JPH08308582A

JPH08308582A - ラットｇｍ２アクチベータ蛋白質遺伝子

Info

Publication number: JPH08308582A
Application number: JP7123757A
Authority: JP
Inventors: Minoru Takizawa; 稔瀧澤; Noboru Matsuo; 登松尾
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 1995-05-23
Filing date: 1995-05-23
Publication date: 1996-11-26

Abstract

(57)【要約】【構成】ラットＧＭ２アクチベータ蛋白質をコードす
る遺伝子。【効果】この遺伝子を用いればラットＧＭ２アクチベ
ータ蛋白質を大量生産することができ、また、ラットは
実験動物として利用し易いことから、糖脂質代謝異常疾
患の診断や研究に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は実験動物として有用なラ
ットの糖脂質代謝機能及び糖脂質代謝異常性疾患の診断
や研究に使用できるラットのＧＭ２アクチベータ蛋白質
遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】糖脂質は生体膜、特に赤血球膜や神経ミ
エリンに多く存在し、特に神経ミエリンでは極めて重要
な役割を果たしているといわれている。この糖脂質の代
謝には、種々の加水分解酵素が関与しており、その加水
分解酵素の欠損は糖脂質代謝異常を生起し、しばしば重
篤な神経症状を呈する疾患の原因となることが知られて
いる。

【０００３】ところで、近年、この糖脂質の代謝には加
水分解酵素だけでなく、アクチベータ蛋白質が深く関与
していることが明らかになっている。例えば、ガングリ
オシドＧＭ２の代謝には、β−ヘキソサミニダーゼＡと
ＧＭ２アクチベータ蛋白質の両者が必要である。このβ
−ヘキソサミニダーゼＡ及びＧＭ２アクチベータ蛋白質
によるＧＭ２の代謝異常に起因する疾患としては、Ｔａ
ｙ−Ｓａｃｈｓ病、Ｓａｎｄｈｏｆｆ病及び若年性ＧＭ
２ガングリオシドーシスＡＢ亜型などが知られている。

【０００４】このＧＭ２アクチベータ蛋白質の大量生産
や生合成の調節にはその遺伝子を解明することが必要で
あり、すでにヒト及びマウスのＧＭ２アクチベータ蛋白
質遺伝子の全配列が報告されている〔Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，Ｖｏｌ．１
７７，Ｎｏ．３，１２１７−１２２３（１９９１）、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２９４，２２７−２３０（１９９
３）〕。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、糖脂質
代謝異常を研究するにあたってマウスは、採血できる量
が少ない、採取できる臓器量が少ない、外科手術が困難
である、糖脂質代謝研究のバックグラウンドが少ない等
の理由により実験動物として使用するには限界があり、
実験動物として取扱い易い動物のＧＭ２アクチベータ蛋
白質遺伝子の解明が望まれていた。従って、本発明の目
的は実験動物として好ましい動物のＧＭ２アクチベータ
蛋白質の遺伝子を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、実
験動物として有用なラットに着目し、そのＧＭ２アクチ
ベータ蛋白質遺伝子の解明について研究した結果、当該
遺伝子のクローニングに成功し、本発明を完成するに至
った。

【０００７】すなわち、本発明はラットＧＭ２アクチベ
ータ蛋白質をコードする遺伝子を提供するものである。

【０００８】以下、本発明を具体的に説明する。本発明
遺伝子のクローニングは、ラット表皮細胞から抽出した
ＲＮＡを用いて作製したｃＤＮＡライブラリーから特定
のＤＮＡをプローブとして用いて目的遺伝子をスクリー
ニングすることにより行なわれる。

【０００９】まず、ｃＤＮＡライブラリーの調製は、ラ
ット表皮細胞から全ＲＮＡを抽出し、次いでそのＲＮＡ
にｐｏｌｙＡを付加した後、常法、例えばＧｕｂｌｅｒ
＆Ｈｏｆｆｍａｎの変法〔Ｇｅｎｅ２５，２６３−２
６９（１９８３）〕に従って、ｍＲＮＡから逆転写酵素
を用いて行なうことができる。

【００１０】次に、用いられる特定のプローブＤＮＡに
ついて説明する。このプローブとしては、目的とするラ
ットＧＭ２アクチベータ蛋白質遺伝子と相同性の高いヒ
ト又はマウスのＧＭ２アクチベータ蛋白質遺伝子、ある
いは当該遺伝子の一部の塩基配列を有する合成プローブ
を用いることもできるが、本発明においてはセラミド：
ガラクトース転移酵素遺伝子をプローブとして用いるこ
とが好ましい。

【００１１】近年、今まで遺伝子の報告された蛋白質と
はタイプの異なる酵素であるセラミド：ガラクトース転
移酵素セラミド：ガラクトース転移酵素のｃＤＮＡがク
ローニングされた〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ９０，１０２６５−１０２６９，１９９
３〕。この酵素は疎水性の強い膜酵素であり、この酵素
の遺伝子をプローブにして、ｃＤＮＡライブラリーのス
クリーニングを行なえば疎水性の強い新たなスフィンゴ
糖脂質の代謝に関与する酵素、蛋白質の遺伝子がクロー
ニングできる可能性が高いと考えた。そこでラット脳の
ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲ法によりセラミド：ガラクトー
ス転移酵素遺伝子をクローニングし、それをプローブと
して用い、セラミド：ガラクトース転移酵素を発現して
いないラット表皮ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニン
グを行なった。

【００１２】２０万クローンをスクリーニングし、６つ
のポジティブクローンが得られた。各クローンの一部の
塩基配列を調べ、既知の遺伝子であるか調べた。その結
果、２つのクローンはマウス（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２
９４，２２７−２３０，１９９３）、ヒト（Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７
７，１２１７−１２２３，１９９１）のガングリオシド
ＧＭ２アクチベータ蛋白質の遺伝子とホモロジーが高か
ったので、インサート長の大きかったほうのクローンの
全長のシークエンスを調べたところ、全長は１９８３ｂ
ｐで、塩基配列から推定されるオープンリーディングフ
レームは、１２〜６０８番目の塩基の１９９アミノ酸で
あった。オープンリーディングフレームをマウス、ヒト
のｃＤＮＡと比較すると塩基配列ではマウスと８６．９
％、ヒトと７１．４％、アミノ酸配列ではマウスと８
４．４２％、ヒトと６５．３２％のホモロジーがあり、
このクローンはラットのＧＭ２アクチベータ蛋白質のｃ
ＤＮＡであることが判明した。

【００１３】このようにして得られる本発明ラットＧＭ
２アクチベータ蛋白質をコードする遺伝子の塩基配列を
配列番号２に、その塩基配列から推定されるアミノ酸配
列を配列番号１に、また得られた遺伝子の全塩基配列及
び推定アミノ酸配列を配列番号３に示す。

【００１４】本発明の遺伝子を用いれば、遺伝子を組み
込んだベクターを大腸菌に導入する（Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｊ．，２９２，５７１−５７６（１９９３））、動物細
胞に導入する（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，Ｖｏｌ．１７７，Ｎｏ．３，１２
１７−１２２３（１９９１））、酵母に導入する（Ｂｉ
ｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９，１３８２−１３８５
（１９９１））、昆虫細胞に導入する（Ａｇｉｃ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５１，Ｎｏ．６，１５７３
−１５８０（１９８７））等の常法の遺伝子組換え技術
によりラットＧＭ２アクチベーター蛋白質を大量に生産
することができる。

【００１５】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれに何ら限定されるものではない。

【００１６】実施例１（１）オリゴヌクレオチドの合成ＰＣＲプライマーに用いるＵＤＰ−ガラクトース：セラ
ミドガラクトース転移酵素（以下セラミド：ガラクト
ース転移酵素）遺伝子増幅用のオリゴヌクレオチド（Ｇ
ＴＡＣＴＧＡＣＧＴＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧＴＴＴＣ、Ｔ
ＣＡＡＴＧＡＣＣＧＡＣＡＣＡＴＡＴＣＴＧＣＴＣ）
は、ファルマシア社ＤＮＡ合成システムＧｅｎｅＡｓ
ｓｅｍｂｌｅｒＳｐｅｃｉａｌを用いて０．２μmole
のスケールでＦｉｎａｌｄｅｔｒｉｔｙｌａｔｉｏｎ
しないで合成し、アプライドバイオシステム社のオリゴ
ヌクレオチド精製カートリッジを用いて精製した。（２）新生ラット脳のＲＮＡ抽出生後６日目のＷｉｓｔａｒ系ラットから脳を摘出し、Ｐ
ＢＳで洗浄した後、ＩＳＯＧＥＮ、（株）ニッポンジー
ン）中で破砕した。クロロホルムを加えて、水層を分離
し水層中のＲＮＡをイソプロパノールで沈澱させた。沈
澱を７５％エタノールで洗浄しＲＮＡを得た。（３）ＲＴ−ＰＣＲによるセラミド：ガラクトース転移
酵素遺伝子の増幅合成したプライマーＤＮＡ、新生ラット脳ＲＮＡから、
宝酒造（株）ＧｅｎｅＡｍｐＲＮＡＰＣＲＫｉｔ
を用いてＲＴ−ＰＣＲを行ないセラミド：ガラクトース
転移酵素遺伝子の増幅を行なった。（４）ＤＮＡの電気泳動ＤＮＡの電気泳動は０．８％アガロースゲル中で４０mM
Ｔｒｉｓ−ａｃｅｔａｔｅ、１mM ＥＤＴＡを用いて
行なった。ＤＮＡの検出はエチジウムブロマイドを用い
て行なった。（５）ＰＣＲ産物のプラスミドベクターへのクローニン
グＰＣＲ産物はインビトロゲン社のＴＡＣｌｏｎｉｎｇ
ｋｉｔを用いて、プラスミドベクターｐＣＲＩＩに組
み込み、大腸菌ＩＮＶαＦ’を形質転換した。ベクター
の入った大腸菌は、アンピシリン、Ｘ−ｇａｌの入った
培地で培養し、青／白で選択した。（６）プラスミドＤＮＡの調製大腸菌からのプラスミドＤＮＡの抽出は、アルカリ法で
行ない、ポリエチレングリコール沈澱により精製した。
または、キアーゲン社のプラスミド抽出キットを用いて
行なった。（７）インサートＤＮＡの調製プラスミドベクターからのインサートの切り出しは、Ｅ
ｃｏＲＩにより行ない、アガロース電気泳動によりイン
サートを分離し、ＢＩＯ１０１社のＧＥＮＥＣＬＥＡ
ＮIIを用いてアガロースゲルからＤＮＡを回収した。

【００１７】（８）新生ラット表皮のＲＮＡ抽出生後２日目のＷｉｓｔａｒ系ラットより皮膚を採取し、
脂肪組織を除いた後、１００００ＰＵのディスパーゼを
含むＰＢＳ（＋）に浸し、室温で２時間反応し、表皮を
剥離した。この表皮（生重量１ｇ）に１０mlのＩＳＯＧ
ＥＮを加えて振盪し細胞を破砕した。クロロホルムを加
えて、水層を分離し水層中のＲＮＡをイソプロパノール
で沈澱させた。沈澱を７５％エタノールで洗浄しＲＮＡ
を得た。得られたＲＮＡにＩＳＯＧＥＮを加え同様の操
作によりＲＮＡを抽出し精製した。（９）ｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡの調製ＲＮＡからｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡの調製はオリゴｄＴセル
ロースカラムを用いて行なった。（10）ｃＤＮＡライブラリーの作製ｃＤＮＡライブラリーの作製は、Ｇｕｂｌｅｒ＆Ｈｏｆ
ｆｍａｎの変法（Ｇｅｎｅ２５，２６３−２６９，１９
８３）に従って行なった。ｃＤＮＡの合成はオリゴｄＴ
プライマーを用いて行ない、得られたｃＤＮＡのサイズ
セレクションを行ない４００ｂｐ以下のｃＤＮＡを除い
た。ｃＤＮＡにＢｓｔＸＩアダプター（５’ＣＴＴＴＣ
ＣＡＧＣＡＣＡＧＡＡＡＧＴＣ３’）を付加しＣＤＭ８
ベクターのＢｓｔＸＩ部位に連結した。得られたｃＤＮ
Ａライブラリーで大腸菌ＭＣ１０６１／Ｐ３の形質転換
を行なった。

【００１８】（11）マルチプライムラベリングアマシャムのマルチプライムＤＮＡ標識システムまた
は、レディプライムＤＮＡ標識システムを用いて、セラ
ミド：ガラクトース転移酵素遺伝子断片を［α³²Ｐ］ｄ
ＣＴＰ（〜１１０ＴＢｑ／mmol）で標識した。反応後、
Ｄ−２５スピンカラム（コダック）を用いて未反応の基
質を除いた。

【００１９】（12）ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニ
ングアンピシリン５０mg／ｌ、テトラサイクリン１０mg／ｌ
含むＬＢ寒天培地上にナイロンメンブレン（Ｈｙｂｏｎ
ｄ−Ｎ⁺、アマシャム）を置き、その上にラット表皮ｃ
ＤＮＡライブラリーで形質転換した大腸菌をまき３７℃
で一晩培養した。大腸菌の生えたメンブレンを培地で湿
らせたナイロンメンブレンと重ね合わせて菌を移し、そ
のメンブレンをＬＢ寒天培地上で３７℃で５時間培養し
レプリカを作製した。菌の生えたナイロンメンブレンを
０．５ＮＮａＯＨ水溶液に２分間２回浸し溶菌し、１
ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（pH７．５）水溶液に２分間２回
浸し中和後、８０℃で２時間乾燥し、菌のＤＮＡをナイ
ロンメンブレンに結合させた。ナイロンブンブレンを１
×ＳＳＣ中で洗浄後、ハイブリダイゼーション溶液（６
×ＳＳＣ、１０×デンハルト、１％ＳＤＳ、サケ精子Ｄ
ＮＡ０．１２５mg／ml）中で６２℃、５時間反応した。
マルチプライム法で標識したＤＮＡを含むハイブリダイ
ゼーション溶液に交換し、６２℃で一昼夜反応し、洗浄
溶液（０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ）中、２５℃で
２０分間振盪し、４５℃で２０分間３回振盪した。洗浄
後ナイロンメンブレンを乾燥し、放射標識されたコロニ
ーを富士写真フィルム製のバイオ・イメージングアナラ
イザーＢＡＳ２０００を用いて検出した。（13）ＤＮＡシークエンスアプライドバイオシステム社のＴａｑＤｙｅＤｅｏ
ｘｙＴｅｒｍｉｎａｔｏｒＣｙｃｌｅＳｅｑｕｅ
ｎｃｉｎｇキットを用いてプラスミドＤＮＡを蛍光標識
し、Ｍｏｄｅｌ３７３ＡＤＮＡシークエンサーを用い
てシークエンシングを行なった。反応に用いるプライマ
ーはベクターの塩基配列及びシークエンシングの結果得
られた塩基配列をもとに設計し、日本遺伝子研究所より
購入した。

【００２０】（14）２０万クローンをスクリーニング
し、６つのポジティブクローンが得られた。各クローン
の一部の塩基配列を調べ、既知の遺伝子であるか調べ
た。その結果、クローン４、５はマウス（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｊ．２９４，２２７−２３０，１９９３）、ヒト
（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ
ｕｎ．１７７，１２１７−１２２３，１９９１）のガン
グリオシドＧＭ２アクチベータ蛋白質の遺伝子とホモロ
ジーが高かったので、インサート長の大きかったクロー
ン４の全長のシークエンスを調べたところ、全長は１９
８３ｂｐで、塩基配列から推定されるオープンリーディ
ングフレームは、１２〜６０８番目の塩基の１９９アミ
ノ酸であった。オープンリーディングフレームをマウ
ス、ヒトのｃＤＮＡと比較すると塩基配列ではマウスと
８６．９％、ヒトと７１．４％、アミノ酸配列ではマウ
スと８４．４２％、ヒトと６５．３２％のホモロジーが
あり、クローン４はラットのＧＭ２アクチベータ蛋白質
のｃＤＮＡであることが判明した。

【００２１】

【発明の効果】本発明の遺伝子を用いればラットＧＭ２
アクチベータ蛋白質を大量生産することができ、また、
ラットは実験動物として利用し易いことから、糖脂質代
謝異常疾患の診断や研究に有用である。

【００２２】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１９９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Arg Arg Val Pro Leu Leu Leu Val Leu Gly Leu Leu Phe Val Leu 5 10 15 Gly Leu Leu Phe Ala Gly Pro Val Ala Pro Ser Arg Leu Ile Ser Lys 20 25 30 Arg Pro Ser Gln Leu Gly Gly Phe Ser Trp Asp Asn Cys Asp Glu Gly 35 40 45 Lys Asp Pro Ala Val Ile Lys Ser Leu Thr Leu Gln Pro Asp Pro Ile 50 55 60 Val Val Pro Gly Asp Val Ile Val Ser Ala Glu Gly Lys Thr Ser Ile 65 70 75 80 Pro Leu Thr Ser Pro Gln Lys Val Glu Leu Thr Val Glu Lys Glu Val 85 90 95 Ala Gly Phe Trp Val Lys Ile Pro Cys Val Glu Gln Leu Gly Ser Cys 100 105 110 Thr Tyr Glu Asn Val Cys Asp Leu Ile Asp Gln Tyr Ile Pro Pro Gly 115 120 125 Glu Thr Cys Pro Glu Pro Leu His Thr Tyr Gly Leu Pro Cys His Cys 130 135 140 Pro Phe Lys Glu Gly Thr Tyr Ser Leu Pro Ser Ser Asn Phe Thr Val 145 150 155 160 Pro Asp Leu Glu Leu Pro Ser Trp Leu Ser Thr Gly Asn Tyr Arg Ile 165 170 175 Gln Ser Ile Leu Ser Ser Gly Gly Lys Arg Leu Ala Cys Ile Lys Ile 180 185 190 Ala Ala Ser Leu Lys Gly Lys 195

【００２３】配列番号：２配列の長さ：５９７配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡ起源生物名：ラット配列 ATGCGTCGTG TACCGCTGCT GCTCGTGCTG GGCTTGCTGT TCGTGCTGGG CTTGCTGTTC 60 GCTGGCCCTG TCGCCCCTTC GCGCCTCATC TCGAAGCGCC CTTCCCAACT TGGTGGCTTC 120 TCCTGGGATA ACTGTGATGA AGGAAAGGAC CCTGCAGTGA TCAAAAGCCT CACGCTCCAA 180 CCTGACCCCA TTGTCGTTCC TGGAGATGTG ATCGTCAGTG CTGAGGGCAA GACCAGCATT 240 CCCCTCACTT CTCCTCAGAA GGTGGAGCTC ACCGTGGAGA AGGAAGTGGC TGGCTTCTGG 300 GTCAAGATCC CTTGCGTAGA ACAGCTAGGA AGCTGTACCT ATGAGAATGT CTGTGACCTG 360 ATAGACCAAT ACATCCCCCC TGGAGAGACC TGCCCAGAGC CGCTGCACAC CTACGGGCTG 420 CCCTGCCATT GTCCCTTCAA GGAAGGCACC TACTCACTGC CTTCGAGCAA CTTCACAGTG 480 CCTGATCTGG AGCTTCCAAG CTGGCTAAGC ACGGGCAACT ACCGCATCCA GAGCATCTTG 540 AGCAGCGGTG GAAAGCGCCT GGCCTGCATC AAGATTGCCG CCTCTCTCAA GGGCAAA 597

【００２４】配列番号：３配列の長さ：１９８３配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡ起源生物名：ラット GGACCGTCGCC ATG CGT CGT GTA CCG CTG CTG CTC GTG CTG GGC TTG CTG 50 Met Arg Arg Val Pro Leu Leu Leu Val Leu Gly Leu Leu 5 10 TTC GTG CTG GGC TTG CTG TTC GCT GGC CCT GTC GCC CCT TCG CGC CTC 98 Phe Val Leu Gly Leu Leu Phe Ala Gly Pro Val Ala Pro Ser Arg Leu 15 20 25 ATC TCG AAG CGC CCT TCC CAA CTT GGT GGC TTC TCC TGG GAT AAC TGT 146 Ile Ser Lys Arg Pro Ser Gln Leu Gly Gly Phe Ser Trp Asp Asn Cys 30 35 40 45 GAT GAA GGA AAG GAC CCT GCA GTG ATC AAA AGC CTC ACG CTC CAA CCT 194 Asp Glu Gly Lys Asp Pro Ala Val Ile Lys Ser Leu Thr Leu Gln Pro 50 55 60 GAC CCC ATT GTC GTT CCT GGA GAT GTG ATC GTC AGT GCT GAG GGC AAG 242 Asp Pro Ile Val Val Pro Gly Asp Val Ile Val Ser Ala Glu Gly Lys 65 70 75 ACC AGC ATT CCC CTC ACT TCT CCT CAG AAG GTG GAG CTC ACC GTG GAG 290 Thr Ser Ile Pro Leu Thr Ser Pro Gln Lys Val Glu Leu Thr Val Glu 80 85 90 AAG GAA GTG GCT GGC TTC TGG GTC AAG ATC CCT TGC GTA GAA CAG CTA 338 Lys Glu Val Ala Gly Phe Trp Val Lys Ile Pro Cys Val Glu Gln Leu 95 100 105 GGA AGC TGT ACC TAT GAG AAT GTC TGT GAC CTG ATA GAC CAA TAC ATC 386 Gly Ser Cys Thr Tyr Glu Asn Val Cys Asp Leu Ile Asp Gln Tyr Ile 110 115 120 125 CCC CCT GGA GAG ACC TGC CCA GAG CCG CTG CAC ACC TAC GGG CTG CCC 432 Pro Pro Gly Glu Thr Cys Pro Glu Pro Leu His Thr Tyr Gly Leu Pro 130 135 140 TGC CAT TGT CCC TTC AAG GAA GGC ACC TAC TCA CTG CCT TCG AGC AAC 482 Cys His Cys Pro Phe Lys Glu Gly Thr Tyr Ser Leu Pro Ser Ser Asn 145 150 155 TTC ACA GTG CCT GAT CTG GAG CTT CCA AGC TGG CTA AGC ACG GGC AAC 530 Phe Thr Val Pro Asp Leu Glu Leu Pro Ser Trp Leu Ser Thr Gly Asn 160 165 170 TAC CGC ATC CAG AGC ATC TTG AGC AGC GGT GGA AAG CGC CTG GCC TGC 578 Tyr Arg Ile Gln Ser Ile Leu Ser Ser Gly Gly Lys Arg Leu Ala Cys 175 180 185 ATC AAG ATT GCC GCC TCT CTC AAG GGC AAA TAACCAGGCA GCAGCCACCA 628 Ile Lys Ile Ala Ala Ser Leu Lys Gly Lys 190 195 TAGAATGAAA GGGCACCAGG AAGGCATGCT TCTTCTTCTG TGTTCCGGGG CCCAGAGCTG 688 CCTGCCTCTA ACTCCGTTCT ATGGTTCTCT ACCCTTTCTG CAAATCACGA CAACCTGACC 748 TGAGGGAGGA TGGACCAGGC GGGTCTCGAC ATCTGTTGGG CTGTACGCCA TGCTCCTTCG 808 CACCCCTACC AACTTTCTAA GAGTTTCTCT CATGTCCCAA ACAGTCAAGG AATGGGAACC 868 AACATGTTAT GGAATCTTAA GTTCAAGCTG GCCCAACATG GGCCTCCTGA AGCTATGCTC 928 ACCCCACCTC TTCGTTTTAG CCACCAACTT AAAAACCAAG ATGACAGTAT TAATCTCTCA 988 TTCCACCCTA AACCTCTCAT CCAGCAAAGA GGTCTAGGTA GCCAGTCTTA GGTCTGCCCC 1048 CCTATTAACT TCCATGATTA ACTACATTCC CTTTGCAACT TGCCTAGCCA ACACTGGGGC 1108 TGACAGATCC TGAAAGGGCA GGATGGCGTG TGACAGAAAC CCTGGGAGAG TTATTGTTGG 1168 GCATGCCCCA TTAACCTCAG TAAAGCACAG GTGCCCAGGG CCAAGCAGAT CGAGGGAGCC 1228 AAAGCAGTCA CTCCCAGGAG CGATGCCCAC TTTTCTTCCT TTGGTATGAC GCATACAGAA 1288 TGGGATGACA TTCCTTATAC CTGACAAGAA ACAAAACTGA AACCCCAACA GCACATGTGC 1348 TCCAGTGCCA GGAGGCCAGG GTCTGGAATG GCATGTCTAG TCCTGGAGGT ACAGTCCAGT 1408 GACCTGTAAG TGCCATGTAA GGAATGTTAC CGGATATTTG CAACAGTTTT CTTCCTTAGG 1468 CCCCAAACCC CAGACTTTTC TATGAAGTCT TAGATTTTTT AACTATTAGA AACAAATTGT 1528 TTTTTATATA CTGTTCAGGC CAAAGGGGCC ACGTGGACTT GTCTGGGGGG TGGGGGGGGA 1588 CATAGCTGGC TCACAGGTGG CTGCTTTTTT TCTCACACCT GTTCGTCTTC TCAGTCTCAA 1648 GTTATCTGAC TTCATTTCTC TCCCCCTCAA GGTCAAGTCC TTGGTACCAG ACCTCAGAGA 1708 GGGCTCAGCC TGCACTGGAG CAGGTCTGCA TGGCCTCTGA GAGCTGGGCC CTGTGCCAGC 1768 CTCAGAGCCC CATCACCATC AGGGTATAGG GGTTCACACT GGAGTGGATC TCCCCACCCC 1828 CACCCCCCAG CAGCCACCTT GTGGAACAGG GGTCCCATGT AGAGAGTGGA TCCCACACCG 1888 GGTTGTACCA TGACAACTTC CTGAGCCTCC GTCAGCCCGG TTCTGGACTG CAAGACTAGT 1948 CTGTCAATAA ATCTTCTTAA AAAAAAAAAA AAAAA 1983

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ラットＧＭ２アクチベータ蛋白質をコー
ドする遺伝子。
【請求項２】配列番号１に記載のアミノ酸配列をコー
ドするものである請求項１記載の遺伝子。
【請求項３】配列番号２に記載の塩基配列を有するも
のである請求項１記載の遺伝子。
【請求項４】配列番号３に記載の塩基配列を有するも
のである請求項１記載の遺伝子。