JPH0840932A - スタフイロコッカス属菌感染症の予防ワクチン及び治療用抗体並びにそれの製造法 - Google Patents
スタフイロコッカス属菌感染症の予防ワクチン及び治療用抗体並びにそれの製造法Info
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 スタフイロコッカス属菌の感染症の予防ワク
チンと、このワクチンで免疫して得られる予防及び治療
用に有効である免疫抗体を提供するものである。 【構成】 スタフイロコッカス属に属する菌の菌体表層
タンパク質及びスタフイロコッカス属に属する菌を培養
して得られる培養代謝産物の混合溶液より採取される分
子量約１０，０００ないし７０，０００のタンパク質を
不活化した抗原からなり、必要により免疫補助剤を加え
たスタフイロコッカス属菌の感染症予防ワクチンまたは
治療用抗体である。
チンと、このワクチンで免疫して得られる予防及び治療
用に有効である免疫抗体を提供するものである。 【構成】 スタフイロコッカス属に属する菌の菌体表層
タンパク質及びスタフイロコッカス属に属する菌を培養
して得られる培養代謝産物の混合溶液より採取される分
子量約１０，０００ないし７０，０００のタンパク質を
不活化した抗原からなり、必要により免疫補助剤を加え
たスタフイロコッカス属菌の感染症予防ワクチンまたは
治療用抗体である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、スタフイロコッカス属
菌の感染症の予防ワクチン、抗体による予防及び治療用
抗体並びにそれの製造法に関する。
菌の感染症の予防ワクチン、抗体による予防及び治療用
抗体並びにそれの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】過去において、スタフイロコッカス属菌
感染症の治療にスタフイロコッカス・アウレウスの培養
液から抽出したヘモリジン及びコアグラーゼを主体とし
た不活化ワクチンが使用されたことがあったが、スタフ
イロコッカス属菌の感染症の治療に新しく開発された種
々の抗生物質が使用可能となり、そのため、スタフイロ
コッカス属菌の感染症にたいするワクチンの必要性が減
少し、使用されなくなってしまった。それ以降、これに
類するワクチンの開発はとくになされていない。過去に
おいて使用されていたスタフイロコッカスワクチンは、
ワクチンの有効性物質が特定できなかったため、抗原の
精製が不十分であり、中に含まれている有効成分が明確
ではなく、また予防効果が明瞭ではなかった。
感染症の治療にスタフイロコッカス・アウレウスの培養
液から抽出したヘモリジン及びコアグラーゼを主体とし
た不活化ワクチンが使用されたことがあったが、スタフ
イロコッカス属菌の感染症の治療に新しく開発された種
々の抗生物質が使用可能となり、そのため、スタフイロ
コッカス属菌の感染症にたいするワクチンの必要性が減
少し、使用されなくなってしまった。それ以降、これに
類するワクチンの開発はとくになされていない。過去に
おいて使用されていたスタフイロコッカスワクチンは、
ワクチンの有効性物質が特定できなかったため、抗原の
精製が不十分であり、中に含まれている有効成分が明確
ではなく、また予防効果が明瞭ではなかった。
【０００３】スタフイロコッカス属菌は、ヒトに常在し
ているいわゆる常在菌で、免疫力の低下したヒトに感染
し、日和見感染症を引き起こす代表的なものであり、一
部に重篤な症状を示し、死に至らしめることが知られて
いる。近年、この菌に使用された治療薬剤、とくに抗生
物質に対する耐性菌、いわゆるＭＲＳＡ（メチシリン耐
性スタフイロコッカス・アウレウス）が出現し、最新の
抗生物質でも、予防及び治療効果が得られない状態が見
られるようになった。
ているいわゆる常在菌で、免疫力の低下したヒトに感染
し、日和見感染症を引き起こす代表的なものであり、一
部に重篤な症状を示し、死に至らしめることが知られて
いる。近年、この菌に使用された治療薬剤、とくに抗生
物質に対する耐性菌、いわゆるＭＲＳＡ（メチシリン耐
性スタフイロコッカス・アウレウス）が出現し、最新の
抗生物質でも、予防及び治療効果が得られない状態が見
られるようになった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】このように、スタヒロ
コッカス、特にＭＲＳＡ（メチシリン耐性スタヒロコッ
カス・アウレウス）による感染症は、抵抗力の弱った患
者に致命的な結果をもたらすにもかかわらず、有効な抗
生物質が殆どなく、これを解決することが望まれてい
る。既に過去のものとなったと思われているスタフイロ
コッカスに対するワクチンが有効であろうと考えられて
いたが、ワクチンとして用いる抗原によりその予防効果
が左右され、安定した効果が得られないのが現状であ
り、現在までスタフイロコッカスに対するワクチンは完
成していない。
コッカス、特にＭＲＳＡ（メチシリン耐性スタヒロコッ
カス・アウレウス）による感染症は、抵抗力の弱った患
者に致命的な結果をもたらすにもかかわらず、有効な抗
生物質が殆どなく、これを解決することが望まれてい
る。既に過去のものとなったと思われているスタフイロ
コッカスに対するワクチンが有効であろうと考えられて
いたが、ワクチンとして用いる抗原によりその予防効果
が左右され、安定した効果が得られないのが現状であ
り、現在までスタフイロコッカスに対するワクチンは完
成していない。
【０００５】本発明によるワクチンで免疫すると、耐性
菌等に対しても総合的に効果が認められ、スタフイロコ
ッカス属菌の感染症の予防に役立ち、またこのワクチン
で免疫した抗体は治療効果が認められる。
菌等に対しても総合的に効果が認められ、スタフイロコ
ッカス属菌の感染症の予防に役立ち、またこのワクチン
で免疫した抗体は治療効果が認められる。
【０００６】本発明者らは、スタフイロコッカス属菌感
染症、特にＭＲＳＡ感染症に有効なワクチンを完成させ
るため研究を進めてきたが、ワクチンを得るための抗原
としては、スタヒフイロコッカス菌の菌体表層タンパク
質、及び菌の代謝産物である外毒素等の一定分子量から
なる免疫原性の高い分画の両者を主体とした不活化ワク
チンを作製し、耐性菌に対しても効果が認められること
を確認し、本発明を完成した。
染症、特にＭＲＳＡ感染症に有効なワクチンを完成させ
るため研究を進めてきたが、ワクチンを得るための抗原
としては、スタヒフイロコッカス菌の菌体表層タンパク
質、及び菌の代謝産物である外毒素等の一定分子量から
なる免疫原性の高い分画の両者を主体とした不活化ワク
チンを作製し、耐性菌に対しても効果が認められること
を確認し、本発明を完成した。
【０００７】本発明により、産生される培養代謝産物で
ある数種の外毒素と、菌体表層成分の一部分が混合され
た、不活化した免疫抗原は、免疫力を高め、スタフイロ
コッカス属菌に対して感染予防の効果を大にしたワクチ
ンを提供することが可能となる。又、耐性菌に対する感
染症の予防には、特にこのワクチンの必要性が高い。こ
のワクチンを免疫抗原として得られる抗体は、治療用抗
体として優れた効果が認められる。
ある数種の外毒素と、菌体表層成分の一部分が混合され
た、不活化した免疫抗原は、免疫力を高め、スタフイロ
コッカス属菌に対して感染予防の効果を大にしたワクチ
ンを提供することが可能となる。又、耐性菌に対する感
染症の予防には、特にこのワクチンの必要性が高い。こ
のワクチンを免疫抗原として得られる抗体は、治療用抗
体として優れた効果が認められる。
【０００８】本発明において用いられる抗原としては、
数種の抗原物質を含んでいてもよいが、特に好ましくは
菌体そのもの即ち全菌体を使用せず、最も有効性の高い
成分を精製し、それを不活化して得られたワクチンであ
る。なぜならば、全菌体を抗原とすれば、有効性に欠け
る抗原物質が多く存在して、不要の抗体が産生され、効
果を上げ得ないからである。菌が代謝する外毒素たとえ
ばスーパー抗原（ＴＳＳＴ−１など免疫力を極端に低下
させるもの）の毒素も不活化抗原としてワクチンに含ま
れており、これにより産生される抗体は特に治療用の効
果をあげ得る。
数種の抗原物質を含んでいてもよいが、特に好ましくは
菌体そのもの即ち全菌体を使用せず、最も有効性の高い
成分を精製し、それを不活化して得られたワクチンであ
る。なぜならば、全菌体を抗原とすれば、有効性に欠け
る抗原物質が多く存在して、不要の抗体が産生され、効
果を上げ得ないからである。菌が代謝する外毒素たとえ
ばスーパー抗原（ＴＳＳＴ−１など免疫力を極端に低下
させるもの）の毒素も不活化抗原としてワクチンに含ま
れており、これにより産生される抗体は特に治療用の効
果をあげ得る。
【０００９】使用される菌体としては、スタヒロコッカ
ス属の菌であれば何でもよいが、本発明のワクチンの性
質上、強毒株であり、また薬剤耐性菌、特に多剤耐性菌
例えばＭＲＳＡが望ましく、さらに例えばスタフイロコ
ッカス・アウレウス、スタフイロコッカス・エピデルミ
ジス、スタフイロコッカス・サプロフイチテイカス等が
挙げられる。
ス属の菌であれば何でもよいが、本発明のワクチンの性
質上、強毒株であり、また薬剤耐性菌、特に多剤耐性菌
例えばＭＲＳＡが望ましく、さらに例えばスタフイロコ
ッカス・アウレウス、スタフイロコッカス・エピデルミ
ジス、スタフイロコッカス・サプロフイチテイカス等が
挙げられる。
【００１０】本発明においては、表層タンパク質と代謝
産物から得られた、分子量１０，０００から７０，００
０の成分を不活化した抗原を使用する。これらの抗原
は、以下のようにして得ることができる。即ち、スタフ
イロコッカス属菌、例えば毒素産生強毒株を、適当な培
地で培養した後、遠心分離等により菌体と培養ろ液に分
離する。
産物から得られた、分子量１０，０００から７０，００
０の成分を不活化した抗原を使用する。これらの抗原
は、以下のようにして得ることができる。即ち、スタフ
イロコッカス属菌、例えば毒素産生強毒株を、適当な培
地で培養した後、遠心分離等により菌体と培養ろ液に分
離する。
【００１１】菌体からは、例えば菌体表層タンパク質を
高濃度の食塩水中で攪拌抽出し、それと培養ろ液を混合
した後、硫安などで塩析して得られる沈澱物より、免疫
原性として不要な夾雑物を、イオン交換樹脂カラムで除
去し、一定の分子量の分画を得る。さらに精製するため
に、このものをろ過などの操作により免疫原性の高い分
画が調製される。この分画に含まれる物質を不活化して
ワクチン抗原として使用することができる。
高濃度の食塩水中で攪拌抽出し、それと培養ろ液を混合
した後、硫安などで塩析して得られる沈澱物より、免疫
原性として不要な夾雑物を、イオン交換樹脂カラムで除
去し、一定の分子量の分画を得る。さらに精製するため
に、このものをろ過などの操作により免疫原性の高い分
画が調製される。この分画に含まれる物質を不活化して
ワクチン抗原として使用することができる。
【００１２】このようにして得られたワクチン抗原は、
以下のような性質を有する。 （１）微黄色・透明の液状であり、特異臭を有さない。 （２）生物活性：不活化前の原液を生理食塩水で５０倍
に希釈した溶液を０．１ｍｌ正常マウスの腹腔に接種す
ると３時間以内に死亡する。ホルマリンで不活化され
る。 （３）温度による変化：１００℃で６０分間加熱すると
失活する。 （４）安定性：室温における保存は、１０日間で不安定
となるが、冷蔵庫での保存は少なくとも６ケ月間は安定
である。−２０℃以下での保存では長期間安定である。
また、凍結乾燥品も長期間安定である。
以下のような性質を有する。 （１）微黄色・透明の液状であり、特異臭を有さない。 （２）生物活性：不活化前の原液を生理食塩水で５０倍
に希釈した溶液を０．１ｍｌ正常マウスの腹腔に接種す
ると３時間以内に死亡する。ホルマリンで不活化され
る。 （３）温度による変化：１００℃で６０分間加熱すると
失活する。 （４）安定性：室温における保存は、１０日間で不安定
となるが、冷蔵庫での保存は少なくとも６ケ月間は安定
である。−２０℃以下での保存では長期間安定である。
また、凍結乾燥品も長期間安定である。
【００１３】（５）溶血性：正常ウサギ赤血球及び羊赤
血球を溶血させる。 （６）溶解性：水や塩類溶液によく溶ける。弱い吸湿性
を示す。 （７）分子量：７．５％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル
電気泳動で、分子量は、１０，０００〜７０，０００で
ある。主たる成分は、２０，０００〜４０，０００であ
る。
血球を溶血させる。 （６）溶解性：水や塩類溶液によく溶ける。弱い吸湿性
を示す。 （７）分子量：７．５％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル
電気泳動で、分子量は、１０，０００〜７０，０００で
ある。主たる成分は、２０，０００〜４０，０００であ
る。
【００１４】本発明では、上記抗原に、必要に応じて防
腐剤および免疫補助剤を添加して製剤化し、ワクチンと
することができる。免疫補助剤としては、例えばリン酸
アルミニウム、ムラミルジペプチド等、また一般的に用
いられる油脂アジュバント等を配合することができる。
１回に接種するワクチンは、タンパク質としての量は、
成人一人当たり（体重５０ｋｇ）２μ〜５０μｇであ
り、より好ましくは２μｇ〜１０μｇである。
腐剤および免疫補助剤を添加して製剤化し、ワクチンと
することができる。免疫補助剤としては、例えばリン酸
アルミニウム、ムラミルジペプチド等、また一般的に用
いられる油脂アジュバント等を配合することができる。
１回に接種するワクチンは、タンパク質としての量は、
成人一人当たり（体重５０ｋｇ）２μ〜５０μｇであ
り、より好ましくは２μｇ〜１０μｇである。
【００１５】
【発明の効果】上記の方法で調製された菌表層タンパク
質および代謝産物は、一定分子量例えば分子量１０，０
００〜１７０，０００であるが、好ましくは１０，００
０〜７０，０００の分画に精製し、ホルマリン等で不活
化し、免疫抗原として接種することにより、スタフイロ
コッカス属菌感染症に対して幅広く感染防禦することが
できる。
質および代謝産物は、一定分子量例えば分子量１０，０
００〜１７０，０００であるが、好ましくは１０，００
０〜７０，０００の分画に精製し、ホルマリン等で不活
化し、免疫抗原として接種することにより、スタフイロ
コッカス属菌感染症に対して幅広く感染防禦することが
できる。
【００１６】以下に本発明の実施例を挙げるが、本発明
はこれに限定されるものではない。 実施例 １ 菌体表層タンパク質の調製：スタフイロコッカス・アウ
レウス株をトリプチケースソイ液体培地で２０〜４８時
間培養した後、これを１２，０００Ｇで４０分間遠心し
て集菌し、０．５〜２Ｍの食塩水中に懸濁させ、低温室
で３日間攪拌し、表層タンパク質の抽出操作を行った。
これを１２，０００Ｇで３０分間遠心し、菌体を除去
し、粗表層タンパク質抽出液を得た。
はこれに限定されるものではない。 実施例 １ 菌体表層タンパク質の調製：スタフイロコッカス・アウ
レウス株をトリプチケースソイ液体培地で２０〜４８時
間培養した後、これを１２，０００Ｇで４０分間遠心し
て集菌し、０．５〜２Ｍの食塩水中に懸濁させ、低温室
で３日間攪拌し、表層タンパク質の抽出操作を行った。
これを１２，０００Ｇで３０分間遠心し、菌体を除去
し、粗表層タンパク質抽出液を得た。
【００１７】培養代謝産物と菌体表層タンパク質混合物
の調製：上記の培養した菌液から菌体を除去して得られ
た上清に上記粗表層タンパク質を混合し、これに５０〜
８５％の飽和になるように硫安を加えて沈澱させ、この
溶液を１２，０００Ｇで３０分間遠心し、沈澱物を得
た。沈澱物を蒸留水に溶解後セルロースチューブに詰
め、０．０５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中で透析し、硫
安を除いた後、イオン交換樹脂カラムクロマト処理する
ことにより、不要な夾雑物、主として培地成分を除去し
た。
の調製：上記の培養した菌液から菌体を除去して得られ
た上清に上記粗表層タンパク質を混合し、これに５０〜
８５％の飽和になるように硫安を加えて沈澱させ、この
溶液を１２，０００Ｇで３０分間遠心し、沈澱物を得
た。沈澱物を蒸留水に溶解後セルロースチューブに詰
め、０．０５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中で透析し、硫
安を除いた後、イオン交換樹脂カラムクロマト処理する
ことにより、不要な夾雑物、主として培地成分を除去し
た。
【００１８】さらにこれをゲル濾過カラムに添加し、生
理食塩水で溶出させ、分子量１０，０００〜７０，００
０の範囲の抗原分画を得た。この分画に、０．１〜０．
６ｗ／ｖ％のホルマリンを加え、３７℃で１４日間不活
化を行った。次に、透析処理することによりホルマリン
を除去し、不活化抗原を得た。ワクチンとして使用でき
るタンパク量の収量は１Ｌ培養したとき、約０．１ｍｇ
であった。
理食塩水で溶出させ、分子量１０，０００〜７０，００
０の範囲の抗原分画を得た。この分画に、０．１〜０．
６ｗ／ｖ％のホルマリンを加え、３７℃で１４日間不活
化を行った。次に、透析処理することによりホルマリン
を除去し、不活化抗原を得た。ワクチンとして使用でき
るタンパク量の収量は１Ｌ培養したとき、約０．１ｍｇ
であった。
【００１９】実施例 ２ ワクチンの不活化、確認試験、ウサギの皮内反応：実施
例１において得られた不活化前の抗原タンパク質１００
μｇをウサギの皮内に接種すると、１５時間以内に死亡
した。不活化後１００μｇを同様に皮内に接種したとこ
ろ、ウサギは生存し、皮内反応は陰性であった。
例１において得られた不活化前の抗原タンパク質１００
μｇをウサギの皮内に接種すると、１５時間以内に死亡
した。不活化後１００μｇを同様に皮内に接種したとこ
ろ、ウサギは生存し、皮内反応は陰性であった。
【００２０】実施例 ３ Ｖｅｒｏ細胞に対する細胞変性試験：細胞変性による試
験：Ｖｅｒｏ細胞を５％牛胎児血清加ＭＥＭ培地（Ｇｉ
ｂｕｃｏＵＳＡ）で９６穴マイクロプレートに増殖さ
せ、この上に等量の不活化前の抗原または不活化抗原を
希釈してそれぞれに添加した。その後５日間観察し、細
胞変性の有無を確認した。抗原液のｖｅｒｏ細胞に対す
る変性試験の結果は、表１に示す通りであった。尚、原
液タンパク量は１００μｇ／ｍｌ、＋；陽性、−；陰性
をそれぞれ示す。
験：Ｖｅｒｏ細胞を５％牛胎児血清加ＭＥＭ培地（Ｇｉ
ｂｕｃｏＵＳＡ）で９６穴マイクロプレートに増殖さ
せ、この上に等量の不活化前の抗原または不活化抗原を
希釈してそれぞれに添加した。その後５日間観察し、細
胞変性の有無を確認した。抗原液のｖｅｒｏ細胞に対す
る変性試験の結果は、表１に示す通りであった。尚、原
液タンパク量は１００μｇ／ｍｌ、＋；陽性、−；陰性
をそれぞれ示す。
【００２１】
【表１】 上記の表１に示す通り、不活化抗原は陰性であった。
【００２２】実施例 ４ 致死毒試験：マウスを用いた不活化前抗原の致死毒試験 ｄｄｙ４週令ＳＰＦマウス１群１０匹を用い、実施例１
において調製した不活化前抗原の１０〜１００μｇ／マ
ウスを腹腔内に接種し、７日間観察した。結果は表２の
試験成績に示す通りであった。
において調製した不活化前抗原の１０〜１００μｇ／マ
ウスを腹腔内に接種し、７日間観察した。結果は表２の
試験成績に示す通りであった。
【００２３】
【表２】 上記の表２から明らかなように、１００μｇから５０μ
ｇまで接種した群は、３時間以内に死亡した。それ以外
は、２０時間以内に死亡した。
ｇまで接種した群は、３時間以内に死亡した。それ以外
は、２０時間以内に死亡した。
【００２４】実施例 ５ 生菌接種試験（１）：使用菌株のマウスに対する致死試
験 スタフイロコッカス・アウレウス菌（ＭＲＳＡ患者分離
株）をウサギ血液寒天培地（ＢＢＬ）に塗抹し、ＢＢＬ
嫌気ジャーシステムで２４時間培養した。シャーレに生
理食塩水を加えて、コンラージ棒で掻き採り、１０11cf
u ／ｍｌの菌液を調整した。これを生理食塩水で１０倍
希釈した希釈系列を作り、１０10cfu 〜１０8cfu／ｍｌ
の菌液をｄｄｙ４週令のマウスの腹腔に０．１ｍｌ接種
し、１４日間観察した。使用菌株は、（Ａ）ＴＳＳＴ−
１産生株、（Ｂ）ＴＳＳＴ−１非産生株をそれぞれ使用
した。マウスは各試験濃度に対し１０匹を使用した。そ
の結果は表３および表４に示す通りであった。なお、腹
腔接種量は０．１ｍｌ／マウス、１４日間観察した。
験 スタフイロコッカス・アウレウス菌（ＭＲＳＡ患者分離
株）をウサギ血液寒天培地（ＢＢＬ）に塗抹し、ＢＢＬ
嫌気ジャーシステムで２４時間培養した。シャーレに生
理食塩水を加えて、コンラージ棒で掻き採り、１０11cf
u ／ｍｌの菌液を調整した。これを生理食塩水で１０倍
希釈した希釈系列を作り、１０10cfu 〜１０8cfu／ｍｌ
の菌液をｄｄｙ４週令のマウスの腹腔に０．１ｍｌ接種
し、１４日間観察した。使用菌株は、（Ａ）ＴＳＳＴ−
１産生株、（Ｂ）ＴＳＳＴ−１非産生株をそれぞれ使用
した。マウスは各試験濃度に対し１０匹を使用した。そ
の結果は表３および表４に示す通りであった。なお、腹
腔接種量は０．１ｍｌ／マウス、１４日間観察した。
【００２５】
【表３】 上記の表３から明らかな通り、（Ａ）株の接種試験では
４×１０8cfu／匹で８０％の死亡が認められた。
４×１０8cfu／匹で８０％の死亡が認められた。
【００２６】
【表４】 上記の表４から明らかな通り、（Ｂ）株の接種試験では
１０8cfu／匹接種で５０％以上の死亡が認められた。
１０8cfu／匹接種で５０％以上の死亡が認められた。
【００２７】実施例 ６ 不活化抗原の免疫原性試験（１）：不活化前抗原による
攻撃試験 実施例１で得られた不活化抗原を２．５μｇ及び１０μ
ｇの溶液を作製し、水酸化アルミゲルアジュバントに吸
着させた。それぞれを、ｄｄｙ４週令ＳＰＦマウス１２
０匹を用い、マウスの皮下に０．２ｍｌ接種した。免疫
３週間後に各々のマウスを不活化前抗原及び生菌で攻撃
した。
攻撃試験 実施例１で得られた不活化抗原を２．５μｇ及び１０μ
ｇの溶液を作製し、水酸化アルミゲルアジュバントに吸
着させた。それぞれを、ｄｄｙ４週令ＳＰＦマウス１２
０匹を用い、マウスの皮下に０．２ｍｌ接種した。免疫
３週間後に各々のマウスを不活化前抗原及び生菌で攻撃
した。
【００２８】攻撃試験で生存したマウスと、免疫のみで
攻撃しなかったマウスは、採血して抗体の試験等に使用
した。不活化前抗原は、蛋白量２０μｇ／０．１ｍｌに
調整し、マウスの腹腔に接種し、１４日間観察した。ま
た生菌は、（Ａ）及び（Ｂ）をウサギ血液寒天培地で培
養し、１０10cfu 〜１０8cfu／匹になるように菌液を調
整し、腹腔に接種し、それぞれ１４日間観察した。その
結果は表５〜表７に示す通りであった。
攻撃しなかったマウスは、採血して抗体の試験等に使用
した。不活化前抗原は、蛋白量２０μｇ／０．１ｍｌに
調整し、マウスの腹腔に接種し、１４日間観察した。ま
た生菌は、（Ａ）及び（Ｂ）をウサギ血液寒天培地で培
養し、１０10cfu 〜１０8cfu／匹になるように菌液を調
整し、腹腔に接種し、それぞれ１４日間観察した。その
結果は表５〜表７に示す通りであった。
【００２９】
【表５】
【００３０】
【表６】
【００３１】
【表７】
【００３２】実施例 ７ 抗体産生試験（１）：生菌凝
集抗体価 湿菌量０．５ｍｇ／１ｍｌの菌液を調整し、免疫血清２
５μｌを９６穴マイクロプレートに入れ、０．１ｗ／ｖ
％アルブミン加０．０１Ｍリン酸緩衝液で２倍希釈系列
を作成し、これに調整した菌液を等量加え、ミキサーで
混合した。２時間３７℃で反応させた後、４℃に一夜放
置し、凝集価を測定した。使用したマウスは、抗体測定
用に免疫し、免疫２週間後に採血し、凝集抗体価を測定
した。結果は表８に示す通りであった。試験菌はＴＳＳ
Ｔ−１産生株を使用した。
集抗体価 湿菌量０．５ｍｇ／１ｍｌの菌液を調整し、免疫血清２
５μｌを９６穴マイクロプレートに入れ、０．１ｗ／ｖ
％アルブミン加０．０１Ｍリン酸緩衝液で２倍希釈系列
を作成し、これに調整した菌液を等量加え、ミキサーで
混合した。２時間３７℃で反応させた後、４℃に一夜放
置し、凝集価を測定した。使用したマウスは、抗体測定
用に免疫し、免疫２週間後に採血し、凝集抗体価を測定
した。結果は表８に示す通りであった。試験菌はＴＳＳ
Ｔ−１産生株を使用した。
【００３３】
【表８】 上記の表８に示す通り、非接種群に比べ凝集抗体価の上
昇が認められた。
昇が認められた。
【００３４】実施例 ８ 抗体産生試験（２）：免疫血清中のヘモリジン中和抗体
価 実施例１で得られた不活化前の抗原２５μｇをマイクロ
プレートに採り、希釈液で２倍希釈系列を作り、これに
等量の１％正常ウサギ赤血球を加え、ミキサーで混合し
た後、３７℃で１時間放置し溶血価を測定した。この溶
血価を測定後、不活化前抗原を希釈し、２3 の溶血価に
調整し、逆受身反応試験用ヘモリジン抗原として使用し
た。免疫後のマウスに対するヘモリジンの中和抗体価は
表９に示す通りであった。表中の＊はコントロールの平
均値、＊＊攻撃後生存マウスを示す。
価 実施例１で得られた不活化前の抗原２５μｇをマイクロ
プレートに採り、希釈液で２倍希釈系列を作り、これに
等量の１％正常ウサギ赤血球を加え、ミキサーで混合し
た後、３７℃で１時間放置し溶血価を測定した。この溶
血価を測定後、不活化前抗原を希釈し、２3 の溶血価に
調整し、逆受身反応試験用ヘモリジン抗原として使用し
た。免疫後のマウスに対するヘモリジンの中和抗体価は
表９に示す通りであった。表中の＊はコントロールの平
均値、＊＊攻撃後生存マウスを示す。
【００３５】
【表９】 上記の表９から明らかなように、免疫マスウは抗ヘモリ
ジン抗体価の上昇を認めたが、不活化前抗原で攻撃し、
耐過したマウスはそれ以上の抗体価を示した。
ジン抗体価の上昇を認めたが、不活化前抗原で攻撃し、
耐過したマウスはそれ以上の抗体価を示した。
【００３６】実施例 ９ 抗体産生確認試験（３）：ＴＳＳＴ−１に対する中和抗
体価 ＴＳＳＴ−１はトキシンテクノロジー社（ＵＳＡ）１ｍ
ｇ／ｍｌを使用した。ＴＳＳＴ−１毒素の凝集価を１：
８に希釈した。マイクロプレート上にマウス免疫血清を
２５μｌ採り、これを血清希釈液で希釈した。上記のＴ
ＳＳＴ−１毒素希釈液を２５μｌ各ウエルに加え、２時
間３７℃で反応させ、ミキサーで混合後、室温で一夜放
置後判定した。毒素攻撃後生存したマウスに対する抗Ｔ
ＳＳＴ−１に対する中和抗体価の試験結果は表１０に示
す通りであった。
体価 ＴＳＳＴ−１はトキシンテクノロジー社（ＵＳＡ）１ｍ
ｇ／ｍｌを使用した。ＴＳＳＴ−１毒素の凝集価を１：
８に希釈した。マイクロプレート上にマウス免疫血清を
２５μｌ採り、これを血清希釈液で希釈した。上記のＴ
ＳＳＴ−１毒素希釈液を２５μｌ各ウエルに加え、２時
間３７℃で反応させ、ミキサーで混合後、室温で一夜放
置後判定した。毒素攻撃後生存したマウスに対する抗Ｔ
ＳＳＴ−１に対する中和抗体価の試験結果は表１０に示
す通りであった。
【００３７】
【表１０】 上記の表１０に示す通り、生存マウスは、中和抗体価の
存在が認められた。
存在が認められた。
【００３８】抗血清による感染阻止試験 ｄｄｙクリーンマウス４週令１群１０匹を使用し、以下
の試験を行った。 毒素の中和試験：抗毒素ウサギ血清の希釈系列を作製し
（抗体価５１２〜３２倍）、これに毒素溶液を等量混合
し、１時間反応させる。その後この溶液０．２ｍｌ／匹
を腹腔に接種し、７日間観察した。対照群に毒素溶液
（ヘモリジン価２7 ）を接種した。抗血清による試験結
果を表１１に示す。
の試験を行った。 毒素の中和試験：抗毒素ウサギ血清の希釈系列を作製し
（抗体価５１２〜３２倍）、これに毒素溶液を等量混合
し、１時間反応させる。その後この溶液０．２ｍｌ／匹
を腹腔に接種し、７日間観察した。対照群に毒素溶液
（ヘモリジン価２7 ）を接種した。抗血清による試験結
果を表１１に示す。
【００３９】
【表１１】 ヘモリジン価２7 ／０．１ｍｌのものを使用した。接種
後７日間観察した。対照は１日後に全て死亡した。この
結果から、抗血清は毒素を中和し、治療に使用が可能で
あることが証明された。
後７日間観察した。対照は１日後に全て死亡した。この
結果から、抗血清は毒素を中和し、治療に使用が可能で
あることが証明された。
【００４０】抗血清と生菌攻撃試験：上記の抗血清によ
る感染阻止試験に述べた方法により生菌と抗血清を混合
し、１時間反応させた後、マウスの腹腔に０．２ｍｌ接
種した。接種後、２週間観察した。接種菌量は１０9cfu
／マウスである。その試験結果は表１２に示す通りであ
った。
る感染阻止試験に述べた方法により生菌と抗血清を混合
し、１時間反応させた後、マウスの腹腔に０．２ｍｌ接
種した。接種後、２週間観察した。接種菌量は１０9cfu
／マウスである。その試験結果は表１２に示す通りであ
った。
【００４１】
【表１２】 生菌は１０ＬＤ50を接種し、対照マウスは全て２日間で
死亡した。この結果、過剰投与の生菌に対しても抗血清
は治療効果が認められた。
死亡した。この結果、過剰投与の生菌に対しても抗血清
は治療効果が認められた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:44）
Claims (7)
- 【請求項１】 スタフイロコッカス属に属する菌の菌体
表層タンパク質およびそのスタフイロコッカス属に属す
る菌を培養して得られる培養代謝産物の混合溶液より採
取される分子量約１０，０００〜７０，０００のタンパ
ク質を不活化した抗原よりなり、必要に応じて免疫補助
剤を加えたスタフイロコッカス属菌感染症予防ワクチン
及び治療用抗体。 - 【請求項２】 不活化がホルマリン処理である請求項１
に記載の予防ワクチン及び治療用抗体。 - 【請求項３】 スタフイロコッカス属に属する菌が、ス
タフイロコッカス・アウレウス、スタフイロコッカス・
エピデルミジス、スイタフイロコッカス・サプロフイチ
テイカスである請求項１に記載の予防ワクチン及び治療
用抗体。 - 【請求項４】 スタフイロコッカス・アウレウスが、メ
チシリン耐性スタフイロコッカス・アウレウス（ＭＲＳ
Ａ）である請求項１に記載の予防ワクチン及び治療用抗
体。 - 【請求項５】 培養代謝産物がスタフイロコッカス属菌
の毒素である請求項１に記載の予防ワクチン及び治療用
抗体。 - 【請求項６】 免疫補助剤がアルミニュウム塩、油脂そ
の他補助剤として混合することができるものである請求
項１に記載の予防ワクチン及び治療用抗体。 - 【請求項７】 スタフイロコッカス属に属する菌を培地
に培養し、培養物を菌体と培養液に分け、菌体より菌体
表層タンパク質を抽出して、得られるタンパク質を前記
培養液と混合し、該混合物より分子量が１０，０００〜
７０，０００の抗原タンパク質を採取し、必要により不
活化処理を行うことよりなるスタフイロコッカス属菌感
染症予防ワクチン及び治療用抗原の製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6178581A JPH0840932A (ja) | 1994-07-29 | 1994-07-29 | スタフイロコッカス属菌感染症の予防ワクチン及び治療用抗体並びにそれの製造法 |
| EP95305294A EP0694309A3 (en) | 1994-07-29 | 1995-07-28 | Vaccine, antigens and antibodies containing compound for inhibiting and preventing induced staphylococcus infection |
| KR1019950022793A KR960003742A (ko) | 1994-07-29 | 1995-07-28 | 스타필로코쿠스 감염의 억제 및 예방용 화합물을 함유하는 백신, 항원 및 항체 |
| US08/509,630 US6391315B1 (en) | 1994-07-29 | 1995-07-31 | Vaccine for inhibiting and preventing induced staphylococcus infection, isolated antigens used therein, and isolated antibodies induced thereby |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6178581A JPH0840932A (ja) | 1994-07-29 | 1994-07-29 | スタフイロコッカス属菌感染症の予防ワクチン及び治療用抗体並びにそれの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0840932A true JPH0840932A (ja) | 1996-02-13 |
Family
ID=16050984
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6178581A Pending JPH0840932A (ja) | 1994-07-29 | 1994-07-29 | スタフイロコッカス属菌感染症の予防ワクチン及び治療用抗体並びにそれの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6391315B1 (ja) |
| EP (1) | EP0694309A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0840932A (ja) |
| KR (1) | KR960003742A (ja) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5055455A (en) | 1988-09-28 | 1991-10-08 | Brigham And Women's Hospital | Capsular polysaccharide adhesin antigen, preparation, purification and use |
| AUPN350795A0 (en) * | 1995-06-13 | 1995-07-06 | Australian National University, The | Nucleic acid molecule and its uses in determining pathogenicity of Staphylococcus |
| US7119250B2 (en) * | 1997-06-03 | 2006-10-10 | The University Of Chicago | Plant centromere compositions |
| US7252828B2 (en) | 1998-07-15 | 2007-08-07 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Polysaccharide vaccine for staphylococcal infections |
| RU2179860C1 (ru) * | 2000-06-09 | 2002-02-27 | Курская государственная сельскохозяйственная академия им. И.И. Иванова | Способ получения стафилококкового анатоксина |
| RU2169580C1 (ru) * | 2000-07-06 | 2001-06-27 | Предприятие по производству бакпрепаратов научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН | Способ получения анатоксина стафилококкового очищенного жидкого для специфической иммунотерапии больных стафилококковой инфекцией |
| WO2004043407A2 (en) | 2002-11-12 | 2004-05-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods and products for treating staphylococcal infections |
| PT1565478T (pt) | 2002-11-12 | 2017-11-14 | The Brigham And Women`S Hospital Inc | Vacina de polissacáridos para infeções estafilocócicas |
| EP2468769A1 (en) | 2004-04-21 | 2012-06-27 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Poly-N-acetyl glucosamine (PNAG/DPNAG)-binding peptides and methods of use thereof |
| US8729013B2 (en) | 2004-08-26 | 2014-05-20 | The University Of Western Ontario | Methods of inhibiting staphylobactin-mediated iron uptake in S. aureus |
| DK2829282T3 (en) * | 2007-03-22 | 2018-01-02 | Univ Colorado Regents | Process for preparing an immunologically active adjuvant-linked dried vaccine composition |
| US8415361B2 (en) | 2007-11-09 | 2013-04-09 | The Salk Institute For Biological Studies | Use of TAM receptor inhibitors as antimicrobials |
| RU2377016C1 (ru) * | 2008-04-16 | 2009-12-27 | ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова | Способ получения стафило-стрептококковой анатоксин-вакцины |
| RU2386448C2 (ru) * | 2008-04-29 | 2010-04-20 | ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова | Способ получения ассоциированной анатоксин-вакцины для профилактики и лечения гнойно-септических болезней |
| RU2377014C1 (ru) * | 2008-04-29 | 2009-12-27 | ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова | Способ получения стафилококковой анатоксин-вакцины |
| KR20150041178A (ko) | 2008-07-21 | 2015-04-15 | 더 브리검 앤드 우먼즈 하스피털, 인크. | 합성 베타-1,6 글루코사민 올리고당에 관한 방법 및 조성물 |
| RU2406532C1 (ru) * | 2009-06-04 | 2010-12-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота |
| WO2011091395A1 (en) * | 2010-01-25 | 2011-07-28 | Functional Genetics, Inc. | Antibodies for diagnosis and therapeutic treatment of prostate cancer |
| CN103561762A (zh) * | 2011-03-16 | 2014-02-05 | 明尼苏达大学董事会 | 诱导针对葡萄球菌属中细菌的免疫应答的组合物和方法 |
| US12447127B2 (en) | 2011-05-17 | 2025-10-21 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Thermostable vaccine compositions and methods of preparing the same |
| US20130309273A1 (en) | 2012-05-17 | 2013-11-21 | Kimberly Hassett | Thermostable Vaccine Compositions and Methods of Preparing Same |
| US12397014B2 (en) | 2019-02-05 | 2025-08-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Polysaccharide compositions for use in treating filariasis |
| CN112940987B (zh) * | 2021-04-10 | 2022-10-14 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一株兔金黄色葡萄球菌及其在制备灭活疫苗中的应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1182555A (en) * | 1967-10-16 | 1970-02-25 | Saphar Lab Ltd | An Anti-Mastitis Vaccine |
| US4075321A (en) * | 1973-05-04 | 1978-02-21 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Vaccines, the process for preparing the same and the applications thereof |
| US4327082A (en) * | 1979-07-12 | 1982-04-27 | Adcock-Ingram Laboratories Limited | Mastitis vaccination |
| US4425330A (en) * | 1981-05-20 | 1984-01-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Bovine mastitis vaccine and method for detecting efficacy thereof |
| US5240704A (en) * | 1983-07-03 | 1993-08-31 | Kitasato Kenkyusho | Vaccine, antibodies & antibody-containing compositions for inhibiting human dental caries induced by streptococcus mutans |
| SE454403B (sv) * | 1984-05-30 | 1988-05-02 | Alfa Laval Agri Int | Anvendning av ett cellyteprotein med fibronektin-, fibrinogen-, kollagen-, och/eller lamininbindande egenskaper vid framstellning av sarbehandlingsmedel |
| US5198215A (en) * | 1987-06-22 | 1993-03-30 | Noordzee Laboratorium N.V. | Composition for controlling mastitis in ruminants, method for its preparation and method of treatment of ruminants |
| US5034515A (en) * | 1987-09-22 | 1991-07-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Staphylococcal fibronectin receptor, monoclonal antibodies thereto and methods of use |
| US5055455A (en) * | 1988-09-28 | 1991-10-08 | Brigham And Women's Hospital | Capsular polysaccharide adhesin antigen, preparation, purification and use |
| AU673508B2 (en) * | 1992-02-25 | 1996-11-14 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Directed human immune globulin for the prevention and treatment of staphylococcal infections |
| JPH08508734A (ja) * | 1993-04-05 | 1996-09-17 | ナショナル ジューイッシュ センター フォア イミュノロジィ アンド レスパラトリィ メディスン | 免疫調節による川崎症候群の処置方法 |
-
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- 1994-07-29 JP JP6178581A patent/JPH0840932A/ja active Pending
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- 1995-07-28 KR KR1019950022793A patent/KR960003742A/ko not_active Withdrawn
- 1995-07-31 US US08/509,630 patent/US6391315B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
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