JPH08500334A

JPH08500334A - タンパク質用薬剤デリバリーとして有用なコラーゲン含有スポンジ

Info

Publication number: JPH08500334A
Application number: JP5519519A
Authority: JP
Inventors: ソン，シユク−ズー; モラビツキー，アンドリユー
Original assignee: アムジエン・インコーポレーテツド
Priority date: 1992-05-01
Filing date: 1993-04-29
Publication date: 1996-01-16
Also published as: WO1993021908A1; US5399361A; IL105529A0; AU672206B2; EP0568334A1; AU4223793A; CN1083392A; US5512301A

Abstract

(57)【要約】吸収性ゼラチンスポンジとコラーゲンと有効成分とから成るコラーゲン含有スポンジが開示されている。また、体表創傷及び体内創傷に対してかかるスポンジを使用した創傷治癒促進方法が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】タンパク質用薬剤デリバリーとして有用なコラーゲン含有スポンジ発明の背景本発明は医薬品の持続的な放出及びデリバリーを改良するためのコラーゲン含有スポンジに関する。コラーゲンは医薬用スポンジの１成分として従来からも使用されている。Arta ndi ［1964年11月17日付けの米国特許第3,157,524号］は、酸処理した膨潤コラーゲンから成るスポンジを開示した。Oluwasanmiら［J.Trauma 16 :348-353 （1976）］は、グルタルアルデヒドによって架橋された厚み1.7mmのコラーゲンスポンジを開示した。Collinsら［Surg.Forum 27 :551-553 （1976）］は、グルタルアルデヒドによって架橋された酸膨潤コラーゲンスポノジを開示した。Be rgら［1982年3月16日付けの米国特許第4,320,201号］は、動物皮革を酵素的に分解し、塊状材料をアルカリまたは酸中で消化し、これを機械的に微粉砕して規定長さのコラーゲン繊維を製造し、繊維を架橋させることによって得られる高いコラーゲン純度の膨潤スポンジを開示した。Bergら［1989年6月6日付けの米国特許第4,837,285 号］は、ビーズ体積の1〜30％のコラーゲン骨格を有する多孔質ビーズを開示した。これらのビーズは細胞増殖用基質として有用である。Doillonら［Scann ing Electron MicroscopyIII：1313-1320 （1984）］、Doillon &Silver ［Bio materials 7:3-8（1986）］及びDoillonら［Biomaterials 8:195-200 （1987 ）は、細孔の孔径約60〜 250μｍのコラーゲンスポンジ中での細胞増殖を開示した。いくつかのスポンジはまた、ヒアルロン酸及び／またはフィブロネクチンを含有していた。さらに、コラーゲンは軟膏中の１成分として使用されてきた［1986年6月5日公開のPCT特許出願W086/03122］。コラーゲンはまた、電流と組み合わせて創傷治癒のために使用されてきた［Silver &Dunn, 1990年6月26日付けの米国特許第4 ,937,323号］。更に、コラーゲン含有膜も従来技術で使用されている。 Abbenhausら［Surg. Forum 16 .477-478 （1965）］は、牛皮から抽出したコラーゲンを加熱し脱水することによって製造した膜厚2〜3mmのコラーゲンフィルムを開示した。Chuは、非化学的に架橋したコラーゲンインプラントを圧縮によって製造し、これが薬剤の持続的デリバリーに有用であることを開示した［1986年7月9日公開の欧州特許出願第187014号； 1986年7月15日付けの米国特許第4,600,533号： 1987年4月7日付けの米国特許第4,655,980号： 1987年8月2 5日付けの米国特許第4,689,399号； 1989年6月28日公開のPCT特許出願W090/000 60］。Cioca ［1983年11月1日付けの米国特許第4,412,947号］は、コラーゲンの有機酸懸濁液を凍結乾燥することによって製造した本質的に純粋なコラーゲンシートを開示した。Kuroyanagiら［1984年1月15日公開の欧州特許出願第167 828号；1987年2月10日付けの米国特許第4,642,118号］は、2つの層、即ちコラーゲン層とポリ―α−アミノ酸層とから成る人造皮膚を開示した。Bergら［19 89年6月27日付けの米国特許第4,841,962号］は、3つの層、即ち接着剤層と架橋コラーゲンマトリックスと多層ポリマーフィルムとから成る創傷用包帯を開示した。Holman ［1990年8月21日付けの米国特許第4,950,699号］は、アクリル接着剤と混合した10％未満のコラーゲンから成る創傷用包帯を開示した。Ciocaらは［英国特許第 1,347,582号］は、凍結乾燥した多分散コラーゲン混合物から成るコラーゲン系の創傷用包帯を開示した。 Stellanら［1983年1月12日公開の欧州特許第069260号］は、高純度天然型コラーゲンから成るコラーゲンインサートを開示した。Zimmerman ら［1984年6月12日付けの米国特許第4,453,939号］は、フィブリノーゲン、ＸIII因子フィブリノゲン及び／またはトロンビンでコートされたコラーゲン含有の創傷治癒組成物を開示した。Leibovichら［1989年2月付けの米国特許第４ ,808,402号］は、コラーゲンと生体侵食性ポリマーと腫瘍壊死因子とから成る創傷治療用組成物を開示した。Yannas & Burke [J.Biomed.Mat.Res. 14:68-81 （1980）］は、人造皮膚の設計を研究し、その実施例のいくつかはコラーゲンを含有している。Chvapil ら， Int.Rev.Connect.Tissue Res. 6：1-61（1973 ），特に51-52頁；Pachenceら， Med.Device andDiag. Ind., 9:49-55 （1987 ）は、薬剤デリバリー用媒体としての使用も含むコラーゲンの種々の用途を開示している。従来から使用されていたコラーゲン含有スポンジのほとんどは、創傷部位での細胞増殖用基質または骨格として使用されており、医薬のデリバリーに使用されたことはない。本発明は、長期間にわたる恒常的、連続的かつ持続的な治療薬の放出を保障することによって医薬用スポンジに極めて望ましい改良を与える。発明の概要本発明は、吸収性ゼラチンスポンジとコラーゲンと有効成分とから成るコラーゲン含有スポンジに関する。好ましくは、吸収性ゼラチンスポンジが架橋ゼラチンである。別の目的としては本発明は、１種または複数の可塑剤、安定剤、乾燥促進剤または緩衝剤をさらに含有するコラーゲン含有スポンジに関する。好ましくは、可塑剤はポリエチレングリコール及びグリセロールから選択され、安定剤はマンニトール、ラクトース及びグルコースから成るグループから選択された糖であり、乾燥促進剤はエタノール、メタノール及びイソプロピルアルコールから成るグループから選択されたアルコールであり、緩衝剤は適当な生物学的緩衝液である。好ましい有効成分は、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＥＧＦ、ＰＤ− ＥＣＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ＝２、ＴＮＦ、ＢＤＮＦ，．ＣＮＴＦ及びＮＴ−３から成るグループから選択される。別の目的としては本発明は、表皮創傷の創傷治癒の促進方法に関する。この方法では、創傷治癒有効量の有効成分を本発明の目的の１つを成すコラーゲンスポンジを介して投与する。別の目的としては本発明は、体内創傷の創傷治癒の促進方法に関する。この方法では、創傷治癒有効量の有効成分を本発明の目的の１つを成すコラーゲンスポンジを介して投与する。図面の簡単な説明図１は、乾燥ジェルフォームーコラーゲンスポンジからのＰＤＧＦのｉｎｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。図２は、乾燥ジェルフォームーコラーゲンスポンジからのＰＤＧＦのｉｎｖｉｔｒｏ放出の一次速度則を示すグラフである。図３は、放射性同位体、ＥＬＩＳＡ及びＰＤＧＦバイオアッセイによって測定したＰＤＧＦの相関関係を示すグラフである。図４は、湿潤ジェルフォームーコラーゲンスポンジからのＰＤＧＦのｉｎｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。図５は、湿潤ジェルフォームーコラーゲンスポンジからのＰＤＧＦのｉｎｖｉｔｒｏ放出の一次速度則を示すグラフである。図６は、放射性同位体、ＥＬＩＳＡ及びＰＤＧＦバイオアッセイによって測定したＰＤＧＦの相関関係を示すグラフである。図７は、コラーゲン非存在下のジェルフォームスポンジからのＰＤＧＦのｉｎｖｉｔｒｏ放出を示すグラフである。図８は、１％コラーゲン溶液によって調製したジェルフォームーコラーゲン系からのＰＤＧＦのｉｎｖｉｖｏ放出を示すグラフである。図９は、8％コラーゲン溶液によって調製したジェルフォムーコラーゲン系からのＰＤＧＦのｉｎｖｉｖｏ放出を示すグラフである。図10は、ラットの血管束モデルを用いて得られた実験結果を示すグラフである。発明の詳細な説明本発明は、吸収性ゼラチンスポンジとコラーゲンと有効成分とから成るコラーゲン含有スポンジに関する。適当な吸収性ゼラチンスポンジは、架橋ゼラチン、例えばジェルフォーム（Up john Inc., Kalamzoo, Michigan）である。可溶性コラーゲンと有効成分とを含む溶液に吸収性ゼラチンを浸漬させることによって吸収性ゼラチンスポンジをコラーゲン及び有効成分と組み合わせる。または、所定量のコラーゲン溶液をゼラチンスポンジの上面に移し溶液を吸収させてもよい。可溶性コラーゲンは、平均分子量400,00０未満、好ましくは分子量約300.000 を有するコラーゲンである。特に適当な可溶性コラーゲンは、Semex S （Semex Medical Co., Malvern,Pennsylvania）である。この特定の可溶性コラーゲンはまた、アテロペプチド形態のコラーゲンであるという利点を有している。アテロペプチドコラーゲンは、テロペプチドを含まないコラーゲンである。テロペプチドは、精製コラーゲンの一端に局在するぺプチドでありしばしば免疫原性に関連する。テロペプチド形態のコラーゲンの溶液は有機酸を用いた加水分解によってアテロペプチド形態のコラーゲンに変換し得る。可溶性コラーゲンの別の好ましい特徴は、最小量の架橋、即ち 0.5％未満の架橋を有することである。可溶性コラーゲンを水などの適当な溶媒に溶解して約 0.5〜約10重量％、好ましくは約1〜約5重量％、より好ましくは約2重量％のコラーゲンを含有する溶液を調製し得る。可溶性コラーゲンの溶液または懸濁コラーゲンフィブリルの分散液を用いて吸収性ゼラチンスポンジの浸漬を行う。典型的には、適当量のコラーゲン溶液を吸収性ゼラチンスポンジの上面に移す。別の場合には、ゼラチンスポンジを保持する容器にコラーゲン溶液を注ぐ。浸漬スポンジの乾燥を適当な温度及び適当な時間で行うことも適当な条件の要因に含まれる。一般に、乾燥温度の上昇に伴って所要乾燥時間は短縮される。より詳細には、適温は約15℃〜35℃、好ましくはほぼ室温であり、適当な乾燥時間は溶媒含量の限界減量が実質的に零になるための十分な時間である（例えば乾燥時間は約１時間から約10日、好ましくは約l日から約5日である）。好ましいコラーゲンスポンジの望ましい最適特性を得るために、コラーゲン溶液に種々の添加剤を任意に添加し得る。このような望ましい特性としては、可撓性、安定性、乾燥時間の短縮及び使用有効成分と相溶性のｐＨなどがある。可撓性を改良するために、適当な可塑剤を使用し得る。適当な可塑剤は、ポリエチレングリコール及びグリセロール、好ましくはグリセロールである。かかる可塑剤は、存在コラーゲンの重量の0〜約100％、好ましくは存在コラーゲンの重量の約10〜約30％、極めて好ましくは存在コラーゲンの重量の約20％の量で存在し得る。有効成分の安定性を改良するために、フィルム中に適当な安定剤を使用し得る。適当な安定剤は、多くの糖類、好ましくはマンニトール、ラクトース及びグルコース、より好ましくはマンニトールである。かかる安定剤は、存在コラーゲンの重量の0〜約5％、好ましくは存在コラーゲンの重量の約1％の量で存在し得る。フィルムの乾燥時間を短縮するために、乾燥促進剤を使用し得る。適当な乾燥促進剤は、アルコール類であり、好ましくはエタノール、メタノール及びイソプロピルアルコール、より好ましくはエタノールである。かかる乾燥促進剤は、溶液または懸濁液の総重量の 0〜約50％、好ましくは溶液または懸濁液の総重量の約10〜約30％、より好ましくは溶液または懸濁液の総重量の約20％の量で存在し得る。使用される特定有効成分と相溶性のｐＨを生じさせるために、フィルム中に適当な緩衝剤を使用し得る。適当な緩衝剤としては、周知の慣用の生物学的緩衝剤のほとんどを使用でき、好ましくは酢酸塩、リン酸塩及びクエン酸塩、より好ましくは酢酸塩及びリン酸塩である。かかる緩衝剤は、コラーゲン溶液または懸濁液の重量の約0.01％〜約2％の量で存在し得る。相溶性ｐＨは、有効成分の安定性を維持し、その治療効果を最適にするかまたはその劣化を防御するｐＨである。適当なｐＨは一般には約3〜約8、好ましくは約5〜約8、極めて好ましくは約7. 0〜約7.5のほぼ中性のｐＨである。好適な有効成分は、創傷治癒、または神経組織の再生を促進する生物学的薬剤、特に組換えタンパク質である。このような好適な有効成分は、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、繊維芽細胞増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来上皮増殖因子（ＰＤＥＧＦ）、血小板由来内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、インシュリン様増殖因子１及び２（ＩＧＦ−１及びＩＧＦ−２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、繊毛性神経栄養因子（ＣＮＴＦ）及びニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）である。好ましい有効成分はＰＤＧＦまたはＰＤＥＣＧＦであり、極めて好ましくはＰＤＧＦである。かかる有効成分は、創傷の治癒を促進するために十分な量、即ち創傷治癒有効量で存在する。有効成分の実際量は、担当医師によって決定され、創傷の軽重、患者の容態、患者の年齢及び何らかの付随的損傷または患者の内科的持病などの種々の要因に左右されるであろう。一般には、有効成分の量は約 1μｇ／ｃｍ² 〜5mg/c m² の範囲であろう。本発明のコラーゲンスポンジは、該スポンジと接触した細胞または組織に有効成分をデリバリーする手段として有用である。例えば、火傷またはその他の皮膚外傷の治療において、損傷領域に適当な有効成分をデリバリーするためにコラーゲンスポンジを創傷に配置し得る。ＰＤＧＦはこのような使用に特に適した有効成分である。コラーゲンスポンジはまた、外科手術創の治癒を促進するために使用できる。このように使用するときは、スポンジを外科手術切開部に配置し、外科手術創の両面間の境界として創傷に縫い込む。コラーゲンスポンジはまた、神経栄養因子をデリバリーするために使用し得る。このように使用するときは、コラーゲンスポンジを神経栄養因子で治療すべき神経組織と直接接触させるかその近傍に配置し得る。実施例実施例１：コラーゲンスポンジの調製１片のゼラチンスポンジ（ジェルフォーム（登録商標）：80×250×10mm）を混練材料（dough）と同様に金属棒（直径： 32mm、長さ：130mm）によって圧延して薄いシートを製造した。得られたシートの厚みはlmmであった。黄銅製のパンチによって薄いシートからウェファーを打ち抜いた。invivo試験用に大直径（直径： 18mm、重量：1.5mg）のウェファーを打ち抜いた。１つの試験では、0.24mlまたは0.4 0 ml、PDGF含有コラーゲン溶液を各ウェファーの上面にピペットで注入した。別の試験では、ウェファーをコラーゲン溶液に浸漬させた。ＰＤＧＦ含有コラーゲン溶液を以下のごとく調製した。まず、2gの可溶性コラーゲン（Se mex S Semex, Frazer, Pennsylvania）を50mlの蒸留水に30〜50℃で溶解することによって4％コラーゲン溶液を調製した。得られた溶液16mlに、０.13mlのグリセロールと2 mlのアルコールと2 mlのＰＤＧＦ溶液（2mg/ml酢酸塩緩衝液）とを添加した。更に、微量の ¹²⁵Ｉ−ＰＤＧＦを溶液に添加した。各ウェファーに溶液を吸収させた後、ウェファーを夜乾燥してＰＤＧＦを含有するスポンジーコラーゲン系を製造した。実施例２：コラーゲンスポンジからの放出速度則 Coster Transwell Cell（“Cell”）（Costar Co., Cambridge，Massachuse tts）を使用し、コラーゲンスポンジからの有効成分の放出速度を以下のごとく測定した。¹²⁵ Ｉ−ＰＤＧＦを含むコラーゲンスポンジを実施例１に記載の方法で調製し、ウェファー（1.6cm直径）をフィルムから打ち抜いた。各ウェファーをCoster Transwell Cellに移し、ポリカーボネ一卜膜の上面に配置した。2 .5mlの受容溶液（水と１％ウシ血清アルブミンまたは水と0.25％ヒト血清アルブミン）をCellホルダーに添加した。Celｌを溶液の上に設定し、放出試験を開始した。規定時間毎に20μｌの受容溶液をピペット採取し、受容溶液を同量の新しい溶液で置換した。別の20μｌの試料を得るために試料採取手順を繰り返した。試料の放射能をガンマカウンタ（Beckmanlnstruments, Co., Irvine, Calilornia）によって測定した。所与の任意の時点の受容溶液中のタンパク質の濃度を放射能に基づいて計算し、ＥＬＩＳＡ及び ³Ｈ−チミジン吸収バィォァッセイのような別の方法を用いて確認した。図１、２、４及び５は、ウェファーから放出されるＰＤＧＦの典型的な放出曲線を示す。コラーゲン溶液をゼラチンスポンジに吸収させた直後に放出試験を行った場合には、乾燥ゲル系からの放出曲線（図１及び図２）が湿潤ゲル系からの放出曲線（図４及び図５）に極めて類似していた。100時間後に約80％の増殖因子が放出されていた。図３及び図６のデータは、乾燥工程が増殖因子の活性を変化させないことを示す。図７は、コラーゲン非存在下のジェルフォームスポンジからのＰＤＧＦの放出を示す。この試験では、ジェルフォームからのＰＤＧＦの放出を試験した。ＰＤＧＦ溶液に浸潰中に膜（膜厚：ｌｃｍ）の内部にトラップされた気泡を除去するために、膜を減圧下に水に浸漬させた。水浸漬膜をＰＤＧＦ溶液中で平衡させた。ＰＤＧＦの放出速度を ¹²⁵Ｉ−ＰＤＧＦを用いてCostar Transwel l cellで測定した。放出速度は極めて速く、ほとんどのＰＤＧＦが12時間後に放出されていた。この試験から得られた結果は、コラーゲンージェルフォームの組み合わせ系が長期間にわたる恒常的、連続的かつ持続的な治療薬の放出を保障することを示す。実施例３：コラーゲンースポンジ系からのタンパク質のｉｎvivo放出速度の測定Ａ．処理前準備各々が約3.0〜3.5kgの若い成ニュージーランド白ウサギ（M & K Rabbitry, Be ntonville,-Arkansas）を、鎮静剤としてRompum（登録商標）（Farbenlabrike n, Bayer, WeslGermany ）を用い、次いで（10分後に）ケタミン（60mg/kg ）及びキシレイン（5 mg/kg ）を筋肉内投与することによって麻酔した。各ウサギの体重を計量し記録した。各ウサギの両耳に小さい綿またはガーゼの栓を挿入し、その後で両耳の内面と外縁を動物用クリッパー（#40剃刀）を用いて剃毛した。次いで各耳の内面に市販のNeet（登録商標）脱毛クリームを塗布し、10分後に乾いたガーゼで拭き取った。両耳の内面を生理食塩水に浸したガーゼで拭い、次いで70%アルコール溶液を塗布した。30ゲージの針を使用し、1:1000エピネフリンを含有する２％キシロカイン溶液を耳に浸潤させることによって各ウサギの片耳の内面の真皮を漂白処理した（これには総量1.5〜 3.0 mlを要した）。浸潤領域をベタジンで３回次いで70％アルコール溶液で洗浄した。必要な場合にはこの時点で耳栓を乾いた耳栓に交換した。次にウサギを滅菌手術室に移した。２つのバークランプを用い、プレキシグラスの“イヤーボード” （WashingtonUniversity Medical Center, Division ol TechnicalServices, St.Louis, Missouri）に、漂白処理した耳を固定した。ウサギの耳の血液供給が妨げられないようにして耳を安定させるために、一方のクランプを動物の耳の先端に固定し他方のクランプを耳の付け根に固定した。動物を滅菌布で被い、手術領域（即ち漂白処理した耳の内面）にべタジンを噴霧し、 3〜5分間乾燥させた。Ｂ．創傷形成創傷形成処置中は無菌法を使用した。顕微手術器具、即ち6mmのトレフィンと両眼顕微鏡（10倍、Zeiss ）とを使用し、各ウサギの内耳の表面に6 mmの生検パンチで静かに傷をつけ、顕微鉗子、鍵切り鋏、刃先の鈍い2 mmのLempertの骨膜起子、滅菌綿チップの付いた塗布器を使用し、露出した軟骨の処まで（骨膜を含めて）生検部位の組織及び繊維を完全に除去した。軟骨膜及びその上の組織を剥離によって除去した。この実験のためには軟骨をパンチで完全に打ち抜く生検を使用しなかった。しかしながら、軟骨の厚みの一部に傷をつけることは許容されると考えた。軟骨中の切れ目即ち生来の疵の場所を丁寧に観察して記録した（採取日の参照用）。創傷内が血液過剰にならないように注意しながら滅菌綿チップの付いた塗布器で生検部位から血液を除去した。完成した生検の各々を生理食塩水に浸したガーゼの小片で被った。創傷を形成した各耳に対して、6 mm大の生検潰瘍を中央線の両側に２個ずつ合計４個配置した（中央線は、ボード上に固定したときの耳の折れ目によって決定した）。要するに、合計5個未満の生検組織を各耳に配置した。生検組織は最小でもlcmの間隔を開けて配置した。片耳が終了すると、生理食塩水を浸潤させたガーゼで耳を被い、次いでガーゼの周囲をテープで封鎖してＰＤＧＦを塗布するまで水分を維持させた。次に、第一の耳と同様の方法で第二の耳を漂白処理し、洗浄し、固定し、創傷を形成した。第二の耳の各々の生検部位の血液を除去し、完成した生検の各々を生理食塩水を浸潤させたガーゼ小片で被った。第二の耳に対しても、処置終了後にＰＤＧＦを塗布するまで生理食塩水を浸潤させたガーゼで被った。処置のこの時点以前の時期に麻酔から覚醒する徴候を示したウサギには25mg/kgのケタミンを筋肉内投与して再度麻酔した。Ｃ．創傷に対する有効成分の塗布 in vivo薬剤放出試験のために実施例１の手順によってウェファーを調製した。この実験では小さいウェファー（直径：5 mm）を使用した。各ウェファーを創傷部位（直径： 6mm）に挿入し、ウェファーを創傷部位に確実に維持するためにTagaderm（登録商標）片を使用した。手術を執刀する研究者の観察下にウサギを麻酔から覚醒させた。覚醒後に、ウサギが創傷及び包帯を破壊するのを防止するために各ウサギの頚に頚周りから約 15〜25cm外側に張り出すプラスチックのネックカラー（Canine Center, St. Lou is,Missouri）を取り付けた。ウサギを隔離ケージに戻し、採取までそこに維持した。Ｄ．コラーゲンーゼラチンスポンジ系からのタンパク質放出の測定選択時点毎に創傷部位からいくつかのウェファーを取り出した。ウェファーを除去した創傷部位を新しいTagaderm（登録商標）片で被った。ウェファーを試験管に収集した。全部のウェファーの回収後、各ウェファーの放射能をカウントした。残留ウェファーの放射能から所与の時点に放出されていたＰＤＧＦの量を計算した。図８は、１％コラーゲン溶液を用いて調製したコラーゲンージェルフォーム系からのＰＤＧＦ放出曲線を示す。約49時間後に約62％のＰＤＧＦが放出されていた。図９は、8％コラーゲン溶液を用いて調製したコラーゲンージェルフォーム系からのＰＤＧＦ放出曲線を示す。この溶液は、可溶性コラーゲンを60℃ の蒸留水に溶解することによって得られた。約49時間後に約73％のＰＤＧＦが放出されていた。実施例４：ラット血管束モデルによって測定した新組織増殖に対するコラーゲン含有スポンジの効果 30匹のルイスラット（ 125〜150グラム）を用い、左後肢脛骨とその根元の大腿骨の動静脈束を課から鼠躊部靭帯まで切開した。この束を直径1.6ｃｍの２つのコラーゲン円板間に挟み、スプーン形のシラスティックモールド内部に配置した。グループAの円板はコラーゲンージェルフォーム系を基材とした。このグループの各円板は約 125μｇのＰＤＧＦを含んでいた。グループBの円板は可溶性コラーゲンを基材とした。このグループの各円板は約 125μｇのＰＤＦＧを含んでいた。グループCの円板はＰＤＧＦ非含有の可溶性コラーゲンから製造し、従って対照として使用した。全部の動物を30日目に殺した。モールドの内容物を全般的に検査し、ディジタル化コンピュータと三次元再構成とを用いた組織形態学的測定によって、得られた組織の体積を測定した。図10は、異なる3グループにおいて得られた新組織体積を示す。125μｇのＰＤＧＦを含有するコラーゲンージェルフォーム系で処理した動物では新組織体積のかなりの増加が観察された。同じ動物モデルに対して可溶性コラーゲン系を用いた従来の実験では、ＰＤＧＦ含有可溶性コラーゲンを基材とするウェファが移植の10日後と15日後との間に新組織の体積をかなり増加させることが知見された。これはＰＤＧＦの用量が大きい場合（ 120μｇ／ウェファー）に特に明白であった。この試験はまた、移植の30日後に新組織が退行することを示していた。今回の実験は、コラーゲンージェルフォーム系が新組織体積の生成及び／または維持のために数週間は十分に作用することを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１．吸収性ゼラチンスポンジとコラーゲンと有効成分とから成るコラーゲン含有スポンジ。２．前記吸収性ゼラチンスポンジが架橋ゼラチンであることを特徴とする請求項１に記載のコラーゲン含有スポンジ。３．前記架橋ゼラチンがジェルフォームであることを特徴とする請求項２に記載のコラーゲン含有スポンジ。４．更に、可塑剤を含むことを特徴とする請求項3に記載のコラーゲン含有スポンジ。５．前記可塑剤が、ポリエチレングリコール及びグリセロールから選択されることを特徴とする請求項４に記載のコラーゲン含有スポンジ。６．更に、安定剤を含むことを特徴とする請求項４に記載のコラーゲン含有スポンジ。７．前記安定剤が、マンニトール、ラクトース及びグルコースから成るグループから選択された糖であることを特徴とする請求項６に記載のコラーゲン含有スポンジ。８．更に、乾燥促進剤を含むことを特徴とする請求項６に記載のコラーゲン含有スポンジ。９．前記乾燥促進剤が、エタノール、メタノール及びイソプロピルアルコールから成るグループから選択されたアルコールであることを特徴とする請求項８に記載のコラーゲン含有スポンジ。 10．更に、緩衝剤を含むことを特徴とする請求項８に記載のコラーゲン含有スポンジ。 11．前記有効成分が、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＥＧＦ、ＰＤ−ＥＣＧＦ，ＫＧＦ，ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＴＮＦ，ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦ及びＮＴ−３から成るグループから選択されることを特徴とする請求項１に記載のコラーゲン含有スポンジ。 12．前記有効成分が、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＥＧＦ、ＰＤ−ＥＣＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＴＮＦ、ＢＤＮＦ、ＣＮＴＦ及びＮＴ−３から成るグループから選択されることを特徴とする請求項10に記載のコラーゲン含有スポンジ。 13．前記有効成分がＰＤＧＦであることを特徴とする請求項11に記載のコラーゲンフィルム。 14．前記有効成分がＰＤＧＦであることを特徴とする請求項12に記載のコラーゲンフィルム。 15．請求項１に記載のコラーゲンスポンジを用いて創傷治癒有効量の有効成分を投与する表皮創傷の創傷治癒促進方法。 16．請求項10に記載のコラーゲンスポンジを用いて創傷治癒有効量の有効成分を投与する表皮創傷の創傷治癒促進方法。 17．請求項１に記載のコラーゲンスポンジを用いて創傷治癒有効量の有効成分を投与する体内創傷の創傷治癒促進方法。 18．請求項10に記載のコラーゲンスポンジを用いて創傷治癒有効量の有効成分を投与する体内創傷の創傷治癒促進方法。