JPH08501934A

JPH08501934A - タンパクチロシンホスファターゼのｐｔｐ−ｄサブファミリー

Info

Publication number: JPH08501934A
Application number: JP6505020A
Authority: JP
Inventors: ウルリッヒ，アクセル; ペーターヒュンダールモラー，ニールス; バッハ−モラー，カリン
Original assignee: マックス−プランク−ゲゼルシャフトツールフェルデルングデルヴィッセンシャフテンエー．ヴェー．
Priority date: 1992-08-05
Filing date: 1993-08-05
Publication date: 1996-03-05
Also published as: DK0654083T3; CA2141847A1; AU4707793A; ATE237688T1; DE69332883D1; EP0654083A1; PT654083E; MX9304769A; WO1994003611A3; DE69332883T2; ES2196010T3; US5831009A; WO1994003611A2; CN1091139A; US5955592A; EP0654083B1

Abstract

(57)【要約】タンパクチロシンホスファターゼの新規なサブファミリー（PTP-D）が同定される。このファミリーには、公知のタンパクチロシンホスファターゼのホスファターゼ触媒ドメインの以前に定義された共通配列における１個、２個、または３個の同定されたアミノ酸の変更を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクが含まれる。このPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは組換え手段により生産しうる。PTP-Dタンパクまたは糖タンパクに対する抗体、それらをコードする核酸構築物、およびPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに結合でき、それらの酵素活性を阻害または剌激する分子をスクリーニングする方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】タンパクチロシンホスファターゼのＰＴＰ−Ｄサブファミリー発明の背景発明の分野本発明は、生化学および細胞分子生物学の分野に属する。本発明は、タンパクチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ）の新規サブファミリー（ＰＴＰ−Ｄ）を構成するＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパク、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸構築物、このような核酸構築物を担う組換え発現ベクター、この組換え発現ベクターを含有する細胞、ＰＴＰ−Ｄタンパクおよび糖タンパクとそれらをコードするＤＮＡ構築物を調製し同定するための方法、ＰＴＰ −Ｄタンパクおよび糖タンパクに特異的な抗体、およびＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクに結合可能で、それらのタンパクチロシンホスファターゼ酵素活性を阻害または剌激することができる化合物をスクリーニングするための方法に関する。技術的背景の説明タンパク質のリン酸化は、様々な細胞プロセスを制御するための基本的なメカニズムである。タンパク質リン酸化の大部分はセリンおよびスレオニン残基で起こるが、多くのガン遺伝子産物および成長因子受容体が内在的なタンパクチロシンキキナーゼ活性を有するという発見により、チロシン残基でのリン酸化が多大の興味を引く。成長因子のシグナル変換、細胞周期の進行および悪性形質転換におけるタンパクチロシンリン酸化の重要性が、現在よく証明されている（Hunter ら、Ann．Rev．Biochem．54：987-930 （1985），Ullrichら、Cell 61：203-212（1990），Nurse，Nature344：503-508 （1990），Cantleyら、Cell 64：281-302（1991））。生化学的研究により、様々な細胞性タンパクのチロシン残基におけるリン酸化は、拮抗するリン酸化反応と脱リン酸化反応とを包含する動的プロセスであることが明らかになった。タンパクチロシンリン酸化の制御は、タンパクチロシンキナーゼ（ＰＴＫアーゼ）およびタンパクチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ）の相互に相反する作用を介して行なわれる。チロシンのリン酸化反応は、ＰＴＫアーゼによって触媒される。チロシンリン酸化タンパクはＰＴＰアーゼの作用によって特異的に脱リン酸化される。細胞内物質のタンパクチロシンリン酸化のレベルは、ＰＴＫアーゼおよびＰＴＰアーゼ活性のバランスによって決定される（Hunter，T.，Cell 58：1013-1016（1989））。ＰＴＫアーゼタンパクチロシンキナーゼ（ＰＴＫアーゼ）は、多くの成長因子受容体および潜在的なガン遺伝子を包含する、多数のタンパク質からなる一群である（Hanks ら、Science 241：42-52（1988））。多くのＰＴＫアーゼは、細胞周期の誘導に必要な開始シグナルに関連している（Weaverら、Mol．and Cell．Biol．11(9)： 4414-4422（1991））。ＰＴＫアーゼは、セリン／スレオニン−特異的タンパク質キナーゼと共通の起源を有するが、多数の相違点を有する、明確に区別された一群の酵素を含んでなる（Hanksら、上記）。ＰＴＫアーゼ活性に変化を生じるメカニズムは、膜貫通トポロジーを有する受容体型ＰＴＫアーゼの場合に最もよく理解される（Ullrichら、（1990）上記）。ある受容体型ＰＴＫアーゼの細胞外ドメインに特異的リガンドが結合すると、オリゴマー化が誘導され、チロシンキナーゼ活性の増加およびシグナル変換経路の活性化に至ると考えられる（Ullr ichら、（1990）上記）。突然変異または過剰発現によるキナーゼ活性の脱制御は、細胞形質転換のメカニズムとして十分に立証されている（Hunterら、（1985 ）上記：Ullrichら、（1990）上記）。ＰＴＰアーゼタンパクホスファターゼは少なくとも二つの別個の異なる酵素群（Hunter．T ．（1989）上記）、タンパクセリン／スレオニンホスファターゼおよびタンパクチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ）、から成る。タンパクチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ）は、二つのサブグループに分類される一群のタンパク質である。第１のサブグループは、単一の保存されたホスファターゼ触媒ドメインを有する低分子量の細胞内酵素から成る。すべての公知の細胞内型ＰＴＰアーゼは、単一の保存されたホスファターゼ触媒ドメインを有する。第１グループのＰＴＰアーゼの例は、（１）胎盤ＰＴＰアーゼＩＢ（ Charbonneauら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．86：5252-5256（1989）；Cher noffら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．87：2735-2789（1989））、（２）Ｔ細胞ＰＴＰアーゼ（Coolら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．86：5257-5261（1 989））、（３）ラット脳ＰＴＰアーゼ（Guanら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S. A．87：1501-1512（1990））、（４）ニューロンホスファターゼ（ＳＴＥＰ）（ Lombrosoら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．88：7242-7246（1991））、および（５）細胞骨格タンパク質に相同な領域を含有する細胞質ホスファターゼ（Guら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A ．88：5867-5871（1991）；Yang ら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．88：5949 -5953（1991））を包含する。第２のサブグループは、Ｒ−ＰＴＰアーゼと称する、高分子量の受容体結合ＰＴＰアーゼから成る。Ｒ−ＰＴＰアーゼは、ａ）細胞内の触媒領域、ｂ）単一の膜貫通セグメント、およびｃ）推定上のリガンド結合細胞外ドメインから成る（ Gebbinkら、上記）。Ｒ−ＰＴＰアーゼのｃ）推定上のリガンド結合細胞外「受容体」ドメインの構造および大きさは、それぞれにまったく異なっている。これに対して、Ｒ−ＰＴＰアーゼのａ）細胞内触媒領域は、高い相同性を有する。すべてのＲ−ＰＴＰアーゼは、二つの縦列に重複した相同なホスファターゼ触媒ドメインを有するが、ＨＰＴＰβと命名されたＲ−ＰＴＰアーゼは顕著な例外であって、唯一のホスファターゼ触媒領域しかもたない（Tsaiら、Journal ofBiol．Chem．266（16）：1 0534-10543（1991））。Ｒ−ＰＴＰアーゼの一例は、白血球共通抗原（ＬＣＡ）である（Ralph，S．J. ，EMBO J．6：1251-1257（1987））。ＬＣＡは、あらゆる白血球およびそれらの造血前駆細胞の表面で発現する一群の高分子量糖タンパクである（Thomas，Ann ．Rev．Immunol．7：339-369（1989））。数種類の生物種由来のＬＣＡの配列には、相当程度の類似性が検出される（Charbonneauら、Proc．Natl．Acad．Sci． U.S．A．85：7182-7186（1986））。ＬＣＡは、Ｔ２００（Trowbridgeら、Eur． J．Immunol．6：557-562（1962））、Ｂ細胞に関するＢ２２０（Coffmanら、Nat ure 289：681-683（1981））、マウスアロタイプマーカーＬｙ−５（Komuroら、 Immunogenetics I：452- 456（1975））、およびもっと新しいものとしてはＣＤ４５（Cobboldら、Leucoc yte Typing III，A．J．McMichael他編、pp．788-803（1987））を包含する様々に異なる名称で文献中に言及される。いくつかの研究は、ＣＤ４５がＴ細胞の活性化において重大な役割を演ずることを示唆する。このような研究は、Weiss A.，Ann Rev．Genet．25：487-510（1 991）に総説としてまとめられている。ある研究において、ＮＳＧにより変異誘発しＣＤ４５発現の欠失で選択したＴ細胞クローンは、Ｔ細胞受容体剌激に対する応答が損なわれていた（Weaverら、（1991）上記）。これらのＴ細胞クローンは、適当な標的細胞の溶解、増殖、およびリンホカイン産生を包含する、Ｔ細胞抗原受容体を通して伝達されるシグナルに対する応答を機能的に欠失していた（ Weaverら、（1991）上記）。別の研究は、ＣＤ４５のＰＴＰアーゼ活性がリンパ球特異的ＰＴＫアーゼであるｐｐ５６^lckの活性化に役割を担うことを示唆する（Mustelinら、Proc．Natl ．Acad．Sci．U.S.A．86：6302-6306（1989）；Ostergaardら、Proc．Natl．Aca d．Sci．U.S.A．86：8959-8963（1989））。これらの著者は、ＣＤ４５のホスファターゼ活性がＣ−末端チロシン残基を脱リン酸化することによってｐｐ５６^lc ^k を活性化し、それがさらにＴ細胞活性化に関与する可能性があるという仮説を提出した。また別のＲ−ＰＴＰアーゼの例は、白血球共通抗原関連分子（ＬＡＲ）である（Streuliら、J．Exp．Med．168：1532-1530（1988）。ＬＡＲは最初はＬＣＡに相同なものとして同定された（Steuliら、上記）。ＬＡＲ分子のａ）細胞内触媒領域は、二つの相同なホスファターゼ触媒ドメイン（ドメインＩおよびドメインII）を含有するが、突然変異分析は、ドメインＩのみがホスファターゼ触媒活性を有し、ドメインIIは、酵素的には不活性であることを示唆する（Steuliら、EMBO J．9(8)： 2399-2407（1990））。アミノ酸位置１３７９にフェニルアラニンに替えてチロシンを有する、化学的に誘導されたＬＡＲ変異体は温度感受性である（Tsaiら、 J．Biol．Chem．266（16）：10534-10543（1991））。ａ）ＬＡＲといくつかの構造的な特色を共有する細胞外ドメインを有する、ｍＲＰＴＰμと命名された新規マウスＲ−ＰＴＰがクローニングされている（Gebb inkら、（1991）上記）。さらに、上記の著者は、ＲＰＴＰμのヒト相同体をクローニングし、ヒト第18染色体上にその遺伝子の位置を決定した。ＤＬＡＲおよびＤＰＴＰと名付けられた二つのショウジョウバエＰＴＰアーゼが、ｃＤＮＡクローンの配列に基づいて予測された（Streuliら、Proc．Natl．A cad．Sci．U.S．A．86：8698-8702（1989））。ＤＰＴＰ９９Ａと命名された別のショウジョウバエＲ−ＰＴＰアーゼをコードするｃＤＮＡがクローニングされ、性質検討がなされている（Hariharanら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．88 ：11266-11270（1991））。他のＲ−ＰＴＰアーゼの例としては、Ｒ−ＰＴＰアーゼα、β、γおよびζがある（Kruegerら、EMBO J．9：3241-3252（1990）、Sap ら、Proc．Natl．Acad ．Sci．U.S.A．87：6112-6116（1990）、Kaplanら、Proc．Natl．Acad．Sci．U. S.A．87：7000-7004（1990）、Jirikら、FEBS Lett．273：239-242（1990）、Ma thews ら、Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．87：4444-4448（1990）、Ohagi ら、Nu cl．Acids Res．18：7159（1990））。公開された出願ＷＯ９５／０１０５０は、ヒトＲ−ＰＴＰアーゼ−α、βおよびγを明らかにし、これら３つのＲ−ＰＴＰアーゼおよびこのタンパク質群の他のタンパク質の保存されたドメインの間にみられる構造上の相同性の本質について報告している。マウスＲ−ＰＴＰアーゼ −αは７９４アミノ酸を有するが、ヒトＲ−ＰＴＰアーゼ−αは８０２アミノ酸を有する。Ｒ−ＰＴＰアーゼ−αは、他のチロシンホスファターゼの触媒ドメインと相同な細胞内ドメインを有する。１４２アミノ酸の細胞外ドメイン（Ｒ−ＰＴＰアーゼ−αのシグナルペプチドを包含する）は、セリンおよびスレオニン含量が高く（32％）、８個の潜在的なＮ−グリコシル化サイトを有する。Ｒ−ＰＴＰアーゼ−αをコードするｃＤＮＡクローンが作成され、Ｒ−ＰＴＰアーゼ−α は真核細胞宿主により発現された。様々な細胞および組織におけるＲ−ＰＴＰアーゼ−αの本来の発現を確認するためにノーザン分析が使用された。Ｒ−ＰＴＰアーゼ−αに対するポリクローナル抗体が、Ｒ−ＰＴＰアーゼ−αの合成ペプチドを用いた免疫化により調製され、この抗体は、Ｒ−ＰＴＰアーゼ−αの一部をコードしたｃＤＮＡクローンを導入した細胞において130kDaのタンパク質を同定する。Ｒ−ＰＴＰアーゼのもう一つの例はＨｅＰＴＰである（Jirikら、FASEB J．4 ：82082（1990）Abstract 2253）。Jirikらは、肝芽腫細胞系統、ＨｅｐＧ２に由来するｃＤＮＡライブラリーを、ＬＣＡの二つのＰＴＰアーゼドメインをコードするプローブでスクリーニングし、ＨｅＰＴＰと命名された新規Ｒ−ＰＴＰアーゼをコードするｃＤＮＡを発見した。ＨｅＰＴＰ遺伝子は、様々なヒトおよびマウス細胞系統および組織において発現すると思われた。ＰＴＰアーゼの初期の精製、配列決定およびクローニング以来、それらに加えて潜在的なＰＴＰアーゼが、早いペースで同定されている。同定された異なるＰＴＰアーゼの数は、着実に増加しつつあり、この酵素群はＰＴＫアーゼ群と同程度に多数からなるのではないかという推測に至っている（Hunter（1989）上記）。公知のＰＴＰアーゼの触媒ドメインに保存されたアミノ酸配列が同定され、明らかに示された（Kruegerら、EMBO J．9：3241-3252（1990）およびYiら、Mol． Cell．Biol．12：836-846（1992）、これらは引用により本文に編入される）。これらのアミノ酸配列を、本文では「共通配列」と称する。 Yiらは、以下のＰＴＰアーゼ：ＬＣＡ、ＰＴＰＩＢ、ＴＣＰＴＰ、ＬＡＲ、ＤＬＡＲ、およびＨＰＴＰα、ＨＰＴＰβ、およびＨＰＴＰγのホスファターゼ触媒ドメインの配列を比較のために並べた。この配列は、次のような「共通配列」を包含する（Yiら、上記、図２（Ａ）、１および２行）：１．ＤＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．１］２．ＣＸＸＹＷＰ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．２］３．Ｉ／ＶＶＭＸＸＸＸＥ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．３］ Kruegerらは、ＰＴＰＩＢ、ＴＣＰＴＰ、ＬＡＲ、ＬＣＡ、ＨＰＴＰα、β、 γ、εおよびζ、およびＤＬＡＲおよびＤＰＴＰのホスファターゼ触媒ドメインの配列を比較のために並べた。この配列は、以下のような「共通配列」を包含する（Kruegerら、上記、図７、１および２行）：１．Ｄ／ＮＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．４］２．ＣＸＸＹＷＰ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．２］３．Ｉ／ＶＶＭＸＸＸＸＥ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．３］チロシン残基の脱リン酸化が、それ自身によって、重要な制御メカニズムとして機能し得ることが明らかになっている。チロシンキナーゼのｓｒｃファミリーの場合には、Ｃ末端チロシン残基の脱リン酸化がチロシンキナーゼ活性を活性化することが明らかになった（Hunter，T.，Cell 49：1-4（1987））。チロシンの脱リン酸化は、成熟促進因子（ＭＰＦ）キナーゼの有糸分裂活性化において、必須の段階であることが示唆された（Morlaら、Cell 58：193-203（1989））。以上の知見は、当該分野において、チロシンホスファターゼ活性を制御するメカニズムを理解する必要性を明示する。ＰＴＰアーゼ間の構造−機能相関の一層の研究が、シグナル変換、細胞周期の進行と細胞の成長、および悪性形質転換のメカニズムの重要な理解を得るために必要であるのは明白である。定義表１は、タンパク質化学者の間で広く用いられ、本文でも使用されるアミノ酸の一文字略号を示す。発明の要約発明者は、本文で、タンパクチロシンホスファターゼの新規サブファミリー（ＰＴＰ−Ｄ）の同定を説明する。以後「ＰＴＰ−Ｄサブファミリー」と称する新規サブファミリーは、過去に報告されたＰＴＰアーゼとは構造において重大な相違がある。したがって、本発明はＰＴＰ−Ｄサブファミリーに属するＰＴＰアーゼであるＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクを提示する。ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクは、そのアミノ酸配列が下記から選択されるようなホスファターゼ触媒ドメインを有する、ＰＴＰアーゼ群のＰＴＰ−Ｄサブファミリーに属するある種のＰＴＰアーゼを含んでなることが望ましい。１．ＧＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．５］２．ＳＸＸＹＷＰ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．６］３．ＩＡＭＶＸＸＸＸＥ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．７］下記から選択されるアミノ酸配列１．ＧＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．５］２．ＳＸＸＹＷＰ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．６］３．ＩＡＭＶＸＸＸＸＥ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．７］は、すでに決定されたＰＴＰアーゼのホスファターゼ触媒ドメインにおけるアミノ酸共通配列と比較して、以下のようなアミノ酸の相違を有する（相違点に下線を付す）：１．ＰＴＰ−ＤＧＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．５］共通ＤＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．１］ＮＹＩＮＡＳ／Ｎ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．８］２．ＰＴＰ−Ｄ１／Ｄ２ＳＸＸＹＷＰ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．６］共通ＣＸＸＹＷＰ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．２］３．ＰＴＰ−Ｄ１／Ｄ２ＩＡＭＶＸＸＸＸＥ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．７］共通（Ｉ／Ｖ／Ｌ）Ｖ（Ｍ／Ｉ／Ｌ）（Ｖ／Ｌ／Ｉ／Ｍ）ＸＸＸＸＥ［ＳＥＱ．ＩＤＮＯ．９］本発明のＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクが天然に存在するものであるならば、それに自然の状態で結合している他のタンパクまたは糖タンパクはほとんどない。本発明のほぼ純粋なＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクを、糖タンパクの生化学的精製法によって調製することができる。あるいはまた、本発明のＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクは、化学的方法、または原核細胞あるいは真核細胞宿主における組換え技法によって調製することができ、これに自然に結合している他のタンパク質および／または修飾されたアミノ酸を有する他のタンパク質が実質的にない状態で与えられる。本発明は、さらに、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクのフラグメント、付加されたアミノ酸を有するＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパク、および置換されたアミノ酸を有するＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクに関するが、さらにＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクが望ましい生物活性を有するように、アミノ酸の欠失、付加、または置換のいずれかをなんらかの組合せで有するＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクに関する。また、本発明は、本発明のＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸配列を含んでなる、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡとしての核酸構築物に関する。本発明は、さらに発現ベクターとしての核酸構築物、ならびにその発現ベクターを含有する原核および真核宿主細胞に関する。本発明のＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクを調製するための方法も本発明に包含され、以下を含んでなる：（ａ）培養条件下でＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクを発現する能力を有する宿主を培養し、（ｂ）ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクを発現させ、（ｃ）培養物からＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクを回収する。本発明はまた、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパク、あるいはＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクのエピトープに特異的な抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、またはキメラ抗体に関する。さらに本発明は、細胞または被検体においてＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクの存在を検出し、または定量するための方法に関するものであり、以下を含んでなる：（ａ）当該細胞またはその抽出物を、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクのエピトープに特異的な抗体と接触させ、（ｂ）細胞またはその抽出物への抗体の結合を検出し、または結合した抗体量を測定する。これにより、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクの存在を決定し、またはその量を測定する。本発明は、細胞または被検体において、正常な、または変異したＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸構築物の存在を検出するための方法に関するものであり、以下を含んでなる：（ａ）ハイブリダイズする条件下で、正常な、または変異したＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクの少なくとも一部をコードしたオリゴヌクレオチドプローブに、細胞または被検体由来の抽出物を接触させ、（ｂ）細胞の核酸に対するプローブのハイブリダイゼーションを測定する。これにより核酸構築物の存在を確認する。アッセイに先立って、ＰＣＲを用いて細胞の核酸を選択的に増幅することができる。さらに本発明は、化学的または生物学的標本において、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクに結合し得る化合物を同定し単離するための方法に関するものであり、その方法は以下を含んでなる：（ａ）ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパク、あるいはその化合物結合部分を固相マトリックスに付着させ、（ｂ）化学的または生物学的標本をその固相マトリックスに接触させて化合物を結合させ、未結合の物質を洗い流し、（ｃ）固相に結合した化合物の存在を検出する；さらに単離の目的で、（ｄ）結合した化合物を溶出する。これにより化合物を単離する。最後に、本発明は、ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクの酵素活性を剌激または阻害できる分子を同定するための方法を包含し、以下を含んでなる：（ａ）化合物を、精製形にあるか、膜標本、または完全な生きたあるいは固定した細胞におけるＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクと接触させ、（ｂ）工程（ａ）の混合物を一定の十分な期間隔でインキュベートし、（ｃ）ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクの酵素活性を測定し、（ｄ）化合物無しでインキュベートしたＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパク酵素活性を比較する。これにより、その分子が活性を剌激しまたは阻害するかどうかを決定する。ＰＴＰ−Ｄタンパクまたは糖タンパクのフラグメントを、活性を剌激または阻害できる分子を同定するためのこの方法に使用することができる。図面の簡単な説明図１は、PCRフラグメントである、PTP-D1の部分的cDNA配列及び推定アミノ酸配列を示す。図２は、PCRフラグメントである、PTP-D2の部分的cDNA配列及び推定アミノ酸配列を示す。図３Ａは、PTP-D1及びPTP-D2の推定アミノ酸配列とPTPアーゼ1Bのアミノ酸配列との比較を示す。CLUSTALプログラムを使用した（Higgins，C.，Fuch，R．and Bleasby，D.，Multiple Sequence Alignment；CABIOS（1991）（印刷中））。図３Ｂは、PTP-D1及びPTP-D2の間のヌクレオチドの比較を示す。図３Ｃは、PTP-D1及びPTP-D2の間のアミノ酸の比較を示す。図４は、PTP-D1の部分的cDNA配列及び推定アミノ酸配列を示す。この部分的cDNA配列は、図１に示したPCRフラグメントのcDNA配列を含む。発明の詳細な説明本発明者等は、これまでに報告されていたPTPアーゼとは有意に構造的に異なるタンパクチロシンホスファターゼ（PTPアーゼ）の新規なサブファミリー（PTP -Dサブファミリー）を同定した。このPTP-Dサブファミリーのメンバーは、PTPアーゼのホスファターゼ触媒ドメイン中のこれまでに定義されていたアミノ酸共通配列と比較して以下のアミノ酸相違（相違部分に下線を付した）の１、２または３つを有する。１．PTP-D：ＧＹＩＮＡＳ／Ｎ（配列番号５）共通ＤＹＩＮＡＳ／Ｎ（配列番号１）ＮＹＩＮＡＳ／Ｎ（配列番号８）２．PTP-D1/D2 ＳＸＸＹＷＰ（配列番号６）共通ＣＸＸＹＷＰ（配列番号２）３．PTP-D1/D2 ＩＡＭＶＸＸＸＸＥ（配列番号７）共通（I/V/L）V（M/I/L）（V/L/I/M）XXXXE （配列番号９）「サブファミリー」の用語は、上記に挙げた特定のアミノ酸残基において構造的に関連するPTPアーゼの群を示すのに使用される。これまでに定義されたアミノ酸共通配列により、Kruegerら，EMBO J．9:3241- 3252（1990）及びYiら，Mol．Cell．Biol．12:836-846（1992）（これらの文献は引用により本明細書の一部とする）に記載された公知のPTPアーゼのホスファターゼ触媒ドメイン中の保存されたアミノ酸配列を意味する。従って、本発明は、１．ＧＹＩＮＡＳ／Ｎ（配列番号５）２．ＳＸＸＹＷＰ（配列番号６）３．ＩＡＭＶＸＸＸＸＥ（配列番号７）から選択された、１、２または３つのアミノ酸配列を有するホスファターゼ触媒ドメインを持つPTPアーゼのPTP-DサブファミリーからのPTPアーゼを含むPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに関する。現時点では、前記のPTPアーゼの新規なPTP-DサブファミリーのPTP-Dタンパク及び糖タンパクがレセプター結合PTPアーゼであるか細胞内PTP アーゼであるかは判っていない。１つの形態においては、本発明は天然の哺乳類PTP-Dタンパクまたは糖タンパクに係わる。別の形態においては、本発明は、組換え体哺乳類PTP-Dタンパクまたは糖タンパクに係わる。別の形態においては、本発明は、化学的に合成された哺乳類PTP-Dタンパクまたは糖タンパクに係わる。本発明の好ましいPTP-Dタンパクまたは糖タンパクはヒト起源のものである。本発明は、天然のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクであって、それが本来結合している他のタンパクまたは糖タンパクを実質的に含まないPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを提供する。「他のタンパクまたは糖タンパクを実質的に含まない」とは、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクが、それが本来結合しているタンパク及び糖タンパクの少なくとも90パーセント（重量基準）、所望の場合は少なくとも99パーセントが精製除去されており、従ってそれらを実質的に含まないことを意味する。これは、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクを含む細胞、組織あるいは体液を標準的なタンパク精製法、例えば前記タンパクに対して反応性を有するモノクローナル抗体を担持する免疫吸着カラムにかけることにより達成することができる。アフィニティー精製の他の形態は、ホスファターゼ触媒ドメインに結合することができる固相基質、あるいはPTP-Dタンパクまたは糖タンパク中に存在し得るレセプター領域に結合するリガンドを使用することができる。あるいは、硫酸アンモニウム沈降、モレキュラーシーブクロマトグラフィー、及びイオン交換クロマトグラフィーのような標準法の組み合わせにより精製を達成することができる。本発明の哺乳類PTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、種々の細胞あるいは組織起源から生化学的に精製できることが理解されるであろう。天然のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの調製のためには、特にヒト起源の、骨格筋のような組織が好ましい。横紋筋肉腫細胞系（RD）のような細胞系を使用することができる。あるいは、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの遺伝子が単離あるいは合成できるので、所望であれば、PTP-Dタンパクは、原核生物もしくは非哺乳類真核生物中で哺乳類起源の他のタンパクまたは糖タンパクを実質的に含むことなく合成できる。本発明で意図されるように、形質転換されたCOS、NIH-3T3またはCHO細胞のような哺乳類細胞中で生産された組換えPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、例えば、天然のタンパク配列であるか、あるいはアミノ酸の欠失及び／または挿入及び／または置換が存在する改変されたタンパク配列である。組換え手段により天然のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクが生成される場合は、それが本来結合している他のタンパク及び／または糖タンパクを実質的に含まないものが得られる。あるいは、固相支持体上での所望の配列のポリペプチドの合成とその後の支持体からのその分離のための方法がよく知られている。さらに別の形態においては、本発明はPTP-Dタンパクまたは糖タンパクのフラグメントを提供する。「フラグメント」の用語は、天然のタンパク配列を有する PTP-Dタンパクまたは糖タンパクから、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードするDNA配列を適当に改変し、Ｃ末端、Ｎ末端及び本来の（native）配列内の１以上の部位において１以上のアミノ酸の欠失を起こすことにより誘導されたポリペプチドを示すのに使用される。PTP-Dタンパクまたは糖タンパクのフラグメントは、拮抗物質または作用物質（以下に定義する）である化合物のスクリーニングに有用である。そのようなPTP-Dタンパクまたは糖タンパクのフラグメントは、本来のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの特徴的な部分を保持し得ることが理解されるであろう。特に、そのようなPTP-Dタンパクまたは糖タンパクのフラグメントは、完全な（i ntact）PTP-Dタンパクまたは糖タンパクに特徴的な１以上の生物学的活性あるいは機能を保持しているべきである。いかなる意味においても特許を請求する本発明の範囲を制限することを意図するものではないが、PTP-Dフラグメントの例は、ａ）触媒ドメイン、ｂ）完全な細胞において他の分子と相互作用するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクのドメイン、ｃ）PTP-Dの制御部分である。さらに別の形態においては、本発明は、天然のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクから、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードするDNA配列を適当に改変し、Ｃ末端、Ｎ末端及び本来の配列内の１以上の部位において１以上のアミノ酸の付加を起こすことにより誘導された、追加のアミノ酸を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを提供する。このような追加のアミノ酸を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、本来のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの特徴的な部分を保持し得ることが理解されるであろう。特に、そのような追加のアミノ酸を有する PTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、完全なPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに特徴的な１以上の生物学的活性あるいは機能を保持しているべきである。少なくともその１つが保持されるべきそのような特徴の例は、ａ）触媒活性、ｂ）基質特異性、ｃ）完全な細胞における他の分子との相互作用、ｄ）PTP-Dの制御機能である。これらの例は、いかなる意味においても特許を請求する本発明の範囲を制限することを意図するものではない。さらに別の形態においては、本発明は、天然のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクから、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードするDNA配列を適当に改変し、または変異させることにより、Ｃ末端、Ｎ末端及び本来のアミノ酸配列内の１以上の部位において１以上のアミノ酸の置換を起こすことにより誘導された、置換されたアミノ酸を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを提供する。このような置換されたアミノ酸を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの特徴的な部分を保持し得ることが理解されるであろう。特に、そのような置換されたアミノ酸を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、完全なPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに特徴的な１以上の生物学的活性あるいは機能を保持しているべきである。少なくともその１つが保持されるべきそのような特徴の例は、ａ）触媒活性、ｂ）基質特異性、ｃ）完全な細胞における他の分子との相互作用、ｄ）PTP-Dの制御機能である。これらの例は、いかなる意味においても特許を請求する本発明の範囲を制限することを意図するものではない。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせも、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの最終構築物に到達するために使用することができるが、ただし最終構築物が完全なPTP-Dタンパクまたは糖タンパクにおいて存在する所望の活性または機能を有することが条件である。そのような活性及び機能の例は、ａ）触媒活性、ｂ）基質特異性、ｃ）インビトロ及びインビボにおける他の分子との相互作用、ｄ）制御機能である。任意の欠失、挿入、及び置換の組み合わせの後に、そのような活性または機能のただ１つが保持されている必要がある。これらの例は、いかなる意味においても特許を請求する本発明の範囲を制限することを意図するものではない。もちろん、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードするDNAにおいてなされる改変または変異はリーディングフレームを変更するものであってはならず、好ましくは、二次mRNA構造を生成し得る相補的な領域を生成しないものである（ヨーロッパ特許公告第75,444号を参照されたい）。遺伝子レベルにおいては、これらのアミノ酸の欠失、及び／または挿入、及び／または置換を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、通常は前記ペプチド分子をコードするDNA中のヌクレオチドの特定部位の突然変異誘発（Adelmanら， DNA 2:183（1983）により例示されたような）により調製され、これによりPTP-D タンパクまたは糖タンパクをコードするDNAが生成され、その後組換え細胞培養物中で該DNAを発現する（下記を参照）。アミノ酸の欠失及び／または挿入及び／または置換を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、典型的には、本来のP TP-Dタンパクまたは糖タンパクと同じ性質の生物学的活性を示す。あるいは、アミノ酸の欠失及び／または挿入及び／または置換を有するPTP-D タンパクまたは糖タンパクは、当分野でよく知られた方法を用いて、直接の化学的合成により調製される。さらに別の形態においては、本発明は、１以上の特定のアミノ酸配列がPTP-D タンパクまたは糖タンパクからの相同配列により置き換えられた、他のPTPアーゼからなるいわゆるキメラ分子を提供する。キメラ分子としては、例えば、PTP- Dタンパクまたは糖タンパクの部分上にグラフトされた別のPTPアーゼからのリガンド結合細胞外領域を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクが含まれる。その他のキメラ分子を以下に挙げる。ａ）ホスファターゼ触媒ドメインがPTP-Dタンパクからのホスファターゼ領域により置き換えられたその他のPTPアーゼ。この場合、好ましいアミノ酸数は220〜260である。ｂ）触媒ドメインの１以上の部分が他のPTPアーゼからの相同部分により置き換えられたPTP-Dタンパクまたは糖タンパク。ｃ）１以上の部分が、１の（またはそれ以上の）PTP-Dサブファミリーの他のメンバーからの相同部分により置き換えられた、PTP-Dサブファミリーのメンバーからなるキメラ分子。「相同配列」は、一次配列中に同様に位置し、配列の相同性を示す、２以上の PTPアーゼ中の配列として定義される。「相同配列」は高い相同度を有する場合のみに限定されるものではないことが強調されるべきである。キメラ分子は、構造−機能の関連の解明及び特定の化合物（薬剤）を同定するための重要な道具である。従って、最も有用なキメラは、常にではないが多くの場合、１つの分子のある部分が、同様に位置するが異なるものである、そうでなければ相同な分子である他の分子からの配列によって置き換えられている分子である。従って、交換された部分がそれらが最も異なる分子の部分を表すことがかなり多いであろう。 PTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、通常はPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの部分ではない追加的な化学的部分を含んでいてもよい。共有結合により改変を生起することも本発明の範囲内である。そのような改変は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの標的とされるアミノ酸残基を、選択された側鎖または末端残基と反応できる有機誘導化剤と反応させることによって、PTP-Dタンパクまたは糖タンパク中に導入することができる。システイニル残基は、最も一般的にはα−ハロアセテート類（及び対応するアミン）、例えばクロロ酢酸またはクロロアセトアミドと反応させ、カルボキシルメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を得る。システイニル残基はまた、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β-（５-イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ-アルキルマレイミド、３-ニトロ-２-ピリジルジスルフィド、メチル２-ピリジルジスルフィド、ｐ-クロロメルクリベンゾエート、２-クロロメルクリ-４-ニトロフェノール、またはクロロ-７-ニトロベンゾ-２-オキサ-１,３-ジアゾールとの反応により誘導化される。ヒスチジル残基は、ジエチルプロカーボネートとのpH 5.5-7.0での反応により誘導化され、これはこの物質がヒスチジル側鎖に比較的特異性を有するからである。ｐ-ブロモフェナシルブロミドも有用であり、反応は好ましくは0.1Mカコジル酸ナトリウム中、pH 6.0で行われる。リシニル及びアミノ末端残基は、コハク酸またはその他のカルボン酸無水物と反応させられる。これらの物質による誘導化は、リシニル残基の電荷に影響を与えるか、あるいは逆転させる。α−アミノ含有残基の誘導化に適当なその他の試薬としては、メチルピコリンイミデートのようなイミドエステル、リン酸ピリドキサール、ピリドキサール、クロロボロハイドライド、トリニトロベンゼンスルホン酸、０-メチルイソ尿素、２,４-ペンタンジオン等が含まれ、トランスアミナーゼにより触媒されるグリオキシレートとの反応も含まれる。アルギニル残基は、１またはいくつかの慣用の試薬、中でもフェニルグリオキサール、２,３-ブタンジオン、１,２-シクロヘキサンジオン、及びニンヒドリンとの反応により改変される。アルギニン残基の誘導化は、グアニジン官能基の高いpKaのために反応がアルカリ条件下で行われる必要がある。さらにこれらの試薬はアルギニンのε−アミノ基とともにリジンの基とも反応する。チロシル残基自体の特定の改変については、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によりチロシル残基にスペクトル標識を導入することの重要性をもって、充分に研究された。最も通常には、Ｎ-アセチルイミジゾール及びテトラニトロメタンを使用して、それぞれ０-アセチルチロシル類及び３-ニトロ誘導体を形成する。カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）はカルボジイミド（R’- N-C-N-R’）、例えば１-シクロヘキシル-３-（２-モルホリニル-（４-エチル）カルボジイミドまたは１-エチル-３-（４-アゾニア-４,４-ジメチルペンチル）カルボジイミドとの反応により選択的に改変される。さらに、アスパルチルまたはグルタミル残基はアンモニウムイオンとの反応によりアスパラギニル及びグルタミニル残基に変換される。グルタミニル及びアスパラギニル残基はしばしば対応するグルタミル及びアスパルチル残基に脱アミド化される。あるいは、これらの残基は弱酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も本発明の範囲にあるものである。２官能物質による誘導化は、ぺプチドを非水溶性支持体マトリックスまたはその他の高分子キャリアに架橋するのに有用である。通常に使用される架橋剤としては、例えば、１,１-ビス（ジアゾアセチル）-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシサクシンイミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸とのエステル、３,３’-ジチオビス（サクシンイミジルオプロピオネート）のようなジサクシンイミジルエステルを含むホモ２官能イミドエステル、ビス−Ｎ− マレイミド−１,８−オクタンのような２官能マレイミドが挙げられる。メチル −３−［ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートのような誘導化剤は、光の存在により架橋を形成することができる、光活性化中間体を生成する。あるいは、例えば臭化シアン活性化炭水化物及び米国特許第3,969,287号、3,691,0 61号、4,195,128号、4,247,642号、4,229,537号及び4,330,440号に記載された反応性基体がタンパク固定化に使用される。その他の改変としては、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のホスホリル化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Creighton，T.E.，Proteins： Struct ure and Molecule Properties，W.H.Freeman & Co.，San Francisco，pp．79-86 （1983））、Ｎ-末端アミンのアセチル化、そしてある場合にはＣ-末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。このような誘導化部分は溶解度、吸収、生物学的半減期等を改善し得る。あるいは、これらの部分はタンパクの望ましくない副作用等を除去または低減し得る。このような効果を媒介し得る部分は、例えば、Remington's Pharmaceutical S cience.， l6th ed.，Mack Pubulishing Co.，Easton，PA（1980）に開示されている。さらに別の形態においては、本発明は、図１及び２にそれぞれ示したように、 PTP-D1またはPTP-D2のアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を示す領域を有する上記に定義したPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに関する。PTP-D1及びPTP-D2 は、ヒト骨格筋で発現されるPTP-DサブファミリーのメンバーであるPTP-Dタンパクである。また別の形態においては、本発明はPTP-D1またはPTP-D2を含むPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに関する。 PTP-Dサブファミリーのメンバー、PTP-D1及びPTP-D2は、ヒト骨格筋で発現されることが示された。従って、本発明は、いかなる意味においても限定するものではないが、この組織で発現されるPTP-D1及びPTP-D2のPTP-Dサブファミリーのそのようなメンバーに関するものである。また別の形態においては、本発明は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードする、あるいはアミノ酸欠失及び／または挿入及び／または置換を有するPTP- Dタンパクまたは糖タンパクをコードするヌクレオチド配列を含む核酸構築物に関する。本発明はさらに、発現ベクター、例えば組換え発現べクター、並びに該発現ベクターを含む原核生物及び真核生物宿主細胞の形態の前記核酸配列にも関する。さらに別の本発明の形態においては、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸構築物の発現方法が提供される。PTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、そのようなPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの発現の助けとなる条件下に適当な栄養培地中で細胞を培養することにより生産できる。当分野の通常の技術を有する者であれば、本発明の核酸構築物及びオリゴヌクレオチドを用いて過度な実験をすることなく、本明細書に記載したPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに配列相同性を有する、ヒトまたはその他の哺乳類の追加的なPTP-Dタンパクまたは糖タンパクをどのようにして同定しクローン化するかは理解するであろう。さらに、本発明の核酸を操作することにより、特定のPTPアーゼからの特定のリガンド結合細胞外領域をPTP-Dタンパクまたは糖タンパク上にグラフトし、キメラPTP-D タンパクまたは糖タンパクを得ることが可能である。そのようなキメラ分子の非限定的な例は、表皮細胞成長因子レセプター、繊維芽細胞成長因子レセプター等である、リガンド結合細胞外領域を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを含む。遺伝子工学的に作成されたキメラレセプターは当分野で知られている（例えば、Riedelら，Nature 324:628-670（1986）を参照）。 PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸構築物、及びアミノ酸欠失及び／または挿入及び／または置換を有するPTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸構築物、及び例えば上記したようなキメラPTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードする核酸構築物は遺伝子治療に使用し得る。疾病を引き起こす異常なあるいは機能不全のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを、正常なPTP-Dタンパクまたは糖タンパクをトランスフェクトされた所望の系統の細胞（例えば造血細胞）を注入することにより置き換えることができる。あるいは、または追加的に、特別のリガンド（例えばEGF）に対するレセプターを有するキメラPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを有する細胞をそのような遺伝子治療に使用することができる。本発明の組換えDNA分子である核酸構築物は、種々の手段の任意のもの、例えばDNAまたはRNA合成、あるいはより好ましくは、組換えDNA法を通して生産することができる。そのような分子を合成する技術は、例えば、Wuら（Prog．Nucl． Acid．Res．Molec．Biol．21:101-141（1978））に開示されている。上記の方法による組換え分子を構築する手順は、Sambrookら，Molecular Cloning: A Labor atory Manual， Second Edition， Cold Spring HarborPress，Cold Spring Har bor，NY（1989）に開示されている。本発明の組換えDNA分子の３’末端は、好ましくは重合に適さないようにするために処理されている。このような処理は、末端を化学的手段によりブロックするか、末端塩基をポリメラーゼ作用を立体的に妨害するように改変することにより達成できる。好ましい態様においては、そのような処理は、例えば３’末端を固体支持体（例えばガラス、プラスチック、ラテックス等）に結合することによりそれを固定することにより達成される。支持体は、任意の形態（例えば、シート、ロッド、球、卵形体等）のものでよい。そのような固定の手順は当業者によく知られている。最も好ましい態様においては、組換えDNA分子の３’末端は、固体支持体に共有結合により結合されている。スペーサ領域を用いて固体支持体から外側にプローブを延長することができるが、（１）それが組換え分子の機能あるいは特徴のいずれをも立体的に妨害せず、（２）スペーサ領域の配列がアッセイのハイブリダイゼーションあるいは重合反応に参加しない範囲のものでなければならない。典型的には、いくつかの、そして好ましくは多数のそのような組換えDNA分子を支持体に固定するのが望ましい。 PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの部分を示すオリゴヌクレオチドは、そのようなPTP-Dタンパク及び糖タンパクをコードする遺伝子の存在のスクリーニング、及びPTP-D遺伝子のクローニングに有用である。そのようなオリゴヌクレオチドを合成する技術については、例えばWuら（上出）に開示されている。タンパク分子は、臭化シアンにより、あるいは例えばパパイン、キモトリプシン、トリプシン等のようなプロテアーゼによりフラグメント化される（Oikeら， J．Biol．Chem．257:9751-9758（1982）；Liuら，Int．J．Pept．Protein Res． 21:209-215（1983））。遺伝子コードは縮退しているため、１より多いコドンを特定のアミノ酸をコードするのに使用できる（Watson，J.D.，In: Molecular Bi ology of the Gene，4th Ed.，Benjamin/Cummings Publishing Co.， Inc.，Men lo Park，CA（1987））。遺伝子コードを用いて、１以上の異なるオリゴヌクレオチドを特定することができ、それぞれがアミノ酸をコードすることができるものである。特定のオリゴヌクレオチドが、実際に本当のＸＸＸコード配列を構成する可能性は、異常な塩基対形成の関係、及び真核生物において（特定のアミノ酸をコードするのに）特定のコドンが実際に使用される頻度を考慮することにより見積もることができる。そのような「コドン使用のルール」はLatheら，J．Molec．Biol．183:1-12（1985）に開示されている。Latheの「コドン使用のルール」を使用して、PTP-D配列をコードすることができる理論的な「最も可能性の高い」ヌクレオチド配列を含む、単一のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドのセットが特定される。アミノ酸配列が単一のオリゴヌクレオチドによりコードされ得ることもあるが、多くの場合はアミノ酸配列は類似したオリゴヌクレオチドのセットの任意のものによりコードされる。重要なことは、このセットのメンバーはペプチドフラグメントをコードすることができる複数のオリゴヌクレオチドを含み、従ってそのペプチドフラグメントをコードする遺伝子と同一のオリゴヌクレオチドを配列を含む可能性があるが、そのセットのただ１つのメンバーが前記遺伝子のヌクレオチド配列に同一のヌクレオチド配列を含むということである。このメンバーはセット中に存在し、セットの他のメンバーの存在下においてもDNAとハイブリダイズできるので、単一のオリゴヌクレオチドを使用して前記ペプチドをコードする遺伝子をクローン化するのと同じ方法において、分別されていないオリゴヌクレオチドのセットを使用することが可能である。 PTP-Dフラグメントをコードすることができる、理論的に「最も可能性の高い」配列を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセットは、その「最も可能性の高い」配列または配列のセットにハイブリダイズすることができる相補的なオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセットの配列を同定するのに使用される。そのような相補的な配列を含むオリゴヌクレオチドはPTP-D遺伝子を同定し単離するためのプローブとして使用することができる（Sambrookら、上出）。 PTP-D遺伝子のフラグメントをコードすることができる、適当なオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセット（またはそのようなオリゴヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドのセットに相補的なもの）は、（上記に記載した方法を用いて）同定され、合成され、当分野でよく知られた手段により、PTP-D 遺伝子を発現することができる細胞に由来するDNA、またはより好ましくはcDNA 調製物に対してハイブリダイズされる。当分野の通常の技術者によく知られた手順を用いて、「最も可能性の高い」PTP-Dペプチドコード配列に相補的な単鎖オリゴヌクレオチド分子を合成することができる（Belagajeら，J．Biol．Chem．2 54:5765-5780（1979）；Maniatisら，In: Molecular Mechanisms in the Contro l of Gene Expression，Nierlichら Ed.，Acad．Press NY（1976）；Wu ら，P rog．Nucl．Acid Res．Molec．Biol．21:101-141 （1978）；Khorana，R.G.，Sc ience 203:614-625（1979））。さらに、DNA合成は自動化合成機を使用して達成することができる。核酸ハイブリダイゼーションの技術はSambrookら（上出）及びHaymesら，（Nucleic Acid Hybridization，A Practical Approach，IRL Pres s，Washington，DC（1985））により開示されている。これらの引用文献は引用により本明細書の一部とする。上記に記載されたような、あるいはそれと類似した技術により、ヒトアルデヒドデヒドロゲナーゼ（Hsuら，Proc．Natl．Acad．S ci．USA 82:3771-3775（1985））、フィブロネクチン（Suzuki ら，EMBO J． 4:2519-2524（1985））、ヒトエストロゲンレセプター遺伝子（Walter ら，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 82:7889-7893（1985））、組織型プラスミノーゲンアクチベータ（Pennicaら，Nature 301:214-221（1983））、及びヒト分娩期胎盤アルカリホスファターゼ相補DNA（Kamら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 82:8715 -8719（1985））について遺伝子のクローン化が成功裏に可能となっている。 PTP-D遺伝子のクローン化の１つの代替的な方法においては、DNAまたはより好ましくはcDNA（PTP-Dを発現することができる細胞からのもの）を発現ベクター中にクローン化することにより、発現ベクターのライブラリーを生成する。そしてこのライブラリーを抗PTP-D抗体に結合するタンパクを発現することができるメンバーについてスクリーニングし、そしてこれがPTP-Dまたはそのフラグメントと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができるヌクレオチド配列を有するものである。この態様においては、PTP-Dタンパクを発現できる細胞からDNAまたはより好ましくはcDNAを抽出し、精製する。精製されたcDNA をフラグメント化し（剪断、エンドヌクレアーゼ消化等により）、DNAまたはcDN Aフラグメントのプールを生成する。次にこのプールからのDNAまたはcDNＡフラグメントを発現ベクター中にクローン化し、そのメンバーのそれぞれが単一のクローン化DNAまたはcDNAフラグメントを含む発現ベクターのゲノムライブラリーを生成する。「発現ベクター」とは、そのベクター中にクローン化されたDNA（またはcDNA ）分子を発現でき（適当な転写及び／または翻訳制御配列の存在により）、そしてそれによりポリペプチドまたはタンパクを生成することができるベクターである。クローン化配列の発現は、発現ベクターが適当な宿主細胞に導入されたときに起こる。原核生物発現ベクターを使用した場合は、適当な宿主細胞はそのクローン化配列を発現できる任意の原核細胞である。同様に、真核発現ベクターを使用した場合は、適当な宿主細胞はそのクローン化配列を発現できる任意の真核細胞である。重要なことは、真核生物 DNAは介在配列を含み得、そのような配列は原核生物細胞中で正確にプロセシングされ得ないので、PTP-Dを発現することができる細胞からのcDNAを使用して原核生物ゲノム発現ベクターライブラリーを形成することが好ましい。cDNAを調製し、ゲノムライブラリーを生成する手順については、Sambrookら（上出）に開示されている。本発明のPTP-Dタンパクまたは糖タンパク、あるいはアミノ酸欠失及び／または挿入及び／または置換を有する本発明のPTP-Dタンパクまたは糖タンパク、あるいは本発明のキメラ分子をコードするDNA配列は、結合のためのブラントエンドもしくはスタガードエンド（staggered ended）末端、適当な末端を与えるための制限酵素消化、接着末端の適当な充填、望ましくない結合を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、及び適当なリガーゼによる結合を含む慣用の技術により、ベクターDNAと組換えることができる。そのような操作のための技術については、Sambrookら（上出）に開示されており、当分野でよく知られている。例えばDNAのような核酸構築物は、それが転写及びまたは翻訳制御情報を含むヌクレオチド配列を含み、そのような配列がポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に「制御可能なように結合している（operably linked）」場合、ポリペプチドを「発現できる」という。制御可能な結合とは、制御DNA配列と発現が望まれるDNA配列が、遺伝子発現を可能とするように連結されている結合である。遺伝子の発現に必要な制御領域の詳細な性質は生物により変化し得るが、一般的には、プロモーター領域を含み、原核生物においてはそれがプロモーター（RNA転写の開始を指示する）と、RNA中に転写されたときにタンパク合成の開始の信号を発するDNA配列とを含む。そのような領域は、転写及び翻訳の開始に関与する５’-非コード配列、例えばTATA ボックス、キャップ配列、CAAT配列等を通常含んでいる。所望ならば、非コード領域３’からタンパクをコードする遺伝子配列までを上記の方法により得ることができる。この領域はその転写終結制御配列のために、例えば終結及びポリアデニル化のために保持されている。従って、通常はタンパクをコードするDNA配列に隣接する３’-領域を保持することにより、転写終結シグナルが与えられる。発現宿主細胞において転写終結シグナルが充分に機能しない場合には、宿主細胞中で機能する３’領域を置換することができる。２つのDNA配列（例えば、プロモーター領域配列及びPTPアーゼコード配列）は、その間の結合の性質が、（１）フレームシフト変異の導入を生起せず、（２）プロモーター領域配列の、PTP-D遺伝子配列の転写を指示する能力を妨害せず、あるいは（３）PTP-D遺伝子の、プロモーター領域配列により転写される能力を妨害しないものである場合に、制御可能なように結合しているという。プロモーターがDNA配列の転写を行うことができる場合は、そのプロモーター領域が前記DNA配列に制御可能なように結合していることになる。このように、タンパクを発現するためには、適当な宿主により認識される転写及び翻訳シグナルが必要である。プロモーターは、RNAポリメラーゼを結合し、「制御可能なように結合した」核酸配列の転写を促進することができる、二本鎖DNAまたはRNA分子である。本明細書で使用するように、「プロモーター配列」とは、RNAポリメラーゼにより転写されるDNAまたはRNAの鎖（strand）上に見られるプロモーターの配列である。「プロモーター配列相補体（complement）」とは、その配列が「プロモーター配列」の相補体である核酸分子である。従って、単鎖「プロモーター配列相補体」に隣接するプライマーDNAもしくはRNA、または「プロモーター配列」の延長に際して、その延長が「プロモーター配列」または「プロモーター配列相補体」に向かって進行する場合、機能的なプロモーターを含む二本鎖分子が形成される。この機能的なプロモーターは、「プロモーター配列」を含む二本鎖分子の鎖（「プロモーター配列相補体」を含む前記分子の鎖ではなく）に制御可能なように結合した核酸分子の転写を指示する。ある種のRNAポリメラーゼはそのようなプロモーターに対して高い特異性を示す。バクテリオファージT7、T3及びSP-6のRNAポリメラーゼは特によく特性化されており、高いプロモーター特異性を示す。これらのRNAポリメラーゼのそれぞれに特異的なプロモーター配列はまた、ポリメラーゼに二本鎖DNA鋳型の２つの鎖の１つの鎖のみを利用すること（即ち転写すること）を指示する。どちらの鎖を転写するかの選択は、プロモーター配列の向きによって決定される。RNAはヌクレオチド５’ホスフェートの３’ヒドロキシル末端への付加によってのみ酵素的に重合するので、上記の選択が転写の方向を決定するのである。核酸分子の２つの配列は、両方の配列が同じRNA転写物に転写されることを可能とするような形、あるいは第２の配列へ延長されるような１つの配列から始まるRNA転写物を可能とするような形のいずれかで互いに結合している場合に、それらは「制御可能なように結合している」という。従って、プロモーター配列及びその他の任意のDNAまたはRNAの「第２の」配列のような２つの配列は、プロモーター配列において開始された転写が制御可能なように結合した第２の配列のRN A転写物を生成する場合に、制御可能なように結合しているものである。「制御可能なように結合する」ためには、２つの配列が互いに直接隣接している必要はない。このように、プロモーターとして機能するためには、上記したように、プロモーター配列は二本鎖分子として存在しなければならない。本発明の目的においては、機能的プロモーター配列の２つの鎖は、「転写」鎖及び「相補」鎖と指称する。「転写」鎖は、二本鎖の、RNAポリメラーゼにより転写される（即ち、転写の鋳型として働く）鎖である。「相補」鎖は、「転写」鎖に相補的な配列を有し、転写が起こるために存在し「転写」鎖にハイブリダイズしなければならない鎖である。従って、プロモーター配列の「転写」鎖が第２の配列に制御可能なように結合している場合は、「転写」鎖の「相補」鎖とのハイブリダイゼーションは、ポリメラーゼの存在下、「転写」鎖の転写を与え、「転写」鎖の配列を鋳型として使用してRNA転写物を生成する。本発明のプロモーター配列は、原核生物、真核生物またはウィルスのものであってよい。適当なプロモーターは抑制可能なもので、より好ましくは構成的なものである。適当な原核生物プロモーターの例は、T4（Malikら，J．Biol．Chem． 263:1174-1181（1984）;Rosenbergら，Gene 59: 191-200（1987）;Shinedlingら，J．Molec．Biol．195;471-480（1987）; Huら，Gene 42:21-30（1986））、T3 、Sp6及びT7（Chamberlinら，Nature 228:227-231（1970）；Bailey ら，Proc． Natl．Acad．Sci．（U.S.A.）80:2814-2818（1983）；Davanlookら，Proc．Natl ．Acad．Sci．（U.S.A.）81:2035-2039（1984））ポリメラーゼを認識できるプロモーター、バクテリオファージλのＰ_R及びＰ_Lプロモーター（The Bacterioph arge Lambda，Hershey，A.D.，Ed.，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring H arbor，NY（1973）；Lambda II，Hendrix，R.W.， Ed.，Cold Spring Harbor Pr ess，Cold Spring Harbor，NY（1980））、E．coliのtrp、 recA、熱ショック、及びlacZプロモーター、B．subtilisのα−アミラーゼ（Ulmanenら，J．Bacteri ol．162:176-182(1985））及びζ-28特異性プロモーター（Gilmanら，Gene 32:1 1-20（1984））、Bacillusのバクテリオファージのプロモーター（Gryczen，T.J .，In: The Molecular Biology of the Bacilli，Academic Press，Inc.，NY（1 982））、Streptomycesプロモーター（Wardら，Mol．Gen．Genet．203:468-478 （1986））、バクテリオファージλのintプロモーター、pBR322のβ-ラクタマーゼ遺伝子のblaプロモーター、及びpBR325のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のCATプロモーター等である。原核生物プロモーターは、Glick，B.R.（J．Ind．Microbiol．1:277-28 8（1987）；Cenatiempo，Y．（Biochimie 68:505-516（1986））；Watsonら（In ：Molecular Biology of the Gene，Fourth Edition，Benjamin Cummings，Menl o Park，CA（1987））及びGottesman，S．（Ann．Rev．Genet．18:415-442（198 4））により概観されている。好ましい真核生物プロモーターとしては、マウスメタロチオネインＩ遺伝子のプロモーター（Hamerら，J．Mol．Appl．Gen 1:273 -288（1982））、SV40初期プロモーター（Benoistら，Nature（London）290:304 -310（1981））、及び酵母gal4遺伝子プロモーター（Johnstonら，Proc．Natl． Acad．Sci．（USA）79:6971-6975（1982）；Silverら，Proc．Natl．Acad．Sci ．（USA）81:5951-5955（1984））等が挙げられる。上記の引用文献の全ては引用により本明細書の一部とする。強力なプロモーターが好ましい。そのような好ましいプロモーターの例は、T3 、SP6及びT7ポリメラーゼを認識するもの、マウスメタロチオネインＩ遺伝子のＰ_Lプロモーターである。PTP-Dの真核生物発現のための最も好ましいプロモーターは、pLSVベクター中で転写を誘導するもののようなSV40プロモーター（Livneh ら，（1986）J．Biol．Chem．261，12490-12497）である。そのようなポリメラーゼ認識部位の配列は、Watsonら（Molecular Biology of the Gene，Fourth Ed ition，Benjamin/Cummings Publishing Co.，Inc．Menlo Park，CA，（1987））により開示されている。さらに別の形態においては、本発明は、PTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、またはPTP-Dタンパクもしくは糖タンパクのエピトープを特異的に認識できる抗体に関する。組換えにより発現された、あるいは天然のPTP-Dタンパクまたは糖タンパク、及び／またはPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを認識する抗体は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの異常な発現または活性化を伴う疾病または症状を診断する方法に使用することができる。本発明は、患者における正常あるいは変異体PTP-D タンパクまたは糖タンパクの存在及びレベルを測定する方法を提供する。個体におけるPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの不存在、もしくはより典型的には低い発現、または変異体PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの存在は、腫瘍形成性形質転換に対する感受性及び癌の進行の重要な予測指標となり得る。あるいは、おそらくはネガティブ制御に非感受性の変異体レセプター／酵素系、もしくは体内の剌激性リガンドの過剰によるものである、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの過剰発現は、糖尿病に対する感受性の重要な予測指標となり得る。本発明は、そのような抗体の、細胞、細胞もしくは組織抽出物、または生物学的流体中の、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの存在を検出するための、またはその量もしくは濃度を測定するための使用にも係わる。１つの形態においては、本発明は、（ａ）細胞またはその抽出物を、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクのエピトープに特異的な抗体に接触させ、（ｂ）前記抗体の前記細胞またはその抽出物に対する結合を検出するか、あるいは結合した抗体の量を測定し、それにより前記PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの存在を決定し、またはその量を測定することを含む、細胞中のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの存在を検出するための、またはその量を測定するための方法に係わる。「抗体」の用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（mAbs）、キメラ抗体、及び抗イディオタイプ（抗Id）抗体を含むことを意図するものである。ポリクローナル抗体は、抗原により免疫された動物の血清から得られた抗体分子の不均質な集合である。モノクローナル抗体（mAbs）は、特定の抗原に対する抗体の実質的に均質な集合である。mAbsは、当分野の技術者に知られた方法により得られる。例えば、Ko hlerら，Nature 256:495-497（1975）及び米国特許第4,376,110号を参照されたい。このような抗体は、IgG、IgM、IgE、IgA、GILD及びその任意のサブクラスを含む、任意の免疫グロブリン種のものであってよい。本発明のmAbsを生成するハイブリドーマはインビトロまたはインビボにおいて培養できる。mAbsのインビボ生産における高力価の生産は、これを現在のところ好ましい生産方法としている。簡単にいえば、個々のハイブリドーマからの細胞をプリスタン活性化BALB/cマウスに腹腔内注射し、高い濃度の所望のmAbsを含む腹水液を生成するものである。イソタイプIgMまたはIgGのmAbsは、そのような腹水液から、または培養物上清から、当分野の技術者によく知られたカラムクロマトグラフィー法により精製できる。キメラ抗体とは、マウスＭＡｂ由来の可変領域とヒト免疫グロブリン定常部を持つもののような、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体およびその生産方法は当業界において公知である（Cabillyら，Proc．Natl．A cad．Sci．USA 71:3273-3277（1984）；Morrisonら，Proc．Natl．Acad．Sci．U SA81:6851-6855（1984）；Boulianne ら，Nature 312:643-646（1984）；Cabill yら，欧州特許出願125023（1984年、11月14日公開）；Neubergerら，Nature 314 :268-270（1985）；Taniguchiら，欧州特許出願171496（1985年、2月19日公開） ; Morrisonら、欧州特許出願173494（1986年、3月5日公開）; Neubergerら，PCT 出願WO86/01533（1986年、3月13日公開）; Kudoら、欧州特許出願184187（1986 年、6月11日公開）; Sahaganら，J．Immunol．137:1066-1074（1986）; Robinso nら，国際特許公報#PCT/US86/002269（1987年5月7日公開）; Liuら，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 84:3439-3443（1987）; Sun ら，Proc．Natl．Acad．Sci．US A 84：214-218（1987）; Betterら，Science 140:1041-1043（1988））。これらの文献は参考のため本明細書に組み込むこととする。抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体とは、抗体の抗原結合部位に通常結合する特有の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄ抗体は、ｍＡｂの供給源としての同じ種および遺伝子型（例えば、マウス系）の動物を抗Ｉｄを製造すべきｍＡｂで免疫感作することによって製造することができる。この免疫感作された動物は、これらのイディオタイプ決定基に対する抗体（抗Ｉｄ抗体）を産生することにより、その免疫感作する抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これに対して応答するであろう。この抗Ｉｄ抗体を“免疫原”として使用して、また別の動物における免疫応答を誘導して、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生させてもよい。この抗抗Ｉｄのエピトープは、抗Ｉｄを誘導したもとのｍＡｂのそれと同一かもしれない。かくして、ｍＡｂのイディオタイプ決定基に対する抗体を用いることにより、同じ特異性の抗体を発現する他のクローンを同定することが可能である。従って、本発明のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに対して産生されたｍＡｂを使用して、BALB/cマウスのような適当な動物に抗Ｉｄ抗体を誘導しうる。そのような免疫感作されたマウス由来の脾臓細胞を使用して、抗ＩｄｍＡｂを分泌する抗Ｉｄハイブリドーマを生産する。さらに、この抗ＩｄｍＡｂをキーホールリンペットへモシアニン（ＫＬＨ）のような担体に結合させ、別のBALB/cマウスを免疫感作するのに使用することができる。これらのマウス由来の血清は、PTP-D エピトープに対して特異的なもとのｍＡｂの結合性を有する抗抗Ｉｄ抗体を含有するであろう。このように抗ＩｄｍＡｂは、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクのような評価されるエピトープと構造的に類似するそれら自身のイディオタイプエピトープすなわち“イディオトープ”を有する。 “抗体”という用語は、無傷の分子の他、（抗原と結合することができる、例えばFabおよびF（ab'）₂のような）そのフラグメントの両方を含むことも意味している。FabおよびF（ab'）₂フラグメントは無傷の抗体のFcフラグメントを欠き、循環からより迅速に除去され、無傷の抗体より非特異的組織結合が少ないかもしれない（Wahlら，J．Nucl．Med．24:316-325（1983））。本発明において有用なFabおよびF（ab'）₂ならびに前記抗体の他のフラグメントを、無傷の抗体分子について本明細書に開示した方法に従って、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの検出および定量に使用しうる。そのようなフラグメントは、典型的には、（Fab フラグメントを生産するには）パパインまたは(F(ab')₂フラグメントを生産するには）ペプシンのような酵素を用いるタンパク質分解切断により生産される。本発明において有用な前記の抗体、または抗体のフラグメントを使用して、PT P-D タンパクまたは糖タンパクを発現する細胞の存在を定量的あるいは定性的に検出しうる。これは、光学顕微鏡、フローサイトメトリーまたは蛍光定量法による検出とカップルさせた蛍光標識抗体（以下を参照）を用いる免疫蛍光法技術により達成することができる。本発明において有用な前記の抗体（またはそのフラグメント）を、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクのin situ検出のために、免疫蛍光法または免疫電子顕微鏡法におけるように組織学的に用いてもよい。In situ検出は、患者から組織学的検体を取り出し、そのような検体に本発明の標識抗体を供給することにより達成されうる。前記抗体（またはそのフラグメント）は、標識抗体（またはフラグメント）を生物学的試料に適用するか、あるいは、重層することにより、供給されることが好ましい。そのような手法を用いることにより、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの存在のみならず、検査される組織におけるその分布も測定することが可能である。本発明を用いて、当業者は、多様性に富む（染色法のような）いずれの組織学的方法も、そのようなin situ検出を達成するために改変できることを容易に理解するであろう。PTP-D タンパクまたは糖タンパクのそのようなアッセイは、典型的には、生物学的液、組織抽出物、リンパ球や白血球のような新たに回収した細胞、または組織培養でインキュベートした細胞のような生物学的試料を、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクを同定することができる検出可能に標識した抗体の存在下でインキュベートし、当業界で周知の多数の技術のいずれかで前記の抗体を検出することを含む。生物学的試料を、ニトロセルロースや、細胞、細胞粒子もしくは可溶性タンパク質を固定化することができる他の固体支持体のような固相支持体で処理してもよい。前記支持体をその後適当な緩衝液で洗浄し、次いで検出可能に標識された PTP-D特異的抗体による処理を行ってもよい。その後前記の緩衝液による固相支持体の二度目の洗浄を行い、未結合の抗体を除去してもよい。前記固体支持体上の結合した標識の量をその後常套手段により検出してもよい。 “固相支持体”には、抗原または抗体を結合することができるいかなる支持体も意図されている。周知の支持体または担体はガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、はんれい岩、および磁鉄鉱を含む。前記担体の性質は、本発明の目的により、ある程度可溶性であっても不溶性であってもよい。支持体材料は、結合した分子が抗原または抗体に結合できる限りは、実質的にいかなる可能な構造的形状を有してもよい。従って、支持体の形状は、ビーズのような球形、試験管の内部表面や棒の外部表面のような円筒形であってよい。あるいはまた、その表面はシートや試験片等のように平面であってもよい。好ましい支持体としては、ポリスチレンビーズが挙げられる。当業者は、抗体または抗原を結合するための多くの他の適当な担体を知っていたり、日常的な実験作業を用いることにより確定することができるであろう。ある多くの抗PTP-D抗体の結合活性は周知の方法に従って測定しうる。当業者は、日常的な実験作業を用いることにより、各測定のための効果的で最適なアッセイ条件を決定することができるであろう。特定の状況に慣例であったり、必要であるような、洗浄、攪拌、振盪、濾過等の他の工程を上記のアッセイに追加してもよい。 PTP-D特異的抗体を検出可能に標識することができる方法のひとつは、上記の抗体を酵素に結合させ、酵素免疫検定法（EIA）に使用することである。この酵素は、性質として、後に適当な基質に晒されると、例えば、分光光度法、蛍光測定法または視覚的手段により検出できる化学的部分を生成するような様式で、前記の基質と反応することとなる。抗体を検出可能に標識するために使用できる酵素としては、これらに限定されるわけではないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベーターガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。検出は、酵素に対する色素産生基質を用いる比色法により達成できる。また、検出は、基質の酵素反応の程度を同様に調製した標準品と視覚的に比較することによっても達成しうる。検出は多様な他のイムノアッセイのいずれかを用いても達成しうる。例えば、抗体または抗体フラグメントを放射性標識することにより、ラジオイムノアッセイ（RIA）を用いて、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクを検出することが可能である（例えば、Workら，Laboratory Techniques and Biochemistry in Molecular Biology，North Holland Publishing Company，New York，（1978）を参照されたいが、この文献は参考のため本明細書に組み込むものとする。）。放射性同位体は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターを用いるような手段やオートラジオグラフィーにより検出することができる。抗体を蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識した抗体を適当な波長の光に暴露すると、その後その存在は蛍光により検出できる。最もよく使用される蛍光標識化化合物は、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒドおよびフルオレサミン（fluorescamine）である。抗体は、¹⁵²Euやランタニド系の他のもののような蛍光発光金属を用いて検出可能に標識することもできる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ DTPA）やエチレンジアミン四酢酸（EDTA）のような金属キレート化基を用いて抗体に結合させることができる。抗体は、化学発光化合物にカップリングさせることにより検出可能に標識することもできる。化学発光標識した抗体の存在は、化学反応の経過中に生じるルミネセンスの存在を検出することにより、その後に測定される。特に有用な化学発光標識化化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、テロマテック（theromat ic）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびオキサレートエステルである。同様に、生物発光化合物を使用して本発明の抗体を標識してもよい。生物発光は、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を増加させる生物学的システムに見出される化学発光のひとつのタイプである。生物発光タンパク質の存在は、ルミネセンスの存在を検出することにより測定される。標識化のために重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびアエルオリン（aeluorin）である。また、本発明は、被検体における、PTP-Dタンパクもしくは糖タンパクをコードする核酸構築物、または、突然変異PTP-Dタンパクもしくは糖タンパクをコードする核酸構築物の存在を検出する方法であって、（ａ）前記被検体からの細胞またはその抽出物を、前記の正常または突然変異PT P-Dタンパクもしくは糖タンパクの少なくとも一部をコードするオリゴヌクレオチドプローブと、ハイブリダイズする条件下で接触させ、（ｂ）前記プローブの前記細胞の前記核酸へのハイブリダイゼーションを測定し、それにより前記核酸構築物の存在を検出することを含む前記の方法に関する。この方法は、工程（ａ）の前にさらなる工程（ｃ）を含んでもよい。工程（ｃ）は、前記PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードする前記細胞の核酸の量を選択的に増幅するものであり、それはポリメラーゼ連鎖反応によるものであってもよい。 PTP-Dタンパクまたは糖タンパク（上記を参照）の種々の部分をコードするオリゴヌクレオチドプローブを使用して、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクをコードするDNAまたはRNA配列の存在について被検体からの細胞を試験する。そのようなプローブを合成する技術は、例えば、Wuら，Prog．Nucl．Acid．Res．Molec． Biol．21:101-141（1978）により開示されている。好ましいプローブは、本発明のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの少なくとも４個のアミノ酸残基、好ましくは少なくとも５個のアミノ酸残基をコードする核酸配列（以下の実施例４を参照）に向けられたものであろう。そのようなプローブを用いて、定性的または定量的アッセイを行うことができる。例えば、ノーザン分析（以下の実施例３を参照）を用いて、細胞または組織標本中のPTP-D mRNA（例えば、PTP-D1 mRNAおよびP TP-D2 mRNA）の発現を測定する。そのような方法は、選択的な増幅技術の使用に続けば、一個体から得られた非常に少量のDNAについてさえ用いることができる。精製した核酸フラグメントを増幅することができる組換えDNAの方法論が長いこと認識されてきた。典型的には、そのような方法論には、核酸フラグメントのDNAまたはRNAベクターへの導入、そのベクターのクローン増幅、およびその増幅された核酸フラグメントの回収が含まれる。そのような方法論の例は、Cohenら（米国特許第4,237,224号）およびSambrookら（上記）により提供されており、これらの文献は参考のため本明細書に組み込むものとする。最近、そのような所望の核酸分子の濃度を増加することができるin vitroの酵素的方法が記載されている。この方法は、“ポリメラーゼ連鎖反応”または“ＰＣＲ”と称されている（Mullisら，Cold Spring Harbor Symp．Quant．Biol．51 :263-273（1986）;Erlich，EP 50，424; EP 84,796，EP 258,017，EP 237，362; Mullis，K.，EP 201,184; Mullis ら.，U.S.4,683,202; Erlich，H.，U.S. 4,5 82,788;およびSaikiら，U.S.4,683,194）。本発明は、また、化学的または生物学的標本におけるPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに結合できる化合物を同定する方法であって、（ａ）前記PTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、またはその化合物結合部分を固相マトリックスに結合させ、（ｂ）前記化合物が結合できるように、前記化学的または生物学的標本を前記固相マトリックスと接触させ、未結合の物質を洗い流し、（ｃ）前記固相に結合した前記化合物の存在を検出することを含む前記の方法に関する。本発明は、複合体混合物からPTP-Dタンパクまたは糖タンパクに結合できる化合物を単離する方法であって、（ａ）前記PTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、またはその化合物結合部分を固相マトリックスに結合させ、（ｂ）前記化合物が結合できるように、前記複合体混合物を前記固相マトリックスと接触させ、未結合の物質を洗い流し、（ｃ）前記の結合した化合物を溶離し、それにより前記化合物を単離することを含む前記の方法にも関する。 “PTP-Dタンパクまたは糖タンパクに結合できる化合物”とは、ホスファターゼドメインの触媒部位の外側でPTP-Dと相互作用する天然または合成的に製造された分子を意味する。“触媒部位”とは、ホスファターゼ活性を含むPTP-Dの最も小さい連続した部分を意味する。そのような化合物は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの酵素活性を直接的にあるいは間接的に調節しうる。そのような化合物の例は、（i）PTP-Dタンパクまたは糖タンパクと相互作用し、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクにより脱リン酸化されうる細胞内タンパク質、（ii）他の細胞型により産生される天然の分子である。 PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの“化合物結合部分”とは、触媒部位の外側にある分子の一部を意味する。触媒部位の部分でないPTP-Dタンパクまたは糖タンパクのいかなる部分も、化合物結合部分となりうる。“化合物結合部分”は、天然または組換え的に発現させたPTP-Dタンパクまたは糖タンパクから、タンパク質分解切断およびそれに続く当業者に公知の常套の精製手法により調製しうる。あるいはまた、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの化合物結合部分は、当業者に公知の組換え技術により、PTP-Dのこれらの部分のみを適当な細胞で発現させることにより生産しうる。また別の見地において、本発明は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの酵素活性または活性化を直接的あるいは間接的に阻害する分子として定義されるアンタゴニストをスクリーニングする方法に関する。さらなる見地において、本発明は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの酵素活性または活性化を直接的あるいは間接的に増加する分子として定義されるアゴニストをスクリーニングする方法に関する。本発明のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクは、ホスファターゼ活性を活性化または阻害し、それにより細胞代謝の主要経路に影響を与えることができる薬物および他の物質をスクリーニングする方法に有用である。無傷のPTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、またはPTP-Dタンパクもしくは糖タンパクのフラグメントを固相マトリックスに結合させることにより、その結合活性に基づいてPTP-Dタンパクまたは糖タンパクと相互作用する能力について、生物学的生成物または化学物質をスクリーニングするために使用することができるアフィニティプローブを創製する。その後結合した物質を精製した形でアフィニティプローブから溶離することができる。 PTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、またはアミノ酸の欠失および／または挿入および／または置換と酵素活性とを有するPTP-Dタンパクもしくは糖タンパクを、ホスファターゼ活性を増強または阻害できる化合物の試験に使用することができる。試験中の化合物がホスファターゼ活性を変える能力を、その試験化合物を精製PTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、またはアミノ酸の欠失および／または挿入および／または置換と酵素活性とを有するPTP-Dタンパクもしくは糖タンパクに添加するin vitroシステムにおいて試験し、酵素活性に対するその効果を当業者に周知の標準的な酵素学的手法を用いて測定することができる。スクリーニングにおける使用に適当なPTP-Dタンパクまたは糖タンパクのフラグメントは、天然または組換え的に発現させたPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの限定されたタンパク質分解処理により調製しうる。あるいはまた、PTP-Dの適当なフラグメントは、組換え技術により生産しうる。ひとつの例として、これはクレームされた本発明の範囲に限定されることを決して意図しているわけではないが、スクリーニングの目的のためには、触媒ドメインのみを使用することが好ましいかもしれない。そのような触媒ドメインは、酵素活性に必要な最小の数のアミノ酸のみから成るが、単独に、あるいは、融合タンパクの一部として、適当な宿主（例えば大腸菌）中で当業者に周知の組換え技術により生産することができるだろう。あるいはまた、PTPアーゼ活性に対する化合物の作用は、生きたあるいは固定した細胞、または生きたあるいは固定した細胞から誘導した膜画分を用いて、全細胞標本において測定することができる。この方法は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの酵素部分に直接作用する化合物をスクリーニングするのに有用である。PTP-D分子または糖タンパクが細胞外レセプター部分を有する場合には、この方法はその細胞外レセプター部分を介して作用する化合物をスクリーニングするのに有用である。試験化合物を、本発明のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクを多量に発現する細胞（例えば、トランスフェクトされたCOSまたはNIH-3T3細胞）、またはそれから誘導された膜標本とともにインキュベートする。その後、当業界で周知の方法（Honeggerら，Cell 51:199-209（1987）；Margolis ら，Cell 57:1101-1107（1989））を用いて、細胞のホスホチロシンの量を測定する。その結果を試験化合物の不存在下で、あるいは、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの公知の活性化因子の不存在下または存在下で得られた結果と比較する。そのような検討において、チロシンキナーゼの活性化因子の存在下での試験化合物の作用も測定できる。 PTPアーゼ活性を剌激する化合物については、ホスホチロシンの量が正味減少する結果となり、一方、PTPアーゼ活性を阻害する化合物については、ホスホチロシンの量が正味増加する結果となるであろう。表皮成長因子（EGF）や血小板由来増殖因子（PDGF）のレセプターのような、チロシンキナーゼである成長因子レセプターの場合には、チロシンリン酸化が細胞の増殖および癌トランスフォーメーションに関連している。脱リン酸化につながるPTPアーゼの活性化は、成長または増殖を妨げる、あるいは、抑制する逆調節機構（counterregulatory mechanism）として働いたり、癌に対する内因的調節機構（endogenous regulatory mechanism）として働くのかもしれない。かくして、このレセプター酵素システムの突然変異または異常調節（dysregulation ）は癌に対する感受性を促進しうる。インスリンレセプターもまたチロシンキナーゼであり、インスリンレセプターを有する細胞におけるチロシンのリン酸化は正常な生理学的機能と関連しているのであろう。細胞増殖および癌の場合とは対照的に、PTPアーゼの活性化はインスリン効果を妨害するであろう。正常以下のPTPアーゼレベルまたは酵素活性は、正常な逆調節機構を排除するように作用するであろう。しかし、おそらくより重要なことに、PT Pアーゼの過剰な活性または不適切な活性化が細胞に対するインスリンの作用を阻害するかあるいは完全に妨げ、それが（インスリン抵抗性変種の）糖尿病につながることが予想されるであろう。かくのごとくであるから、糖尿病に対する感受性はPTPアーゼ異常調節と関連しているのかもしれない。従って、正常または突然変異PTP-D遺伝子を同定するか、あるいは、細胞または組織に結合したPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの量または活性を測定する本発明の方法は、癌、糖尿病、または細胞ホスホチロシン代謝における変化に関連した他の疾病に対する感受性を同定する方法として利用することができる。また、本発明は、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの正常または異常な発現を伴う疾病または状態の治療に意図される医薬組成物へのそのように同定されたアンタゴニストまたはアゴニストの使用に関する。上記組成物は、典型的には、全身または局所注射または注入用の形態にあって、注射または注入のための適当な担体とともに製剤化されてもよい。本発明は、また、PTP-Dタンパクまたは糖タンパクの活性化を伴う疾病または状態を予防または治療する方法であって、それが必要な患者に、有効な投与量の本発明のPTP-Dタンパクもしくは糖タンパク、本発明の抗体、または本発明のPTP -Dタンパクもしくは糖タンパクの酵素活性を剌激するかまたは阻害する分子を投与することを含む前記の方法に関する。本発明をさらに以下に示す実施例において説明するが、これらの実施例はクレームされているような本発明の範囲を限定することを決して意図しているわけではない。実施例１ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いた新規ＰＴＰａｓｅサブファミリーの同定全ＲＮＡは、ヒト骨格筋からグアニジニウムチオシアネート／ＣｓＣｌ法（Ch irgwin et al.，Biochem．18: 5293-5299（1979））により単離した。ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡは、オリゴ（ｄＴ）セルロースカラム上で単離した（Aviv et al.，Pr oc．Natl．Acad．Sci．USA 58: 1408-1412（1972））。第１鎖ｃＤＮＡは、２μ ｇのポリ（Ａ）⁺から、Gibco BRL （米国メリーランド州20877、Gaithersburg）からのオリゴ（ｄＴ）プライミング及びモロニー・マウス白血病ウィルスＲＮas e Ｈ逆転写酵素を用いて製造者の説明に従って合成した。骨格筋で発現するＰＴＰaseに対応するｃＤＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応により単離した（Saiki et al.，Science 239: 487-491（1988））。要約すれば、上記からのヒト筋肉第１鎖ｃＤＮＡ（約５０ｎｇに相当）を、Gene Amp kit （P erkin Elmer Cetus、米国コネティカット州、ノーウォーク）を用いて以下の組の退化性（degenerative）オリゴヌクレオチドプライマーで増幅させた。センスプライマー（オリゴヌクレオチドno．58）［配列番号１０］アンチセンスプライマー（オリゴヌクレオチドno．57）［配列番号１１］これらのプライマーは、以下のアミノ酸共通配列に対応する。センスプライマー（オリゴヌクレオチド＃58） F W X M X W ［配列番号１２］アンチセンスプライマー（オリゴヌクレオチド＃57） H C S A G（S/I/V）G ［配列番号１３］各ＰＣＲサイクルは、９４℃で１分間の変性工程、３７℃で２分間のアニーリング工程、及び７２℃で２分間の伸長工程からなる。３０ないし４０サイクルを実施した。反応生成物をアガロースゲル電気泳動にかけた。（既に記載したＰＴＰaseの構造に基づき）予想される大きさの断片を単離し、ＴＡクローニングシステム（Invitrogen、カリフォルニア州サンジエゴ）を用いてサブクローン化し、（Current Protocols in Molecular Biology，eds．F．M．Ausubel et al.，J ohn Wiley & Sons，New York，1988に記載されたような）標準法を用いて、Sang er et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 74: 5463-5467（1977）に記載された酵素的連鎖停止法によって配列を決定した（Sequenase、米国Biochemicals）。ＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２と名付けられた２つのＰＣＲ断片のＤＮＡ部分配列及び推定アミノ酸配列を、それぞれ図１及び図２に示す。推定アミノ酸配列を、CLUSTALプログラム（Higgins，C.，Fuch，R．及びBleasby，D.，Multiple Seq uence Alignment; CABIOS（1991）（印刷中））を用いて図３Ａ中のＰＴＰase １Ｂと比較した。両断片は、他の公知のＰＴＰaseと明らかに相同性を有するが、驚くべきことに、この種の酵素について未だ記述されていない性質を有することがわかった（ウィスコンシン大学、Genetics Computer Group による分析）。これらのＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２の特有の性質を、先に記載した公知のＰＴＰaseの共通配列と比較して、以下に示す（相違部に下線が引かれている）。１．ＰＴＰ−Ｄ１／Ｄ２ S X X Y W P ［配列番号６］共通 C X X Y W P ［配列番号２］２．ＰＴＰ−Ｄ１／Ｄ２ I A M V X X X X E ［配列番号７］共通 (I/V/L) V (M/I/L) (V/L/I/M) X X X X E ［配列番号９］実施例２ＰＴＰ−Ｄサブファミリーの構成員のｃＤＮＡクローニングｍＲＮＡは、実施例１に記載したようにヒト骨格筋から調製した。ｃＤＮＡライブラリーは、Okayama及びBerg，Mol．Cell．Biol．2: 161-170（1982）; Okay ama及びBerg，Mol．Cell．Biol．3: 280-289（1983）に記載された方法を用いて構築した。プライマー断片を製造するため、ｐＣＤＶＩ−ＰＬベクターを用いた（Noma et al.，Nature 319: 640-646（1986））。短い合成アダプターを、最近記述された第２鎖プライマーとして用いた（Boel et al.，BioTechniques11： X X（1991））。H.Inuoue et al.，Gene 96:23-28（1990）によるプロトコールに従って、E．coli ＤＨ５α（Gibco BRL、米国メリーランド州20877、Gaithersburg ）を形質転換のために用いた。形質転換後、細胞を、プレート当たり15,000 -20,000コロニーの密度で、ＬＢプレート（５０μｇアンピシリン／ｍｌ含有）上にまいた。標準コロニーハイブリダイゼーション技術（Maniatis et al.，Molecular Clo ning （A Laboratory Manual），Cold Spring Harbor Laboratory，第２版（198 8））を用いてニトロセルロースレプリカフィルター（Scleicher & Schuell，BA 85）を覆った。以下のオリゴヌクレオチドを合成し、Ｔ₄ポリヌクレオチドキナーゼ及び［γ−³²Ｐ］ＡＴＰ（Amersham）を用いて５’末端を標識化し、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングに用いた。 5’ATA GCA ATG GTG ACA GCA GAA 3’ ［配列番号１４］このオリゴヌクレオチドは、実施例１からのＰＣＲ断片no．1のアミノ酸配列 Ile-Ala-Met-Val-Thr-Ala-Gluに対応する。５０ｍｌのハイブリダイゼーション溶液（６×ＳＳＣ、５×Denhardt溶液、0.05％ＳＤＳ（Current Protocols in Molecular Biology，eds．F.M.Ausubel et al.，John Wiley & Sons,New York （1988））中の１０pmoleの標識化オリゴヌクレオチドをレプリカニトロセルロースフィルターに加え、４２℃で３時間ハイブリダイズさせた。次いで、フィルターを６×ＳＳＣ、0.05％ＳＤＳ中で、室温で３回、４２℃で１回、最後に４８℃で１回洗浄した。オートラジオグラフィーにより同定された陽性コロニーを標準技術（Maniatis et al.，Molecular Cloning（A Laboratory Manual），Ｃo ld Spring Harbor Laboratory，第２版（1988））により単離した。ＰＴＰ−Ｄ１と示された１つの陽性クローンの部分配列及び推定アミノ酸配列を図４に示す。この部分配列は上記からのＰＣＲ断片no．1の配列を含み、これにより、単離されたｃＤＮＡクローンであることが確認された。更に、先に記載されたＰＴＰaseとの比較は、ＰＴＰ−Ｄ１の少なくとも１つの更なる特有の性質を示した（相違部に下線が引かれている）。３．ＰＴＰ−Ｄ１ G I N A S ［配列番号５］共通 N/D Y I N A S/N ［配列番号４］実施例３ＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２のノーザンブロット分析全ＲＮＡは、ヒト骨格筋から、Puissant et al.，BioTechniques 8: 148-149 （1990）に記載された酸性グアニジニウムチオシアネート−フェノール−クロロホルム抽出法により単離した。ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡは、オリゴ（ｄＴ）カラム上で単離した（Aviv etal.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 69: 1408-1412（1972））。１５μｇのポリ（Ａ）⁺ＲＮＡをＰＴＰ−Ｄ１発現のためにプローブされたレーンに負荷し、７．５μｇをＰＴＰ−Ｄ２発現のために分析されたレーンに負荷し、ＲＮＡをアガロース−ホルムアルデヒドゲル中で分離し、標準技術（Curr ent Protocols in Molecular Biology，eds．F．M．Ausubel et al.，John Wile y & Sons，New York（1988））を用いてニトロセルロースフィルターにブロットした。このフィルターを、ＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２について示された配列に対応する³²Ｐ−標識化ｃＤＮＡ断片でハイブリダイズした。この³²Ｐ−標識化は、Random Primers DNA Labeling System（Cat．no．8187SA，Bethesda Resear ch Laboratories、米国メリーランド州20877、Gaithersburg）を用いて製造者の指示に従って行った。次いで、フィルターをＸ線フィルムに適用した。ノーザンブロット分析は、骨格筋におけるＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２の主な転写物は、それぞれ６．５ｋｂ及び１１ｋｂであったことを示す。実施例４ＰＴＰ−Ｄサブファミリーの新規な構成員の同定全ＲＮＡは、以下の組織及び細胞系：骨格筋、肝臓、胎盤、ＨｅｐＧ２（American Type Culture Collection （ATCC ） HB8065）、ＲＤ（ATCC CCL 136）（Puissant et al.，BioTechniques 8: 148 -149（1990））のそれぞれから単離した。ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡは、オリゴ（ｄＴ）カラム上で単離した（Aviv et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 69: 1408-1412（1972））。実施例１に記載したように、第１鎖ｃＤＮＡを合成した。上記組織及び細胞系からのｃＤＮＡ調製物を別々に標準条件を用いるポリメラーゼ連鎖反応にかけた（PCR Technology - Principles and Applications for DNA Amplification，Er lich，H．E.，ed.，Stockton Press，New York（1989））。以下のプライマーを増幅のために用いた。センスプライマー：（オリゴヌクレオチドno．58、本発明の実施例１参照）これを以下の２種のアンチセンスプライマーのいずれかと組合せた。オリゴヌクレオチドno．250（ＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２のアミノ酸配列ＣＹＡＴＴＧ［配列番号１５］に対応）：［配列番号１６］オリゴヌクレオチドno．251（ＰＴＰ−Ｄ１のアミノ酸配列ＱＥＲＴＶＷ [ 配列番号１７］に対応）：［配列番号１８］３０ないし４０サイクルを実施した。反応生成物をアガロースゲル電気泳動にかけた。予想される大きさの断片（オリゴヌクレオチドno．58及びno．250の組合せについての約１９０ｂｐ；オリゴヌクレオチドno．58及びno．251の組合せについての約２３５ｂｐ）を単離し、平滑末端化し、標準技術を用いてｐＧＥＭ３ベクター（Promega）にサブクローン化した（Ausubel et al.，Current Proto cols in Molecular Biology， John Wiley & Sons，New York（1988））。サブクローン化したＰＣＲ生成物を、Sequenase （米国Biochemicals、米国オハイオ州44122、Cleveland）を用いて酵素的連鎖停止法（Sanger et al.，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 74: 5463-5467（1977））によって配列を決定した。ヌクレオチド配列及び対応するアミノ酸配列をＰＴＰ−Ｄ１及びＰＴＰ−Ｄ２の配列と比較した。クローンは、実施例１及び２で示したＰＴＰ−Ｄ１／ＰＴＰ−Ｄ２及び／又はＰＴＰ−Ｄ１／Ｄ２配列と７０％以上の一致を示し、本発明に従ったＰＴＰ−Ｄサブファミリーの構成員であると同定された。実施例５ＰＴＰ−Ｄ蛋白質についての核酸の存在の検出全ＲＮＡは、細胞系ＨｅｐＧ２（American Type Culture Collection （ATCC ） HB8065）及びＲＤ（ATCC CCL 136）（Puissant et al.，BioTechniques 8: 1 48-149（1990））から単離した。ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡは、オリゴ（ｄＴ）カラム上で単離した（Aviv & Leder，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 69: 1408-1412（19 72））。実施例１に記載したように、第１鎖ｃＤＮＡを合成した。ｃＤＮＡを標準条件を用いるポリメラーゼ連鎖反応にかけた（PCR Technology -Principles a nd Applications for DNA Amplificat，Erlich，H．E.，ed.，Stockton Press， New York（1989））。以下のプライマーを増幅のために用いた。［配列番号１９］アンチセンスプライマー：３５サイクルを実施した。反応生成物をアガロースゲル電気泳動にかけた。予想される大きさの断片（３６０ｂｐ）を単離し、平滑末端化し、標準技術を用いてｐＧＥＭ３ベクター（Promega）にサブクローン化した(Ausubel et al.，Curr ent Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，New York（1988））。サブクローン化したＰＣＲ断片のＰＴＰ−Ｄ同一性は、Sequenase（米国Bioch emicals、米国オハイオ州44122、Cleveland）を用いる酵素的連鎖停止法（Sange r et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 74: 5463-5467（1977））を用いて配列を決定することによって確認した。実施例６細胞中のPTP-Dタンパクまたは糖タンパクの存在の検出とその定量原核発現ベクターpGEXの改変 PTP D1のｃDNAフラグメント（下記参照）を導入するために、pGEX2Tベクター（Pharmacia，Uppsala，Sweden）のクローニングサイトを標準技術（Current Pr otocols in Molecular Biology，eds．F．M．Ausubel et al.，John Wiley & So ns，New York，1988）を用いて改変した。pGEX2Tベクターを制限酵素BamHIとEco RIで消化し、単離した。この消化されたpGEX2Tベクターに、下記のオリゴヌクレオチド：を連結して、次のクローニングサイト：5'EcoRI，Ncol，BamHI，Stul，Xbal，Hi ndII3'を有するベクターpGEX-AK2を得た。大腸菌によるGST-PTP D1融合タンパクの発現 PTP D1をコードするcDNA（実施例２）を制限酵素EcoRIとBglIIで消化した。消化後、約1600 bpのフラグメントを単離し、標準的な技術（Current Protocols i n Molecular Biology，eds．F．M．Ausubel et al.， John Wiley & Sons，New York，1988）を用いて上記pGEX-AK2（EcoRIとBamHIで消化）に連結した。この挿入されたフラグメントは、本発明の図４に示されるPTP D1のコード領域（すなわち、272アミノ酸をコードしている）と約800 bpの３’非翻訳領域に対応している。グルタチオンＳ−トランスフェラーゼとPTP D1の融合タンパク（Smith et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 83:87 -3-8707（1988)）をコードするpGEX-AK2/PTP D1ベクター構築物を大腸菌株のDH5 α（カタログ番号8263SA，Bethesda Research Laboratories，Gaithersburg，MD ）とSURE（登録商標）（カタログ番号200294，Stratagene，La Jolla，CA 92037 ）に導入した。これらの形質転換大腸菌の一晩の培養物をLB培地にて生育させ、そして新しい培地に１：10に希釈して１時間生育させた。イソプロピル-1-チオ-β-D-ガラクトピラノシド（IPTG）を最終濃度で0.5mM（DH5α）と5mM（SURE）まで添加し、これら培養物をさらに4時間インキュベートした。コントロールは、1）IPTG含有または不含のpGEX-AK2； 2）IPTGを添加しないpGEX-AK2/PTP D1であった。GST-P TP D1融合タンパクは、封入体から不溶性の産物として（1.0%（v/v）トリトンX1 00を含むpH7.5の50mM N-2-ヒドロキシエチルピペラジン-N'-2-エタンスルホン酸（HEPES）緩衝液中での3回の洗浄物を用いる）単離するか、またはグルタチオン -セファロース4Bアフィニティークロマトグラフィー（カタログ番号17-0756-01 ，Pharmacia，Uppsala，Sweden）を用い、製造業者の使用説明書にしたがって可溶性のタンパクとして単離した。PTP D1に対して特異性のある抗体の生産 PTP D1に対して特異性のある抗血清を標準技術により作った（Practical Immu nology 3rd Edition，L．Hudson & F．C．Hay，Blackwell，Oxford（1989)）。手短に記載すると、200μlのリン酸緩衝溶液中の200μgのGST-PTP D1融合タンパクを等量のフロイント完全アジュバント（Sigma，カタログ番号F5881）と一緒にし、これを2匹のニュージーランドウサギの大腿筋肉中に筋内注射した。各ウサギに100μgの融合タンパクを投与した。最初の注射から2週間後に追加免疫注射を行なった（最初の免疫化と同じ操作であるがフロイントアジュバントは用いない）。さらに2週間後に20mlの血液を各ウサギから得た。この血液を室温で１時間ガラスチューブ中で凝血させて、これらチューブのウェルから凝血物を離した後に遠心した。その血清を新しいチューブに移し、使用するまで-20℃でアリコートにて保存した。グルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）と反応する抗体を除去するために、上記の方法（「大腸菌によるGST-PTP D1融合タンパクの発現」）を用いてグルタチオンS-トランスフェラーゼ飽和のグルタチオン-セファロース4Bカラムにその血清を通した。GSTタンパクを作るためにpGEX-AK2構築物を用いた。抗GST抗体の完全な除去を確実とするため、その血清をカラムに3回通した。この除去の効率は下記のようにウェスタンブロットにより評価した（「細胞系中のPTP-D1の存在の検出とその定量」）。細胞系中のPTP-D1の存在の検出とその定量哺乳動物細胞によるPTP D1の発現を検出するために抗PTPD1抗体を用いることができる。標準法による免疫蛍光は、特定の細胞系と組織中の発現に関する情報を提供するであろう。さらに重要でもあることに、この抗体調製物は、細胞系および組織中のその量を測定するために用いることができる。抗PTP D1抗体の後者への適用の1例として、RD細胞系（アメリカンタイプカルチャーコレクションCCL 136）中のPTP D1の検出を以下に記載する。この実施例は、他の細胞および組織においてもPTP D1の検出に同様に用いることのできる抗体の利用を決して限定するものではないことを強調したい。同じように、この抗体調製物はPTP D1の精製と他の種類の検出検定法の確立に有用でありうる。ハンクス液と10%（v/v）のウシ胎児血清（Gibco-BRL）を含有し、通常の2倍の濃度のアミノ酸とビタミンを含有する最小必須培地（イーグル；カタログ番号04 1-022570、Gibco，Life Technologies Ltd.，Paisley，Scotland）で、標準技術を用いてRD（胎児性横紋筋肉腫（embryonal rhabdomyosarcoma）；ヒト）細胞系を培養した。この細胞をリン酸緩衝溶液で2回洗浄し、上清を除去した。1枚の10cm組織培養皿の細胞を800μlのトリトンX100溶解緩衝液（20mM HEPES，pH7.5，50mM NaCl， 10%グリコール，1.0%トリトンX100，1.5mM MgCl2，4mMエチレングリコール-ビス（β-アミノエチルエチルエーテル）N,N,N',N'-テトラアセテート（EGTA: Sigma ED2SS）、10μg/mlアプロチニン（aprotinin）、１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド（PMSF））で可溶化し、遠心して、その上清を使用するまで−80℃ でアリコートにて保存した。この溶解物の1〜50μlを25μlのSDS試料緩衝液（62 .5mM Tris-Cl,pH7.0，3.0%（w/v）SDS,10%（v/v）グリセロール，10%2-メルカプトエタノールおよび0.05%（w/v）ブロモフェノールブルー）と混合して、5分間沸騰し、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（7.5%）で分離し、ニトロセルロース上に標準技術（Burnette，W．N．(1981）Anlyt．Biochem．112:195-201）を用いてブロットした。RD細胞溶解物と平行させた所与量の上記大腸菌産生GST-PT P D1融合タンパクを用いてPTP D1の定量用標準曲線を作成した。このニトロセルロースフィルターをリン酸緩衝溶液（PBS ）１リットルあたり2gの粉ミルク（Carnation、非脂肪ドライミルク、Carnation ，Los Angeles）とともに30分間インキュベートして非特異的な結合をブロックし、0.02%（v/v）ツィーン20（Sigma P1379）（PBS-ツィーン）と0.2%（w/v）ゼラチン（BioRadカタログ番号170-6537、Richmond，California）を含有するPBS で1回洗浄し、PBS-ツィーンで3回洗浄し、最後に上記の抗PTP D1抗体調製物の１：200の希釈物（PBS-ツィーン中）とともに4時間インキュベートした。PBS-ツィーンで3回洗った後、フィルターを西洋ワサビペルオキシダーゼ複合ヤギ抗ウサギIgG（カタログ番号170-6525，BioRad）とインキュベートした。これらフィルターをPBS-ツィーンで3回洗い、ウサギ抗体の量およびそれによりPTP D1の量を、増強化学発光（ECL）法を用いて製造業者の使用説明書（カタログ番号RPN 210 6，Amersham，UK）にしたがって決定した。RD細胞系から得られたシグナルを、大腸菌産生GST-PTP D1融合タンパクを用いて得られた上記標準曲線と比較することにより、RD細胞系の産生したPTP D1を定量することができた。実施例７ PTP-D タンパクまたは糖タンパクの酵素活性を剌激または阻害する分子の同定 PTP D1またはその機能部位の完全コード領域を含むcDNAを、標準技術（Ausube l et al.，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，New York（1988)）を使用して哺乳類の発現ベクター pcDNA 1（カタログ番号（Cat ．No.）V490-20、インバイトロゲン（Invitrogen）社、サンディエゴ）に挿入する。Gorman et al.，Virology 171:377-385（1989）により述べられている293細胞過渡（transient）発現系を酵素的に活性なPTP D1の製造に使用する。標準技術を使用して、293細胞を、10％（v/v）ウシ胎児血清（ギブコ社）を補足したダルベッコ改変イーグル培地（カタログ番号a041-02430、ギブコ、ライフテクノロジー社、スコットランド、ペイズリー）中で、5％CO₂で37℃で培養する。プラスミド構築物PTP-D1/pcDNA 1の10μgを、0.25M CaCl₂ 0.5mlおよび2xBBS （50 mM N,N-ビス（2-ヒドロキシエチル）-2-アミノエタン-スルフォン酸（BES ）、280mM NaCl、1.5 mM Na₂HPO₄）0.5mlと混合し、そしてChen & Okayama（Mol .Cell．Biol．7:2745-2752（1987)）により述べられているように、10cmペトリ皿中の1.5×10⁶個の203細胞のトランスフェクションに使用する。リン酸カルシウム-DNA沈殿物を添加後、細胞を3%CO₂で37℃で24時間インキュベートし、その後10％ウシ胎児血清を補足したDMEMで一回洗浄し、そして新しい培地中で5%CO₂ で37℃でさらに24時間インキュベートする。培地を除去し、そして細胞を1mlの溶菌緩衝液（20 mM HEPES pH7.5、150mM NaCl、10％グリセロール、1.0％トリトンX100、1.5mM MgCl₂、4mMエチレングリコールビス（β-アミノエチルエチルエーテル）N,N,N',N'-四酢酸（EGTA;シグマED2SS）、10μg/ml アプロチニン（aprotinin）、1mM PMSF）で溶菌する。細胞溶解物を4℃で2500× gで2分遠心分離する。上澄みを取り出し、100μlアリコートを液体窒素で急速凍結し、−70℃で使用するまで保存する。３種の異なる基質をPTP-D1ホスファターゼ活性の潜在的阻害剤と剌激剤の評価のために使用する: 1)p-リン酸ニトロフェニル（pNP-P; シグマ104-0）; 2)³²P- 標識レイタイド（Raytide）（オンコジーン（Oncogene）サイエンス社、ニューヨーク州マンハセット（Manhasset)）; 3)³²P-標識ウシミエリン塩基性タンパク（MBP）。１種以上のこれらの基質に対するPTP-D1の活性を減少または増加させる物質をさらに分析する。 pNP-Pに対するPTP-D1の活性を、N.K.Tonks et al.,J Biol．Chem．263:6731-6 737（1988）に記載されているように本質的に測定する。マイクロタイタープレートを使用して、上記からの10μlの293溶解物を、室温で100μlのpNP-P（それぞれ30および100mM）とインキュベートする。吸収をダイナテックMR5000読み取り装置で１分間の合間をおいて読み取る。剌激または阻害活性を分析する物質を、pNP-Pの添加5分前にPTP-D1/293細胞溶解物に添加する。レイタイドおよびミエリン塩基性タンパクの³²Pでの標識 ³²P-標識レイタイド（登録商標）に対するPTP-D1の活性を、Krueger et al.（ EMBO J.9:3241-3252（1990)）により述べられているように本質的に測定する。合成ペプチドレイタイドを、若干修正をした製品指示書（オンコジーンサイエンス）に従ってチロシンキナーゼp60^c-a ^rc を使用して³²Pで標識する。手短に言えば、2μlのp60^c-arcを20μlのレイタイド（1mg/ml）および108μlのキナーゼ緩衝液（10mM MgCl₂を含む50mM HEPES pH7 .5、0.2%（v/v）β-メルカプトエタノール、30μM ATPおよび50μCi［γ-²²P］A TP）と混合する。混合物を37℃で16時間インキュベートし、そして20mM NaH₂PO₄ 中の500μlの20％（w/v）トリクロロ酢酸（TCA）と100μlの5mg/mlアセチル化ウシ血清アルブミンを添加して反応を停止する。混合物を遠心分離し、沈殿物を20 ％TCA/20mM NaH₂PO₄で3回洗浄し、そして最後に0.2Mトリス-Cl pH8.0に再溶解する。ミエリン塩基性タンパク（シグマ社）を、Guan et al.，Nature 350:359-362 （1991）により述べられているように、レイタイドの標識に使用したものと同様の手順で標識する。MBP 30μgを以下の成分を含む反応物質60μl中で標識する:5 0mM HEPES緩衝液pH7.5、10mM MgCl₂、0.067%β-メルカプトエタノール、150μCi ［γ-³²P］ATPを含む0.05mM ATPおよび4U p43^v-ablキナーゼ（オンコジーンサイエンス）。混合物を30℃で60分インキュベートし、そして反応を氷冷トリクロロ酢酸を最終濃度20%まで添加して停止する。30分間氷上に置いたのち、沈殿物を2 0％TCAで3回洗浄し、H₂O 100μlに再溶解する。レイタイドまたはMBPを使用するPTP ase活性検定 5 μlの10×PTP ase緩衝液（25mM HEPES pH7.3、5mM EDTA、10mMジチオトレイトール）を、a)5μlの³²P-標識レイタイドまたはMBP（1分当たり10-20Ｘ10⁴カウントに相当する）、 b)PTP-D1/293細胞溶解物それぞれ5，10および25μl、およびc)最終体積50μlのH₂ Oと混合する。37℃で30分インキュベート後、反応を停止する。レイタイドの場合は、0.75mlの酸性木炭混合物（Krueger et al.，EMBO J.9:3241-3252（1990) ）:0.9M HCl、90mMピロリン酸ナトリウム、2mM NaH₂PO₄、4%（v/v）ノリト（Nor it）A（シグマ社)）を添加して反応を停止する。混合し遠心分離した後、上澄み 400μlを取り出し放射活性を定量する。基質としてMBPを使用する場合は、反応を20％TCA（最終体積）で停止する。その後、上澄み中の³²Pの量を測定する。剌激または阻害活性を分析する物質を、検定の開始5分前にPTP-D1/293細胞溶解物に添加する。配列表（２）配列番号１の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はアスパラギンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号１：（２）配列番号２の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号２：（２）配列番号３の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：１（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はバリンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号３：（２）配列番号４の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：１（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はアスパラギンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はアスパラギンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号４：（２）配列番号５の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はアスパラギンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号５：（２）配列番号６の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号６：（２）配列番号７の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：９アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号７：（２）配列番号８の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はアスパラギンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号８：（２）配列番号９の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：９アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：１（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はバリンまたはロイシンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：３（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はイソロイシンまたはロイシンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：４（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸は、ロイシン、イソロイシンまたはメチオニンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号９：（２）配列番号１０の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号１０：（２）配列番号１１の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号１１：（２）配列番号１２の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号１２：（２）配列番号１３の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：７アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ペプチド（Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＊「このアミノ酸はイソロイシンまたはバリンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号１３：（２）配列番号１４の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２１塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号１４：（２）配列番号１５の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号１５：（２）配列番号１６の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３４塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号１６：（２）配列番号１７の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号１７：（２）配列番号１８の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２９塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号１８：（２）配列番号１９の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２１塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号１９：（２）配列番号２０の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２３塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｓｃ特徴（Ｂ）存在位置：６（Ｄ）他の情報：／注＊「このヌクレオチドはグアニンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｓｃ特徴（Ｂ）存在位置：８（Ｄ）他の情報：／注＊「このヌクレオチドはチミンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｓｃ特徴（Ｂ）存在位置：９（Ｄ）他の情報：／注＊「このヌクレオチドは、シトシン、グアニンまたはアデニンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｓｃ特徴（Ｂ）存在位置：１２（Ｄ）他の情報：／注＊「このヌクレオチドは、シトシン、グアニンまたはアデニンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｓｃ特徴（Ｂ）存在位置：１５（Ｄ）他の情報：／注＊「このヌクレオチドは、シトシン、グアニンまたはアデニンで置換されてもよい。」（ｉｘ）特徴：（Ａ）名称／キー：ｍｉｓｃ特徴（Ｂ）存在位置：１８（Ｄ）他の情報：／注＊「このヌクレオチドはアデニンで置換されてもよい。」（ｘｉ）配列の記載：配列番号２０：（２）配列番号２１の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号２１：（２）配列番号２２の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：４０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号２２：（２）配列番号２３の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２６１塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号２３：（２）配列番号２４の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８７アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号２４：（２）配列番号２５の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２７０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号２５：（２）配列番号２６の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：９０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号２６：（２）配列番号２７の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号２７：（２）配列番号２８の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号２８：（２）配列番号２９の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号２９：（２）配列番号３０の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：６０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号３０：（２）配列番号３１の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２９アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号３１：（２）配列番号３２の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２７アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号３２：（２）配列番号３３の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：３００塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号３３：（２）配列番号３４の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２７０塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号３４：（２）配列番号３５の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１５０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号３５：（２）配列番号３６の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：９０アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号３６：（２）配列番号３７の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：８７７塩基対（Ｂ）配列の型：核酸（Ｃ）鎖の数：両形態（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ＤＮＡ（ｘｉ）配列の記載：配列番号３７：（２）配列番号３８の情報（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：２７２アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：両形態（ｉｉ）分子の種類：ペプチド（ｘｉ）配列の記載：配列番号３８：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 Ｄ 9284−4ＣＴ 9284−4ＣＣ０７Ｈ 21/04 Ｂ 8615−4ＣＣ１２Ｎ 1/21 8828−4Ｂ 5/10 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｐ 21/08 9358−4ＢＣ１２Ｑ 1/68 Ａ 9453−4ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｖ 8310−2Ｊ 33/577 Ａ 8310−2Ｊ //(Ｃ１２Ｎ 9/16 ＢＣ１２Ｒ 1:19） 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/54 ＡＤＵ 9455−4Ｃ 37/64 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ (72)発明者モラー，ニールスペーターヒュンダールドイツ連邦共和国ディー―81373 ミュンヘンハイテルヴァンガーシュトラーセ 32番地 (72)発明者バッハ−モラー，カリンドイツ連邦共和国ディー―81373 ミュンヘンハイテルヴァンガーシュトラーセ 32番地

Claims

【特許請求の範囲】１．天然のものであり、それが本来結合している他のタンパクまたは糖タンパクを実質的に含まないPTP-D タンパクまたは糖タンパク。２．１．G Y I N A S/N（配列番号５）２．S X X Y W P（配列番号６）、および３．I A M V X X X X E（配列番号７）から選択される１個、２個、または３個のアミノ酸配列を含むホスファターゼ触媒ドメインを含む請求の範囲第１項記載のPTP-Dタンパクまたは糖タンパク。３．天然のものでない、請求の範囲第１項記載のPTP-Dタンパクまたは糖タンパク。４．アミノ酸を欠失している、請求の範囲第３項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。５．アミノ酸が付加されている、請求の範囲第３項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。６．アミノ酸が置換されている、請求の範囲第３項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。７．天然のものであり、それが本来結合している他のタンパクまたは糖タンパクを実質的に含まない、請求の範囲第１項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。８．PTP-D1の図１に示したアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有るアミノ酸配列を含む請求の範囲第１項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。９．PTP-D1である、請求の範囲第８項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。 10．PTP-D2の図２に示したアミノ酸配列と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求の範囲第１項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。 11．PTP-D2である、請求の範囲第10項記載のPTP-D タンパクまたは糖タンパク。 12．PTP-D タンパクまたは糖タンパクをコードするヌクレオチド配列を含む組換え核酸構築物。 13．cDNA配列である、請求の範囲第12項記載の組換え核酸構築物。 14．ゲノムDNA配列である、請求の範囲第12項記載の組換え核酸構築物。 15．配列番号２３（図１）のヌクレオチド配列を有する請求の範囲第12項記載の組換え核酸構築物。 16．配列番号２５（図２）のヌクレオチド配列を有する請求の範囲第12項記載の組換え核酸構築物。 17．発現伝達体である、請求の範囲第12項記載の組換え核酸構築物。 18．ベクターである、請求の範囲第17項記載の組換え核酸構築物。 19．プラスミドである、請求の範囲第17項記載の組換え核酸構築物。 20．PTP-D タンパクまたは糖タンパクをコードするヌクレオチド配列を含む、単離および精製された核酸構築物。 21．配列番号２３（図１）のヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第20項記載の単離および精製された核酸構築物。 22．配列番号２５（図２）のヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第20項記載の単離および精製された核酸構築物。 23．請求の範囲第17項の核酸構築物で形質転換された原核宿主細胞。 24．細菌である、請求の範囲第23項記載の原核宿主細胞。 25．請求の範囲第17項の核酸構築物で形質転換された真核宿主細胞。 26．酵母細胞または哺乳動物細胞である、請求の範囲第25項記載の真核宿主細胞。 27．PTP-D タンパクまたは糖タンパクを製造する方法であって、（ａ）培養条件下で前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクを発現できる宿主細胞を培養し、（ｂ）前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクを発現させ、（ｃ）前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクを前記培養物から回収することを含む前記の方法。 28．宿主細胞が原核生物である請求の範囲第27項記載の方法。 29．宿主細胞が真核生物である請求の範囲第27項記載の方法。 30．PTP-D 分子に特異的な抗体。 31．モノクローナルである、請求の範囲第30項記載の抗体。 32．ポリクローナルである、請求の範囲第30項記載の抗体。 33．細胞におけるPTP-D タンパクまたは糖タンパクの存在を検出するか、あるいは、PTP-D タンパクまたは糖タンパクの量を測定する方法であって、（ａ）前記細胞またはその抽出物をPTP-D タンパクまたは糖タンパクのエピトープに特異的な抗体と接触させ、（ｂ）前記細胞またはその抽出物への前記抗体の結合を検出するか、あるいは、結合した抗体の量を測定し、それにより前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクの存在を決定するか、あるいは、前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクの量を測定することを含む前記の方法。 34．細胞または被検体における、PTP-D タンパクをコードする核酸配列、または、突然変異PTP-D タンパクもしくは糖タンパクをコードする核酸構築物の存在を検出する方法であって、（ａ）前記被検体からの細胞またはその抽出物を、前記PTP-D タンパクもしくは糖タンパクの少なくとも一部または前記突然変異PTP-D タンパクもしくは糖タンパクの少なくとも一部をコードするオリゴヌクレオチドプローブと、ハイブリダイズする条件下で接触させ、（ｂ）前記プローブの前記細胞の核酸へのハイブリダイゼーションを測定し、それにより前記核酸構築物の存在を検出することを含む前記の方法。 35．工程（ａ）の前に、（ｃ）PTP-D タンパクまたは糖タンパクをコードする細胞の核酸の量を選択的に増幅することをさらに含む請求の範囲第34項の方法。 36．化学的または生物学的標本におけるPTP-D タンパクまたは糖タンパクに結合できる化合物を同定する方法であって、（ａ）前記PTP-D タンパクもしくは糖タンパク、またはその化合物結合部分を固相マトリックスに結合させ、（ｂ）前記化合物が結合できるように、前記化学的または生物学的標本を前記固相マトリックスと接触させ、未結合の物質を洗い流し、（ｃ）前記固相に結合した前記化合物の存在を検出することを含む前記の方法。 37．複合体混合物からPTP-D タンパクまたは糖タンパクに結合できる化合物を単離する方法であって、（ａ）前記PTP-D タンパクもしくは糖タンパク、またはその化合物結合部分を固相マトリックスに結合させ、（ｂ）前記化合物が結合できるように、前記複合体混合物を前記固相マトリックスと接触させ、未結合の物質を洗い流し、（ｃ）前記の結合した化合物を溶離し、それにより前記化合物を単離することを含む前記の方法。 38．PTP-D タンパクまたは糖タンパクの酵素活性を剌激または阻害できる分子を同定する方法であって、（ａ）精製形にあるか、膜標本または完全な生きたあるいは固定した細胞における前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクと前記化合物を接触させ、（ｂ）工程（ａ）の前記混合物を十分な期間インキュベートし、（ｃ）前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクの酵素活性を測定し、（ｄ）前記酵素活性を前記化合物なしにインキュベートした前記PTP-D タンパクまたは糖タンパクのそれと比較し、それにより、PTP-D タンパクまたは糖タンパクが前記の活性を剌激するか、あるいは、阻害するかを決定することを含む前記の方法。 39．工程（ａ）におけるPTP-D タンパクまたは糖タンパクがPTP-D タンパクまたは糖タンパクのフラグメントである、請求の範囲第38項記載の方法。 40．異常なPTP-D タンパクまたは糖タンパクを伴う疾病を治療または予防するための医薬組成物であって、PTP-D タンパクまたは糖タンパク、および医薬的に許容できる担体を含む前記組成物。 41．異常なPTP-D タンパクまたは糖タンパクを伴う疾病を治療または予防するための医薬組成物であって、PTP-D タンパクまたは糖タンパクの酵素活性を剌激するかまたは抑制するのに有効な量の分子を含む前記組成物。 42．被検者の異常なPTP-D タンパクまたは糖タンパクを伴う疾病を治療または予防する方法であって、前記被検者に請求の範囲第40項記載の組成物を投与することを含む前記の方法。 43．被検者の異常なPTP-D タンパクまたは糖タンパクを伴う疾病を治療または予防する方法であって、前記被検者に請求の範囲第41項記載の組成物を投与することを含む前記の方法。 44．PTP-D タンパクまたは糖タンパク、および医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物。 45．PTP-D タンパクまたは糖タンパクの酵素活性を剌激するかまたは阻害するのに有効な量の分子を含む医薬組成物。 46．被検者の疾病を治療または予防する方法であって、前記被検者に請求の範囲第44項記載の組成物を投与することを含む前記の方法。 47．被検者の疾病を治療または予防する方法であって、前記被検者に請求の範囲第45項記載の組成物を投与することを含む前記の方法。