JPH0840908A

JPH0840908A - 癌細胞増殖抑制剤

Info

Publication number: JPH0840908A
Application number: JP17661994A
Authority: JP
Inventors: Kazuo Chihara; 和夫千原; Toshimitsu Matsui; 利充松井; Mitsuhiro Ito; 光宏伊藤; Taizo Taniguchi; 泰造谷口; Noboru Iwata; 暢岩田; Toru Murayama; 徹村山; Masato Sato; 正人佐藤
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-07-28
Filing date: 1994-07-28
Publication date: 1996-02-13

Abstract

(57)【要約】【構成】一般式【化１】（式中の記号は、以下の意味を示す。Ｒ¹：置換されていてもよいアリール基又は５員単環、
６員単環もしくは５員−６員連環の芳香族複素環基。Ｒ²：置換されていてもよいアリール基。）で示される
ベンゾジアゼピン誘導体又はその製薬学的に許容される
塩を有効成分とする癌細胞増殖抑制剤。【効果】ＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容体拮抗作用を
有し、癌細胞増殖抑制剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬として有用な、殊
に一般式

【化２】（式中の記号は、以下の意味を示す。Ｒ¹：置換されていてもよいアリール基又は５員単環、
６員単環もしくは５員−６員連環の芳香族複素環基。Ｒ²：置換されていてもよいアリール基。）で示される
ベンゾジアゼピン誘導体又はその製薬学的に許容される
塩を有効成分とする癌細胞増殖抑制剤並びに癌治療薬に
関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】本発明医
薬の有効成分である一般式（Ｉ）で示される化合物又は
その塩は、ＣＣＫ−Ｂ（コレシストキニン−Ｂｒａｉ
ｎ）受容体及びガストリン受容体拮抗作用を有すること
から、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃炎等の消化器系疾患や
食欲調整系の障害、痛み、不安等の中枢系の障害等に有
用なことが知られている（国際公開第９２／１１２４６
号パンフレット（１９９２））。ヒト大脳ＣＣＫ−Ｂ受
容体とガストリン受容体は、遺伝子クローニングにより
同一であることが示され（J.Biol.Chem.268,18300(199
3),J.Biol.Chem.268,8164(1993)）、肺癌、膵癌、大腸
癌、胃癌、Ｔ細胞性リンパ腫等の多くのヒト癌細胞株に
発現している。これらヒト癌細胞株は、ＣＣＫやガスト
リン等のリガンドによって濃度依存的に増殖することが
知られている（Am.J.Physiol.266,277(1994),Cancer Re
s.53,5208(1993),Cancer Res.49,2840(1989),Oncogene
9,861(1994)）。一方、選択的なＣＣＫ−Ｂ／ガストリ
ン受容体拮抗薬であるＬ−３６５２６０（米国特許第
４，８２０，８３４号明細書実施例２８１記載の化合
物）は、ヒト肺小細胞癌由来の細胞株において，ＣＣＫ
の生物活性を示す部分ペプチドであるＣＣＫ−８の特異
的結合を阻害することが報告されているが（Peptides
8,103(1987),Peptides 11,1033(1990)）、この化合物の
ＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容体に対する結合阻害活性は
弱く、臨床において癌治療薬として応用されるまでには
至っていない。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、ＣＣＫ−
Ｂ／ガストリン受容体拮抗作用を有する上記一般式
（Ｉ）で示される化合物について鋭意研究を行った結
果、これらの化合物がＣＣＫ−８やガストリン等のリガ
ンド依存性の細胞増殖を抑制することを見い出し、本発
明を完成した。即ち、本発明は、一般式（Ｉ）で示され
る化合物又はその塩を有効成分とするＣＣＫ−Ｂ／ガス
トリン受容体発現癌細胞の増殖抑制剤に関する。殊に、
本発明は癌細胞に発現したＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容
体に結合し、ＣＣＫ及びガストリンの作用に拮抗する化
合物を含有する医薬を提供することを目的とする。更
に、本発明の有効成分である一般式（Ｉ）で示される化
合物は、ＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容体を発現する癌細
胞内のＤＮＡ合成をも抑制して、癌細胞増殖抑制作用を
示す。

【０００４】ここに一般式（Ｉ）で示される化合物にお
いて「アリール基」としては、たとえばフェニル基、イ
ンデニル基及びナフチル基等が挙げられる。これらのア
リール基は置換基を有していてもよい。この置換基とし
てはたとえば、低級アルキル基、低級アルコキシ基及び
ハロゲン原子等を挙げることができる。ここに、低級ア
ルキル基とは、炭素数１〜６個からなる直鎖上又は分枝
状の炭化水素鎖であり、代表的なものとしては、メチル
基、エチル基、プロピル基，ｎ−ブチル基，ｎ−ペンチ
ル基、イソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基等である。ま
た、低級アルコキシ基とは、上記低級アルキル基を有す
るアルコキシ基であって、たとえばメトキシ基、エトキ
シ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ
基等を挙げることができる。ハロゲン原子としては、た
とえばフッ素原子、塩素原子又は臭素原子が挙げられ
る。次に、「５員単環、６員単環もしくは５員−６員連
環の芳香族複素環基」としてはチオフェン環、フラン
環、ピロール環、チアゾール環、オキサゾール環、イミ
ダゾール環、ピリジン環、ベンゾチオフェン環、ベンゾ
フラン環、インドール環等を挙げることができる。

【０００５】次に、本発明の有効成分である化合物
（Ｉ）は、不整炭素原子を有しており、異性体が存在す
るため、本発明の有効成分として、これらの異性体をも
採用することができる。また、本発明化合物は、酸と塩
を形成する。それらの塩としては、たとえば塩酸塩、硫
酸塩、酢酸塩等の無機酸又は有機酸との塩が挙げられ
る。尚、化合物（Ｉ）及びその塩の製造法については、
国際公開第９２／１１２４６号パンフレット（１９９
２）に係る出願に記載されている。

【０００６】

【発明の効果】本発明医薬の有効成分である一般式
（Ｉ）で示される化合物又はその塩は、癌細胞の特質と
もいえる急速な増殖を抑制するため、肺癌、膵癌、大腸
癌、胃癌、Ｔ細胞性リンパ腫等の癌治療薬として有用で
ある。更には、癌細胞に発現したＣＣＫ−Ｂ／ガストリ
ン受容体へのリガンド結合阻害作用により、癌細胞のＣ
ＣＫ及びガストリンに対する感受性を検出することも可
能であり、癌診断薬としても有用である。

【０００７】また、本発明の化合物は毒性が低く、医薬
としての使用に適している。たとえばＳＤラットの試験
では、経口投与において１００ｍｇ／ｋｇ投与しても重
篤な副作用は認められない。本発明化合物又はその塩は
錠剤、散剤、細粒剤、カプセル剤、丸剤、液剤、注射
剤、坐剤、軟膏、貼付剤等に調整され、経口的（舌下投
与を含む）又は非経口的に投与される。製剤用の単体や
賦形剤としては、個体又は液体状の非毒性医薬用物質が
挙げられる。これらの例としては、たとえば乳糖、ステ
アリン酸マグネシウム、スターチ、タルク、ゼラチン、
寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、
カカオバター、エチレングリコール等やその他常用のも
のが例示される。本発明化合物の臨床的投与量は、適用
される患者の症状、体重、年齢や性別等を考慮して適宜
決定されるが、通常成人１日あたり経口投与で１〜１０
００ｍｇであり、これを１回あるいは数回に分けて投与
する。

【０００８】〈実験例及び実施例〉次に、実験例及び実
施例を挙げて、本発明を更に説明する。実験例１（ヒト癌細胞の増殖抑制作用）実験系の意義ＤＮＡの前駆体であるチミジンの細胞への取り込み量を
測定することにより，ＤＮＡ合成を指標に細胞増殖抑制
作用を測定した。下記実験例及び実施例においては、被
験化合物として一般式（Ｉ）で示される化合物のうち
（Ｒ）−１−［２，３−ジヒドロ−１−（２’−メチル
フェナシル）−２−オキソ−５−フェニル−１Ｈ−１，
４−ベンゾジアゼピン−３−イル］−３−（３−トリ
ル）ウレア（以下、化合物Ａと称する）を、その対照化
合物としてＬ−３６５２６０（米国特許第４，８２０，
８３４号明細書実施例２８１に記載の化合物）を採用
した。

【０００９】実験方法ヒト肺小細胞癌由来のＮＣＩＨ５１０Ａ細胞を、１０％
牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（Gibuco社
Grand Island,NY）中で３７℃、５％ＣＯ₂下で培養維
持したものを使用した。血清飢餓にした上記細胞を９６
穴プレートに播種し、インスリン、トランスフェリン添
加ＲＰＭＩ培地中にガストリン（１０^-8Ｍ）及び各種濃
度の被験化合物又は対照化合物を添加して４４時間培養
を行い、続いてメチル［³Ｈ］チミジン（1Ciml、25mCi/m
mol,Amersham）を添加して４時間培養を行った。培養
後、トリクロロ酢酸（５％）を加えて、遠心分離により
取り込まれなかったチミジンを除去し、沈殿（細胞）を
１％ＳＤＳ添加１ｍＭ水酸化ナトリウムで溶解した。液
体シンチレーションカウンターで［³Ｈ］量を測定し
て、細胞内に取り込まれたチミジン量とした。この結果
を図１に示す。本結果より、被験化合物は１０^-7Ｍ以上
でＤＮＡ合成におけるチミジン取り込みを抑制したこと
から、癌細胞増殖を有意に抑制することが判明した。一
方、対照化合物であるＬ−３６５２６０は被験化合物の
１０倍量で同等程度のチミジン取り込みを抑制したこと
から、癌細胞増殖抑制効果において、本発明化合物は、
対照化合物の１０倍以上の効果を有することが分った。

【００１０】実験例２（ヒトＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受
容体発現マウス細胞の増殖抑制作用）実験系の意義ＣＣＫ及びガストリンの細胞増殖促進作用は、ＣＣＫ又
はガストリンが細胞表面に存在するＣＣＫ−Ｂ／ガスト
リン受容体に結合することにより、イノシトールリン酸
や細胞内Ｃａ²⁺等を介する細胞内情報伝達機構が活性化
され、その増幅したシグナルが核に到達し、核内のＤＮ
Ａ合成が促進されることにより、細胞増殖に到ると考え
られている。そこで、ヒトのＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受
容体を発現させたマウスの繊維芽細胞（非癌細胞）を用
い、細胞内情報伝達因子であるイノシトールリン酸産生
を指標に、本発明化合物によるＣＣＫのＣＣＫ−Ｂ／ガ
ストリン受容体発現細胞への結合阻害、及びそれに伴う
細胞内情報伝達機構の活性化抑制と細胞増殖抑制効果を
確認した。ここで、以下の実験で用いたＣＣＫ−８は、
ＣＣＫの部分ペプチドであり２６〜３３までの８アミノ
酸残基を有し、ＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容体のリガン
ド作用を示す（Yalow:Gastroenterology.58,609(197
0)）。

【００１１】実験方法ヒトＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容体を発現したマウス繊
維芽細胞株ＮＩＨ３Ｔ３細胞（Taniguchi et al.:Oncog
ene 9,861(1994)）を１０％牛血清（ICN Flow,Costa Me
sa、CA）を添加したＤＭＥＭ培地（Gibuco、Grand Islan
d、NY）中で培養維持したものを使用した。血清飢餓にし
た上記細胞をｍｙｏ［³Ｈ］イノシトール（1μCiml、10
^-20mCi/mmol,Amersham）で予め２４時間標識を行った。
細胞をＤＭＥＭ培地にて２回洗浄した後ＣＣＫ−８（５
×１０^-9Ｍ）及び各種濃度の被験化合物又は対照化合物
を添加し、１０ｍＭクロロリチウム存在下３７℃で３０
分反応を行った。氷冷したメタノールの添加により反応
停止、イノシトールリン酸を抽出して、［³Ｈ］量を液
体シンチレーションカウンターにて測定し、イノシトー
ルリン酸産生量を求めた。この結果を図２に示す。本結
果より、本発明医薬の有効成分である一般式（Ｉ）で示
される化合物は、対照化合物に比して有意に強いイノシ
トールリン酸産生抑制効果を示した。即ち、化合物Ａは
１０^-8Ｍ量で９０％以上の抑制を示したのに対し、対照
化合物では抑制効果は見られなかった。これにより本発
明医薬の有効成分である化合物（Ｉ）はヒトＣＣＫ−Ｂ
／ガストリン受容体発現細胞において顕著な細胞内情報
伝達機構の活性化抑制を示したことから、細胞増殖抑制
効果がＣＣＫ−Ｂ／ガストリン受容体発現細胞への結合
阻害、及びそれに伴う細胞内情報伝達機構の活性化抑制
によるものであることを確認した。

【００１２】

【実施例】以下に本発明の医薬について実施例により更
に詳細に説明する。実施例１（錠剤）組成２０ｍｇ錠４０ｍｇ錠化合物Ａ２０ｍｇ４０ｍｇ乳糖７３．４８０コーンスターチ１８２０ヒドロキシプロピルセルロース４５カルボキシメチルセルロースカルシウム４４．２ステアリン酸マグネシウム０．６０．８合計１２０ｍｇ１５０ｍｇ

【００１３】２０ｍｇ錠の調整法化合物Ａ１００ｇ、乳糖３６７ｇ，コーンスターチ
９０ｇを流動造粒コーティング装置（大川原製作所
製）を使用して均一に混合した。これに１０％ヒドロキ
シプロピルセルロース溶液２００ｇを噴霧して造粒し
た。乾燥後、２０メッシュの篩を通し、これにカルボキ
シメチルセルロースカルシウム２０ｇ、ステアリン酸
マグネシウム３ｇを加え、ロータリー打錠機（畑鉄工
所製）で７ｍｍ×８．４Ｒの臼杵を使用して１錠当たり
１２０ｍｇの錠剤とした。

【００１４】４０ｍｇ錠の調整法化合物Ａ１４０ｇ、乳糖２８０ｇ，コーンスターチ
７０ｇを流動造粒コーティング装置（大川原製作所
製）を使用して均一に混合した。これに１０％ヒドロキ
シプロピルセルロース溶液１７５ｇを噴霧して造粒し
た。乾燥後、２０メッシュの篩を通し、これにカルボキ
シメチルセルロースカルシウム１４．７ｇ、ステアリ
ン酸マグネシウム２．８ｇを加え、ロータリー打錠機
（畑鉄工所製）で７．５ｍｍ×９Ｒの臼杵を使用して１
錠当たり１５０ｍｇの錠剤とした。

【図面の簡単な説明】

【図１】化合物Ａ及び対照化合物について、チミジンの
細胞内への取り込み量を比較した図である。

【図２】化合物Ａ及び対照化合物について、イノシトー
ルリン酸の産生量を比較した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者谷口泰造兵庫県神戸市北区日の峰５丁目10−１− 801 (72)発明者岩田暢兵庫県神戸市東灘区住吉台14番８−208号 (72)発明者村山徹兵庫県神戸市中央区多聞通５丁目２−７− 302号 (72)発明者佐藤正人茨城県つくば市二の宮２丁目５番地の９ルーミー筑波321号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式【化１】（式中の記号は、以下の意味を示す。Ｒ¹：置換されていてもよいアリール基又は５員単環、
６員単環もしくは５員−６員連環の芳香族複素環基。Ｒ²：置換されていてもよいアリール基。）で示される
ベンゾジアゼピン誘導体又はその製薬学的に許容される
塩を有効成分とする癌細胞増殖抑制剤。
【請求項２】（Ｒ）−１−［２，３−ジヒドロ−１−
（２’−メチルフェナシル）−２−オキソ−５−フェニ
ル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−３−イル］−３
−（３−トリル）ウレア又はその製薬学的に許容される
塩を有効成分とする請求項１記載の癌細胞増殖抑制剤。
【請求項３】癌治療薬として用いる請求項１又は２記載
の癌細胞増殖抑制剤。