JPH08500595A

JPH08500595A - メラニン細胞のメラニン含有量を増加させるためのジアシルグリセロールの使用

Info

Publication number: JPH08500595A
Application number: JP6506555A
Authority: JP
Inventors: エイ．ギルクレスト，バーバラ; アール．ゴードン，フィリップ
Original assignee: Boston University
Current assignee: Boston University
Priority date: 1992-08-21
Filing date: 1993-08-20
Publication date: 1996-01-23
Also published as: US5750091A; US5352440A; EP0655907B1; EP0655907A1; CA2143003A1; DE69324689D1; WO1994004122A2; WO1994004122A3

Abstract

(57)【要約】メラニン細胞中のメラニン合成を誘導し、これによってメラニン細胞のメラニン含有量を増加させ、その結果色素沈着を増加させる方法、これらの方法によって作成されるメラニン含有量の増加したメラニン細胞、およびこれらの使用。

Description

【発明の詳細な説明】メラニン細胞のメラニン含有量を増加させるためのジアシルグリセロールの使用明細書発明の背景メラニンは、脊椎動物の皮膚、毛、毛皮、および羽毛の主要色素（色）として機能する構造的に関連のある化合物の１群である。メラニン色素沈着は、皮膚や毛の正常な発色の主な原因であって、日光やその他の光源による紫外線障害から生体を保護する働きがある。メラニンは、皮膚や毛穴に見られる「メラニン細胞」という特殊な細胞だけがこれを合成する。合成されたメラニンは、メラニン細胞の樹状突起（エクステンション）を経由して、表皮にもっとも多く存在する細胞型である周囲のケラチノサイトに転送される。メラニン合成速度およびその後の樹状突起を経由するメラニン細胞によるメラニン転送は、紫外線曝露の影響を受けるようである。多くの者にとっては、皮膚の色が濃いほど社会的にも美容的にも好ましいと考えられる。現在では、自然の日光または特別に設計された紫外線光源（日焼けランプ）を用いる日焼け法が皮膚の色を濃くする手段としてもっとも普通である。ただし、ヒトの皮膚が紫外線に長期間曝露されると、皮膚ガンや光線老化（長期的）および疼痛性日焼けや角膜炎（短期的）の危険など長期的および短期的に健康に悪影響が及ぶことがよく知られている。さらに、色白の者は日光性皮膚ガンにかかりやすく、黒色腫（皮膚ガン）のリスクが高く、しわや不規則色素沈着や肌あれを特徴とする状態である皮膚日光症という光老化現象を引き起こす。色黒の者でも日光に長期曝露されると、皮膚ガンや老化促進のリスクが高くなる。白斑、限局性白皮症、アルビノ、およびその他の色素沈着不足障害などの異状や、ある種の炎症プロセスの結果、正常な色素沈着さえ不可能な者がいる。このような異状が極端になると、毛と皮膚の両方が完全に脱色してしまう。比較的軽度の場合は、色素沈着不足障害によって、皮膚や毛に白色のまだら部分ができる。これらの状態はいずれも、美容的および心理的に重大な問題を引き起こす可能性がある。メラニン細胞とメラニン含有量は、毛、毛皮、および羽毛の色素沈着の原因でもある。たとえば、白髪は毛球中に存在するメラニン細胞の数や活性の低下によるものである。ヒト以外の動物では、メラニン細胞含有量とメラニン合成速度の変化が、毛、毛皮、ウール、およびその他の種類の動物体毛の色を変化させる。メラニン合成を増大させることでメラニン細胞のメラニン含有量を増大させることができれば、紫外線照射の危険を伴わないで皮膚の色を濃くする新規方法が提供されるであろう。また、毛のメラニン含有量を増大させると、白髪を黒くする方法が提供されよう。さらに、メラニン産生を維持することができれば、毛皮、ウール、羽毛、およびその他の動物毛部分の脱色を最小にでき、目的の色素沈着レベルを有する毛皮やウールや羽毛を生物学的に操作して製造することができるようになるであろう。発明の概要本発明は、メラニン細胞におけるメラニン合成を誘導することによってメラニン細胞のメラニン含有量を増大させ、その結果色素沈着を増大させる方法に関する。本発明の方法においては、メラニン細胞におけるメラニン合成を誘導するジアシルグリセロールをメラニン細胞と接触させることで、メラニン細胞におけるメラニン合成を誘導してメラニン細胞のメラニン含有量を増大させる。メラニン細胞のメラニン含有量が増大すると、メラニン細胞の色素沈着が増大し、色が黒くなる。ジアシルグリセロールと接触させるメラニン細胞は、脊椎動物の皮膚、毛、毛皮、または羽毛中に存在していてよい。本明細書で使用する場合、ジアシルグリセロール、すなわちＤＡＧという用語は、天然の１，２−ジアシルグリセロルおよび合成のＤＡＧアナログおよび誘導体を含む。ＤＡＧはメラニン合成を誘導することができるので、メラニン細胞増殖を変化させることなくメラニン細胞のメラニン含有量を増大させることができる。さらに、ＤＡＧはメラニン細胞の樹状突起を増加させないので、生物学的作用と細胞機能について選択的であり、既存のメラニン細胞内に特異的にメラニンの合成と産生を誘導する能力を有するということに限定されるのが普通である。本発明の方法においてとくに有用なのは、ＤＡＧの水分散性アナログである１− オレオイル−２− アセチル−グリセロールすなわちＯＡＧである。ＤＡＧは、メラニン細胞におけるメラニン産生の低下または完全欠損によって生じた様々な状態を治療する目的に使用することができる。このような状態としては、白斑、でん風（tinea versicolor）、アルビノ、およびその他の色素沈着不足状態などが挙げられる。ＤＡＧは、皮膚を日焼けさせたり毛色を濃くしたりする目的で美容的に使用することもできるし、動物の毛皮、ウール、羽毛、およびその他の動物体毛部分の脱色を防止する目的にも使用することができる。好ましい態様においては、メラニン合成を誘導するＤＡＧまたはそのようなＤＡＧを組み合わせたものを、生体適合性のある流動担体と混合して、皮膚のメラニン細胞に塗布または接触させることができる局所施用処方を作成し、イン・ビボで皮膚のメラニン含有量を増大させ、皮膚の色素沈着を増大させることができる。本態様は、ヒトの皮膚の美容的日焼け法としてとくに有用である。別の態様においては、ＤＡＧは、メラニン含有量が高くなったメラニン細胞をイン・ビトロで培養するために、従来知られている培地および培養手法と共に使用することができる。それぞれの場合において、ＤＡＧを使用すると、メラニン細胞内のメラニン合成が増大し、その結果メラニン細胞のメラニン含有量が増大し、最終的に色素沈着が増大する。本発明はまた、本明細書で開示する方法によって製造したメラニン含有量を高めたメラニン細胞に関する。メラニン含有量が高くなったメラニン細胞は、後天性または先天性の皮膚白斑に移植する皮膚移植片を作成し、皮膚が正常なかつ均一な着色を獲得できるようにするうえで、有用でありえる。図面の簡単な説明付属の図面を参照することによって、本発明の理解が容易かつ完全になる。図１ａおよび１ｂは、ヒトメラニン細胞の増殖とメラニン含有量に及ぼすジアシルグリセロールの影響を示すグラフである。図２は、単独で投与した場合とホルボールエステルによる前処理後に投与した場合のヒトメラニン細胞の増殖に及ぼすジアシルグリセロールの影響を示すグラフである。図３は、単独で投与した場合とホルボールエステルによる前処理後に投与した場合のヒトメラニン細胞によるメラニン産生に及ぼすジアシルグリセロールの影響を示すグラフである。図４は、培養中のＳ９１ネズミ黒色腫細胞の増殖に及ぼすジアシルグリセロールの影響を示すグラフである。図５は、培養中のＳ９１ネズミ黒色腫細胞のメラニン含有量に及ぼすジアシルグリセロールの影響を示すグラフである。詳細な説明本発明は、メラニン細胞におけるメラニン合成を誘導することによりメラニン細胞のメラニン含有量を増大させ、その結果色素沈着を増大させる方法に関する。本明細書で使用する場合、色素沈着という用語は、脊椎動物の皮膚、毛、毛皮、および羽毛にメラニン色素が沈着することをいう。すなわち、メラニン合成を誘導することによりメラニン細胞中のメラニン含有量を増大させる本発明の方法は、ジアシルグリセロール、すなわちＤＡＧという化合物の１群の使用に関するものであり、ＤＡＧとしては天然のもの、ＤＡＧの合成アナログ、およびＤＡＧの誘導体が含まれる。メラニン合成の正確な機構については不明であるが、環状３’，５’−アデノシン１リン酸（ｃＡＭＰ）が媒介する細胞内シグナル導入経路がネズミのメラニン形成に存在することを示す多くの証拠がある［コーナーとパウエレック（Korn er, A. and Pawelek, J.M.），Nature 267:44 （1977）；ハラバンら（Halaban, R., et al.） J. Cell Biol. 97:480 （1983）］。しかし、ヒトのメラニン形成におけるｃＡＭＰの役割についてはよくわかっていない［フリードマンとギルヒレスト（Friedmann, P.S. and Gilchrest, B.A.），J.Cell.Physiol. 133:88 （1987）］。もう１つの第２の細胞内シグナル導入メッセンジャーはジアシルグリセロール、すなわちＤＡＧである。特定の剌激物質がホスホリパーゼＣを活性化させて、細胞膜からＤＡＧを遊離させ、これかプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）を活性化させる［ニシヅカ（Nishizuka, Y.），Science 233:305 （1986）］。本明細書に示すように、ＤＡＧは生物活性を有する強力なメラニン合成刺激物質であること、およびＤＡＧと接触するとメラニン細胞のメラニン含有量が増えることが証明されている。ジアシルグリセロールの化学構造と存在状況天然のジアシルグリセロールは、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）生理活性化物質として細胞内シグナル導入経路において極めて重要な役目を果たしている［ベルリッジ（Berridge, N.J.）， Ann. Rev. Biochem. 56:159193 （1987）；ニシヅカ（Nishizuka, Y. ），Science 233:305-312 （1986）］。最近、やはりＰＫＣ活性化物質としての生物活性を有する合成ＤＡＧアナログが調製された［ガノングとベル（Ganong，B.R. and Bell, R.M. ），Meth. Enzymol. 141:313-320 （1987）］。本明細書で使用する場合、ＤＡＧという用語は、天然ジアシルグリセロール、ならびに天然ジアシルグリセロールの合成アナログおよび誘導体を含む。ＤＡＧアナログは従来の方法で調製することができ、下記化合物Ａ、Ｂ、Ｃの一般化学構造式を有する。上記式中、ＲとＲ’は炭素含有部分を示す。ＲとＲ’は通常、長鎖（炭素原子数１５以上）のカルボン酸であり、１つ以上の炭素間２重結合を有していてもよい。ほとんどの場合、ＲとＲ’は化学組成が互いに異なっている［ガノングとベル（Ganong, B.R. and Bell, R.M. ），Meth. Enzymol. 141:313-320（1987）］。一方、Ｒ”は、グリセロール構造中の隣接炭素原子と炭素エステル結合を形成しないものであればどのような化学要素であってもよい。すなわち、Ｒ”としては、水酸基、リン酸基、イオウ原子、エーテル基、ハロゲン化物、窒素含有要素、または水素などが挙げられる。［ガノングとベル（Ganong, B.R. and Bell, R .M. ），Meth. Enzymol. 141:313-320（1987）］。本発明の方法において有用なジアシルグリセロール本発明の方法において有用なジアシルグリセロール（ＤＡＧ）は、生物活性を示す（メラニン合成を誘導する）ことでイン・ビボとイン・ビトロの両方または一方の条件下でメラニン細胞のメラニン含有量を増大させる天然のＤＡＧならびに合成のＤＡＧアナログである。天然ＤＡＧはホスファチジルイノシトールの誘導体であり、グリセロール構造の１位炭素位置にアシル化された長鎖モノ不飽和脂肪酸を含んでいるのが普通である。また、ＤＡＧは、グリセロール構造の２位炭素位置にアシル化されたアラキドン酸を中心とする高度不飽和脂肪酸を含んでいるのが普通である。本発明の方法において好ましいＤＡＧの１つは、合成ＤＡＧアナログである１ −オレオイル−２−アセチル−グリセロール、すなわちＯＡＧである。ＯＡＧは、水に溶けること、およびメラニン細胞の増殖と成長の両方または一方に影響を及ぼすことなくメラニン含有量における用量依存的な応答を生じさせる能力があるという理由でとくに有用である。また、その他の好ましいＤＡＧはグリセロール構造の３位炭素位置に遊離水酸基を含んでおり、グリセロールに似た炭素数３の骨格構造を有する。生物活性があり、メラニン細胞内のメラニン合成を強力に剌激すると考えられるＤＡＧとしては下記のものが挙げられるが、これらに限定されない。ジアシルグリセロールアナログ１，２−ジホルミルグリセロール１，２−ジアセチルグリセロール１，２−ジブタノイルグリセロール１，２−ジヘキサノイルグリセロール１，２−ジオクタノイルグリセロール１，２−ジデカノイルグリセロール１，２−ジドデカノイルグリセロール１，２−ジテラデカノイルグリセロール１，２−ジヘキサデコイルグリセロール１，２−ジオクタデカノイルグリセロール１，２−ジエイコサノイルグリセロール１，２−ジドコサノイルグリセロール１，２−ジテトラコサノイルグリセロール１，２−ジパルミトイルグリセロール１，２−ジオレオイルグリセロール１，２−ジリノレオイルグリセロール１，２−ジリノレノイルグリセロール１，２−アラキドノイルグリセロール１−オクタノイル−２−ホルミル−グリセロール１−オクタノイル−２−アセチル−グリセロール１−オクタノイル−２−ブタノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−ヘキサノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−デカノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−オクタデカノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−エイコサノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−ドコサノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−テトラコサノイル−グリセロール１−オクタノイル−２−パルミトイル−グリセロール１−オクタノイル−２−オレオイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ホルミル−グリセロール１−パルミトイル−２−アセチル−グリセロール１−パルミトイル−２−ブタノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ヘキサノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−オクタノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−デカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−オクタンデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−エイコサノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ドドコサノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−オレオイル−グリセロール１−パルミトイル−２−リノレオイル−グリセロール１−パルミトイル−２−アラキドノイル−グリセロール１−オレオイル−２−ホルミル−グリセロール１−オレオイル−２−アセチル−グリセロール１−オレオイル−２−ブタノイル−グリセロール１−オレオイル−２−ヘキサノイル−グリセロール１−オレオイル−２−オクタノイル−グリセロール１−オレオイル−２−デカノイル−グリセロール１−オレオイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−オレオイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−オレオイル−２−パルミトイル−グリセロール１−オレオイル−２−リノレオイル−グリセロール１−オレオイル−２−アラキドノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ホルミル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−アセチル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ブタノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−オクタノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−デカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−オクタデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−エイコサノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−パルミトイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−オレオイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−リノレオイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−アラキドノイル−グリセロールヒトのメラニン細胞に及ぼすジアシルグリセロールの影響以下の実験で、ヒトメラニン細胞に及ぼすＤＡＧの影響を調べるとともに、ＤＡＧとのインキュベーションに先だって行なわれる特定薬剤によるヒトメラニン細胞の前処理の影響を明らかにする。第１の実験群は、実施例１で説明するようにして培養したヒトメラニン細胞を用いて行なった。完全メラニン細胞培地中でヒトメラニン細胞を１−オレオイル −２−アセチル−グリセロール（ＯＡＧ）と混合し、３７℃Ｃで６日間インキュベートした。実施例２に説明するようにして細胞のメラニン含有量を測定した。結果を図１ａと１ｂにグラフ化している。図から、２５〜２００ｕＭのＯＡＧ濃度レベル範囲でメラニン含有量増加の用量依存的応答が見られるが、メラニン細胞の増殖や成長には有意な影響がないことがわかる。１００ｕＭの濃度でＯＡＧを添加すると、未処理対照（すなわち実施例１で説明するようにして培養したメラニン細胞を完全メラニン細胞培地と混合し、処理細胞と同様にインキュベートしたもの）と比べて、メラニン細胞１個あたりのメラニン含有量が平均４倍増加した。ＯＡＧはヒトメラニン細胞の樹状突起を増加させず、ヒトメラニン細胞の成長に有意な影響を及ぼさなかったということが重要である。第２の実験群は、培養ヒトメラニン細胞を公知のプロテインキナーゼＣ活性化物質であるテトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）でまず前処理して行なった。ＴＰＡはまずＰＫＣ活性を剌激し、続いて長期にわたりＰＫＣ活性を強く抑制することが知られている。はじめに、実施例１に説明したようにしてヒトメラニン細胞を入手、培養した。続いて、培養したヒトメラニン細胞をメラニン細胞培地中で１００ｎＭのＴＰＡと混合し、３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、ＯＡＧを加え、培養物を再び６日間インキュベートした。次いで、細胞のメラニン含有量を実施例２に従って評価した。結果をそれぞれ図２と図３にグラフ表示している。図２は、ＯＡＧもＴＰＡ前処理も両者を組み合わせたものもヒトメラニン細胞増殖に実質的に影響を及ぼさないことを示しているが、図３は、ＯＡＧ処理と組み合わせたＴＰＡ前処理に相関してヒトメラニン細胞１個あたりのメラニン含有量が有意に増加することを示している。したがって、ＴＰＡにあらかじめ曝露させると、メラニン合成に対するＯＡＧの影響が実際に増強されたことになる。以上のことから、メラニン産生を最大にするためには、選んだＤＡＧと接触させる前にヒトメラニン細胞を前処理するのが望ましいようである。ヒト以外のメラニン細胞に及ぼすジアシルグリセロールの影響この実験群は、ヒト以外のソースから得たメラニン細胞に及ぼすＤＡＧの影響を調べる目的で行なったものである。これらの実験では、ネズミＳ９１黒色腫細胞を従来法で培養、維持した［フリードマンとギルヒレスト（Friedmann, P.S.a nd Gilchrest,B.A.），J. Cell. Physiol. 133:88-94（1987）］。次いで、Ｓ９１黒色腫細胞を１００ｕＭのＯＡＧ、またはＳ９１黒色腫細胞におけるｃＡＭＰレベルの上昇およびメラニン合成誘導をももたらす３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）１００ｕＭと混合した。各化学物質は、２％のＦＢＳを含むダルベッコ最少イーグル培地中でＳ９１黒色腫細胞と混合し、３７℃で７日間インキュベートした。結果をそれぞれ図４と５にグラフ化している。図４は、１〜２００ｕＭの範囲の濃度のＯＡＧはＳ９１黒色腫細胞の増殖を誘導しなかったことを示している。ＩＢＭＸは類似の作用を示し、やはり細胞成長を引き起こさなかった。一方、図５は、ＯＡＧとＩＢＭＸではメラニン産生増大誘導能力が大きく異なることを示している。１００ｕＭの濃度のＩＢＭＸは、Ｓ９１黒色腫細胞におけるメラニン産生を大幅に増大させたことが明白である。一方、上記実験条件下でのＯＡＧは対照と比べてメラニン産生の実質的増大を誘導しなかった。これらの結果は、ＤＡＧの生物学的作用がメラニン細胞の由来元によって選択的、識別的であることを示唆するものである。すなわち、用いた条件下では、ＯＡＧはＳ９１ネズミ黒色腫細胞に対して有意な影響を及ぼさない。一方、ＯＡＧをヒトメラニン細胞に接触させると、ヒトメラニン細胞の細胞増殖は引き起こされず、メラニン含有量が実質的に増加する。イン・ビボにおけるジアシルグリセロールの作用イン・ビボにおけるＤＡＧの影響を調べるためにモルモット成獣における実験も行なった。モルモットは、ヒトの皮膚におけるメラニンの分布と同様に表皮ならびに毛穴にメラニンを含んでいるので、ヒトの色素系の研究のためのモデルとして受入れられている［ボローグニアら（Bolognia, J.L.,et al., ） Pigment Cell Res. 3:150 （1990）；イモカワ（Imokawa, G. ），Arch. Dermatol. Res. 278:352 （1986）］。実施例３で詳細に説明するように、モルモット皮膚のＯＡＧ処理部分で色素沈着の増大が４〜５日目に見られ、約１カ月持続し、その後徐々に消失した。いずれの時点でも、ＯＡＧ処理部分は対照部分（ビーイクル単独処理部分）より色が濃かった。また、最終塗布後７日目（最初の塗布後１４日目）にＯＡＧ処理皮膚、ビーイクル処理皮膚、および隣接の未処理皮膚のパンチ生検標本を採取した。やはり実施例３で説明するようにして、生検標本を処理し、メラニンを黒色に染めることが知られている還元剤を含むフォンターナ−マッソン染色剤で染色して、色素がメラニンであることを確認した。皮膚標本における組織学的色素沈着はＯＡＧ処理皮膚で最大であり、未処理隣接皮膚組織で最小であった。いずれの標本でも、ベースラインおよび日光曝露誘導日焼け後に正常皮膚で見られるものと全く同じように、下層表皮に色素沈着が集中していた。これらの実験は、ＯＡＧは正常な日焼けと臨床的にも組織学的にも同じ形でイン・ビボにおける表皮色素沈着を増大させる能力があることを明確に示している。したがって、これらのデータは、ＤＡＧがイン・ビボでメラニン細胞におけるメラニン形成を誘導する能力があることを確定するものである。ジアシルグリセロールの投与と使用法ＤＡＧ、とくにＯＡＧをメラニン細胞と接触させると、メラニン細胞増殖を変化させることなくメラニン細胞のメラニン含有量を増大させる能力を示す。ＤＡＧは、以下のようにして本発明の方法に使用してもよい。すなわち、イン・ビトロおよびイン・ビボで皮膚移植片、同種移植片、および自家移植片に色素を沈着させる（着色する）方法に使用してもよいし、白斑、アルビノ、限局性白皮症、および炎症後色素沈着不足などの色素沈着不足障害を治療するために使用してもよいし、日光に依らないヒト皮膚日焼け剤としてや、自然の日光の存在下での日焼け促進剤としてや、イン・ビボで毛を黒化すなわち色素再沈着させる治療法として使用してもよいし、イン・ビボで白髪（脱色毛）を防止するために使用してもいし、動物から濃色の毛や毛皮やウールをイン・ビボで得るために使用してもよい。ＤＡＧは、日光の非存在下で皮膚の日焼けを目的としてヒトにおけるメラニン合成を誘導したり、自然の日光の存在下で皮膚の日焼けを促進したり、白（脱色）髪を黒くする治療法を提供するうえで、とくに有用である。本発明の方法のＤＡＧはイン・ビボとイン・ビトロの両方において使用されるものとする。イン・ビボ用途の場合、メラニン細胞との接触は、１種類以上のＤＡＧを個体の皮膚または毛に直接局所塗布することによって行なうのが望ましい。この目的のためには、ＤＡＧはゲル、軟膏、ローション、クリームなどの薬理学的に許容される局所担体と混合して使用され、水、グリセロール、アルコール、プロピレングリコール、脂肪アルコール、トリグリセリド、脂肪酸エステル、鉱油などの担体が例示される。その他の使用可能な局所担体としては、流動ワセリン、パルミチン酸イソプロピル、ポリエチレングリコール、エタノール（９５％）、モノラウリン酸ポリオキシエチレン（５％）水溶液、ラウリル硫酸ナトリウム（５％）水溶液などが挙げられる。その他、抗酸化剤、湿潤剤、粘性安定剤、および同様の薬物などの物質を必要に応じて添加してもよい。また、場合によっては、本明細書で説明するＤＡＧは皮膚の上、中、または下に置いた器具内に置かれることもある。そのような器具としては、受動的または能動的放出機構によって皮内にＤＡＧを放出させるパッチ、インプラント、注射物などが挙げられる。イン・ビボ用途の場合、流動担体物質中に０．１０〜２０．０ｍＭの最終濃度範囲でＤＡＧアナログが含まれているのが好ましいが、投与すべきＤＡＧの実際に好ましい量は、使用する特定の化合物、処方する特定の組成物、施用方法、および治療対象個体の特定の部位に応じて異なる。メラニン合成を増大させることによりメラニン細胞のメラニン含有量を増大させるのに効果的なＤＡＧの濃度は、従来公知の薬理学的手順を用いて決定することができ、本明細書で説明する細胞培養法と動物モデルを用いて評価することができる。あるいは、ＤＡＧを実験試薬としてメラニン細胞培養物とともにイン・ビトロで使用する場合、メラニン合成の誘導により培養メラニン細胞のメラニン含有量を増大させるのに十分な濃度のＤＡＧを生細胞周囲の培地に直接添加してもよい。ＤＡＧの阻害濃度と毒性濃度の測定も公知の方法を用いて可能であり、本明細書で説明する手法および当該分野に習熟せる者に知られているその他の方法を用いて評価することができる。以下、実施例により本発明をさらに説明するが、これらの実施例はいかなる意味でも本発明を限定するものではない。実施例１：メラニン細胞の細胞培養ヒトケラチノサイトおよびメラニン細胞のソースとして、２時間以内の随意環状切除の際に得た新生児包皮を使用した。０．２５％トリプシン中で１晩インキュベーシヨンした後、真皮から表皮を分離した。ギルヒレストら（Gilchrest et al.）［J. Invest. Dermatol. 83:370-376 （1984）］の手順に従って調製した表皮から１次培養メラニン細胞系を樹立した。手順を簡単にまとめると次のとおりである。まず、手術標本を断片化し、カルシウムを含まないリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ですすぎ、０．２５％トリプシン（GIBCO 社）中４℃で１晩インキュベートした。鉗子を用いて真皮から断片の表皮部分を分離し、０．０２％ＥＤＴＡ中３７℃で１０分間インキュベートし、攪拌して単一細胞懸濁液を作成し、３５ｍｍペトリ皿１枚あたり１０⁶個の濃度でメラニン細胞成長培地でインキュベートし、８％二酸化炭素と９２％空気の中で３７℃に保った。毎週３回新鮮なメラニン細胞成長培地を培養物に加えた。メラニン細胞成長培地は、１０ｎｇ／ｍｌの表皮成長因子、１０ｎＭのトリイオドチリン、１０ｕｇ／ｍｌのトランスフェリン、１０ｕｇ／ｍｌのインスリン、１ｎＭのコレラトキシン、および１００ｕｇ／ｍｌのウシ視床下部抽出物を添加した無血清培地である培地１９９（Medium 199）（GIBCO 社、４００−１１００）である。実施例２：メラニン細胞のバイオアッセイ３５ｍｍペトリ皿１枚あたり２ｘ１０⁴個の割合でメラニン細胞をまき、１０ｕｇ／ｍｌのインスリン、１０^-9Ｍのトリイオドチリン、１０ｕｇ／ｍｌのトランスフェリン、１．４ｘ１０^-6Ｍのヒドロコーチゾン、１０ｎｇ／ｍｌの表皮成長因子、１０^-9Ｍのコレラーゲン、２％のＦＢＳ、および１００ｕｇ／ｍｌのＢＨＥを加えたＤＭＥＭと混合した。以下、この培地を完全メラニン細胞培地とよぶ。３７℃で２４時間インキュベーションを行なった後、２系列または３系列でメラニン細胞培養物に、フリー完全メラニン細胞培地またはＤＡＧのいずれかを加えた。次いで、各メラニン細胞培養物を３７℃で６〜７日インキュベートした。続いて、各メラニン細胞培養物を集め、０．４ｍＭのＥＤＴＡのＰＢＳ溶液で洗い、０．１３％のトリプシンと０．２ｍＭのＥＤＴＡを含む混合物１ｍｌで処理した後、３７℃で約１０分間インキュベートし、１ｍｌのＰＢＳを加えた。得られた各懸濁液の０．５ｍｌづつを、合計容量が１０ｍｌになるように等張食塩水で希釈し、パーティクルカウンター（モデルＺＭ、 Colter Science社）を用いて計測した。メラニン含有量を求めるために、残りの懸濁液をマイクロ遠心分離機で５分間遠心分離した。上清を捨て、得られた細胞ペレットを１ＭのＮａＯＨの０．１ｍｌに溶かし、続いて０．４ｍｌの水で希釈した。４７５ナノメートルにおける光学密度を測定することによってメラニン濃度を計算し、得られた値を¹⁴Ｃ−ＤＯＰＡの取り込みおよひチロシナーゼ活性と極めて高い相関性を示すメラニン形成指標である合成メラニン測定標準曲線と比較することによって外挿した［フリードマンとギルヒレスト（Friedmann, P.S. and Gilchrest, B.A. ），J. Cell. P hysiol. 133:88-94（1987）］。メラニン値は、培養物１個あたりのメラニン総量、細胞１個あたりのメラニン含有量、または未処理対照に対する百分率として表した。場合によっては、培養物をリン酸緩衝食塩水で１回洗った後、倒立顕微鏡を用いて位相差顕微鏡写真を撮った。実施例３：モルモット成獣によるイン・ビボ実験表皮と毛穴にメラニンを有することが知られている系統のモルモット成獣２匹を入手した。モルモットの毛を刈り、剃毛して、背部に広い無毛部分を設けた。適当なベースライン色素沈着を示す２ｃｍｘ４ｃｍのサイズの部分２個所を選び、それぞれ（ａ）５０ｕｌのＯＡＧをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かしたもの（５０ｍｇ／ｍｌ）または（ｂ）５０ｕｌのＤＭＳＯだけをビーイクル対照としたもののいずれかを塗布した。各塗布ごとに１０分間動物を拘束し、ケージに戻す前に試験溶液を吸収するようにした。塗布は、７日間毎日行なった。ＯＡＧ処理部分で色素沈着の増大が見られた。色素沈着は４〜５日目にまず明らかになり、約１カ月間持続し、その後徐々に減少した。いずれの時点でも、ＯＡＧ処理部分の色はビーイクル処理（ＤＭＳＯ）部分より濃かった。ＯＡＧ処理によって引き起こされた違いと色素沈着の増大は肉眼でも見ることができた。これらの動物を観察し、結果を永久に記録するために写真を撮った。写真は、要求があればいつでも提供可能である。また、最終塗布後７日目（最初の塗布後１４日目）にＯＡＧ処理皮膚、ＤＭＳＯ処理皮膚、および隣接の未処理皮膚のパンチ生検標本を採取した。生検標本を処理して厚さ３ミクロンの垂直断面標本を作成した後、メラニンを黒色に染色することが知られている還元剤を含む染色剤であるフォンターナ−マッソン染色剤で染色した。発色原としての鉄色素を排除するためにペルル（Perl）の染色処理を行なったところ、陰性であったので、染色した材料はメラニンであることがさらに確認された。いずれの標本でも、ベースラインおよび日光曝露誘導日焼け後に正常皮膚で見られるものと全く同じように、下層表皮に色素沈着が集中している。均等物当業者であれば、単に常識的実験手法を用いて、ここに述べた発明の具体的態様に対する多くの均等物を認識し、また確認し得るであろう。これらの均等物は下記のクレームの範疇に含まれるものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年９月１２日【補正内容】原文明細書１０ページ補正１−パルミトイル−２−ブタノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ヘキサノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−オクタノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−デカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−オクタンデカノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−エイコサノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−ドコサノイル−グリセロール１−パルミトイル−２−オレオイル−グリセロール１−パルミトイル−２−リノレオイル−グリセロール１−パルミトイル−２−アラキドノイル−グリセロール１−オレオイル−２−ホルミル−グリセロール１−オレオイル−２−アセチル−グリセロール１−オレオイル−２−ブタノイル−グリセロール１−オレオイル−２−ヘキサノイル−グリセロール１−オレオイル−２−オクタノイル−グリセロール１−オレオイル−２−デカノイル−グリセロール１−オレオイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−オレオイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−オレオイル−２−パルミトイル−グリセロール１−オレオイル−２−リノレオイル−グリセロール１−オレオイル−２−アラキドノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ホルミル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−アセチル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ブタノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−オクタノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−デカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ドデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−テトラデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−オクタデカノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−エイコサノイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−パルミトイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−オレオイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−リノレオイル−グリセロール１−ヘキサノイル−２−アラキドノイル−グリセロール原文明細書１１ページの補正ヒトのメラニン細胞に及ぼすジアシルグリセロールの影響以下の実験で、ヒトメラニン細胞に及ぼすＤＡＧの影響を調べるとともに、ＤＡＧとのインキュベーションに先だって行なわれる特定薬剤によるヒトメラニン細胞の前処理の影響を明らかにする。第１の実験群は、実施例１で説明するようにして培養したヒトメラニン細胞を用いて行なった。完全メラニン細胞培地中でヒトメラニン細胞を１−オレオイル −２−アセチル−グリセロール（ＯＡＧ）と混合し、３７℃で６日間インキュベートした。実施例２に説明するようにして細胞のメラニン含有量を測定した。結果を図１ａと１ｂにグラフ化している。図から、２５〜２００μＭのＯＡＧ濃度レベル範囲でメラニン含有量増加の用量依存的応答が見られるが、メラニン細胞の増殖や成長には有意な影響がないことがわかる。１００μＭの濃度でＯＡＧを添加すると、未処理対照（すなわち実施例１で説明するようにして培養したメラニン細胞を完全メラニン細胞培地と混合し、処理細胞と同様にインキュベートしたもの）と比べて、メラニン細胞１個あたりのメラニン含有量が平均４倍増加した。ＯＡＧはヒトメラニン細胞の樹状突起を増加させず、ヒトメラニン細胞の成長に有意な影響を及ぼさなかったということが重要である。第２の実験群は、培養ヒトメラニン細胞を公知のプロテインキナーゼＣ活性化物質であるテトラデカノイルホルボール −１３−アセテート（ＴＰＡ）でまず前処理して行なった。ＴＰＡはまずＰＫＣ活性を刺激し、続いて長期にわたりＰＫＣ活性を強く抑制することが知られている。原文明細書１３ページの補正ヒト以外のメラニン細胞に及ぼすジアシルグリセロールの影響この実験群は、ヒト以外のソースから得たメラニン細胞に及ぼすＤＡＧの影響を調べる目的で行なったものである。これらの実験では、ネズミＳ９１黒色腫細胞を従来法で培養、維持した［フリードマンとギルヒレスト（Friedmann, P.S.a nd Gilchrest,B.A. ），J. Cell. Physiol. 133:88-94 （1987）］。次いで、Ｓ９１黒色腫細胞を１００μＭのＯＡＧ、またはＳ９１黒色腫細胞におけるｃＡＭＰレベルの上昇およびメラニン合成誘導をももたらす３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）１００μＭと混合した。各化学物質は、２％のＦＢＳを含むダルベッコ最少イーグル培地中でＳ９１黒色腫細胞と混合し、３７℃で７日間インキュベートした。結果をそれぞれ図４と５にグラフ化している。図４は、１〜２００μＭの範囲の濃度のＯＡＧはＳ９１黒色腫細胞の増殖を誘導しなかったことを示している。ＩＢＭＸは類似の作用を示し、やはり細胞成長を引き起こさなかった。一方、図５は、ＯＡＧとＩＢＭＸではメラニン産生増大誘導能力が大きく異なることを示している。１００μＭの濃度のＩＢＭＸは、Ｓ９１黒色腫細胞におけるメラニン産生を大幅に増大させたことが明白である。一方、上記実験条件下でのＯＡＧは対照と比べてメラニン産生の実質的増大を誘導しなかった。これらの結果は、ＤＡＧの生物学的作用がメラニン細胞の由来元によって選択的、識別的であることを示唆するものである。すなわち、用いた条件下では、ＯＡＧはＳ９１ネズミ黒色腫細胞に対して有意な影響を及ぼさない。一方、ＯＡＧをヒトメラニン細胞に接触させると、ヒトメラニン細胞の細胞増殖は引き起こされず、メラニン含有量が実質的に増加する。原文明細書１８ページの補正手順を簡単にまとめると次のとおりである。まず、手術標本を断片化し、カルシウムを含まないリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ですすぎ、０．２５％トリプシン（GIBCO 社）中４℃で１晩インキュベートした。鉗子を用いて真皮から断片の表皮部分を分離し、０．０２％ＥＤＴＡ中３７℃Ｃで１０分間インキュベートし、攪拌して単一細胞懸濁液を作成し、３５ｍｍペトリ皿１枚あたり１０⁶個の濃度でメラニン細胞成長培地でインキュベートし、８％二酸化炭素と９２％空気の中で３７℃に保った。毎週３回新鮮なメラニン細胞成長培地を培養物に加えた。メラニン細胞成長培地は、１０ｎｇ／ｍｌの表皮成長因子、１０ｎＭのトリイオドチリン、１０μｇ／ｍｌのトランスフェリン、１０ｕｇ／ｍｌのインスリン、１ｎＭのコレラトキシン、および１００μｇ／ｍｌのウシ視床下部抽出物を添加した無血清培地である培地１９９（Medium 199）（GIBCO社、４００−１１００）である。実施例２：メラニン細胞のバイオアッセイ３５ｍｍペトリ皿１枚あたり２ｘ１０⁴個の割合でメラニン細胞をまき、１０ｕｇ／ｍｌのインスリン、１０^-9Ｍのトリイオドチリン、１０ｕｇ／ｍｌのトランスフェリン、１．４ｘ１０^-6Ｍのヒドロコーチゾン、１０ｎｇ／ｍｌの表皮成長因子、１０^-9Ｍのコレラーゲン、２％のＦＢＳ、および１００ｕｇ／ｍｌのＢＨＥを加えたＤＭＥＭと混合した。以下、この培地を完全メラニン細胞培地とよぶ。３７℃で２４時間インキュベーションを行なった後、２系列または３系列でメラニン細胞培養物に、フリー完全メラニン細胞培地またはＤＡＧのいずれかを加えた。次いで、各メラニン細胞培養物を３７℃で６〜７日インキュベートした。続いて、各メラニン細胞培養物を集め、０．４ｍＭのＥＤＴＡのＰＢＳ溶液で洗い、０．１３％のトリプシンと０．２ｍＭのＥＤＴＡを含む混合物１ｍｌで処理した後、３７℃で約１０分間インキュベートし、１ｍｌのＰＢＳを加えた。得られた各懸濁液の０．５ｍｌづつを、合計容量が１０ｍｌになるように等張食塩水で希釈し、パーティクルカウンター（モデルＺＭ、Colter Science社）を用いて計測した。請求の範囲４．ヒトの毛を含む脊椎動物の毛の色素沈着を増加させるための薬剤の製造におけるジアシルグリセロールの使用。５．ジアシルグリセロールが１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである請求項４記載の使用。６．脊椎動物の毛孔中に存在するメラニン細胞のメラニン含有量を増加させることによる、ヒトの毛を含む脊椎動物の毛の美容的黒色化方法であって、このメラニン細胞をメラニン細胞中のメラニン合成を誘導するジアシルグリセロールと接触させることによりメラニン細胞中のメラニン合成を誘導し、メラニン細胞のメラニン含有量を増加させることを含む美容的黒色化方法。７．生理学的に許容されうる担体中に含まれるメラニン合成を誘導するジアシルグリセロールを含んでなる、脊椎動物の毛穴中に存在するメラニン細胞のメラニン含有量を増加させるための組成物であって、その中にはジアシルグリセロールがメラニン細胞中のメラニン合成を誘導するに十分な量で存在しているものである組成物。８．ジアシルグリセロールが１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである請求項６記載の方法または請求項７記載の組成物。９．メラニン合成を誘導するジアシルグリセロールを生理学的に許容されうる担体中に含んでなる、脊椎動物の毛穴中のメラニン細胞のメラニン含有量を増加させるための局所処方であって、この中にはジアシルグリセロールがメラニン細胞中のメラニン合成を誘導するに十分な量で存在し、該ジアシルグリセロールが、例えば１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである、局部処方。１１．脊椎動物の毛穴中に存在するメラニン細胞のメラニン含有量を増加させることによる、ヒトの毛を含む脊椎動物の毛の色素沈着を増加させる方法であって、毛に覆われた色素沈着させたい部分を生理学的に許容されうる担体中に有効量のジアシルグリセロールを含む局所処方と接触させることからなる、該ジアシルグリセロールが、例えば１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである、方法。１２．毛、毛皮、ウール、または羽毛の色素沈着を促進するための色素沈着剤としてジアシルグリセロールの使用。１３．任意の生理学的に許容されうる担体中の色素沈着有効量のジアシルグリセロールを毛皮部分、ウール部分または羽毛部分に塗布することを含む、脊椎動物の毛皮、ウールまたは羽毛の脱色防止方法。１４．該ジアシルグリセロールが以下の化合物からなる群より選択されるものである、請求項４または請求項１２記載の使用、１，２−ジホルミルグリセロール、１，２−ジアセチルグリセロール、１，２−ジブタノイルグリセロール、１，２−ジヘキサノイルグリセロール、１，２−ジオクタノイルグリセロール、１，２−ジデカノイルグリセロール、１，２−ジドデカノイルグリセロール、１，２−ジテラデカノイルグリセロール、１，２−ジヘキサデコイルグリセロール、１，２−ジオクタデカノイルグリセロール、１，２−ジエイコサノイルグリセロール、１，２−ジドコサノイルグリセロール、１，２−ジテトラコサノイルグリセロール、１，２−ジパルミトイルグリセロール、１，２−ジオレオイルグリセロール１，２−ジリノレオイルグリセロール、１，２−ジリノレノイルグリセロール、１，２−アラキドノイルグリセロール、１−オクタノイル−２−ホルミル−グリセロール、１−オクタノイル−２−アセチル−グリセロール、１−オクタノイル−２−ブタノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−ヘキサノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−デカノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−ドデカノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−テトラデカノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−オクタデカノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−エイコサノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−ドコサノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−テトラコサノイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−パルミトイル−グリセロール、１−オクタノイル−２−オレオイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−ホルミル−グリセロール、１−パルミトイル−２−アセチル−グリセロール、１−パルミトイル−２−ブタノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−ヘキサノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−オクタノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−デカノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−ドデカノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−テトラデカノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−オクタデカノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−エイコサノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−ドコサノイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−オレオイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−リノレオイル−グリセロール、１−パルミトイル−２−アラキドノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−ホルミル−グリセロール、１−オレオイル−２−アセチル−グリセロール、１−オレオイル−２−ブタノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−ヘキサノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−オクタノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−デカノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−ドデカノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−テトラデカノイル−グリセロール、１−オレオイル−２−パルミトイル−グリセロール、１−オレオイル−２−リノレオイル−グリセロール、１−オレオイル−２−アラキドノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−ホルミル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−アセチル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−ブタノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−オクタノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−デカノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−ドデカノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−テトラデカノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−ヘキサデカノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−オクタデカノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−エイコサノイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−パルミトイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−オレオイル−グリセロール、１−ヘキサノイル−２−リノレオイル−グリセロール、及び１−ヘキサノイル−２−アラキドノイル−グリセロール。１５．該ジアシルグリセロールが１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである請求項１２記載の使用。１６．脊椎動物の毛に覆われた部分を有効量のジアシルグリセロールと接触させることを含む、ヒトを含む脊椎動物の該部分を美容的に黒色化する方法。１７．生理学的に許容されうる担体中に含まれる有効量のジアシルグリセロールを含んで成る、ヒトを含む脊椎動物の毛の色を黒色化するための組成物。１８．生理学的に許容されうる担体中に含まれる有効量のジアシルグリセロールを含んで成る、ヒトを含む脊椎動物の毛の色を黒色化するための局所処方であって、該ジアシルグリセロールが、例えば１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである局所処方。１９．毛に覆われた色素沈着させたい部分を、生理学的に許容されうる担体中に色素沈着有効量のジアシルグリセロールを含有する局所処方と接触させることからなる、ヒトの毛の色素沈着を増加させる方法であって、該ジアシルグリセロールが、例えば１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/23 ＡＦＫ // Ｃ０７Ｃ 69/10 9546−4Ｈ 69/18 69/30 69/58 69/587

Claims

【特許請求の範囲】１．脊椎動物のメラニン細胞を、例えばイン・ビトロにおいてメラニン合成を誘導するジアシルグリセロールと接触させ、それによりそのメラニン細胞中のメラニン合成を誘導し、メラニン細胞のメラニン含有量を増加させることを含む、脊椎動物のメラニン細胞のメラニン含有量を増加させる方法。２．ジアシルグリセロールが１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである請求項１記載の方法。３．請求項１の方法により作成された、メラニン含有量の増加した脊椎動物のメラニン細胞。４．メラニン細胞におけるメラニン合成を誘導するための、例えばヒトの皮膚またはヒトの毛の色素沈着を増加させるための薬剤の製造におけるジアシルグリセロールの使用。５．ジアシルグリセロールが１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである請求項４記載の使用。６．ヒト皮膚中に存在するメラニン細胞のメラニン含有量を増加させることによるヒト皮膚の美容的日焼け方法であって、メラニン細胞とヒトメラニン細胞中でメラニン合成を誘導するジアシルグリセロールとを接触させ、これによりメラニン細胞中のメラニン合成を誘導し、メラニン細胞中のメラニン含有量を増加させることからなる方法。７．生理学的に許容されうる担体中に含まれるメラニン合成を誘導するジアシルグリセロールを含有する、メラニン細胞のメラニン含有量を増加させるための組成物であって、メラニン細胞中のメラニン合成を誘導するに十分な量のジアシルグリセロールが含まれるものである組成物。８．ジアシルグリセロールが１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールである請求項６記載の方法または請求項７記載の組成物。９．メラニン合成を誘導するジアシルグリセロールを生理学的に許容されうる担体中に含む、メラニン細胞のメラニン含有量を増加させるための局所処方であって、このジアシルグリセロールが、例えば１−オレオイル−２−アセチル−グリセロールであり、メラニン細胞中のメラニン合成を誘導するに十分な量で存在するものである局所処方。１０．ヒト皮膚に存在するメラニン細胞のメラニン含有量を増加させることによる、ヒト皮膚の美容的日焼け方法であって、皮膚中に存在するメラニン細胞と請求項９記載の局所処方とを接触させ、これによりメラニン細胞のメラニン含有量を増加させ、この皮膚を日焼けさせることからなる方法。１１．ヒトの毛の中に存在するメラニン細胞のメラニン含有量を増加させることによるヒトの毛の色素沈着を増加させる方法であって、毛の中のメラニン細胞を請求項９記載の局所処方と接触させ、これによりメラニン細胞のメラニン含有量を増加させ、毛の色素を増加させることからなる方法。１２．皮膚、毛、毛皮、ウール、または羽毛の色素沈着に影響を与えるためのジアシルグリセロール、例えば１−オレオイル−２−アセチル−グリセロール。１３．そこに存在するメラニン細胞とジアシルグリセロールとを接触させてメラニン合成を誘導し、これによりメラニン細胞のメラニン含有量を増加させることを含む、動物の毛皮、ウールまたは羽毛の脱色を防止する方法。