ
Emiliano Cannas
エミリアーノ・カンナス
Angelo Venturelli
アンジエロ・ベチユレーリ
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 酵素阻害剤の存在下にβ−ラクタム抗生物質
を酵素合成する方法を提供すること。 【解決手段】 水性媒体中、−５℃〜＋３５℃の温度
で、遊離又は固定化形態のペニシリンアシラーゼ酵素の
存在下に、６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセフ
ァロスポラン酸とアミド又はその塩とを反応させてペニ
シリン又はセファロスポリンを製造する方法において、
特定の酵素阻害剤を、０．０００１〜０．５のモル濃度
で反応混合物に加えることを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、式（Ｉ）及び式
（II）：
【０００２】
【化５】
【０００３】〔式中、ＸはＳ又はＣＨ2であり、Ｒは任
意に置換された炭化水素６員環であり、Ｒ1は、水素原
子、ハロゲン原子、メチル基、メトキシ基、Ｃ1−Ｃ4ア
ルケニル基、又は酸素原子、硫黄原子若しくは窒素原子
を介して有機基に結合したメチレン基である〕のペニシ
リン及びセファロスポリンの改良型酵素製造法に関す
る。
【０００４】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＵＳ−
Ａ−３８１６２５３号明細書は、水溶液中、活性微生物
又は酵素の存在下に、＋５℃〜＋５０℃の範囲、好まし
くは＋２０℃〜＋４０℃の範囲の温度で、α−置換され
たα−アミノ酸と７−アミノセファロスポラン酸又は７
−アミノデスアセトキシセファロスポラン酸の誘導体と
を反応させてペニシリン又はセファロスポリンを製造す
る方法を記載している。該米国特許明細書に記載のよう
に操作すると、同時に生ずる類似反応により、反応混合
物からの分離が困難な副生成物が形成されるために、所
望の最終生成物の収率が著しく低減することが見いださ
れた。
【０００５】ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書は、上
記の欠点を排除するか又は少なくとも軽減させる、式
（Ｉ）又は（II）のペニシリン及びセファロスポリン製
造法を提案している。該方法では、６−アミノペニシラ
ン酸又は７−アミノセファロスポラン酸と式Ｒ−ＣＨ
（ＮＨ2）−ＣＯＯＨのα−置換α−アミノ酸又はその
反応性誘導体とを、固定化ペニシリンアシラーゼの存在
下に、水性媒体中、−５℃〜＋２０℃の範囲、好ましく
は約＋４℃の温度で反応させる。
【０００６】ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書には反
応条件が明確に記載されており、さらに所望の最終生成
物が極めて良好な収率（９０％以上）で得られた２５個
の製造実施例も詳記されている。
【０００７】収率が十分に高く（約９０％）且つ最終生
成物が容易に精製される方法のみが工業的に実施可能な
ものであることに留意されたい。
【０００８】ＥＰ−Ａ−０４７３００８号明細書は、出
発物質として用いるα−置換α−アミノ酸及びその反応
性誘導体を概念的に記載しているが、具体的に示されて
いるアミノ酸はＤ−フェニルグリシンメチルエステルの
みである。
【０００９】本出願人は、ＥＰ−Ａ−０４７３００８号
明細書の実施例に記載の手順に従って入念に多くのテス
トを実施したが、所望の結果は全く得られなかった。
【００１０】反応媒体中のアミノ酸のモル比が、用いら
れる６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロス
ポラン酸１モル当たり４モル未満の場合には、所望の最
終生成物の収率は極めて低くなり（約６０％以下）、そ
のような収率は工業的に許容し得ないものであることが
実証された。
【００１１】反応物質中のＤ−フェニルグリシンメチル
エステルの量が、用いられる６−アミノペニシラン酸又
は７−アミノセファロスポラン酸１モル当たり４〜６モ
ルの範囲である場合にのみ良好な工業的に許容し得る収
率が得られる。
【００１２】しかし、この場合、コストが許容し得ない
程増加する（Ｄ−フェニルグリシンメチルエステルは極
めて高価である）だけでなく、反応の所望最終生成物で
あるペニシリン又はセファロスポリンからの分離が困難
若しくは不可能である副生成物が形成される。
【００１３】Ｄ−フェニルグリシンの他のエステル又は
他のアミノ酸のエステルを用いることも試みられたが、
全ての努力は失敗に帰した。
【００１４】アミノ酸の種々の反応性誘導体を用いた場
合も同様に思わしくない結果に終わった。
【００１５】独国特許出願ＤＯＳ２２１４４４４号明細
書は、ペニシリンアシラーゼ酵素の存在下に、７−アミ
ノデスアセトキシセファロスポラン酸（７−ＡＤＣＡ）
とフェニルグリシンアミドとを反応させることによるセ
ファロスポリン（特にセファレキシン）の酵素合成を記
載しているが、得られた収率は非常に低い。
【００１６】ＰＣＴ／ＤＫ９１／００１８８（ＷＯ９２
／０１０６１）号及びＰＣＴ／ＤＫ９２／００３８８
（ＷＯ９３／１２２５０）号の各明細書は、固定化ペニ
シリンアシラーゼ酵素の存在下に、式（III）
【００１７】
【化６】
【００１８】のアミドと６−アミノペニシラン酸又は７
−アミノセファロスポラン酸とを反応させる酵素アシル
化によるβ−ラクタム抗生物質の製造法を記載してい
る。
【００１９】これらの方法は実施可能ではあるが、かな
りの量のアミド（III）が該酵素自体により加水分解さ
れ、それによって、所望の最終生成物中の不純物量が増
大することが認められた。さらに、最終生成物の一部も
同酵素により加水分解される。
【００２０】ペニシリンアシラーゼの初期出願（Ｅ．
Ｃ．３．５．１．１１）以来、該酵素は、フェニル酢
酸、フェノキシ酢酸及び／又は他の阻害剤の存在により
阻害されることが知られており、該酵素はこれらの阻害
剤の存在下に活性を失い且つ触媒作用が停止する傾向が
ある。これは、フェニル酢酸、フェノキシ酢酸又は他の
阻害剤を微量含み得るβ−ラクタム核をアシル化する際
に問題となる。
【００２１】該問題は、この種の阻害を示さない酵素を
追求することにより克服しようとする多くの試みがなさ
れた（Ｄ．Ｄ．Ｙ．Ｒｙｕら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １９８
５，第２７巻，９５３〜９６０ページ；Ａ．Ｍ．Ｂｌｉ
ｎｋｏｗｓｋｙら，Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９９３，第１５巻，９６５
〜９７３ページを参照されたい）。種々の微生物源〔ア
セトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、キサント
モナス（Ｘａｎｔｏｍｏｎａｓ）属〕を起源とする酵素
（アンピシリンアシラーゼ若しくはアミダーゼ、セファ
ロスポリンアシラーゼ若しくはアミダーゼ、セファレキ
シン合成酵素などとして知られているいることが多い）
が選択された。しかし、これらの酵素はいずれも市販さ
れていないばかりか、工業的な使用に必要とされるよう
な大規模な製造も行われていない。従って、該方法は、
β−ラクタム抗生物質の合成に特定的な触媒を完成させ
る研究にかなりの投資を必要とすることから好ましくな
い。
【００２２】酵素阻害を克服する別の方法は、酵素アシ
ル化を実施する前に、例えばＰＣＴ／ＤＫ９１／００１
８８号明細書に記載のように有機溶媒で抽出することに
より該阻害剤を排除するものである。該方法の主な欠点
は、まさに有機溶媒を用いることにある。β−ラクタム
核の酵素アシル化を正確に実施して前記溶媒の使用を省
けば環境にやさしい方法が達成されるが、該方法は未だ
満足すべき結果を示していない。
【００２３】
【課題を解決するための手段】驚くべきことには、本出
願人は、ペニシリンアシラーゼ触媒反応に関する特定実
験の間に、大量の上記阻害剤の存在下においてさえも前
記阻害が回避され、β−ラクタム抗生物質の合成が可能
であることを見いだした。初期には全く存在しないか又
は微量しか存在しない阻害剤を限定量導入して、以下に
記載のような合成に有利な条件下に酵素阻害を用いるこ
とさえ可能な場合がある。
【００２４】
【発明の実施の形態】従って、本発明は、上記に特定し
たそれぞれ式（Ｉ）及び（II）のペニシリン及びセファ
ロスポリンの改良型酵素製造法に関し、該方法は、−５
℃〜＋３５℃の温度で、遊離又は固定化形態のペニシリ
ンアシラーゼ酵素の存在下に、式（ＩＶ）又は式（Ｖ）
【００２５】
【化７】
【００２６】〔式中、Ｘ及びＲ1は上記と同義である〕
の６−アミノペニシラン酸又は７−アミノセファロスポ
ラン酸と、式（III）
【００２７】
【化８】
【００２８】〔式中、Ｒは上記と同義であり、Ｒ2及び
Ｒ3はそれぞれ独立に、水素原子又は線状若しくは分枝
Ｃ1−Ｃ3アルキル基である〕のアミド又はその塩とを、
酸（ＩＶ）又は（Ｖ）１モル当たり前記アミド（III）
１〜６モルのモル比で反応させることからなり、式（Ｖ
Ｉ）：
【００２９】
【化９】
【００３０】〔式中、Ｒ4は、線状若しくは分枝Ｃ1−Ｃ
5アルキル基、置換若しくは非置換芳香族環、ハロゲン
又はプロトンであり；Ｙは不在であってよいが、存在す
る場合は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ2、フェニル又はハロゲンであ
り；Ｒ5は、カルボキシル、線状若しくは分枝Ｃ1−Ｃ4
エステル又は−ＣＯＮＨ2基であり；Ｒ6は、Ｈ、ＯＨ、
ＯＣＨＯ又はＣＨ3である〕の酵素阻害剤を０．０００
１〜０．５のモル濃度で反応混合物に添加することを特
徴とする。
【００３１】特に、前記酵素（ＶＩ）は、０．０００５
〜０．２の範囲のモル濃度で存在し、フェニル酢酸、フ
ェノキシ酢酸、マンデル酸、（線状若しくは分枝）Ｃ1
−Ｃ5アミド及びこれらの酸のエステルから選択され
る。
【００３２】本発明はさらに、本発明方法により製造さ
れたペニシリン又はセファロスポリン並びに医薬上許容
し得る希釈剤又は担体を含む医薬組成物にも関する。
【００３３】ペニシリン又はセファロスポリンを含む医
薬組成物は一般に、常法により製造され、医薬上適当な
形態で投与される。
【００３４】式（Ｉ）及び（II）に関して、Ｒは、例え
ば、非置換又はヒドロキシル、ハロゲン、アルキル、ア
ルコキシ、カルボキシル、ニトロ若しくはアミノで置換
されたシクロヘキセニル基、フェニル基又はシクロヘキ
サジエニル基であってよい。
【００３５】Ｒ1は、Ｏ、Ｓ若しくはＮ原子を介してメ
チレン基に結合し、任意に、ヒドロキシル、ハロゲン、
アルキル、アルコキシ、カルボニル、カルボキシ、シア
ノ、アミドなどから選択された１個以上の基で置換され
た有機基、特に、アルコキシ基若しくはアルコキシカル
ボニル基又はＯ、Ｓ及びＮから選択された１〜４個のヘ
テロ原子を含む５若しくは６員複素環式基に結合したメ
チレン基、水素原子、ハロゲン原子又はメチル基であっ
てよい。
【００３６】本明細書に用いられているアルキル及びア
ルコキシという用語は、１〜６個、好ましくは１〜４個
の炭素原子を含む基を指す。
【００３７】式（III）のアミドを有するα−アミノ酸
の例には、Ｄ−フェニルグリシン、Ｄ−ｐ−ヒドロキシ
フェニルグリシン及びＤ−１，４−シクロヘキサジエン
−１−イル−グリシンが含まれる。
【００３８】アミドの適当な塩は、塩酸、フッ化水素
酸、臭化水素酸、硫酸若しくは硝酸のような無機酸との
塩、又は酢酸、ギ酸若しくはマレイン酸のような有機酸
との塩である。
【００３９】以下の酸は、式（ＩＶ）及び（Ｖ）の化合
物のなかで特に重要なものである：６−アミノペニシラ
ン酸（６−ＡＰＡ）、７−アミノデスアセトキシセファ
ロスポラン酸（７−ＡＤＣＡ）、７−アミノセファロス
ポラン酸、７−アミノ−３−クロロセファロスポラン
酸、７−アミノ−３−メトキシセファロスポラン酸、７
−アミノフェナセチルデスアセトキシセファロスポラン
酸、７−アミノフェノキシアセチルデスアセトキシセフ
ァロスポラン酸、７−アミノ−３−クロロカルバセフェ
ム、ペニシリンＧ及びペニシリンＶ。
【００４０】ペニシリンＧ又はＶ及び７−アミノフェナ
セチルデスアセトキシセファロスポラン酸は、一般に、
それぞれ６−ＡＰＡ及び７−ＡＤＣＡを製造するための
原料として用いられ、６−ＡＰＡ及び７−ＡＤＣＡは、
アンピシリン、アモキシシリン、セファレキシン及びセ
ファドロキシルの製造に用いられている。現在までのと
ころ、ＰＣＴ／ＤＫ９１／００１８８号明細書に記載の
ように、酵素アシル化反応にこれらの中間体（６−ＡＰ
Ａ及び７−ＡＤＣＡ）を使用し得るようにするために
は、該中間体からフェニル酢酸又はフェノキシ酢酸を除
去する必要があった。阻害剤を含んだままこれらの化合
物を合成し得るということは、中間体を精製する必要無
しに合成を有利に進めて、反応プロセスを大幅に短縮し
且つ有機溶媒の使用を回避し得ることを意味する。
【００４１】酵素阻害剤は、合成開始当初から反応混合
物中に存在させても、又は反応進行中に随時添加しても
よい。生成物の分離及びその後のプロセス全般を容易に
するために、酵素反応の終了時に該阻害剤を添加しても
よい。
【００４２】本発明の方法に触媒として用いられる酵素
は、任意の微生物源、特に、キサントモナス（Ｘａｎｔ
ｈｏｍｏｎａｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）、アースロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ）、Ｋｌｕｙｖｅｒａ、アセトバクター（Ａｃｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ）、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ）、バシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）又はアクロモナス
（Ａｃｒｏｍｏｎａｓ）株を起源とするＥ．Ｃ．３．
５．１．１１（ペニシリンアシラーゼ、ペニシリンヒド
ロラーゼ、アンピシリンアシラーゼなどとしても知られ
ている）に分類されるペニシリンアミドヒドロラーゼで
ある。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）の天
然又は合成株から誘導される酵素が特に好ましい。これ
らのうちの何種かは大量に且つ固定化形態で入手し得
る。
【００４３】酵素は、遊離形態（即ち、可溶）でも固体
マトリックス上に固定化された形態でも使用し得る。固
体マトリックスのうちでは、合成エポキシ樹脂又はアズ
ラクトン樹脂のような特に生体分子固定化用担体が特に
好ましい。
【００４４】
【実施例】実施例１ Ｄ（−）フェニルグリシンアミドを用いた７−ＡＤＣＡ
の酵素アシル化によるセファレキシンの合成 ９ｇ（４２ｍｍｏｌ）の７−アミノデスアセトキシセフ
ァロスポラン酸及び１５．７ｇ（１００ｍｍｏｌ）のＤ
（−）フェニルグリシンアミドを水に溶解した（最終容
量３００ｍｌ）。溶液を約４℃に冷却し、ｐＨを６．８
に調整し、次いで、４Ｎの硫酸を自動添加してｐＨを一
定に保つ制御装置（以後ｐＨ−スタットと称す）に接続
した冷却反応器に移した。
【００４５】（アズラクトン又はエポキシ樹脂上に）固
定化形態のペニシリンアミドヒドロラーゼ酵素５４００
ＩＵを上記溶液に加え、４℃及びｐＨ６．８の一定条
件下にインキュベートした。
【００４６】約８５分後、該溶液から酵素を濾過して分
離した。該溶液に希カセイソーダ溶液に溶解した約４ｇ
のβ−ナフトールを加えた。セファレキシン／β−ナフ
トール複合体形態の生成物１６．６ｇを、出発核に対す
るモル収率７４％で回収した。次いでβ−ナフトール複
合体から（公知手順により）高品質のセファレキシン一
水和物を得た。
【００４７】実施例２ フェニル酢酸の存在下でのセファレキシンの合成 不純物として１．１８％のフェニル酢酸及び１．６３％
の７−アミノフェナセチルデスアセトキシセファロスポ
ラン酸を含む不純な７−アミノデスアセトキシセファロ
スポラン酸１７ｇ（０．０７７ｍｏｌ）及びＤ（−）フ
ェニルグリシンアミド４２．６８ｇ（０．２８ｍｏｌ）
を、最終容量が６００ｍｌになるように水に溶解した。
【００４８】ｐＨ−スタットをｐＨ７．６に、サーモス
タットを２℃に設定し、７５６０ＩＵの固定化酵素を用
い、実施例１に記載のように反応を行った。５時間半
後、反応を中断し、ペニシリンアシラーゼを濾別した。
６ｇのβ−ナフトールを用いて生成物を沈殿させ、８
７．５％のモル収率を得た。次いで実施例１に記載のよ
うにして、セファレキシン一水和物を得た。
【００４９】実施例３ ７−アミノフェナセチルデスアセトキシセファロスポラ
ン酸及びＤ（−）フェニルグリシンアミドからのセファ
レキシンの合成 １６ｇ（０．０４８ｍｏｌ）の７−アミノフェナセチル
デスアセトキシセファロスポラン酸を水に溶解し、ｐＨ
を８．０にするに十分な希ＮａＯＨを加え、溶液を２８
℃に加熱し、最終容量が３２０ｍｌになるように水で希
釈し、次いでｐＨ−スタットに接続した適当な反応器に
移し、温度調節浴中に浸漬させた。
【００５０】該溶液（溶液Ａ）に、固定化形態のペニシ
リンアシラーゼ約１４０００ ＩＵを加え、次いで一定
ｐＨ（２ＮのＮａＯＨを加えて）及び一定温度を維持し
た。
【００５１】別個に、約１８０ｇ／ｌの濃度のＤ（−）
フェニルグリシンアミド水溶液（溶液Ｂ）を調製した。
【００５２】約２時間反応させた後、約１９０ｍｌの溶
液Ｂを溶液Ａに加え、必要なら、ｐＨ及び温度を調整し
た。４Ｎの硫酸を加えてｐＨを一定に維持した。
【００５３】７時間後、真空下に濾過して酵素を取り出
した。得られた溶液からセファレキシン／β−ナフトー
ル複合体を沈殿させ、８０．８％のモル収率に相当する
量のセファレキシンを回収した。公知手順によりセファ
レキシン／β−ナフトール複合体から大量のセファレキ
シン一水和物を回収した。
【００５４】実施例４ ７−アミノ−３−クロロセファロスポラン酸の酵素アシ
ル化における阻害剤の使用 実施例１のように反応を行ったが、但し、９．８５ｇ
（０．０４２ｍｏｌ）の７−アミノ−３−クロロセファ
ロスポラン酸を用いた。反応完了時に、希ＮａＯＨに溶
解した１．５ｇのフェニル酢酸を加え、その後、セファ
レキシンに関して既に実施例１〜３に記載したようにセ
ファクロル／β−ナフトール複合体を沈殿させた。
【００５５】７−アミノ−３−クロロセファロスポラン
酸のモル収率は７０％であった。セファクロル／β−ナ
フトール複合体を分解（公知法により）して、セファク
ロル一水和物を得た。
【００５６】実施例５ 阻害剤の存在下の６−アミノペニシラン酸の酵素アシル
化 公知法を用いた酵素加水分解によりペニシリンＧから６
−アミノペニシラン酸（以後６−ＡＰＡと称す）を得、
酸で沈殿させて水溶液から分離した。得られた生成物は
フェニル酢酸不純物を含んでいた。
【００５７】８０％濃度の湿った不純６−ＡＰＡ２０．
８ｇ（０．０７７ｍｏｌ）を水に溶解し、実施例２に記
載にようにＤ（−）フェニルグリシンアミドと混合し、
約０．７ｇ／ｌのフェニル酢酸を含む溶液を得た。６６
７０単位のペニシリンアシラーゼを加え、実施例２に記
載のように反応を実施した。６−ＡＰＡの８２．４％が
変換された。
【００５８】実施例６ フェニル酢酸の存在下のセファレキシンにおけるペニシ
リンＧアシラーゼの加水分解阻害 １３ｇ（６０．７５ｍｍｏｌ）の７−アミノデスアセト
キシセファロスポラン酸（７−ＡＤＣＡ）、４６．５ｇ
（２３０．８４ｍｍｏｌ）のＤ−フェニルグリシンメチ
ルエステル・ＨＣｌ及び１４０ｍｇ（１．０３ｍｍｏ
ｌ）のフェニル酢酸を、最終容量が１０００ｍｌになる
ように水に溶解した。
【００５９】初期のｐＨ７．２５及び温度３℃の条件下
に、１７．５ｇ（３０００ＩＵ）のペニシリンＧアシラ
ーゼのアシル化を行った。約３時間後、７−ＡＤＣＡの
９３％がセファレキシンに変換された。
【００６０】７−ＡＤＣＡの９３％がセファレキシンに
変換された後、加水分解によるＤ−フェニルグリシン形
成に対するセファレキシンの合成生産のモル比は２．１
５で、阻害剤を用いずに得た場合は１．４４であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 エミリアーノ・カンナス イタリー国、20098・サン・ジユリアー ノ・ミラネーズ（ミラン）、ビア・レピユ ブリカ・11・エツフエ (72)発明者 アンジエロ・ベチユレーリ イタリー国、20063・チエルヌスコ・ス ル・ナビツリオ（ミラン）、ビア・レオナ ルド・ダ・ビンチ・31

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式（Ｉ）又は（II） 【化１】 〔式中、ＸはＳ又はＣＨ2であり、Ｒは任意に置換され
    た炭化水素６員環であり、Ｒ1は、水素原子、ハロゲン
    原子、メチル基、メトキシ基、Ｃ1−Ｃ4アルケニル基、
    又は酸素原子、硫黄原子若しくは窒素原子を介して有機
    基に結合したメチレン基である〕のペニシリン又はセフ
    ァロスポリンを製造する方法であって、該方法は、水性
    媒体中、−５℃〜＋３５℃の温度で、遊離又は固定化形
    態のペニシリンアシラーゼ酵素の存在下に、式（ＩＶ）
    又は（Ｖ） 【化２】 〔式中、Ｘ及びＲ1は上記と同義である〕の６−アミノ
    ペニシラン酸又は７−アミノセファロスポラン酸と、式
    （III） 【化３】 〔式中、Ｒは上記と同義であり、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ
    独立に、水素原子又は線状若しくは分枝Ｃ1−Ｃ3アルキ
    ル基である〕のアミド又はその塩とを、酸（ＩＶ）又は
    （Ｖ）１モル当たりアミド（III）１〜６モルのモル比
    で反応させることからなり、式（ＶＩ）： 【化４】 〔式中、Ｒ4は、線状若しくは分枝Ｃ1−Ｃ5アルキル
    基、置換若しくは非置換芳香族環、ハロゲン及びプロト
    ンからなる群から選択され；Ｙは不在であってもよい
    が、存在する場合は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ2、フェニル又はハ
    ロゲンであり；Ｒ5は、カルボキシル、線状若しくは分
    枝Ｃ1−Ｃ4エステル及び−ＣＯＮＨ2基からなる群から
    選択され；Ｒ6は、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨＯ及びＣＨ3からな
    る群から選択される〕の酵素阻害剤を、０．０００１〜
    ０．５のモル濃度で反応混合物に加えることを特徴とす
    る方法。
  2. 【請求項２】 前記阻害剤のモル濃度が好ましくは０．
    ０００５〜０．２の範囲であることを特徴とする請求項
    １に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記阻害剤（ＶＩ）が、フェニル酢酸、
    フェノキシ酢酸、マンデル酸及び（線状若しくは分枝）
    Ｃ1−Ｃ5アミド並びにこれらの酸のエステルから選択さ
    れることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記アミド（III）が、Ｄ−フェニルグ
    リシン及び有機又は無機酸とのその塩からなる群から選
    択されることを特徴とする請求項１又は２に記載の方
    法。
  5. 【請求項５】 請求項１から４に記載の方法によって得
    られたペニシリン又はセファロスポリンを含む医薬組成
    物。
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