JPH08500328A

JPH08500328A - 突然変異したスーパー抗原の保護作用

Info

Publication number: JPH08500328A
Application number: JP5513459A
Authority: JP
Inventors: ダブリュ．カップラー，ジョン; マーラック，フィリッパ
Original assignee: National Jewish Center for Immunology and Respiratory Medicine
Current assignee: National Jewish Health
Priority date: 1992-01-28
Filing date: 1993-01-28
Publication date: 1996-01-16
Also published as: AU681341B2; EP0626805A1; CA2128415A1; EP0626805A4; WO1993014634A1; KR950700005A; AU3600593A

Abstract

(57)【要約】本発明は、スーパー抗原の毒性作用を防止または治療する方法よりなる。対象は、本来のスーパー抗原と同様の方法でＴ細胞の特異的Ｖβ成分と相互作用する分子で治療される。本発明の分子は、Ｔ細胞の増殖を誘導することなく、抗体産生を誘発する突然変異したスーパー抗原または修飾したスーパー抗原である。

Description

【発明の詳細な説明】突然変異したスーパー抗原の保護作用発明の分野本発明は、抗原介在性疾患および抗原開始性疾患の防止と治療に関する。具体的には、スーパー抗原の病理作用を持たないスーパー抗原に対する抗体応答を誘発する、修飾されたスーパー抗原または突然変異したスーパー抗原である分子の投与による、スーパー抗原病原体に対する保護を与えることに関する。本発明の分子はまた、Ｔ細胞が抗原に応答するような修飾に至る方法でＴ細胞リセプターのＶβ成分と相互作用することもある。発明の背景脊椎動物の免疫系は、微生物や大きな寄生体による感染から脊椎動物を保護するように進化した。この免疫系は以下の２つの方法のいずれかにより抗原に応答する：（１）血中を循環し、それらを誘導した外来の抗原に特異的に結合する蛋白抗原の産生を含む、Ｂ細胞介在性の体液性抗体応答。抗原への抗体の結合により、食細胞が抗原を消化し、抗原を破壊するのを助ける血中蛋白系（まとめて補体と呼ばれる）をしばしば活性化する；そして（２）もし抗原が感染性ウイルスの場合は宿主細胞を死滅させることにより、または他の宿主細胞（例えば食細胞）を誘導して抗原を破壊することにより、主に宿主細胞の表面上の外来の抗原と反応する特殊な細胞の産生を含む、Ｔ細胞に介在される細胞介在性免疫応答（細胞の分子生物学（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＣｅｌｌ）（１９８３）、アルバーツ（Ｂ．Ａｌｂｅｒｔｓ）ら（編）、第１７章、９５２頁）。抗体の産生には、抗体を産生するＢ細胞の刺激に至る多くの前段階が起きることが必要である。抗体産生に至る工程に含まれる主要な段階の１つは、抗原認識の段階である。抗原認識には胸腺（Ｔ）細胞の参加が必要である。Ｔ細胞はその表面にＴ細胞抗原リセプター（ＴＣＲ）と呼ばれる抗原特異的リセプターを有する。Ｔ細胞が蛋白抗原を認識することができる前に、抗原は抗原提示細胞の表面に提示されなければならない。抗原はまずマクロファージまたは他の抗原提示細胞により処理されなければならない。これらの細胞は基本的に抗原を飲み込み、それらをペプチドに切り刻んで、ぺプチドは主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子とともに細胞表面に提示する。主要組織適合抗原は、主要組織適合複合体と呼ばれる遺伝子の複合体によりコードされる抗原のファミリーである。ＭＨＣ抗原はすべての高等脊椎動物の細胞の上に発現される。ヒトにおいてはこれらは最初に白血球の上で証明されたため、ＨＬＡ抗原（ヒト白血球関連抗原）と呼ばれる。ＭＨＣ分子には２つの主要なクラス（クラスＩとクラスII）がありそれぞれ細胞表面糖蛋白のセットよりなる。この２つのクラスのＭＨＣ抗原はＴ細胞の異なる亜集団を刺激する。ＭＨＣクラスII分子は病原体に対する多くの応答に関与している。これに対してＭＨＣクラスＩ分子は、病原体がウイルスまたは悪性腫瘍細胞の場合に関与する。ＭＨＣクラスＩが関与する時、抗体刺激は起きず、ＭＨＣクラスＩ処理した抗原とＴ細胞の相互作用により、病原体に感染した細胞の溶解が起きる。処理された抗原ぺプチドはＭＨＣ分子の裂け目に適合する。抗原が提示されると、その特定のペプチドに対するリセプターを有する体の中の数個のＴ細胞がその複合体に結合する。多くのＴ細胞は、同じ細胞表面上の自己ＭＨＣ糖蛋白と一緒の場合のみ細胞の表面上の抗原を認識する。処理された抗原およびＭＨＣ複合体と複合体を形成するＴ細胞の能力は、Ｔ細胞リセプター（ＴＣＲ）に依存する。ＴＣＲは２つの蛋白鎖（αとβ）よりなる。各鎖は定常ドメインと可変ドメインを有する。可変ドメインは２つ（α）または３つ（β）の異なる遺伝子断片中にコードされている（可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）、結合（Ｊ））（シウ（Ｓｉｕ）ら（１９８４）Ｃｅｌｌ３７：３９３；ヤナギ（Ｙａｎａｇｉ）ら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３４３０）。各Ｔ細胞においてα鎖とβ鎖のＶ、ＤおよびＪドメインの組合せが、Ｔ細胞にのみ特徴的な方法で抗原認識をし、唯一の結合部位を規定する。マラック（Ｍａｒｒａｃｋ）ら（１９８８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ９：３０８；トヨナガ（Ｔｏｙｏｎａｇａ）ら（１９８７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５８５；デービス（Ｄａｖｉｓ）（１９８５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５２９；ヘンドリック（Ｈｅｎｄｒｉｃｋ）ら（１９８２）Ｃｅｌｌ３０：１４１；バビット（Ｂａｂｂｉｔｔ）ら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１７：３５９；ブース（Ｂｕｕｓ）ら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３５：１３５３；タウンゼント（Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）ら（１９８６）Ｃｅｌｌ４４：９５９；ビヨルクマン（Ｂｊｏｒｋｍａｎ）ら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ３２９：５０６）を参照。一般的に α鎖とβ鎖は、処理された抗原とＭＨＣにより形成されるリガンドの認識に関与している。Ｔ細胞が抗原により刺激される時、それらは分裂し、種々の細胞介在性免疫反応に関与する活性化エフェクター細胞に分化する。Ｔ細胞により少なくとも３つの反応が行われる：（１）細胞毒性Ｔ細胞は外来性またはウイルス感染した脊椎動物細胞を特異的に死滅させる；ヘルパーＴ細胞はＢリンパ球を助ける；そして（３）サプレッサーＴ細胞は特異的細胞の応答を抑制する。最近「スーパー抗原」と呼ばれる新規のクラスの抗原は、特定のＶβ成分（すなわちＴＣＲのβ鎖の可変ドメイン）に結合することによりＴ細胞を直接刺激することができることが証明されている（カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８７）Ｃｅｌｌ４９：２６３；カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８７）Ｃｅｌｌ４９：２７３；マクドナルド（ＭａｃＤｏｎａｌｄ）ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：４０；プレン（Ｐｕｌｌｅｎ）ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３５：７９６；カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３５；アベ（Ａｂｅ）ら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：４１３２；ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）ら（１９８９）Ｃｅｌｌ５６：２７；ジェーンウェイ（Ｊａｎｅｗａｙ）ら（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１０７：６１；バーコフ（Ｂｅｒｋｏｆｆ）ら（１９８０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３１８９；カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：８１１）。従来のペプチド抗原の認識と異なり、Ｔ細胞リセプターの他の成分（すなわちＤβ、Ｊβ、Ｖα、Ｊα）はスーパー抗原結合に何の役割も果たしていないようである。スーパー抗原は一般的にＴ細胞に対して刺激性であるが、刺激されたＴ細胞上に存在する特定のＶβ成分とのみ相互作用するようである。Ｖβ遺伝子の相対的な数は限定ざれているため、多くのＴ細胞は個々の細胞内で特定のＶβ成分を有し、従って特定のスーパー抗原はＴ細胞群の大部分と相互作用することができる。すなわちＶβ集団の頻度に依存して、全Ｔ細胞群の５−３０％はスーパー抗原により刺激されるが、通常の抗原に対する同様の応答はふつう１０００分の１よりはるかに小さい。スーパー抗原はクラスIIＭＨＣ分子と相互作用するが、これらはべプチドとしてよりもインタクトの蛋白として作用するようである。すなわちこれらは通常のペプチドの結合する溝には結合しないようである。その代わりこれらは結合溝の外壁上のアミノ酸残基と相互作用するようである。既知のスーパー抗原とそれらの配列と構造については表Ｉに記載されている。２つの明確なクラスのスーパー抗原が記載されている。最初のものは２０年前に注目され、この時フェステンスタイン（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎ）は、あるＭＨＣの同じ株間で混合リンパ球反応において著しい反応を見いだした。刺激性の抗原をＭＨＣ抗原と区別するために次位（ｍｉｎｏｒ）リンパ球刺激性（Ｍｌ）抗原と呼んだ（フェステンスタイン（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎ）ＴｒａｎｓｐｌａｎｔＲｅｖ．１５：６２）。これらのスーパー抗原は内因性のレトロウイルス遺伝子によりコードされている（パーマー（Ｐａｌｍｅｒ）（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏ．１：７４）。マウスにおいてこれらの遺伝子が存在すると、応答するＴ細胞の顕著な欠失が起き、動物のＴ細胞リセプター群中に大きな穴ができる可能性がある（プレン（Ｐｕｌｌｅｎ）ら（１９８８）前述）。スーパー抗原の第２のセットは、注射の後に種々の病原作用を産生することができる細菌蛋白またはウイルス蛋白について増え続けるリストにより示される（マラックとカプラー（Ｍａｒｒａｃｋ＆Ｋａｐｐｌｅｒ）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４８：７０５）。普通に見られるヒトの病原体である黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（Ｓ．ａｕｅｕｓ））は、ＳＥＡ（スタフィロコッカスエンテロトキシンＡ）からＳＥＥまで命名されているいくつかのエンテロトキシン（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ）を産生し、これらはヒトの食中毒や時にショックに関与している（マラックとカプラー（Ｍａｒｒａｃｋ＆Ｋａｐｐｌｅｒ）（１９９０）前述；ボハッチ（Ｂｏｈａｃｈ）ら（１９９０）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．１１７：２５１）。いくつかのＳ．ａｕｒｅｕｓ単離株はまた、ヒトの大多数の毒性ショック症候群に関与していると考えられている毒性ショック症候群トキシン−１（ＴＳＳＴ−１）や、皮膚剥離症候群（ｓｃａｌｄｅｄｓｋｉｎｓｙｎｄｒｏｍｅ）に関連する関連剥離性トキシン（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅｔｏｘｉｎｓ）（ＥｘＴＦ）を産生する。別の一般的なヒトの皮膚や咽頭の病原体であるストレプトコッカスピロゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｒｏｇｅｎｅｓ）（すなわちＡ群ストレプトコッカス）もまた、スーパー抗原性を有するトキシンを産生する（アベ（Ａｂｅ）ら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１４６：３７４７）。これらはストレプトコッカスエリスロゲニックトキシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌｅｒｙｔｈｒｏｇｅｎｉｃｔｏｘｉｎｓ）Ａ−Ｃ（ＳＰＥＡ−Ｃ）と命名されている。Ｓ．ａｕｒｅｕｓトキシンのアミノ酸配列はいくつかの相同性を示すが、また顕著な差異も示す（ベントレー（Ｂｅｎｔｌｅｙ）ら（１９８８）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７０：３４；ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら（１９８６）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６６：２９；リー（Ｌｅｅ）ら（１９８８）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７０：２９５４；ブロムスター−ハウタマア（Ｂｌｏｍｓｔｅｒ−Ｈａｕｔａｍａａ）ら（１９８６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１５７８３）を参照）。Ｓ．ａｕｒｅｕｓはＭＨＣクラスII型分子を有するマウスの細胞の存在下で強力なＴ細胞の増殖応答を刺激する抗体を有する（カールソン（Ｃａｒｌｓｏｎ）ら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：２８４８；ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）ら（１９８９）Ｃｅｌｌ５６：２７）。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ蛋白は、特定のＶβ成分を有する齧歯類の細胞を選択的に刺激する。クラスIIＭＨＣ分子へのトキシンの結合はＴ細胞認識に必須であるが、この工程は通常の抗原で見られるよりも許容性が高い。ぺプチド抗原は結合に際してアレレ（対立遺伝子）性ＭＨＣ残基に依存性が高いが、スーパー抗原は広範囲のアレレ性およびイソタイブ型のＭＨＣクラスII分子に結合する（ハーマン（Ｈｅｒｍａｎｎ）ら（１９８９）Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：２１７１；ハーマン（Ｈｅｒｍａｎｎ）ら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：７０９；ショール（Ｓｃｈｏｌｌ）ら（１９９０），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：２２６；モレック（Ｍｏｌｌｅｃｋ）ら（１９９１９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：４６３を参照）。Ｔ細胞はめったに自己ＭＨＣ（アロＭＨＣ（ａｌｌｏ−ＭＨＣ））分子に結合したぺプチド抗原を認識しないが、個々のＴ細胞は、種々のアレレ型のＭＨＣのみでなく異なるクラスIIイソタイプや異種間（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ）クラスII分子にさえ結合したトキシンに応答することができる。そのような観察事実は、スーパー抗原は、従来のペプチド抗原が結合すると考えられているアレレとして超可変性の溝より外で比較的保存された部位で結合することを示唆している。スーパー抗原は自己免疫疾患に関係することもあり、ここでは免疫系の成分が正常な組織を攻撃する。自己に応答するＴ細胞（有害な可能性のある自己反応性Ｔ細胞）の欠失の工程は寛容または陰性選択と呼ばれる（カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８７）Ｃｅｌｌ４９：２７３；カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３５；マクドナルド（ＭａｃＤｏｎａｌｄ）ら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：４０；フィンケル（Ｆｉｎｋｅｌ）ら（１９８９）Ｃｅｌｌ５８：１０４７）。免疫系は通常自己反応性Ｔ細胞は欠失するが、時にこの監視機構を免れるものがいくつかある。ヒトのＴ細胞群の２０％を刺激するスーパー抗原の能力は、自己を認識する循環する数個のＴ細胞の好ましくない複製につながることが示唆されている（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）ら（１９９２）ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ２６６：９２）。ある種のＶβ型を有するＴ細胞は、関節炎や多発性硬化症などの種々の自己免疫症状への関与が示唆されている。これらの知見は破壊性の細胞は、同定されたＶβ型に結合するスーパー抗原により活性化されることを意味する（ジョンソン（Ｊｏｈｎｓｏｎ）ら（１９９２）前述）。自己免疫疾患は免疫系が自己を認識できないことの結果である。免疫系による宿主細胞の攻撃により以下のような多数の疾患が起きる：多発性硬化症や重症筋無力症のような神経疾患、リウマチ様関節炎のような関節の疾患、全身性エリテマトーデスで観察されるような核酸への攻撃、種々の臓器に関連する他の疾患（例えば乾癬、若年生糖尿病、シェーグレン症候群、および甲状腺疾患））。これらの疾患は種々の症状を有し、軽いものから生命をおびやかすものまである。例えばリウマチ様関節炎（ＲＡ）は慢性で再発性の炎症性疾患であり主に関節が関与しており、北アメリカの人口の１−３％に影響を与え、女性対男性の比は３：１である。重症のＲＡ患者は、血管炎、筋萎縮症、皮下結節、リンパ腫、脾腫、および白血球減少症などの関節外の症状を示す。ＲＡ患者の約１５％は完全に運動痺痲を起こすと推定されている。自己抗原に特異的なＴ細胞が自己免疫疾患の開始に決定的な役割を果たすことが、いくつかの証拠により示唆されている。ＲＡの場合は、ＭＨＣクラスIIの遺伝子のＤＲ４とＤＲ１アレレとのつながり、そして時に関節液や影響を受けた関節の組織中の小数クローン性の活性化ＣＤ４⁺Ｔ細胞（スタストニー（Ｓｔａｓｔｎｙ）ら（１９７６）Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２９８：８６９；ギボフスキー（Ｇｉｂｏｆｓｋｙ）ら（１９７８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４８：１７２８；マクミシェル（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ）ら（１９７７）Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．２０：１０３７；シッフ（Ｓｃｈｉｆｆ）ら（１９８２）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．４１：４０３；ヅグエストイ（Ｄｕｇｕｅｓｔｏｙ）ら（１９８４）Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１６５；レグランド（Ｌｅｇｒａｎｄ）ら（１９８４）Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．３６：６９０；グレゲルス（Ｇｒｅｇｅｒｓｅ）ら（１９８７）Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．３２：１５；バーメスター（Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ）ら（１９８１）Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．２４：１３７０：フォックス（Ｆｏｘ）ら（１９８２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ１．１２８：３５１；ヘムラー（Ｈｅｍｌｅｒ）ら（１９８６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７８：６９６；スタメンコイック（Ｓｔａｍｅｎｋｏｉｃ）ら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：１１７９）の知見は、この疾患へのＣＤ４⁺、αβＴＣＲを有するクラスII 限定性Ｔ細胞の関与を示唆している。この見解は種々の方法によりＴ細胞の部分的除去または阻害をすると、ある患者では疾患が緩和されるという知見により支持される（パウルス（Ｐａｕｌｕｓ）ら（１９７７）Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．２０：１２４９；カーシュ（Ｋａｒｓｈ）ら（１９７９）Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．２２：１０５５：コチン（Ｋｏｔｚｉｎ）ら（１９８９）Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０５：９７６；へルツォーク（Ｈｅｒｚｏｇ）ら（１９８７）Ｌａｎｃｅｔｉｉ：１４６１；ヨーカム（Ｙｏｃｕｍ）ら（１９８９）Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．１０９：８６３）。米国特許出願第０７／７３２，１１４号（参考のためここに具体的に引用されている）は、自己免疫疾患の診断のために特異的Ｖβ成分が使用できること、具体的にはＲＡを診断するのに関節液中の高い割合のＶβ１４⁺Ｔ細胞の存在が使用できることを示している。自己免疫疾患の治療法の開発に焦点をあてた多くの研究がなされている。例えばヨーロッパ特許公報第３４０，１０９号（標題：自己免疫疾患治療として抗Ｔ細胞リセプター決定基）、および１９８５年１０月２９日出願の米国特許第４，５５０，０８６号（ラインハルツ（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ）ら（標題：ヒトＴ細胞を認識するモノクローナル抗体）は、特定の疾患に関連したＴ細胞リセプターの可変領域遺伝子の特定の配列の検出法と、その配列に対する抗体による疾患の治療法を記載している。１９８９年１２月１２日出願の米国特許第４，８８６，７４３号（フッド（Ｈｏｏｄ）ら）（標題：Ｔ細胞リセプターの可変領域内の唯一の配列に基づく診断試薬とその利用）は、特定の疾患に関連するＶβ領域中の唯一の配列を有するＴ細胞の存在に基づく疾患の診断方法を記載している。ＰＣＴ特許出願公報第Ｗ０９０／０６７５８号は、ＲＡに関連した特異的なＶβ領域（具体的にはＶβ３、Ｖβ９およびＶβ１０）を検出する方法と、Ｖβ３、Ｖβ９およびＶβ１０を認識するモノクローナル抗体によるＲＡの治療法を記載している。免疫病原体に暴露されたことのない動物は、それに対して特異的な防御を有していない。しかし病原体と化学構造が類似であるが病原作用を示す能力のない非病原型の病原体を注射することにより、動物を病原体に対して免疫することができる。動物は病原体の非病原型に対して特異的な抗体を産生し、これらの抗体は動物を病原型の病原体から防御する。発明の要約本発明は分子を用いる治療によるスーパー抗原の毒性作用を防止する方法を包含し、ここで該分子はＴ細胞活性化をすることなく抗体産生を誘発する。本発明はまた、スーパー抗原の修飾された誘導体または突然変異した誘導体よりなる分子を包含する。本発明はさらに、Ｔ細胞リセプター（ＴＣＲ）のＶβ成分のみまたはα鎖およびβ鎖の両方と相互作用する分子を投与することよりなる、抗原により誘発されるＴ細胞応答を修飾する方法を包含する。本発明の分子は、特定のＶβ成分を提供するＴ細胞の少なくとも１つまたはそれ以上の亜集団の欠失または不活性化／脱感作に導くことにより機能する。スーパー抗原の毒性作用を防止するには、この作用の達成方法を正確に理解する必要がある。本発明より以前に、スーパー抗原がどのようにしてＴ細胞と相互作用するかは公知であったが、対象動物が病状を示す機作と病状は進展するのか否かについては十分理解されてこなかった。種々の観察事実は、いくつかの機構のうちのどれかが毒性の原因であることを示唆している。スーパー抗原に介在されるかまたは開始される病状は、本発明の突然変異体スーパー抗原分子の投与により、防止されるかまたは治療されることが見いだされた。本発明の突然変異トキシンの投与により、突然変異分子に対する抗体産生を引き起こすことがある。これらの抗体のいくつかはまた、正常の非突然変異トキシンと反応する。従って免疫された個人が通常のトキシンに直面する時、これらの交差反応性抗体は通常のトキシンと反応しそのトキシン活性を阻害する。図面の簡単な説明図１はＳＥＢの３次元構造のリボン模式図である。領域１（残基９−２３）、領域２（残基４０−５３）、および領域３（残基６０−６１）は影をつけて区別されている。ＭＨＣまたはＴＣＲ結合に関与する部位が示してある。ＭＨＣおよび／またはＴＣＲ結合に重要な突然変異解析により同定される残基が示してある。図２ａは大腸菌から精製された２μｇの組換えＳＥＢとＳ．ａｕｒｅｕｓ培養物から精製された野生型ＳＥＢのＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析を示す。分子量マーカー（ｋＤ）：β−ホスホリラーゼ、９４；ウシアルブミン、６９；オバルブミン、４５；カルボキシラーゼ、３０；大豆トリプシンインヒビター、２１；リゾチーム、１４。図２ｂはＬＧ２細胞上のＤＲへのＳＥＢ結合のＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析を示す。分子量マーカー（ｋＤ）：ウシアルブミン、６９；オバルブミン、４５；キモトリプシノーゲン、２７；大豆トリプシンインヒビター、２１；ミオグロビン、１７；リゾチーム、１４。図３はＳＥＢ突然変異体の配列を示す。破線はＳＥＢの突然変異していない部分を示す。ＳＥＢ突然変異体を作成するのに使用したオリゴヌクレオチドの位置も示してある。図４はＤＲ−１を有するリンパ芽腫株Ｔ−Ｇ２細胞へのＳＥＢとＳＥＢ突然変異体の結合を示す。図５は領域１ＳＥＢ突然変異体によるＴ細胞ハイブリドーマの刺激を示す。精製したＳＥＢまたは領域１突然変異体の調製物を、ＳＥＢを認識することが公知のＶβ成分を有するＴ細胞ハイブリドーマの集団を刺激する能力について試験した：ＫＳ−２０．１５（Ｖβ７）、ＫＳ−６．１（Ｖβ８．２）、ＫＳ−４７．１（Ｖβ８．３）、Ｋ１６−５７（Ｖβ８．１）。図６は領域２ＳＥＢ突然変異体によるＴ細胞ハイブリドーマの刺激を示す。精製したＳＥＢの調製物を図５のように試験した。図７は領域３ＳＥＢ突然変異体によるＴ細胞ハイブリドーマの刺激を示す。精製したＳＥＢの調製物を図５のように試験した。図８はＳＥＢとその突然変異体のインビボでの作用を示す。３匹の群のマウスの重量を測定し、次に０、５０μｇ（左）または１００μｇ（右）の組換えＳＥＢまたは突然変異体ＳＥＢＢＲ−２５７またはＳＥＢＢＲ−３５８を含有するバランスト塩溶液（ＢＳＳ）を与えた。図９はＳＥＢ抗原投与に対する突然変異体トキシンの防御効果を示す。マウスに野生型のＳＥＢ抗原投与の３カ月前に生理食塩水またはＢＲ−２５７を投与した。発明の詳細な説明本発明の分子は、抗原介在性疾患および抗原開始性疾患を異なる方法で防止または治療するのに有効である。本発明の分子が有効である異なる方法には、病原体に対して防御を与えるＴ細胞応答の修飾と抗体の産生がある。具体的には本発明は、スーパー抗原介在性疾患およびスーパー抗原開始性疾患の防止または治療法を与える。本発明の方法は一般的に、当該分野で公知であり本発明中に記載されている方法により、突然変異したスーパー抗原分子を調製し、ＭＨＣまたはＴＣＲに結合することができる抗原突然変異体を同定し、そして突然変異していないスーパー抗原への暴露に対して防御能を与えることができるか否かを試験することよりなる。本発明は既知のスーパー抗原に対する防御を達成するための前述の方法の実現可能性を記載する。組換えスタフィロコッカスエンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）の突然変異体を調製し、以下の実施例１−４に記載のように精製した。ＨＬＡ−ＤＲ１ホモ接合リンパ芽種株ＬＧ２細胞への突然変異体ＳＥＢ分子の結合と異なるＶβ成分を有するＴ細胞ハイブリドーマの刺激を調べて、ＭＨＣ分子またはＴＣＲに結合することができるＳＥＢ突然変異体を選択した。突然変異していないＳＥＢと区別できない程度にＬＧ２細胞に結合しＴ細胞ハイブリドーマを刺激しなかったＳＥＢ突然変異体ＢＲ−２５７を、ＳＥＢに暴露する３カ月前に実験動物に注射すると、ＳＥＢの毒性作用に対して完全な防御を示した。霊長類でも同様の結果が得られた。本発明の開示内容はＳＥＢの以後の抗原投与に対して動物を防御することができる、突然変異したＳＥＢ分子の産生を記載しているが、本発明の方法は他のスーパー抗原にも同様に適用可能である。スーパー抗原が介在する自己免疫疾患の検出法や治療法として、先に詳述した自己免疫疾患の診断に特異的Ｖβ成分の存在を利用することができる能力を本発明とともに組合せることができる。スーパー抗原の介在する疾患の存在は、「指紋」解析（例えば疾患状態でＶβ成分に変化があるか否か）により、測定することができる。Ｖβ成分中の変化（リウマチ様関節炎の関節液中のＶβ１４⁺Ｔ細胞の増加）は、スーパー抗原介在疾患の存在を示唆している。次に示唆されるスーパー抗原を同定するのに、当該分野で公知の方法を適用することができる。疾患の開始または進展にスーパー抗原の関与の可能性があるか否かについて、Ｖβ 指紋を公知のスーパー抗原のそれと比較することができる。ウイルス感染または細菌感染が疾患の開始に関連している時は、スーパー抗原をコードする遺伝子を探索してもよい。スーパー抗原が同定または単離されれば、スーパー抗原の暴露に対して防御を与えることができる突然変異スーパー抗原分子を産生するのに、本発明の方法が適用される。本明細書において種々の用語が使用され、それらについて定義することが有用であろう。以下にそれらを示すが、これらは以下の実施例で使用されていることを注目すべきである。前述したように免疫応答における主要な過程は、ＭＨＣ分子が抗原と相互作用してＴ細胞に提示される複合体を形成することである。一般にＴ細胞応答は非常に特異的であり、抗原とＭＨＣ分子の特定の複合体に対して応答するＴ細胞の亜集団は非常に限定される。この応答は一般にＴ細胞リセプターのほとんどまたはすべての成分の相互作用を必要とする。しかしながらある場合においては、提示された抗原はリセプターのＶβ成分とのみ相互作用すればよく、他のすべての成分は基本的に関係がない。これは抗原は、通常の場合よりも多くのＴ細胞と反応することができ、かつしていることを意味している。本発明の分子は、Ｔ細胞がスーパー抗原に応答するような修飾に至るように、Ｔ細胞リセプターのＶβ成分と相互作用することができる。「Ｔ細胞応答性を修飾する」ことは、対象のＴ細胞が投与された分子により刺激された時、または同時、前または後に投与された抗原に対して応答する方法を変化させることができることを意味する。例えばＴ細胞の成長の初期にある亜集団は提示された抗原に相互作用し欠失される。本発明の分子はこうして（すなわち特定のＶβ成分を提示するＴ細胞の少なくとも１つまたはそれ以上の亜集団の欠失または不活性化／脱感作に導くことにより）作用する。本発明の特定の実施態様において、分子は、検討の対象に通常起きるＢ細胞応答を変化させることなく、Ｔ細胞応答を修飾する。このタイプの物質は、例えば対象に受動免疫を与えることにより、またはワクチンとして作用することにより、有用である。スーパー抗原誘導体を使用する時、これらは制限されたＴ細胞応答を引き起こさず、Ｂ細胞応答を引き起こすように抗原として作用するため、これらの誘導体はもうスーパー抗原性は有しない。本発明のスーパー抗原誘導体はスーパー抗原蛋白に対して通常の抗体産生を誘発することができる。本発明の抗原はまた、他の抗原の競合物質として見ることができる。ここに記載する分子が、他の場合には抗原またはスーパー抗原に対する全面的な応答を産生するのに必要なＭＨＣ成分と相互作用するなら、これらはその応答の程度を防止または低下させるであろう。本発明の分子はまたある場合には「エンハンサー」として見ることができ、この場合個々のＴ細胞応答はいくつかの理由により障害されるか、または減弱される。本発明の包含する分子の投与により、個々のＴ細胞集団は大幅に拡大される。本明細書で「Ｔ細胞応答性を修飾する」という用語は、いつも第２の成分（例えば抗原）に対するものであり、特にいつもＴ細胞リセプターの一部として特定のＶβ成分を提示するＴ細胞の応答に対するものであり、リセプターの他の成分は基本的に関係がない。本発明の分子は、少なくともＭＨＣ分子に結合するのに充分なサイズのアミノ酸配列を含有する。残りの分子はアミノ酸、または炭水化物または脂質構造よりなっていてもよい。「応答性を低下させる」という用語は、特定のＶβ成分を発現するＴ細胞の部分を欠失させることも意味する。本明細書で使用する「スーパー抗原誘導体」とは、少なくともその構造がＭＨＣまたはＴ細胞に結合するのに必要なスーパー抗原またはスーパー抗原の一部により提示されるアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を含有する分子を意味する。「修飾された」スーパー抗原誘導体（または断片）は、「突然変異した」スーパー抗原（または断片）とは異なる。「修飾されたスーパー抗原」という用語は、スーパー抗原のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含有するが、スーパー抗原分子自身には見られない修飾を含有する分子を意味すると定義される。例えばスーパー抗原がアミノ酸１−２５０を含有するなら、「修飾された」スーパー抗原誘導体は、本来のスーパー抗原分子中には見られないアミノ酸配列が広がった部分に位置する、アミノ酸５０−７５と同じ配列を含有する。追加の修飾は例えば、異なるグリコシル化またはグリコシル化の欠如、または通常は何もないところのグリコシル化がある。「突然変異した」スーパー抗原とは、分子の本来の形に比較して突然変異の実際のアミノ酸配列が変化している構造を意味する。例えばスーパー抗原がアミノ酸１−２５０を含有する場合、突然変異したスーパー抗原は、対応する本来の配列と同じであるがアミノ酸６９−７１で異なる、アミノ酸５０−６８と７２−７５を含有する。この差は、異なるアミノ酸が使用される「置換」、アミノ酸が追加されて本来の形より長い「付加」、またはアミノ酸が欠失している「欠損」のうちの１つである。「ワクチン」とは、対象に投与された時ワクチン一般に典型的な同じタイプの応答（例えば免疫予防）を引き起こす製剤を意味する。ワクチンはアジュバントまたは他の物質を含有してもよい。スーパー抗原として知られている分子のクラスはＴ細胞リセプターの特定のＶ β成分と相互作用し、特定のＴ細胞亜集団が大量に増加することは公知である。ＭＨＣ分子とスーパー抗原の前の相互作用を仮定しているこの相互作用は、Ｔ細胞リセプターの他の領域とは完全に独立している。ＭＨＣとペプチドの相互作用に関連して、ＭＨＣ分子は種々の「表現型」として入手でき、異なる表現型は種々の提示されたペプチドや抗原に対して特異的であることに注意すべきである。例えばＨＬＡ−ＤＲはＳＥＢの提示に関連していることは公知である。すなわち異なるＭＨＣ表現型は異なる抗原にとって価値があるが、ＨＬＡ表現型の測定と特定の抗原または抗原ファミリーの提示との相関の測定は充分に当業者の技術範囲内にある。すなわち本発明は、ＭＨＣ分子とＴ細胞リセプターの少なくとも１つのＶβ成分の両方に相互作用する分子の対象への投与を介する、Ｔ細胞応答の修飾を含む。この相互作用はいくつかの方法でＴ細胞応答に影響する。応答に影響するおそらく最も初歩的な方法は、分子がＭＨＣ分子と相互作用し、他の分子のＭＨＣへの結合を妨害することである。通常の抗原またはスーパー抗原はＴ細胞増殖性応答を引き起こす複合体をＭＨＣと形成することができないため、競合する分子が修飾されるかまたはＴ細胞の増殖を誘導しない場合、応答の減弱または排除があるであろう。Ｔ細胞応答を修飾する他の方法は、Ｔ細胞を「脱感作」、「不活性化」または「アネルギー化」（免疫力低下）することである。この機構は、ＭＨＣ分子、抗原およびＴ細胞リセプターとの相互作用、以下のダウンレギュレーション（ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）またはＴ細胞の不活性化を含む。この機構は成熟した対象では、胎児で発生する欠失現象より一般的である。後者の現象は、３つの単位の相互作用を介してＴ細胞の種々の亜集団が実際に生物から除去される１つである。Ｔ細胞応答の修飾はまた、Ｔ細胞亜集団の刺激を含む。本明細書で記載される情報は、当業者がＭＨＣと相互作用する物質およびＴ細胞の特定の亜集団を対象に投与して、Ｔ細胞の亜集団を増殖させることを可能にする。この方法は、特定のＶβ亜集団が病状（例えば自己免疫疾患）に関連している場合、疾患の治療に特に好ましい。免疫応答とはよく考えるとＢ細胞とＴ細胞の応答の両方を含むことを理解すべきである。本発明の１つの面は、Ｂ細胞応答を修飾することなくＴ細胞応答を修飾する分子の使用である。そのような物質は、後述するように特にワクチンとして有用である。本発明の分子は、好ましくは（しかしこれに限定されない）スーパー抗原誘導体である。これらの誘導体は前述したように修飾または突然変異されてもよい。これらの分子または本明細書に記載の他の分子は、記載される方法でＴ細胞応答を修飾するのに充分な量で投与される。使用される物質の量は、実際の物質、必要な応答および治療の対象により異なる。該分子はまたワクチンとしても作用する。これらのワクチンは、分子の普通の型に通常関連する全Ｔ細胞応答なしで、Ｂ細胞応答を産生するという意味で、対象に防御免疫を与える。実施例７は、ＳＥＢの効果の１つを示す。再び、当業者の知識の調節範囲内の変数（治療すべき症状、調節されるＶβ分子など）に依存して、ワクチンとして選択される物質は当業者の責任である。このワクチンは、ワクチン組成物として通常見られる他の物質（アジュバント、担体など）を含有していてもよい。本明細書に記載の物質の投与法（静脈注射、腹腔内注射および筋肉内注射）は、対象への治療薬の投与の他の標準的方法のすべてと同様に異なる。本発明はまた、前述の方法に有用な特定の突然変異体を作成する方法を開示する（例えば突然変異体をコードする単離された核酸配列、これらやこのために使用されるベクターおよびプラスミッドにより形質転換される細胞株、及び単離された突然変異体分子（突然変異スーパー抗原を含む）を含む）。本明細書中に記載される本発明の他の応用は当業者に明らかであり、ここで繰り返す必要はないであろう。使用される用語や表現は、記述のためであり決して限定するものでなく、そのような用語や表現を用いる場合に示され記載される特徴と同等のものおよびその一部を決して排除するものではなく、本発明の範囲内において種々の修飾が可能であることは理解すべきである。ポリメラーゼチェイン反応（ＰＣＲ）や標準的分子生物学的方法（実施例１に記載）は、組換えＳＥＢの作成と発現に使用された。そのような突然変異体は、実施例２に記載の２つの方法のうちの１つにより作成された。最初の方法はＳＥＢ遺伝子の全長にわたってランダムな突然変異を導入した。第２の方法はＳＥＢ遺伝子の約６０−７５塩基に規定される領域中にランダムな突然変異を導入した。突然変異ＳＥＢの可能性のあるものの最初の同定では、ヒトＤＲ−発現細胞株中の異なるＶβ成分を有する齧歯類のＴ細胞ハイブリドーマの刺激により、機能するトキシンの存在につき形質転換体からの溶解液を試験した。Ｔ細胞ハイブリドーマの刺激で陰性の溶解液は、ＳＥＢに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）の使用によりＳＥＢの存在を試験した（実施例３）。非機能性のＳＥＢを産生する形質転換体の配列を決定し、突然変異体を同定した。突然変異ＳＥＢを産生する形質転換体を増殖させ、実施例４に記載するように突然変異ＳＥＢを精製した。突然変異の位置と作用の解析を行った。Ｔ細胞によるトキシン認識にＭＨＣクラスII分子への結合が必須であるため、実施例５に記載するようにヒトＭＨＣ抗原ＨＬＡ−ＤＲ１に結合する突然変異ＳＥＢの能力を試験した。突然変異していないトキシンにより刺激される特異的Ｖβ成分を有するハイブリドーマのあるもの（すべてではない）を選択的に刺激する突然変異ＳＥＢ（例えば領域３突然変異体）を産生させた。すなわち野生型のスーパー抗原により刺激されるＴ細胞集団のほんの一部を選択的に刺激するのに、本発明の突然変異したスーパー抗原を使用することができる。ＳＥＢのＮ−末端部にＭＨＣおよび／またはＴＣＲ結合に影響する３つの領域が同定された（実施例４と図１）。領域１（残基９−２３）の突然変異はＭＨＣとＴＣＲ結合の両方に影響を与えた。この結果は２３Ｎが特に重要であることを示唆していた。Ｓ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンが最大の相同性を有するように配向する時（マラックとカプル（Ｍａｒｒａｃｋ＆Ｋａｐｐｌｅ）（１９９０）、前述）、この残基はすべてのエンテロトキシンと毒性ショックトキシン中で保存される。領域２（残基４１−５３）中の突然変異は、Ｔ細胞を刺激することができる同様の効果を持って、トキシンがＭＨＣクラスIIに結合する能力を劇的に減少させた。突然変異の約半分にＦ４４が関与していた。再び、すべてのエンテロトキシンでこの残基は保存され、この残基はすべてのトキシンのＭＨＣへの結合に非常に重要な役割を果たすことを示している。興味深いことに領域１または２のいずれかの突然変異のどれもＭＨＣへのトキシンの結合を抹消するものはなく、いずれの場合も突然変異体のＴ細胞刺激能力は、大量の過剰のトキシンを加えることにより回復された。領域３での突然変異（６０Ｎ、６１Ｙ）はトキシンのＭＨＣへの結合に影響しなかったが、２つのＶβ（７と８．１）との相互作用に影響を与えた。このＶβ特異的作用は、これらのアミノ酸はいくつかのＴＣＲＶβ（おそらく他のＶβ成分ではない）との相互作用に重要であることを示唆している。動物における突然変異ＳＥＢの毒性は、実施例６に記載のように試験した。マウスにバランスト塩溶液（ＢＳＳ）、組換えＳＥＢ、またはＦ４４（ＢＲ−３５８）またはＮ２３（ＢＲ−２５７）での領域ＩＳＥＢ突然変異体を注射した。いずれかの突然変異ＳＥＢの５０μｇを与えたマウスは、ＢＳＳを与えたマウスと区別することができなかったが、組換えＳＥＢを与えたマウスは５日以内に死んでしまった。ＳＥＢから免疫防御能を与える突然変異ＳＥＢの能力をインビボで試験した（実施例７）。ＳＥＢで抗原投与する３カ月前に１００μｇの突然変異ＳＥＢＢＲ−２５７を与えたマウスは、ＳＥＢの毒性作用から完全に防御されたが、ＢＲ −２５７を与えなかったマウスはＳＥＢによる抗原投与の４−５日後に死んだ。霊長類でも同様の結果が得られた。サルにおける嘔吐応答を誘発するのに突然変異ＳＥＢＢＲ−３５８またはＢＲ−２５７は、効果がないか効果があっても小さかった（実施例７）。実施例８はＳＥＡトキシンへの上記方法の応用と、対応するＳＥＢ突然変異体と同じ挙動をするＳＥＡ突然変異体の産生を記載している。実施例１．組換えＳＥＢの作成と発現ポリメラーゼチェイン反応（ＰＣＲ）ＰＣＲ（サイキ（Ｓａｉｋｉ）ら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：４８７）は、アンプリタク（ＡｍＰｌｉＴａｑ）組換えＴａｑポリメラーゼとパーキンエルマーシータス（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣｅｔｕｓ）（ノーウォーク（Ｎｏｒｗａｌｋ）、コネチカット州）のＤＮＡサーマルサイクラーを用いて行った。１分間の変性工程とアニーリング工程、＜５００ｂｐ合成のための１分間の延長工程と＞５００ｂｐ合成のための２分間の延長工程を２０−３０サイクル行った。テンプレート濃度は１−１０Ｍであり、オリゴヌクレオチドブライマー濃度は１μＭであった。ｄＮＴＰの濃度は２００μＭであるが、突然変異を導入する場合は１つのｄＮＴＰの濃度を２０ｍＭに低下させた。ＳＥＢ作成体以下のようにスーパー抗原ＳＥＢの遺伝子を過剰発現させた。シグナルペプチドを含まず成熟ＳＥＢをコードする遺伝子の部分に隣接する（ｆｌａｎｋ）オリゴヌクレオチドプライマーを用いてＰＣＲにおいて、ＳＥＢ遺伝子を含有する線状化プラスミッド（ラネリ（Ｒａｎｅｌｌｉ）ら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：５８５０）をテンプレートとして用いた。５’プライマー（配列番号１）である。このプライマーは、プラスミッドｐＴＺ１８Ｒ（ファルマシアファインケミカルズ（ＰｈａｒｍａｃａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ）、ピスカタウェイ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ）、ニュージャージー州）中にクローン化された時ＬａｃＺ遺伝子のフレーム内にＳＥＢ遺伝子を入れるＥｃｏＲＩ部位を含有する。このオリゴヌクレオチドプライマーはまた、ＳＥＢ遺伝子が、それ自身の開始ＡＴＧを有する他のプライマーに容易に移動できるように、ＬａｃＺ遺伝子断片とＳＥＢ遺伝子の最初の間にＡＴＧを加えるＮｃｏＩ部位を含有する。この３’プライマーはＳＥＢ遺伝子の停止コードの後ろにＨｉｎｄIII位を含有していた（配列番号２）：このＰＣＲ断片をＥｃｏＲＩとＨｉｎｄIIIで消化し、ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄI II消化ｐＴＺ１８Ｒに結合させた。大腸菌ＸＬ１−ブルー（ストラタジェン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ）、ラホイヤ（ＬａＪｏｌｌａ）、カリホルニア州）をこのプラスミッドで形質転換し、単一の形質転換体を採取し、挿入体（ｐＳＥＢ２）の配列を決定して突然変異が無いことを確認した。誘導によりｐＳＥＢ２作成体はほとんど細胞質性のＳＥＢの過剰産生を引き起こした（約１０μｇ／ｍｌブロス）。しかしＬａｃＺ／ＳＥＢ融合蛋白を産生するよりも、この細菌はＳ．ａｕｒｅｕｓから分泌されたＳＥＢと同じ見かけの分子量を有する蛋白を産生した（図１ａ）。この融合蛋白のＬａｃＺ部分は大多数のＳＥＢからインビボで切断されたか、またはＬａｃＺとＳＥＢの間に導入されたＡＴＧはＬａｃＺの翻訳開始部位より効率的であった。実施例２ＳＥＢ突然変異体の産生ＳＥＢ突然変異体を２つの方法のうちのいずれかにより産生させた。１つの方法ではＳＥＢ遺伝子の全長にわたってランダム突然変異が導入された。このために実施例１のＳＥＢ作成体を調製したが、ＰＣＲはＴａｑボリメラーセのエラー率を増加させるためにｄＡＴＰまたはｄＴＴＰ濃度を１０倍減少させて行った（イニス（Ｉｎｎｉｓ）ら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：９４３６）。これにより生成物量は５−１０倍減少する。２つの反応の生成物を一緒にし、実施例１に記載のようにｐＴＺ１８Ｒにクローン化し、実施例３でＢＲ突然変異体で記載したように、個々の形質転換体を突然変異ＳＥＢについてスクリーニングした。スクリーニングした約４００個のトキシン産生形質転換体のうち、１０個はＴ細胞を刺激する能力により機能性突然変異体として同定した。低濃度のｄＣＴＰとｄＧＴＰを同様に処理したが、生成物の結果において低下の程度はより少なく、約２００個の形質転換体をスクリーニングしても突然変異体は検出されなかった。ＳＥＢ遺伝子の約６０−７５の塩基で規定される領域にランダム突然変異を導入するのに第２のＰＣＲ法を用いた。各位置がそれぞれ１％のずつの３つの正しくない塩基を含有する、図２に示すように位置した以下のオリゴヌクレオチドブライマー（Ａ（配列番号３）、Ｂ（配列番号４）、そしてＣ（配列番号５））を合成した：これらの突然変異オリゴヌクレオチドは、ベクター（ＡとＢ）または内部ＳＥＢ（Ｃ）オリゴヌクレオチドを池のプライマーとして、そしてＳＥＢ遺伝子をテンプレートとするＰＣＲ反応のプライマーとして作用した。合成したＳＥＢ断片の各分子は、突然変異プライマーに対応する領域に２−３個のランダム塩基突然変異を有することが予測された。突然変異断片をＰＣＲ反応中の混合テンプレートとして単独でまたは遺伝子の３’部を含有する他の断片とともに、ＳＥＢ遺伝子に取り込んで、全長ＳＥＢ２遺伝子を再合成した（ホー（Ｈｏ）ら（１９８９）Ｇｅｎｅ７７：５１；プレン（Ｐｕｌｌｅｎ）ら（１９９０）Ｃｅｌｌ６１：１３６５）。あるいは適当な制限酵素で消化し、ｐＳＥＢ２に結合し、ここから対応する領域を取り出すことにより、これを行った。ＤＮＡ配列決定プラスミッド挿入体を、セクアナーゼ（Ｓｅｐｕｅｎａｓｅ）（ユーエスバイオケミカル社（Ｕ．Ｓ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｒｐ．）、クリーブランド、オハイオ州）を用いるサンガー（Ｓａｎｇｅｒ）ら（１９７７）（ＰｒｏＣ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ７４：５４６３）の方法により、２本鎖スーパーコイルプラスミッドテンプレートに対する修飾を用いて配列決定した（ウェイカートとチャブリス（ＷｅｉｃｋｅｒｔａｎｄＣｈａｍｂｌｉｓｓ）（１９８９）ＥｄｉｔｏｒｉａｌＣｏｍｍｅｎｅｎｔｓ、Ｕ．Ｓ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｒｐ．）、クリーブランド、オハイオ州、５−６頁）。実施例３ＳＥＢ突然変異体の形質転換体のスクリーニング抗ＳＥＢモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）ＳＥＢで複数回免疫したＢ１０．Ｑ（βＢＲ）から標準的方法により、少なくとも５つのＳＥＢのエピトープに特異的な１０個のモノクローナル抗体を産生した。これらの抗体の１つ（Ｂ３４４．１）を、ＳＥＢとＳＥＢ突然変異体の定量と免疫親和性精製の両方に用いた。Ｂ３４４．１はＩｇＧ１であり、ＳＥＢに対して高親和性を有し、ＭＨＣクラスII分子に結合したＳＥＢを検出し免疫沈降させ、ＤＲに結合したＳＥＢをＴ細胞認識を妨害しなかったため選択された（データは示していない）。ＳＥＢの酵素結合免疫吸着測定法調製物中のＳＥＢの量はＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）により測定した。６μｇ／ｍｌの天然のＳＥＢ（シグマケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）、セントルイス、ミズーリ州）の溶液で、マイクロタイタープレートのウェルを一晩被覆した。次にウエルを２５％ＦＣＳでインキュベートし、完全に洗浄した。種々の濃度の既知および未知のＳＥＢ調製物をインヒビターとしてウェルに加え、次に一定量の抗ＳＥＢ抗体（トキシンテクノロジー（ＴｏｘｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、マジソン（Ｍａｄｉｓｏｎ）、ウイスコンシン州）（ＢＲ実験中のポリクローナルウサギ抗ＳＥＢとＢＡ、ＢＢおよびＢＣ実験中のモノクローナル抗ＳＥＢ、Ｂ３４４）を加えた。１時問後ウエルを完全に洗浄し、ヤギ抗ウサギＩｇＧに結合したアルカリ性ホスファターゼ（シグマケミカル社（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．））または基質としてｐ−ニトロフェニルホスフェートを用いる標準的方法により、結合した抗体を検出した。データのコンピューター解析により、４０５ｎｍでの反応のＯＤをインヒビターの投与量と未知物質中のＳＥＢの濃度に関連させた。突然変異ＳＥＢの可能性のあるものの最初のスクリーニング最初のスクリーニングのために、突然変異ＳＥＢ遺伝子の可能性のあるものを含有する個々の形質転換体から、記載されるように完全な溶解液を調製した。ヒトＤＲ−発現細胞株を提示細胞として用いて、α／βリセプターを持っている齧歯類のＴ細胞ハイブリドーマをＶβ７またはＶβ８．３で刺激して、機能性トキシンの存在について試験した。産生されたＳＥＢのレベルまたは全長に影響を与える突然変異の可能性を排除するために、これらのハイブリドーマのいずれかを刺激することが欠損している溶解液を、ＳＥＢ蛋白の存在についで測定した。突然変異を見つけるためにそれらから蛋白を産生するプラスミッドの配列決定を行った。突然変異体の配列を図２に示す。Ｔａｑポリメラーゼでエラーを誘導したランダム突然変異体（ＢＲ）を３つの領域（１．２．４）で、すべて分子のアミノ末端の９３アミノ酸で集めた（ただし、分子のカルボキシル基末端での１つのケース、ＢＲ−３７４での追加の保存性突然変異を除く）。その産生法から予測されるように１つを除くこれらすべての突然変異はＡからＧまたはＴからＣの突然変異であるが、これらの配列の別のところに１つのサイレント突然変異（ｓｉｌｅｎｔｍｕｔａｔｉｏｎ）が見られた。突然変異オリゴヌクレオチドＣまたはＡ（ＢＣ、ＢＡ突然変異体）とともに領域１または２に追加の突然変異体が産生された。領域３は、もともとオリゴヌクレオチドＡによりカバーされる最後のアミノ酸を含む単一の突然変異体（ＢＡ−６２）として発見された。この突然変異体は他のＢＡ突然変異体とは異なる表現型を有していた。突然変異体オリゴヌクレオチドＢとともにこの領域に追加の突然変異体が産生された（ＢＢ突然変異体）。９３位で保存されているジスルフィド結合を形成するシステインを妨害するとまったく予測できない好ましくない影響を示すため、領域４の突然変異はさらなる解析により除去された。さらに数個の突然変異体は、２つ以上の領域（Ｂｒ−４７４、ＢＡ−７２）を含有するか、高度に劣化したトキシン（ＢＲ−２６７）を産生するか、または既に存在する突然変異体（ＢＡ−５０）と同じであるため、さらに性状解析はしなかった。実施例４組換えＳＥＢの調製最初のスクリーニングのために、寒天プレートから採取した形質転換体の個々のコロニーを、１００μｌの２ＸＶＴとカルベニシリン（ｃａｒｂｅｎｉｃｉｉｌｉｎ）を含有する９６ウェルのマイクロタイタープレートに移した。ＢＡはウェルとして１ｍＭのＩＰＴＧを含有する以外は、同じプレートを調製した。いずれも撹拌しながら３７℃で一晩インキュベートした。最初のプレート各ウェルに５０μｌのグリセロールを加え、これを混合し、次に−７０℃で保存した。ＳＥＢ含有溶解液を調製するために、２番目のプレートの各ウェルに、３ｍｇ／ｍｌのリゾチームと３００μｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅＩを含有する５０μｌのＨＮＭ緩衝液（１０ｍＭのヘペス、ｐＨ７．０、３０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭの塩化マグネシウム）を加えた。このプレートを３７℃で１５分間インキュベートし、３回凍結融解し、遠心分離してペレット破片にした。上澄液を新しいプレートに移し、ＥＬＩＳＡおよびＴ細胞ハイブリドーマ刺激の両方によりＳＥＢの存在を調べた。この方法で０．３μｂ／ｍｌと１０μｂ／ｍｌのＳＥＢを含有する調製物が産生された。精製した突然変異体ＳＥＢを産生するために、−７０℃で保存した９６ウェルのマイクロタイタープレートから形質転換体を回収した。ＩＰＴＧを含有する一晩培養物（１容量）からの細菌を遠心分離により集め、１−２ｍｇ／ｍｌのリゾチームと１０μｇ／ｍｌのＤＮＡｓｅＩを含有する１：１０容量のＨＮＭ緩衝液中に再懸濁した。懸濁液を１５，０００ｇで２０分間遠心分離して細菌の破片を除去し、上澄液を集めてろ過した（０．２μ）。２−３ｍｇ／ｍｌのモノクローナル抗体でＳＥＢ（Ｂ３４４）に結合した１：５０容量のファロース４Ｂビーズを含有するカラムに濾液を通した。ビーズをＰＢＳで完全に洗浄し、トキシンを０．１Ｍのグリシン−ＨＣｌ（ｐｈ２．７）で溶出し、１Ｍの炭酸ナトリウムで中和した。ＳＥＢを１ｍｇ／ｍｌに濃縮し、セントリコン１０マイクロコンセントレーター（Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ１０ｍｉｃｒｏｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒｓ）（アミコン社（ＡｍｉｃｏｎＣｏｒｐ．）、デンバーズ（Ｄｅｎｖｅｒｓ）、マサチュセッツ州）を用いて緩衝液をＢＳＳに変更した。この方法で細菌培養物１リットルにつき３−１０ｍｇのトキシンが得られた。こうして産生したＳＥＢとその突然変異体はＳＤＳ−ＰＡＧＥによると９５％以上の純度があった。領域１のＳＥＢ突然変異体を表２に示し、領域１突然変異体と領域２突然変異体を表３に示し、領域３突然変異体を表４に示す。記載した突然変異体はすべてＡからＧ、またはＴからＣのヌクレオチド置換を含有し、これはこれらの産生のために用いた方法から予測されるであろう。オリゴヌクレオチドＣまたはＡを用いて突然変異が産生される時、これらの突然変異はＳＥＢ配列のアミノ酸９−２３（領域１）、または４１−５３（領域２）に濃縮された（表３）。オリゴヌクレオチドプライマーＢを使用した時、表４に示した突然変異体が産生された。正常のＳＥＢではアミノ酸９３はシステインである。このために、この領域の突然変異はジスルフィド結合を妨害する可能性があるため、さらに考慮しなかった。すなわち突然変異体ＢＲ−３０とＢＲ−３１１を排除した。トキシンが非常に劣化しているため、２カ所以上の領域で変化がある突然変異体（２個以上の突然変異体ではない）（すなわちＢＲ−４７４とＢＡ−７２）もまたＢＲ−２６７のように除いた。ＢＡ−５０は公知の突然変異体であり、これ以上検討しなかった。ＳＥＢの構造研究おそらく最も研究されたスタフィロコッカスのエンテロトキシンである、ＳＥＢの３次元構造は最近報告された（スワミナサン（Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎ）ら（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ３５９：８０１）。ＳＥＢの模式図を図１に示す。ＳＥＢ分子は２つのドメインを含有する。最初のドメインは残基１−１２０よりなり、２番目は残基１２７−２３９よりなる。前述したように、ＭＨＣクラス II結合および／またはＴ細胞活性化に影響を与えるＳＥＢのＮ−末端部分に３つの領域が同定されている（カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：３８７）。これらの各領域に、関与する特異的アミノ酸が測定されている。同定された残基のあるものはＭＨＣクラスII結合とＴ細胞活性化に影響を与え、他はＴ細胞活性化のみに影響を与える。スーパー抗原ＭＨＣクラスII結合はＴ細胞に必須であるため、ＭＨＣクラスII結合に影響を与える残基はＴ細胞活性化に影響を与えるため、これらからＴ細胞結合情報は得られない。しかしこれらはスーパー抗原上のＭＨＣクラスII結合部位に関する情報を与える。一方、Ｔ細胞活性化に影響を与えるがＭＨＣクラスII結合に影響を与えない残基は、ＳＥＢ上のＴ細胞結合部位中にある可能性がある。９−２３のアミノ酸残基として定義される領域１は、ＴＣＲ結合とＭＨＣクラスII結合の両方に影響を与えるため、二機能性である。この領域の突然変異には、１０、１４、１７および２３位の残基を、単一または２つの突然変異として含んでいた（表２）。残基２３（Ｎ２３）のアスパラギンはα−らせん（α２）の上にあり、側鎖は溶媒の方を向いている。これは最も重要な残基であり、すべてのスタフィロコッカスのエンテロトキシンで保存されておりＴＣＲ活性化に最も重要である。ＭＨＣクラスII結合を妨害したものは２３位のわすか５つの突然変異体であるが、すべてのものがＴＣＲ活性化に影響を与えた。残基１４と１７の突然変異はＭＨＣクラスII結合とＴＣＲ活性化の両方に影響を与えた。残基Ｓ１４は非常に短いαらせん（α１）であり、溶媒に暴露されているがＦ１７はα１のもう一方の端に位置している。トキシンの表面のＳ１４、Ｆ１７およびＮ２３（図１）の位置は、ＭＨＣクラスII分子および／またはＶβと最重要な接触をするのに好ましい。残基Ｆ１７は内部を向いており、残基１７４−１７９と２０３ −２０９の２つの別のループに挟まれたループ中に存在する。これはセリン（Ｆ１７Ｓ）による置換は、ＭＨＣクラスII結合とサイトカイン産生を低下させる構造変化を導入したかも知れないことを示唆している。Ｓ１４（α１上）とＭＨＣクラスII結合、そしてＮ２３（α２上）とＴＣＲ活性との関連は、領域１の二機能性の役割のもととなる構造的基礎を表している。この領域は小数の連続的なアミノ酸よりなるが、異なる機能に関与している第２の構造の別の隣接している成分上に分散されている。α１とα２が近接していることは、領域１のアミノ酸はＶβとＭＨＣクラスIIの結合部の近くの３分子複合体中に位置しているという提案（カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９９２）前述）と一致している。領域２は残基４０−５３と定義され、すべてのスタフィロコッカスのエンテロトキシンにおいてＭＨＣクラスIIへの結合を仲介するのに重要であると示唆されている。この領域の突然変異の約半分は、保存残基Ｆ４４（表３）を含有していた。他の突然変異には残基４１、４５、４８、５２および５３を含有していた。すなわちこの領域はおそらく、ＭＨＣクラスII結合に特異的である。残基４８− ５２はβ鎖（β２）中にある。残基Ｆ４４はβ１とβ２を連結する曲がり角の上にあり、側鎖が溶媒に露出している。これはＭＨＣクラスIIと重要な疎水性結合接触をするのに好都合に位置している。領域３は２つの残基（６０と６１）で構成されており、このいずれかの突然変異はＴＣＲ活性化に影響を与えるがＭＨＣクラスII結合には影響は与えない。残基６０と６１はβ２とβ３を連結するループ内にある、溶媒に露出されている（表４）。実施例５突然異ＳＥＢのＨＬＡ−ＤＲへの結合ＭＨＣクラスIIへの結合はＴ細胞によりトキシン認識に必須であるため、突然変異はトキシンのＤＲ分子への結合能力またはＴＣＲ−α／βによるこの複合体の認識能力に影響を与えたかも知れない。これらの２つの可能性を区別するのを助けるために、ＨＬＡ−ＤＲ１ホモ接合リンパ芽腫株ＬＧ２を用いた（ガッチとレイボールド（ＧａｔｔｉａｎｄＬｅｉｈｏｌｄ）（１９７９）ＴｉｓｓｕｅＡｎｔｉｇｅｎｓ１３：３５）。¹²⁵Ｉ −標識ＬＧ２細胞を、５０μ ｇ／ｍｌの組換えＳＥＢを加えてまたは加えないで３７℃で２時間インキュベートした。細胞を含まない溶解液を１％ジギトニン中で調製し、３ｍｇ／ｍｌのＢ３４４抗ＳＥＢモノクローナル抗体の結合したセファロースビーズと、室温で４時間インキュベートした。ビーズを完全に洗浄し、標識した結合した物質を還元下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（リームリ（Ｌａｅｍｍｌｌｉ）（１９７０）Ｎａｔｕｒｅ２２７：６８０）とオートラジオグラフィーで解析した。対照として、抗ＤＲモノクローナル抗体のＬ２４３（ランプソンとレビー（ＬａｍｐｓｏｎａｎｄＬｅｖｙ）（１９８０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２５：２９３）を使用した（溶解液の１／２０容量を抗ＳＥＢビーズとともに使用した）。ＳＥＢはＬＧ２上でＤＲ分子に結合する（図２ｂ）。免疫親和性精製したトキシンを調製し、ＳＥＢとその突然変異体を精製するのに使用したのと同じ抗ＳＥＢモノクローナル抗体を用いるフローサイトメトリーにより、そのＬＧ２への結合能力を評価した。１００μｌの組織培養培地中で３×１０⁴個のＬＧ２細胞を３７℃で一晩インキュベートした。細胞を完全に洗浄し、約１μｇ／ｍｌの抗ＳＥＢモノクローナル抗体（Ｂ３４４．１）とともに４℃で３０分問インキュベートした。細胞を再度洗浄し、蛍光標識したヤギ抗マウスＩｇＧ１（フィッシャーサイエンティフィック社（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｏ．））とともに４℃で１５分間インキュベートした。細胞を再度洗浄し、細胞の表面蛍光を解析し、第２の試薬のみに対して添加したトキシンの量で見られた蛍光について補正した。その結果（表４に示す）は、領域１、２および３のそれぞれの突然変異について示されている。４つの領域１の突然変異体によりＬＧ２への結合は、突然変異していないＳＥＢのそれと区別することができなかった。他の３つの突然変異体は結合能力が約１００倍低下していた。これらの結果は、領域１内の残基１４と２３の間の残基はＭＨＣ結合に重要であることを示唆している。７つの突然変異のうちの５つは２３Ｎが関与していた。１つの場合（ＢＲ−２９、２３Ｎ→Ｓ）でのみこの突然変異がＭＨＣ結合を低下させた。これらの結果は残基２３ＮはＮＨＣ結合とＶβ 相互作用に重要であることを示唆している。領域２の突然変異はすべてほんのわずかにＬＧ２に結合し（ＳＥＢより約１，０００倍弱い）、領域２の突然変異体はトキシンのクラスIIＭＨＣへの結合に重要なアミノ酸の範囲（特に４４Ｆ）を規定していることを示している。領域３の突然変異体はＬＧ２への結合に基本的に影響されず、この２アミノ酸領域（６０Ｎ、６１Ｙ）はＶβ相互作用に重要であることを示唆している。実施例５異なるＶβ成分を有するＴ細胞上の突然変異の影響ＳＥＢ突然変異体はもともとＶβ７⁺またはＶβ８．３⁺Ｔ細胞ハイブリドーマを刺激するため同定された。Ｔ細胞認識上のＳＥＢ突然変異体の影響をさらに詳細に評価するために、精製した突然変異体トキシンを種々の投与量で、ＳＥＢを認識することが知られている４つの齧歯類のＶβ成分（Ｖβ７、Ｖβ８．１−３（ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）ら（１９９１）前述；キャラハン（Ｃａｌｌａｈａｎ）ら（１９８９）前述：ハーマン（Ｈｅｒｍａｎ）ら（１９９１）前述））のそれぞれを有する追加のＴ細胞ハイブリドーマに対して試験した。異なる濃度のトキシンを、２００μｌの組織培養培地中の３×１０⁴個のＤＲ⁺細胞とともに３７ ℃で一晩インキュベートした。必須のＶβ特異性を有する５×１０⁴個のＴ細胞ハイブリドーマを５０μｌで加え、混合物を一晩インキュベートした。カプラー（Ｋａｐｐｌｅｒ）ら（１９８１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５３：１１９８とモスマン（Ｍｏｓｍａｎｎ）（１９８３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６５：５５に従い、Ｔ細胞ハイブリドーマの応答を分泌されるＩＬ．−２として測定した。結果を図５−７に示す。領域１の突然変異体（図５）のうち、２３Ｎを有する５つ（ＢＲ−２５７、ＢＲ−２９１、ＢＣ−６、ＢＣ−６６，ＢＣ−８８）は、これらの４つはＳＥＢと同様にＤＲに結合したにもかかわらず、すべてのハイブリドーマをほんのわずかに刺激したのみである。これらの結果は、残基２３ＮはＶβ相互作用に重要なアミノ酸であるが、このアミノ酸を含む５番目の突然変異体（ＢＲ−２９１）はＭＨＣにわずかに結合したのみであるため、このアミノ酸はＭＨＣ結合にも影響を与えるかも知れないことを示している。他の２つの領域１の突然変異体もまたわずかに刺激したのみである。ＢＲ−７５の場合これは主にその弱いＤＲへの結合のためかも知れないが、ＢＲ−２１０突然変異の影響はＤＲへの結合よりもＴ細胞刺激に対して数オーダー大きかった。これらを総合すると、これらの結果は、ＤＲに結合したＳＥＢのＴ胞認識の間領域１のアミノ酸は、ＶβとＭＨＣの間の結合部の３分子複合体中に位置しており、各残基は各成分と相互作用することの証拠である。他の領域の突然変異はそれほど複雑でない表現型を産生した。領域２の突然変異体のすべては、それらのリセプター中にＶβ成分があるにもかかわらず（図６）、Ｔ細胞ハイブリドーマのすべてを刺激することはなかった。小さな差はあったが、一般に刺激に対する突然変異の影響はＤＲ結合で見られたものと同じであった。これらの結果は、領域２の突然変異は主にＤＲ結合に影響するという結論に一致する。２アミノ酸の領域３の突然変異体は最も差があった（図７）。この領域に隣接する２０アミノ酸の範囲中のランダム突然変異体が、これら２つのアミノ酸中に見いだざれた。これらの突然変異体は、Ｖβ７を有するハイブリドーマを刺激しなかったが、Ｖβ８．２またはＶβ８．３を有するハイブリドーマを刺激した。この性質はこれらのハイブリドーマの特異的ではないことを確認するために、トキシンを４つの他のＴ細胞ハイブリドーマ（１つのＶβ７⁺、２つのＶβ８．１⁺ および１つのＶβ８．３⁺）で試験した。結果は図７のものと区別することができなかった（データは示していない）。実施例６ＳＥＢのインビボ作用のためのＴ細胞相互作用の必要性細菌トキシンのスーパー抗原性がそれらのインビボの毒性にいかに重要であるかという問題は、解決していない。本発明者らによる以前の実験は、ＳＥＢの毒性は関連するＶβ成分を有するＴ細胞の頻度に直接関連しているため、マウスにおけるＳＥＢの毒性は、Ｖβ特異的にＴ細胞を刺激する能力に関連していることを示唆していた（マラック（Ｍａｒｒａｃｋ）ら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：４５５）。しかしいくつかのＳ．ａｕｒｅｕｓのトキシンが単球上のクラスIIに結合、ＴＮＦやＩＬ−１のようなサイトカインの産生を刺激する能力（パルソネット（Ｐａｒｓｏｎｎｅｔ）（１９８８）Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１：２６３）は、直接の単球刺激はある状態におけるトキシンの病原性の多くを説明するのに充分であるかも知れないという可能性を開く。この考えを試験するために、クラスIIＭＨＣには充分結合するが、極度な高濃度以外ではＴ細胞を刺激しない、領域１の突然変異体ＢＲ−２５７を種々の濃度でマウスに注射した。突然変異していないＳＥＢと突然変異体ＢＲ−３５８（これらは領域２のすべての突然変異体のようにクラスIIＭＨＣにはわずかに結合するのみである）を対照として使用した。調製物を汚染するかも知れないＬＰＳの影響を最小にするために、ＬＰＳ応答性の欠如した株であるＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスを使用した。急速な体重減少がマウスにおけるＳＥＢの最も顕著で急速な毒性であるため（マラック（Ｍａｒｒａｃｋ）ら（１９９０）前述）、０日に注射をした後マウスの体重を毎日測定した。３匹のマウスの群の体重を測定し、０μｇ、５０μｇまたは１００μｇの組換えＳＥＢ、突然変異体ＳＥＢＢＲ−２５７、または突然変異体ＳＥＢＢＲ−３５８を含有するバランスト塩水溶液（ＢＳＳ）を与えた。マウスが死ぬまで毎日体重を測定した。結果を図８に示す。結果は生存しているマウスの開始体重からの変化の平均割合で示してある。５０μｇまたは１００μｇの組換えＳＥＢを与えたマウスは、３−４日間で急速に体重が減少し、すべでのマウスは５日以内に死んだ。突然変異体ＢＲ−３５８を与えたマウスは影響を受けず、ＢＳＳのみを与えたマウスと区別がつかなかった。しかし１００μｇのＢＲ−２５７を与えられたマウスはわずかな体重減少を示し、後に回復した。これらの結果は、マウスではＳＥＢの毒性の大部分はそのＴ細胞を刺激する能力に依存していることを確認しており、これはＴ細胞誘導性リンホカイン自身またはＴ細胞により活性化される他の細胞により産生されるものは、このトキシンの作用様式に非常に重要であることを示唆している。しかし、高投与量におけるＢＲ−２５７のわずかな作用は、Ｔ細胞の関与なしで結合したＳＥＢにより直接刺激されたクラスIIを有する細胞からの寄与の可能性を示す。実施例７ＳＥＢ突然変異体の防御効果ＳＥＢ突然変異体の防御効果を試験した。これらの実験において、野生型のＳＥＢで抗原刺激する前に生理食塩水または１００μｇのＢＲ−２５７をマウスに投与した。投与の日（「０」日）に５０μｇのＳＥＢを腹腔内投与した。体重の変化と生存を測定した。結果は図９に示す。対照を与えたマウスは、ＳＥＢにより抗原刺激の後４−５日後に死に、ＳＥＢ突然変異体で免疫したマウスでは防御効果が見られた。実施例８ＳＥＢ然変異体の産生と動物におけるその防御作用スタフィロコッカスのエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）突然変異体を、前述の方法に従って産生した。ＳＥＡのアミノ酸配列にＳＥＢのアミノ酸配列を重ね合わせると、４５位の突然変異は４５位のＳＥＢ突然変異体で見られるのと同様にＳＥＡがＭＨＣに結合する能力を阻害することが見いだされた。霊長類で同様の試験を行った。野生型ＳＥＢ、領域ＩＳＥＢ突然変異体ＢＲ− ２５７（Ｆ４４で突然変異）またはＢＲ−３５８（Ｎ２３で突然変異）の１つをマウスに投与し、嘔吐性応答の誘発を評価した。いずれのＳＥＢ突然変異体も、霊長類において効果がないか、野生型ＳＥＢよりも効果ははるかに小さかった。これらの結果は、本明細書中に記載された突然変異体スーパー抗原の産生方法は、一般的にすべてのスーパー抗原に適用可能であり、患者をスーパー抗原の病原作用から防御する方法を与えることを、確認している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】（１）分子はＴ細胞活性化を誘導することなく抗体産生を誘発する、分子を用いる治療によりスーパー抗原の毒性作用を防止する方法。（２）分子は突然変異したスーパー抗原である、請求の範囲第１項に記載の方法。（３）分子は修飾したスーパー抗原である、請求の範囲第１項に記載の方法。（４）突然変異したスーパー抗原よりなる分子。（５）修飾したスーパー抗原よりなる分子。（６）Ｔ細胞リセプター（ＴＣＲ）の特異的Ｖβ成分と相互作用する分子を投与することよりなる、抗原により誘発されるＴ細胞応答を修飾する方法。（７）分子は突然変異したスーパー抗原である、請求の範囲第６項に記載の方法。（８）分子は修飾したスーパー抗原である、請求の範囲第６項に記載の方法。（９）分子はＴ細胞活性化を誘導することなく抗体産生を誘発する、分子を用いる治療によりスーパー抗原の毒性作用を治療する方法。