JPH08279A - レバンビオースの製造方法 - Google Patents

レバンビオースの製造方法

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JPH08279A
JPH08279A JP13714694A JP13714694A JPH08279A JP H08279 A JPH08279 A JP H08279A JP 13714694 A JP13714694 A JP 13714694A JP 13714694 A JP13714694 A JP 13714694A JP H08279 A JPH08279 A JP H08279A
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JP
Japan
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levanbiose
streptomyces
culture
levan
enzyme
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Pending
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JP13714694A
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English (en)
Inventor
Masaru Iizuka
勝 飯塚
Yoshichika Minamiura
能至 南浦
Ichiro Kojima
一郎 小島
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eneos Corp
Original Assignee
Nippon Oil Corp
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 ストレプトマイセス・アルビドフラブス(S
treptomycesalbidoflavus)、
ストレプトマイセス・アヌラツス(Streptomy
ces anulatus)、ストレプトマイセス・サ
プロフィチクス(Streptomyces sapr
ophyticus)およびストレプトマイセス・アル
ボビナセウス(Streptomyces albov
inaceus)から選ばれる放射菌由来のレバナーゼ
又はレバナーゼ含有物とレバンとを接触せしめることに
よりレバンをレバンビオースに加水分解し、そして該レ
バンビオースを採取することによりレバンビオースを製
造する方法。 【効果】 目的物であるレバンビオースが選択的に生成
する。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明はレバンから微生物的にレ
バンビオースを製造する方法に関する。
【0002】
【従来の技術】レバンからレバンビオースを生成せしめ
る微生物として、バシルス・ズブチリス(Bacill
us subtilis)(Yamamoto S.,
ら、Agric.Biol.Chem.49(2),3
43−350,1985)、シードモナス・プチダ(P
seudomonas putida)(Muraka
mi H.ら、Agric.Biol.Chem.54
(9),2247−2256,1990)、ストレプト
マイセス・グリセウス(Streptomyces g
riseus)(特開昭48−99385)、及びスト
レプトマイセス・sp(Streptomyces s
p)(Murakami H.ら、Agric.Bio
l.Chem.54(9),2247−2256,19
90)が知られている。
【0003】しかしながら、通常ストレプトマイセス属
の微生物を使用する場合には目的生産物であるレバンビ
オースのほかに、他のフラクトオリゴ類、特にフラクト
ース3個又は4個から成るフラクトオリゴ糖、及びフラ
クトースが副生したり、レバンビオースの生産量が少な
いという欠点がある。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、レバ
ンからレバンビオースを選択的に製造する方法を提供す
るものである。
【0005】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明はスト
レプトマイセス・アルビドフラブス(Streptom
yces albidoflavus)、ストレプトマ
イセス・アヌラツス(Streptomyces an
ulatus)、ストレプトマイセス・サプロフィチク
ス(Streptomyces saprophyti
cus)およびストレプトマイセス・アルボビナセウス
(Streptomyces albovinaceu
s)から選ばれる放射菌由来のレバナーゼ又はレバナー
ゼ含有物とレバンとを接触せしめることによりレバンを
レバンビオースに加水分解し、そして該レバンビオース
を採取することを特徴とするレバンビオースの製造の方
法を提供するものである。
【0006】
【具体的な説明】本発明において使用する微生物として
は、ストレプトマイセス・アルビドフラブス(Stre
ptomyces albidoflavus)、スト
レプトマイセス・アヌラツス(Streptomyce
s anulatus)、ストレプトマイセス・サプロ
フィチクス(Streptomyces saprop
hyticus)、及びストレプトマイセス・アルボビ
ナセウス(Streptomyces albovin
aceus)の種であって、レバンからレバンビオース
を選択的に、例えば実質的にレバンビオースのみを、生
成せしめるものであればよい。
【0007】この様な菌株の具体例としては、ストレプ
トマイセス・アルビドフラブス(Streptomyc
es albidoflavus)IFO 1301
0、ストレプトマイセス・アヌラツス(Strepto
myces anulatus)IFO 13369、
ストレプトマイセス・サプロフィチクス(Strept
omyces saprophyticus)IFO
13440、ストレプトマイセス・アルボビナセウス
(Streptomyces albovinaceu
s)IFO 12739などが挙げられる。これらはI
FOカタログに記載されており、IFOより自由に入手
することができる。
【0008】しかしながら、本発明において使用する微
生物は上記の菌株に限定されるものではなく、例えば上
記の種に属し、すでに単離され保存されている菌株、又
は、放線菌の単離のための常法に従って単離し、菌学的
性質の試験に基いて上記いずれかの種に属すると認めら
れる菌株を例えば本発明の実施例1に示す方法によりレ
バンビオースの生産性について調べ、レバンビオースを
選択的に生成する菌株を選択することもできる。
【0009】本発明の放線菌によりレバン分解酵素又は
前の含有物を得るには、前培養を行った後に本培養を行
うのが好ましい。前培養のための培地としては本発明の
放線菌が増殖し得る培地であればよい。例えば炭素源と
してグリセリン、グルコース、スクロース、マンニッ
ト、イノシトール、澱粉などを単独で又は組合わせて使
用することができ、窒素源としては例えばペプトン、酵
母エキス、肉エキス等が用いられる。さらに必要に応じ
てリン酸塩、カリウム塩等の無機塩類を含めることがで
きる。
【0010】本培養のための培地には炭素源としてレバ
ンを加えるのが極めて好ましい。さらに窒素源としては
硝酸アンモニウム等の無機窒素源が好ましく、さらに微
量要素の給源として酵母エキス、肉エキス、ペプトン等
を用いるのが好ましい。さらに、無機塩としてリン酸
塩、カリウム、マグネシウム、鉄、カルシウム等の塩類
を添加するのが好ましい。培養は25℃〜30℃、好ま
しくは約27℃において行う。培養期間は前培養、本培
養とも1〜4日間程度であり、好ましくは2〜3日間程
度である。培養は好気的条件下で行い、通常、振とう、
攪拌、通気等により好気的条件を確保する。
【0011】本発明においてレバンをレバンビオースに
分解するには精製したレバン分解酵素(レバナーゼ)を
用いることもできるが、経済的見地から酵素含有物を用
いるのが好ましい。酵素含有物としては、レバン分解酵
素生産菌の培養物それ自体、培養物から回収した菌体、
菌体破砕物、菌体抽出物、培養液から菌体を除去した
液、例えば培養濾液もしくは遠心分離液、あるいは種々
の段階まで酵素を濃縮もしくは乾燥又は半精製した中間
精製物等が挙げられる。菌体の破砕は微生物菌体を破砕
するための常用手段、例えば機械的なすりつぶし、高圧
から低圧への圧力変化、酵素による細胞壁の溶解等によ
り得ることができる。菌体抽出物は、例えば上記のごと
き菌体破砕物から、遠心分離、濾過等の常法に従って不
溶物を除去することにより得られる。
【0012】酵素濃縮物又は乾燥物は、例えば前記の培
養物、菌体、菌体除去培養液、菌体破砕物、菌体抽出物
等を、常法に従って、例えば減圧濃縮により濃縮し、あ
るいは常法に従って、例えば減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結
乾燥等により乾燥することにより得られる。中間精製物
としては、前記の菌体破砕物、菌体抽出物、もしくは菌
体除去培養液、又はこれらの濃縮物の、有機溶剤、例え
ばアセトン、エタノール等による沈澱及び/又は乾燥
物、前記菌体抽出物もしくは菌体除去培養液又はこれら
の濃縮物の硫酸アンモニウム沈澱物、等が挙げられる。
中間精製物はさらに、酵素の精製に常用されているクロ
マトグラフィー法によっても得ることができる。前記の
種々の酵素含有物はまた、常法に従って固定化して用い
ることもできる。
【0013】最も簡単な反応方法は、レバンを炭素源と
して含有する培地中で本発明の放線菌を培養する方法で
ある。この方法においては、培地中のレバンの一部が放
線菌に資化されて菌体の増殖に用いられ、それによりレ
バン分解酵素が生産される。そして培養中のレバンの残
りが酵素により分解されてレバンビオースとなり、これ
が目的物として回収される。この態様においては、培養
中に間欠的又は連続的にレバンを添加することによって
レバンビオースの増収を図ることもできる。
【0014】他の反応方法は、培養物から、菌体、培養
濾液等を分離した後、これらを酵素源として用いて培養
とは別の段階として反応を行う方法である。この方法の
最も便利な態様は、培養物から濾液又は上清液を回収
し、これを粗酵素液として用い、例えばリン酸緩衝液、
クエン酸緩衝液、ほう酸緩衝液等の緩衝液中でレバンの
分解を行う方法である。
【0015】この場合の反応液のpHは3.0〜9.0、
好ましくは5〜7、例えばpH6.0であり、反応温度は
20℃〜70℃、好ましくは30〜50℃である。反応
における基質レバンの初期濃度は酵素濃度等により異な
るが0.1%〜30%、好ましくは1〜10%である。
反応時間は、使用する酵素量、基質であるレバンの量等
により異なるが10分〜1時間、好ましくは1時間〜3
日間である。反応液又は培養液からのレバンビオースの
回収・精製は糖類の回収・精製に用いられる常法に従っ
て行うことができ、例えば、シリカゲルカラムクロマト
グラフィー、活性炭カラムクロマトグラフィー、凍結乾
燥等により行うことができる。
【0016】生成物がレバンビオースであることの確認
は薄層クロマトグラフィー(薄層板:シリカゲル、展開
溶媒:n−ブタノール/ピリジン/水=8/1/1)に
よって行うことができる。まず生成物のRf値がレバン
ビオースに一致すること、および生成物の塩酸分解物を
展開するとフルクトースに一致することから確認され
る。さらに生成物のマススペクトル、NMRスペクトル
からも確認できる。
【0017】
【効果】本発明のストレプトマイセス・アルビドフラブ
ス(Streptomycesalbidoflavu
s)、ストレプトマイセス・アヌラツス(Strept
omyces anulatus)、ストレプトマイセ
ス・サプロフィチクス(Streptomyces s
aprophyticus)およびストレプトマイセス
・アルボビナセウス(Streptomyces al
bovinaceus)から選ばれる放射菌を用いるこ
とにより、レバンが選択的(特異的)にレバンビオース
に加水分解され、他のフラクトオリゴ糖やフラクトース
が実質上生成しない。
【0018】
【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。実施例1. ストレプトマイセス・アルビドフラブスIF
O 13010、ストレプトマイセス・アヌラツスIF
O 13369、ストレプトマイセス・サプロフィチク
スIFO 13440、およびストレプトマイセス・ア
ルボビナセウスIFO 12739を各々、斜面培地
(1L当たりペプトン5g、肉エキス5g、グルコース
10g、塩化ナトリウム3g、寒天15g、pH7.2)
上に培養し、その培養物の1白金耳を、70mLの前培養
培地(1L当たりレバン10g、酵母エキス2g、肉エ
キス2g、バクトペプトン4g、スークロース9g、フ
ルクトース0.4g、硝酸ナトリウム3g、リン酸一水
素二カリウム1g、硫酸マグネシウム0.5g、塩化マ
ンガン0.2g、pH7.2)を収容した500mL坂口フ
ラスコに接種し、27℃にて3日間振とう培養した。
【0019】次に、この前培養物1.4mLを、70mLの
本培養培地(組成は前培養培地に同じ)を収容した50
0mL坂口フラスコに植菌し、27℃にて振とう培養し、
2日目、7日目の培養液を採取した。培養液を遠心分離
し菌体を除去後、薄層クロマトグラフィーを行った結果
を図1に示した。
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は本発明の放射菌を用いた場合の培養上澄
の薄層クロマトグラフである。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 ストレプトマイセス・アルビドフラブス
    (Streptomyces albidoflavu
    s)、ストレプトマイセス・アヌラツス(Strept
    omyces anulatus)、ストレプトマイセ
    ス・サプロフィチクス(Streptomyces s
    aprophyticus)およびストレプトマイセス
    ・アルボビナセウス(Streptomyces al
    bovinaceus)から選ばれる放射菌由来のレバ
    ナーゼ又はレバナーゼ含有物とレバンとを接触せしめる
    ことによりレバンをレバンビオースに加水分解し、そし
    て該レバンビオースを採取することを特徴とするレバン
    ビオースの製造方法。
JP13714694A 1994-06-20 1994-06-20 レバンビオースの製造方法 Pending JPH08279A (ja)

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Legal Events

Date Code Title Description
A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20040106