JPH083182A - 新規物質ｆｒ１７１４１４、その製造方法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 抗腫瘍活性を有する新規ＦＲ１７１４１４
物質、真菌に属するＦＲ１７１４１４物質産生菌を栄養
培地で培養することによるＦＲ１７１４１４物質の製造
方法、ＦＲ１７１４１４物質を含有する医薬組成物およ
びその抗腫瘍剤としての医薬用途。 【効果】 ＦＲ１７１４１４物質は、ヒトを含む哺乳
動物に対して、優れた抗腫瘍作用を有する新規物質であ
る。当該物質は、経口および非経口投与が可能であり、
抗腫瘍剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規物質ＦＲ１７１４
１４に関する。より具体的には、抗腫瘍活性を有する新
規物質ＦＲ１７１４１４、真菌（fungus) に属するＦＲ
１７１４１４産生菌を培地中で培養することによるＦＲ
１７１４１４物質の生産方法、ＦＲ１７１４１４物質を
含有する医薬組成物およびその医薬用途に関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】本発明
は、抗腫瘍活性および以下に詳述する物理・化学的性質
を有する新規ＦＲ１７１４１４物質を提供するものであ
る。また本発明は、真菌に属するＦＲ１７１４１４産生
菌を培地中で培養し、得られる培養物からＦＲ１７１４
１４物質を採取することからなるＦＲ１７１４１４物質
の生産方法を提供するものである。さらに本発明は、有
効成分としてＦＲ１７１４１４物質を含有する医薬組成
物、その抗腫瘍剤としての用途を提供するものである。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物の
生産物から新規抗腫瘍物質を得るべくスクリーニングし
ていたところ、真菌に属する１つの菌株の培養物から新
規物質ＦＲ１７１４１４を単離することに成功し、本発
明を完成した。

【０００４】すなわち、本発明は下記の物理・化学的性
質を有する新規物質ＦＲ１７１４１４に関する。 （ａ）形状： 無色針状 （ｂ）分子式： Ｃ₁₀Ｈ₁₂Ｏ₄ （ｃ）元素分析： Ｃ 61.88 ; Ｈ 6.32 （ｄ）融点： ８３〜８６℃ （ｅ）分子量：２１９〔ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ 219 (M
＋Na) 〕 （ｆ）紫外線吸収スペクトル： λ_max nm (ε) (CH ₃OH）： ２７３ｎｍ（ε＝4,390) （ｇ）赤外線吸収スペクトル：図１参照 （ｈ）溶解性： 易溶：メタノール，酢酸エチル，ジクロロメタン，クロ
ロホルム，アセトニトリル，水 不溶：ヘキサン （ｉ）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応、エーリ
ッヒ反応 陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、塩化第二
鉄反応 （ｊ）¹ Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ₃ ）（図２
参照） δ ppm : 6.02 (1H, d, J=16Hz), 5.97 (1H, m), 4.94
(1H, br s),4.63 (1H, d, J=15Hz), 4.42 (1H, d, J=15
Hz),3.94 (1H, br s, exchangeable), 3.80 (1H, dd,
J=4 and 2Hz),3.55 (1H, dd, J=4 and 1Hz), 3.10 (1H,
br s, exchangeable),1.84 (3H, br d, J=6Hz), （ｋ）¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ₃ ）（図３
参照） δ ppm : 195.2 (s), 147.0 (s), 135.3 (d), 130.9
(s), 121.4 (d),64.8 (d), 62.2 (t), 55.7 (d), 53.
5 (d), 19.1 (q). （ｌ）比旋光度： [α] ²³ _D ＝−２７０°（ｃ＝１．
０，ＣＨ₃ ＯＨ） （ｍ）薄層クロマトグラフィー： 固定相：シリカゲル６０Ｆ₂₅₄ （メルク社製）、 展開溶媒：ＣＨ₂ Ｃｌ₂ ：ＣＨ₃ ＯＨ＝１０：１、 Ｒｆ＝０．４７

【０００５】ＦＲ１７１４１４物質は、Ｎｏ．１４５６
０株等の真菌に属するＦＲ１７１４１４産生菌を培地中
で培養し、得られる培養物からＦＲ１７１４１４物質を
採取することにより調製することができる。真菌に属す
るＦＲ１７１４１４産生菌のうち、Ｎｏ．１４５６０株
は本発明者らによって長野県諏訪湖で採取された落葉か
ら新たに単離された真菌である。Ｎｏ．１４５６０株の
凍結乾燥品はブタペスト条約の国際寄託機関である工業
技術院生命工学工業技術研究所（茨城県つくば市東１丁
目１番３号）に１９９４年２月１６日付で寄託番号ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４５６８として寄託された。

【０００６】上述の微生物は、新規ＦＲ１７１４１４物
質の製造の説明のために例示したものにすぎず、新規Ｆ
Ｒ１７１４１４物質の製造は、ここで述べる特定の生物
の使用によるものに限定されない。。

【０００７】また本発明はＦＲ１７１４１４物質を生産
することができるいかなる変異体の使用をも包含するも
のであり、その中には天然の変異体およびＸ線照射、紫
外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ─ニトロソグ
アニジン、２−アミノプリン等での処理といった慣用の
方法により、上述の生物から人工的に製造されうる変異
体も含まれる。

【０００８】Ｎｏ．１４５６０株は、次の形態学、培養
上及び生理学的特徴を有する。 〔１〕ＦＲ１７１４１４物質産生菌Ｎｏ．１４５６０株
の特徴 この生物は各種培地上で速やかに拡がり、黄色の集落を
形成する。本菌は各種培地上で、テレオモルフ、アナモ
ルフのいずれも形成しなかった。以下に本菌の菌学的性
質を示す。各種寒天培地上での培養性状を表１に示し
た。

【０００９】麦芽抽出寒天培地の中心に接種し、２５℃
で１４日間培養した時の生育は極めて拡大的で、直径
７．５〜８．０ｃｍであった。集落の表面は平坦、薄
く、フェルト状で、灰味黄色であった。集落裏面は明黄
色であった。分生子形成は見られなかった。同様な培養
をポテト・デキストロース寒天上で行った時も、生育は
極めて拡大的で直径６．５〜７．０ｃｍであった。この
集落表面は平坦、フェルト状から綿毛状で、オレンジ色
味白色から赤味白色であった。集落裏面は茶色から茶味
オレンジ色であった。分生子形成は観察されなかった。

【００１０】Ｎｏ．１４５６０株は４〜２９℃で生育可
能で、最適生育温度は２３〜２５℃である〔ポテトデキ
ストロース寒天培地（日水社製）上での測定〕。

【００１１】

【表１】

【００１２】以上の特徴は、２５℃で１４日間培養後に
観察したものである。色調に記載はメチューン・ハンド
ブック・オブ・カラー〔エイ・コーナラップ・アンド・
ジェイ・エッチ・ウォンシャー著、３版、メチューン
社、ロンドン、1983年 (Kornerup, A. and J.H. Wansch
er, 「Methuen Handbook of Colour」 Third ed., p52
5,Methuen, London)〕をもとにして行った。

【００１３】一般に、ＦＲ１７１４１４物質は、ＦＲ１
７１４１４産生菌を同化されうる炭素源および窒素源を
含有する培地中で、好ましくは好気性条件下（例えば、
振盪培養、液内培養等）で培養することにより製造する
ことができる。培地中の炭素源は好ましくはグルコー
ス，フルクトース，グリセリン及び澱粉等の炭水化物で
ある。また、その他ラクトース，アラビノース，キシロ
ース，デキストリン，糖みつ等の炭素源を含有していて
もよい。

【００１４】窒素源としては、好ましくは酵母抽出物，
ペプトン，グルテン粉，綿実粉，大豆粉，コーンスティ
ープリカー，乾燥酵母等、およびアンモニウム塩（例え
ば、硝酸アンモニウム，硫酸アンモニウム，リン酸アン
モニウム等）、尿素、アミノ酸等の無機または有機窒素
化合物である。炭素源および窒素源は、組み合わせて使
用することが有利であるが、それらの純粋な形体のもの
を使用する必要はない。なぜならば、純度の低い物質は
微量の成長因子とかなりの量のミネラル栄養素を含んで
おり、それが使用に適しているからである。また所望に
より、培地に炭酸カルシウム，リン酸ナトリウムまたは
リン酸カリウム，ヨウ化ナトリウムまたはヨウ化カリウ
ム，マグネシウム塩，塩化コバルト等のミネラル塩を添
加してもよい。また、必要ならば、培地がかなり泡立つ
場合に、液体パラフィン，高級アルコール，植物油，ミ
ネラル油またはシリコン等の消泡剤を添加してもよい。

【００１５】大量にＦＲ１７１４１４を製造するための
条件としては、液内好気性培養条件が好ましい。少量の
製造には、フラスコまたはボトル中での振盪または表面
培養が用いられる。さらに、増殖を大型タンク中で行う
場合には、ＦＲ１７１４１４の生産工程での成長遅滞を
避けるために、製造タンク中への接種に発育型の微生物
（微生物の前培養物）を用いることが好ましい。従っ
て、望ましくは、まず胞子又は菌糸を有する微生物を含
む比較的少量の培地を接種し、その接種培地を培養する
ことにより、発育型の微生物の培養物（微生物の前培養
物）を作製する。それから、培養した前培養物を無菌的
に大型タンクに移す。前培養物を作製するための培地と
しては、ＦＲ１７１４１４物質の製造に使用される培地
と実質的に同じもの、もしくは幾分異なるものが挙げら
れる。

【００１６】培養混合物の攪拌および通気は様々な方法
で行うことができる。攪拌は、プロペラもしくはこれに
準じる機械的攪拌装置の使用、培養器の回転もしくは振
盪、さまざまなポンプ装置の使用または滅菌エアーを培
地に通過させること等により行うことができる。通気
は、培養混合物中に滅菌エアーを通過させることにより
有効に行われる。

【００１７】培養は、培養条件およびスケールによって
異なるが、通常約４℃から約４０℃、好ましくは約２０
℃から約３０℃の温度で、５０時間から１００時間の間
行われる。

【００１８】このようにして製造されたＦＲ１７１４１
４物質は、一般に抗生物質等の他の発酵生産物の採取に
用いられる常法により、培地から採取することができ
る。一般的に、生産されたＦＲ１７１４１４物質の多く
が培養濾液中に見つかっているので、該ＦＲ１７１４１
４物質は、培養物を濾過もしくは遠心することによって
得られる培養濾液から、減圧下での濃縮、凍結乾燥、常
用の溶媒での抽出、ｐＨ調整、常用の樹脂（例えば、陰
または陽イオン交換樹脂，非イオン性，吸着樹脂など）
での処理、常用の吸着剤（例えば、活性炭、ケイ酸、シ
リカゲル、セルロース、アルミナなど）での処理、結晶
化、再結晶化などといった常法を用いて採取することに
よって単離することができる。

【００１９】ＦＲ１７１４１４物質の生理学的性質のい
くつかについては、次の試験で詳しく説明される。 試験例１ （インビトロでのＦＲ１７１４１４物質によるヒト腫瘍
細胞に対する増殖阻害活性） 細胞毒性を調べるために、１０％ウシ胎児血清，ペニシ
リン（５０ユニット／ｍｌ）及びストレプトマイシン
（５０μｇ／ｍｌ）を含むダルベッコ最少必須培地（完
全培地）を用いて、メタノールに溶解したＦＲ１７１４
１４物質の２倍希釈列各５０μｌを９６穴マイクロタイ
タープレートに調製した。一方、Ａ５４９（ヒト肺腺癌
細胞），ＭＣＦ−７（ヒト乳腺癌細胞），ＨＴ２９（ヒ
ト結腸腺癌細胞），Jurkat（ヒトＴ細胞白血病細胞）及
びＵ９３７細胞（ヒト組織球性リンパ腫）（５×１
０³ ）は、完全培地を用いて、細胞濃度を１×１０⁵ 細
胞／ｍｌに調製した後、各々上記プレートに５０μｌず
つ加えた。各プレートを３７℃で４日間培養し、Mosman
n （J. Immunol, Methods, 65, 55-63,1983）に記載の
方法に従って、ＭＴＴ（テトラゾリウム）アッセイを行
った。具体的には、ヒト腫瘍細胞の培養が終了した後、
ＭＴＴ溶液（１００μｌ培地あたり１０μｌ）をアッセ
イする全てのウエルに添加し、プレートを３７℃で更に
４時間インキュベーションした。酸−イソプロパノール
（１００μｌ、０．０４Ｎ塩酸含有イソプロパール）を
全てのウエルに添加して、暗青結晶が溶解するように十
分に混合した。全ての結晶が溶解した後、プレートを、
２波長マイクロプレート光度計（波長５５０ｎｍ、対照
波長６６０ｎｍ、モデルＭＴＰ−１２０；コロナエレク
トリックコーポレーション社製）を用いて測定した。な
お、ＭＴＴ（テトラゾリウム）アッセイに用いるＭＴＴ
溶液は、ＭＴＴ〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-d
iphenyl tetrazolium bromide 、シグマ社製〕をリン酸
緩衝液（ＰＢＳ）に５ｍｇ／ｍｌとなるように溶解し
て、滅菌濾過して少量の不溶残渣を除去して調製した。
結果を表２に示す。

【００２０】

【表２】

【００２１】試験例２ （Ｐ３８８マウス白血病細胞に対するＦＲ１７１４１４
物質の抗腫瘍活性） ＦＲ１７１４１４物質の抗腫瘍活性をマウス腫瘍モデル
で測定した。Ｐ３８８マウス白血病細胞（１×１０⁶ ）
をＢＤＦ₁ マウス（雌、８週令）に腹腔内移植した。腫
瘍細胞の移植後２４時間たったところで、ＦＲ１７１４
１４物質をマウスに腹腔内投与した。ＦＲ１７１４１４
物質の腹腔内投与は、１日に１回、更に３日間（ｑｄ１
−４）もしくは８日間（ｑｄ１−９）に続けられた。投
与にはＦＲ１７１４１４物質を１０％ＨＣＯ ６０（ｗ
／ｖ，ニッコウケミカル社製）を含む０．９％生理食塩
水に懸濁したものを用いた。対照マウスには１０％ＨＣ
Ｏ ６０を含む０．９％生理食塩水を腹腔内に投与し
た。結果を表３に示す。

【００２２】

【表３】

【００２３】抗腫瘍活性はグループの平均生存時間とし
て表わし、またＴ／Ｃ％（処理グループの平均生存時間
／対照グループの平均生存時間×１００）として表わし
た。表中、実験１及び実験２は、ＦＲ１７１４１４物質
の投与をそれぞれ４日及び９日間続けたものである。

【００２４】試験例３ （急性毒性） ＦＲ１７１４１４物質をＩＣＲ系マウス５匹に３２０ｍ
ｇ／ｋｇの投与割合で腹腔内投与した。一週間の観察後
でも、異常な症状は認められなかった。

【００２５】本発明のＦＲ１７１４１４は医薬上許容さ
れ得る担体が混入された状態で、ヒトを含む哺乳動物に
抗腫瘍剤として、カプセル，錠剤，顆粒剤、粉末剤、バ
ッカル錠、舌下錠および溶液といった医薬組成物の形態
で経口的もしくは非経口的に投与することができる。医
薬上許容され得る担体としては、薬学的目的のために通
常用いられる様々な有機もしくは無機性の担体が挙げら
れ、具体的には例えば添加剤（例えば、シュークロー
ス，澱粉，マンニット，ソルビット，ラクトース，グル
コース，セルロース，タルク，リン酸カルシウム，炭酸
カルシウム等）、結合剤（セルロース，メチルセルロー
ス，ヒドロキシプロピルセルロース，ポリプロピルピロ
リドン，ゼラチン，アラビアゴム，ポリエチレングリコ
ール，シュークロース，澱粉等）、崩壊剤（例えば、澱
粉，カルボキシメチルセルロース，カルボキシメチルセ
ルロースのカルシウム塩，ヒドロキシプロピル−スター
チ，グリコールナトリウム−スターチ，炭酸水素ナトリ
ウム，リン酸カルシウム，クエン酸カルシウム等）、滑
沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、エアロジ
ル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等）、香料（例え
ばクエン酸、メントール、グリシン、オレンジパウダー
など）、保存剤（例えば、安息香酸ナトリウム、亜硫酸
水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン
等）、安定化剤（例えばクエン酸、クエン酸ナトリウ
ム、酢酸等）、懸濁剤（例えば、メチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等）、
分散剤（例えば、界面活性剤等）、水性希釈剤（例え
ば、水等）、オイル（例えば、ゴマ油等）および基剤ワ
ックス（例えば、カカオバター，ポリエチレングリコー
ル，白色ワセリン等）が挙げられる。

【００２６】ＦＲ１７１４１４物質の投与量は、患者の
疾患の種類、体重及び／又は年齢、さらには投与経路の
種類等の様々な要因によって変わり得る。ＦＲ１７１４
１４物質の好ましい投与量は、通常０．１〜５０ｍｇ／
ｋｇ／日の投与範囲から選択される。

【００２７】

【実施例】以下、本発明を説明するために実施例を挙げ
る。 実施例１ （１）Ｎｏ．１４５６０株の培養 シュークロース（４％），綿実粉（２％），乾燥酵母
（１％），ペプトン（１％），リン酸二水素カリウム
（０．２％），炭酸カルシウム（０．２％）及びＴｗｅ
ｅｎ８０（０．１％）を含む培地（１６０ｍｌ）を５０
０ｍｌ容のエルレマンマイヤーフラスコに加え、１２０
℃で３０分間滅菌した。該培地にＮｏ．１４５６０株の
斜面培養物を１白金耳接触し、ロータリーシェイカーを
使用して毎分２５０ｒｐｍ、２５℃で３日間振盪培養し
た。それから、あらかじめコーンスターチ（２％），グ
リセリン（１％），ピーナッツパウダー（１％），コー
ンスティープリカー（０．５％）および炭酸カルシウム
（０．２％）を含む培地（ｐＨ６．０）を５００ｍｌ容
のエルレマンマイヤーフラスコ３０本に１６０ｍｌずつ
加え、１２０℃で３０分間滅菌処理しておいた培地に、
得られた培養物を３．２ｍｌずつ接種して、ロータリー
シェイカーで毎分２５０ｒｐｍ、２５℃にて５日間培養
した。

【００２８】（２）ＦＲ１７１４１４物質の単離および
精製 培養終了後、得られた培養物（４．８Ｌ）に等量のアセ
トンを加え、１時間室温にて抽出した。該抽出物にけい
藻土２００ｇを添加し、濾過した。得られた濾液（８
Ｌ）を４Ｌになるまで減圧濃縮した。この濃縮物をｐＨ
７．０に調整した後、等量の酢酸エチルを加え抽出し
た。抽出残渣に再び酢酸エチルを加え、抽出を繰り返し
た。得られた抽出液を減圧濃縮し、油状残渣をシリカゲ
ル５０ｇ（Kiesil gel 60,70 - 230 メッシュ: メルク
社製）と混ぜて、この混合物をメタノールでスラリーと
した。溶媒を留去した後、得られた乾燥パウダーをシリ
カゲルをｎ−ヘキサンで充填したカラムクロマトグラフ
ィー（１００ｍｌ）に付した。このカラムをｎ−ヘキサ
ン（５００ｍｌ）およびｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの
混液（３：１ｖ／ｖ，５００ｍｌ）で展開した後、ｎ−
ヘキサンと酢酸エチルの混液（１：１ｖ／ｖ、２Ｌ）で
溶出した。目的物質を含有する画分を集めて減圧濃縮
し、油状の残渣を得た。この油状残渣（１ｇ）をメタノ
ール（１０ｍｌ）に溶解して、ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＭカ
ラム（ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ−５０タイプ、ＹＭＣ
社製）を備した逆相カラムクロマトグラフィーに付し、
２０％水性アセトニトリルで溶出した。目的物質を含有
する画分を集めて、減圧濃縮した。該濃縮物を酢酸エチ
ルで２回抽出して、得られた抽出液を減圧濃縮し、乾燥
してＦＲ１７１４１４物質の粉末（２９８ｍｇ）を得
た。

【００２９】

【発明の効果】本発明のＦＲ１７１４１４物質は、ヒト
を含む哺乳動物に対して、優れた抗腫瘍作用を有する新
規物質である。当該物質は、経口および非経口投与が可
能であり、抗腫瘍剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＫＢｒ法で測定したＦＲ１７１４１４物質の赤
外線吸収スペクトルを示す図である。

【図２】ＦＲ１７１４１４物質の ¹Ｈ−ＮＭＲ（ ¹Ｈ核
磁気共鳴）スペクトルを示す図である。

【図３】ＦＲ１７１４１４物質の¹³Ｃ−ＮＭＲ（¹³Ｃ核
磁気共鳴）スペクトルを示す図である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 高瀬 茂弘 茨城県石岡市総社１−12−10 (72)発明者 寺野 紘 茨城県土浦市真鍋2600−３

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の特徴を有する新規物質ＦＲ１７１
   ４１４。 （ａ）形状： 無色針状 （ｂ）分子式： Ｃ₁₀Ｈ₁₂Ｏ₄ （ｃ）元素分析： Ｃ 61.88 ; Ｈ 6.32 （ｄ）融点： ８３〜８６℃ （ｅ）分子量：２１９〔ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ 219 (M
   ＋Na) 〕 （ｆ）紫外線吸収スペクトル： λ_max nm (ε) (CH ₃OH）： ２７３ｎｍ（ε＝4,390) （ｇ）溶解性： 易溶：メタノール，酢酸エチル，ジクロロメタン，クロ
   ロホルム，アセトニトリル，水 不溶：ヘキサン （ｈ）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応、エーリ
   ッヒ反応 陰性：ニンヒドリン反応、モーリッシュ反応、塩化第二
   鉄反応 （ｉ）¹ Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ₃ ） δ ppm : 6.02 (1H, d, J=16Hz),5.97 (1H, m),4.94 (1
   H, br s),4.63 (1H, d, J=15Hz),4.42 (1H, d, J=15H
   z),3.94 (1H, br s, exchangeable),3.80 (1H, dd, J=4
   and 2Hz),3.55 (1H, dd, J=4 and 1Hz),3.10 (1H, br
   s, exchangeable),1.84 (3H, br d, J=6Hz), （ｊ）¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ₃ ） δ ppm : 195.2 (s),147.0 (s),135.3 (d),130.9 (s),1
   21.4 (d),64.8 (d),62.2 (t),55.7 (d),53.5 (d),19.1
   (q). （ｋ）比旋光度： [α] ²³ _D ＝−２７０°（ｃ＝１．
   ０，ＣＨ₃ ＯＨ）
2. 【請求項２】 真菌に属するＦＲ１７１４１４産生菌を
   培地中で培養し、得られる培養物からＦＲ１７１４１４
   物質を採取することからなる請求項１記載のＦＲ１７１
   ４１４物質の生産方法。
3. 【請求項３】 有効成分として請求項１記載のＦＲ１７
   １４１４物質を含有する医薬組成物。
4. 【請求項４】 抗腫瘍剤である請求項３記載の医薬組成
   物。
5. 【請求項５】 カビＮｏ．１４５６０株の生物学的に純
   粋な培養菌。