JPH08502726A - ３分枝性クラスタグリコシドの調製およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 各グリコシド残基が、鎖中に少なくとも４つの原子を有する可変性、親水性長鎖のスペーサによってクラスタの分岐点に付加される３分枝性クラスタグリコシド。グリコシドスペーサは、好適には少なくとも２つの親水性基を含む。３分枝性クラスタグリコシドの製薬剤における用途は、たとえば低脂質血症剤である。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ３分枝性クラスタグリコシドの調製およびその用途 発明の分野 本発明は、３分枝性クラスタグリコシド、すなわち、３つの糖類のクラスタを 含み、したがってヒトまたは動物の肝に存在する受容体によって認識することが できる化合物に関する。 このような３分枝性クラスタダリコシドは、種々の目的のために利用すること ができ、たとえば、コレストロール残基、または選択的親和性基を含む場合であ れば、高脂血症の治療の枠内にある、血液から肝へのリポたんぱくおよび脂質胞 の生体内伝達のために使用することができる。 先行技術 一つには、薬剤を特に肝に向ける輸送賦形剤を作るために、また他方において は、血流からアテローム発生低比重リポたんぱく（ＬＤＬ）を取除くために、リ ポたんぱくや脂質胞を適切な経路を介して肝に導く方法についての研究がこれま で行われてきた。 肝実質細胞上の無唾液糖たんぱく受容体を介した、肝の脂質胞またはリポたん ぱくの摂取を誘発するために、たとえばコレステリルグリコシド（参考文献１〜 ４）、ラクトシルセレブロシド、ガングリオシド（参考文献５〜９）や化学的に 変性させたリン脂質（参考文献１０〜１１）のような糖脂質が開発されてきた。 しかしながら、リポたんばく／細胞内脂肪粒子に会合させる場合、これらの周 知の化合物は、薬剤−ターゲットにおいて、これらの化合物の利用が可能な用途 を妨害する肝クッペル細胞上の同様にガラクトースを認識するフコース／ガラク トース受容体による摂取の方を優先することを示している。フコース／ガラクト ース受容体は糖類、糖たんぱく質および粒子を結合し、高比重の末端ガラクトー ス基を露出する（参考文献２２）。おそらく、高親和性結合は本質的にはグリコ シドの２、３、４分枝性を必要としない。 上述の糖脂質は、肝実質細胞上の無唾液たんぱく受容体によって認識される配 位子を含んでいる。該受容体は高能力の摂取系統と肝実質細胞上における独特の 局在化を示す。該受容体は末端ガラクトース基を持つ糖たんばく質および糖類を 認識することができ、オリゴ分枝糖類の方を明らかに好 む。 さらにまた上述の化合物は、脂質胞またはリポたんぱくと配位子との会合に備 えた構造を有している。その目的のために、これらの物質には脂質胞またはリポ たんぱく質と自発的に会合する脂質部が与えられている。 これらの周知の糖脂質の欠点は特に、それらは水溶性ではないという点であり 、それがこれらの物質の生体内での利用を困難にしている。 こういったことから、水溶性クラスタガラクトソ脂質、すなわち式２２のトリ −ガラクトース−コレステロール（ｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃｈｏｌ）（参考文献１ ２〜１５および２６）についての研究が行われてきている。これらの研究によっ て該化合物は血流から不可逆的にコレステロールを取り除き、肝によるコレステ ロール摂取を誘発することができることが実証された。 しかしながら、種々の欠点は低脂質血症作用剤としてｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃｈ ｏｌを使用することに関係がある。まず第１に、その効力が低いということであ る。すなわち血流のＬＤＬレベルを有意に低下させるには、ｔｒｉｓ−ｇａｌ− ｃｈｏｌの投与量を高くすることが必要である（参考文献１５）。さらにまた、 ｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃ ｈｏｌの注入後、ＬＤＬは肝細胞上の無唾液糖たんぱく受容体を介してではなく 、肝クッペル細胞上のフコース／ガラクトース受容体を介して除去される。最初 に述べたタイプの細胞による除去の方が後に述べたタイプの細胞による除去より もずっと好ましく、これは肝細胞だけがＬＤＬから胆汁酸にコレステロールを転 換し、これらを胆汁の中に分泌することができるからである。 ｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃｈｏｌは、肝実質細胞に対して（リポ）たんぱく質を向 ける特異性が低いということ、および低コレステリン血症への効能が低いという ことのどちらも、無唾液糖たんぱく受容体に対するグリコシドの特異性および親 和性が低いことに関係していたといえる。無唾液糖たんぱく受容体に対する親和 性および特異性に関して、ｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃｈｏｌからのクラスタグリコシ ドを最適化することが必要であった。 これまでに、Ｌｅｅらは無唾液糖たんぱく質受容体による高親和性認識の必要 条件についての研究を報告している（参考文献２４）。さらに詳細には、３種の クラスタグリコシドの親和性についての研究が報告されている：（１）合成分枝 オリゴ糖構造；（２）末端の糖成分がクラスタグリコシドの分枝点に直接付加さ れているトリ−ガラク トース／トリ−ラクトースデンドライトおよびそのオリゴマ；および（３）グリ コペプチド誘導体。Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｉｒｓｃｈｆｅｌｄｅｒ−Ｔａｙｌｏｒモ デルを用いた結合に関する研究やモデル化についての研究から、無唾液糖たんぱ く受容体の親和性決定因子として、クラスタガラクトシドの原子価の他に他の決 定因子があるということが分かった。原子価を一定と仮定した場合、ガラクトー ス間の空間的な最大距離と分枝点においてガラクトース残基をつないでいる腕の 自由度もこの受容体の親和性に影響を及ぼしていた。 こういった基本的な規則を適用して上記の化合物、特に３価、４価および６価 のグリコシドを合成し、これらのクラスタグリコシドの親和性を決定した。 しかしながら、このどちらかといえば理論的な研究の結果のいくつかはかなり 疑わしいものである。まず第１に、ガラクトース残基の“最大”空間距離につい ては第１の兆候しか得られていない。これは使用されたモデルが、試験される構 造体に疎水性や水和作用、立体障害などの物理的作用によって課せられる拘束を 考慮していないからである。 第２に、たとえば、どちらかいえば疎水性のあ るアミノヘキシル鎖の分岐点に糖の一部を結合している提案されている腕の可変 性が非常に過大評価されている。疎水性のスペーサは他の疎水性構造体と、もし くは内部的に凝集する傾向がある。さらに、水環境中において分離した疎水性ス ペーサは、該スペーサの可変性を制限する比較的剛性のある水構造体によって取 り囲まれている。 被試験体であるクラスタグリコシドの親和性測定のために用いられる結合試験 において、Ｌｅｅらは非現実的なほど高い親和性を見いだしている。たとえば、 ４配位子、すなわちＡＳＯＲ、Ｌａｃ₄₀ＢＳＡ、ｔｒｉｓ（ｇａｌ） ＡＨＴ、 およびＡｓｐ（ｔｒｉｓ（Ｌａｃ）ＡＨＴ）₂についてそれぞれ０．５、０．２ ５、８，０００および４５ｎＭの親和性を見いだしている。上記の４配位子につ いてはまた他の者によっても試験された（参考文献２３，２５）。該他者および 本発明の発明者によって測定された親和性はそれぞれおよそ５、１５、４００， ０００および６，５００ｎＭが一般的であった。これらのより現実的な値はＬｅ ｅらが述べた値の少なくとも１０〜５０倍はあり、すなわちこれは該受容体につ いての現実の親和性は少なくとも１０〜５０倍低いということを意昧している。 こういった事実に基づけば、絶対的親和性の比較の代わりに、ＡＳＯＲまたは ｔｒｉｓ（ｇａｌ）ＡＨＴ（参考文献２３のｔｒｉｓ（ｇａｌ）単量体、または 本明細書のＴＧ（４Å））に対するクラスタグリコシドの親和性の相対的増加を 比較することは正当化される。Ｌｅｅらが述べた結果は、ｔｒｉｓ（ｇａｌ）と 比較した場合、３価のクラスタガラクトシドについては約８０〜１６０倍また６ 価のクラスタガラクトシドについては約６００倍の親和性の増加に相当し、これ はＴＧ（４Å）に非常に類似しており、およびＭａｒｙらによって開発された１ 価のクラスタグリコシド（参考文献２３）と同一である。 本発明に従えば、親和性の最大増加および、特に、３価のクラスタグリコシド についてＬｅｅらによって得られたような無唾液糖たんぱく受容体に対する特異 性はまださらにかなり改良することが可能であるということが分かった。これは コレステロールを低下させ、および／または肝親和性薬剤−ターゲットを目的と した用途という観点においては非常に望ましいものである。 発明の要約 本発明は、３分枝性または３価のクラスタグリ コシドにおける、クラスタグリコシドの糖類を該クラスタの分岐点に結合してい る、可変性と疎水性を有し、かつしばしば水和可能である長鎖またはスペーサの 導入に関する。末端ガラクトース基を有するクラスタグリコシドの場合、このよ うな鎖を導入することは著しく親和性を高めることになり、さらにもっと重大な ことは、肝実質細胞上の無唾液糖たんばく受容体に関して著しく特異性を高める ことになる。 本明細書において、「長い」とは少なくとも１０Åのスペーサを指し、好適に は２０Åまたはそれ以上のスペーサを指している。「親水性」スペーサとは、分 岐したまたは直鎖のＣ₁〜Ｃ₄アルキレン基、特にエチレン基、プロピレン基から 成り、これらは２つの親水性基たとえばオキソ、チオ、アミノ、アミドまたはウ レイド基の間に配置されている。このようなスペーサはたとえば、−［−ＨＧ− Ａｌｋ−］ｅ−と表してもよく、該式においてＨＧ基は独立して親水性基を表し 、Ａｌｋ基は独立して前述のアルキレン基を表し、およびｅは通常１〜８となり 、好適には１〜４である。可変性鎖は好適には２重結合および３重結合を含まず 、好適には親水性である。最後に、「水和性」基は一般には水素結合供与体およ び受容体の両方 を含んでいる。このような基は該鎖のまわりに水分子を集めることができる。 図に示したように、３分枝性ガラクトシドについてのたとえばオリゴエチレン グリコール単位から成る、本発明に従った可変性のある親水性および水和性鎖が ３．７から１９．５Åに伸びると、無唾液糖たんぱく受容体の親和性は２，００ ０倍高くなる。他方、クッペル細胞上のフコース／ガラクトースの親和性は、該 鎖が３．７から１９．５Åに伸びても一定のままである。 無唾液糖たんぱく受容体についての親和性と特異性が高くなったクラスタグリ コシドは、脂質と結合し、糖脂質を形成した後に、実質肝細胞によるリポたんぱ くと脂質胞の摂取を高めさせるために利用することができる。したがってこれは 効果的な低脂質血症剤と肝実質細胞固有担体の両方の開発に有望なものである。 発明の詳細な説明 本発明は、３分枝性クラスタグリコシドを提供するもので、該３分枝性クラス タグリコシドにおいて各グリコシド残基は、炭素原子やその他の適切な原子また は糖類のような基とすることができるクラスタの分岐点に、少なくとも鎖長が４ 原子 を有する可変で親水性があり、および／または水和性の長スペーサを介して付加 されている。 より詳細には、本発明に従ったクラスタグリコシドは式１によって表すことが でき、該式においてＧＯはグリコシド基を示し、Ｘ¹は可変性のある親水性スペ ーサであり、Ａは炭素原子や糖の一部のような分岐点であり、Ｚは末端基であり 、Ｘ²は結合基または末端基スペーサを表している。 さらに本発明は、該新規化合物、すなわち本発明に従った３分枝性クラスタグ リコシドを含む薬剤、ならびに製薬的に受け入れ可能な担体の用途を提供する。 好適には、グリコシドスペーサの鎖長は鎖中の４原子よりも長く、鎖中の８原 子またはそれ以上であり、または１０原子またはそれ以上である。ここにおいて 、グリコシドスペーサの鎖は少なくとも２つの親水性基を有することが好ましい 。原則的には親水性基であればよいが、該親水性基は好ましくは−Ｏ−，−ＣＯ −，−ＮＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＮＨＣＯ−，−Ｓ−，−Ｎ（ＣＨ₃）ＣＯ，お よびＣＯＮ（ＣＨ₃）−から選択される。−ＯＣＯ−および−ＣＯＯ−基を使用 してもよいが、これらの基は加水分解に対するその感度のために好適度は劣る。 本発明に従った３分枝性化合 物の生物学的安定性はメチルアセタール（Ｏ−Ｃ−Ｏ）をメチルチオアセタール またはエチレングリコールエーテルで置換することによって、アミドをメチルア ミドで置換することによって、およびエステルをチオエステル、チオエーテルま たはエーテルで置換することによって著しく改善することができる。 非常に適しているのはグリコシドスペーサが式２を満たす３分枝性クラスター グリコシドであり、該式においてＲ¹，Ｒ²，Ｒ³はそれぞれ水素原子または１〜 ４の炭素原子を持つアルキル基を示し、ｐおよびｑはそれぞれ１〜６の整数であ り、ｎおよびｒは０〜６の整数である。 式２のＲ¹，Ｒ²，Ｒ³は水素原子であり、ｎは０〜４の整数、ｐは２〜３の整 数、ｑは１〜３の整数、ｒは１〜５の整数であることが望ましい。 グリコシド残基（糖残基）は原則的には自由に選択することができるが、好適 には無唾液たんぱく受容体に対して非常に高い固有の親和性を有する、β−Ｄ− ガラクトシル、２−アセトアミド−２−デオキシ−ガラクトピラノシル，β−Ｄ −ラクトシル、１−フェニル−β−Ｄ−ガラクトシル、１−プロピル−β−Ｄ− ガラクトシル、または１−ブチル−β−Ｄ−ガラクトシルから成る単糖類 から選択される。 本発明に従った３分枝性クラスタグリコシドの個々の実施例においては、鎖中 の少なくとも４原子の鎖長を有する末端基スペーサがクラスタの分岐点である炭 素原子に付加される。 また、好ましくは鎖長は鎖中の４原子よりも長く、少なくとも６原子であり、 少なくとも８原子または１０原子またはそれ以上であっても好ましい。末端基ス ペーサの鎖は少なくとも１つのアルキレン基と少なくとも２つの親水性基を有し ていることが好ましく、この場合親水性基は好ましくは、−Ｏ−、−ＣＯ−、− ＮＨ−、Ｓ、−ＣＯＮＨ−、ＮＨＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＣＯＮ（ＣＨ₃） −、および−Ｎ（ＣＨ₃）ＣＯ−から選択される。 非常に適切であるのは末端基スペーサが式３を満たしている３分技性クラスタ グリコシドであり、該式においてＲ⁴，Ｒ⁵およびＲ⁶はそれぞれ水素原子または １〜４個の炭素原子を持つアルキル基であり、ｓ，ｔ，ｕはそれぞれ１〜６の整 数であり、ｖおよびｗはそれぞれ０〜４である。 式３のＲ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶はそれぞれ水素原子を表しており、ｖは１〜２の整数で あり、Ｗは０〜２の整数であり、ｓ，ｔ，ｕはそれぞれ１〜４の 整数であることが好ましい。 本発明に従った３分枝性クラスタグリコシドの特に好ましい実施例においては 、末端基スペーサはそれに付加された末端基を有しており、該末端基は選択的に 防御される反応基または親油基、薬剤残基および薬剤担体残基から選択される。 好適には、末端基は水酸基、１〜４の炭素原子を有するアルコキシ基、アミノ基 、３β−コレステロール残基、Ｎα，Ｎε−ジオレオイルリシン残基、５β−コ ラン酸−３α−オールオレート残基、５−コレイン酸−３β−オールオレート残 基、５β−コラン酸−３α、１２α−ジオールジオレート残基、またはリポたん ばく残基を有しており、とりわけコレステロール残基を有している。 本発明に従った適切な３分枝性クラスタグリコシドは式１で表すことができ、 該式においてＧＯ−はグリコシド残基であり、Ｘ¹はグリコシドスペーサであり 、Ｘ²は末端基スペーサであり、Ｚは末端基である。 分岐点Ａは炭素原子である必要はない。該分岐点はグルコース基のような糖類 などの基であってもよい。 本発明に従った特に好ましい３分枝性クラスタグリコシドは式４を満たし、該 式においてｑは１ 〜３の整数であり、ＧＯ−はガラクトース残基であり、−Ｏｃｈｏｌはコレステ ロール残基である。 本発明に従ったクラスタグリコシドは可変性のある親水性鎖（Ｘ¹）を介して クラスタの分岐点に糖類が付加されるという特異性によって、周知のクラスタグ リコシドとは異なっており、該可変性のある親水性鎖（Ｘ¹）はエチレングリコ ールやプロピレングリコールの単位のオリゴマ鎖により伸ばされても、伸ばされ なくてもどちらでもよいアルキレンジオールから成るものとすることができる。 引き続いて該分岐点は、好適には１０〜１５Å長さのペプチドのような鎖（Ｘ² ）を介して末端基ｚに付加され、該末端基ｚの組成は意図されている最終用途に 依存している。 糖類は好適にはガラクトシル、２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシル、１−フェニル−ガラクトピラノシル、１−プロピル−ガラク トピラノシル、１ブチル−ガラクトピラノシル、またはラクトシル基から成る。 これらのガラクトシル単位は無唾液たんばく受容体上のガラクトース結合部位に 対して固有の高い親相性を示す。上述の該クラスタガラクトシドは、従来のｔｒ ｉｓ−ｇａｌ−ｃｈｏｌのクラスタグリコシド成分よりも、無唾液糖たんぱく受 容体に対す る新和性および特異性がずっと高いという利点がある（２，０００倍まで）。 １９．５Å（少なくとも４炭素原子の）の可変性のある親水性鎖を用いてスペ ーサを引き延ばすことによって誘発された、本発明に従ったクラスタグリコシド である（図１５ａおよび実施例参照）ＴＧ（２０Å）（図１５Ａおよび実施例参 照）の親和性の増加は、ＴＧ（４Å）＝トリ（ガラクトース）［ｔｒｉｓ（ｇａ ｌ）］に比較して２，０００倍あることが観察されたが、これはｔｒｉｓ（ｇａ ｌ）と比較したａｓｐ（ｔｒｉｓ（Ｌａｃ）ＡＨＴ）₂についてＬｅｅら（参考 文献２４）によって実現されたもの（１７０〜６７０倍）よりもかなり大きい。 これは１つには、デンドライトの分岐点とグリコシドを連結しているＴＧ（２０ Å）のスペーサは高度に可変性と親水性があるという事実に起因している。この ようなスペーサの高い親水性によって水溶液中でのスペーサの最適の可変性と水 和性が得られる。Ｌｅｅら（参考文献２４）およびＭａｒｙら（参考文献２３） はスペーサを伸ばすために疎水性ヘキジル部を利用しているが、これは水溶液中 での３分枝性構造の広がりと可変性を次善のものとしかしない。 高い低脂質血症効力を持つ糖脂質を考える場合、 末端基Ｚは３β−コレステロール、Ｎα，Ｎε−ジオレオイルリシン、５β−コ ラン酸−３α−オールオレート、５−コレイン酸−３β−オールオレート、５β コラン酸−３α、１２α−ジオールジオレートのような親油性の強い基を有して いる。無唾液糖たんぱく受容体に関してクラスタグリコシド成分が高い親和性を 持つ結果として、この糖脂質の低脂質血症効力は非常に高く、肝実質絹胞による リポたんぱくまたは脂質胞の摂取が強く促進される。 肝実質細胞に抗感作ＤＮＡを向けるためにクラスタグリコシド構造体を使用す ることが意図されている場合には、末端基Ｚは酸と不安定なフェノールとのエス テルまたはフォスファミドバンドを介した５′末端の遊離リン酸塩基を介してク ラスタグリコシドのＸ²基に結合されているオリゴ核酸塩鎖を有している。肝に 抗感作ＤＮＡを向けることによって、所望でない遺伝子生成物の生合成を抑制す ることが可能となる。 高度にアテローム、を形成するリポたんぱく（ａ）［ｌｐ（ａ）］の合成の抗 感作抑制が意図されている場合には、末端基Ｚは塩基対配列５′−ＣＧＴＣＧＴ ＧＧＡＣＴＧＴＴＴＣＧを含んでもよい。この配列はｌｐ（ａ）のたんぱく質成 分であ る、アポリポたんぱく（ａ）について遺伝情報を指定するｍＲＮＡ（メッセンジ ャＲＮＡ）に特に結び付いている。 Ｂ型肝ウイルスの複製の抗感作抑制が目的とされている場合には、末端基Ｚは 塩基対配列５′−ＧＴＴＣＴＣＣＡＴＧＴＴＣＧＧを有している。この配列はＢ 型肝ウイルス抗原について遺伝情報を指定するｍＲＮＡを特に認識する（参考文 献２１）。 肝に抗ウイルス剤を向けるために、より詳細には肝実質細胞に抗ウイルス剤を 向けるために使用できるクラスタグリコシド構造を意図する場合には、末端基Ｚ は抗ウイルス作用を有する化合物を含む。基Ｘ²に抗ウイルス治療剤を結合させ ることは、酸−不安定フォスファミドバンドを介して実行することができる。 クラスタグリコシドとの誘導体に好適の抗ウイルス剤としては：５−（２−ブ ロモフェニル）−２′−デオキシウリジンと２′−フルオロアラビノフラノシル −５−ヨウドシトシンとがあり、これらはいずれもＢ型肝ＤＮＡポリメラーゼの 効力のある抑制剤である。これらの化合物は、リン酸化の後、チロシン（Ｘ²） の水酸基またはリジン（Ｘ²）の遊離ε−アミノ基に結合させることが できる。 リンシュマニア症に対する治療剤として、プリマキンを考えることができるが 、プリマキンは、その作用に本質的なものではない遊離カルボキシル基を介して 、グリコシドのＸ²に簡単に結合させることができる。 本発明による３分枝性クラスタグリコシドはそれ自体として周知の方法によっ て調製することができる。新しい３分枝性クラスタグリコシドの調製は本発明に よって含まれる主題である。 本発明は、たとえば、式５の３分枝性クラスタグリコシドの調製のための方法 を提供するものであり、該式においてＧＯ−はグリコシド残基であり、Ｘ²は末 端スペーサであり、Ｚは末端基であり、Ｒ¹〜Ｒ³はそれぞれ水素原子または１〜 ４の炭素原子を持つアルキル基であり、ｐとｑはそれぞれ１〜６の整数であり、 ｎとｒは０〜６の整数をであり、該方法においては、Ｇ′Ｏ−が防御グリコシド 残基である式６の化合物が式７の化合物と反応し、該式７においてＺ′は末端基 Ｚ、または該末端基Ｚによって置き換えられべき基を表しており、該基Ｚ′は得 られた化合物であり、該基Ｚ′が末端基Ｚによって置き換えられるべき基である 場合には、該基Ｚ′は基Ｚによって置き換 えられ、予めまたは引き続いて、得られた化合物のグリコシド残基は脱防御され る。 式７の化合物と式６の化合物の反応は、好適にはＮ−ヨウドコハク酸イミドと トリフルオロメタンスルフォン酸の存在下で実施される。 反応中、グリコシド残基は、たとえば第３ブチル酸カリウムの処理によって後 に取り除くことができる水酸基防御ベンゾイル基によって防御される。 この方法においては、式７のＺ′はたとえば防御反応性基であってもよく、該 防御反応性基は、脱防御の後、親油性基、薬剤残基および薬剤担体残基から選択 された末端基Ｚによって置き換えられる。 本発明はまた、式８の３分枝性クラスタグリコシドを調製するための方法を提 供するもので、該式８においてＧＯ−はグリコシド残基であり、Ｚは末端基であ り、Ｒ¹〜Ｒ³はそれぞれ水素原子または１〜４の炭素原子を持つアルキル基であ り、ｐとｑはそれぞれ１〜６の整数であり、ｎとｒは０〜６の整数であり、Ｘ³ は末端基スペーサであり、 該方法においては、Ｇ′Ｏ−が防御グリコシド残基である式６の化合物は、Ｑ がアミノ防御基で ある式９の化合物と反応し、得られた化合物のアミノ基は脱防御され、およびそ れによって得られた遊離アミノ基は−ＮＨ−Ｘ³−Ｚ基に転換され、予めまたは 引き続いて、得られた化合物のグリコシド残基が脱防御される。 これらの方法で出発材料として使用される式６の化合物は、好適には式１１の 化合物と式１０の化合物を反応させることによって調製される。 式１１の化合物と式１０の化合物の反応は、好適にはＮ−ヨードコハク酸イミ ドおよびトリフルオロメタンスルフォン酸の存在下で実施される。 本発明に従った方法の実施例は以下のステップを有する方法である： ａ）１−メチル−６−コハク酸イミジルアジペート（式１２）がＮ，Ｎ′−ジ シクロヘキシルカルボジイミドの存在下でＮ−ヒドロキシコハク酸イミドとの反 応によって１メチルアジピン酸からそれ自体において周知である方法によって調 製される。 ｂ）Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）−グ ルシンアミド（式１３、式においてＲ＝Ｈ、Ｑ¹＝Ｈ）がＮ，Ｎ′−ジシクロヘ キシルカルボジイミドの存在下でベンジルオキジカルボニルグリシンと２−アミ ノ− ２−ヒドロキシ−メチル−１，３−プロパンジオールとの反応によってそれ自体 において周知である方法で調製され、その後、防御ベンジルオキシカルボニル基 が、触媒としてのパラジウム／炭素の存在下でＨ₂との反応によってそれ自体に おいて周知である方法で取り除かれる。 ｃ）Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキジメチル）エチル）−Ｎ α（１−６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３、式においてＲ＝Ｈ、 Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）が（ａ）で得られた１−メチル−６−コハ ク酸イミジルアジテートと（ｂ）において得られた化合物との反応によってそれ 自体において周知の方法で調製される。 ｄ）Ｎ−［トリ［［（メチルチオメチル）オキシ］メチル］メチル］−Ｎα− （１−（６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３、式においてＲ＝−Ｃ Ｈ₂ＳＣＨ₃、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）が過酸化ベンゾイルの存在下 でジメチルスルフィドと（ｃ）で得られた化合物との反応によってそれ自体にお いて周知である方法で調製される。 ｅ）エチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシド （式１４、式においてＲ′＝ベンゾイル，Ｒ″＝−ＳＣ₂Ｈ₅）が、順に、塩化錫 （ＩＶ）、第３ブチル酸カリウム、最後にベンゾイルクロリドの存在下でエタノ ールエチオールと反応することによって、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ア セチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドからそれ自体において周知の方法で調製さ れる。 ｆ）２−ヒドロキシエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ −ガラクトピラノシド（式１４の化合物１４ｂ、式においてＲ′＝ベンゾイル（ Ｂｚｌ）およびＲ″＝−Ｏ（ＣＨ₂）₂ＯＨ）、３−ヒドロキシプロビル２，３， ４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（式１４の化合 物１４ｃ、式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝−Ｏ（ＣＨ₂）₃）ＯＨ）、５− ヒドロキシ−３−オキサペンタン２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイルーβ −Ｄ−ガラクトピラノシド（式１４の化合物１４ｄ、式においてＲ′＝Ｂｚｌお よびＲ″＝−Ｏ［（ＣＨ₂）₂Ｏ］₂Ｈ）および１１−ヒドロキシ−３，６，９− トリオキサウンデカン２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラ クトピラノシド（式１４の化合物１４ｅ、式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝ −Ｏ［（ＣＨ₂）₂Ｏ］４Ｈ）がＮ −ヨウドコハク酸イミドおよびトリフルオロメタンスルフォン酸の存在下におい てエチレングリコール、プロパンジオール、ジエチレングリコールまたはテトラ エチレングリコールとの（ｅ）において得られた化合物との反応によってそれ自 体において周知である方法において調製される。 ｇ）Ｎ−［トリ−Ｏ−（オリゴ−オキサアルキル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ ル）メトキシメチル］メチル−Ｎα−（１−（６−メチル）アジピル）グリシン アミド（式１５ｂ〜１５ｅ）がトリフルオロメタンスルフォン酸およびＮ−ヨウ ドコハク酸イミドとの存在下で（ｄ）で得られた化合物と化合物１４ｂ〜１４ｅ のどれか１つとを結合させ、それに続いて第３ブチル酸カリウムで該生成物を処 理することによってそれ自体において周知の方法において調製される。 グリコシドとクラスタの分岐点の間に延長された可変性のある親水性鎖を有す るクラスタグリコシドを調製するための本発明に従った方法の第２実施例は以下 のようなステップを有する方法である： ａ）１−ニトロ４−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシプロピル）ブタン （式１６，式においてＲ＝Ｈ、Ｒ′＝ＮＯ₂）が１−アミノ４−ヒ ドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシプロピル）ブタン（式１６、式においてＲ ＝Ｈ、Ｒ′＝ＮＨ₂）に、Ｚｎ／ＨＣｌまたはＬｉＡｌＨ₄によって、それ自体に おいて周知の方法で還元される。この化合物のアミノ基は等価量のジイソプロピ ルエタノールアミンの存在下でトリフルオロ酢酸アンヒドリドとの反応によって 、トリフルオロアセチル基によりそれ自体において周知の方法において防御され 、１−Ｎ−（４−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシプロピル）ブチル）ト リフルオロアセトアミド（式１６、式においてＲ＝Ｈ、Ｒ′＝−ＮＨＣＯＣＦ₃ ）を形成する。 ｂ）Ｎ−［トリ［［（メチルチオメチル）オキシ］プロピル］メチル］−２， ２，２−トリフルオロアセトアミド（式１６、式においてＲ＝−ＣＨ₂ＳＣＨ₃、 Ｒ′＝−ＮＨＣＯＣＦ₃）が過酸化ベンゾイルの存在下においてジメチルスルフ ィドと（ａ）で得られた化合物との反応によって、それ自体において周知の方法 により調製される。 ｃ）アルカノール１１−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサウンデカン２， ３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１ ４ｅ）と（ｂ）で得られた化合物の誘導体がＮ−ヨウドコハク酸イミドとトリフ ルオ ロメタンスルフォン酸の存在下での反応により、それ自体において周知である方 法において生じる。第３ブチル酸カリウムによる処理による形成された生成物の 脱ベンゾイル化により式１７の化合物を生じる。式においてＲ＝Ｈ、Ｑ³＝−Ｃ ＯＣＦ₃である。 ｄ）（ｃ）において得られた化合物を水溶液中にてピペリジンで処理して防御 トリフルオロアセチル基を除去した後、脱防御アミノ基を１０〜１５Åの長さの オリゴペプチド様スペーサＸ³を介して末端基Ｚと共に誘導することができる。 グリコシドとクラスタの分岐点の間に延長された可変性、親水性スペーサを有 するクラスタグリコシドの調製のための本発明に従った方法の第３実施例は以下 のようなステップを含む： ａ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリアリル−β−Ｄ−グリコピラノシル− ６−フェナセチルエステルがフェナセチルクロライドとの反応およびそれに続く ２，３，４水酸基のアリルブロミドとの反応によりピリジン中で１−Ｏ−メチル β−Ｄ−グルコース酸から調製される。 ｂ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリ（プロピル２−アミノエチルスルフィ ド）−β−Ｄ−グルコピラノース−６−フェナセチルエステルが３ −アミノ１−プロパンチオールの存在下で該化合物の光活性化により１−Ｏ−メ チル−２，３，４−トリアリル−β−Ｄ−グルコピラノース−６−フェナセチル エステルから調製された。 ｃ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリ（プロピル２−（Ｎ−エチルチオウレ イド−Ｎ′−［ｐ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニレン）］スルフィド ）−β−Ｄグルコピラノース６−フェナセチルエステルが１−フェニル−（β− Ｄ−ガラクトピラノシル）４−イソチオシアネートの１，５等価物と１−Ｏ−メ チル２，３，４−トリ（プロピル２−アミノエチルスルフィド）β−Ｄ−グルコ ピラノース６−フェナセチルエステルとの反応によって合成される。 ｄ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリ（プロピル２−（Ｎ−エチルチオウレ イド−Ｎ′−［ｐ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニレン）］スルフィド ）−β−Ｄ−グルコピラノース（式２３）がフェニルアセチルエステラーゼを用 いた３７℃における酵素消化により１−Ｏ−メチル２，３，４−トリ（プロピル ２−）Ｎ−エチルチオウレイド−Ｎ′−［ｐ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル） フェニレン）］スルフィド）−β−Ｄ−グルコピラノース６−フェナセチルエス テルから調 製される。 本発明を以下の実施例を用いてさらに詳細に説明する。 実施例１ これらの化合物が以下のステップにより調製された（上述の出発材料はそれぞ れ平均的な品質の市販品である）： Ａ）１−メチル−６−コハク酸イミジルアジペート（式１２）。 １００ｍｌアセトン中１．６ｇ（１００ｍｍｏｌ）１−メチルアジペート溶液 に１１．６ｇ（１００ｍｍｏｌ）Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドを添加した。次 に、１００ｍｌアセトン中２２．８ｇ（１１０ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘ キシルカルボジイミドを添加することによってカップリングを開始させた。２０ ℃にて２時間撹拌した後、濾過により沈殿を除去した。濾液を蒸発乾燥させ、溶 離液としてジクロロメタン中５％のメタノールを用いて、１５０ｍｌ硅酸ゲルカ ラムに通してクロマトグラフィにより分析した。目的としている生成物を含む留 分を集め、溶剤を除去した。収率：２４．３ｇの純１−メチル−６−コハク酸イ ミジルアジペート（９４ｍｍｏｌ：９４％）。 ｂ）Ｎ−（ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキ シメチル）エチル）−Ｎα−（ベンジルオキシ−カルボニル）グリシンアミド（ 式１３、式においてＲ＝Ｈ、Ｑ¹＝ＢＯＣ）。 ５０ｍｌジメチルフォルムアミド中１．８ｇ（トリ−Ｏ−ヒドロキシメチル） アミノメタン（１５ｍｍｏｌ）および３．１５ｇ（１５ｍｍｏｌ）Ｎ−ベンジル オキシカルボニルグリシンを含む溶液に、３．７ｇ（１７ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ′− ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加し、該懸濁液を２日間２０℃にて撹拌し た。反応後、該懸濁液を濾過し、溶剤を蒸発除去させた。硅酸ゲルカラム（１５ ０ｇ）にて残留物を溶離液としてジクロロメタン中１０％のメタノールを用いて 、硅酸ゲルカラム（１５０ｇ）により残留物の精製を行った後、表題の化合物の 白色結晶２．２５ｇ（７．１ｍｍｏｌ、４７％）を得た。 ｃ）Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）Ｎα− （１−（６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３の化合物、式において Ｒ＝Ｈ、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）。 （ｂ）にて得られた化合物の防御Ｎ−ベンジルオキシカルボニル基を還元加水 素分解によって除去した。該目的のために、（ｂ）で得られた化合 物１５．６ｇ（５０ｍｍｏｌ）をエタノール／メタノール混合物（１／１，ｖ／ ｖ）２００ｍｌ中にて溶解させ、および該溶液をＮ₂と共に分散させた。次に、 ２００ｍｇＰｄ／Ｃを添加し、該溶液に２０℃にて２時間、大気圧において水素 を充分含ませた。還元した後、パラジウム／炭素を濾過し、溶剤を蒸発させた。 粗反応性生成物（式１３、式においてＲ＝Ｑ¹＝Ｈ）を式１２と誘導体生成の ために直接用いた。式１２および１３の化合物のうち１２．４ｇ（５０ｍｍｏｌ ）を１００ｍｌジメチルホルムアミドに溶解させ、３時間２０℃にて保温し、そ の後該懸濁液を１８時間４℃にて保管した。沈殿物を濾過によって取り除き、濾 液を蒸発させた。残留物をジクロロメタン中２０％のメタノールにより硅酸ゲル カラム（２００ｇ）で精製した。Ｎヒドロキシコハク酸イミジルがピークに達し た後すぐにカラムから生成物を抽出した。溶剤を除去した後、１２．８ｇの白色 、非晶質粉末（４０ｍｍｏｌ、８０％）が残った。 ｄ）Ｎ−［トリ［［（メチルチオ−メチル）オキジ］メチル］メチル］−Ｎα− （１−（６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３、式においてＲ＝−Ｃ Ｈ₂ＳＣＨ₃、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ ＣＯＯＣＨ₃）へのトリオールのチオメチル化。 チオメチル化はＭｅｄｉｎａら（参考文献１６）の方法に従って行われた。氷 のように冷たい２０ｍｌアセトニトリルに溶解させた（Ｃ）にて得られた０．９ ６ｇ（３ｍｍｏｌ）の化合物に、４．６ｍｌ（５４ｍｍｏｌ）ジメチルスルフィ ドと６．５ｇ（２７ｍｍｏｌ）過酸化ベンゾイルを添加した。３時間０℃にて保 温した浚、２０ｍｌエチルアセテートを添加し、該溶液を２５ｍ１０．１ＮＮａ ＯＨにより２度抽出した。この有機相を捕集し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ脱水した 。該生成物をＬＨ₂Ｏカラム（７０×２．５ｃｍ）によるクロマトグラフィおよ び硅酸ゲルカラム（２００ｇ）によるクロマトグラフィによって溶離液としてジ クロルメタンを用いて分析した。エーテル／石油エーテル（６０゜〜４０゜）か らの結晶化により１．０３ｇ白色結晶（２．０ｍｍｏｌ、６７％）が得られた。 ｅ）エチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガラ クトピラノシド（式１４、式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝−ＳＣ₂Ｈ₅）。 β−Ｄ−ガラクトピラノシルペンタアセテートから７．８ｇを５０ｍｌジクロ ロエタンに溶解さ せた。溶剤を取り除き、残渣を７５ｍｌジクロロエタンに加え、１．６３ｍｌ（ ２２ｍｍｏｌ）のエタンチオールを添加した。該溶液を氷の上に置き０．３５ｍ ｌ（３ｍｍｏｌ）塩化錫（ＩＶ）を滴下した。該溶液を１時間保温した。完全に 反応させた後、該保温された物を順次、５０ｍｌ１Ｍのフッ化カリウムを２回と １０％（ｖ／ｖ）ＮａＨＣＯ₃水とを用いて抽出した。該有機相をＭｇＳＯ₄を用 いて乾燥させ、引き続いて脱水した。次に残渣に０．５ｇブチル酸カリウムが添 加された１００ｍｌのメタノールに溶解させた。該懸濁液を１時間２０℃にて撹 拌し、ダウエックス／ピリジンを添加して中和した。ダウエックスによる濾過の 後、溶剤を蒸発させた。残渣を５０ｍｌピリジン中に加え、１２．５ｍｌ（１２ ０ｍｍｏｌ）ベンゾイルクロリドを添加してアクリル化を開始させた。１時間、 ２０℃にて反応させた後、余分のベンゾイルクロリドをＨ₂Ｏを添加して不活性 化させ、その後溶剤を蒸発させた。油性の残渣は５０ｍｌジクロロメタンで溶解 させた後、５０ｍｌＨ₂Ｏおよび５０ｍｌ１０％（ｖ／ｖ）ＮａＨＣＯ₃水にて洗 浄した。該有機相をＭｇＳＯ₄により濾過し、蒸発させ、１０．３ｇ（１６ｍｍ ｏｌ；８１％）エチル−２，３，４，６−テトラ− Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを得た。 ｆ）エチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシドへのアルキレンジオールの連結。 １−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトビラ ノシル）−２−エタノール（８０％、化合物１４ｂ）、 １−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラ ノシル）−３−プロパノール（８３％、化合物１４ｃ）、 １−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラ ノシル）−３−オキサペンタン−５−オール（９０％、化合物１４ｄ）および １−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラ ノシル）−３，６，９−トリオキサンウンデカン−１１−オール（９３％、化合 物１４ｅ） を形成するためのアルキレンジオール（エチレングリコール、プロパンジオール 、ジエチレングリコールおよびテトラエチレングリコール）とｅ）で得られた化 合物の誘導体形成がＦｌｕｅｇｅｌｉらの方法（参考文献１８）に従って実施さ れた。 ｇ）β−Ｄ−ガラクトシル誘導体のＮ−［トリ［［［（メチルチオメチル）オキ シ］メチル］メチル］−Ｎα−（１−（６−メチル）アジピル）グリジンアミド への連結。 （ｄ）で得られた化合物１００ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）と（ｆ）で得られた化合 物の内の１つの化合物０．７２ｍｍｏｌとを４ｍｌジクロロエタン／テトラヒド ロフラン（１／１、ｖ／ｖ）に溶解させた。分子ふるい（４Å）を添加し、懸濁 液にＮ₂を通しながら１５分間撹拌した。１７０ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）Ｎ− ヨウドコハク酸イミドおよび１２ｍｇ（０．０７５ｍｍｏｌ）トリフルオロメタ ンスルフォン酸を溶解させた８．５ｍｌジクロロエタン／テトラヒドロフランを 添加し反応を開始させた。この反応の後、ピリジンを添加し、該溶液を濾過し、 ２５ｍｌ １Ｍ Ｎａ₂Ｓ₂Ｏ₃および１０％（ｖ／ｖ）ＮａＨＣＯ₃水によって抽 出した。生成物をＬＨ₂Ｏカラム、次に硅酸ゲルカラムを使ったゲル排除により 単離させた。収率：種々のω−ヒドロキシ−アルキル２，３，４，６−テトラ− Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドのについて２４〜５３％。 防御クラスタグリコシドの脱ベンゾイル化は以下のように行われた。１０ｍｌ メタノール／１， ４−ジオキサン（３／１）中の該クラスタグリコシド５０μｍｏｌに、６０ｍｇ ブチル酸カリウムを添加した。該溶液を４時間２０℃にて撹拌した。反応後、該 溶液をダウエックスピリジンによって中和し、該有機相を蒸発させた。残渣を水 に加え凍結乾燥させた。Ｓ１００カラムによるゲル排除を行い、式１５ｂから１ ５ｅの純粋生成物を単離させた。 実施例２ このように調製された化合物の最適の分子構造を最小−機械エネルギ計算によ って計算することができる。これによって問題をクラスタグリコシド内の隣合っ ている糖類の空間距離を計算することが可能となる。調製されたクラスタグリコ シドのこのような計算の結果を下の表に挙げた： ＊）最大鎖長さ。糖のアノマ中心とクラスタグリコシドの分岐点の間の距離と して定義される。 ＊＊）クラスタ糖分子内の隣り合った２つの糖類間の距離。 表Ｉから明らかなようにクラスタ内の隣あった２つの糖類間の認識可能な最大 距離は、クラスタグリコシドの分岐点に糖類が固定されている鎖の長さの増加に つれて増加する。また特に最大鎖長（ＴＧ（１３Å）およびＴＧ２０Å）の場合 、該鎖の可変性は非常に大きく、その結果糖類は空間内の理論的に許容可能な位 置を占めることができると思われる。以下の実施例３に示されるように、このこ とは無唾液たんぱく受容体とクラスタグリコシドの最適の結合を実現するために 非常に重要なことである。 実施例３ クラスタグリコシドの親和性は結合の研究によって実証することができる。こ れらの研究の中では、これまでに述べられた手順に従ってラットの肝から単離し た実質細胞にラジオアイソトープによる標識無唾液オロソムコイドが結合するこ とを該化合物はどの程度抑制することができるのかということが研究されている （参考文献１７）。抑制が生じる糖濃度が親和性を判断する１つの目安 となる。 肝実質細胞上の無唾液糖たんぱくについてのクラスタグリコシドの特異性に関 する考えは肝クッペル細胞上の同様にガラクトースを認識するフコース／ガラク トース受容体についての親和性と該受容体の親和性を比較することによって得る ことができる。肝クッペル細胞上のガラクトース認識フコース／ガラクトース受 容体の親和性は、クッペル細胞（１〜１．５×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）とラク トース化されたラジオアイソトープ標識低濃度リポたんぱく（¹²⁵Ｉ−Ｌａｃ− ＬＤＬ）との結合を該化合物がどの程度阻止するかということを調べている結合 の研究によって決定することができる。その目的のために、２％ＢＳＡおよび２ ｍＭＣａＣｌ₂が補足されたＤＭＥＭ培養液中のクッペル細胞を１ｎＭ〜３００ μＭの範囲の濃度において、３μｇ／ｍｌ¹²⁵Ｉ−Ｌａｃ−ＬＤＬによって、化 合物の存在または不存在下で、２時間４℃にて培養した。培養後、肝実質細胞に 対する¹²⁵Ｉ−ＡＳＯＲの結合についての方法と同じ方法で、クッペル細胞に対 する¹²⁵Ｉ−Ｌａｃ−ＬＤＬの結合を測定した。 表２：肝実質細胞上の無唾液糖たんぱく受容体に対する種々のクラスタグリコ シドの親和性 親和性は抑制定数Ｋｉの逆数として定義される。 図１から明らかなようにグリコシドスペーサの長さが増大すると、その結果変 位曲線は左側（低濃度）に著しくずれることになる。これは無唾液糖たんぱく受 容体（ＡＳＧＰｒ）からの無唾液オロソムコイドをクラスタグリコシドが変位す ることができる能力の著しい増大を示している。言い換えれば：抑制定数Ｋｉの 逆数として表される親和性は著しく増大するということである（表２）。このよ うに、１９．５Åの鎖長を有するＴＧ（２０Å）は３．７Åの鎖長を有するＴＧ （４Å）（ｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃｈｏｌのクラスタグリコシド部）よりも無唾液 糖たんぱく受容体に関する親和性が２，０００倍の大きさとなる。さらにまた表 ２から、鎖長は無唾液糖たんぱく受容体の親和 性を決定する唯一のパラメータではないと結論付けることができる。ＴＧ（１０ Å）はＴＧ（１３Å）よりもいくらか僅かにその親和性が高い。より疎水性の高 い基がガラクトース基の直接的な環境に位置する場合には、無唾液糖たんぱく受 容体の親和性はより高くなるものと思われる。Ｃｏｎｎｏｌｌｙらの研究はこれ を確認していると思われる（参考文献２０）。 図２から分かるように、鎖の長さの増加がクッペル細胞上の肝フコース／ガラ クトース受容体の親和性を著しく変化させることにはならない。このことは親和 性と同時に、鎖長の増大とともに、実質細胞上の受容体についての特異性も増大 するということを意昧している。 無唾液糖たんばく受容体によるクラスタグリコシドの認識を最適化したＬｅｅ ら（２４）や、Ｍａｒｙら（２３）とは反対に、我々は無唾液糖たんぱく受容体 について最適の選択性を有するクラスタグリコシドを作り出すことを試みた。こ のことは、（疎水性スペーサ分子を有する）オリゴマｔｒｉｓ（ｇａｌ）化合物 、またはその他の高原子価のクラスタにおけるように、お互いから余り離れてい ないところに位置している高密度のガラクトース単位を有するクラスタグリコシ ドは避け るべきであるということを示唆している。これらの化合物はクッペル細胞上のフ コース／ガラクトース受容体について高い親和性を示しており、したがって無唾 液糖たんぱく受容体に対して低特異性を示している（参考文献２２）。 特に実質細胞を（リポ）たんぱくまたは細胞内脂肪粒子誘導薬剤担体の標的と する場合に、クラスタグリコシドを適用することを目的とする場合には、これは 重要である。 最も長いスペーサＴＧ（２０Å）を有するクラスタグリコシドは、肝実質細胞 上の無唾液糖たんぱく受容体についての高い親和性と特異性に鑑み、低脂質血症 治療薬または肝薬剤担体に機能化するための有望なリガンドである。 実施例４ クラスタグリコシドＴＧ（２０Å）から出発する糖脂質の調製： ａ）Ｎ−［トリ−Ｏ−（３，６，９−トリオキサンウンデカニル−β−Ｄ−ガラ クトピラノシル）メチル）メチル−Ｎα−１−（アジピル）グリシンアミド（式 １８）。 ５００ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）ＴＧ（２０Å）（式１５ｅ）を９．７５ｍｌ 、１，３−ジオキサン：水混合物（７７：２３）に溶解させ、０． ２５ｍｌ４Ｎ水酸化ナトリウムを添加した。該溶液を１５分間室温にて撹拌し、 その後該塩基性溶液を酢酸で中和した。次に、溶剤を蒸発させ、残渣をＳｅｐｈ ａｃｒｙｌ Ｓ１００−ＨｉＬｏａｄカラムを使ってクロマト分析を行った。収 率：３４０ｍｇ（７２％）。 ｂ）グリシン−（５−コレステン−３β−イリスタ）−ヒドロトリフルオロアセ テート（式１９）。 ３．８７ｇ（１０ｍｍｏｌ）コレステロールを１００ｍｌジクロロエタン中で ８９０ｍｇ（５ｍｍｏｌ）Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンおよび１．０ ３ｇ（５ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジクロロヘキシルカルボジイミドを含む溶液に添加 した。１２０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンを触媒量添加 し反応を開始させた。５０℃にて３時間の保温を行った後、沈殿をろ過し、ろ液 を１００ｍｌ１０％ＮａＨＣＯ₃水溶液を順次２回用いて抽出した。該有機相を 硫酸ナトリウム上で乾燥させ溶剤を除去した。次に残渣を硅酸ゲル６０カラムを 用いて溶離液としてジクロロメタン中２０％メタノールによりクロマトグラフ分 析にかけた。生成物は最終的にエーテル／水から結晶化させた。収率：２．２３ ｇ（８２％）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グリシン−（５−コ レステン−３β−イリスタ）。この化合物（０．５５ｇ；１ｍｍｏｌ）のベンジ ルオキシカルボニル基は３０分間２０℃にてジクロロメタン中１０ｍｌ２０％ト リフルオロ酢酸による処理によって取り除かれた。脱防御の後、トルエンを添加 し、溶媒を蒸発させた。純粋な生成物をエタノール．／ジクロロメタン混合物か らトリフルオロアセテート塩として結晶化させた。収率：式１９の化合物５２０ ｍｇ（９２％）。 ｃ）Ｎ−Ｎ−［トリ−Ｏ−（３，６，９−トリオキサウンデカニル−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシル）メチル）メチル−Ｎα−（１−（６−（５−コレステン−３ β−イロキシ）グリシル）アジピル）グリシンアミド（式２０）。 式１８の化合物３４０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）、８０μｌ（０．５ｍｍｏｌ ）ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍｍｏｌ、８０μｌ）および式１９の化 合物２３０ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を７ｍｌジメチルアセトアミドに溶解させた 。１００ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）ＢＯＰ試薬を添加し、結合を開始させた。３ ０分間２０℃にて保温した後、溶剤を蒸発させ、残渣を水に加え溶液を凍結乾燥 させた。粗生成物を溶離液としてメタノールを使いＬＨ２０カラムにより、また 次に溶離 液としてメタノールを用い硅酸ゲル６０カラムによりクロマトグラフ分析を行い 精製した。収率：式２０の化合物２０１ｍｇ（４６％；ＴＧ（２０Å）−コレス テロール）。 実施例５ このようにして調製された化合物ＴＧ（２０Å）−コレステロール（式２０） を用いて血清コレステロールレベルを低下させることができる。 このことは次のように実証された。雄のラット（２５０〜３００ｇ）にエーテ ルを用いて麻酔をかけた。次いで０．５６ｍｇ、０．１８ｍｇ、０．０５６ｍｇ または０ｍｇのＴＧ（２０Å）−コレステロール（式２０）または０．５６ｍｇ トリ−グルコース−コレステロール（式２１）が溶解している５００μｌＰＢＳ をペニス静脈内に注入した。図３に示した時間において、３００μｌの血液試料 を眼窩穿剌により採取した。この血液試料を遠心分離器にかけ（５分；１，５０ ０ｇ）、血清をＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社のＣＨＯＤ−ＰＡＰ キットによるコレステロール試験に用いた。注入２４時間後にラットから採血し 、該採血を遠心分離器にかけ、その後血清をピペットで採取した。次に、該血清 を密度勾配超遠心分離にかけ、種々のリポたんぱく画分を単離し た：ＨＤＬ（１．２１＜ｄ＜１．０５），ＬＤＬ（１．０５０＜ｄ＜１．０１９ ）、ＩＤＬ（１．０１９＜ｄ＜１．００６）、ＶＬＤＬ（ｄ＜１．００６）。最 後にこれらのリポたんぱく画分の全コレステロール濃度をＣＨＯＤ−ＰＡＰキッ トを用いて試験した。 図３は血清コレステロールの全レベルがＴＧ（２０Å）−コレステロールを注 入した結果として低下していることを示している。この低下は投与量に依存して いる。偽薬を注入された対照ラットの血清中の全コレステロール含有量は測定さ れた時間にわたって一定である。ｔｒｉｓ−ｇｌｕ−ｃｈｏｌ（式２１）の注入 は血清からコレステロールを除去するガラクトース−特異性を示すコレステロー ルレベルの変化にはつながっていない。これまでに開発されたｔｒｉｓ−ｇａｌ −ｃｈｏｌ（式２２）と比較した場合、その効力は少なくとも２５倍増加した（ 参考文献１５）。 さらに、コレステロールレベルの縦続的低下は注目に値する。０．５６ｍｇＴ Ｇ（２０Å）−ｃｈｏｌを一度投与した後２４時間経過しても、コレステロール レベルは対照値には戻ってはいない。 ２４時間後に見られた全コレステロールレベルの低下が血清ＨＤＬレベルの低 下に反映されてい る（図４参照）。ＨＤＬレベルは投与量に依存して低下し、ＴＧ（２０Å）−ｃ ｈｏｌの注入後著しく低下している。ＬＤＬレベルも同様にＴＧ（２０Å）Ｃを 投与した後この時間に低下している。他のリポたんぱくの濃度はＴＧ（２０Å） −ｃｈｏｌによって有意に影響されていない。しかしながらこれらのデータを内 挿していく場合、試験時間は最適ではなく、ＨＤＬはラットの中の最も主要なリ ポたんぱくであり（６５〜７０％）、したがってＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの蓄 積は特にＨＤＬ中で発生するという事実を考慮しておくべきである。 １２指腸、胆管および心臓静脈にカテーテルが装備されたラットにＴＧ（２０ Å）Ｃ（０．５６ｍｇ、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）に溶解されている）も胆管流 を離れる肝からの胆汁酸の胆管分泌、および一定不変のコレステロールの胆管分 泌を増大させる。おそらく、リポたんぱく誘導コレステロール摂取についてのＴ Ｇ（２０Å）Ｃ−誘発増加は、ラットの胆汁酸分泌と有効に結び付いていると思 われる。このことは低コレステロール血症治療薬として、ＴＧ（２０Å）Ｃを適 用できる可能性と重大な関係があると思われる。（図５参照） 実施例６ このようにして調製された化合物ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（式２０）を肝実 質細胞にＬＤＬを向けるために用いることもできる。 これを実証するために、単離させた低密度リポたんぱくにそれ自体において周 知である方法に従ってＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷し、粒子の生体内挙動を 調べた。ＰＢＳ中のＬＤＬ（５０μｇ）を、０、５、１５、および５０μｇＴＧ （２０Å）−ｃｈｏｌとともに３０分間２０℃にて保温した。これによってラッ トに静脈注射した後のＬＤＬの挙動が変化することになった。これは図６に示さ れている。ＬＤＬが負荷されていない粒子（¹²⁵Ｉで識別）は静脈注射後血粒か らゆっくりとしか消退していかず、肝によって摂取されるのは非常にごく僅かの 量だけであるのに対し、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌが負荷された粒子は取り除か れ、非常に速く肝内に取り込まれる。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの高い親水性の ために、この化合物の交換は、ＬＤＬと他のリポたんぱくおよび皮質部分との間 で非常に早く起こる。これは数分後の血流のＬＤＬレベルの安定化につながるも のである。 次に、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌのＬＤＬにお ける蓄積により、ＬＤＬの生理学的割合を変化させる。この複合体はガラクトー ス特有の経路を介して肝によって摂取される。しかしながら肝は２つのガラクト ース特有の状態をもっている。ここで、この複合体は肝の実質細胞によって摂取 されるのか、それともクッペル細胞によって摂取されるのかを立証することがで きる。図７は、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷した結果として肝によって摂取 されたＬＤＬが実質細胞にかなり配置されていることを示している。ＴＧ（２０ Å）−ｃｈｏｌが負荷されていない肝によって摂取されたＬＤＬは主にクッペル 細胞中にある。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ／ＬＤＬ複合体を注入する１分前に、 ５０ｍｇ／ｋｇ無唾液フェチュインを予め注入することによる無唾液糖たんぱく 受容体の遮断は、肝実質細胞による摂取を著しく阻害することになる。これは、 この複合体を負荷することが実質細胞中の無唾液糖たんぱく受容体を介する肝摂 取につながるということを示している。 このことは、ＴＧ（２０Å）（式１５ｅ）またはＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（ 式２０）の低脂質血症治療剤としての、または肝実質細胞に薬剤担体を向ける作 用物質としての利用の可能性にとって非常に重要なものである。 実施例７ リポたんぱく（ａ）（ｌｐ（ａ））の生体内における挙動に対するＴＧ（２０ Å）Ｃの影響。 このようにして調製されたＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（式２０）は、肝実質細 胞にａｐｏ（ａ）を向けるために使用することができる。高レベルのｌｐ（ａ） は肝に関係する疾病や血管に関係する疾病の発生と相関関係がある。今日までの ところ、発病を低下させる充分な臨床的治療法を適用することはできない。ＴＧ （２０Å）Ｃを肝摂取およびｌｐ（ａ）の処理を剌激するために用いることがで きるかどうかを調べるために、単離されたｌｐ（ａ）にそれ自体において周知で ある方法に従ってＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷し、該粒子の生体内挙動を調 べた。ＰＢＳ中のｌｐ（ａ）（５０μｇ）を０、５、１５、５０μｇＴＧ（２０ Å）（−ｃｈｏｌ）とともに３０分間２０℃にて保温した。この負荷がラットに 静脈注射を行った後のａｐｏ（ａ）の挙動の変化を導いた。これは、図８に示さ れている。負荷されていないａｐｏ（ａ）粒子（¹²⁵Ｉで標識化されている）が 静脈投与後、血流から非常にゆっくりとしか消失せず、ごくわずかの程度にしか 肝によって摂取されないのに対し、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負 荷された粒子は浄化され、負荷されていない粒子の場合よりもずっと早く肝内に 摂取される。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの親水性が非常に高いために、この化合 物の交換はｌｐ（ａ）とその他のリポんぱくおよび脂質分との間で非常に速やか に行われる。これによって数分後に血流中のｌｐ（ａ）レベルの安定化が図られ る。 次に、ｌｐ（ａ）中のＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの蓄積によってｌｐ（ａ）の 生理学的挙動が変化する。該複合体はガラクトース特有の経路を介して肝によっ て摂取される。しかしながら肝は２つのガラクトース特有の受容体を有している 。該複合体は、肝上の実質細胞によって摂取されるのか、それともクッペル細胞 によって摂取されるのかを実証することができる。表３は、ＴＧ（２０Å）−ｃ ｈｏｌを負荷した結果として、肝によって摂取されたｌｐ（ａ）が実質細胞内で ほとんど回収される（５４±１１％）ことを示している。ＴＧ（４Å）Ｃが負荷 されたｌｐ（ａ）は肝によって摂取され、主にクッペル細胞内にある。このこと は、ＴＧ（４Å）Ｃとは対照的に、ＴＧ（２０Å）Ｃは肝実質細胞にｌｐ（ａ） を向けることに、より効果的であることを示唆している。¹²⁵Ｉ−ｌｐ（ａ）の ＴＧ（２０Å）Ｃ誘発肝摂取は、 １５０ｍｇのＮ−アセチル−ガラクトースアミンをラットに予め注入することに よって阻止することができるので（データは示されていない）、このことは該化 合物の負荷が実質細胞内の無唾液糖たんぱく受容体を介した肝摂取につながると いうことを示している。 これは、ｌｐ（ａ）を低下させる治療薬としてのＴＧ（２０Å）（式１５ｅ） またはＴＧ（２０Å）−Ｃｈｏｌ（式２０）の適用の可能性にとって非常に重要 なことである。 表３：種々の量のＴＧ（２０Å）ＣまたはＴＧ（４Å）Ｃを負荷されたｌｐ（ ａ）の肝会合に対する種々のタイプの細胞の寄与。 ¹²⁵Ｉ−Ｌｐ（ａ）（５０μｇ）を５０μｇのＴＧ（２０Å）ＣまたはＴＧ（ ４Å）Ｃと５００μｌＰＢＳ中で混合した。室温にて３０分放置した後、該肝混 合物をラットに体重１ｋｇあたり５０μｇのアポリポたんばく投与量にて注射し た。注射後１０分で実質細胞、内皮細胞およびクッペル細胞を肝から単離し、放 射能数値を測定した。数値は、細胞たんぱく１ｍｇあたりの注入投与量の１０- ３．％として表し、３回の実験の平均±ｓ．ｅ．ｍである。 参考文献 1）Chabala and Shen，Carbohydr．Res．67：55-63（1978）． 2）Ponpipom et al.，Can．J．Chem．58：214-220（1979）． 3）Slama and Rando，Carbohydr．Res．88：213-221（1981）． 4）Roelen et al.，J．Med．Chem．34：1036-1041（1991）． 5）Bussian and Wriston，Biochim．Biophys．Acta 471：336-340（1977）． 6）Jonah et al.，Biochim．Biophys．Acta 541：321-333（1978）． 7）Surolia and Bacchawat，Biochim．Bioiphys．Acta 497：760-765（1977）． 8）Hoekstra et al.，Biochim．Biophys．Acta 603：336-346（1980）． 9）Spanjer and Scherphof，Biochim．Biophys．Acta 734：40-47（1983）． 10）Gosh and Bacchawat，Biochim．Biophys．Acta 632：562-572（1980）． 11）Gosh et al.，Arch．Biochem．Biophys．206：454-457（1981）． 12）Kempen，et al.，J．Med．Chem．27：1306-1312（1984）． 13）Van Berkel et al.，J．Biol．Chem．260：2694-2699（1985）． 14）Van Berkel et al.，J．Biol．Chem．260：12203-12207（1985）． 15）KemPen et al.，J．Lipid Res．28：659-666（1987）． 16）Medina et al.，Tetr．Letters 29：3773-3776（1988）． 17）Biessen et al.，in”Mechanisms of Hepatic Endocytosis”，eds E．Wind ler＆H．Greten，Z．Zuckschwerdt Verlag，Munich（Germany），pp 157-166（1 992）． 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【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年９月７日 【補正内容】 （１９９４年９月７日付補正の英文明細書第７頁初め〜第９ａ頁最後までの 翻訳文） すなわち本発明に従った３分枝性クラスタグリコシドを含む薬剤、ならびに製薬 的に受け入れ可能な担体の用途を提供する。 好適には、グリコシドスペーサの鎖長は鎖中の４原子よりも長く、鎖中の８原 子またはそれ以上であり、または１０原子またはそれ以上である。ここにおいて 、グリコシドスペーサの鎖は少なくとも２つの親水性基を有することが好ましい 。原則的には親水性基であればよいが、該親水性基は好ましくは−Ｏ−，−ＣＯ −，−ＮＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＮＨＣＯ−，−Ｓ−，−Ｎ（ＣＨ₃）ＣＯ、お よびＣＯＮ（ＣＨ₃）−から選択される。−ＯＣＯ、および−ＣＯＯ−基を使用 してもよいが、これらの基は加水分解に対するその感度のために好適度は劣る。 本発明に従った３分枝性化合物の生物学的安定性はメチルアセタール（Ｏ−Ｃ− Ｏ）をメチルチオアセタールまたはエチレングリコールエーテルで置換すること によって、アミドをメチルアミドで置換することによって、およびエステルをチ オエステル、チオエーテルまたはエーテルで置換することによって著しく改善す る ことができる。 非常に適しているのはグリコシドスペーサが式２： −（CHR¹）_n［0（CHR²）_p］_rOCH²O（CHR³）_q− ・・・（２） を満たす３分枝性クラスターグリコシドであり、該式においてＲ¹，Ｒ²，Ｒ³は それぞれ水素原子またはメチル基を示し、ｐおよびｑはそれぞれ１〜４の整数で あり、ｎおよびｒは０〜６の整数である。 Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³はそれぞれ水素原子であり、ｎは０〜４の整数、ｐは２〜３の 整数、ｑは１〜３の整数、ｒは１〜５の整数であることが望ましい。 グリコシド残基（糖残基）は原則的には自由に選択することができるが、好適 には無唾液たんぱく受容体に対して非常に高い固有の親和性を有する、β−Ｄ− ガラクトシル、２−アセトアミド−２−デオキシ−ガラクトピラノシル，β−Ｄ −ラクトシル、１−フェニル−β−Ｄ−ガラクトシル、１−プロピル−β−Ｄ− ガラクトシル、または１−ブチル−β−Ｄ−ガラクトシルから成る単糖類から選 択される。 本発明に従った３分枝性クラスタグリコシドの個々の実施例においては、鎖中 の少なくとも４原子の鎖長を有する末端基スペーサがクラスタの分 岐点である炭素原子に付加される。 また、好ましくは鎖長は鎖中の４原子よりも長く、少なくとも６原子であり、 少なくとも８原子または１０原子またはそれ以上であっても好ましい。末端基ス ペーサの鎖は少なくとも１つのアルキレン基と少なくとも２つの親水性基を有し ていることが好ましく、この場合親水性基は好ましくは、−Ｏ−、−ＣＯ−、− ＮＨ−、Ｓ、−ＣＯＮＨ−、ＮＨＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＣＯＮ（ＣＨ₃） −、および−Ｎ（ＣＨ₃）ＣＯ−から選択される。 非常に適切であるのは末端基スペーサが式３： −NH［CO（CHR⁴）_sNH］_vCO（CHR⁵）、_tCO［NH（CHR⁶）_uCO］_w− ・・・（３） を満たしている３分枝性クラスタグリコシドであり、該式においてＲ⁴，Ｒ⁵およ びＲ⁶はそれぞれ水素原子または１〜４個の炭素原子を持つアルキル基であり、 ｓ，ｔ，ｕはそれぞれ１〜４の整数であり、ｖおよびｗはそれぞれ０〜４である 。 Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶はそれぞれ水素原子を表しており、ｖは１〜２の整数であり、 Ｗは０〜２の整数であり、ｓ，ｔ，ｕはそれぞれ１〜４の整数であることが好ま しい。 本発明に従った３分枝性クラスタグリコシドの 特に好ましい実施例においては、末端基スペーサはそれに付加された末端基を有 しており、該末端基は選択的に防御される反応基または親油基、薬剤残基および 薬剤担体残基から選択される。好適には、末端基は水酸基、１〜４の炭素原子を 有するアルコキシ基、アミノ基、３β−コレステロール残基、Ｎα，Ｎε−ジオ レオイルリシン残基、５β−コラン酸−３α−オールオレート残基、５−コレイ ン酸−３β−オールオレート残基、５β−コラン酸−３α、１２α−ジオールジ オレート残基、またはリポたんぱく残基を有しており、とりわけコレステロール 残基を有している。 本発明に従った適切な３分枝性クラスタグリコシドは式１： ［GO−X¹−］₃A−X²−Z ・・・（１） で表すことができ、該式においてＧＯ−はグリコシド残基であり、Ｘ¹はグリコ シドスペーサであり、Ｘ²は末端基スペーサであり、Ｚは末端基である。 分岐点Ａは炭素原子である必要はない。該分岐点はグルコース基のような糖類 などの基であってもよい。 本発明に従った特に好ましい３分枝性クラスタグリコシドは式４： ［GO−（CH₂CH₂O）₄CH₂O（CH₂）_q−］₃ CNHCOCH₂NHCO（CH₂），CONHCH₂CO−Ochol ・・・（４） を満たし、該式においてｑは１〜３の整数であり、ＧＯ−はガラクトース残基で あり、−Ｏｃｈｏｌはコレステロール残基である。 本発明に従ったクラスタグリコジドは可変性のある親水性鎖（Ｘ¹）を介して クラスタの分岐点に糖類が付加されるという特異性によって、周知のクラスタグ リコシドとは異なっており、該可変性のある親水性鎖（Ｘ¹）はエチレングリコ ールやプロピレングリコールの単位のオリゴマ鎖により伸ばされても、伸ばされ なくてもどちらでもよいアルキレンジオールから成るものとすることができる。 引き続いて該分岐点は、好適には１０〜１５Å長さのペプチドのような鎖（Ｘ² ）を介して末端基ｚに付加され、該末端基ｚの組成は意図されている最終用途に 依存している。 糖類は好適にはガラクトシル、２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシル、１−フェニル−ガラクトビラノシル、１−プロピル−ガラク トピラノシル、１ブチル−ガラクトピラノシル、またはラクトシル基から成る。 これらのガラクトシル単位は無唾液たんぱく受容体上のガラクトース結合部位に 対して固有の高い親和性 を示す。上述の該クラスタガラクトシドは、従来のｔｒｉｓ−ｇａｌ−ｃｈｏｌ のクラスタグリコシド成分よりも、無唾液糖たんぱく受容体に対する新和性およ び特異性がずっと高いという利点がある（２，０００倍まで）。 １９．５Å（少なくとも４炭素原子の）の可変性のある親水性鎖を用いてスペ ーサを引き延ばすことによって誘発された、本発明に従ったクラスタグリコシド である（図１５ｅ： および実施例参照）ＴＧ（２０Å）の親和性の増加は、ＴＧ（４Å）＝〔ｔｒｉ ｓ（ｇａｌ）〕に比較して２，０００倍あることが観察されたが、これはｔｒｉ ｓ（ｇａｌ）と比較したａｓｐ（ｔｒｉｓ（Ｌａｃ）ＡＨＴ）₂についてＬｅｅ ら（参考文献２４）によって実現されたもの（１７０〜６７０倍）よりもかなり 大きい。これは１つには、デンドライトの分岐点とグリコシドを連結しているＴ Ｇ（２０Å）のスペーサは高度に可変性と親水性があるという事実に起因してい る。このようなスペーサの高い親水性によって水溶液中で のスペーサの最適の可変性と水和性が得られる。Ｌｅｅら（参考文献２４）およ びＭａｒｙら（参考文献２３）はスペーサを伸ばすために疎水性ヘキシル部を利 用しているが、これは水溶液中での３分枝性構造の広がりと可変性を次善のもの としかしない。 高い低脂質血症効力を持つ糖脂質を考える場合、末端基Ｚは３β−コレステロ ール、Ｎα，Ｎε−ジオレオイルリジン、５β−コラン酸−３α−オールオレー ト、５−コレイン酸−３β−オールオレート、５βコラン酸−３α、１２α−ジ オールジオレートのような親油性の強い基を有している。無唾液糖たんぱく受容 体に関してクラスタグリコシド成分が高い親和性を持つ結果として、この糖脂質 の低脂質血症効力は非常に高く、肝実質細胞によるリポたんぱくまたは脂質胞の 摂取が強く促進される。 （１９９４年９月７日付補正の英文明細書第１１頁初め〜第１７ｄ頁最後までの 翻訳文） その作用に本質的なものではない遊離カルボキシル基を介して、グリコシドのＸ² に簡単に結合させることができる。 本発明による３分枝性クラスタグリコシドはそれ自体として周知の方法によっ て調製することができる。新しい３分枝性クラスタグリコシドの調製は本発明に よって含まれる主題である。 本発明は、たとえば、式５： ［GO−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOCH₂O（CHR³）_q−］₃C−X²−Z ・・・（５） の３分枝性クラスタグリコシドの調製のための方法を提供するものであり、該式 においてＧＯ−はグリコシド残基であり、Ｘ²は末端スペーサであり、Ｚは末端 基であり、Ｒ¹〜Ｒ³はそれぞれ水素原子または１〜４の炭素原子を持つアルキル 基であり、ｐとｑはそれぞれ１〜４の整数であり、ｎとｒは０〜６の整数をであ り、該方法においては、Ｇ′Ｏ−が防御グリコシド残基である式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH ・・・（６） の化合物が式７： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q］₃C−X²−Z′ ・・・（７） の化合物と反応し、該式７においてＺ′は末端基Ｚ、または該末端基Ｚによって 置き換えられべき基を表しており、該基Ｚ′は得られた化合物であり、該基Ｚ’ が末端基Ｚによって置き換えられるべき基である場合には、該基Ｚ′は基Ｚによ って置き換えられ、予めまたは引き続いて、得られた化合物のグリコシド残基は 脱防御される。 式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH ・・・（６） の化合物と式７： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q］₃C−X²−Z′ ・・・（７） との化合物の反応は、好適にはＮ−ヨウドコハク酸イミドとトリフルオロメタン スルフォン酸の存在下で実施される。 反応中、グリコシド残基は、たとえば第３ブチル酸カリウムの処理によって後 に取り除くことができる水酸基防御ベンゾイル基によって防御される。 この方法においては、式７： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q］₃C−X²−Z′ ・・・（７） のＺ′はたとえば防御反応性基であってもよく、該防御反応性基は、脱防御の後 、親油性基、薬剤残基および薬剤担体残基から選択された末端基Ｚによって置き 換えられる。 本発明はまた、式８： ［GO−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOCH₂O（CHR³）_q−］₃C−NH−X³−Z ・・・（８） の３分枝性クラスタグリコシドを調製するための方法を提供するもので、該式８ においてＧＯ−はグリコシド残基であり、Ｚは末端基であり、Ｒ¹〜Ｒ³はそれぞ れ水素原子または１〜４の炭素原子を持つアルキル基であり、ｐとｑはそれぞれ １〜４の整数であり、ｎとｒは０〜６の整数であり、Ｘ³は末端基スペーサであ り、 該方法においては、Ｇ′Ｏ−が防御グリコシド残基である式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH ・・・（６） の化合物は、Ｑがアミノ防御基である式９： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q−］₃C−NHQ ・・・（９） の化合物と反応し、得られた化合物のアミノ基は脱防御され、およびそれによっ て得られた遊離アミノ基は−ＮＨ−Ｘ³−Ｚ基に転換され、予めまたは引き続い て、得られた化合物のグリコシド残基か脱防御される。 これらの方法で出発材料として使用される式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH ・・・（６） の化合物は、好適には式１０： G′SC₂H₅ ・・・（10） の化合物と式１１： HO（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH ・・・（11） との化合物を反応させることによって調製される。 式１０： G′SC₂H₅ ・・・（10） の化合物と式１１： HO（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH ・・・（11） との化合物の反応は、好適にはＮ−ヨードコハク酸イミドおよびトリフルオロメ タンスルフォン酸の存在下で実施される。 本発明に従った方法の実施例は以下のステップを有する方法である： ａ）１−メチル−６−コハク酸イミジルアジペート（式１２）： がＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下でＮ−ヒドロキシコハク 酸イミドとの反応によって１メチルアジピン酸からそれ自体において周知である 方法によって調製される。 ｂ）Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）−グ ルシンアミド（式 １３、 （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ ・・・（13） 式においてＲ＝Ｈ、Ｑ¹＝Ｈ）がＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドの 存在下でベンジルオキシカルボニルグリシンと２−アミノ−２−ヒドロキシ−メ チル−１，３−プロパンジオールとの反応によってそれ自体において周知である 方法で調製され、その後、防御ベンジルオキシカルボニル基が、触媒としてのパ ラジウム／炭素の存在下でＨ₂との反応によってそれ自体において周知である方 法で取り除かれる。 ｃ）Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）−Ｎ^α （１−６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３、 （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ 式においてＲ＝Ｈ、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）が（ａ）で得られた１ −メチル−６−コハク酸イミジルアジテートと（ｂ）において得られた化合物と の反応によってそれ自体において周知の方法で調製される。 ｄ）Ｎ−［トリ［［（メチルチオメチル）オキシ］メチル］メチル］−Ｎ^α− （１−（６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３、 （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ 式においてＲ＝−ＣＨ₂ＳＣＨ₃、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）が過酸化 ベンゾイルの存在下でジメチルスルフィドと（ｃ）で得られた化合物との反応に よってそれ自体において周知である方法で調製される。 ｅ）エチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシド（式１４： 式においてＲ′＝ベンゾイル，Ｒ″＝−ＳＣ₂Ｈ₅）が、順に、塩化錫（ＩＶ）、 第３ブチル酸カリウム、最後にベンゾイルクロリドの存在下でエタノールエチオ ールと反応することによって、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β −Ｄ−ガラクトピラノシドからそれ自体において周知の方法で調製される。 ｆ）２−ヒドロキシエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ −ガラクトピラノシド（式１４： を有する化合物１４ｂ、式においてＲ′＝ベンゾイル（Ｂｚｌ）およびＲ″＝− Ｏ（ＣＨ₂）₃ＯＨ）、３−ヒドロキシプロピル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベ ンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（式１４： を有する化合物１４ｃ、式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝−Ｏ（ＣＨ₂）₃Ｏ Ｈ）、５−ヒドロキシ−３−オキサペンタン２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベン ゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（式１４： を有する化合物１４ｄ、式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝−Ｏ［（ＣＨ₂）₃ Ｏ］₂Ｈ）および １１−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサウンデカン２，３，４，６−テトラ −Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（式１４： を有する化合物１４ｅ、式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝−Ｏ［（ＣＨ₂）₂ Ｏ］₄Ｈ）がＮ−ヨウドコハク酸イミドおよびトリフルオロメタンスルフォン酸 の存在下においてエチレングリコール、プロパンジオール、ジエチレングリコー ルまたはテトラエチレングリコールとの（ｅ）において得られた化合物との反応 によってそれ自体において周知である方法において調製される。 ｇ）Ｎ−［トリ−Ｏ−（オリゴ−オキサアルキル−β−Ｄ−ガラクトピラノシ ル）メトキシメチル］メチル−Ｎα−（１−（６−メチル）アジピル）グリシン アミド（式１５ｂ〜１５ｅ）： がトリフルオロメタンスルフォン酸およびＮ−ヨウドコハク酸イミドとの存在下 で（ｄ）で得られた化合物と化合物１４ｂ〜１４ｅのどれか１つとを結合させ、 それに続いて第３ブチル酸カリウムで該生成物を処理することによってそれ自体 において周知の方法において調製される。 グリコシドとクラスタの分岐点の間に延長された可変性のある親水性鎖を有す るクラスタグリコ シドを調製するための本発明に従った方法の第２実施例は以下のようなステップ を有する方法である： ａ）１−ニトロ４−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシプロピル）ブタン （式１６，式においてＲ＝Ｈ、Ｒ′＝ＮＯ₂）が１−アミノ４−ヒドロキシ−１ ，１−ビス（ヒドロキシプロピル）ブタン（式１６： ［RO（CH₂）₃−］₃C−R′ …（16） 式においてＲ＝Ｈ、Ｒ′＝ＮＨ₂）に、Ｚｎ／ＨＣｌまたはＬｉＡｌＨ₄によって 、それ自体において周知の方法で還元される。この化合物のアミノ基は等価量の ジイソプロピルエタノールアミンの存在下でトリフルオロ酢酸アンヒドリドとの 反応によって、トリフルオロアセチル基によりそれ自体において周知の方法にお いて防御され、１−Ｎ−（４−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシプロピル ）ブチル）トリフルオロアセトアミド（式１６： ［RO（CH₂）₃−］₃C−R′ 式においてＲ＝Ｈ、Ｒ′＝−ＮＨＣＯＣＦ₃）を形成する。 ｂ）Ｎ−［トリ［［（メチルチオメチル）オキシ］プロピル］メチル］−２， ２，２−トリフル オロアセトアミド（式１６： ［RO（CH₂）₃−］₃C−R′ 式においてＲ＝−ＣＨ₂ＳＣＨ₃、Ｒ′＝−ＮＨＣＯＣＦ₃）が過酸化ベンゾイル の存在下においてジメチルスルフィドと（ａ）で得られた化合物との反応によっ て、それ自体において周知の方法により調製される。 ｃ）アルカノール１１−ヒドロキシ−３，６，９−トリオキサウンデカン２， ３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１ ４ｅ）と（ｂ）で得られた化合物の誘導体がＮ−ヨウドコハク酸イミドとトリフ ルオロメタンスルフォン酸の存在下での反応により、それ自体において周知であ る方法において生じる。第３ブチル酸カリウムによる処理による形成された生成 物の脱ベンゾイル化により式１７の化合物を生じる。式においてＲ＝Ｈ、Ｑ¹＝ −ＣＯＣＦ₃である。 ｄ）（ｃ）において得られた化合物を水溶液中にてピペリジンで処理して防御 トリフルオロアセチル基を除去した後、脱防御アミノ基を１０〜１５Åの長さの オリゴペプチド様スペーサＸ³を介して末端基Ｚと共に誘導することができる。 グリコシドとクラスタの分岐点の問に延長され た可変性、親水性スペーサを有するクラスタグリコシドの調製のための本発明に 従った方法の第３実施例は以下のようなステップを含む： ａ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリアリル−β−Ｄ−グリコピラノシル− ６−フェナセチルエステルがフェナセチルクロライドとの反応およびそれに続く ２，３，４水酸基のアリルブロミドとの反応によりピリジン中で１−Ｏ−メチル β−Ｄ−グルコース酸から調製される。 ｂ）１−Ｏ−メチル１−２，３，４−トリ（プロピル２−アミノエチルスルフ ィド）−β−Ｄ−グルコピラノース−６−フェナセチルエステルが３−アミノ１ −プロパンチオールの存在下で該化合物の光活性化により１−Ｏ−メチル−２， ３，４−トリアリル−β−Ｄ−グルコピラノース−６−フェナセチルエステルか ら調製された。 ｃ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリ（プロピル２−（Ｎ−エチルチオウレ イド−Ｎ′−［ｐ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニレン）］スルフィド ）−β−Ｄグルコピラノース６−フェナセチルエステルが１−フェニル−（β− Ｄ−ガラクトピラノシル）４−イソチオシアネートの１，５等価物と１−Ｏ−メ チル２，３，４−トリ（プロピル２−アミノエチルスルフィド）β−Ｄ −グルコピラノース６−フェナセチルエステルとの反応によって合成される。 ｄ）１−Ｏ−メチル−２，３，４−トリ（プロピル２−（Ｎ−エチルチオウレ イド−Ｎ′−［ｐ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニレン）］スルフィド） −β−Ｄ−グルコピラノース（式２３）： がフェニルアセチルエステラーゼを用いた３７℃における酵素消化により１−Ｏ −メチル２，３，４−トリ（プロピル２−）Ｎ−エチルチオウレイド−Ｎ′−［ ｐ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）フェニレン）］スルフィド）−β−Ｄ−グ ルコピラノース６−フェナセチルエステルから調製される。 本発明を以下の実施例を用いてさらに詳細に説 明する。 実施例１ これらの化合物が以下のステップにより調製された（上述の出発材料はそれぞ れ平均的な品質の市販品である）： ａ）１−メチル−６−コハク酸イミジルアジペート（式１２）： １００ｍｌアセトン中１．６ｇ（１００ｍｍｏｌ）１−メチルアジペート溶液 に１１．６ｇ（１００ｍｍｏｌ）Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドを添加した。次 に、１００ｍｌアセトン中２２．８ｇ（１１０ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘ キシルカルボジイミドを添加することによってカップリングを開始させた。２０ ℃にて２時間撹拌した後、濾過により沈殿を除去した。濾液を蒸発乾燥させ、溶 離液としてジクロロメタン中５％のメタノールを用いて、１５０ｍｌ硅酸ゲルカ ラムに通してクロマトグラフィにより分析した。目的としている生成物を含む留 分を集め、溶剤を除去した。収率：２４．３ｇの純１−メチル−６−コハク酸イ ミジルアジペート（９４ｍｍｏｌ；９４％）。 ｂ）Ｎ−（ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）−Ｎα−（ ベンジルオキシ−カルボニル）グリシンアミド（式１３： （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ 式においてＲ＝Ｈ、Ｑ１¹＝ＢＯＣ）。 ５０ｍｌジメチルフォルムアミド中１．８ｇ（トリ−Ｏ−ヒドロキシメチル） アミノメタン（１５ｍｍｏｌ）および３．１５ｇ（１５ｍｍｏｌ）Ｎ−ベンジル オキシカルボニルグリシンを含む溶液に、３．７ｇ（１７ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ′− ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加し、該懸濁液を２日間２０℃にて撹拌し た。反応後、該懸濁液を濾過し、溶剤を蒸発除去させた。硅酸ゲルカラム（１５ ０ｇ）にて残留物を溶離液としてジクロロメタン中１０％のメタノールを用いて 、硅酸ゲルカラム（１５０ｇ）により残留物の精製を行った後、表題の化合物の 白色結晶２．２５ｇ（７．１ｍｍｏｌ、４７％）を得た。 ｃ）Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）Ｎ^α− １−（６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３ （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ の化合物、式においてＲ＝Ｈ、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）。 （ｂ）にて得られた化合物の防御Ｎ−ベンジルオキシカルボニル基を還元加水 素分解によって除去した。該目的のために、（ｂ）で得られた化合物１５．６ｇ （５０ｍｍｏｌ）をエタノール／メタノール混合物（１／１，ｖ／ｖ）２００ｍ ｌ中にて溶解させ、および該溶液をＮ₂と共に分散させた。次に、２００ｍｇＰ ｄ／Ｃを添加し、該溶液に２０℃にて２時間、大気圧において水素を充分含ませ た。還元した後、パラジウム／炭素を濾過し、溶剤を蒸発させた。 粗反応性生成物（式１３： （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ 式においてＲ＝Ｑ¹＝Ｈ）を式１２： との誘導体生成のために直接用いた。式１２および１３の化合物のうち１２．４ ｇ（５０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌジメチルホルムアミドに溶解させ、３時間２０ ℃にて保温し、その後該懸濁液を１８時間４℃にて保管した。沈殿物を濾過によ って取り除き、濾液を蒸発させた。残留物をジクロロメタン中２０％のメタノー ルにより硅酸ゲルカラム（２００ｇ）で精製した。Ｎヒドロキシコハク酸 イミジルがピークに達した後すぐにカラムから生成物を抽出した。溶剤を除去し た後、１２．８ｇの白色、非晶質粉末（４０ｍｍｏｌ、８０％）が残った。 ｄ）Ｎ−［トリ［［（メチルチオ−メチル）オキシ］メチル］メチル］Ｎ^α−（ １−（６−メチル）アジピル）グリシンアミド（式１３、 （ROCH₂−）₃C−NHCOCH₂NHQ¹ 式においてＲ＝−ＣＨ₂ＳＣＨ₃、Ｑ¹＝−ＣＯ（ＣＨ₂）₄ＣＯＯＣＨ₃）へのトリ オールのチオメチル化。 チオメチル化はＭｅｄｉｎａら（参考文献１６）の方法に従って行われた。氷 のように冷たい２０ｍｌアセトニトリルに溶解させた（Ｃ）にて得られた０．９ ６ｇ（３ｍｍｏｌ）の化合物に、４．６ｍｌ（５４ｍｍｏｌ）ジメチルスルフィ ドと６．５ｇ（２７ｍｍｏｌ）過酸化ベンゾイルを添加した。３時間０℃にて保 温した後、２０ｍｌエチルアセテートを添加し、該溶液を２５ｍｌ０．１ＮＮａ ＯＨにより２度抽出した。この有機相を捕集し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ脱水した 。該生成物をＬＨ₂Ｏカラム（７０×２．５ｃｍ）によるクロマトグラフィおよ び硅酸ゲルカラム（２００ｇ）によるクロマトグラフィによって溶離液としてジ クロルメタンを用いて分析した。エーテル／石油エーテル（６０゜〜４０゜）か らの結晶化により１．０３ｇ白色結晶（２．０ｍｍｏｌ、６７％）が得られた。 ｅ）エチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−１−チオ−β−Ｄ−ガラ クトピラノシド（式１４： 式においてＲ′＝ＢｚｌおよびＲ″＝−ＳＣ₂Ｈ₅）。 β−Ｄ−ガラクトピラノジルペンタアセテートから７．８ｇを５０ｍｌジクロ ロエタンに溶解させた。溶剤を取り除き、残渣を７５ｍｌジクロロエタンに加え 、１．６３ｍｌ（２２ｍｍｏｌ）のエタンチオールを添加した。該溶液を氷の上 に置き０．３５ｍｌ（３ｍｍｏｌ）塩化錫（ＩＶ）を滴下した。該溶液を１時間 保温した。完全に反応させた後、該保温された物を順次、５０ｍｌ１Ｍのフッ化 カリウムを２回と１０％（ｖ／ｖ）ＮａＨＣＯ₃水とを用いて抽出した。該有機 相をＭｇＳＯ₄を用いて乾燥させ、引き続いて （１９９４年９月７日付補正の英文明細書第２５頁初め〜第２８ｃ頁最後までの 翻訳文） 式１８の化合物３４０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）、８０μｌ（０．５ｍｍｏｌ ）ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍｍｏｌ、８０μｌ）および式１９の化 合物２３０ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）を７ｍｌジメチルアセトアミドに溶解させた 。１００ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）ＢＯＰ試薬を添加し、結合を開始させた。３ ０分間２０℃にて保温した後、溶剤を蒸発させ、残渣を水に加え溶液を凍結乾燥 させた。粗生成物を溶離液としてメタノールを使いＬＨ₂Ｏカラムにより、また 次に溶離液としてメタノールを用い硅酸ゲル６０カラムによりクロマトグラフ分 析を行い精製した。収率：式２０の化合物２０１ｍｇ（４６％；ＴＧ（２０Å） −コレステロール）。 実施例５ このようにして調製された化合物ＴＧ（２０Å）−コレステロール（式２０） ： を用いて血清コレステロールレベルを低下させることができる。 このことは次のように実証された。雄のラット（２５０〜３００ｇ）にエーテ ルを用いて麻酔をかけた。次いで０．５６ｍｇ、または０．１８ｍｇ、０．０５ ６ｍｇまたは０ｍｇのＴＧ（２０Å）−コレステロール（式２０）または０．５ ６ｍｇ ｔｒｉｓ−ｇｌｕ−ｃｈｏｌ（式２１） が溶解している５００μｌＰＢＳをペニス静脈内に注入した。図３に示した時間 において、３００μｌの血液試料を眼窩穿剌により採取した。この血液試料を遠 心分離器にかけ（５分；１，５００ｇ）、血清をＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎ ｎｈｅｉｍ社のＣＨＯＤ−ＰＡＰキットによるコレステロール試験に用いた。注 入２４時間後にラットから採血し、該採血を遠心分離器にかけ、その後血清をピ ペットで採取した。次に、該血清を密度 勾配超遠心分離にかけ、種々のリポたんばく画分を単離した：ＨＤＬ（１．２１ ＜ｄ＜１．０５），ＬＤＬ（１．０５０＜ｄ＜１．０１９）、ＩＤＬ（１．０１ ９＜ｄ＜１．００６）、ＶＬＤＬ（ｄ〈１．００６）。最後にこれらのリポたん ぱく画分の全コレステロール濃度をＣＨＯＤ−ＰＡＰキットを用いて試験した。 図３は血清コレステロールの全レベルがＴＧ（２０Å）−コレステロールを注 入した結果として低下していることを示している。この低下は投与量に依存して いる。偽薬を注入された対照ラットの血清中の全コレステロール含有量は測定さ れた時間にわたって一定である。ｔｒｉｓ−ｇｌｕ−ｃｈｏｌ（式２１）： の注入は血清からコレステロールを除去するガラクトース−特異性を示すコレス テロールレベルの変化にはつながっていない。これまでに開発されたｔｒｉｓ− ｇａｌ−ｃｈｏｌ（式２２）： と比較した場合、その効力は少なくとも２５倍増加した（参考文献１５）。 さらに、コレステロールレベルの継続的低下は注目に値する。０．５６ｍｇＴ Ｇ（２０Å）−ｃｈｏｌを一度投与した後２４時間経過しても、コレステロール レベルは対照値には戻ってはいない。 ２４時問後に見られた全コレステロールレベルの低下が血清ＨＤＬレベルの低 下に反映されている（図４参照）。ＨＤＬレベルは投与量に依存して低下し、Ｔ Ｇ（２０Å）−ｃｈｏｌの注入後著しく低下している。ＬＤＬレベルも同様にＴ Ｇ（２０Å）Ｃを投与した後この時間に低下している。他のリポたんぱくの濃度 はＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌによって有意に影響されていない。しかしながらこ れらのデータを内挿していく場合、試験時間は最適ではなく、ＨＤＬはラットの 中の最も主要なリポたんぱくであり（６５〜７０％）、したがってＴＧ（２０Å ）−ｃｈｏｌの蓄積は特にＨ ＤＬ中で発生するという事実を考慮しておくへきである。 １２指腸、胆管および心臓静脈にカテーテルが装備されたラットにＴＧ（２０ Å）Ｃ（０．５６ｍｇ、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）に溶解されている）も胆汁流 を離れる肝からの胆汁酸の胆管分泌、および一定不変のコレステロールの胆管分 泌を増大させる。おそらく、リポたんぱく誘導コレステロール摂取についてのＴ Ｇ（２０Å）Ｃ−誘発増加は、ラットの胆汁酸分泌と有効に結び付いていると思 われる。このことは低コレステロール血症治療薬として、ＴＧ（２０Å）Ｃを適 用できる可能性と重大な関係があると思われる。（図５参照） 実施例６ このようにして調製された化合物ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（式２０）： を肝実質細胞にＬＤＬを向けるために用いること もできる。 これを実証するために、単離させた低密度リポたんぱ＜にそれ自体において周 知である方法に従ってＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷し、粒子の生体内挙動を 調べた。ＰＢＳ中のＬＤＬ（５０μｇ）を、０、５、１５、および５０μｇＴＧ （２０Å）−ｃｈｏｌとともに３０分間２０℃にて保温した。これによってラッ トに静脈注射した後のＬＤＬの挙動が変化することになった。これは図６に示さ れている。ＬＤＬが負荷されていない粒子（¹²⁵Ｉで識別）は静脈注射後血粒か らゆっくりとしか消退していかす、肝によって摂取されるのは非常にごく僅かの 量だけであるのに対し、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌが負荷された粒子は取り除か れ、非常に速く肝内に取り込まれる。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの高い親水性の ために、この化合物の交換は、ＬＤＬと他のリポたんぱくおよび皮質部分との間 で非常に早く起こる。これは数分後の血流のＬＤＬレベルの安定化につながるも のである。 次に、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌのＬＤＬにおける蓄積により、ＬＤＬの生理 学的割合を変化させる。この複合体はガラクトース特有の経路を介して肝によっ て摂取される。しかしながら肝は２ つのガラクトース特有の状態をもっている。ここで、この複合体は肝の実質細胞 によって摂取されるのか、それともクッペル細胞によって摂取されるのかを立証 することができる。図７は、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷した結果として肝 によって摂取されたＬＤＬが実質細胞にかなり配置されていることを示している 。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌが負荷されていない肝によって摂取されたＬＤＬは 主にクッペル細胞中にある。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ／ＬＤＬ複合体を注入す る１分前に、５０ｍｇ／ｋｇ無唾液フェチュインを予め注入することによる無唾 液糖たんぱく受容体の遮断は、肝実質細胞による摂取を著しく阻害することにな る。これは、この複合体を負荷することが実質細胞中の無唾液糖たんぱく受容体 を介する肝摂取につながるということを示している。 このことは、ＴＧ（２０Å）（式１５ｅ）またはＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（ 式２０）： の低脂質血症治療剤としての、または肝実質細胞に薬剤担体を向ける作用物質と しての利用の可能性にとって非常に重要なものである。 実施例７ リポたんぱく（ａ）（ｌｐ（ａ））の生体内における挙動に対するＴＧ（２０ Å）Ｃの影響。 このようにして調製されたＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（式２０）： は、肝実質細胞にａｐｏ（ａ）を向けるために使用することができる。高レベル のｌｐ（ａ）は肝に関係する疾病や血管に関係する疾病の発生と相関関係がある 。今日までのところ、発病を低下させる充分な臨床的治療法を適用することはで きない。ＴＧ（２０Å）Ｃを肝摂取およびｌｐ（ａ）の処理を剌激するために用 いることができるかどうかを調べるために、単離されたｌｐ（ａ）にそれ自体に おいて周知である方法に従ってＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷し、該粒子の生 体内挙動 を調べた。ＰＢＳ中のｌｐ（ａ）（５０μｇ）を０、５、１５、５０μｇＴＧ（ ２０Å）（−ｃｈｏｌ）とともに３０分間２０℃にて保温した。この負荷がラッ トに静脈注射を行った後のａｐｏ（ａ）の挙動の変化を導いた。これは、図８に 示されている。負荷されていないａｐｏ（ａ）粒子（¹²⁵Ｉで標識化されている ）が静脈投与後、血流から非常にゆっくりとしか消失せず、ごくわずかの程度に しか肝によって摂取されないのに対し、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷された 粒子は浄化され、負荷されていない粒子の場合よりもずっと早く肝内に摂取され る。ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの親水性が非常に高いために、この化合物の交換 はｌｐ（ａ）とその池のリポんぱくおよび脂質分との間で非常に速やかに行われ る。これによって数分後に血流中のｌｐ（ａ）レベルの安定化が図られる。 次に、ｌｐ（ａ）中のＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌの蓄積によってｌｐ（ａ）の 生理学的挙動が変化する。該複合体はガラクトース特有の経路を介して肝によっ て摂取される。しかしながら肝は２つのガラクトース特有の受容体を有している 。該複合体は、肝上の実質細胞によって摂取されるのか、それともクッペル細胞 によって摂取されるの かを実証することができる。表３は、ＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌを負荷した結果 として、肝によって摂取されたｌｐ（ａ）が実質細胞内でほとんど回収される（ ５４＋１１％）ことを示している。ＴＧ（４Å）Ｃが負荷されたｌｐ（ａ）は肝 によって摂取され、主にクッペル細胞内にある。このことは、ＴＧ（４Å）Ｃと は対照的に、ＴＧ（２０Å）Ｃは肝実質細胞にｌｐ（ａ）を向けることに、より 効果的であることを示唆している。¹²⁵Ｉ−ｌｐ（ａ）のＴＧ（２０Å）Ｃ誘発 肝摂取は、１５０ｍｇのＮ−アセチル−ガラクトースアミンをラットに予め注入 することによって阻止することができるので（データは示されていない）、この ことは該化合物の負荷が実質細胞内の無唾液糖たんぱく受容体を介した肝摂取に つながるということを示している。 これは、ｌｐ（ａ）を低下させる治療薬としての、式１５ｅ： を有する化合物ＴＧ（２０Å）、またはＴＧ（２０Å）−ｃｈｏｌ（式２０）： の適用の可能性にとって非常に重要なことである。 表３：種々の量のＴＧ（２０Å）ＣまたはＴＧ（４Å）Ｃを負荷されたｌｐ（ ａ）の肝会合に対する種々のタイプの細胞の寄与。 ¹²⁵Ｉ−Ｌｐ（ａ）（５０μｇ）を５０μｇのＴＧ（２０Å）ＣまたはＴＧ（ ４Å）Ｃと５００μｌＰＢＳ中で混合した。室温にて３０分放置した後、該肝混 合物をラットに体重１ｋｇあたり５０μｇのアポリポたんぱく投与量にて注射し た。注射後１０分で実質細胞、内皮細胞およびクッペル細胞を肝から単離し、放 射能数値を測定した。数値は、細胞たんぱく１ｍｇあたりの注入投与量の１０− ３，％として表し、３回の実験の平均±ｓ．ｅ．ｍである。 【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年１１月１０日 【補正内容】 請求の範囲 １．式１： ［GO−X¹−］₃A−XZ−Z …（１） を有する３分枝性クラスタグリコシドであって、該式において各グリコシドＧＯ は長い可変性、親水性スペーサＸ¹によって分岐点Ａに付加され、該スペーサＸ¹ は鎖中で少なくとも４原子を有し、本質的に、２つの親水性基の間に配置される 分岐した、または直鎖のＣ₁〜Ｃ₄のアルキレン基の単位からなり、式： −［HG−Alk−］e− で表され、該式においてＨＧ基は独立して親水性基を表し、Ａｌｋ基は独立して 分岐した、または直鎖の炭素数Ｃ₁〜Ｃ₄のアルキレン基を表し、ｅは１〜８で変 化し、Ｘ²は鎖中の少なくとも４原子の長さの鎖長の末端スペーサであり、Ｚは 、テトラキス−Ｏ−（３−カルボキシ−プロピオニル）ペンタエリトリトールテ トラキス−（１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシ ド−６−イル）テトラエステルとテトラキス−Ｏ−（３−カルボキシ−プロピオ ニル）ペンタエリトリトールテトラキス−（α−Ｄ−グルコピラノシド−６−イ ル）テトラエステルを除く、選択的な防御反応基、親油基、薬剤残基、薬剤担 体残基から選ばれた末端基であることを特徴とする３分枝クラスタグリコシド。 ２．グリコシドスペーサ１の鎖は、少なくとも２つの親水性基ＨＧを含むこと を特徴とする請求項１記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ３．親水性基ＨＧは、−Ｏ−，−ＣＯ−，−ＮＨ−，−ＣＯＮＨ−，ＮＨＣＯ −，ＯＣＯ、および−ＣＯＯ−から選択されることを特徴とする請求項１または ２記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ４．グリコシドスペーサ１が、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³がそれぞれ水素原子またはメチル 基であり、ｐおよびｑがそれぞれ１〜４の整数であり、ｎおよびｒが０〜６の整 数である式２： −（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOCH₂O（CHR³）_q− …（２） を満たすことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の３分枝性クラスタグ リコシド。 ５．Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³はそれぞれ水素原子であることを特徴とする請求項４記載 の３分枝性クラスタグリコシド。 ６．ｎは２〜４の整数であり、ｐは２〜３の整数であり、ｑは１〜３の整数で あり、ｒは１〜５の整数であることを特徴とする請求項４または５記載の３分枝 性クラスタグリコシド。 ７．グリコシド残基がβ−Ｄ−ガラクトシル、２−アセトアミド−２−デオキ シ−ガラクトピラノシル、β−Ｄ ラクトシル、１−フェニル−β−Ｄ−ガラク トシル、１−プロピル−β−Ｄ−ガラクトシルおよび１−ブチル−β−Ｄ−ガラ クトシルから選択されることを特徴とする請求項１〜６の１つまたは複数の請求 項に記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ８．クラスタの分岐点Ａが炭素原子または糖類であることを特徴とする請求項 １〜７の１つまたは複数の請求項に記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ９．末端基スペーサの鎖が少な＜とも１つのアルキレン基および少なくとも１ つの親水性基を有することを特徴とする請求項８記載の３分枝性クラスタグリコ シド。 10．親水性基が−Ｏ−，−ＣＯ−，−ＮＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＮＨＣＯ−， −ＯＣＯ、および−ＣＯＯ−から選択されることを特徴とする請求項９記載の３ 分枝性クラスタグリコシド。 11．末端基スペーサが、Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶がそれぞれ水素原子、または炭素原子 数が１〜４であるアルキル基であり、ｓ、ｔ、ｕがそれぞれ１〜４の整数であり 、ｖおよびｗがそれぞれ０〜４の整 数である式３： −NH［CO（CHR⁴）_sNH］_vCO（CHR⁵）_tCO［NH（CHR⁶）_uCO］_w− …（３） を満たすことを特徴とする請求項１０記載の３分枝性クラスタグリコシド。 12．Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶がそれぞれ水素原子であることを特徴とする請求項１１記 載の３分枝性クラスタグリコシド。 13．ｖは１〜２の整数であり、ｗは０〜２の整数であり、ｓ，ｔ，ｕはそれぞ れ１〜４の整数であることを特徴とする請求項１１または１２記載の３分枝性ク ラスタグリコシド。 14．末端基が水酸基、炭素数１〜４のアルコキシ基、アミノ基、３β−コレス テロール−残基、Ｎα，Ｎε−ジオレオイルリシン残基、５β−コラン酸−３α −オールオレイン酸塩、５−コラン酸−３β−オールオレイン酸塩残基、５β− コラン酸−３α，１２α−ジオールジオレート残基またはリポたんばく残基を含 むことを特徴とする前記請求項のいずれかに記載の３分枝性クラスタグリコシド 。 15．末端基がコレステロール残基を含むことを特徴とする請求項１４記載の３ 分枝性クラスタグリコシド。 16．ｑが１〜３の整数、ＧＯがガラクトース残基を表し、−Ｏｃｈｏｌがコレ ステロール残基を表す式４： ［GO−（CH₂CH₂O）₄CH₂O（CH₂）_q−］₃ CNHCOCH₂NHCO（CH₂）₄CONHCH₂CO−Ochol …（４） を満たしている、請求項１記載の３分枝性クラスタグリコシド。 17．請求項１〜１６の１つまたは複数個の請求項に記載の３分枝性クラスタグ リコシド、ならびに少なくとも１つの薬学的に受容可能な担体を有する薬剤の調 製。 18．ＧＯ−がグリコシド残基であり、Ｘ²が末端スペーサであり、Ｚが末端基 であり、Ｒ¹〜Ｒ³がそれぞれ水素原子、または炭素原子数が１〜４のアルキル基 であり、ｐおよびｑがそれぞれ１〜４の整数であり、ｎおよびｒは０〜６の整数 である式５： ［GO−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOCH₂O（CHR³）_q−］₃C−X²−Z …（５） の３分枝性クラスタグリコシドを調製する方法であって、Ｇ′Ｏ−が防御グリコ シドの残基を表している式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH …（６） の化合物が、Ｚ′が末端基Ｚまたは末端基Ｚによ って置き換えられるべき基を表し、得られた化合物中の基Ｚ′が、末端基Ｚによ って置き換えられるべき基を表している場合には、末端基Ｚによって置き換えら れる式７： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q］₃C−X²−Z′ …（７） の化合物と反応させられ、予めまたは引き続いて、得られた化合物のグリコシド 残基が脱防御されることを特徴とする方法。 19．式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH …（６） の化合物と式７： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q］₃C−X²−Z′ …（７） の化合物との反応がＮ−ヨードコハク酸イミドおよびトリフルオロメタンスルホ ン酸の存在下で行われることを特徴とする請求項１８記載の方法。 20．グリコシド残基Ｇ′Ｏが水酸基防御ベンゾイル基によって防御され、該ベ ンゾイル基は後に第３ブチル酸カリウムによる処理によって取り除かれることを 特徴とする請求項１８または１９記載の方法。 21．Ｚ′が防御反応基であり、該防御反応基は脱防御の後、親油基、薬剤残基 およひ薬剤担体残基から選択される末端基Ｚによって置き換えられることを特徴 とする請求項１８〜２０の１つまた は複数の請求項記載の方法。 22．ＧＯ−がグリコシド残基であり、Ｚが末端基であり、Ｒ¹〜Ｒ³がそれぞれ 水素原子、または炭素原子数１〜４のアルキル基であり、ｎ，ｐ，およびｑがそ れぞれ１−６の整数であり、ｒが０〜６の整数であり、Ｘ³が末端スペーサであ る式８： ［GO−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOCH₂O（CHR³）_q−］₃C−NH−X³−Z …（８） の３分枝性クラスタグリコシドを調製する方法であって、Ｇ′Ｏ−が防御グリコ シドの残基である式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR2）_p］_rOH …（６） の化合物が、Ｑがアミノ防御基である式９： ［CH₃SCH₂O（CHR³）_q−］₃C−NHQ …（９） の化合物と反応し、得られた化合物中のアミノ基は脱防御され、このようにして 得られた自由なアミノ基が−ＮＨ−Ｘ³−Ｚ基に転換され、予めまたは引き続い て得られる該化合物のグリコシド残基が脱防御されることを特徴とする３分枝性 クラスタグリコシドを調製する方法。 23．式６： G′O−（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH …（６） の化合物が、式１０： G′SC₂H₅ …（10） の化合物と式１１： HO（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH …（11） の化合物とを反応させることによって調製されることを特徴とする請求項１８〜 ２２の１つまたは複数の請求項に記載の方法。 24．式１０： G′SC₂H₅ …（10） の化合物と式１１： HO（CHR¹）_n［O（CHR²）_p］_rOH …（11） の化合物との反応がＮヨードコハク酸イミドおよびトリフルオロメタンスルホン 酸の存在下で行われることを特徴とする請求項２３記載の方法。 【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年１１月３０日 【補正内容】 （１９９４年１１月３０日付補正の英文明細書第６頁の翻訳文） 脂質と結合し、糖脂質を形成した後に、実質肝細胞によるリポたんばくと脂質胞 の摂取を高めさせるために利用することができる。したがってこれは効果的な低 脂質血症剤と肝実質細胞固有担体の両方の開発に有望なものである。 発明の詳細な説明 本発明は、式１： ［GO−X¹−］₃A−XZ−Z …（１） を有する３分枝性クラスタグリコシドを提供するもので、該式において各グリコ シドＧＯは長い可変性、親水性スペーサＸ¹によって分岐点Ａに付加され、該ス ペーサＸ¹は鎖中で少なくとも４原子を有し、本質的に、２つの親水性基の間に 配置される分岐した、または直鎖のＣ₁〜Ｃ₄のアルキレン基の単位からなり、式 ： −［HG−Alk−］e− で表され、該式においてＨＧ基は独立して親水性基を表し、Ａｌｋ基は独立して 分岐した、または直鎖の炭素数Ｃ₁〜Ｃ₄のアルキレン基を表し、ｅは１〜８で変 化し、Ｘ²は鎖中の少なくとも４原 子の長さの鎖長の末端スペーサであり、Ｚは、テトラキス−Ｏ−（３−カルボキ シ−プロピオニル）ペンタエリトリトールテトラキス−（１，２，３，４−テト ラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド−６−イル）テトラエステルとテ トラキス−Ｏ−（３−カルボキシ−プロピオニル）ペンタエリトリトールテトラ キス−（α−Ｄ−グルコピラノシド−６−イル）テトラエステルを除く、選択的 な防御反応基、親油基、薬剤残基、薬剤担体残基から選ばれた末端基である。 さらに本発明は、該新規化合物、すなわち本発明に従った３分枝性クラスタグ リコシドを含む薬剤、ならびに製薬的に受け入れ可能な担体の用途を提供する。 （１９９４年１１月３０日付補正の英文明細書第２３頁初め〜第２４頁最後まで の翻訳文） 実施例４ クラスタグリコジドＴＧ（２０Å）から出発する糖脂質の調製： ａ）Ｎ−［トリ−Ｏ−（３，６，９−トリオキサウンデカニル−β−Ｄ−ガラト フェラノシル）メトキシメチル］メチル−Ｎ^α−１−（アジピル）グリシンアミ ド（式１８）： 式１５ｅ を有する化合物５００ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）ＴＧ（２０Å）（式１５ｅ）を ９．７５ｍｌ、１，４−ジオキサン：水混合物（７７：２３）に溶解させ、０． ２５ｍｌ４Ｎ水酸化ナトリウムを添加した。該溶液を１５分間室温にて撹拌し、 その後 該塩基性溶液を酢酸で中和した。次に、溶剤を蒸発させ、残渣をＳｅｐｈａｃｒ ｙｌＳ１００−ＨｉＬｏａｄカラムを使ってクロマト分析を行った。収率：３４ ０ｍｇ（７２％）。 ｂ）グリシン−（５−コレステン−３β−アイリスタ）−ヒドロトリフルオロア セテート（式１９）： ３．８７ｇ（１０ｍｍｏｌ）コレステロールを１００ｍｌジクロロエタン中８ ９０ｍｇ（５ｍｍｏｌ）Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンおよび１．０３ ｇ（５ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジクロロヘキシルカルボジイミドを含む溶液に添加し た。１２０ｍｇ（１ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンを触媒量添加し 反応を開始させた。５０℃にて３時間の保温を行った後、沈殿をろ過し、ろ液を １００ｍｌ１０％ＮａＨＣＯ₃水溶液を順次２回用いて抽出した。該有機相を硫 酸ナトリウム上で乾燥させ溶剤を除去した。次に残渣を硅酸ゲル６０カラムを用 いて溶離液としてジクロロメタン中２０％メタノールによりクロマトグラフ分析 にかけた。生成物は最終的にエーテル／水から 結晶化させた。収率：２．２３ｇ（８２％）Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−グ リシン−（５−コレステン−３β−イリスタ）。この化合物（０．５５ｇ；１ｍ ｍｏｌのベンジルオキシカルボニル基は３０分間２０℃にてジクロロメタン中１ ０ｍ１２０％トリフルオロ酢酸による処理によって取り除かれた。脱防御の後、 トルエンを添加し、溶媒を蒸発させた。純粋な生成物をエタノール／ジクロロメ タン混合物からトリフルオロアセテート塩として結晶化させた。収率：式１９： の化合物５２０ｍｇ（９２％）。 ｃ）Ｎ−Ｎ−［トリ−Ｏ−（３，６，９−トリオキサウンデカニル−β−Ｄ−ガ ラクトピラノシル）メトキジメチル］メチル−Ｎ^α−（１−（６−（５−コレス テン−３β−イロキシ）グリシル）アジピル）グリシンアミド（式２０）：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヴァン ベルケル，テオドルス ヨセフス コルネリス オランダ国 2024 デーペー ハールレム ヴァン ネシュトラート 44 (72)発明者 ヴァン ボーム，ヤコブス フベルトゥス オランダ国 2253 エルデー ヴォールス コーテン ヘット ヴェデ 107

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．３分枝性クラスタグリコシドであり、各グリコシド残基が、鎖中に少なく とも４つの原子を有する可変性、親水性長鎖のスペーサによってクラスタの分岐 点に付加されることを特徴とする３分枝性クラスタグリコジド。 ２．グリコシドスペーサの鎖は、少なくとも２つの親水性基を含むことを特徴 とする請求項１記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ３．親水性基は、−Ｏ−，−ＣＯ−，−ＮＨ−，−ＣＯＮＨ−，ＮＨＣＯ−， −ＯＣＯ−ｅｎ−ＣＯＯ−から選択されることを特徴とする請求項２記載の３分 枝性クラスタグリコシド。 ４．グリコシドスペーサが、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³がそれぞれ水素原子または炭素原 子数が１〜４のアルキル基であり、ｐおよびｑがそれぞれ１〜６の整数であり、 ｎおよびｒが０〜６の整数である式２を満たすことを特徴とする請求項３記載の ３分枝性クラスタグリコシド。 ５．式２中のＲ¹，Ｒ²，Ｒ³はそれぞれ水素原子であることを特徴とする請求 項４記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ６．式２において、ｎは２〜４の整数であり、ｐは２〜３の整数であり、ｑは １〜３の整数であ り、ｒは１〜５の整数であることを特徴とする請求項４または５記載の３分枝性 クラスタグリコシド。 ７．グリコシド残基がβ−Ｄ−ガラクトシル、２−アセトアミド−２−デオキ シ−ガラクトピラノシル、β−Ｄ−ラクトシル、１−フェニル−β−Ｄ−ガラク トシル、１−プロビル−β−Ｄ−ガラクトシル−Ｄおよび１−ブチル−β−Ｄ− ガラクトシルから選択されることを特徴とする請求項１〜６の１つまたは複数の 請求項に記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ８．鎖中に少なくとも４個の原子をもつ鎖長の末端基スペーサがクラスタの分 岐点である炭素原子に付加されることを特徴とする請求項１〜７の１つまたは複 数の請求項に記載の３分枝性クラスタグリコシド。 ９．末端基スペーサの鎖が少なくとも１つのアルキレン基および少なくとも１ つの親水性基を有することを特徴とする請求項８記載の３分枝性クラスタグリコ シド。 10．親水性基が−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯＮＨ−、ＮＨＣＯ−、− ＯＣＯ−ｅｎ−ＣＯＯ−から選択されることを特徴とする請求項９記載の３分枝 性クラスタグリコシド。 11．末端基スペーサが、Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶がそれぞれ水素原子／または炭素原子 数が１〜４であるアルキル基であり、Ｓ、、ｔ、ｕがそれぞれ１〜６の整数であ り、ｖおよびｗがそれぞれ０〜４の整数である式３を満たすことを特徴とする請 求項１０記載の３分枝性クラスタグリコシド。 12．式３のＲ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶がそれぞれ水素原子であることを特徴とする請求項 １１記載の３分枝性クラスタグリコシド。 13．式３においてｖは１〜２の整数であり、ｗは０〜２の整数であり、ｓ，ｔ ，ｕはそれぞれ１〜４の整数であることを特徴とする請求項１１または１２記載 の３分枝性クラスタグリコシド。 14．末端基が末端基スペーサに付加され、この末端基は選択的に防御された反 応基、親油基、薬剤残基および薬剤担体残基から選択されることを特徴とする請 求項８〜１３の１つまたは複数の請求項に記載の３分枝性クラスタグリコシド。 15．末端基が水酸基、炭素数１〜４のアルコキシ基、アミノ基、３β−コレス テロール−残基、Ｎα，Ｎε−ジオレオイルリシン残基、５β−コラン酸−３α −オールオレート残基、５−コラン酸−３β−オールオレート残基、５β−コラ ン酸−３α，１２α−ジオールジオレート残基または リポたんぱく残基を含むことを特徴とする請求項１４記載の３分枝性クラスタグ リコシド。 16．末端基がコレステロール残基を含むことを特徴とする請求項１５記載の３ 分枝性クラスタグリコシド。 17．ＧＯ−がグリコシド残基を表し、Ａが分岐基を表し、Ｘ¹がグリコシドス ペーサを表し、Ｘ²が末端基スペーサを表し、Ｚが末端基を表している式１を満 たす、請求項１〜１６の１つまたは複数の請求項記載の３分枝性クラスタグリコ シド。 18．ｑが１〜３の整数、ＧＯがガラクトース残基を表し、−Ｏｃｈｏｌがコレ ステロール残基を表す式４を満たしている、請求項１７記載の３分枝性クラスタ グリコシド。 19．請求項１〜１８の１つまたは複数個の請求項に記載の３分枝性クラスタグ リコシド、ならびに少なくとも１つの薬学的に受容可能な担体を有する薬剤の調 製。 20．ＧＯ−がグリコシド残基であり、Ｘ²が末端スペーサであり、Ｚが末端基 であり、Ｒ¹〜Ｒ³がそれぞれ水素原子／または炭素原子数が１〜４のアルキル基 であり、ｐおよびｑがそれぞれ１〜６の整数であり、ｎおよびｒは０〜６の整数 である式５の３分枝性クラスタグリコシドを調製する 方法であって、Ｇ’Ｏ−が防御グリコシドの残基を表している式６の化合物が、 Ｚ’が末端基Ｚまたは末端基Ｚによって置き換えられるべき基を表し、得られた 化合物中の基Ｚ’が、末端基Ｚによって置き換えられるべき基を表している場合 には、末端基Ｚによって置き換えられる式７の化合物と反応され、予めまたは引 き続いて、得られた化合物のグリコシド残基が脱防御されることを特徴とする方 法。 21．式７の化合物と式６の化合物との反応がＮ−ヨードコハク酸イミドおよび トリフルオロメタンスルホン酸の存在下で行われることを特徴とする請求項２０ 記載の方法。 22．グリコシド残基が水酸基防御ベンゾイル基によって防御され、該ベンゾイ ル基は後に第３ブチル酸カリウムによる処理によって取り除かれることを特徴と する請求項２０または２１記載の方法。 23．式７におけるＺ’が防御反応基であり、該防御反応基は脱防御の後、親油 基、薬剤残基および薬剤担体残基から選択される末端基Ｚによって置き換えられ ることを特徴とする請求項２０〜２２の１つまたは複数の請求項記載の方法。 24．ＧＯ−がグリコシド残基であり、Ｚが末端 基であり、Ｒ¹−Ｒ³がそれぞれ水素原子または炭素原子数１〜４のアルキル基で あり、ｎ、ｐ、およびｑがそれぞれ１−６の整数であり、ｒが０−６の整数であ り、Ｘが末端スペーサ₃である式８の３分枝性クラスタグリコシドを調製する方 法であって、Ｇ’Ｏ−が防御グリコシドの残基である式６の化合物が、Ｑがアミ ノ防御基である式９の化合物と反応し、得られた化合物中のアミノ基は脱防御さ れ、このようにして得られた自由なアミノ基が−ＮＨ−Ｘ³−Ｚ基に転換され、 予めまたは引き続いて得られる該化合物のグリコシド残基が脱防御されることを 特徴とする３分枝性クラスタグリコシドを調製する方法。 25．式６の化合物が、式１１の化合物と式１０の化合物とを反応させることに よって調製されることを特徴とする請求項２０〜２４の１つまたは複数の請求項 に記載の方法。 26．式１１の化合物と式１０の化合物との反応がＮヨードコハク酸イミドおよ びトリフルオロメタンスルホン酸の存在下で行われることを特徴とする請求項２ ５記載の方法。